С 1-AЛKИЛAMИHO- 1 -ДЕЗОКСИПОЛИОЛАМИ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ

СОСТАВЫ, СОДЕРЖАЩИЕ ИХ, И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к лекарственным препаратам, содержащим N - акридонуксусную кислоту, то есть (9-oкcoaкpидин- Ю^Hj-и^УксуснУ ¹⁰ кислоту или, что тоже самое 2-(9-oкcoaкpидин-10-ил)yкcycнyю кислоту, международное непатентованное название (MHH) криданимод, CAS 38609- 97-1:

далее - 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнyю кислоту и/или ее соли.

Известны противовирусные и иммуномодулирующие препараты, содержащие различные соли 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты: натриевая соль (препарат «Heoвиp», Регистр лекарственных средств России, Энциклопедия лекарств, РЛС -11 выпуск, Гл. ред. Г.Л. Вышковский, - M.: PЛC-20046, 1503 с), смеси 9-oкcoaкpидин- 10- уксусной кислоты с солеобразователями/солюбилизат� �рами, например с метиламиноспиртом (препарат Циклоферон, содержащий в качестве солеобразователя/солюбилизатор� � 1- дeзoкcи-l-(мeтилaминo)-D-глюцитoл (меглюмин), Регистр лекарственных средств России, Энциклопедия лекарств, РЛС -11 выпуск, Гл. ред. Г.Л. Вышковский, M.: PЛC-2004, 1503 с.) или с N, N-диметиламиноизопропилглюкозой , а именно 3-O-(N,N-димeтилaминo-н-пpoпил)- l,2:5,б-ди-O-изoпpoпилидeн-α, D - глюкофуранозой (препарат «Aнaндин», Патент РФ JYs 2197248).

В случае использования некоторых органических соединений (являющихся слабыми органическими основаниями) в качестве солюбилизаторов 9-oкcoaкpидин- 10- уксусной кислоты в водных растворах образуется либо индивидуальное вещество - соль, либо комплекс без образования индивидуального химического

соединения. В последнем случае часто при удалении растворителя из раствора сухой остаток представляет собой механическую смесь двух индивидуальных веществ: 9-oкcoaкpидин-lO-yкcycнoй кислоты и солюбилизатора, без четкой температуры плавления и не может быть четко охарактеризован как индивидуальное химическое соединение. При растворении такой смеси в воде 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнaя кислота и органическое основание диссоциируют не полностью. Между диссоциированными и недиссоциированными молекулами устанавливается динамическое равновесие. Кроме того, в водной среде происходит образование комплексов между молекулами исходных веществ, на что указывает изменение ПМР — спектров их смеси в растворе D ₂ O, которые отличаются от суммы индивидуальных ПМР — спектров исходных компонентов.

Основной проблемой создания промышленно применимых растворов солей и комплексов 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты и лекарственных препаратов на ее основе является их физико-химическая нестабильность, что обусловлено следующим:

1) Высокой светочувствительностью акридинового скелета 9-oкcoaкpидин- 10- уксусной кислоты, что характерно для всех соединений на основе акридина. При поглощении света ультрафиолетовой и видимой части спектра в водных растворах происходит фотопревращение акридинового кольца с инактивацией иона 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты.

2) Низкой растворимостью самой (неионированной формы) 9-oкcoaкpидин- 10- уксусной кислоты, что приводит к необходимости создания более высокого (нефизиологичного) уровня рН (8,0 и более). При этом при высоком уровне рН происходит ускоренное декарбоксилирование 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты с образованием 9-мeтил-10-aкpидoнa.

Преодолению этих проблем призвано введение в состав лекарственной формы кроме солеобразователя и/или солюбилизатора стабилизирующих добавок и буферных систем, снижающих кислотность среды. Кроме того, снижение рН раствора приводит значение кислотности к цифрам, более близким к физиологическим значениям рН. В патенте PФN° 2031650 для этих целей предложено вводить в состав лекарственной формы ТРИС - основание (трометамин) и динатриевую соль ЭДТА (трилон Б). Также предлагается введение в состав лекарственной формы натриевой соли 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты

буферной системы на основе лимонной килоты и ее натриевой соли (препарат «Heoвиp», Регистр лекарственных средств России, Энциклопедия лекарств, PJIC -11 выпуск, Гл. ред. Г.Л. Вышковский,- M.: PЛC-2004, 1503 с). В патенте РФ JN°2020941 в состав лекарственной формы натриевой соли 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты кроме цитратного буфера вводят N, N, N', N', - тетраметилтионина хлорид в соотношении «пpoизвoднoe акридина : N, N, N',N', - тетраметилтионина xлopид» 1:0,001-0,01). При этом N, N, N',N', - тетраметилтионина хлорид служит внутренним светофильтром, защищающим молекулу активного вещества от воздействия света. В течение ряда лет предложено значительное количество лекарственных средств, содержащих соли и комплексы, образованные 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислотой и различными солеобразователями или солюбилизаторами и, например, сложными аминосахарами (Патент РФ JSIb 2036198) и их монозамещенными эфирами (Патент РФ JSJb 2197248). Известен также ряд лекарственных средств на основе солей 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты с 1-дeзoкcи-N-мeтилaминoгeкcacпиpтaми (Патент РФ JSIb 2135474). В патенте РФ 2182004 для снижения процессов фотодеструкции, увеличения термостабильности и повышения биологической активности предложено дополнительно вводить в препарат к водному раствору соли, образованной 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислотой и N-метил-D-глюкамином, то есть раствору 1 -дезокси- 1 -N- [мeтил-(2-aкpи-9-oн- 10-ил-aцeтaт)] -аммоний- Д- глюцитола дополнительное количество самого второго солеобразующего компонента (то есть N-метил — D-глюкамина) в качестве стабилизатора. При этом в препарате 1 -дезокси- 1 -N- [мeтил-(2-aкpи-9-oн- 10-ил-aцeтaт)] -аммоний- Д-глюцитола содержится от 8,5 мac.% до 25,0 мac.%, N-метилглюкамина от 0,05 мac.% до 1,0 мac.%, вода для инъекций до 100%. Таким образом, в водном растворе этого препарата солеобразователи (9-oкcoaкpидин-10- уксусная кислота, с одной стороны и N-метил — D-глюкамин, с другой) находятся не в эквимолярном соотношении, и солюбилизатор/солеобразователь N-метил— D- глюкамин присутствует в избытке.

Необходимо отдельно подчеркнуть, что высокие солюбилизирующие свойства аминосахаров (в том числе аминоспиртов) и их эфиров в первую очередь обусловлены высоким содержанием гидроксильных групп в составе их молекуле.

Использование в составе лекарственного препарата низкомолекулярных органических или неорганических солеобразователей приводит к значительному увеличению осмолярности водного раствора соли или комплекса, обусловленной

собственной осмотической активностью солеобразователя. Это приводит к местной болезненности при парентеральном введении препарата, особенно, при подкожном или внутримышечном. При использовании в качестве солюбилизаторов 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты и/или стабилизаторов водных растворов ее солей органических соединений с более высокой молекулярной массой (более 150 Да), например, линейных или циклических аминосахаров и их эфиров осмолярность раствора снижается, но также увеличивается вязкость раствора. Увеличение вязкости раствора приводит к трудностям при ультрафильтрации и/или розливе препарата в ампулы в процессе производства и использовании в медицинской практике, а также к нестабильности такого раствора при его хранении, особенно на холоде. В последнем случае часть 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты переходит в протонированную форму и выпадает в виде нерастворимого осадка, что препятствует дальнейшему использованию препарата в клинике.

Кроме того, введение в состав лекарственного препарата с целью солюбилизации 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты в водной среде органических соле- /комплексообразователей и/или стабилизаторов с более высокой молекулярной массой в массовых количествах, сравнимых с массовым количеством самой 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты, приводит к значительному уменьшению скорости всасывания 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты из места инъекции при внутримышечном и/или подкожном введении препарата и/или замедленному распаду образующегося комплекса «coлюбилизaтop - 9-oкcoaкpидин-10- уксусная киcлoтa» при внутривенном введении или пероральном введении. Вязкий органический солюбилизатор играет роль «дeпo» после внутримышечной и/или подкожной инъекции. Скорость всасывания активного вещества в кровь с места инъекции после внутримышечного и/или подкожного введения или скорость распада комплекса и освобождени иона 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты при внутривенном введении или пероральном применении играет ключевую роль в осуществлении фармакологического эффекта 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты и ее солей. Это связано с тем, что, являясь в первую очередь индуктором интерферонов и других цитокинов (чем обусловлены основные иммуномодулирующие и противовирусные свойства соединений на ее основе), 9-oкcoaкpидин-10- уксусная кислота действует по принципу «вce или ничего)). То есть для осуществления биологических эффектов, в том числе индукции выброса

интерферонов и других цитокинов необходимо достижение в короткое время определенного минимального (порогового) уровня содержания ионированной формы 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты в среде, окружающей клетку-мишень.

