CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención está relacionada con las técnicas utilizadas en la prevención y control de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19), y más particularmente está relacionada con una vacuna recombinante de vector viral que tiene insertada una secuencia de nucleótidos exógena que codifica proteínas con actividad antigénica contra el coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo grave (SARS-CoV2), y un vehículo, adyuvante y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

Los coronavirus (CoV) son una familia de virus que causan el resfriado común y enfermedades graves como el Síndrome Respiratorio del Medio Oriente (MERS-CoV) y el Síndrome Respiratorio Agudo Severo (SARS-CoV). El coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo grave (SARS- CoV2) es el agente etiológico del brote de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19), que comenzó en diciembre de 2019 en Wuhan, China. El 11 de marzo de 2020 la Organización Mundial de la Salud (OMS) declaró al COVID'19 como pandemia.

Actualmente, no hay medicamentos o vacunas disponibles para tratar COVID-19, y se ha reportado un número significativo de muertes principalmente en pacientes de edad avanzada con comorbilidad. Para el 4 de mayo de 2020, se registraron más de 3.4 millones de casos en todo el mundo, con más de 239 mil muertes, que continúan aumentando, principalmente en Europa y los Estados Unidos que son países con una fracción mayor de población de ancianos que han adquirido la infección. Hasta la fecha, la única medida efectiva para contrarrestar la propagación de COVID-19 consiste en aislar a la población, poner en cuarentena a las personas infectadas, suspender la mayoría de las actividades comerciales y negocios, junto con una terapia clínica intensiva para pacientes con síntomas graves. Sin embargo, la adopción de tales medidas de contención ha impactado dramáticamente la economía de todos los países que hoy en día luchan contra esta pandemia.

En el camino de encontrar una solución contra esta enfermedad infecciosa emergente, las vacunas vectorizadas ofrecen un enfoque de vacuna viva que no involucra al patógeno completo. De acuerdo con información de la OMS (htlpsV/www.whQ.int/blueprint/prionty-diseases/key-action/no vei- coronavjrysjandsca e-nc y. df, consultado el 4 de mayo de 2020), algunas instituciones y empresas farmacéuticas están desarrollando vacunas recombinantes contra COVID-19 basadas en vectores de adenovirus humano, MVA, VSV y sarampión, entre otros. Al respecto, previamente para el caso del virus SARS-CoV varias vacunas vectorizadas fueron descritas con estos vectores. No obstante, un grupo encontró que los hurones inmunizados con una vacuna MVA/SARS-CoV desarrollaron hepatitis (Chen et al., 2005). Las construcciones de vacunas contra SARS-CoV basadas en la replicación de un adenovirus humano defectuoso tipo 5 que expresa una glicoproteína espicular S del SARS-CoV parcial o total se han evaluado para determinar su inmunogenicidad en ratas y monos (Liu et al., 2005 y Gao et al., 2003), pero la inmunización depende de una dosis alta de vacuna, y la seguridad y la eficacia protectora no han sido demostradas. También se ha descrito una versión atenuada del virus de la parainfluenza humana tipo 3, un patógeno respiratorio pediátrico común, para expresar la glicoproteína espicular S del SARS- CoV, de la cual se demostró que una sola inoculación intranasal e intratraqueal era inmunogénica y protectora contra el SARS-CoV en un desafío en hámsteres y monos verdes africanos (Bukreyev et al., 2004). Sin embargo, una preocupación que existe con cualquier vector basado en un patógeno común es que la población adulta tiene una inmunidad significativa frente a la exposición previa que restringirá la infección y la replicación del vector viral y reducirá su inmunogenicidad. De hecho, las comparaciones de la inmunogenicidad de las vacunas vectorizadas con el virus vaccinia y las de vectores con adenovirus humano tipo 5 en roedores, primates no humanos y humanos demostraron que la inmunidad preexistente al vector redujo en gran medida la inmunogenicidad de estas vacunas (Kanesa-thasan et al., 2000, Sharpe et al., 2001 y Zhi et al., 2006).

