DESCRIPCIÓN

La presente invención se refiere a la elaboración, uso y composición que comprende un extracto de estigmas de azafrán (Crocus sativus L.) obtenido a escala industrial para su uso como medicamento. Específicamente, se refiere a una composición eficaz en la prevención de trastornos del estado de ánimo relacionados con la depresión.

Esta invención se encuadra en el campo de la industria farmacéutica, concretamente dentro del campo de la prevención de los trastornos del estado de ánimo relacionados con la depresión. El extracto de azafrán de la presente invención está titulado en safranal y crocinas mediante Cromatografía Líquida de Alta Eficacia (HPLC), que son principios activos relacionados con la inhibición de la recaptación de neurotransmisores relacionados con el estado de ánimo. Este extracto se presenta como una alternativa natural para evitar el uso de antidepresivos sintéticos, que tienen múltiples contraindicaciones y desventajas asociadas. La presente invención determina la dosis efectiva y la concentración adecuada de safranal y crocinas en el extracto final analizados mediante HPLC, como condición crítica para la eficacia del producto en la prevención de trastornos del estado de ánimo relacionados con la depresión, demostrado por un estudio clínico en el que participaron 128 individuos.

SECTOR DE LA INVENCIÓN

La aplicación de la presente invención se enmarca dentro de la industria farmacéutica, concretamente dentro del campo de la prevención de los trastornos del estado de ánimo relacionados con la depresión.

ESTADO DE LA TÉCNICA

Después de la hipertensión, el trastorno depresivo es la condición médica más común en países desarrollados (Akhondzadeh et al., 2008). La Organización Mundial de la Salud (OMS) lo define como el más común de los trastornos mentales, que afecta a un alto porcentaje de la población. Los síntomas más comunes son la pérdida de peso, cuadros de ansiedad, hipocondriasis, insomnio, trastornos somáticos y sexuales, sentimientos de culpabilidad, de suicidio, etc. (Hamilton, 1960). Largos períodos de depresión pueden desembocar en la aparición de patologías crónicas como enfermedades cardiacas, metabólicas como es el caso de la diabetes o trastornos hormonales, entre otras (Moussavi et al., 2007; Bisschop et al., 2004).

Dado que una de las principales causas de la aparición de la depresión es la disminución de algunos neurotransmisores relacionados con el estado de ánimo (Carr et al., 201 1 ; Lopresti y Drummond, 2014), los antidepresivos más empleados en la actualidad son inhibidores selectivos de la recaptación de estos neurotransmisores (Serretti et al., 2007). Entre los principales neurotransmisores responsables del estado de ánimo destacan la serotonina, la norepinefrina (noradrenalina) y la dopamina. Un ejemplo muy conocido es la fluoxetina (Noorbala et al., 2005), que inhibe la recaptación de neurotransmisores a través de transportadores presentes en las neuronas presinápticas, lo que lleva a aumentar las concentraciones de neurotransmisores en el espacio extracelular. Una de las principales desventajas de los tratamientos con fármacos sintéticos es la aparición de efectos secundarios, que pueden ser desde leves, como la sequedad de la boca, dolor de cabeza, náuseas, diarrea, etc., hasta graves, como taquicardias, disfunción sexual, hipertensión, hipercolesterolemia... etc. (Ferguson, 2001 ; Vanderkooy, 2002). Además, estos tratamientos pueden interaccionar con otros medicamentos, no se pueden abandonar de una forma inmediata, y, en muchos casos, pueden causar adicción (Haddad, 2005).

Conviene señalar también, que aproximadamente entre 29 y 46% de los pacientes que se someten a tratamientos basados en fármacos antidepresivos con dosis y duración adecuadas, no muestran una respuesta favorable al tratamiento (Fava et al., 1996, 2003).

Debido a las elevadas exigencias en materia de seguridad de los tratamientos con antidepresivos y los efectos secundarios asociados, en los últimos años, la investigación ha centrado su atención en extractos de plantas con posible aplicación psicofarmacológica. Entre ellos, se encuentran los productos a base de azafrán {Crocus safívus L), cuyo efecto se ha evidenciado científicamente tanto con estudios in vivo en animales de experimentación, como con estudios clínicos con personas que presentaban patologías relacionadas con la depresión (Akhondzadeh, 2004, 2005, 2008; Bastí et al., 2007; Noorbala et al. , 2005; Moshiri et al., 2006; Ulbricht et al., 201 1 ; Kashani, 2013; Shahmansouri et al. , 2014). Estas investigaciones han puesto de manifiesto que el safranal y las crocinas presentes en los extractos de azafrán estudiados son los responsables del aumento de la concentración de neurotransmisores en el tejido encefálico (Karimi et al., 2001 ; Hosseinzadeh et al., 2004; Noorbala et al. , 2005; Ettehadi et al., 2013). Las crocinas actúan vía inhibición de la captación de dopamina y norepinefrina, mientras que el safranal actúa vía inhibición de la serotonina (Hosseinzadeh et al., 2004), por lo que el tratamiento con extractos de azafrán es efectivo, siempre y cuando estén presentes tanto las crocinas como el safranal en las concentraciones adecuadas. El safranal (2,2,6-trimetil-1 ,3- ciclohexadien-1 -carboxaldehido) es el componente principal responsable del aroma del azafrán que representa más del 60% de los compuestos aromáticos totales (Ordundi y Tsimidou, 2004). Las crocinas son ésteres glicosilados del carotenoide dicarboxílico crocetina, y están formadas por varios ésteres glicosídicos, principalmente de trans- y cis- crocinas 3 y 4 (Alonso et al., 2001 ). Se diferencian de los demás carotenoides de origen vegetal por su solubilidad en agua y aportan el color rojo-anaranjado intenso característico del azafrán.

Los trastornos de estado de ánimo relacionados con la depresión suelen estar asociada a un elevado estrés oxidativo y, en consecuencia, a un déficit en antioxidantes exógenos (Maes et al., 201 1 ; Maes et al. , 2012; Palta et al., 2014). Durante los cuadros de depresión, las concentraciones de enzimas que actúan como antioxidantes endógenos disminuyen, principalmente la superóxido dismutasa, la catalasa y la glutatión peroxidasa, mientras que aumentan las concentraciones del malonaldehído, que actúa de marcador del estrés oxidativo (Lopresti et al. , 2014) junto a algunos productos derivados de la oxidación de los ácidos grasos poliinsaturados (como los 4-hidroxialquenales). Todo ello promueve respuestas inmunes, inflamatorias y, en algunos casos, neurodegenerativas (Leonard y Maes, 2012). En todos los casos, la presencia de antioxidantes exógenos ayuda a prevenir la aparición del estrés oxidativo (Maes et al., 201 1 ; Maes et al. , 2012; Palta et al., 2014), como ocurre en el caso de extractos naturales provenientes del azafrán. Para poder determinar la calidad del azafrán, la Organización Internacional de Estandarización (ISO) propuso un método de análisis IS03632 (1980, 1993), que permite categorizar de forma rápida y sencilla la calidad de la planta mediante medida espectrofotométrica.

Se trata del método de análisis de los compuestos responsables de la calidad del azafrán mediante la Normativa IS03632, que avala el contenido de estos principios activos en los productos de venta. Es un método espectrofotométrico rápido y sencillo, que mide la absorbancia a 257 nm (Á _max de Picrocrocina), a 330 nm (Á _max de Safranal) y a 440 nm (Á _max de Crocinas) de una disolución de extracto de azafrán. Este método se emplea para categorizar la calidad de los estigmas de azafrán, pero se ha terminado aceptando para el análisis de compuestos bioactivos de los extractos de azafrán.

