Le cycle cellulaire de la plupart des cellules permet d'augmenter la taille, de doubler la quantité d'ADN, pour assurer la répartition du matériel génétique de manière équitable dans les cellules filles. Le cycle cellulaire est divisé en deux périodes bien distinctes : l'interphase pendant laquelle se produit la réplication de l'ADN et la mitose.

Les phases de réplication et de mitose sont contrôlées par des complexes protéiques régulés par leur état de phosphorylation/déphosphorylation et/ou leur dégradation. De nombreuses pathologies neuro-dégénératives et/ou cancéreuses, associées à la présence de protéines incorrectement structurées (aberration dans la structure secondaire et tertiaire de la molécule) ou à la présence de protéines non dégradées à un stade où il est indispensable qu'elles le soient, sont connues actuellement.

Le système ubiquitine/protéasome joue un rôle majeur dans la protéolyse intracellulaire, la dégradation d'un certain nombre de protéines associées au bon déroulement du cycle cellulaire. L'inactivation du protéasome par des inhibiteurs spécifiques du site actif permettra de comprendre la mécanistique du dysfonctionnement de la dégradation des protéines et ainsi d'envisager de nouvelles classes de molécules antitumorales.

Il a été observé que des peptides-aldéhydiques inhibiteurs de la calpaïne et du protéasome tel que le N-acétyl-leucinyl-leucinyl-norleucinal (ALLN), le benzyloxycarbonyl leucinyl-leucinyl-leucinal (MG132) et le N-acétyl-leucinyl-valinyl- phénylalaninal (ALVP), mais pas le N-acétyl-leucinyl-leucinyl-méthioninal (ALLM), ont une action synergique dans la suppression de la prolifération cellulaire et l'induction de l'apoptose dans trois lignées cellulaires tumorales humaines ainsi que dans les adénocarcinomes pulmonaires, les carcinomes de prostate, et les carcinomes du sein (Cusak JC, Liu R, Houston M, Adendroth K, Elliot PJ, Adams J and Baldwin AS Jr (2001) Cancer Res, 61,3535-3540 ; Soligo D, Servida D, Fontanella E, Lamorte G, Caneva L, Fumiatti R, and Lambertenghi Deliliers G (2001) Br J Haematol, 113,126- 135 ; Sun J, Nam S, Lee CS, Li B, Coppola D, Hamilton AD, Dou QP and Sebti SM (2001) Cancer Res, 61,1280-1284.

Les peptides transformés et en particulier les pseudopeptides suscitent un grand intérêt car ils sont capables de se comporter comme des analogues plus efficaces que les peptides eux-mêmes dont les applications thérapeutiques sont toutefois limitées par une biodégradabilité importante, un faible pouvoir de franchissement des barrières physiologiques et par le manque de sélectivité vis-à-vis de la cible. Il est donc nécessaire de concevoir des analogues plus actifs, plus stables et plus spécifiques. Les pseudopeptides pour lesquels la nature chimique du squelette peptidique et de la liaison amide (CO-NH) est modifiée, permettent d'induire une biodisponibilité plus importante que celle des peptides mimés tout en préservant une bonne activité biologique. Cette propriété des pseudopeptides, est liée notamment à la résistance induite vis-à-vis des peptidases, qui dégradent très rapidement tout peptide exogène en coupant le squelette peptidique au niveau des liaisons amide, et dont l'action est alors ralentie par la modification de ces liaisons.

Des composés hydrazinopeptoïdes sont décrits notamment dans la demande internationale WO 03/018557.

La présente invention découle de la mise en évidence par les Inventeurs du fait que les composés hydrazinopeptoïdes réduits de formule (I), décrits ci-après, ont une action spécifique sur les cellules cancéreuses à induire celles ci à entrer en apoptose selon un mécanisme d'inhibition des activités enzymatiques inhérentes au protéasome.

L'invention a pour objet les composés de formule générale (I) suivante : dans laquelle : Y représente CH2, ou CO, n représente un nombre entier de 1 à 10, notamment n représente 1 ou 2, sous réserve que lorsque n représente 1, Y représente CH2, et que lorsque n est supérieur à 1, l'un au moins des groupes Y dans la formule (I) représente CH2, RI et R6, indépendamment l'un de l'autre, représentent : o un atome d'hydrogène, o un groupe utilisable dans le cadre de la protection des atomes d'azote en synthèse peptidique, tel que le groupe BOC, FMOC ou Z,

o un groupe de formule-COR, ou-CH2COR dans laquelle R représente : > un atome d'hydrogène, sous réserve que lorsque RI est un hydrogène, celui-ci se présente sous forme d'un sel soluble dans les solvants aqueux, tel qu'un sel de trifluoroacétate, un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, le cas échéant substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, tels que les groupes R représentant-CF3 ou un groupe-CH2X, X représentant un atome d'halogène tel que Cl ou Br, un groupe-COORa dans lequel Ra représente H ou un groupe alkyle, tel qu'un groupe méthyle ou éthyle, un groupe amine primaire-NH2 ou une amine Ivre ou IIIre, > un groupe alkoxy, tel qu'un groupe méthoxy-OMe, ou éthoxy -OEt, # un groupe phényle, # un groupe pyridinium, tel que le groupe de formule R2, R3, R4 et R5, indépendamment les uns des autres, représentant : o un atome d'hydrogène, o un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, le cas échéant substitué, notamment par un ou plusieurs atomes d'halogène ou par un ou plusieurs groupes amine ou phényle, tels que les groupes méthyle, butyle, isobutyle,- (CH2) 4NH2,-CH2Ph,- (CH2) 4NHBoc, a ou RI en association avec R2, ou R6 en association avec R5, représentent un groupe de formule La présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable, un composé de formule (I) générale suivante :

dans laquelle : Y représente CH2 ou CO, n représente un nombre entier de 1 à 10, notamment n représente 1 ou 2, sous réserve que lorsque n représente 1, Y représente CH2, et que lorsque n est supérieur à 1, l'un au moins des groupes Y dans la formule (I) représente CH2, 'Ri et Ru, indépendamment l'un de l'autre, représentent : o un atome d'hydrogène, o un groupe utilisable dans le cadre de la protection des atomes d'azote en synthèse peptidique, tel que le groupe BOC, FMOC ou Z, o un groupe de formule-COR, ou-CH2COR dans laquelle R représente : > un atome d'hydrogène, sous réserve que lorsque RI est un hydrogène, celui-ci se présente le cas échéant sous forme d'un sel soluble dans les solvants aqueux, tel qu'un sel de trifluoroacétate, > un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, le cas échéant substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, tels que les groupes R représentant-CF3 ou un groupe-CH2X, X représentant un atome d'halogène tel que Cl ou Br, # un groupe-COORa dans lequel Ra représente H ou un groupe alkyle, tel qu'un groupe méthyle ou éthyle, > un groupe amine primaire-NH2 ou une amine Il,, ou IIIre, > un groupe alkoxy, tel qu'un groupe méthoxy-OMe, ou éthoxy -OEt, > un groupe phényle, > un groupe pyridinium, tel que le groupe de formule R2, R3, R4 et Rs, indépendamment les uns des autres, représentant : o un atome d'hydrogène, o un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, le cas échéant substitué, notamment par un ou plusieurs atomes d'halogène ou par un ou plusieurs groupes amine ou phényle, tels que les groupes méthyle, butyle, isobutyle,- (CH2) 4NH2,-CH2Ph,- (CH2) 4NHBoc, - (CH2) 3NHC (NH2) =NH, ou RI en association avec R2, ou R6 en association avec R5, représentent un B (OH) 2 groupe de formule-ci