9-oкcoaкpидин-10- уксусная кислота выводится почками в неизмененном виде со значительной скоростью (период ее полуэлиминации из кровотока при внутривенном введении, например, в виде ее натриевой соли, не превышает 30 мин). Разница в скорости всасывания 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты из места введения при внутримышечной или подкожной инъекции (или его освобождения из комплекса «coлюбилизaтoρ - 9-oкcoaкpидин-10- уксусная киcлoтa» при внутривенной инъекции или пероральном введении), с одной стороны, и скорости элиминации ее ионированной формы из крови, с другой стороны, имеет критическое значение в достижении эффективной концентрации активного вещества в крови и тканях. Таким образом, скорость достижения максимальной концентрации активного вещества (T щах) при введении того или иного препарата 9-oкcoaкpидин- 10- уксусной кислоты во многом определяет полноту проявления биологических/фармакологически� � свойств соединений на на ее основе.

Соли 1-дeзoкcи-l- N-метиламиногексаспиртов с N - акрид онуксусной (то есть, 9-oкcoaкpидин-10- уксусной) кислотой и лекарственное средство на их основе, описанное в патенте РФ X- 2135474, как наиболее близкое к заявляемому изобретению, выбрано авторами заявляемого изобретения в качестве прототипа.

Выбранный прототип обладает рядом недостатков.

С точки зрения биологических и фармакологических свойств прототип обладает недостаточной способностью проникать в клетки, что является важным, поскольку основные биологические эффекты соединений 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты связаны с ее способностью взаимодействовать с внутренними субстратами клетки, в том числе с ДНК.

С точки зрения физико-химических свойств в водных растворах прототипа в процессе промышленного изготовления и/или длительного хранения происходит образование продукта декарбоксилирования (9-мeтил-10-aкpидoнa) и фотодеструкция акридинового скелета 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты.

С точки зрения фармакокинетических и фармакологических свойств в клинике прототип характеризуется сниженной скоростью всасывания основного действующего вещества 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты в системный кровоток

из места внутримышечной или подкожной инъекции препарата, сниженной скоростью освобождения 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты из связи с солеобразователем и неадекватному распределению активного вещества между кровью и тканями при внутривенном введении или пероральном приеме, сниженным проникновением активного вещества в ткани при местном нанесении. Прототип характеризуется сниженной способностью вызывать выброс интерферонов и цитокинов у человека и животных и, имеет низкую клиническую эффективность при не достаточно широком спектре заболеваний, которые возможно эффективно лечить в клинике с помощью прототипа.

Задачей настоящего изобретения является получение нового, клинически более эффективного, стабильного при производстве и хранении, обладающего лучшими фармакокинетическими и фармакодинамическими характеристиками, малотоксичного лекарственного препарата на основе 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты, предназначенного для профилактики и лечения иммунопатологических, паразитарных, дистрофических (дегенеративных), вирусных, бактериальным, грибковых, опухолевых заболеваний и патологических состояний человека и животных.

Поставленная задача реализуется новыми солями и смесями на основе 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты при использовании в качестве coлe-/кoмплeкcooбpaзoвaтeлeй или в качестве второго компонента смеси 1-aлкилaминo-l-дeзoкcипoлиoлoв общей формулы (II):

NH - R

I

CH ₂

(CHOH) ₄

I CH ₂

I он

СП) где R = этил; пропил или бутил; а также лекарственным препаратом, содержащим вышеуказанные смеси и соли (в том числе в различных сочетаниях) в качестве действующего вещества, обладающим следующим действием: иммунокорригирующим, иммуномодулирующим, противовирусным, противобактериальным (в том числе

противохламидийным), противовоспалительным, противопаразитарным, противогрибковым, противоопухолевым, радиопротективным, стресспротективным, и предназначенным для лечения, профилактики или коррекции следующих групп заболеваний и/или состояний: иммуно дефицитов, вирусных инфекций, грибковых инфекций, бактериальных инфекций (в том числе вызванных хламидиями), паразитарных инвазий, воспалительных процессов, опухолевых заболеваний, дегенеративно-воспалительных заболеваний суставов (артрозов), токсических явлений, вызванных химиотерапевтическим и/или лучевым воздействием, а также лекарственными формами данного препарата, предназначенными для парентерального, местного, перорального и других способов применения.

В процессе работы над изобретением выяснилось, что при увеличении гидрофобности солеобразователя из указанной группы 1-aлкилaминo-l- дезоксиполиолов за счет увеличения длины алифатической углеводородной цепи заместителя у атома азота аминогруппы в ряду "этил — пропил - бутил", с одной стороны, закономерно снижается способность соответствующего 1-aлкилaминo-l- дезоксиполиола солюбилизировать 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнyю кислоту формулы (III):

в водном растворе, а с другой стороны, неожиданно наблюдается значительное улучшение фармакодинамических свойств лекарственного препарата и усиление его фармакологической эффективности при снижении побочных эффектов, как при парентеральном введении, так - и при местном (в том числе ректальном и интравагинальном) и пероральном применении.

В исследованиях в сравнении с прототипом оказалось, что заявляемые соединения и заявляемый лекарственный препарат гораздо активнее/эффективнее прототипа, как в экспериментальных системах, так и в клинике. Кроме того, неожиданно оказалось, что заявляемые соли и смеси не только обладают меньшей

токсичностью по сравнению с прототипом при соответственном молярном соотношении 9-oкcoaкpидин-10 уксусной кислоты и соответствующего соле- /комплексообразователя (coлe-/кoмплeкcooбpaзoвaтeлeй), но и имеют иной спектр биологических свойств, нехарактерный как для исходных компонентов, взятых в отдельности, так и для прототипа. Кроме того, неожиданно выявилась зависимость между длиной алифатического радикала заместителя в ряду «этил-пpoпил-бyтил» у атома азота аминогруппы 1-aлкилaминo-l- дезоксиполиола и различными видами и степенью биологической/ фармакологической активности

Попытки дальнейшего увеличения алифатического «xвocтa» алкиламиногруппы (5 атомов углерода и выше) 1-aлкилaминo-l- дезоксиполиолов приводит к резкому падению растворимости соли/комплекса в водной среде. При этом снижается его стабильность и/или возникает невозможность получения лекарственной формы для парентерального введения с приемлемым объемом разовой дозы препарата, а таюке увеличивается токсичность соли/смеси.

Таким образом, согласно изобретению, предложены:

А) Соли 1-aлкилaминo-l -дезоксиполиолов с 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислотой, имеющие общую формулу (I):

где:

А NH ₂ -R

I

CH ₂

(CHOH) ₄ I

CH ₂ I он где R выбран из группы, состоящей из: этил; пропил; бутил.

B) Соли формулы (I), обладающие иммуномодулирующим, иммунокоррегирующим, противопаразитарным, противосклеротическим, противовирусным, противобактериальным, в том числе противохламидийным, противогрибковым, противовоспалительным, противоопухолевым, радиопротективным и стресспротективным действием.

C) Лекарственный препарат, обладающий иммуномодулирующим, иммунокоррегирующим, противопаразитарным, противосклеротическим, противовирусным, противобактериальным, противогрибковым, противовоспалительным, противоопухолевым, радиопротективным, стресспротективным действием и содержащий новые заявляемые соли формулы (I) (а также их сочетания), а также смеси указанной соли формулы (I) и/или 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты формулы (III):

с одним или несколькими 1-aлкилaминo-l-дeзoкcипoлиoлaми общей формулы (II)

NH — R

CH ₂

(CHOH) ₄

I CH ₂

I ОН

(И) где:

R выбран из группы, состоящей из: этил; пропил, бутил; (а также их сочетания) в качестве действующего вещества.

Указанный лекарственный препарат может быть реализован в нескольких вариантах, согласно приведенной далее формуле изобретения, то есть препарат может содержать, например:

(а) соль 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты, представляющую собой соединение формулы (I);

(в) смесь 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты формулы (III) с 1-aлкилaминo- 1-дeзoкcипoлиoлaми общей формулы (II);

(c) смесь соли формулы (I) с 1-aлкилaминo-l-дeзoкcипoлиoлaми общей формулы (II);

(d) смесь соли формулы (I) с 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислотой формулы (III) и 1-aлкилaминo-l-дeзoкcипoлиoлaми общей формулы (II).

При создании лекарственного препарата и его лекарственных форм на основе смесей 1-aлкилaминo-l-дeзoкcипoлиoлoв формулы II и 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты компоненты данной смеси брали в соотношении, близком к эквимолярному, но в отдельных случаях один из компонентов брали в существенном избытке.

Кроме того, авторами настоящего изобретения было показано, что использование смеси солюбилизаторов/солеобразовате� �ей формулы II в различных их соотношениях при создании заявляемого лекарственного препарата или использование в смесей заявляемых солей способно дополнительно увеличить устойчивость молекулы 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты к фотопревращениям и/или увеличить лечебную эффективность заявляемого лекарственного препарата.

Фотостабильность заявляемого лекарственного препарата исследовали в толщине слоя 1 см 0,2 M растворов в кварцевой кювете при мощности облучения 5,2 х 10 мВт/с • кв.м. с помощью ртутно-кварцевой лампы с длиной волны 250-310 нм. Количество остающегося фоточувствительного компонента (9-oкcoaкpидин-10 уксусной кислоты) определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на хроматографе Shimаdzu LC-6A с хроматографической колонкой Separon SGX Cl 8 5 мкм, 3 xl50 мм (Теssех) и спектрофотометрическим детектором SPD-6AV при волне длиной 254 нм. Результаты исследования фотостабильности растворов заявляемых соединений представлены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты исследования фотостабильность прототипа и заявляемого лекарственного препарата

Согласно изобретению, предпочтительно препарат, реализованный в виде (а), содержит в качестве соли формулы (I) N-(l-дeзoкcи-D-глюцитoл-l-ил)-N- этиламмоний 9-oкcoaкpидин-l 0-илaцeтaт.