Existen varios productos en el mercado a base de azafrán, sin embargo, a menudo comprenden una proporción de los compuestos activos safranal y crocinas mucho inferior a lo indicado, ya que la composición de estos productos se evalúa únicamente mediante la Normativa IS03632, un método espectrofotométrico que no es suficientemente selectivo, objetivo ni preciso para la determinación de estos principios activos como ya han señalado varios estudios tras la publicación de dicha Normativa (Tarantilis et al., 1995; Orfanou y Tsimidou, 1996). Alonso et al. (2001) encontraron que a las longitudes de onda de 257 y 330 nm, a las que se determinan respectivamente la picrocrocina y el safranal según la Normativa IS03632, aparecen interferencias de otros compuestos, principalmente isómeros de las crocinas, que son mayoritarios en el azafrán y que producen un valor sobreestimado del contenido del safranal.

El uso de la metodología ISO puede ajustar el contenido de principios activos en los extractos de azafrán según su absorbancia, permitiendo que un extracto de azafrán que no tenga safranal en su composición emita señal a 330 nm igualmente. Este efecto es debido principalmente a algunos isómeros de crocina, como se ha comentado anteriormente, lo que produce un enmascaramiento de la calidad real del producto. Una formulación de este tipo va en claro detrimento de la calidad de estos productos, lo que puede contribuir de una forma significativa a la pérdida de confianza del consumidor.

Por lo tanto, a la vista de lo expuesto en párrafos anteriores, existe en el estado de la técnica la necesidad de proporcionar una composición basada en un extracto natural de azafrán que contenga las concentraciones adecuadas de crocinas y saf ranal, analizadas de manera objetiva en el extracto de azafrán, para prevenir de forma eficaz los trastornos en el estado de ánimo relacionados con la depresión pero sin los efectos secundarios negativos asociados al empleo de fármacos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a una composición que comprende un extracto de estigmas de azafrán para su uso como medicamento eficaz en la prevención de trastornos del estado de ánimo relacionados con la depresión. El extracto se presenta como una alternativa natural con el objetivo de mejorar el estado de ánimo, prevenir trastornos del estado de ánimo relacionados con la depresión, y evitar el tratamiento con antidepresivos sintéticos que presentan múltiples contraindicaciones y efectos secundarios.

Esta invención describe un procedimiento de obtención, estandarización y empleo de un nuevo extracto de azafrán, titulado en los principales compuestos bioactivos safranal y crocinas por HPLC, relacionados con la prevención de los trastornos depresivos, que además son los principales responsables de las características organolépticas del azafrán (aroma y color, respectivamente). El extracto objeto de la presente invención es una alternativa natural para prevenir trastornos relacionados con la depresión, con el objetivo de evitar el tratamiento con fármacos antidepresivos sintéticos. Como se ha indicado previamente, las composiciones basadas en extractos de azafrán que existen actualmente en el mercado están tituladas aplicando la metodología estipulada en la Normativa IS03236, lo que origina una proporción de los compuestos activos safranal y crocinas mucho inferior a lo indicado al tratarse de un método espectrofotométrico que no es suficientemente selectivo, objetivo ni preciso para la determinación de estos principios activos (ver ejemplo 2). Como consecuencia, los extractos de azafrán existentes en el mercado no presentan las cantidades adecuadas de principios activos para ejercer su efecto preventivo sobre los trastornos relacionados con la depresión. Para evitar este problema, los inventores han introducido un paso de separación previa de dichos principios activos para su cuantificación individualizada por cromatografía en fase líquida de alta eficacia, en modo de fase reversa (RP-HPLC), y así determinar las concentraciones objetivas de las moléculas que son terapéuticamente activas, es decir, de safranal, crocinas y picrocrocinas (ver Ejemplo 1 ). Gracias a este nuevo procedimiento de titulación del azafrán, la presente invención se relaciona con un procedimiento de obtención y uso terapéutico de un extracto de azafrán, que se diferencia del resto de extractos existentes en el mercado porque está titulado de forma objetiva en aquellos principios activos (saf ranal/crocinas) que tienen el efecto preventivo frente a los trastornos del estado de ánimo relacionados con la depresión. Esta composición garantiza una adecuado equilibrio entre safra na l/crocinas en el extracto final, que además ha demostrado ser efectivo en un estudio clínico doble ciego realizado con 128 participantes a los que se les administró una dosis de 28 mg/día de extracto durante un mes, observando una mejora significativa en el estado de ánimo global (ver Ejemplo 3).

Por lo tanto, la presente invención presenta las siguientes ventajas:

- El safranal y las crocinas analizadas por HPLC del extracto de la presente invención se encuentran en una mayor proporción que en otros extractos comerciales de azafrán caracterizados por la Normativa IS03632. - El extracto de la presente invención ha demostrado tener efecto funcional en la mejora del estado del ánimo en personas sanas, concretamente ha demostrado reducir la tensión, depresión, ira, fatiga, ansiedad, estrés y confusión de los pacientes, aumentando además el vigor de los mismos. - El extracto de la presente invención puede ser utilizado como complemento alimenticio.

- El extracto de la presente invención no presenta los efectos secundarios asociados a los antidepresivos y ansiolíticos farmacéuticos comerciales sintéticos. A la vista de lo anterior, un primer aspecto de la presente invención se refiere a una composición en polvo que comprende un extracto de estigmas de azafrán titulado mediante HPLC y caracterizada porque comprende: a) entre un 0,03% y un 1 % en peso seco en safranal, y

b) al menos 3,48% en peso seco de crocinas, en donde dichas crocinas comprenden frans-crocina-4 (isómero principal), írans-crocina-3, frans-crocina-2', c s-crocina-4, frans-crocina-2, írans-crocina-1 y/o cualquiera de sus mezclas. Un segundo aspecto de la presente invención se refiere al uso de la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, para la formulación de un medicamento.

Un tercer aspecto de la presente invención se refiere al uso de la composición, tal y como se ha descrito anteriormente para preparar un medicamento para la prevención de trastornos de ánimo. Por trastornos de ánimo se entiende trastornos asociados a cuadros de depresión tales como sentimientos de fatiga, estrés y ansiedad entre otros.

Un cuarto aspecto de la presente invención se refiere al uso de la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, como complemento alimenticio.

Un quinto aspecto de la presente invención se refiere a un alimento funcional que comprende la composición, tal y como se ha descrito anteriormente.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Para la obtención del extracto de azafrán de la invención en primer lugar se hace una selección estricta de la materia prima, basándose principalmente en la determinación de los principios activos safranal y crocinas por HPLC, carga microbiana, etc. La extracción industrial de los principios activos de los estigmas de azafrán seleccionados se lleva a cabo preferentemente con agua o con mezclas hidroalcohólicas siempre y cuando la proporción de etanol no supere el 20 % (v/v). El control de la temperatura durante el proceso de extracción es crítico y ha de limitarse a 70 °C para evitar el deterioro de algunos isómeros de crocinas que pueden afectarse en condiciones de temperaturas superiores. Disolventes orgánicos como acetato de etilo, hexano, éter de petróleo, acetona, metanol u otros similares no están permitidos para la obtención del extracto de azafrán objeto de la presente invención.

El extracto bruto se presenta en forma de líquido denso, de color rojo y aroma intensos característicos del azafrán, que se enfría a temperatura ambiente con posterior eliminación de la humedad, pudiéndose emplear para esta etapa distintas técnicas de secado, siempre y cuando se trabaje a temperatura inferior a los 70 °C.

