本発明に用いられる(A)水溶性ポルフィリ� ��誘導体又はその塩としては、ポルフィリン� ��格を有し、鉛イオンと反応して特定の波長� ��吸光度が変化するものが挙げられる。

 具体的なポルフィリン誘導体としては、� ��式(1)

 (式中、X ¹ ~X ⁴ のうち少なくとも1個は

 を示し、残余は水素原子を示し、

 R ¹ はアルキル基、スルホアルキル基、カルボキ シアルキル基、ヒドロキシアルキル基又は水 素原子を示し、R ² 及びR ³ は水酸基、カルボキシル基、アミノ基、スル ホン酸残基、リン酸残基又はトリアルキルア ンモニウム基を示す)で表される水溶性ポル� �ィリンが挙げられる。

 前記式(1)中、R ¹ で示されるアルキル基としては、メチル基、 エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n -ブチル基、n-ペンチル基、n-ヘキシル基等の� ��素数1~6のアルキル基が挙げられるが、メチ� ��基が特に好ましい。また、スルホアルキル� ��としては、スルホメチル基、スルホエチル� ��、スルホプロピル基、スルホブチル基、ス� ��ホペンチル基、スルホヘキシル基等のスル� ��C _1-6 アルキル基が挙げられる。カルボキシアルキ ル基としては、カルボキシメチル基、カルボ キシエチル基、カルボキシプロピル基、カル ボキシブチル基、カルボキシペンチル基、カ ルボキシヘキシル基等のカルボキシC _1-6 アルキル基が挙げられる。ヒドロキシアルキ ル基としては、ヒドロキシメチル基、ヒドロ キシエチル基、ヒドロキシプロピル基、ヒド ロキシブチル基、ヒドロキシペンチル基、ヒ ドロキシヘキシル基等のヒドロキシC _1-6 アルキル基が挙げられる。

 R ² 及びR ³ の具体例としては、水酸基、カルボキシル基 、アミノ基、スルホン酸残基(-SO ₃ H)、リン酸残基、トリメチルアンモニウム基� ��挙げられるが、スルホン酸残基(-SO ₃ H)、トリメチルアンモニウム基が特に好まし� ��。

 X ¹ ~X ⁴ の好ましい例としては、スルホフェニル基、 スルホチエニル基、トリメチルアンモニウム フェニル基、ヒドロキシフェニル基、カルボ キシフェニル基、アミノフェニル基、ホスホ リルフェニル基、ピリジニウム基、メチルピ リジニウム基、スルホエチルピリジニウム基 、カルボキシメチルピリジニウム基、ヒドロ キシエチルピリジニウム基等が挙げられる。 より好ましくは、4-スルホフェニル基、4-ス� �ホチエニル-2-イル基、4-トリメチルアンモニ ウムフェニル基、4-ヒドロキシフェニル基、4 -カルボキシルフェニル基、4-アミノフェニル 基、4-ホスホリルフェニル基、N-メチルピリ� �ニウム-4-イル基、N-メチルピリジニウム-3-イ ル基、N-スルホエチルピリジニウム-4-イル基� ��が挙げられる。さらに好ましくは、4-スル� �フェニル基、4-トリメチルアンモニウムフェ ニル基、N-メチルピリジニウム-4-イル基、N-� �チルピリジニウム-3-イル基等が挙げられる� �

 特に好ましい式(1)の化合物としては、5,10 ,15,20-テトラキス(4-スルホフェニル)ポルフィ� ��ン(以下、TPPSと略する場合がある)、5,10,15,20 -テトラキス(N-メチルピリジニウム-4-イル)ポ� ��フィリン(以下、TMPyPと略する場合がある)、 5,10,15,20-テトラキス(4-トリメチルアンモニウ� ��フェニル)ポルフィリンが挙げられ、これら のうち、測定感度の点から、好ましくはTPPS� �はTMPyPである。