La présente invention concerne également une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, comprenant, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable, un composé de formule générale (I), dans laquelle : Ri représente un groupe protecteur BOC, ou Z, ou un groupe-COCH2X, X représentant un atome d'halogène tel que Cl ou Br, ou RI représente H, sous réserve que lorsque Ri représente H, celui-ci se présente le cas échéant sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate de formule + CF3CO2, H3N-, 'Rz représente H ou un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, tel qu'un groupe isobutyle, R3 représente H ou un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, tel qu'un groupe isobutyle, ou R3 représente un groupe benzyle, 'l'un de R4 ou de R5 représente H, tandis que l'autre représente un groupe alkyle tel que défini ci-dessus, et R6 représente H ou un groupe protecteur BOC ou Z, n représente 1 ou 2, Y est tel que défini ci-dessus.

Une composition pharmaceutique avantageuse selon l'invention est une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, comprenant, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable, un composé de formule générale (I), dans laquelle : - Ri représente un groupe protecteur BOC, ou Z, ou un groupe-COCH2X, X représentant un atome d'halogène tel que Cl ou Br, ou RI représente H, - R2 représente H, - R3 représente un groupe isobutyle, ou un groupe benzyle, - R4 représente H, ou un groupe méthyle ou isobutyle, - R5 représente H, ou un groupe isobutyle, - R6 représente un groupe protecteur BOC ou Z, - n représente 1, - Y représente CH2.

Une composition pharmaceutique avantageuse selon l'invention est caractérisée en ce que le composé de formule (I) est choisi parmi les composés de formule suivante : H CH2-CH (CH3) 2 (5 a) 1 1 z Boy N 1 1 CH2-CH (CH3) 2 H H Zu ( (5b) N Boc N Boc N CH2-CH (CH3) 2 CH2-CH (CH3) 2 CH2-CH (CH3) 2 H Boc /Boc /NwN . N Sc) CH H 2 t D H CH3 z Nez , N/\/N (Sd) 1 CHz-CH (CH3) 2 CH,-CH (CH,), t I N/Z N Boc N//N (Se) CH H \ CH H Selon un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus comprenant, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable, un composé de formule générale (I), dans laquelle : - R1 est différent de R2, -Rs est différent de R6, et - le groupe-N (Ri) (R2) est différent du groupe-N (R5) (R6).

Les compositions pharmaceutiques préférées de l'invention sont caractérisées en ce que le composé de formule (I) est choisi parmi les composés de formule (5a), (5b), (5c), (Sd), (5e), (7a), (8a) et (8b).

La présente invention concerne également une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme administrable par voie intrapéritonéale, notamment à raison d'environ 5 mg/kg/jour.

La présente invention concerne l'utilisation de composés de formule (I) tels que définis précédemment, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de cancers tels que les cancers du foie, du colon, du sein, des mélanomes, en induisant l'entrée en apoptose des cellules cancéreuses.

La présente invention concerne également des composés de formule générale (I) suivante : dans laquelle : Y représente CH2 ou CO, n représente un nombre entier de 1 à 10, notamment n représente 1 ou 2, sous réserve que lorsque n représente 1, Y représente CH2, et que lorsque n est supérieur à 1, l'un au moins des groupes Y dans la formule (I) représente CH2, 'Ri et R6, indépendamment l'un de l'autre, représentent : o un atome d'hydrogène, o un groupe utilisable dans le cadre de la protection des atomes d'azote en synthèse peptidique, tel que le groupe BOC, FMOC ou Z, o un groupe de formule-COR, ou-CH2COR dans laquelle R représente : > un atome d'hydrogène, sous réserve que lorsque RI est un hydrogène, celui-ci se présente le cas échéant sous forme d'un sel soluble dans les solvants aqueux, tel qu'un sel de trifluoroacétate, > un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, le cas échéant substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, tels que les groupes R représentant-CF3 ou un groupe-CH2X, X représentant un atome d'halogène tel que Cl ou Br, > un groupe-COORa dans lequel Ra représente H ou un groupe alkyle, tel qu'un groupe méthyle ou éthyle, > un groupe amine primaire-NH2 ou une amine IIre ou IIIre, > un groupe alkoxy, tel qu'un groupe méthoxy-OMe, ou éthoxy - OEt, > un groupe phényle, > un groupe pyridinium, tel que le groupe de formule R2, R3, R4 et R5, indépendamment les uns des autres, représentant : o un atome d'hydrogène, o un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, le cas échéant substitué, notamment par un ou plusieurs atomes d'halogène ou par un ou plusieurs groupes amine ou phényle, tels que les groupes méthyle, butyle, isobutyle,- (CH2) 4NH2,-CH2Ph,- (CH2) 4NHBoc, - (CH2) 3NHC (NH2) =NH, a ou RI en association avec R2, ou R6 en association avec R5, représentent un groupe de formule à l'exclusion des composés répondant aux formules suivantes (II), (III), (IV) et R'représentant un atome d'hydrogène, un groupe éthyle, un groupe isopropyle, un groupe n-butyle, un groupe n-propyle ou un groupe - CH (Me) (Et), R"représentant un atome d'hydrogène, un groupe éthyle, un groupe n-butyle, un groupe n-propyle ou un groupe-CH2+,

A représentant un atome d'hydrogène, un groupe méthyle, un groupe éthyle, un groupe n-propyle, un groupe n-butyle, un groupe C5Hll ou un groupe C6H13, B représentant un groupe méthyle, un groupe éthyle, un groupe n-propyle, un groupe n-butyle, un groupe CsHl l ou un groupe C6H13.

L'invention a plus particulièrement pour objet les composés susmentionnés de formule générale (I) dans laquelle : # R1 représente un groupe protecteur BOC, ou Z, ou un groupe-COCH2X, X représentant un atome d'halogène tel que Cl ou Br, ou RI représente H, sous réserve que lorsque Ri représente H, celui-ci se présente le cas échéant sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate de formule CF3CO2-, H3N-, R2 représente H ou un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, tel qu'un groupe isobutyle, R3 représente H ou un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, tel qu'un groupe isobutyle, ou R3 représente un groupe benzyle, 'l'un de R4 ou de R5 représente H, tandis que l'autre représente un groupe alkyle tel que défini ci-dessus, et R6 représente H ou un groupe protecteur BOC ou Z, n représente 1 ou 2, Y est tel que défini ci-dessus.