El último paso consiste en una adecuación del tamaño de partícula mediante molienda del extracto seco en un molino de martillos o cuchillas, siempre controlando que la temperatura de molienda no afecte a los compuestos bioactivos, y un tamizado del molido a través de un tamiz de luz de malla máxima de 240 pm. El extracto bruto se mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable hasta obtener la fórmula de la presente invención. Ejemplos no limitantes de excipientes son almidón, lactosa, dextrosa, maltodextrina, sacarosa, manitol, sorbitol, glucosa, celulosa microcristalina, fosfato di- y tricálcico, sulfato de calcio, caolín y cloruro de sodio. Preferiblemente el excipiente se obtiene de entre la dextrina, la maltodextrina o cualquiera de sus mezclas. Por tanto, un primer aspecto de la presente invención se refiere a una composición en polvo que comprende un extracto de estigmas de azafrán titulado mediante HPLC y caracterizada porque comprende: a) Entre un 0,03% y un 1 % en peso seco de safranal,

b) Al menos 3,48% en peso seco de crocinas, en donde dichas crocinas comprenden frans-crocina-4 (isómero principal), frans-crocina-3, fra/7s-crodna-2', c s-crocina-4, frans-crocina-2, frans-crocina-1 y/o cualquiera de sus mezclas.

Preferiblemente la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, comprende: a) Entre un 0,03% y un 0,50% en peso seco de safranal,

b) Entre un 3,48% y un 8,00% en peso seco de crocinas.

Más preferiblemente, la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, comprende:

a) Entre un 0,03% y un 0,50% en peso seco de safranal.

b) Entre un 3,48 % y un 7,00% en peso seco de crocinas. Aún más preferiblemente la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, comprende:

a) Entre un 0,03% y un 0,35% en peso seco de safranal.

b) Entre un 3,48% y un 6,00% en peso seco de crocinas.

En otra realización más preferida de la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, la composición se caracterizada por que comprende, con respecto a la cantidad de crocinas totales de la composición, entre un 45% y un 65% en peso seco de írans-crocin-4, entre un 15% y un 30% en peso seco de frans-crocin-3, entre un 0,3% y un 5% en peso seco de fra/7s-crocin-2', entre un 0,3% y un 10% en peso seco de c/s-crocin-4, entre un 0,3% y un 15% en peso seco de frans-crocin-2, entre un 0,5% y un 5% en peso seco de frans-crocin-1 y/o cualquiera de sus mezclas. En otra realización más preferida de la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, la composición se caracterizada por que comprende, con respecto a la cantidad de crocinas totales de la composición, un 53% en peso seco de fra ns-crocin- 4, un 22% en peso seco de frans-crocin-3, un 1 % en peso seco de frans-crocin-2', un 2% en peso seco de c/s-crocin-4, un 3% en peso seco de íra/?s-crocin-2, un 2% en peso seco de frar?s-crocin-1 y/o cualquiera de sus mezclas.

En otra realización del primer aspecto de la presente invención, la composición tal y como se ha descrito anteriormente, además comprende picrocrocina, cuyo contenido en el extracto de la presente invención analizado por HPLC según el método propuesto por Caballero-Ortega et al., (2007), comprende al menos 2,5% expresado en g de p-nitroanilina por 100g de extracto en base seca.

En otra realización del primer aspecto de la presente invención, la composición tal y como se ha descrito anteriormente, además comprende una concentración en polifenoles totales analizados mediante el reactivo de Folin-Ciocalteu (Singleton y Rossi, 1965) de al menos un 1 ,0%, expresado en ácido gálico por 100 g de extracto en base seca. En otra realización del primer aspecto de la presente invención, la composición tal y como se ha descrito anteriormente, comprende:

a) Entre un 0,03% y un 0,35% en peso seco de safranal,

b) Entre un 3,48% y un 6,00% en peso seco de crocinas,

c) Al menos un 2,5% expresado en g de p-nitroanilina por 100 g de extracto en base seca, y

d) Al menos un 1 ,0% de ácido gálico por 100 g de extracto en base seca. En otra realización del primer aspecto de la presente invención, la composición tal y como se ha descrito anteriormente, tiene un tamaño de partícula inferior a 240 μητ

En otra realización del primer aspecto de la presente invención, la composición tal y como se ha descrito anteriormente, además comprende al menos un excipiente farmacológicamente aceptado.

El término "excipiente" hace referencia a una sustancia que ayuda a la absorción de cualquiera de los componentes del producto de la invención, estabiliza dichos componentes o ayuda a la preparación de la composición farmacéutica. Así pues, los excipientes pueden tener la función de mantener los componentes unidos, como por ejemplo almidones, azúcares o celulosas; función edulcorante, colorante, de protección del medicamento del medio externo, como por ejemplo para aislarlo del aire y/o la humedad; función de relleno de una pastilla, cápsula o cualquier otra forma de presentación, como por ejemplo el fosfato de calcio dibásico; función desintegradora para facilitar la disolución de los componentes y su absorción en el intestino, sin excluir otro tipo de excipientes no mencionados en este párrafo. Por tanto, el término "excipiente" se define como aquella materia que, incluida en las formas galénicas, se añade a los principios activos o a sus asociaciones para posibilitar su preparación y estabilidad, modificar sus propiedades organolépticas o determinar las propiedades físico-químicas de la composición farmacéutica y su biodisponibilidad. El excipiente "farmacéuticamente aceptable" no debe interaccionar con la actividad de los compuestos activos de la composición farmacéutica. Ejemplos de excipientes son aglutinantes, rellenantes, desintegradores, lubricantes, recubridores, edulcorantes, saborizantes y colorantes. Ejemplos más concretos no limitantes de excipientes aceptables son almidones, azúcares, xilitol, sorbitol, fosfato de calcio, grasas esferoides, talco, sílice o glicerina, entre otros.

En una realización preferida del primer aspecto de la presente invención, la composición es una composición farmacéutica, y comprende excipientes farmacéuticamente aceptables. La composición farmacéutica es la formulación del conjunto de componentes que forman al menos el producto de la invención (la composición que comprende un extracto de azafrán), que tiene al menos una aplicación en la mejora del estado físico, fisiológico y/o psicológico de un sujeto, que implique una mejora general de su estado de salud, así como un aumento en su calidad de vida.

En la presente invención el término "sujeto" es equivalente al término "individuo", por lo que ambos términos pueden emplearse indistintamente en la presente invención. Se entiende por "sujeto" a cualquier animal perteneciente a cualquier especie. Ejemplos de sujetos incluyen, sin limitar a, animales de interés comercial tales como aves (gallinas, avestruces, pollos, ocas, perdices, etc.), conejos, liebres, animales domésticos (perros, gatos, etc.), ganado ovino (ovejas, etc.), ganado caprino (cabras, etc.), ganado porcino (jabalíes, cerdos, etc.), ganado equino (caballos, ponis, etc.) y ganado vacuno o bovino (toros, bueyes, etc.). En una realización particular, el sujeto es un mamífero, preferiblemente, un primate, más preferiblemente un ser humano de cualquier raza, sexo o edad.

Un segundo aspecto de la presente Invención se refiere al uso de la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, para preparar un medicamento. El medicamento comprende la composición en una dosis terapéuticamente efectiva. En el sentido utilizado en esta descripción, la expresión "dosis terapéuticamente efectiva" se refiere a aquella concentración de los componentes de interés de la composición farmacéutica, que cuando se administra es capaz de producir unos claros efectos preventivos, tal como se define más adelante, de una enfermedad o condición patológica de estudio.