 本発明の式(1)で表される水溶性ポルフィリ� ��誘導体は、置換基X ¹ ~X ⁴ の種類に応じて、塩の形態であってもよい。 具体的には、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、p-ト� ��エンスルホン酸塩等の酸付加塩等が挙げら� ��る。

 本発明で用いる式(1)で表される水溶性ポ� ��フィリンは、微量金属の比色試薬として公� ��の化合物である。該ポルフィリン誘導体は� ��例えばピロールとベンズアルデヒドの脱水� ��合と、p-クロラニルによる酸化によって得� �れるテトラフェニルポルフィリンのフェニ� �基を、濃硫酸中でスルホン酸化することに� �って製造することができる(J. S. Lindsey, I.  C. Schreiman, H. C. Hsu, P. C. Kearney, and A. M.� �Marguerettaz, ‘‘Rothemund and Adler-Longo Reactions  Revisited : Synthesis of Tetraphenylporphyrinsunder E quilibrium Conditions’’, J. Org. Chem., 1987, 52,� �827)。また、市販品として入手することも可� ��である。

 鉛濃度測定用試薬中の式(1)で表される水� ��性ポルフィリンの濃度は、使用時の濃度と� ��て、0.01~1000μmol/L、更に、0.1~500μmol/L、特に� ��1~100μmol/Lであるのが、試料溶液中に微量含� ��れる鉛濃度測定の精度の点で好ましい。

 本発明に用いられる(B)成分としては、ポ� ��アクリルアミド(PAAm)、ポリビニルアルコー� ��(PVA)、ポリエチレングリコール(PEG)であり、 これらのうち、測定感度や安定性の点からポ リアクリルアミドが好ましい。これらは、い ずれも水溶性の高分子で、それぞれ様々な用 途で使用される公知の化合物であり、市販品 として入手できる。

 本発明の鉛濃度測定用試薬中のPAAm濃度は、 使用時の濃度として、1~40質量%、特に10~25質� �%が好ましい。また、PAAmの平均分子量は1000~1 00000、特に5000~20000が好ましい。
 本発明の鉛濃度測定用試薬中のPVA濃度は、� ��用時の濃度として、0.1~20質量%、特に1~10質� �%が好ましい。また、PVAの重合度は100~10000、� ��に200~2000が好ましい。
 本発明の鉛濃度測定用試薬中のPEG濃度は、� ��用時の濃度として、0.1~20質量%、特に1~10質� �%が好ましい。また、PEGの分子量は100~50000、� ��に10000~40000が好ましい。

 一般的に、PAAmは、紙力増強剤、接着剤、 凝集剤の他、化粧品の適度な粘性と安定化に 寄与する基剤としても使用され、また、ゲル 化したものは電気泳動に用いられる。PVAは、 接着剤、界面活性剤、フィルム材料等に利用 され、PEGは、薬剤等の安定化剤や基剤として 利用されている。しかしながら、PAAm、PVA、PE Gをカルシウムイオンのマスキング剤として� �用したり、水溶性ポルフィリンと鉛イオン� �の安定な反応に寄与する添加剤として使用� �れた例はない。

 本発明の鉛濃度測定用試薬に用いられる( C)成分のカルシウムイオンを発生させるカル� ��ウムイオン供給化合物は、本発明の効果を� ��なわないでカルシウムイオンを遊離する化� ��物であれば特に制限されるものではない。� ��えば、塩化カルシウム、硫酸カルシウム、� ��酸カルシウム、炭酸カルシウム、水酸化カ� ��シウム、リン酸水素カルシウム、リン酸カ� ��シウム等の無機カルシウム塩;酢酸カルシウ ム、ギ酸カルシウム、乳酸カルシウム、グル コン酸カルシウム、安息香酸カルシウム、イ ソ酪酸カルシウム、プロピオン酸カルシウム 、サリチル酸カルシウム等の有幾カルシウム 塩が挙げられる。カルシウムイオン供給化合 物としては、無機カルシウム塩、例えば、塩 化カルシウム、硫酸カルシウム及び硝酸カル シウムが好ましく、特に塩化カルシウムが好 ましい。