L'invention concerne plus particulièrement encore les composés susmentionnés de formule générale (I) dans laquelle : Ri représente un groupe protecteur BOC, ou Z, ou un groupe-COCH2X, X représentant un atome d'halogène tel que Cl ou Br, ou RI représente H, R2 représente H, 'rus représente un groupe isobutyle, ou un groupe benzyle, 'R4 représente H, ou un groupe méthyle ou isobutyle, # R5 représente H, ou un groupe isobutyle, 'rye représente un groupe protecteur BOC ou Z, n représente 1,

Y représente CH2. Des composés particulièrement préférés dans le cadre de la présente invention sont ceux de formules suivantes : CH2-CH (CH3) 2 (5a) z Boc N N 1 1 CH2-CH (CH3) 2 H H H ''Z z N//N (5b) Boc non CH,-CH (CH,), CH,-CH (CH,), CHi-CH (CH3) 2 !) Boc Z--"N'N (5c) CH," CH2 H H CH3 Z Boc CHZ CH (CH3) Z CHZ CH (CH3) 2 H /Z Boc N H Chu 1 Les composés préférés selon l'invention sont des composés de formule générale (I), dans laquelle : - Ri est différent de R2, - R5 est différent de R6, et - le groupe-N (Ri) (R2) est différent du groupe-N (R5) (R6).

De tels composés sont notamment choisis parmi les composés de formules (5a), (5b), (5c), (5d), (5e), (7a), (8a) et (8b) susmentionnées.

L'invention concerne également toute composition pharmaceutique comprenant un composé susmentionné de formule (I) en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.

Avantageusement, les compositions pharmaceutiques de l'invention sont caractérisées en ce qu'elles se présentent sous une forme administrable par voie intrapéritonéale, notamment à raison d'environ 5 mg/kg/jour.

L'invention a également pour objet l'utilisation de composés susmentionnés de formule (I), pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de cancers tels que les cancers du foie, du colon, du sein, des mélanomes, en induisant l'entrée en apoptose des cellules cancéreuses.

L'invention concerne également un procédé de préparation d'un composé susmentionné de formule (I), caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : - réaction du composé de formule (1) suivante dans laquelle Ri, R2, et R3 sont tels que définis ci-dessus, avec du bromoacétate de méthyle ce qui conduit à l'obtention des aza-3-amino esters de formule (2) suivante dans laquelle Ri, R2, et R3 sont tels que définis ci-dessus, - traitement du composé de formule (2) obtenu à l'étape précédente avec NaBH4 et LiCI, ce qui conduit à l'obtention des aza- (33-amino alcools de formule (3) suivante dans laquelle Rl, R2, et R3 sont tels que définis ci-dessus,

- traitement du composé de formule (3) obtenu à l'étape précédente par de la triéthylamine, du DMSO, et l'oxydant pyridine sulfure trioxyde, ce qui conduit à l'obtention des aza- (33-amino aldéhydes de formule (4) suivante dans laquelle Rl, R2, et R3 sont tels que définis ci-dessus, - réaction du composé de formule (4) obtenu à l'étape précédente avec le composé de formule (Ibis) suivante dans laquelle R4, R5, et R6 sont tels que définis ci-dessus, ce qui conduit à l'obtention de composés de formule (5) suivante dans laquelle RI, R2, R3 R4, Rs, et R6 sont tels que définis ci-dessus, - le cas échéant, traitement du composé de formule (5) obtenu à l'étape précédente avec de l'acide trifluoroacétique, ce qui conduit à l'obtention de composés de formule (6) suivante dans laquelle R3 R4, Rs, et R6 sont tels que définis ci-dessus, - le cas échéant, réaction du composé de formule (6) obtenu à l'étape précédente avec un composé de formule X-CH2-CO-X dans laquelle X représente un atome d'halogène tel que Cl ou Br, ce qui conduit à l'obtention de composés de formule (7) suivante dans laquelle X, R3 R4, R5, et R6 sont tels que définis ci-dessus, - le cas échéant, réaction du composé de formule (6) obtenu à l'étape précédente avec un aldéhyde borylé de formule ce qui conduit à l'obtention de composés de formule (8) suivante dans laquelle R3 R4, R5, et R6 sont tels que définis ci-dessus.

L'invention a également pour objet les composés intermédiaires de synthèse répondant aux formules (2), (3), et (4) susmentionnées, et leur utilisation dans le cadre de la mise en oeuvre dans le procédé de préparation décrit ci-dessus.

L'invention sera davantage illustrée dans la description détaillée qui suit la synthèse de composés de l'invention, et l'étude de leurs propriétés biologiques.

L'ALLN (inhibiteur des cystéines protéases et du protéasome) possède un aminoaldéhyde C terminal comme groupement électrophile. D'autres inhibiteurs d'activités comparables ont été développés tel que le dipeptide Z-Leu-Norleu-H également représenté sur le schéma ci-dessous.

o 1H o ~ o ~ N-YN-Y'"'Y' H Ô H Ô H Ô Ac-Leu Leu Norleu-H Z-Leu Norleu-H ALLN Ki= 0, 19pM Ki= 0, 07, uM L'ALLN (le N-acétyl-Leucyl-Leucyl-Norleucinal) inhibe la progression du cycle cellulaire en affectant la transition Gl/S et la transition métaphase-anaphase au moment de la mitose. De fortes concentrations d'ALLN (> 50 ug/ml) produisent un arrêt prolongé en mitose tandis que des concentrations plus faibles ont pour conséquence un ralentissement de la mitose. Les cellules peuvent ensuite engager un second cycle.

Toutefois, il est bien connu que les amino aldéhydes sont peu stables et se racémisent très rapidement, ce qui entraîne une modification ou perte d'activité. D'où

l'idée de synthétiser des analogues ne possédant aucun centre d'asymétrie de configuration fixée afin d'obtenir une activité maximum vis à vis de l'inhibition spécifique de la dégradation des protéines kinases impliquées dans le cycle.

L'invention fait converger le développement d'une nouvelle série de pseudopeptides, des hydrazinopeptoïdes réduits de formule générale I, et l'analyse de leur mode d'action sur des cibles biologiques (inhibition de l'activité protéolytique du protéasome in vitro) ainsi que des disfonctionnements de la division cellulaire observée dans certaines pathologies cancéreuses ou neurodégénératives.

Le cycle cellulaire est divisé en deux périodes distinctes : l'interphase (réplication de l'ADN) et la mitose. Les transitions entre les phases du cycle cellulaire des eucaryotes, et la progression au sein de chacune de ces phases sont très fortement contrôlées au niveau moléculaire. Les mécanismes qui contrôlent l'entrée et la sortie de mitose et donc la ségrégation chromosomique sont très mal connus. Un défaut dans une des étapes de ces processus peut conduire à des altérations du caryotype telle que la perte ou le gain d'un chromosome et/ou un changement de ploïdie qui sont fréquemment observés dans les tumeurs.