Un tercer aspecto de la presente invención se refiere al uso de la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, para preparar un medicamento para la prevención de trastornos del estado de ánimo relacionados con la depresión. En la presente invención se entiende por "prevención" a evitar que se produzca la enfermedad o la condición patológica en un individuo, en particular, cuando dicho individuo tiene predisposición por la condición patológica, pero aún no se ha diagnosticado que la padezca. En la presente invención, la enfermedad o condición patológica es un trastorno del estado de ánimo relacionado con la depresión.

Se entiende por "trastorno" al patrón comportamental o psicológico de significación clínica que, cualquiera que sea su causa, es una manifestación individual de una disfunción psicológica o biológica. Esta manifestación se considera síntoma cuando aparece asociada a un malestar (por ejemplo, el dolor), a una discapacidad (por ejemplo, el deterioro en un área de funcionamiento) o a un riesgo significativamente aumentado de morir o de sufrir dolor, discapacidad o pérdida de libertad. En la presente invención se entiende por "trastornos del estado de ánimo" al conjunto de trastornos definidos en el manual diagnóstico y estadístico de los trastornos mentales (en inglés, Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, abreviado DSM IV TR) cuya principal característica subyacente sería una alteración del estado de ánimo del individuo. La Clasificación Internacioinal de Enfermedades o CIE 10, clasifica estos trastornos bajo el apartado denominado «Trastornos del humor (afectivos)». Suelen diferenciarse dos grupos de trastornos del estado de ánimo, en función de si incluyen o no la presencia de episodios de manía o hipomanía: los trastornos depresivos y los trastornos bipolares. En el contexto de la presente invención, la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, va dirigida a la prevención de trastornos del estado de ánimo relacionados con la depresión. Ejemplos de Trastornos del estado de ánimo relacionados con la depresión incluyen, sin limitar a, depresión atípica, depresión melancólica, depresión psicótica, depresión catatónica, depresión postparto, trastorno afectivo estacional, distimia, depresión doble, trastorno depresivo no especificado, trastorno depresivo de la personalidad, trastorno depresivo breve recurrente y depresión menor.

En una realización de los aspectos segundo y tercero, la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, se administra oralmente.

En otra realización de los aspectos segundo y tercero, la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, se administra en una dosis superior a 15 mg/día, preferiblemente la dosis diaria está entre 20 y 40 mg/día, más preferiblemente la dosis diaria está entre 25 y 31 mg/día, todavía más preferiblemente la dosis diaria está entre 25 y 28 mg/día, aún más preferiblemente la dosis diaria es de 28 mg/día. Para su aplicación terapéutica, el producto de la invención se encontrará en una forma farmacéuticamente aceptable o sustancialmente pura, es decir, que tiene un grado de pureza farmacéuticamente aceptable excluyendo los aditivos farmacéuticos habituales como diluyentes y portadores, y no incluyendo material considerado tóxico a niveles de dosificación normales.

Los grados de pureza del extracto de azafrán de la presente invención son superiores al 50%, preferiblemente superior al 70%, y todavía más preferiblemente superiores al 90%. La "forma galénica o forma farmacéutica" es la disposición a la que se adaptan los principios activos y excipientes para constituir un medicamento. Se define por la combinación de la forma en la que la composición farmacéutica es presentada por el fabricante y la forma en la que es administrada.

La composición farmacéutica puede comprender un "vehículo" o portador, que es preferiblemente, una sustancia inerte. La función del vehículo es facilitar la incorporación de otros compuestos, permitir una mejor dosificación y administración o dar consistencia y forma a la composición farmacéutica. Por tanto, el vehículo es una sustancia que se emplea para diluir cualquiera de los componentes de la composición farmacéutica de la presente invención hasta una concentración determinada; o bien que aún sin diluir dichos componentes es capaz de permitir una mejor dosificación y administración, o dar consistencia y forma al medicamento. Por todo ello se consideraría un vehículo farmacéuticamente aceptable. Cuando la forma de presentación del extracto es líquida, el vehículo farmacéuticamente aceptable es el diluyente. Además, el excipiente y el vehículo deben ser farmacológicamente aceptables. La composición farmacéutica de la invención puede comprender otras sustancias activas. Además del requerimiento de la eficacia terapéutica, donde dicha composición farmacéutica puede necesitar el uso de otros agentes terapéuticos, pueden existir razones fundamentales adicionales que obligan o recomiendan en gran medida el uso de una combinación de un compuesto de la invención y otro agente terapéutico. El término "principio activo" es toda materia, cualquiera que sea su origen, humano, animal, vegetal, químico o de otro tipo, a la que se atribuye una actividad concreta para constituir un medicamento.

En cada caso, la forma de presentación del medicamento se adaptará a la vía de administración elegida. Por ello, la composición de la presente invención se puede presentar bajo la forma de soluciones o cualquier otra forma de administración clínicamente permitida y en una dosis terapéutica efectiva. La composición farmacéutica de la invención se puede presentar de forma sólida, semisólida, líquida o gaseosa. Como comprimido, cápsula, polvo, gránulo, ungüento, solución, supositorio, inyectable, inhalante, gel, jarabe, nebulizador, microesfera o aerosol. Preferiblemente la composición está adaptada a la administración oral, como por ejemplo en forma de comprimido, cápsula, polvo, gránulo, solución o jarabe.

En otra realización de los aspectos segundo y tercero, la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, se administra como comprimido, cápsula, polvo, gránulo o solución.

Las composiciones anteriormente mencionadas pueden ser preparadas usando métodos convencionales, como los descritos en las Farmacopeas de diferentes países y en otros textos de referencia. Los compuestos y composiciones de la presente invención pueden ser administrados junto con otros medicamentos en terapias combinadas.

Adicionalmente a lo descrito en párrafos anteriores, en la presente invención también se contempla la posibilidad de que la composición, tal como se ha descrito anteriormente, se pueda administrar a un sujeto de forma conjunta con otros compuestos, tanto si éstos forman parte o no de la composición.

Un cuarto aspecto de la presente invención se refiere al uso de la composición, tal y como se ha descrito anteriormente, como complemento alimenticio. Por complemento alimenticio se entiende los productos comercializados en forma de cápsulas, comprimidos, ampollas, tisanas, soluciones bebibles, etc. , cuyo fin es completar la dieta habitual y que constituyen una fuente concentrada de nutrientes (tales como vitaminas, minerales, aminoácidos, ácidos grasos esenciales, fibras, etc.) u otras sustancias que tienen un efecto nutricional o fisiológico. Un quinto aspecto de la presente invención se refiere a un alimento funcional que comprende la composición, tal y como se ha descrito anteriormente. Un alimento funcional es aquel alimento que, más allá de satisfacer las necesidades nutricionales, es capaz de producir un efecto específico beneficioso para la salud asociado a la prevención o reducción del riesgo de contraer patologías concretas. Este efecto beneficioso se consigue principalmente por adición, modificación o eliminación de ciertos componentes presentes en los alimentos. Dentro del contexto de la presente invención también se contempla los métodos de tratamiento equivalentes a los usos descritos en la presente descripción. Así, en otro aspecto, la invención se relaciona con un método para prevenir en un sujeto trastornos del estado de ánimo relacionados con la depresión que comprende administrar a dicho sujeto una composición tal como se ha descrito anteriormente.

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DEL CONTENIDO DE LAS FIGURAS Figure 1. Cromatogramas superpuestos de HPLC de los principales componentes del extracto de azafrán de la invención. P: Picrocrocina; t-c-4: írans-Crocina-4; s: Safranal.

Figure 2. Cambios en los valores medios de POMS que muestran cinco subescalas negativas (T: tensión; D: depresión; A: ira; F: fatiga; C: confusión) y una positiva (V: vigor). POMS MCS: del inglés POMS Mean Change Score, puntuaciones de cambio medio en la escala POMS; Plb: Placebo.