Por otro lado, se ha descrito al virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) como un vector que potencialmente puede ser utilizado para desarrollar vectores de vacunas para humanos, como por ejemplo en los documentos de patente WO2011059334, US9476033 o US10308913. El NDV es un virus de ARN de cadena negativa no segmentado de la familia Paramyxoviridae y sus huéspedes naturales son las aves, por lo que es antigénicamente distinto de los patógenos humanos comunes. El grupo de DiNapoli et al., 2007, evaluó a un NDV que expresaba la glicoproteína espicular S del SARS-CoV como un vector tópico de vacuna respiratoria con SARS-CoV como el patógeno objetivo mediante análisis directo de los tejidos nasales y pulmonares recolectados por necropsia en el pico de replicación del SARS- CoV. Se encontró que monos verdes africanos inmunizados a través del tracto respiratorio con dos dosis de esta vacuna desarrollaron un título de anticuerpos neutralizantes de SARS-CoV comparables con la respuesta secundaria observada en animales que han sido inmunizados con una vacuna experimental diferente de SARS-CoV y desafiados con SARS-CoV. Cuando los animales inmunizados con NDV que expresaba la glicoproteína espicular S fueron desafiados con una dosis alta de SARS-CoV, el análisis viral directo de los tejidos pulmonares tomados por necropsia en el pico de replicación viral demostró una reducción promedio de 236 o 1,102 veces en el título pulmonar de SARS-CoV en comparación con los animales control.

No obstante lo anterior, la glicoproteína espicular S del SARS-CoV presenta importantes diferencias con la del SARS-CoV2 (Walls et al., 2020). Las glicoproteínas espiculares (S) de los coronavirus promueven la entrada en las células y son el objetivo principal de los anticuerpos. De acuerdo con Wall et al., la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2 alberga un sitio de escisión de furina en el límite entre las subunidades SI / S2, que se procesa durante la biogénesis y diferencia significativamente a este virus de SARS-CoV y de los coronavirus relacionados con el SARS. Es la primera vez que se describe un coronavirus con un sitio de corte polibásico para una proteasa. De esta forma, no es posible conocer o deducir si una vacuna vectorizada recombinante contra COVID-19 basada en NDV o algún otro virus resultará efectiva para el tratamiento o prevención de COVID-19.

Más aún, no ha sido determinado para una vacuna recombinante la forma más efectiva de insertar los genes de SARS-CoV2 de forma que produzcan una respuesta inmune que permita controlar la pandemia, y mucho menos en un vector de virus de Newcastle. Por lo anterior, es absolutamente necesario desarrollar una vacuna contra COVID-19 que provea un nivel de protección suficiente para un control efectivo de la pandemia actual.

OBJETOS DE LA INVENCIÓN

Teniendo en cuenta los defectos de la técnica anterior, es un objeto de la presente invención proporcionar una vacuna recombinante de vector viral contra la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) que sea efectiva.

Es otro objeto de la presente invención proveer el uso de una vacuna recombinante de vector viral para el control de COVID-19.

Es un objeto adicional de la presente invención, proveer una construcción de vector viral con una secuencia de nucleótidos exógena insertada que codifica para proteínas con actividad antigénica contra el coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo grave (SARS-CoV2).

Estos y otros objetos se logran mediante una vacuna recombinante contra COVID-19 en vector viral de conformidad con la presente invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN.

Para ello, se ha inventado una vacuna recombinante que comprende un vector viral basado en el virus de la enfermedad de Newcastle, que tiene insertada una secuencia de nucleótidos exógena del coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo grave (SARS-CoV2), capaz de generar una respuesta inmune celular, y un vehículo, adyuvante y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Durante el desarrollo de la presente invención, se ha encontrado de manera inesperada que una vacuna recombinante que comprende un vector viral capaz de generar una respuesta inmune celular que tiene insertada una secuencia de nucleótidos exógena que codifica para sitios antigénicos del coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo grave (SARS-CoV2), y un vehículo, adyuvante y/o excipiente farmacéuticamente aceptable, brinda una protección adecuada contra la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19).