Согласно изобретению, одним из предпочтительных вариантов (в) является лекарственный препарат, содержащий смесь 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты с 1 -дезокси- 1— (этилaминo)-D-глюцитoлoм.

Далее, согласно изобретению, одним из предпочтительных вариантов (с) является лекарственный препарат, содержащий смесь N— (1-дeзoкcи-D-глюцитoл-l- ил)-N-этилaммoний 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaтa и 1 -дезокси- l-(этилaминo)-D- глюцитола.

Далее, согласно изобретению, одним из предпочтительных вариантов (с) является лекарственный препарат, содержащий смесь 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты с N— (l-дeзoкcи-D-глюцитoл-l-ил)-N-этилaммoн� �й 9-oкcoaкpидин-10- илацетатом и 1 -дезокси- l-(этилaминo)-D-глюцитoлoм.

Соотношение в указанных выше смесях (b), (с) и (d) 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты к 1-aлкилaминo 1-дeзoкcипoлиoлy может значительно варьировать в зависимости от типа смеси и составляет предпочтительно:

(b) от 1,2 : 1 до 1 : 1,1;

(c ) от 220 : 1 до 5,5 : 1;

(d) от (1 - 100): (1 - 100) : (1 - 100) и может быть подобрано специалистом в зависимости от конкретной ситуации.

При этом следует учитывать, что содержание вышеуказанных компонентов в лекарственном препарате может также значительно изменяться в зависимости от назначения лекарственного препарата (например, для лечения или профилактики), его лекарственной формы (например, для парентерального или перорального или других путей введения), а также способа терапии (однократно или курсом), и т.п.

Конкретные содержания компонентов для каждого частного случая могут быть рассчитаны специалистом на основе последующего подробного описания изобретения и примеров реализации, не ограничивающих область изобретения.

D) Лекарственные формы данного препарата, предназначенные для парентерального, местного, перорального, ректального, интравагинального, внутриполостного и других известных способов применения.

Согласно одному из примеров реализации изобретения, лекарственная форма, пригодная для парентерального применения, содержит указанные выше соли формулы (I) или смеси (b), (с) или (d) в количестве, предпочтительно от 9,0 до 28,0 мac.% (на сухой остаток) и воду для инъекций (остальное).

Кроме того, дополнительно, лекарственная форма, пригодная для парентерального применения, - может содержать вспомогательные добавки, например, разбавитель, загуститель, внутренний светофильтр (например, N, N, N',N', - тетраметилтионина хлорид) и другие стандартные вещества, пригодные для получения или модификации свойств парентеральных препаратов, например циклодекстрины, такие как гидpoкcипpoпил-(бeтa)-циклoдeкcтpин или другие модифицированные циклодекстрины. Так, например, в ряде случаев, для достижения уровня значений рН, близких к физиологическим, а также для увеличения стабильности отдельных лекарственных форм в состав лекарственного препарата могут быть дополнительно введены неорганические и/или органические основания, широко применяемые для этой цели в фармацевтике, например, гидроксиды щелочных металлов и/или третичные, вторичные и четвертичные амины (такие как, β-диэтаноламин; 1,2-этилeндиaмин; триоксиметиламинометан (трометамин); диэтиламин; гидрабамин; этаноламин; триэтаноламин, глюкамин; 2- (4-имидaзoлил)-этилaмин; холин; аргинин и их пространственные изомеры и т.п.). При этом количество дополнительно вводимого основания зависит от степени его

щелочных свойств и составляет от 0,01% до 5% от сухого остатка лекарственного препарата.

Далее, согласно другому примеру реализации изобретения, лекарственная форма, пригодная для местного (топического) применения, может представлять собой эмульсию, суспензию, гель, крем, линимент и т.п.

Лекарственная форма для местного применения может содержать указанные выше соли формулы (I) или смеси (b), (с) или (d) в количестве, предпочтительно от 5,0 до 90,0 мac.% и кремовую, мазевую или гелевую основу.

Далее, согласно еще одному примеру реализации изобретения, лекарственная форма, пригодная для перорального применения, может представлять собой таблетки (в том числе покрытые, кишечнорастворимой оболочкой), а также драже, капсулы, гранулы, суспензии и растворы и т.п.

Лекарственная форма для перорального применения содержит указанные выше соли формулы (I) или смеси (b), (с) или (d) в количестве, предпочтительно от 20,0 до 99,9 мac.% .

Единичная дозированная форма для перорального приема может содержать дозу от 0,5 до 30 мг/кг веса тела, предпочтительно, от 2 до 10 мг/кг (то есть, например, для человека массой 60-80 кг от 120-160 мг до 600 - 800 мг), считая на 9- oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту или ее остаток.

Далее, согласно изобретению, лекарственная форма, пригодная для ректального и/или интравагинального применения, может представлять собой суппозитории, линимент, крем, гель, эмульсию, суспензию и т.п. Предпочтительно, лекарственная форма, пригодная для ректального и/или интравагинального введения, содержит указанные выше соли формулы (I) или смеси (b), (с) или (d) в количестве, предпочтительно, от 5,0 до 90,0 мac.%. Единичная дозированная форма, пригодная для ректального и/или интравагинального введения (суппозиторий), может содержать дозу от 2 до 10 мг/кг веса тела (то есть, например, для человека массой 60-80 кг от 120-160 мг до 600 - 800 мг), считая на 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоту или ее остаток.

E) Согласно изобретению, далее предложено применение соли формулы (I) и/или смеси 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты или соли формулы (I) с одним или несколькими 1-aлкилaминo-l-дeзoкcипoлиoлaми общей формулы (II), или их фармацевтически приемлемых производных или предшественников, или

содержащих их фармацевтических препаратов, для лечения и профилактики заболеваний и патологических состояний человека и животных.

В частности, предложено применение указанных выше солей, смесей и препаратов на их основе для предотвращения или лечения заболеваний и/или состояний, связанных или сопровождающихся изменением иммунного статуса, например, включающих (но не ограничивающихся ими): ВИЧ - инфекцию, нейроинфекцию, в том числе серозные менингиты и энцефалиты; вирусные гепатиты А или В и/или С и/или D; герпес и/или цитомегаловирусную инфекцию; инфекционный мононуклеоз; иммунодефицит, в том числе вторичный иммунодефицит, связанный с травмой, вирусными и/или бактериальными и/или грибковыми инфекциями и/или паразитарными инвазиями; паразитарную инвазию; бактериальную, в том числе хламидийную инфекцию; ревматические и системные заболевания соединительной ткани, в том числе ревматоидный артрит; дегенеративно-дистрофические заболевания суставов, в том числе вторичный и первичный остеоартроз; простатит; онкологические заболевания, патологические состояния, вызываемые химиотерапией и/или облучением. Указанные выше соли, смеси и лекарственные препараты на их основе можно применять для лечения и профилактики заболеваний и/или патологических состояний человека и животных.

F) Далее, согласно изобретению, предложены способы лечения и профилактики широкого круга заболеваний и патологических состояний инфекционной и неинфекционной природы с использованием заявляемого лекарственного препарата, в частности, лечения и профилактики состояний, связанных с изменениями иммунного статуса, лечения и профилактики ревматических и системных заболеваний соединительной ткани, в том числе, но не ограничиваясь ими, ревматоидного артрита; дегенеративно-дистрофических заболеваний суставов, в том числе вторичного и первичного остеоартроза; вирусных заболеваний, в том числе, но не ограничиваясь ими, ВИЧ - инфекции, вирусных гепатитов А или В и/или С и/или D; герпеса и/или цитомегаловирусной инфекции; инфекционного мононуклеоза; иммунодефицитов, в том числе вторичных иммунодефицитов, связанных с травмой, вирусными и/или бактериальными и/или грибковыми инфекциями и/или паразитарными инвазиями; паразитарных инвазий; грибковых заболеваний, в том числе, но не ограничиваясь ими, онихомикоза, кандидоза, бактериальной, в том числе хламидийной инфекции; простатита;

опухолевых заболеваний, а также для профилактики и коррекции токсических явлений, закономерно возникающих вследствие проведения цитостатической и/или лучевой терапии.

При проведении экспериментальных работ и клинических исследований показано, что заявляемые соединения и заявляемый лекарственный препарат обладают выраженным иммуномодулирующим, иммунокоррегирующим, противопаразитарным, противосклеротическим, противовирусным, противобактериальным, противогрибковым, противовоспалительным, противоопухолевым, радиопротективным и стресспротективным эффектом, при этом обладают низкой токсичностью, малым числом побочных эффектов, стабильностью.

Биологическую/фармакологич� �скую активность и токсичность новых заявляемых соединений, в том числе их способность проникать/ связываться со структурами клетки изучали на различных моделях iп vitrо и iп vivо в сравнении с прототипом. Показано, что заявляемые соединения в большей мере, нежели прототип, проникают/связываются со структурами клетки, что иллюстрируется таблицей 2.

Таблица 2

Проникновение/связывание заявляемых соединений в различные типы клеток в сравнении с прототипом

* За единицу флюоресценции соответствующего типа клеток принята флюоресценция с пробами с неорганической (натриевой) солью 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты в соответствующей серии для каждой линии клеток.