Figure 3. Cambios en los valores de POMS que muestran los valores del análisis "Total Mood Disturbance", TMD MCS: del inglés Total Mood Disturbance Mean Change Score, puntuaciones de cambio medio del parámetro TMD; Plb: Placebo. Figure 4. Cambios en los valores medios de PANAS para la evaluación de Afecto Positivo (Positive Affect) y Afecto Negativo (Negative Affect). PANAS MCS: del inglés PANAS Mean Change Score, puntuaciones de cambio medio en la escala PANAS; Plb: Placebo; PA: Positive Affect; NA: Negative Affect.

Figure 5. Cambios en los valores medios de DASS para la evaluación de depresión (D), ansiedad (Ax) y estrés (S). DASS MCS: del inglés DASS Mean Change Score, puntuaciones de cambio medio en la escala DASS; Plb: placebo.

EJEMPLOS

A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que pone de manifiesto la composición y la actividad de la composición de la invención.

Ejemplo 1 - Determinación de la concentración de los compuestos bioactivos en la composición de la invención En primer lugar se seleccionaron los estigmas de azafrán en base a su calidad (azafrán procedente de cultivos en Castilla-La Mancha, España) y se maceraron en agua a una temperatura inferior a 70°C y con agitación. Posteriormente se llevó a cabo una concentración más exhaustiva sin sobrepasar los 70°C de temperatura, y se obtuvo un extracto bruto seco, que fue posteriormente diluido con dextrina hasta conseguir una concentración mínima en safranal y crocinas de 0,03% y 3,48% en base seca respectivamente.

El análisis cuantitativo de los compuestos bioactivos del extracto de azafrán así obtenido se llevó a cabo en un equipo HPLC 1260 Infinity Series acoplado a detector "Diode Array" (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA). Para la separación cromatográfica se empleó una columna C18 (250 mm/4,6 mm/5 μιτι; ACE-5 PFP, Escocia) a 25°C y un flujo de la fase móvil de 1 mL/min. La fase móvil estaba compuesta por un componente A) agua:acetonitrilo (85: 15, v/v) y componente B) metanol, con un gradiente lineal de 10 a 100% de metanol en 60 min. Tanto las muestras del extracto de la presente invención como los patrones de referencia fueron diluidos en una solución de metanol:agua (50:50, v/v). La elución de la picrocrocina, el safranal y las crocinas fue monitorizada a las absorbancias de 250, 310 y 440 nm, respectivamente (Caballero-Ortega et al., 2007). La cuantificación de estos compuestos se llevó a cabo mediante rectas de calibrado externas de p-nitroanilina (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) para cuantificar la picrocrocina, el safranal (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) para cuantificar el propio safranal, y el isómero trans- crocina-4 (Phytolab, Hamburg, Germany) para cuantificar los distintos isómeros de crocinas. En la Fig. 1 se muestra el cromatograma superpuesto, adquirido a las longitudes de onda 250, 310 y 440 nm del extracto de azafrán de la invención, en las condiciones cromatográficas anteriormente descritas. A 250 nm se observa un pico con tiempo de retención (tr) de 7,6 minutos, que corresponde a la picrocrocina, mientras que a 310 nm se ve otro pico con tr de 33,9 minutos, que corresponde con el safranal. En el cromatograma registrado a 440 nm, ya en el espectro visible, aparecen los distintos isómeros de crocinas, siendo el pico mayoritario el correspondiente al isómero trans- crocina-4 (minuto 22,3).

Para confirmar la identidad de cada pico se llevó a cabo también un análisis de las masas de cada molécula encontrada en el extracto de la presente invención. Para ello se utilizó un equipo Agilent, serie 1100 (Palo Alto, California, EEUU) acoplado a un detector de espectrometría de masas quadrupolo (Hewlett-Packard, serie 1 100 MSD) con una fuente de ionización electrospray (ESI), que trabajaba tanto en modo positivo como negativo. El rango de masas fue de 50 a 1500 urnas, flujo de gas de secado (del inglés drying gas flow) fue de 10 L/minutos, temperatura de gas de secado (del inglés drying gas temperature ) fue de 340 °C, presión del nebulizador (del inglés nebulizer pressure) fue de 40 psig, temperatura de vaporizador (del inglés vaporizer temperature ) fue de 150°C, voltaje del capilar (del inglés capillary voltaje) fue de 2000V, voltaje de carga (del inglés charging voltaje ) fue de 2000V.

En la siguiente Tabla 1 se muestra el análisis individual de los principales isómeros de crocinas, encontrados en el extracto de azafrán de la presente invención a 440 nm, junto a los principales compuestos bioactivos encontrados a 250 nm (picrocrocina y kaempferol diglucósido), y 310 nm (safranal). Todos los espectros UV-VIS de los isómeros de crocinas tuvieron en común máximos aproximados a 250, 310 y 440 nm, y los principales quasi-iones y fragmentos analizados se corresponden con los encontrados por Lech et al., (2009) en hebras de azafrán, donde el modo ESI+ fue el más eficaz a la hora de determinar cada uno de estos carotenoides. La picrocrocina muestra un máximo a 251 nm, el safranal también muestra un solo máximo a 313 nm, mientras que el kaempferol diglucósido presenta un espectro característico de este flavonoide con máximos a 265 y 346 nm. El resto de isómeros de crocinas encontrados en el extracto de azafrán de la presente invención mostraron el mismo espectro característico de este carotenoide, como se muestra en la Tabla 1 , con máximos en torno a 257, 330 y 440 nm.

Para la identificación de la frans-crocina-4 y el safranal se utilizaron además los patrones de referencia disponibles comercialmente, de los que se prepararon disoluciones que se sometieron en las mismas condiciones de análisis que las utilizadas para el extracto titulado por HPLC objeto de la presente invención.

Tabla 1. Compuestos identificados en el cromatograma de la Figura 1 con detección ESI-MS en modo ión positivo (ESI+) y negativo (ESI-).

TR

Compuesto Máximos UV-Vis (nm) ESI + (m/z) ESI - (m/z) (minutos)

51 1 ,2; 365,1 ;

353,2; 337,1 ; 1480,8; 667,2;

7,6 Picrocrocina 251 329,1 ; 185,1 ; 517,1 ; 385,0;

159,9; 151 ,1 ; 181 ,2; 153,1 123,0; 81 ,3

Kaempferol

11 ,5 266; 347 633,2; 347,1 609,0; 284,0 diglucósido

16,7 262; 325; 442; 467

17,8 223; 270; 429; 438

18,0 223; 270; 327; 419; 440

19,3 261 ; 441 ; 465

999,4; 675,2; 1336,2; 651 ,2;

22,1 írans-crocina-4 261 323; 441 ; 464

511 ,2; 347.1 326,8; 283,1

22,7 261 440

999,2; 742,8;

23,8 261 323; 439; 462

717,0; 510,9 347,0

24,2 260 439; 461

26,0 262 323; 440; 463

26,7 írans-crocina-3 261 323; 440; 463 837,4

27,9 261 438; 462

29,8 260 437; 462

675,2; 593,0;

30,7 írans-crocina-2 ^' 261 328; 440; 464

513,2; 351 ,1 ; 130,1 ; 102,2; 74,1

31 ,2 460

32,3 243; 305; 420; 441

32,6 243; 305; 420; 441

33,9 Safranal 313

999,4; 821 ,3;

36,2 c/s-crocina-4 225; 262; 325; 433; 456 668,3; 611 ,0; 651 ,2

391 ,0; 347,0

651 ,2; 327,1 ;

37,6 írans-crocina-2 260; 322; 433; 458 675,2; 541 ,1

311 ,1 ; 283,18,7 224; 262; 225; 432; 455

768,8; 748,8;

1 ,1 írans-crocina-1 224; 259; 318; 433; 458 575,2; 513,2;

473,2; 351 ,1

Los fragmentos en estilo tipográfico "negrita" corresponden a iones quasi-moleculares (999,4; 837,4; 675,2; 633,2; 609,0; 513,2; 51 1 ,2; 353,2 m/z) o fragmentos iónicos (151 , 1 ; 123,0 m/z) coincidentes con el trabajo realizado por Lech et al., (2009).