El vector viral utilizado puede estar activo (vivo) o inactivado (muerto), entendiéndose por inactivado que el virus recombinante que funciona como vector viral y contiene la secuencia de nucleótidos que codifica para sitios antigénicos del SARS-CoV2 haya perdido la propiedad de replicarse. La inactivación se logra mediante procedimientos físicos o químicos bien conocidos en el estado de la técnica, preferiblemente mediante inactivación química con formaldehído o beta-propiolactona (Office International des Epizooties 2008). Newcastle Disease. OIE Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animáis. Office International des Epizooties. France, p. 576-589). En el sentido opuesto, se entiende que un virus activo o vivo, mantiene su capacidad para replicarse.

Preferiblemente, el vector viral utilizado es un paramixovirus, el cual se selecciona entre cualquier paramixovirus que incluya cualquier serotipo, genotipo o clase genética, incluyendo los virus lentogénicos, mesogénicos y velogénicos. Asimismo, es posible utilizar paramixovirus a los cuales puede realizarse técnicas de genética inversa para eliminar la fenilalanina de la posición 117 y los aminoácidos básicos de la posición cercana a la posición Q114 que dan la patogenicidad a los paramixovirus, o paramixovirus incluidos en el género Avulavirus que infectan a las aves, tales como el virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) o el virus Sendai. Más preferiblemente el vector viral es el NDV, dicho vector viral se selecciona preferiblemente de cepas lentogénicas o mesogénicas, tal como las cepas LaSota, Bl, QV4, Ulster, Roakin, Komarov. De manera preferida, el virus recombinante es de la cepa La Sota.

Por lo que se refiere a la secuencia de nucleótidos exógena que codifica para sitios antigénicos del SARS-CoV2, en el caso de la presente invención la secuencia de nucleótidos utilizada preferiblemente se selecciona de una secuencia que codifica a la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2 o una secuencia que codifique una secuencia derivada de ésta. La glicoproteína espicular S del SARS- CoV2 comprende dos subunidades funcionales responsables de la unión al receptor de la célula huésped (subunidad SI) y la fusión de las membranas viral y celular (subunidad S2), y su secuencia de nucleótidos está disponible en la base de datos de GenBank con el número de acceso NC_045512.2. En una modalidad preferida de la invención la secuencia de nucleótidos exógena que codifica para sitios antigénicos del SARS-CoV2 se selecciona entre una secuencia que codifica la subunidad SI de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2, una secuencia que codifica la subunidad S2 de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2, una secuencia que codifica las dos subunidades SI y S2 de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2, una secuencia que codifique por lo menos un fragmento de las subunidades SI o S2 de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2, una secuencia con una identidad de por lo menos 80% con la secuencia que codifique la subunidad SI de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2, una secuencia con una identidad de por lo menos 80% con la secuencia que codifique la subunidad S2 de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2, una secuencia con una identidad de por lo menos 80% con la secuencia que codifique las dos subunidades SI y S2 de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2, una secuencia con una identidad de por lo menos 80% con una secuencia que codifique por lo menos un fragmento de las subunidades SI o S2 de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2, una secuencia que codifica las dos subunidades SI y S2 de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2 desprovista de por lo menos un epitope localizado entre los nucleótidos correspondientes a los aminoácidos 1 a 460 de la secuencia de SI, o una secuencia que codifica la subunidad SI de la glicoproteína espicular S del SARS- CoV2 desprovista de por lo menos un epitope localizado entre los nucleótidos correspondientes a los aminoácidos 1 a 460 de la secuencia de SI. En una modalidad preferida, el epitope localizado entre los nucleótidos correspondientes a los aminoácidos 1 a 460 de la secuencia de SI se selecciona entre las secuencias de aminoácidos SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 o SEQ ID NO: 10. Más preferiblemente, la secuencia de nucleótidos exógena que codifica para sitios antigénicos del SARS-CoV2 se selecciona entre una secuencia con una identidad de por lo menos 80% con alguna de las secuencias SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 o SEQ ID NO: 5.