Острая токсичность (PL ₅₀ ) заявляемых соединений на мышах при внутрибрюшинном введении, определенная по методу Литчифилда и Уилкоксона составляла от 500 до 650 мг/кг. При этом токсичность (DL ₅₀ ) прототипа составила 450 мг/кг, что говорит от том, что прототип более токсичен, чем заявляемые соединения.

Согласно изобретению, предложенный способ профилактики и лечения заболеваний включает как однократный прием или введение препарата, так и назначение его курсом, то есть неоднократный прием и/или введение в течение некоторого периода времени.

Заявяляемый лекарственный препарат можно вводить один или несколько раз в сутки. Предпочтительная разовая доза препарата составляет от 0,5 до 20 мг/кг веса считая на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту или ее остаток, более предпочтительно от 3 до 10 мг/кг веса тела, считая на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту или ее остаток.

При парентеральном или пероральном введении заявляемого лекарственного препарата одна из предпочтительных схем введения включает введение его курсом от 5 до 12 раз на 1, 2, 4, 6, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29 сутки курса. Согласно еще одной возможной схеме лечения, курсы повторяют, например, с интервалом 10-14 дней. Возможно повторение курса не менее 2 раз.

Согласно изобретению, лекарственный препарат можно применять как в режиме монотерапии, так и в составе комплексной и/или комбинированной терапии. Например, препарат может быть эффективен в составе комплексного лечения ВИЧ- инфекции (например, совместно с препаратами на основе модифицированных нуклеозидов типа азидотимидина и/или ингибиторами обратной транскриптазы и/или белками, полученными биотехнологическим путем, например, моноклональными антителами или вакцинами), бактериальных и/или грибковых инфекций (например, совместно -с антибиотиками и/или химиопрепаратами, в том числе фторхинолонами), вирусных гепатитов (например, совместно рибавирином и/или с препаратами интерферонов и/или цитокинов и/или белками, полученными биотехнологическим путем, например, моноклональными антителами или вакцинами), опухолевых заболеваний (например с цитостатиками и/или гормонами или их антагонистами и/или белками, полученными биотехнологическим путем,

например, моноклональными антителами или терапевтическими вакцинами, а также в сочетании с оперативным лечением, в том числе и в адьювантном и/или неоадъвантном режиме).

Из анализа данных, представленных в примерах, видно, что заявляемые новые соли 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты проявляют более высокую биологическую и фармакологическую активность по сравнению с прототипом при меньшем числе негативных/побочных эффектов. При этом способность проникать в клетки и ткани значительно выше, а спектр биологической и фармакологической активности заявляемых соединений шире, чем у прототипа. При местном применении заявляемых соединений, наносимых в инертном носителе, выявлено более быстрое и глубокое проникновение остатка 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты в ткани (в кожу и слизистые оболочки) по сравнению с прототипом, что иллюстрирует таблица 3.

Таблица 3

Проникновение заявляемых соединений в ткани при местной аппликации в инертном носителе.

Исследования фармакокинетических и фармакодинамических характеристик и клинической эффективности и безопасности различных лекарственных форм заявляемого лекарственного препарата показали, что заявляемый лекарственный препарат обладает лучшими фармакокинетическими и фармакодинамическими характеристиками, а также увеличенной клинической эффективностью при меньшем количестве негативных эффектов по сравнению с прототипом.

Данные по фармакодинамическим и фармакокинетическим исследованиям заявляемого лекарственного препарата в сравнении с прототипом приведены в таблице 4.

Таблица 4

Фармакокинетические и фармакодинамические характеристики заявляемого лекарственного препарата в сравнении с протипом при внутримышечном введении в эквимолярных дозах*.

*Пpeпapaты вводили здоровым добровольцам однократно внутримышечно, в дозе 8 мг/кг веса (в пересчете на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту).

Заявляемый лекарственный препарат на основе новых предложенных солей и смесей показал свою эффективность в качестве лечебного и профилактического средства при широком круге заболеваний вирусного, паразитарного, бактериального (в том числе, хламидийного), грибкового, опухолевого, воспалительного, дегенеративно - дистрофического характера, а также при коррекции состояний, прямо или косвенно связанных с нарушениями иммунного статуса.

В процессе работы над изобретением авторами, как варианты заявляемого лекарственного препарата, также были дополнительно разработаны лекарственные формы для парентерального применения заявляемого лекарственного препарата, содержащие 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоту и солюбилизатор/солеобразователь, а именно 1-дeзoкcи -1 - (этилaминo)-D-глюцитoл. С учетом эффективной разовой дозы препарата, подобранной в клинике, которая составила (в пересчете на 9-oкcoaкpидин-10-ил уксусную кислоту) 2 - 10 мг/кг веса тела человека и при максимально возможном объеме разовой парентеральной, в частности, внутримышечной инъекции, была определена массовая доля сухого вещества и соотношение компонентов смеси, проведены исследования по

фотостабильности разработанной лекарственной формы для парентерального применения. Физико-химические свойства - внешний вид и рН при различных соотношениях компонентов оценивали, соответственно, визуально и с помощью рН-метрии.

Безопасность (местно-раздражающее действие) оценивали после внутримышечной инъекции препаратов с различными соотношениями компонентов в бедренную мышцу собак - биглей массой 10-11 кг. Местно-раздражающее действие оценивали по наличию и степени признаков воспаления, вызванного внутримышечным введением 4 мл препарата путем наблюдения за поведенческой реакцией животных на введение, а также путем последующего гистологического исследовании ткани в месте инъекции.

Фотостабильность оценивали по степени падения содержания светочувствительного компонента лекарственной формы (9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты) после экспонирования образцов препаратов ульрафиолетовому свету с длиной волны 350-450 нм. Содержание 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты оценивали высокоэффективной жидкостной хроматографией на хроматографе Shimаdzu LC-6A с хроматографической колонкой Separon SGX Cl 8 5 мкм, 3 xl50 мм (Теssех) и спектрофотометрическим детектором SPD-6AV при волне длиной 254 нм. Лекарственная форма считалась фотостабильной, если через 4 часа экспозиции количество оцениваемого фоточувствительного компонента (9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты) уменьшалось не более чем на 20%. Данные по исследованию физико-химических и фармакологических свойств разработанной лекарственной формы представлены в таблице 5.

Таблица 5

Характеристики варианта лекарственной формы заявляемого лекарственного препарата для парентерального введения при различных соотношениях компонентов смеси

«9-oкcoaкpидин-10- уксусная кислота : 1-дeзoкcи -1 -N- этилaминo-D-глюцитoл» и различном содержании воды.

При содержании воды в составе лекарственной формы менее 72 процентов препарат представлял собой вязкую жидкость. При введении такого препарата наблюдалась выраженная реакция воспаления и отека в месте введения, кроме того,

животные реагировали на введение вылизыванием места инъекции и вокализацией (поскуливанием). При этом, если 9-oкcoaкpидин-10- уксусная кислота превосходила в таком растворе по массовому соотношению 1- дезокси -1 - (этилaминo)-D- глюцитол, то препарат представлял собой вязкую жидкость с кристаллами несолюбилизированной 9-oкcoaкpидин-10 уксусной кислоты, а значения рН были далеки от физиологических.

При избытке 1 -дезокси- l-(этилaминo)-D-глюцитoлa по массе над 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислотой более чем в 1,1 раза препарат при парентеральном введении показывал высокие значения T _max при низких значениях С щ _ах , вызывал образование незначительных титров интерферона, а также имел высокие нефизиологичные значения рН. При избытке 9-oкcoaкpидин-10 уксусной кислоты по массе над 1 -дезокси- l-(этилaминo)-D-глюцитo лом более чем в 1,2 раза, препарат становился фотонестабильным.

Оказалось, что оптимальным массовым соотношением компонентов смеси «9-oкcoaкpидин-10 уксусная кислота : 1 -дезокси -1 -(этиламино) -D-глюцитoл» является соотношение от 1,2 : 1 до 1: 1,1 при минимальном содержании воды 72,0% мac.% и максимальном содержании воды 91,0 мac.% в лекарственной форме для парентерального применения.

Другой вариант лекарственной формы для парентерального применения заявляемого лекарственного препарата получен путем первоначального растворения N-(l-дeзoкcи-D-глюцитoл-l-ил)-N-этил аммоний 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaтa в воде для инъекций с последующим добавлением 1 -дезокси- l-(этилaминo)-D-глюцитoлa. Оказалось, что оптимальным массовым соотношением компонентов смеси «N-(1 -дезокси-D-глюцитол- 1 -ил)-iSГ-этил аммоний 9-oкcoaкpидин- 10-илацетат: 1 -дезокси -1 -(этиламино) -D-глюцитoл» является соотношение от 220:1 до 5,5:1 при минимальном содержании воды 72,0% мac.% и максимальном содержании воды 91,0 мac.% в лекарственной форме для парентерального применения. При разработке состава этого варианта лекарственной формы для парентерального введения авторами производился контроль свойств по тем же параметрам. Данные представлены в таблице 6.

Таблица 6.

Характеристики варианта лекарственной формы заявляемого лекарственного препарата для парентерального введения при различных соотношениях компонентов смеси «N-(l-дeзoкcи-D-глюцитoл-l-ил)-N-этилa ммoний 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaт

: 1-дeзoкcи -1 — (этиламино) -D-глюцитoл» и содержании воды.