Debido a que el safranal y las crocinas son los principios activos relacionados con la mejora del estado de ánimo, éstos se cuantificaron de forma conjunta como la suma de las concentraciones de safranal y los distintos isómeros de crocinas en g/100 g de materia seca (%), según los cromatogramas obtenidos del análisis por HPLC previamente descrito. Para su cuantificación se emplearon rectas de calibrado representando unidades de área frente a la concentración (mg/L), obtenidas mediante el análisis de las sustancias de referencia comerciales safranal y el isómero de trans- crocina-4 a 310 y 440 nm respectivamente. La concentración de estos compuestos en el extracto de azafrán de la presente invención se calculó mediante la fórmula (1 ), teniendo en cuenta la humedad de dicho extracto y la pureza de las sustancias de referencia empleadas.

(A31 Onm ^— 3310nm)/rn31 Onm ⁺ (∑A440nm ^— 34 0nm)/ TU 0nm

(%)= x 100 (1)

C donde:

En el extracto de azafrán de la presente invención:

A ₃ i onm es el área del pico del safranal a 310 nm.

∑A ₄ onm es la suma de las áreas de los picos correspondientes a los distintos isómeros de crocina a 440 nm.

C es la concentración del extracto (mg/L) En las sustancias de referencia:

a3ionm es la ordenada en el origen de la recta de calibrado del patrón de safranal a ₄ 40nm es la ordenada en el origen de la recta de calibrado del patrón de frans-crocina-4 rrbionm ^es I ^a pendiente de la recta de calibrado del patrón de safranal

m ₄ 40nm es la pendiente de la recta de calibrado del patrón de írans-crocina-4

Entre los principios activos cuantificados en la fórmula (1) anterior, las crocinas son los compuestos mayorltarios. El safranal se encuentra en menor proporción, pero su presencia es imprescindible en el extracto de azafrán para obtener el efecto deseado en la prevención de los trastornos del estado de ánimo relacionados con la depresión.

Ejemplo 2 - Análisis HPLC de extractos comerciales de azafrán titulados en safranal según la Normativa IS03632

Se analizaron 5 extractos comerciales de azafrán mediante HPLC. Todas las muestras Indicaban contener un 2% en peso de safranal mediante la metodología usada según la Normativa IS03632. El análisis por HPLC se efectuó de la misma manera que el realizado en el ejemplo 1 para los extractos de azafrán de la Invención (Tabla 2).

Tabla 2. Análisis HPLC según el método descrito en el Ejemplo 1 de distintas muestras comerciales (A-E) de extractos de azafrán titulados al 2% en safranal según la Normativa IS03632.

*Suma de Safranal y Crocinas analizadas por HPLC según fórmula (1)

En la Tabla 2 se observa que todas las muestras están tituladas al 2% en peso seco de safranal mediante la normativa IS03632, pero sin embargo el análisis cromatográfico demuestra que el contenido en safranal está bastante por debajo de dicha cantidad, Incluso este principio activo está totalmente ausente en una de los extractos analizados (Muestra C). Además, la concentración en crocinas presenta grandes variaciones, a pesar de que todas las muestras estaban tituladas al 2% en safranal mediante la Normativa IS03632. Estos datos ponen de manifiesto la necesidad efectuar otros análisis cuantitativos específicos como la metodología HPLC descrita anteriormente para la evaluación de principios activos en extractos de azafrán.

Ejemplo 3 - Estudio clínico

En otra modalidad preferida se llevó a cabo un estudio clínico doble ciego, paralelo y controlado con placebo en participantes sanos, con el objetivo de determinar la dosis efectiva de los principios activos presentes en el extracto de la presente invención, que tienen efecto en la prevención de los trastornos del estado de ánimo relacionados con la depresión.

Metodología En el siguiente ejemplo se describe la composición de los comprimidos que recibieron los participantes incluidos en el ensayo clínico. Como se puede observar en la Tabla 3, el nuevo extracto de azafrán se vehículo en dos dosis, una de 28 mg/día y otra de 22 mg/día, divididas en dos tomas diarias, que junto al grupo placebo, conformaron los tres grupos de tratamiento estudiados.

Tabla 3. Composición del extracto de azafrán objeto de la presente invención y de placebo, presente en los comprimidos empleados en el ensayo clínico.

Dosis Diaria (en comprimidos)

Fórmula ofrecida en el estudio clínico

2x14 mg 2x11 mg Placebo 2x0mg

Extracto de la invención 14,0 1 1 ,0 0,0

Excipientes

Oxido de hierro rojo 0,0 0,0 0,1

Celulosa-microcristalina 187,0 190,0 176,9 Hidrógenofosfato de calcio 144,0 144,0 144,0

Extracto de zanahoria 0,0 0,0 22,0

Povidona 5,0 5,0 5,0

Croscarmelosa de sodio 9,0 9,0 9,0

Sílice coloidal anhidra 3,0 3,0 4,0

Estearato de magnesio 3,0 3,0 4,0

Cubierta

Hipromelosa 9,0 9,0 9,0

Macrogol 8000 3,7 3,7 3,7

Óxido de hierro rojo 2,3 2,3 2,3

Cera de carnauba q.s. q.s. q.s.

: quantum sufficit

En este estudio se investigó la eficacia del extracto de azafrán objeto de la presente invención para mejorar el estado de ánimo general, reduciendo sentimientos de estrés, ansiedad, fatiga, y aumentando el vigor y la calidad del sueño en adultos sanos.

En el ensayo clínico participaron 128 individuos (mujeres y hombres sanos con edades comprendidas entre 18 y 77 años, auto-diagnosticados, con posterior confirmación por parte de facultativos, con bajo estado de ánimo, pero sin depresión), para estudiar el efecto del nuevo extracto de azafrán durante un mes de tratamiento. Los participantes fueron divididos en tres grupos a los que se les suministró el extracto de azafrán de la presente invención en forma de comprimidos con dosis de 28 mg/día, 22 mg/día, o un tratamiento de placebo, respectivamente, tal y como se observa en la Tabla 4. Cada sujeto recibió instrucciones precisas por parte de los facultativos, de tomar dos comprimidos al día durante cuatro semanas (un comprimido con la comida y otro con la cena).

Tabla 4. Datos demográficos de los participantes al principio del estudio clínico.