D'une manière générale, les phases sont contrôlées par des complexes protéiques composés d'une sous unité catalytique, une protéine kinase de type cdk (cyclin dependent kinase) et d'une sous unité régulatrice qui est une cycline. L'interdépendance entre les phases S et M nécessite différents niveaux de régulation. Le système ubiquitine/protéasome qui représente un des mécanismes de dégradation des protéines, intervient dans certains processus cellulaires, tels que la réponse immunitaire des lymphocytes infestés par un virus. Il est également impliqué dans la dégradation de protéines associées au bon déroulement du cycle cellulaire. Le disfonctionnement des processus de dégradation est corrélé à un certain nombre de pathologies telles des pathologies neuro-dégénératives ou cancéreuses. L'inactivation du protéasome par des inhibiteurs spécifiques permettra de comprendre la mécanistique du disfonctionnement de la dégradation des protéines et ainsi d'envisager de nouvelles classes de molécules antitumorales.

Le système ubiquitine/protéasome est responsable de la dégradation d'une grande majorité de protéines cellulaires incluant non seulement les protéines régulatrices à courte durée de vie (cyclines, les inhibiteurs de cyclines, certaines protéines kinases) mais également, les protéines incorrectement structurées et/ou de demi-vie longue.

Dans les cellules cancéreuses, l'ubiquitination est parfois considérablement augmentée

ce qui favorise et amplifie la reconnaissance de celles ci par le protéasome par voie de conséquence, cette modification post-traductionelle accroît le turnover des protéines régulatrices du cycle et contribue ainsi a une dérégulation du cycle cellulaire et l'apparition de mitoses anormales. D'autre part, le protéasome est impliqué dans la dégradation de protéines proapoptotiques, dans les conditions normales de croissance, ces protéines sont dégradées et synthétisées à chaque cycle. Un grand nombre de pathologies neuro-dégénératives et/ou cancéreuses, associées à ces disfonctionnements ont été largement documentées depuis ces dernières années. Par exemple, le fonction onco-suppressive de p53 (protéine impliquée dans la réparation de l'ADN) est altérée dans certains cancers tels que les cancers du col de l'utérus et du colon.

Dans une cellule normale, les inhibiteurs du protéasome sont relativement peu actifs. Contrairement les inhibiteurs du protéasome sont plus actifs sur les cellules tumorales induisant la production de protéines apoptotiques et par voie de conséquence l'entrée des cellules tumorales en apoptose.

Dans les synthèses réalisées dans le cadre de la présente invention, c'est l'inhibition du protéasome que nous avons ciblé afin de produire des molécules antimitotiques et à plus long terme envisager des nouvelles classes de molécules à visée thérapeutique.

Méthodologie de synthèses des hydrazinopeptoïdes réduits : L'invention porte sur la synthèse d'hydrazinopeptoïdes réduits. Les chaînes latérales des monomères, mimant les aminoacides, sont portées par des atomes d'azote qui sont isoélectroniques des CHa ce qui leur conférerait une grande liberté conformationnelle. De plus, ces monomères ne possèdent aucun centre d'asymétrie de configuration fixée. Le positionnement correct de la chaîne peptidique dans un site enzymatique se produirait à la fois par le déplacement d'équilibres conformationnel et configurationnel. On pourrait envisager que l'action d'un tel composé, d'un point de vue stéréochimique, soit équivalente à celle d'un mélange de diastéréoisomères en équilibre rapide, l'interaction avec le site enzymatique déplaçant l'équilibre vers le composé le plus affine. D'autres bénéfices potentiels peuvent également en résulter tels qu'une simplification des méthodes de synthèse (suppression des problèmes stéréochimiques) et une plus grande résistance de tels analogues aux squelettes modifiés vis-à-vis de l'action des peptidases. La méthode de la présente invention permet d'introduire une grande variété des chaînes latérales, protéogéniques ou non protéogéniques, dans des

positions choisies. Ceci permet d'une part de mimer la plupart des aminoacides naturels et non naturels et d'autre part d'introduire sur le squelette pseudopeptidique des chaînes latérales susceptibles de moduler ses caractéristiques biophysiques. L'introduction de groupements favorisant le passage de ces analogues à travers les membranes cellulaires (chaînes lipophiles) ou augmentant leur solubilité dans le milieu plasmatique (groupements perfluorés par exemple) permet de moduler, voire, d'optimiser la biodisponibilité de ces composés.

Deux voies de synthèse de monomères aza- (33-amino acides ont été mises au point, selon la nature des chaînes latérales que l'on désire mimer : - Soit par bromoacétylation d'hydrazines N, N'-disubstituées, la déprotection du monomère orthogonalement protégé conduisant à l'aza p3 amino acide désiré avec des rendements de l'ordre de 60-80 %.

- Soit par amination réductrice de l'acide slvoxylique.

De la même manière qu'il est aujourd'hui possible de préparer des a-amino aldéhydes à partir du pool des a-amino acides, il nous a été possible à partir des aza ß3- amino acides d'obtenir des dérivés alcools et aldéhydiques. avec de bons rendements. GP HN ^ GPHN ^ GPHN N C02R, N CH20H--- N CHO LiCI/NaBH4 R Ss/pyridine

Les monomères préparés dans le cadre de la présente invention, ainsi que le pool d'hydrazines diversement substituées que nous possédons, constituent un point de départ pour la construction de nouveaux fragments pseudodipeptidiques. Il a ainsi été possible de synthétiser selon le schéma réactionnel suivant des hydrazinopeptoïdes réduits orthogonalement protégés.

Après déprotection des extrémités C ou N-terminales, il a été possible : - soit de fonctionnaliser l'une ou l'autre des extrémités afin d'obtenir des analogues dipeptidiques tels que D, E et F.

- soit de coupler une nouvelle unité aza 3 amino acide sur une des extrémités et fonctionnaliser l'autre extrémité afin d'obtenir des analogues tripeptidiques tel que G ou H.

1 Méthodologie de synthèse I) Monomères aza-ß3-amino acides 1-Synthèse d'aza-ß3-amino esters N-protégés 2 Ruz ruz z OMe Toluène OMe R/NNH+ Br-- R1/NN reflux, 18 heures ! (2) R m3 (1 (2) A une solution d'hydrazine 1 (lOmmol, léq) dans 50ml de toluène, 3 équivalents de bromoacétate de méthyle (30mmol) et 1.5 équivalents de K2CO3 (15mmol) sont ajoutés. Le mélange est porté au reflux pendant 18 heures. Le KBr formé est filtré sur papier. Le toluène et bromoacétate de méthyle en excès sont coévaporés avec du chloroforme sous pression réduite. L'aza-ß3-amino méthyl ester 2, obtenu sous forme d'huile jaune, est suffisamment pur pour être utilisé dans les réactions ultérieures.