La secuencia de nucleótidos exógena que codifica para sitios antigénicos del SARS-CoV2 de la vacuna de la presente invención se puede preparar mediante síntesis química de la secuencia de nucleótidos de interés para poder insertarla posteriormente dentro del vector viral de paramixovirus. La inserción de la secuencia de nucleótidos exógena se realiza utilizando técnicas estándares de clonación de biología molecular y se puede insertar en cualquiera de las regiones intergénicas del genoma del paramixovirus. La clona infecciosa así producida es transfectada en un cultivo celular para la generación del virus recombinante.

El virus se replica en cualquier sistema adecuado para su crecimiento, tales como embrión de pollo SPF, o líneas celulares comerciales o diseñadas expresamente para hacer crecer virus, hasta alcanzar la concentración del virus que se requiere para lograr la respuesta antigénica, preferiblemente entre 10 ⁶⁰ y 10 ¹⁰⁰ DIEP50%/mL, más preferiblemente entre 10 ⁶⁰ y 10 ⁸⁰ DIEP50%/mL para formulaciones de virus activo y entre 10 ⁸ a 10 ⁹ · ⁵ DIEP50%/mL para el caso de vacunas de virus inactivado. Para el aislamiento del virus, el virus se elimina del sistema adecuado para su crecimiento y se separa de los componentes celulares o de otro tipo, típicamente mediante procedimientos de clarificación bien conocidos, como centrifugación en gradiente y cromatografía en columna, y puede purificarse adicionalmente según se desee utilizando procedimientos bien conocidos, por ejemplo, ensayos en placa.

En la modalidad en la que la vacuna es viva, se trata de un virus activo vacunal lentogénico naturalmente o uno atenuado mediante procedimientos ya conocidos en el estado de la técnica. Por otro lado, cuando la vacuna es inactivada, una vez alcanzada la concentración viral requerida para lograr la respuesta antigénica, se procede a inactivar el virus. De manera preferida, la inactivación se realiza mediante procedimientos físicos o químicos bien conocidos en el estado de la técnica, preferiblemente mediante inactivación química con formaldehído, beta-propiolactona o etilenimina binaria (B. E. I.).

Los vehículos farmacéuticamente aceptables para la vacunas de la presente invención son preferentemente soluciones acuosas o emulsiones. Más particularmente, se prefiere que el vehículo utilizado sea una emulsión agua-aceite, aceite-agua o agua-aceite-agua (WOW, por sus siglas en inglés), preferiblemente una emulsión agua-aceite-agua. Por lo que se refiere a la administración de la vacuna, ésta puede realizarse por vía intramuscular, vía intranasal, vía subcutánea, aspersión, nebulización, utilizando los medios y formas adecuados a cada caso y dependiendo si se trata de una vacuna viva o de una vacuna inactivada, preferiblemente por vía intramuscular para vacunas inactivadas o intranasal para vacunas vivas.

La presente invención será mejor entendida a partir de los siguientes ejemplos, los cuales se presentan únicamente con fines ilustrativos para permitir la comprensión cabal de las modalidades preferidas de la presente invención, sin que por ello se implique que no existen otras modalidades no ilustradas que puedan llevarse a la práctica con base en la descripción detallada arriba realizada.

EJEMPLO 1

Generación del vector NDV LaSota

Para clonar el genoma de ARN del NDV cepa LaSota y generar así un vector viral en forma de ADN plasmídico denominado pNDVLS11801140 (SEQ ID NO: 6), primeramente se llevó a cabo la extracción de ARN viral total de NDV cepa LaSota por el método de triazol. A partir del ARN purificado, se llevó a cabo la síntesis de ADNc (ADN complementario) del genoma viral, usando como molde el ARN total purificado anteriormente. Con el objetivo de clonar todos los genes del genoma de NDV (15, 183 pares de bases (pb)), se amplificaron por PCR, 7 fragmentos con extremos "traslapantes" y sitios de restricción cohesivos. El fragmento 1(F1) abarca del nucleótido (nt) 1-1755, F2 va de nt 1-3321, F3 comprende del nt 1755-6580, F4 va de 6,151-10, 210, F5 abarca del nt 7,381-11,351, F6 va de 11,351- 14,995 y F7 comprende del nt 14,701- 15, 186. El ensamble de los 7 fragmentos fue realizado dentro de un vector de clonación denominado pGEM-pSLl 1801140 usando técnicas estándares de ligación, lo que permitió reconstruir el genoma de NDV LaSota, el cual después de la clonación contiene un sitio de restricción único SacII, entre los genes P y M, el cual sirve para la clonación de cualquier gen de interés en esta región viral del vector.