Grupos de tratamiento

Total 28 mg/día 22 mg/día Placebo

Datos demográficos

(n = 121) (n = 41) (n = 42) (n = 38)

Edad

40,38 (13,97) Media (SD) 39,1 (13,77) 40,4 (12,71) 36,7 (14,59)

23-68 Intervalo de variación 18-77 21-68 18-77

Género (Número, %) Mujeres 75 (62,0%) 26 (63,4%) 26 (61 ,9%) 23 (60,5%) Hombres 46 (38,0%) 15 (36,6%) 16 (38,1 %) 15 (39,5%)

Estado (Número, %)

74 (61 ,2%) 25 (61 ,0%) 27 (64,3%) 22 (57,9%) Con pareja

47 (38,8%) 16 (39,0%) 15 (35,7%) 16 (42, 1 %) Sin pareja

Trabajo (Número, %)

Empleado/estudiante 103 (85,1 %) 34 (82,9%) 37 (88,1 %) 32 (84,2%) Desempleado/jubilado 18 (14,9%) 7 (17, 1 %) 5 (1 1 ,9%) 6 (15,8%)

Peso 76,34 75,89 77,54

75,56 (17,39) Media kg (SD) (17,22) (16,48) (18,20)

Indice Masa Corporal

Media (SD) 26,42 (6,33) 26,74 (5,90) 27,01 (7,91) 25,38 (4,77)

Fumador/a (Número, %)

Si 17 (14,0%) 8 (19,5%) 6 (14,3%) 3 (7,9%) No 104 (86,0%) 33 (80,5%) 36 (85,7%) 35 (92, 1 %)

Alcohol (Número, %)

Menos de 3 por semana 44 (36,4%) 14 (36,1 %) 12 (28,6%) 18 (47,4%) Más de 3 por semana 77 (63,6%) 27 (65,9%) 30 (71 ,4%) 20 (52,6%)

Ejercicio cada semana

Si (Número, %) 85 (70,2%) 29 (70,7%) 27 (64,3%) 29 (76,3%) No (Número, %) 36 (29,8%) 12 (29,3%) 15 (35,7%) 9 (23,7%)

No se observaron diferencias significativas entre grupos al comienzo del tratamiento (p

> 0,01 , dos colas).

SD: Desviación estándar El estudio fue revisado y aprobado por el Comité de Ética de Investigación Clínica Queensland y recogido en el "Australian New Zealand Clinical Triáis Registry" (número de aprobación HREC2014002), amparado bajo la legislación vigente, en el NHMRC (National Health and Medical Research Council; Australia). Los participantes fueron evaluados mediante facultativos siguiendo los criterios de inclusión y exclusión aprobados por el Comité de Ética del presente ensayo clínico.

Tras una primera entrevista con el facultativo, fueron excluidas aquellas personas diagnosticadas con un trastorno del estado de ánimo como MDD (Trastorno Depresivo Mayor), trastorno bipolar o cualquier otro tipo de trastorno que hubiera dado resultado positivo para la depresión en el Inventario de Depresión de Beck (Beck et al., 1988). Se excluyeron también aquellas personas que sufriesen de insomnio o tenían empleo en turno de noche y fueron incapaces de tener una noche de sueño normal, o que sufriesen de síndrome premenstrual severo con cambios en el estado de ánimo y/o dolor que pudiese enmascarar resultados durante el período de estudio, así como personas que padeciesen de cualquier trastorno neurológico o que estuviesen tomando suplementos dietéticos nutricionales, incluidas las hierbas, que pudieran afectar el estado de ánimo, como por ejemplo la hierba de San Juan, triptófano, S- adenosil metionina, 5-hidroxitriptófano, melatonina y ácido γ-aminobutírico. También quedaron excluidas las personas que estaban tomando un suplemento de azafrán o no podían excluir el azafrán o los alimentos que lo contuviesen en su dieta. Además, se excluyeron aquellos candidatos que pudieran presentar algún tipo de hipersensibilidad conocida a medicamentos o suplementos nutricionales, alimentos o si estaban recibiendo medicación de tipo heparina, warfarina, dalteparina, enoxaparina u otro tratamiento anticoagulante similar, que hubieran sido diagnosticados con hipertensión o estuviesen siendo tratados con medicamentos antihipertensivos, con insuficiencia renal o hepática, o cualquier otro tipo de enfermedad, problemas de alcoholismo o consumo de drogas. También quedaron excluidos aquellos individuos que estuviesen participando o que hubiesen participado en otro ensayo clínico en los últimos 30 días.

Después de analizar 137 potenciales participantes bajo los criterios de exclusión, 128 adultos sanos de 18-77 años fueron asignados al azar en tres grupos. Siete participantes abandonaron el estudio, llegando al final de la etapa experimental con 121 participantes activos, (28 mg / día (n = 41), 22 mg / día (n = 42), y el placebo (n = 38).

El efecto del extracto de azafrán de la invención en el estado de ánimo se evaluó empleando los siguientes indicadores, ampliamente descritos en la literatura médica y psicología clínica: POMS (Profile of Mood States), PANAS (The Possitive and Negative Affect Schedule) y DASS (Depression Anxiety Stress States). El sueño se controló mediante el índice PSQI (Pittburgh Sleep Quality Index).

El análisis POMS (Profile of Mood States. McNair et al., 1971), empleado en el estudio clínico para evaluar el estado de ánimo inicial, consta de 65 ítems, con adjetivos que describían una emoción (por ejemplo, triste, enfadado, alegre), en una escala de cinco puntos para cada uno, donde 0 = nada en absoluto; 1 = un poco; 2 = moderadamente; 3 = mucho; y 4 = extremadamente (excepto los ítems de relajación y eficiencia, que fueron contabilizados de forma inversa). A los participantes se les preguntó cómo se sentían en ese momento, y las respuestas se agruparon en seis subescalas; 5 negativos (tensión, depresión, ira, fatiga y confusión) y 1 positivo (Vigor). Para cada participante se calculó el "Trastorno del Estado de Ánimo" (TMD, que incluye Tensión + Depresión + Ira + Fatiga + Confusión - Vigor) que proyecta una visión general del estado de ánimo del individuo. La variación de las puntuaciones desde el inicio (baseline) hasta la semana 4 del estudio se calcularon para cada subescala, con objeto de reducir la varianza dentro de los grupos (Davidson et al. , 2002; Edwards y Haythornthwaite, 2004). Las variaciones de puntuación durante el tratamiento con respecto al TMD fueron desde -232 a 200 (un resultado positivo indicaba un aumento de la depresión, mientras que uno con valor negativo indicaba una disminución de la depresión).

Como método secundario se empleó el PANAS (Watson y Clark, 1994) un indicador que consta de 20 ítems; 10 palabras positivas (por ejemplo, emocionado, orgulloso, alerta... ) y 10 palabras negativas (por ejemplo, hostil, irritable, miedo... ), puntuando en una escala de 5 puntos al igual que el POMS. A los participantes se les preguntó cómo se sentían con respecto a la semana anterior y las respuestas se agruparon en dos subescalas (Afecto Positivo, PA, y el afecto negativo, NA). El intervalo de variaciones de puntuación para el PA y NA fueron de -40 a 40. Otro método de análisis secundario empleado fue el correspondiente a las Escalas de Depresión, Ansiedad y Estrés o DASS-21 (Lovibond y Lovibond, 1995), que consta de 21 ítems divididos en tres subescalas correspondientes a la depresión, ansiedad y estrés (cada una con 7 ítems de auto-informe). A los participantes se les preguntó cómo se sentían durante la semana pasada y se puntuó cada ítem de 0 a 3, donde 0 = nunca; 1 = veces; 2 = frecuencia; y 3 = casi siempre.

El índice PSQI o Pittsburgh Sleep Quality (Buysse et al., 1989), está diseñado para medir la calidad del sueño mediante 19 preguntas de auto-clasificación y cinco preguntas propuestas por personas que tuviesen contacto frecuente y directo con el participante de estudio, siempre que fuese posible.

Los análisis estadísticos se llevaron a cabo mediante el programa SPSS 23.0 con nivel de significación a<0,05. Las distintas variaciones de puntuación de cada uno de los parámetros estudiados, relacionados con el estadio de ánimo y el sueño, fueron calculados para cada uno de los participantes incluidos en el ensayo clínico (Davidson et al. , 2002; Edwards y Haythornthwaite, 2004).