2a R1 = Boc, R2 = H, R3 =CH2CH (CH3) 2 Rdt : 98% ; Huile jaune RMN 1H (CDCl3) # (ppm) : 0.95 (d, 6H, J=6. 6Hz) ; 1.45 (s, 9H) ; 1.72 (m, 1 H) ; 2.64 (d, 2H, J=7. 5Hz) ; 3.70 (s, 2H) ; 3. 73 (s, 3H) ; 6. 54 (sl, 1H) RMN 13C (CDCI3) 8 (ppm) : 20.8 (q) ; 26. 8 (d) ; 28.5 (q) ; 51.7 (q) ; 58. 1 (t) ; 65.2 (t) ; 79.9 (s) ; 155.4 (s) ; 171.6 (s) Analyse élémentaire de C12H24N204, Tr. C (55.13), H (9.34), N (10.80), Calc. C (55.36), H (9.29), N (10.76).

2b R1 = Z, R2 = H, R3 =CH2CH (CH3) 2, Rdt : 96% ; Huile jaune RMN1H (CDCl3) # (ppm): 0.97 (d, 6H, J=6. 4Hz) ; 1.66 (m, 1H) ; 2.58 (d, 2H, J=7. 0Hz) ; 3. 74 (m, 2H+3H) ; 5.15 (s, 2H) ; 6.76 (sl, 1H) ; 7.27 (s, 5H)

RMN13C (CDCl3) # (ppm) : 20.9 (q) ; 26.9 (d) ; 52.0 (q) ; 58. 2 (t) ; 65.3 (t) 67.3 (t) ; 128.6 (d) ; 128. 8 (d) ; 128. 9 (d) ; 136. 6 (s) ; 156. 0 (s) ; 171.6 (s) Analyse élémentaire de C, 5H22N204 : Tr. C (61.13), H (7.43), N (9.68), Calc. C (61.21), H (7. 53), N (9.52).

2c RI = Boc, R2 = H, R3 = CH2Ph Rdt : 94% ; Huile jaune RMN1H (CDCl3) # (ppm) : 1.64 (s, 9H) ; 3.93 (s, 2H) ; 3.98 (s, 3H) ; 4.36 (s, 2H) ; 7.53-7. 63 (m, 5H) ; 6.95 (sl, 1H).

Analyse élémentaire de C15H22N2O4: Tr. C (61.18), H (7. 50), N (9. 58), Calc. C (61. 21), H (7. 53), N (9.52).

2dR=Boc, R2=H, R3=CH3 Rdt : 90% ; mp : 87°C RMNIH (CDCI3, Sppm) : 1.3 (s, 9H) ; 2.75 (s, 3H) ; 3.7 (s, 2H) ; 3.8 (s, 3H) ; 6.6 (s, 1H).

Analyse élémentaire de C9Hl8N204 : Tr. C (49.48), H (8.23), N (12.79), Calc. C (49.53), H (8. 31), N (12.84).

2eRl=Z, R2=H, R3=CH3 Rdt : 95%, Huile RMN1H (CDCl3, # ppm) : 2.7 (s, 3H) ; 3.7 (s, 2H) ; 3.72 (s, 3H) ; 5.1 (s, 2H) ; 6.9 (s large, 1H) ; 7.4 (m, SH).

Analyse élémentaire de C12Hl6N204 Tr. C (57.08), H (6.28), N (11.15), Cale. C (57.13), H (6. 39), N (11.10).

2-Synthèse d'aza-ß3-amino alcool 3

A une solution d'aza-ß3-amino méthylester 2 (lOmmol, léq) dans 50ml d'éthanol et de tétrahydrofurane (65/35) sont ajoutés 1.5 équivalents (15mmol) de NaBH4 et 1.5 équivalents de LiCI (15mmol). Ce mélange est laissé sous agitation à température ambiante pendant une nuit. Le milieu réactionnel est acidifié par HCl 2N puis extrait par deux fois 50ml de dichlorométhane. La phase organique est lavée successivement 2 fois par 50ml d'eau, 50 ml de NaHCO3 2N et 50ml d'une solution saturée en NaCI. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, puis évaporée sous pression réduite pour conduire à l'aza-ß3-amino alcool 3 qui cristallise lentement.

3a RI = Boc, R2 = H, R3 =CH2CH (CH3) 2 Rdt : 76% ; Pf : 83°C RMN IH (CDCI3) i (ppm) 1.11 (d, 6H, J=6. 5Hz) ; 1.61 (s, 9H) ; 1.93 (m, 1H) ; 2.28 (d, 2H, J=7Hz) ; 2.90 (t, 2H, J=4. 5Hz) ; 3.73 (t, 2H, J=4. 0Hz) ; 4.13 (s, 1H) ; 5.62 (s, 1H) RMN13C (CDCl3) # (ppm) 20.9 (q) ; 26.8 (d) ; 28.6 (q) ; 58.9 (t) ; 61. 0 (t) ; 67. 3 (t) ; 80.6 (s) ; 156.9 (s) Analyse élémentaire de CnH24N203 : Tr. C (56.77), H (10.32), N (12.21), Calc. C (56.87), H (10.41), N (12.06).

3b Rl = Z, R2 = H, R3 =CH2CH (CH3) 2, Rdt : 83% ; Huile jaune RMN1H (CDCl3) # (ppm): 1. 13 (d, 6H, J=6. 5Hz) ; 1.95 (m, 1H) ; 2.68 (d, 2H, J=7. 0Hz) ; 2.93 (large, 2H) ; 3.75 (t, 2H, J=4. 7Hz) ; 4.21 (s, 1H) ; 5.30 (s, 2H) ; 6.21 (s, 1H) ; 7.52 (s, 5H) RMN13C (CDCl3) # (ppm) : 20.9 (q) ; 26.7 (d) ; 58. 9 (t) ; 60.9 (t) ; 67.1 (t) ; 67.5 (t) ; 128.5 (d) ; 128.7 (d) ; 128.8 (d) ; 128.9 (d) ; 136.5 (s) ; 157. 6 (s) Analyse élémentaire de C14H22N2O3: Tr. C (63.02), H (8.22), N (10. 33), Calc. C (63.13), H (8. 33), N (10. 52).

3c R1 = Boc, R2 = H, R3 = CH3 Rdt : 70% ; huile RMN1H (CDCl3, # ppm) : 1.3 (s, 9H, Boc) ; 2.55 (s, 3H, CH3) ; 2.6 (t, 2H, CH2) ; 3.5 (t, 2H, CH2) ; 4 (s large, 1H, OH) ; 5.9 (s, 1H, NH).

Analyse élémentaire de C8H8N203 Tr. C (50.42), H (9.45), N (14.63), Calc. C (50. 51), H (9. 54), N (14. 73).

3dRi=Z, R2=H, R3=CH3 Rdt : 80% ; huile RMNIH (CDC13, Sppm) : 2.7 (s, 3H, CH3) ; 2.8 (t, 2H, CH2) ; 3.4 (s large, 1H, OH) ; 3.6 (t, 2H CH2) ; 5.1 (s, 2H, CH2) ; 6. 2 (s large, 1H, NH) ; 7.4 (m, SH, Ph).