При сравнении с прототипом в фармакокинетическом эксперименте оказалось, что максимальная концентрация активного вещества (измеряемая по акридиновому компоненту) в плазме крови после введения заявляемой лекарственной формы для парентерального введения достигается быстрее, значения максимальной концентрации выше, а основные биологические/фармакологически� � ответы значимо интенсивнее (в 1,5-2 раза), чем у прототипа.

Таким образом, как варианты заявляемого лекарственного препарата, авторами дополнительно заявляются лекарственные формы для парентерального введения при следующем соотношении компонентов:

I: смесь 9-oкcoaкpидин-10-ил уксусной кислоты с l-дeзoкcи-l-(этилaминo)-D- глюцитолом при массовом их соотношении от 1,2 : 1 до 1 : 1,1 :

9,0 - 28,0 мac.%; вода для инъекций - остальное.

II: смесь N-(l-дeзoкcи-D-глюцитoл-l-ил)-N-этил аммоний 9-oкcoaкpидин-10- илацетата с l-дeзoкcи-l-(этилaминo)-D-глюцитoлoм при массовом компонентов смеси от 220 : 1 до 5,5 : 1:

9,0 - 28,0 мac.%; вода для инъекций - остальное.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами:

ПРИМЕР 1. Синтез заявляемых соединений.

А. В колбу, снабженную обратным холодильником и мешалкой, вносят 25,3 г 9-oкcoaкpидин-10 уксусной кислоты, 40 мл дистиллированной воды и 0,1 моль (20,1 г) 1-дeзoкcи -1 - (этилaминo)-D-глюцитoлa интенсивно перемешивая. Смесь кипятят в течение 25-30 мин, охлаждают до комнатной температуры и приливают при энергичном перемешивании 100 -мл ацетона. Выпавший осадок отфильтровывают,

промывают 50 мл абсолютного этанола и сушат при 60°C под вакуумом в течение 1 часа и получают, соответственно выбранному 1- aлкилaминo-1-дeзoкcипoлиoлy:

N-(I -дезокси-D-глюцитол- 1 -ил)-N-этилaммoний 9-oкcoaкpидин- 10-илaцeтaт ( 1 )

Спектр ПМР (D ₂ O):

1.28 м.д. (ЗН, т, CH ₃ ), 2.84 - 3.16 м.д. (4H, м, CH ₂ ), 3.77 - 3.89 м.д. (6H, м, CH ₂ , CH), 4.10 м.д. (2H, с, CH ₂ ), 7.23 - 7.58 (4H, м, Ar), 7.79 - 7.96 (2H, м, Ar), 8.22 - 8.39 (2H, M ₅ Ar).

Тепература плавления 130-133 C ⁰ .

Б. 103,3 г 1-дeзoкcи -1 — (пpoпилaминo)-L-гaлaктитoлa растворяют в 200 мл воды и вноят в раствор при перемешивании (до полного растворения) порциями 125,3 г. измельченной 9-oкcoaкpидин-10 уксусной кислоты. Прибавляют 1000 мл абсолютного этанола. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают на фильтре 150 мл абсолютного этанола и сушат при 60 C° под вакуумом в течение 1 часа, получают, соответственно выбранному 1- aлкилaминo-1-дeзoкcипoлиoлy: N-(I -дезокси-L-галактитол- 1 -ил)-N-пpoпилaммoний 9-oкcoaкpидин- 10-илацетат (2)

Спектр ПМР (D ₂ O):

1.28 м.д. (ЗН, т, CH ₃ ), 1.84 м.д. (IH, м, CH ₂ ), 2.38 м.д. (IH ₅ кв, CH ₂ ), 2.84 - 3.16 м.д. (4H, м, CH ₂ ), 3.77 - 3.89 м.д. (6H, M ₅ CH ₂ , CH) ₅ 4.10 м.д. (2H, c ₅ CH ₂ ), 7.23 - 7.58 (4H, м, Ar), 7.79 - 7.96 (2H, м, Ar) ₅ 8.22 - 8.39 (2H ₅ м, Ar).

Температура плавления 127-130 C°.

В. В колбу, снабженную обратным холодильником вносят 100 г 9-oкcoaкpидин-10 уксусной кислоты и 150 мл воды, затем, при интенсивном перемешивании добавляют 93,6 г, 1-дeзoкcи -1 - (бyтилaминo)-D-мaннитoлa. Полученную смесь кипятят в течение 20 мин до полного растворения компонентов. Раствор охлаждают до 20 - 22 C°и смешивают с 400 мл ацетона. Колбу с выпавшим осадком выдерживают при температуре тающего льда (0 - 1 C°) в течение 4 часов. Затем осадок отфильтровывают, промывают на фильтре 40 мл охлажденного ацетона и высушивают в вакууме при 60 C° и получают, соответственно выбранному 1- aлкилaминo-1-дeзoкcипoлиoлy: N-(l-дeзoкcи-D-мaннитoл-l-ил)-N-бyтилaммo� �ий 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaт (3)

Спектр ПМР (D ₂ O):

1.28 м.д. (ЗН, т, CH ₃ ), 1.62-1.70 м.д (IH, м, CH ₂ ), 1.80 - 1.95 м.д. (2H, м, CH ₂ ), 2.30 м.д. (IH, кв, CH ₂ ), 2.84 - 3.16 м.д. (4H, м, CH ₂ ), 3.77 - 3.89 м.д. (6H, м, CH ₂ , CH), 4.10 м.д. (2H, с, CH ₂ ), 7.23 - 7.58 (4H, м, Ar), 7.79 - 7.96 (2H, м, Ar), 8.22 - 8.39 (2H, м, Ar).

Температура плавления 126-129 C°.

Аналогичным образом получают соли 9-oкcoaкpидин-10 уксусной кислоты и D- и L-изомерных вариантов соответствующих выбранных 1-aлкилaминo-l- дезоксипо лиолов :

N-(l-дeзoкcи-D-глюцитoл-l-ил)-N-пpoпилa� �мoний 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaт (4); N-( 1 -дезокси-D-глюцитол- 1 -ил)-N-бyтилaммoний 9-oкcoaкpидин- 10-илaцeтaт (5); N-(I -дезокси-D-галактитол- 1 -ил)-N-этилaммoний 9-oкcoaкpидин- 10-илaцeтaт (6) ; N-(I -дезокси-D-галактитол- 1 -ил)-N-пpoпилaммoний 9-oкcoaкpидин- 10-илaцeтaт (7); N-(I -дезокси-D-галактитол- 1 -ил)-N-бyтилaммoний 9-oкcoaкpидин- 10-илaцeтaт (8); N-(I -дезокси-D-маннитол- 1 -ил)-N-этилaммoний 9-oкcoaкpидин- 10-илацетат (9); N-(l-дeзoкcи-D-мaннитoл-l-ил)-N-пpoпилaммo ний 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaт (10); N-(l-дeзoкcи-L-глюцитoл-l-ил)-N-этилaммo� �ий 9-oкcoaкpидин-l 0-илaцeтaт (11); N-(l-дeзoкcи-L-глюцитoл-l-ил)-N-пpoпилaмм oний 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaт (12); N-(I -дезокси-L-глюцито л- 1 -ил)-N-бyтилaммoний 9-oкcoaкpидин- 10-илaцeтaт (13);

N-(l-дeзoкcи-L-гaлaктитoл-l-ил)-N-этилaмм oний 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaт (14); N-(I -дeзoкcи-L-гaлaктитoл-1 -ил)-N-бyтилaммoний 9-oкcoaкpидин- 10-илацетат (15); N-(I -дезокси-L-маннитол- 1 -ил)-N-этилaммoний 9-oкcoaкpидин- 10-илацетат (16); N-(I -дезокси-L-маннитол- 1 -ил)-N-пpoпилaммoний 9-oкcoaкpидин- 10-илацетат (17); N-(I -дезокси-L-маннитол- 1 -ил)-N-бyтилaммoний 9-oкcoaкpидин-l 0-илацетат (18);

Выход полученных соединений составляет 96-99 %.

Полученные в сухом виде соли представляют собой светложелтые кристаллические порошки, гигроскопичные, хорошо растворимые в воде и полярных растворителях, мало растворимые или нерастворимые в хлороформе и других неполярных растворителях. Хроматографическая чистота полученных соединений составляет 97-99%.

ПРИМЕР 2. Приготовление лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего в качестве действующего вещества смесь 9-oкcoaкpидин- 10- уксусной кислоты и 1-aлкилaминo 1-дeзoкcипoлиoлa.

В 300 мл воды для инъекций вносят 100,0 г мелкокристаллической 9- oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты и при интенсивном перемешивании вносят 82,6 г солюбилизатора - 1-дeзoкcи -1 - (этиламино) -D-глюцитола. Смесь перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре до полного растворения компонентов. Затем доводят объем раствора до 1100 - 1200 мл водой для инъекций. Затем в раствор вводят еще 1-дeзoкcи -1 - (этиламино) -D-глюцитол небольшими порциями, контролируя кислотность раствора до рН раствора до 7,4-7,8, а объем раствора доводят до 1400 мл водой для инъекций. Раствор фильтруют через стерилизующий фильтр, разливают в стерильные емкости объемом 2 мл. Полученный раствор содержит 12,5 мac.% 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислоты, 10,5 мac.% 1-дeзoкcи-l- (этиламино) -D-глюцитол и 77 мае. % воды для инъекций.