RESULTADOS

POMS

En la Fig. 2 se representan los resultados obtenidos para cada una de las emociones analizadas durante el periodo de tratamiento en los tres grupos de estudio (tratamiento con extracto de azafrán en dosis de 28 mg/día o de 22 mg/día, y placebo). El Test post hoc de Gabriel mostró en todas las subescalas de POMS una mejora significativa del tratamiento con el extracto de azafrán en las puntuaciones de cambio para el grupo tratado con 28 mg/día del extracto de azafrán de la presente invención.

Para el caso de la "Tensión" se observó una mejora significativa al finalizar el periodo de tratamiento, F (2, 1 13) = 3,82; p = 0,025. El Test post hoc de Gabriel reveló que el grupo intervenido con 28 mg/día del extracto de azafrán, se encontraba 4 veces menos tenso que el grupo placebo (mejoría de -1 ,06 a -4,00, Fig. 2). Igualmente sucedió para la subescala "Depresión" con una F (2, 1 13) = 9,46, p < 0,001 , ω = 0,36 (gran efecto); el grupo tratado con 28 mg/día del extracto de azafrán mejoró significativamente, encontrándose 6 veces menos deprimido al final del tratamiento en comparación con el grupo placebo, como se puede observar en la Fig. 2 (mejoría de - 1 ,33 a -8,43).

La misma tendencia fue observada para las subescalas "Ira", con valores de F (2, 1 12) = 4,39, p = 0,010, ω = 0,26 (efecto intermedio); "Fatiga", con F (2, 1 13) = 4,92, p = 0,009, ra = 0,25 (efecto intermedio) y "Confusión", con F (2, 1 13) = 7,81 , p = 0,001 , ra = 0,32 (efecto intermedio). El tratamiento con 28 mg/día del extracto de azafrán redujo significativamente en 5 veces, en comparación con el grupo placebo, el estado de ira (de -1 , 14 a -5,05), fatiga (de -1 , 1 1 a -5,00) y confusión (de -0,83 a -4,35; Fig. 2).

Para la subescala POMS "vigor" se observó una mejora significativa en escala inversa, con un valor de F (2, 1 12) = 5,25, p = 0,007, ra = 0,26 (efecto intermedio). El grupo tratado con 28 mg/día del extracto de azafrán experimentó un aumento significativo del "vigor" al final del tratamiento, mejorando en 10 veces la escala de vigor en comparación con el grupo placebo (de -0,39 a +4,00; Fig. 2). En la Fig. 3 se representa la variación media correspondiente al análisis del "Total Mood Disturbance" (TMD) o Perturbaciones Totales del Estado de Ánimo para cada uno de los grupos de estudio durante el mes de tratamiento con el extracto de azafrán de la presente invención F (2, 1 11) = 9,94, p < 0,001 , CD = 0,37 (gran efecto). En concreto, el grupo tratado con 28 mg/día del extracto de azafrán disminuyó su nivel TMD de manera significativa aproximadamente 6 veces en comparación con el grupo placebo (de -5,37 a -30,83; Fig. 3). PANAS

En la Fig. 4 se muestran los valores de cambio medios para el análisis PANAS, que aunque no llegan a ser significativos, muestran una tendencia clara para el "Afecto Positivo" (Positive Affect o Positive Mood) y "Afecto Negativo" (Negative Affect o Negative Mood), indicando una mejora en el estado de ánimo en los grupos tratados tanto a dosis de 22 mg/día como de 28 mg/día con el extracto de azafrán de la presente invención, con respecto al grupo placebo, tras un mes de tratamiento.

El análisis de la varianza (ANOVA) mostró una diferencia significativa del tratamiento, entre los grupos de estudio en las puntuaciones referentes a "Afecto Negativo", F (2, 1 1 1) = 6,97, p = 0,001 , CD = 0,31 (efecto intermedio). La variación en el valor del "Afecto Negativo" en el grupo tratado con 28 mg/día del extracto de azafrán, mejoró de forma significativa en 3 veces en comparación con el grupo placebo (de -2,40 a -6,63), p = 0,001 , d = -0,42 (efecto intermedio, de acuerdo con las convenciones de Cohén).

DASS

También se realizó el tratamiento ANOVA con la prueba DASS para analizar las variaciones observadas en las subescalas: depresión, ansiedad y estrés entre los distintos grupos de tratamiento.

Para las puntuaciones de cambio en el caso concreto de la subescala de depresión DASS se observó un efecto significativo con F (2, 1 18) = 12,96, p <0,001 , a = 0,41 (gran efecto). Como se puede observar en la Fig. 5, el grupo tratado con 28 mg/día con el extracto de azafrán de la presente invención mejoró significativamente con respecto al grupo placebo, reduciendo en 4 veces los síntomas relacionados con un cuadro depresivo (valores de -1 ,42 a -5,61). Asimismo, se observó un efecto dosis dependiente obteniendo una mejoría significativa en los participantes tratados con 28 mg/día con respecto a los tratados con 22 mg/día del extracto de azafrán, que redujo a la mitad los síntomas relacionados con la depresión (valores de -2,87 a -5,61).

Para la subescala de ansiedad, el tratamiento mostró también una mejora significativa, F (2, 1 18) = 4,33, p = 0,01 , ω = 0,23 (efecto intermedio). Según el Test post hoc de Gabriel se produjo una disminución significativa de la ansiedad de casi 3 veces en el grupo tratado con 28 mg/día del extracto de azafrán en comparación con el grupo placebo, tras un mes de tratamiento (mejora de -1 ,23 a -3,22; Fig. 5). En el caso de la subescala DASS Estrés, también se observó un cambio significativo tras el tratamiento con el extracto de azafrán, F (2, 1 18) = 14,29, p <0,001 , co = 0,42 (gran efecto). El grupo tratado con 28 mg/día del presente extracto mejoró significativamente el cuadro de estrés con respecto al resto de los grupos de estudio. Concretamente, se redujeron a 2 y 4 veces los signos de estrés al final del tratamiento, en comparación con el grupo tratado con 22 mg/día (reducción de -3, 1 1 a -6,12) y con el grupo placebo (reducción de -1 ,49 a -6, 12), respectivamente.

Al igual que en el efecto del tratamiento sobre la componente "Estado de ánimo", el efecto del extracto de azafrán de la presente invención también fue destacable en el componente correspondiente a la calidad del "Sueño", evaluada mediante el índice de Pittsburgh (PSQI). Tras realizar el análisis estadístico ANOVA sobre variaciones de puntuación en el PSQI global, se observó una mejora significativa en el sueño del grupo tratado con 28 mg/día en la puntuación de cambio global del PSQI , F (2, 106) = 4,27, p = 0,016, en comparación con el grupo placebo.

CONCLUSIÓN

Los resultados obtenidos en el estudio clínico amplían la literatura científica ya que es el primer ensayo de este tipo que se ha realizado con personas sanas. Además, demuestra que el extracto de azafrán de la invención obtenido a escala industrial, analizado mediante HPLC, no ejerce ningún efecto secundario o no deseado en el organismo, pero sí que se observan efectos positivos significativos en todos los estudios psicológicos llevados a cabo para analizar el estado de ánimo al final del tratamiento (POMS-TMD, PANAS, DASS y PSQI). En cuanto a la dosis, se pudo observar una relación dosis-dependiente clara entre las dos concentraciones estudiadas, por lo que este estudio se configura como uno de los primeros en identificar un esquema de dosificación clínicamente apropiado y empíricamente justificado. Los efectos del extracto de azafrán objeto de la presente memoria de patente sobre el estado de ánimo fueron consistentes en ambos sexos, y se han logrado sin efectos adversos sobre los parámetros de rendimiento o seguridad.

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