EJEMPLO 2

Clonación de diversas secuencias de nucleótidos exóaenas de SARS-CoV2 dentro del sitio

SacII del vector PNDVLS11801140.

Para clonar diversas secuencias de nucleótidos exógenas derivadas de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2, mediante el uso del software Vector NTi® se ensamblaron InSi/ico las siguientes 5 versiones del gen de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2 con base en la cepa Wuhan- Hu-1 (número de acceso NC_045512.2):

Spike S1/S2 SARS-CoV2: Secuencia de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2 (con las subunidades SI y S2) sin modificaciones (SEQ ID NO: 1).

Spike SI SARS-CoV2/TMCyto: Secuencia de la subunidad SI de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2 fusionado a las secuencia transmembranal y citoplásmica (TMCyto) del gen F de NDV (SEQ ID NO: 2).

Spike S1/S2 SARS-CoV2/TMCyto: Secuencia del ectodominio de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2 fusionado a las secuencia transmembranal y citoplásmica (TMCyto) del gen F de NDV (SEQ ID NO: 3).

Spike S1/S2 SARS-CoV2/PreF: Secuencia del ectodominio de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2 fusionado a las secuencia transmembranal y citoplásmica (TMCyto) del gen F de NDV, modificado para que la proteína F de NDV adquiera la conformación Pre-Fusión. El sitio de corte de la glicoproteína espicular S fue mutado de RRAR a A y se introdujeron 2 mutaciones a Prolina en los aminoácidos K986P y V987P (SEQ ID NO: 4).

Spike S1/S2 SARS-CoV2/PreF/-ADE: Secuencia del ectodominio de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2 fusionado a las secuencia transmembranal y citoplásmica (TMCyto) del gen F de NDV, modificado para que la proteína F de NDV adquiera la conformación Pre-Fusión y evitar la amplificación de la infección dependiente de anticuerpos (ADE por sus siglas en inglés). El sitio de corte de la glicoproteína espicular S fue mutado de RRAR a A y se introdujeron 2 mutaciones a Prolina en los aminoácidos K986P y V987P y se introdujo de forma sintética la deleción del epitope correspondiente a los aminoácidos localizados en las posiciones 363 a 368 (SEQ ID NO: 5).

Las secuencias anteriores fueron inicialmente clonadas de forma independiente en un vector pUC. Los insertos de pUC fueron luego sub-clonados mediante técnicas estándares de ingeniería genética, en el sito único de restricción SacII, situado entre los genes P y M del genoma de NDV LaSota contenido en el plásmido pNDVLSl 1801140. El plásmido pNDVLSl 1801140 contiene, además, todas las secuencias de las señales de transcripción y traducción para que cada una de las cinco versiones de los genes, puedan ser transcritas y traducidas y generar así 5 diferentes versiones de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2. El resultado del proceso de clonación generó 5 clonas de ADN _C (ADN complementario) de NDV denominadas respectivamente: pNDVLS/Spike S1/S2 SARS-CoV2. pNDVLS/Spike SI SARS-CoV2/TMCyto. pNDVLS/Spike S1/S2 SARS-CoV2/TMCyto. pNDVLS/Spike S1/S2 SARS-CoV2/PreF. pNDVLS/Spike S1/S2 SARS-CoV2/PreF/-ADE.