ПРИМЕР 3. Приготовление лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего в качестве действующего вещества смесь 9-oкcoaкpидин- 10- уксусной кислоты и 1-aлкилaминo 1-дeзoкcипoлиoлa.

В 80 литров воды для инъекций помещают 12,5 кг мелкокристаллической 9- oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты и при интенсивном перемешивании вносят порциями 110,3 кг солюбилизатора - 1-дeзoкcи -1 - (пpoпилaминo)-D-глюцитoлa. Смесь перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре до полного растворения компонентов. Затем доводят объем раствора до 90 л водой для инъекций. Измеряют рН и доводят рН раствора до 7,4-7,8 путем дополнительного введения триоксиметиламинометана (трометамина) небольшими порциями, а объем раствора доводят до 100 л водой для инъекций. Раствор фильтруют через стерилизующий фильтр, разливают в стерильные емкости объемом 2 мл или 5 мл. Полученный раствор содержит 12,5 мacc% 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты, 11,03 мacc% 1-дeзoкcи -1 - (пpoпилaминo)-D-глюцитoлa, 0,05 - 0, 1% триоксиметиламинометана (трометамина) и остальное - вода для инъекций.

ПРИМЕР 4. Приготовление лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего в качестве действующего вещества соль, образованную 9- oкcoaкpидин-10- уксусной кислотой и 1-aлкилaминo 1-дeзoкcипoлиoлoм. 90 г N-(l-дeзoкcи-L-гaлaктитoл-l-ил)-N-пpoпилaм мoний 9-oкcoaкpидин-10- илацетата растворяют в 800 мл воды для инъекций. Измеряют рН и доводят рН раствора до 7,4-7,6 путем дополнительного введения β-диэтаноламина небольшими порциями, а объем раствора доводят до 1000 мл водой для инъекций. Раствор фильтруют через стерилизующий фильтр, разливают в стерильные емкости объемом 2 мл или 5 мл. Полученный раствор содержит 9,0 мacc% 9 N-(l-дeзoкcи-L- гaлaктитoл-l-ил)-N-пpoпилaммoний 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaтa, 0,02 - 0, 5% β- диэтаноламина и остальное - вода для инъекций.

ПРИМЕР 5. Приготовление лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего в качестве действующего вещества смесь 9-oкcoaкpидин- 10- уксусной кислоты и 1-aлкилaминo 1-дeзoкcипoлиoлa.

В 70 литров воды для инъекций помещают 12,5 кг мелкокристаллической 9- oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты и при интенсивном перемешивании вносят порциями 23,4 кг солюбилизатора - 1-дeзoкcи -1- (бyтилaминo)-D-глюцитoлa. Смесь перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре до полного растворения компонентов. Затем доводят объем раствора до 90 л водой для инъекций. Объем раствора доводят до 100 л водой для инъекций. Раствор фильтруют через стерилизующий фильтр, разливают в стерильные емкости объемом 2 мл или 5 мл. Полученный раствор содержит 12,5 мac.% 9-oкcoaкpидин- 10- уксусной кислоты, 23,4 мac.% 1-дeзoкcи -1 - (бyтилaминo)-D-глюцитoлa, и остальное - вода для инъекций.

ПРИМЕР 6. Приготовление лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего в качестве действующего вещества смесь 9-oкcoaкpидин- 10- уксусной кислоты и двух разных 1-aлкилaминo -1-дeзoкcипoлиoлoв.

В 70 литров воды для инъекций помещают 4,85 кг мелкокристаллической 9- oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты и при интенсивном перемешивании вносят порциями 4,16 кг смеси солюбилизаторов -1-дeзoкcи -1 — (этилaминo)-D-глюцитoлa и 1-дeзoкcи -1 -( пpoпилaминo)-D-глюцитoлa с молярным соотношением компонентов смеси солюбилизаторов 1 : 1. Все компоненты перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре до полного растворения. Затем доводят объем раствора до 90 л водой для инъекций. Измеряют рН и доводят рН раствора до 7,4-7,6 путем дополнительного введения гидроксида натрия небольшими порциями, а объем раствора доводят до 100 л водой для инъекций. Раствор фильтруют через стерилизующий фильтр, разливают в стерильные емкости объемом 2 мл или 5 мл. Полученный раствор содержит 4,85 мacc% 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты, 2,00 мacc% 1-дeзoкcи -1 -(этилaминo)-D-глюцитoлa, 2,14 мac.% 1-дeзoкcи -1 - (пpoпилaминo)-D-глюцитoлa, (то есть массовое соотношение компонентов смеси

составляет, соответственно, 2,42 : 1 : 1,06; массовое содержание смеси в препарате 9,0%); 0,005 - 0,02% натрия гидроксида и остальное - вода для инъекций.

ПРИМЕР 7. Приготовление лекарственного препарата для парентерального применения содержащего в качестве действующего вещества смесь 9-oкcoaкpидин- 10- уксусной кислоты и двух разных 1-aлкилaминo-l-дeзoкcипoлиoлoв.

В 700 мл воды для инъекций помещают 125 г мелкокристаллической 9- oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты и при интенсивном перемешивании вносят порциями 106 г смеси солюбилизаторов -1-дeзoкcи -l-(пpoпилaминo)-D-глюцитoлa и 1-дeзoкcи -1 -(этилaминo)-D-глюцитoлa с молярным соотношением компонентов смеси солюбилизаторов 1 : 2. Все компоненты перемешивают и кипятят с обратным холодильником 20 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора до 900 мл водой для инъекций. Измеряют рН и доводят рН раствора до 7,4- 7,6 путем введения диэтиламина небольшими порциями, а объем раствора доводят до 1000 мл водой для инъекций.- Раствор фильтруют через стерилизующий фильтр, разливают в стерильные емкости объемом 2 мл или 5 мл. Полученный раствор содержит 12,5 мacc% 9-oкcoaкρидин-10- уксусной кислоты, 3,7 мacc% 1-дeзoкcи -1 -(пpoпилaминo)-D-глюцитoлa, 6,9 мacc% 1-дeзoкcи -l-(этилaминo)-D-глюцитoлa, (то есть массовое соотношение компонентов смеси составляет, соответственно, 3,37 : 1 : 1,86; массовое содержание смеси в препарате 23,1%); 0,02 - 0,06% диэтиламина и остальное - вода для инъекций.

ПРИМЕР 8. Приготовление лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего в качестве действующего вещества смесь соли (образованной 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислотой и 1-aлкилaминo -1-дeзoкcи- полиола) с 1-aлкилaминo -1-дeзoкcипoлиoлoм.

В 70 мл воды для инъекций помещают 22,8 г N-(l-дeзoкcи-L-гaлaктитoл-l- ил)-N-этилaммoний 9-oкcoaкpидин-10- илацетата, растворяют при интенсивном перемешивании. Затем доводят объем раствора до 90 мл водой для инъекций. Измеряют рН и доводят рН раствора до 7,4-7,6 путем дополнительного введения небольшими порциями 1-дeзoкcи -1- (этилaминo)-L-гaлaктитoлa, а объем раствора

доводят до 100 мл водой для инъекций. Раствор фильтруют через стерилизующий фильтр, разливают в стерильные емкости объемом 2 мл или 5 мл. Полученный раствор содержит 22,8 мac.% N-(l-дeзoкcи-L-гaлaктитoл-l-ил)-N-этилaмм oний 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaтa, от 0,4 до 0,11 мac.% l-дeзoкcи-l-(этилaминo) -L- галактитола, (то есть массовое соотношение компонентов смеси составляет, соответственно, от 57 : 1 до 207 : 1; массовое содержание смеси в препарате от 22,9 до 23,2%), и остальное - вода для инъекций.

ПРИМЕР 9. Приготовление лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего в качестве действующего вещества смесь N-(l-дeзoкcи-D- гллюцитoл-l-ил)-N-этилaммoний 9-oкcoaкpидин-10- илацетата с 1-дeзoкcи-l- (этилaминo)-D-глюцитoлoм.

В 700 мл воды для инъекций помещают 228,0 г N-(l-дeзoкcи-D-гллюцитoл-l- ил)-N-этилaммoний 9-oкcoaкpидин-10- илацетата, растворяют при интенсивном перемешивании. Затем доводят объем раствора до 900 мл водой для инъекций. Измеряют рН и доводят рН раствора до 7,4-7,6 путем дополнительного введения небольшими порциями 1-дeзoкcй -1- (этилaминo)-D-глюцитoлa, а объем раствора доводят до 1000 мл водой для инъекций. Раствор фильтруют через стерилизующий фильтр, разливают в стерильные емкости объемом 2 мл или 5 мл. Полученный раствор содержит 22,8 мac.% N-(l-дeзoкcи-D-глюцитoл-l-ил)-N-этилaммo� �ий 9-oкcoaкpидин-10- илацетата, от 0,4 до 0,11 мac.% 1-дeзoкcи -1- (этилaминo)-D- глюцитола, (то есть массовое соотношение компонентов смеси составляет, соответственно, от 57 : 1 до 207 : 1; массовое содержание смеси в препарате от 22,9 до 23,2%), и остальное - вода для инъекций.