Analyse élémentaire de CHl6N203 Tr. C (58.85), H (7.22), N (12.33), Calc. C (58.91), H (7. 19), N (12.49).

Masse C11H16N2O3: [M+Na]+ m/z théorique : 247. 1059 ; m/z trouvé : 247.1060 3-Synthèse d'un aza-p3-amino aldéhyde 4 A une solution d'azaß3-amino alcool 3 (lOmmol, léq) dans 30ml de dichlorométhane sont ajoutés 3 équivalents de triéthylamine (30mmol), 3 équivalents de DMSO (30mmol), suivis de 3 équivalents de l'oxydant pyridine sulfure trioxyde (30mmol) à une température de 15°C. On place ce mélange sous agitation à température ambiante pendant 4 heures, la phase organique est ensuite lavée deux fois successivement par 30ml d'eau puis 30ml de NaHC03 2N, et enfin 30ml d'une solution saturée en NaCl. Après séchage sur sulfate de sodium, le solvant organique est évaporé sous pression réduite, on obtient une huile marron qui correspond à l'aza-p3-amino aldéhyde 4.

4a R, = Boc, R2 = H, R3 = CH2CH (CH3) 2 Rdt : 71 %, Huile RMN1H (CDCl3) # (ppm): 0. 97 (d, 6H, J=6.6Hz) ; 1.25 (s, 9H) ; 1.74 (m, 1H) ; 2. 57 (d, 2H, J=7Hz) ; 3.65 (sl, 2H) ; 6.10 (sl, 1H) ; 9.77 (t, 1H, J=1. 2Hz) RMN 13C (CDCl3) # (ppm) : 20.5 (q) ; 26.5 (d) ; 28.3 (q) ; 65.4 (t) ; 67.2 (t) ; 81. 5 (s) ; 154.9 (s) ; 201.5 (d).

CuH22N203, 230. 30

4b RI = Z, R2 = H, R3 =CH2CH (CH3) 2, Rdt : 75% RMN1H (CDCl3, 8 ppm) : 0.9 (d, 6H) ; 1.8 (m, 1H) ; 2.55 (d, 2H) ; 3.7 (s, 2H) ; 5.2 (s, 2H) ; 6.9 (s, 1H) ; 7.3 (m, 5H) ; 9.75 (s, 1H).

C14H20N2O3, 4c Rl = Boc, R2 = H, R3 = CH3 Rdt : 75% RMN1H (CDC13, 8 ppm) : 1.3 (s, 9H) ; 2.55 (s, 3H) ; 3.6 (d, 2H) ; 6.2 (s, 1H) ; 9.75 (s, 1H).

C8Hs6N203, 188.22 4d R1 = Z, R2 = H, R3 = CH3 Rdt : 80% RMN1H (CDCl3, 8 ppm) : 2.8 (s, 3H) ; 3.65 (s, 2H) ; 5.1 (s, 2H) ; 6.8 (s large, 1H) ; 7.4 (m, 5H) ; 9.75 (s, 1H).

C11H14N2O3, 222.24 II) Dimères réduits orthogonalement protégés A une solution d'aza-ß3-amino aldéhyde 4 (lOmmol, léq) dans l'éther (10ml) est ajoutée l'hydrazine Ibis (12mmol, 1.2 équivalents), puis le pH est ajusté à 4 par addition de HCl 2N. Après 1 heure d'agitation à température ambiante, l'éther est évaporé et le milieu est dissout dans 10ml d'éthanol. Le cyanoborohydure de sodium (12mmol, 1.2 équivalents) est additionné par petites fractions et le mélange est laissé sous agitation pendant 2 heures. Le complexe borylé est hydrolysé à pH 1 par ajout de HCl 2N, puis le pH est réajusté à 7 par addition de NaHC03 2N. 10mL de chloroforme sont ajoutés au milieu et la phase organique est lavée successivement par 2 fois 20ml de HCl 2N, puis 20ml d'eau saturé en NaCl. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium et les solvants sont évaporés sous pression

réduite. On obtient le dimère 5 sous forme d'huile ou de solide lavé deux fois par 20ml d'éther.

5a RI = Boc, Ruz = H, R3 = CH2CH (CH3) 2, R4 = CH2CH(CH3)2, R5 = H, R6 = Z Rdt : 80% ; Huile RMN'H (CDC13) S (ppm) 0.82 (d, 2x6H, J=6.8Hz) ; 1.34 (s, 9H) ; 1.64 (m, 2xlH) ; 2.28 (d, 2H, J=6.3Hz) ; 2.38 (d, 2H, J=6.3Hz) ; 2.76 (m, 2x2H) ; 5.02 (s, 2H) ; 5.89 (sl, 1H) ; 6.83 (sl, 1H) ; 7.23 (s, 5H) RMN13C (CDCl3) # (ppm) 21.2 (q) ; 26.5 (d) ; 28.8 (q) ; 55. 4 (t) ; 56. 3 (t) ; 65.3 (t) ; 66.7 (t) ; 79.9 (s) ; 127.1 (d) ; 127.5 (d) ; 127.7 (d) ; 139. 9 (s) ; 156. 2 (s) ; 157. 7 (s) Analyse élémentaire de C23H40N4O4: Tr. C (63.21), H (9.23), N (12.83), Calc. C (63.41), H (9. 25), N (12.40).

Masse C23H40N4O : [M+Na] + m/z théorique : 459.2947 ; m/z trouvé : 459.2942 5b RI = Boc, R2 = H, R3 = CH2CH(CH3)2, R4 = H, R5 = CH2CH(CH3)2, R6 = Z Rdt : 80% ; Huile RMN 1H (CDCl3) # (ppm) 0.77-087 (d, 2x6H, J=6.7Hz) ; 1.36 (s, 9H) ; 1.63 (m, 1H) ; 1.95 (m, 1H) ; 2.19-2. 58 (large, 2x2H) ; 2. 85 (m, 2H) ; 3.14 (t, 2H, J=6.9Hz) ; 3. 89 (sl, 1H) ; 5.0 (s, 2H) ; 6.43 (sl, 1H) ; 7.27 (s, 5H) RMN13C (CDCl3) # (ppm) 20.3 (q) ; 21.1 (q) ; 26.8 (d) ; 27.3 (d) ; 28.8 (q) ; 47.6 (t) ; 58.2 (t) ; 65.4 (t) ; 67.8 (t) ; 80.2 (s) ; 128. 3 (d) ; 128. 5 (d) ; 128. 9 (d) ; 136. 9 (s) ; 155. 4 (s) ; 157. 4 (s) Analyse élémentaire de C23H40N4O4 Tr. C (63.13), H (9.44), N (12.80), Calc. C (63.41), H (9.25), N (12.40).