 本発明の鉛濃度測定用試薬中のカルシウ� ��イオン供給化合物は、使用時に、0.1~100mmol/L 、特に5~50mmol/Lを供給できる量が好ましい。

 本発明の鉛濃度測定用試薬には上記成分及� ��水の他、本発明の効果を損なわない範囲で� ��通常溶液中の重金属イオンの測定に使用さ� ��る任意成分を加えることができる。このよ� ��な任意成分としては、pH調整剤、界面活性� �、酸化防止剤、防腐剤、その他の金属に対� �るマスキング剤等が挙げられる。
 pH調整剤としては、N-シクロヘキシル-3-アミ ノプロパンスルホン酸(以下、CAPSと略する場� ��がある)、N-シクロヘキシル-2-アミノエタン� ��ルホン酸、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナト� ��ウム、水酸化ナトリウム等から選ばれる少� ��くとも1種のものが挙げられる。鉛濃度測定 用試薬と試料溶液との混合液のpHを、8~13、更 に9~11(25℃)に調整するためのpH調整剤が好ま� �い。

 界面活性剤としては、陽イオン性界面活性� ��、陰イオン性界面活性剤、非イオン性界面� ��性剤等が挙げられる。
 その他の金属に対するマスキング剤として� ��、エチレンジアミン-N,N’-ジプロピオン酸� �エチレンジアミン-N,N’-ジ酢酸及び1,6-ジア� �ノヘキサン-N,N,N’,N’-テトラ酢酸等が挙げ� �れる。

 本発明の鉛濃度測定用試薬は、原液、濃� ��液、粉体、ペースト状等いずれの形態でも� ��い。また、鉛濃度測定用試薬の各成分を適� ��、別々又は混合した状態で保存してもよい� ��

 本発明の鉛濃度測定方法は、上記鉛濃度測� ��用試薬と試料溶液とを混合し、その吸光度� ��測定することにより行われる。
 測定にあたっては、鉛濃度測定用試薬と試� ��溶液との混合液のpHが、8~13、更に9~11(25℃)� �なるように調整することが好ましい。なお� �該混合液のpHがこの範囲外である場合は、こ の範囲になるように予め鉛濃度測定用試薬の pHをpH調整剤で調整するのが好ましい。
 吸光度測定に先立ち、鉛濃度測定用試薬と� ��料溶液との混合液を加熱する等して反応を� ��分に進行させておくことが好ましい。加熱� ��度は30~90℃が好ましく、加熱時間は1~60分が� ��ましい。このうち、精度と感度及びスルー� ��ットの点から、加熱時間は60~80℃、加熱時� �は3~15分が特に好ましい。

 本発明の鉛濃度測定用試薬を用いた試料溶� ��中に含有する鉛濃度測定方法は、例えば、� ��光度法により標準試料を用いた検量線を用� ��て行われる。
 吸光度計による測定における吸光波長は、3 50~700nm、更に400~500nm、特に460~490nmであるのが� ��ましい。

 本発明において鉛濃度を測定する試料は、� ��に限定されないが、海水、河川水、水道水� ��工場排水、焼却灰や飛灰等の灰溶出液等の� ��境試料;食品、飲料、農林水産物、植物、薬 剤、ヒト又は動物の血液、唾液、精液等の体 液、腎臓、心臓、脳等の臓器、筋肉、皮膚、 神経組織、毛髪、糞便等の生体試料等が挙げ られる。
 本発明の鉛濃度測定用試薬を用いた鉛濃度� ��定方法において、試料溶液は、これら試料� ��原液の他、測定のために試料を公知の手法� ��適宜抽出や濃縮・希釈等した抽出液、濃縮� ��希釈液等も含まれる。該試料溶液中のカル� ��ウムイオン濃度は、特に限定されないが、1 50mM以下が好ましく、50mM以下が特に好ましい� ��