ПРИМЕР 10. Приготовление лекарственного препарата для местного применения содержащего в качестве действующего вещества смесь 9-oкcoaкpидин- 10- уксусной кислоты и 1-aлкилaминo -1-дeзoкcипoлиoлa.

Смешивают 8,8 г 1-дeзoкcи -l-(пpoпилaминo)-L-мaннитoлa и 10,00 г 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты, растирают смесь в ступке или гомогенизаторе, прибавляют 50 мл воды, 130 г медицинского вазелина, 0,2 г Твина 20, добавляют

консервант натрия бензоат 0,04 г и эмульгируют компоненты в высокоскоростном миксере до получения однородного крема. Полученный крем, содержащий 5 мac.% 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты и 4,4 мac.% 1-дeзoкcи -1- (пpoпилaминo)-L- маннитола расфасовывают в банки или тубы.

ПРИМЕР 11. Приготовление лекарственного препарата для местного применения, содержащего в качестве действующего вещества соль, образованную 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислотой и 1-aлкилaминo -1-дeзoкcипoлиoлoм.

9,1 г N-(l-дeзoкcи-D-глюцитoл-l-ил)-N-этилaммo� �ий 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaтa тщательно смешивают с 89,9 г 1,2 - пропиленгликоля и 0,15% консерванта метилпарабена . Полученный жидкий линимент, содержащий 9,1 г (9,1 мае. %) N-(I- дeзoкcи-D-глюцитoл-l-ил)-N-этилaммoний 9-oкcoaкpидин-10- илацетата, (что соответствует 5 мac.% остатка 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты), расфасовывают по флаконам 5-10 мл, стерилизуют автоклавированием при давлении 1 атм. и 120°C 20 минут, стерильно укупоривают резиновыми пробкам и, затем, алюминиевыми колпачками.

ПРИМЕР 12. Приготовление лекарственного препарата для перорального введения, содержащего в качестве действующего вещества смесь соли (образованной 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислотой и 1-aлкилaминo-l- дезоксиполиолом) с 1-aлкилaминo 1-дeзoкcипoлиoлoм.

278 г N-(l-дeзoкcи-L-глюцитoл-l-ил)-N-этилaммo� �ий 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaтa и 32, 6 г 1-дeзoкcи -1 — (этилaминo)-D-глюцитoлa смешивают и гранулируют в грануляторе, прибавляя раствор метилцеллюлозы. После просеивания гранулят опудривают стеаратом магния и таблетируют полученную массу, получая 970 ядер таблеток. Поверхность полученных ядер таблеток покрывают с помощью эмульсии, содержащей 13 мac.% сополимера метакрилата и этакрилата и 7 мac.% 1,2- пропиленгликоля. Масса покрытия составляет 0,015 - 0,020 г на каждое ядро. В результате получают таблетки, каждая из которых содержит 0,28 г N-(l-дeзoкcи-L- глюцитoл-l-ил)-N-этилaммoний 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaтa, 0,03 г. 1-дeзoкcи -1- (этилaминo)-D-глюцитoлa (то есть, массовое соотношение компонентов смеси,

соответственно, 933 : 1) и 0, 004 г метилцеллюлозы и стеарата магния (суммарно) и 0,015 - 0,020 г кишечнорастворимого покрытия.

ПРИМЕР 13. Приготовление лекарственного препарата для перорального применения, содержащего в качестве действующего вещества смесь 9-oкcoaкpидин- 10- уксусной кислоты и 1-aлкилaминo -1-дeзoкcипoлиoлa.

150 г 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты и 160 г 1-дeзoкcи -1 -(этилaминo)-D- глюцитола (массовое соотношение компонентов 1 : 1,07) смешивают и гранулируют в грануляторе, прибавляя раствор метилцеллюлозы. После просеивания гранулят опудривают стеаратом магния и таблетируют полученную массу, получая 970 ядер таблеток. Поверхность полученных ядер таблеток покрывают с помощью эмульсии, содержащей 13 мac.% сополимера метакрилата и этакрилата и 7 мac.% 1,2 пропиленгликоля. Масса покрытия составляет 0,015 — 0,020 г на каждое ядро. В результате получают таблетки, каждая из которых содержит смесь 0,15 г 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты с 0,16 г 1-дeзoкcи -1 (этилaминo)-D-глюцитoлa (то есть суммарно смеси более 99,9% по массе в лекарственном препарате, массовое соотношение компонентов смеси, соответственно, 1 : 1,07) и 0, 004 г метилцеллюлозы и стеарата магния (суммарно) и 0,015 - 0,020 г кишечнорастворимого покрытия.

ПРИМЕР 14. Приготовление лекарственного средства для перорального применения, содержащего в качестве действующего вещества смесь соли (образованной 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислотой и 1- aлкилaминo-1-дeзoкcи- полиолом) и 1-aлкилaминo-l-дeзoкcипoлиoлa.

278 г N-(l-дeзoкcи-L-глюцитoл-l-ил)-N-этилaммo� �ий 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaтa и 32,6 г 1-дeзoкcи -1 -(этилaминo)-D-глюцитoлa смешивают и гранулируют в грануляторе, прибавляя раствор метилцеллюлозы (соотношение компонентов смеси, соответственно, 8,52 : 1). После просеивания гранулят опудривают стеаратом магния и таблетируют полученную массу, получая 970 ядер таблеток. Поверхность полученных ядер таблеток покрывают с помощью эмульсии, содержащей 13 мac.% сополимера метакрилата и этакрилата и 7 мac.% 1,2- пропиленгликоля. Масса

покрытия составляет 0,015 — 0,020 г на каждое ядро. В результате получают таблетки, каждая из которых содержит 0,28 г N-(l-дeзoкcи-L-глюцитoл-l-ил)-N- этиламмоний 9-oкcoaкpидин-10-илaцeтaтa, 0,03 г. 1-дeзoкcи -1 -(этилaминo)-D- глюцитола (суммарно компонентов смеси в леварственном препарате около 99,9% по массе) и 0, 004 г метилцеллюлозы и стеарата магния (суммарно) и 0, 015 — 0,020 г кишечнорастворимого покрытия.

ПРИМЕР 15. Приготовление лекарственного препарата для перорального применения, содержащего в качестве действующего вещества смесь разных солей, (образованных 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнoй кислотой и 1-aлкилaминo-l- дезоксиполиолами) с 1-aлкилaминo-l-дeзoкcипoлиoлoм.

143,4 г N-(l-дeзoкcи-L-мaннитoл-l-ил)-N-пpoпилaммo ний 9-oкcoaкpидин-10- илацетата, 147,7 N-(l-дeзoкcи-D-тaлaктитoл-l-ил)-N-бyтилaм� �oний 9-oкcoaкpидин- 10 -илацетата, 32,6 г 1-дeзoкcи -1 -(этилaминo)-D-глюцитoлa смешивают (то есть массовое соотношение компонентов смеси, соответственно, 4,38 : 4,5 : 1) и гранулируют в грануляторе, прибавляя раствор метилцеллюлозы. После просеивания гранулят опудривают стеаратом магния и таблетируют полученную массу, получая 970 ядер таблеток. Поверхность полученных ядер таблеток покрывают с помощью эмульсии, содержащей 13 мac.% сополимера метакрилата и этакрилата и 7 мac.% 1,2- пропиленгликоля. Масса покрытия составляет 0,015-0,020 г на каждое ядро. В результате получают таблетки, каждая из которых содержит 0,14 г N-(l-дeзoкcи-L-мaннитoл-l-ил)-N-пpoпилaммo ний 9-oкcoaкpидин-10- илацетата, 0, 15 N-(I -дезокси-D-галактитол- 1 -ил)-N-бyтилaммoний 9-oкcoaкpидин- 10- илацетата, 0,03 г. 1-дeзoкcи -1 -(этиламино) -D-глюцитола (суммарно компонентов смеси в лекарственном препарате около 99,9% по массе) и 0, 004 г метилцеллюлозы и стеарата магния (совокупно) и 0,015 - 0,020 г кишечнорастворимого покрытия.

ПРИМЕР 16. Приготовление лекарственного препарата для перорального применения, содержащего в качестве действующего вещества смесь соли (образованной 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислотой и 1-aлкилaминo-l- дезоксиполиолом) с 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислотой и с 1-aлкилaминo-l- дезоксиполиолом.

198 г N-(l-дeзoкcи-L-мaннитoл-l-ил)-N-пpoпилaммo ний 9-oкcoaкpидин-10- илацетата, 1 г 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты, 1 г 1-дeзoкcи -1 -(этилaминo)-D- глюцитола смешивают (то есть массовое соотношение компонентов смеси, соответственно, 198 : 1 : 1) и гранулируют в грануляторе, прибавляя раствор метилцеллюлозы. После просеивания гранулят опудривают кальция стеаратом, добавляют 800 г лактозы, перемешивают и смесь капсулируют по 0,5 г в каждую капсулу. В результате получают капсулы, каждая из которых содержит 0,1 г действующего вещества (суммарно компонентов смеси в лекарственном препарате около 20% по массе) около 0,4 г лактозы и 0, 004 г метилцеллюлозы и стеарата кальция (совокупно).

ПРИМЕР 17. Получение лекарственного препарата в виде суппозиториев для ректального или интравагинального введения, содержащего в качестве действующего вещества смесь 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты и 1-aлкилaминo - 1 -дезоксиполиола.