Masse de C23H40N404 [M+H] + m/z théorique : 437.3128 ; m/z trouvé : 437.3119 5c R1 = Z, Ruz = H, R3 = CH2Ph, R4 = CH2CH (CH3) 2, Rs = H, R6 = Boc Rdt : 80% RMN1H (CDCl3, # ppm) : 0.9 (d, 6H, 2xCH3) ; 1.4 (s, 9H, Boc) ; 1.75 (m, 1H, CH) ; 2.35 (d, 2H, CH2) ; 2.95 (m, 4H, 2xCH2) ; 4.1 (s, 2H, CH2) ; 5.2 (s, 2H, CH2) ; 5.75 (s, 1H, NH) ; 6.9 (s, 1 H, NH) ; 7.3 (m, 1 OH, 2xPh).

RMNi3C (CDC13, 6 ppm) : 21.1 (q), 26.7 (d), 28.5 (q), 56.1 (t), 56.6 (t), 58.9 (t), 67 : 2 (t), 80.6 (s), 128.4 (d), 128.7 (d), 128.9 (d), 129.1 (d), 129.7 (d), 135.8 (d), 137.1 (d), 159.9 (s), 161.2 (s).

Masse de C26H38N404 : [M+Na] + m/z théorique : 493.2791 ; m/z trouvé : 493.2787 5d RI = Boc, R2 = H, R3 = CH2CH (CH3) 2, R4 = CH3, Rs = H, R6 = Z Rdt : 84% RMN'H (CDCl3, 8 ppm) : 0.8 (d, 6H, 2xCH3) ; 1.35 (s, 9H, Boc) ; 1.65 (m, 1H, CH) ; 2.25 (m, 2H, CH2) ; 2.45 (s, 3H, CH3) ; 2.6 (m, 4H, 2xCH2) ; 5.1 (s, 2H, CH2) ; 6.75 (s, 1H, NH) ; 7.4 (m, 5H, Ph).

RMN13C (CDCl3, # ppm) : 20.5 (q), 21.0 (q), 26.4 (d), 28.5 (q), 47.6 (q), 55.3 (t), 56.9 (t), 62.1 (t), 66.2 (t), 82.1 (s), 128.4 (d), 128.7 (d), 128.9 (d), 136.8 (d), 158.3 (s), 161.2 (s).

Masse de C2lH36N404 : [M+Na] + m/z théorique : ; m/z trouvé : 5e RI = Boc, R2 = H, R3 = CH2Ph, R4 = CH2CH (CH3) 2, R5 = H, R6 = Z Rdt : 40% RMN'H (CDC13, # ppm) : 0.9 (d, 6H, 2xCH3) ; 1.4 (s, 9H, Boc) ; 1.8 (m, 1H, CH) ; 2.35 (d, 2H, CH2) ; 2.95 (m, 4H, 2xCH2) ; 4.1 (s, 2H, CH2) ; 5.1 (s, 2H, CH2) ; 6.4 (s, 1H, NH) ; 6.9 (s, 1H, NH) ; 7.3 (m, 10H, 2xPh).

RMN13C (CDCl3, # ppm) : 21.2 (q), 26.6 (d), 28.6 (q), 56.2 (t), 56.7 (t), 58.9 (t), 67.2 (t), 80.9 (s), 128.4 (d), 128.7 (d), 128.9 (d), 129.4 (d), 129.7 (d), 135.8 (d), 137.1 (d), 159.7 (s), 161.3 (s).

Masse de C26H38N404 : [M+Na] + m/z théorique : 493.2791 ; m/z trouvé : 493.2786 III) Déprotection des hydrazino azapeptoïdes réduits L'hydrazino azapeptoïde réduit 5 (lOmmol, léq) est solubilisé dans un mélange 50/50 (15ml) de dichlorométhane et d'acide trifluoroacétique. Le milieu est laissé sous agitation pendant 3 heures. Le solvant est évaporé et le résidu est solubilisé dans 10ml d'eau. La phase aqueuse est lavée par deux fois 15ml d'éther. Le pH est ensuite ramené à 7 à l'aide de NaHC03 2N et la phase organique est lavée par 2 fois 50ml d'eau. Après séchage sur sulfate

de sodium la phase organique est évaporée sous pression réduite. Le produit 6 est obtenu sous la forme d'une huile.

6a NH2-N-iBu-(CH2) 2-N-azaLeu-OBz R3 = CH2CH (CH3) 2, R4 = CH2CH (CH3) 2, Rs = H, R6 = Z Rdt : 74%, Huile RMN1H (CDCl3) # (ppm) 1.15 (d, 2x6H, J=6.6Hz) ; 2.01 (m, 2H) ; 2.47 (d, 2H, J=6.8Hz) ; 2.52 (large, 2H) ; 2.78 (t, 2H, J=4.3Hz) ; 3.14 (large, 2H) ; 3.24 (large, 2H) ; 5.34 (s, 2H) ; 6. 48 (sl, 1H) ; 7.56 (m, 5H) RMN'3C (CDCl3) a 07pm) 21.1 (q) ; 26. 2 (d) ; 26.6 (d) ; 56.1 (t) ; 58. 3 (t) ; 66.9 (t) ; 70. 9 (t) ; 128.4 (d) ; 128.8 (d) ; 128.9 (d) ; 136. 9 (s) ; 156.9 (s) Cl8H32N402, 336. 47 6b NH2-NBz-N-azaLeu-OBz R3 = CH2Ph, R4 = CH2CH (CH3) 2, R5 = H, R6 = Z Rdt : 67%, Huile RMN IH (CDCl3) a (ppm) 0.90 (d, 6H, J=6.6Hz) ; 1.75 (m, 1H) ; 2.58 (d, 2H, J=6. 8Hz) ; 3.12 (large, 2H) ; 3.28 (large, 2H) ; 4.18 (s, 2H) ; 5.17 (s, 2H) ; 6.32 (sl, 1H) ; 7.39 (m, 5H), 7.47 (m, 5H) IV)-Refonctionalisation de l'hydrazino azapeptoïde réduit La solution d'hdyrazino N-azapeptoïde 6 déprotégé à l'extrémité N-terminale (2mmol, léq) dans le dichlorométhane distillé (10ml) est refroidie à 0°C dans un bain de glace et de sel. On ajoute la triéthylamine distillée (2.2mmol, l. léq) et le bromure de bromoacétyle (2.2mmol, 1. 1éq) dans le dichlorométhane (1 Oml) est additionné goutte à goutte en une heure. Le mélange est ensuite laissé sous agitation à température ambiante pendant 5

heures, puis lavé 3 fois par 20ml d'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium et le solvant est évaporé sous pression réduite. L'analogue réduit 7 est obtenu sous la forme d'un solide qui précipite lentement à froid dans l'éther et est recristallisé dans l'éther.