Cada uno de los plásmidos generados fue caracterizado por PCR para detectar la presencia de cada versión de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2. También fueron caracterizados por digestión con enzimas de restricción, obteniendo los patrones de restricción esperados. La estabilidad y secuencia del producto de PCR de cada versión de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2 fue confirmada por secuenciación.

EJEMPLO 4

Generación de virus recombinantes·

Cada uno de los plásmidos generados en el ejemplo anterior fue transformado por método químico y luego propagado de forma independiente en E.coli, durante 16 horas en agitación continua a 37 °C. El ADN de cada clona, fue purificado por procedimientos estándares de biología molecular. 10 microgramos ^g) de ADN purificado fueron usados en experimentos de transfección mediante el uso de lipofectamina, en células Hep2 y A-549. Cuarenta y ocho horas después de la transfección, cada uno de los virus recombinantes generados de las 5 transfecciones, fue recuperado del sobrenadante y usado en ensayos de propagación viral en huevos embrionados de pollo libres de patógenos específicos (SPF) para la posterior preparación de las vacunas.

EJEMPLO 5

Propagación de los virus recombinantes·

A partir de las semillas de producción, se inocularon huevos embrionados de pollo SPF, con la dosis infectante previamente determinada para cada uno de los virus recombinantes preparados en el ejemplo anterior. Los embriones se incubaron a 37°C por un periodo de 48 horas, revisando diariamente la mortalidad. Transcurrido este periodo, se refrigeraron los embriones vivos de un día para otro, preferentemente 24 horas, se cosechó el fluido amnioalantoideo (FAA) en condiciones asépticas y se clarificó por centrifugación. El FAA se utilizó para caracterizar por hemoaglutinación la generación de virus recombinantes rescatados del cultivo celular de E coli y por RT-PCR, usando primers específicos para amplificar la secuencia localizada entre los genes P y M, y poner evidencia la presencia de las diversas versiones de la glicoproteína espicular S del SARS-CoV2 clonada en cada uno de los virus recombinantes recuperados. Una vez establecida la identidad por RT-PCR, se procedió a establecer la estabilidad de los diversos insertos mediante secuenciación de cada uno de ellos. De los ensayos de transfección y propagación en huevos embrionados de pollo SPF se generaron los siguientes 5 virus recombinantes: rNDVLS/Spike S1/S2 SARS-CoV2. rNDVLS/Spike SI SARS-CoV2/TMCyto. rNDVLS/Spike S1/S2 SARS-CoV2/TMCyto. rNDVLS/Spike S1/S2 SARS-CoV2/PreF. rNDVLS/Spike S1/S2 SARS-CoV2/PreF/-ADE.

EJEMPLO 6

Elaboración de vacunas activas e inactivadas contra COVID-19.

Los virus preparados en el ejemplo anterior se purificaron del FAA como se ha descrito anteriormente (Santry et al. 2018, Nestola et al., 2015).

Las vacunas activas e inactivadas se prepararon con cada uno de los virus en una emulsión del tipo agua-aceite-agua. Para la preparación de la fase oleosa se utilizó aceite mineral y surfactantes del tipo Span 80 y Tween 80. Para la preparación de la fase acuosa se mezcló el FAA con una solución conservadora (timerosal). Para la elaboración de la emulsión, se agregó lentamente la fase acuosa a la fase oleosa bajo agitación constante. Para alcanzar el tamaño de partícula especificado, se utilizó un homogenizador o un molino coloidal.

Las vacunas anteriores se formularon para aportar un mínimo de 10 ⁶⁰ DIEP50%/mL en el caso de las vacunas de virus vivo o activado, y 10 ⁸⁰ DIEP50%/mL en el caso de vacunas de virus inactivado.

Aun cuando se ha ilustrado y descrito modalidades específicas de la invención, debe hacerse hincapié en que son posibles numerosas modificaciones a la misma, como puede ser el virus utilizado como vector viral, y la secuencia viral exógena utilizada. Por lo tanto, la presente invención no deberá considerarse como restringida excepto por lo que exija la técnica anterior y las reivindicaciones anexas.