7a BrCH2CO-NHNiBu-(CH2) 2-N-aza-Leu-OBz RI =-CO-CH2-Br, R2 = H, R3 = CH2CH (CH3) 2, R4 = CH2CH (CH3) 2, R5 = H, R6 = Z m. p., Rdt : 55%, RMN IH (CDCI30 a pm) 0.96 (d, 2x6H, J=6.6Hz) ; 1.78 (m, 2xlH) ; 2.47 (d, 2H, J=7Hz) ; 2.56 (d, 2H J=7Hz) ; 2.91 (large, 2H) ; 2.97 (large, 2H) ; 3.79 (s, 2H) ; 5.16 (s, 2H) ; 5.90 (sl, 1H) ; 7.03 (sl, 1H) ; 7. 38 (m, 5H) RMN 13C (CDCI3) a (ppm) 18.7 (q) ; 19.6 (q) ; 28.5 (d) ; 29.5 (d) ; 55.5 (t) ; 61.75 (t) ; 62.27 (t) ; 66.44 (t) ; 127.6 (d) ; 128.4 (d) ; 128.6 (d) ; 136.8 (s) ; 159.0 (s) ; 175.7 (s) Analyse élémentaire de C20H33N4O3Br : Tr. C (52.52), H (7.27), N (12.25) ; Calc. C (52.48), H (7.27), N (12.32).

V)-Refonctionalisation de l'hydrazino azapeptoïde réduit par un acide boronique : A une solution sous agitation d'hydrazino azapeptoïde réduit 6 (5 mmol, 1 équi) dans 5 ml d'éther est ajouté par petites fractions l'aldéhyde borylé (5.5 mmol, 1.1 équi) en solution dans l'éther (10 mL). Le milieu est laissé sous agitation pendant 1 heure. L'huile obtenue est chromatographiée. m-B (OH) 2-Ph-HC=NahPhe-N-azaLeu-Z : Rl, R2 = (HO) 2Bm- (C6H4) CH=, R6 = Z, mp = °C ; RMN 1H (CDCl3) # (ppm) 0.87 (d, 6H, J=6, 5 Hz), 1.75 (m, 1H), 2.46 (large, 2H), 3.04 (large, 2H), 3.52 (large, 2H), 3.72 (large, 2H), 4.24 (s, 2H), 5.16 (s, 2H), 7.09 (m, 1H), 7.22 (m, 10H), 7. 37 (large, 1H), 7.84 (d, 1H), 8.10 (s, 2H), 10.0 (s large, 1H).

RMN 13C (CDCl3) 6 (ppm)

21.0 (q), 26.3 (t), 54.0 (t), 66.5 (t), 66.9 (t), 67.9 (t), 128.1, 128.6, 128.8, 129.1, 129.3, 128.6, 128.8, 131.1, 131.8, 135.9, 136.9, 141.1, 170.8 (s).

Analyse élémentaire de C28H35N404B : Tr. : C, (65.39) ; H, 6. 31 ; N, 11.23 ; B, 1.77. Calc. C, 65.13 ; H, 6.44 ; N, 10. 85 ; B, 2.09. m-B (OH) 2-Ph-HC=NahPhe-N-azaLeu-Z : Ri, R2 = (HO) 2Bm-(C6H4) CH=, R6 = Z, X = CH2, R3=i-Bu, R4=i-Bu, R5 = H mp = °C ; RMN IH (CDC13) 8 (ppm) 0.87 (d, 6H, J=6, 5 Hz), 1.75 (m, 1H), 2.46 (large, 2H), 3.04 (large, 2H), 3.52 (large, 2H), 3.72 (large, 2H), 4.24 (s, 2H), 5.16 (s, 2H), 7.09 (m, 1H), 7.22 (m, 10H), 7. 37 (large, 1H), 7.84 (d, 1H), 8.10 (s, 2H), 10.0 (s large, 1H).

RMN 13C (CDC13) 5 (ppm) 21.0 (q), 26.3 (t), 54.0 (t), 66.5 (t), 66.9 (t), 67.9 (t), 128.1, 128.6, 128.8, 129.1, 129.3, 128.6, 128.8, 131.1, 131.8, 135.9, 136.9, 141.1, 170.8 (s).

Analyse élémentaire de C28H35N404B : Tr. : C, (65.39) ; H, 6.31 ; N, 11.23 ; B, 1.77. Calc. C, 65.13 ; H, 6.44 ; N, 10.85 ; B, 2.09.

II-Activité Biologique des composés réduits Dans les cellules eucaryotes la grande majorité des protéines impliquées dans la régulation du cycle cellulaire est dégradée par le protéasome Cette voie de dégradation est très précisément régulée et est très sélective à la fois dans le choix des protéines à dégrader et dans le choix du moment de la phase du cycle cellulaire où la protéine sera dégradée. Le système ubiquitine-protéasome joue également un rôle très important dans le contrôle de la division cellulaire Une activité trop importante du protéasome peut donc être à l'origine de la présence d'un taux anormalement bas de protéines impliquées dans la limitation de la prolifération cellulaire comme les suppresseurs de tumeur. De même, une activité réduite du protéasome peut être à l'origine de la présence d'une quantité anormalement élevée de protéines impliquées dans la stimulation de la prolifération cellulaire comme les oncogènes.

Le protéasome joue également un rôle très important dans l'entrée en apoptose des cellules. Certains inhibiteurs du protéasome peuvent provoquer une inhibition de l'apoptose et d'autres une activation de l'apoptose. Une hypothèse actuelle est que certaines protéines contrôlant l'entrée en apoptose sont continuellement synthétisées mais continuellement dégradées par le protéasome. Ce serait une des raisons pour laquelle une inhibition du protéasome aurait pour conséquence directe une induction de l'apoptose.

Les inhibiteurs du protéasome ont donc un très sérieux potentiel anticancéreux et les nombreuses études cliniques actuellement en cours pour évaluer leur rôle comme adjuvant dans des protocoles de chimiothérapie témoignent de cette importance.

Effet antiprolifératif des composés sur des tissées cancéreuses Les inventeurs ont étudié l'effet des pseudopeptides comparativement sur des lignées cellulaires normales et tumorales ceci afin de déterminer la spécificité cellulaire d'action des composés. Ils ont analysé la croissance cellulaire ainsi que la viabilité des cellules sous l'effet du pseudo peptide réduit 7a sur les lignées suivantes.

Skov3 : cancer de l'ovaire (humain) OvCar3 : cancer de l'ovaire (humain) L1210 : Leucémie de souris Action antiproliférative des pseudodipeptides sur les différentes lignées tumorales La cytotoxicité des pseudopeptides est évaluée par la capacité des cellules viables à réduire le bromure de 3- (4, 5-diméthylthiazol-2-yl) -2,5-diphényltétrazolium (ou MTT, produit jaune soluble dans l'eau) en cristaux de formazan, produit insoluble dans l'eau, mais soluble dans le DMSO (de couleur violette) via les déshydrogénases mitochondriales. La quantité de cellules viables est donc proportionnelle à la quantité de cristaux formés. Un grand nombre d'inhibiteurs du protéasome se sont révélés avoir une action antiproliférative sur des lignées cancéreuses. L'action antiproliférative des composés a donc été regardée sur plusieurs lignées cancéreuses. Skov3 OvCar3 L1210 7a 5, 551, 29 1, 970, 15 3, 21, 0 Testé sur les différentes lignées citées, le composé 7a s'est avéré être un très bon composé antiprolifératif pour les 3 lignées tumorales.