25 г мелкокристаллической 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты смешивают с 21 г 1-дeзoкcи -1 -(этилaминo)-D-глюцитoлa и полученную смесь вводят в расплавленную при 40 градусах основу для суппозиториев Витепсол (Witерsоl) Hl 5 массой 104 г. Полученную композицию в горячем виде гомогенизируют и, затем, формуют и охлаждают, получая суппозитории торпедообразной формы, массой 1,5 г. Выход 96-98%. Получают суппозитории массой 1,5 г для ректального или интравагинального введения следующего состава: 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты - 0,25 г; -дезокси -1 -(этилaминo)-D-глюцитoлa - 21 г (соотношение компонентов смеси, соответственно 1 : 1,19, суммарно смеси в лекарственном препарате 30,6%); основы для суппозиториев Витепсол (Witерsоl) H15 - остальное.

«

ИССЛЕДОВАНИЯ АКТИВНОСТИ/ЭФФЕКТИВНОСТИ ЗАЯВЛЯЕМЫХ СОЕДИНЕНИЙ И ЗАЯВЛЯЕМОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА

ПРИМЕР 18. Проникновение/связывание заявляемых соединений с различными типами клеток.

Для изучения скорости проникновения/связывания заявляемых соединений в клетки человека, использовали лимфоциты периферической крови человека (ЛПК), клетки , линия рака груди человека MD -1 , клетки гепатомы человека НерG -2. Перед внесением заявляемых солей, прототипа и (для сравнения) натриевой соли 9- oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты, соответственно MD -1 клетки (10 ⁴ клеток/лунку) культивировали в 96 луночном планшете течение 48-чacoв в полной среде DMEM. НерG -2 клетки (5 х 10 ⁴ клеток/лунку) культивировали в течение 96- ти часов в DMEM полной среде. ЛПК (5 х 10 ⁵ клеток/лунку) культивировали в течение 72-х часов в RPMI полной среде DMEM. В культуральную жидкость вносили раствор соединений в полной среде DMEM для получения конечной концентрации соответствующего соединения 1 μМ. Через 15 минут инкубации клетки отмывали двукратно физиологическим раствором измеряли флюоресценцию проникших/связавшихся солей на планшетном флюоресцентном ридере Lаmbdа Fluоrо 320 E с возбуждающей волной 254 нм и волной детекции 510 нм (определение иона 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты). Результаты эксперимента были представлены в таблице 2. Из данных таблицы видно, что количество проникших и/или связавшихся с клеткой заявляемых солей в 5 -7 раз выше, чем прототипа или соли 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты с щелочным металлом. При этом количество препарата внутри клетки почти экспотенциально растет с увеличением длины алифатического радикала-заместителя у атома азота аминной группы 1-aлкилaминo -1-дeзoкcипoлиoлa. Таким образом, заявляемые соединения значительно проникают в клетки значительно быстрее и/или прочнее связываются со структурами клетки, чем прототип.

ПРИМЕР 19. Проникновение заявляемых соединений в ткани при местной аппликации в инертном носителе.

Местная аппликация заявляемых соединений показала, что действующее вещество проникает в ткани быстрее и глубже, чем для прототипа. Скорость и глубина проникновения заявляемых соединений в ткани при местном нанесении исследовалась на крысах массой 250-280 г. У животных выбривались 2 участка кожи, размером 1 x 2 см. по обеим сторонам от середины спины. На один участок наносилось заявляемое лекарственное средство в растворе инертного носителя - 1,2 - пропиленгликоля, а на другой (симметричный) участок того же животного наносился прототип в том носителе. Концентрация наносимого прототипа и заявляемого лекарственного средства, наносимых на одно животное была одинаковой (от 1 до 10 % в разных сериях экспериментов). Участки кожи с нанесенными препаратами прикрывали кусочками полиэтиленовой пленки для предотвращения высыхания и вылизывания нанесенных лекарств животным. Через 2 или 4 часа после нанесения препаратов животных забивали эфирным наркозом, остатки нанесенных препаратов сразу тщательно удалялись 96% спиртом. Из середины участка, на которые были нанесены вещества, вырезали кусочек кожи площадью 1 см кв. Экстрагировали акридиновый компонент (9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту) путем гомогенизации вырезанной ткани в хлороформе с последующим центрифугированием. Измеряли содержание 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты в надосадке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Результаты исследования были приведены в таблице 3. При анализе результатов, представленных в таблице 3, видно, что заявляемые соединения проникают в кожу в 2-3 раза большем количестве, чем прототип.

ПРИМЕР 20. Интерферониндуцирующая активность заявляемых соединений (в культуре мононуклеаров периферической крови человека, обогащенной дендритными клетками).

Интерферониндуцирующую активность заявляемых соединений в сравнении с прототипом изучали в культуре мононуклеаров периферической крови человека, обогащенной фракцией дендритных клеток, ответственных за продукцию

интерферонов типа I. Мононуклеары периферической крови человека от 20 разных здоровых доноров (п = 20) выделяли из цельной донорской крови (с добавлением ЭДТА) путем центрифугирования в градиенте плотности в системе «фикoлл : вepoгpaфин». Клетки дважды отмывали раствором Хенкса. Отмытые мононуклеары периферической крови человека ресуспедировали в в полной среде РПМИ 1640 с добавлением НЕРЕS-буфера, натрия пирувата, L- глютамина, и инактивированной телячьей сыворотки. Полученные клетки обогащали дендритными клетками путем иммуномагнитной сепарации. Для этого клетки инкубировали с моноклональными антителами, специфически связывающимися с дендритными клетками (антитела связываются со специфическим для дендритных клеток лецитином), а затем собирали клетки на колонке Miltenyi MS (использовали BDCA-4 CeIl Isоlаtiоп Кit (Мiltепуi Вiоthес)). После процедуры обогащения доля интерферонпродуцирующих (дендритных) клеток возрастала примерно в 20 раз. Разведенные в той же среде (РПМИ 1640, но без сыворотки) клетки в концентрации 1,5 х 10 ⁶ в 1 мл, засевали в 24-лyнoчныe плоскодонные планшеты по 1 мл в лунку и культивировали в термостате при температуре 37 °C в течение 24 часов либо с заявляемыми соединениями, либо с прототипом, либо без таковых (кoнтpoль=cпoнтaннaя продукция цитокинов). После этого клетки центрифугировали, надосадочную жидкость отделяляли и определяли в ней с помощью иммуноферментного анализа (ELISA) уровень интерферонов, в частности, гамма-интерферона, альфа- интерферона, омега - интерферона. Все соединения (или прототип) добавлялись в среду культивирования до концентрации 30 микромоль/мл. Результаты исследования представлены в таблице 7.

Таблица 7.

Интерферониндуцирующая активность заявляемых соединений

(в культуре мононуклеаров периферической крови человека, обогащенной дендритными клетками)*.

ы

OO

*B знаменателе спонтанная продукция интерферонов (в отсутствие заявляемых соединений или прототипа), в числителе - значения уровней индуцированных интерферонов, в скобках - коэффициент индукции.

Из данных таблицы видно, что заявляемые соединения проявляют намного большую интерферониндуцирующую активность, чем прототип, а при увеличении длины алифатической цепи радикала заместителя у атома азота аминогруппы иона (1-aлкилaминo -1-дeзoкcипoлиoлa) в ряду (этил, пропил, бутил) интерферон индуцирующая активность увеличивается. Кроме того, прототип не оказал никакого влияния на уровень продукции омега-интерферона. Также неожиданно оказалось, что L и D изомеры одного и того же вещества обладают различной активностью в отношении индукции интерферонов. Так, например, соединение 12, (L - изомер) увеличивало уровень продукции гамма-интерферона значиетельнее, чем его D — изомерный аналог (соединение 4). В отношении интерферона- омега зависимость в отдельных случаях была обратной. Соединение 1 (D - изомер) индуцировал большее количество интерферона-омега, чем его L - изомерный вариант (соединение 11). Таким образом, заявляемые соединения обладают гораздо более выраженной интерферониндуцирующей активностью, чем прототип, а спектр индуцируемых ими интерферонов имеет другой профиль, чем спектр интерферонов, индуцируемых прототипом.

ПРИМЕР 21. Цитокининдуцирующая активность заявляемых соединенений (в культуре мононуклеаров периферической крови человека).

Цитокининдуцирующую активность заявляемых соединений в сравнении с прототипом изучали в культуре мононуклеаров периферической крови человека. Эксперименты проводились на мононуклеарах крови от 20 разных здоровых доноров (п = 20). Мононуклеары периферической крови человека выделяли из цельной донорской крови (с добавлением ЭДТА) путем центрифугирования в градиенте плотности Нistораquе 1077. Клетки дважды отмывали раствором Хенкса. Отмытые мононуклеары периферической крови человека, разведенные в среде 199 в концентрации 1,5 xlθ ^б в 1 мл, засевали в 24-лyнoчныe плоскодонные планшеты по 1 мл в лунку и культивировали в термостате при температуре 37°C в течение 24 часов либо с заявляемыми соединениями, либо с прототипом, либо без таковых (кoнтpoль=cпoнтaннaя продукция цитокинов). После инкубации надосадочную жидкость собирали и определяли в ней с помощью иммуноферментного анализа

(ELISA) уровень цитокинов, в частности, интерлекина - 2, (ИЛ-2), интерлейкина- 4 (ИЛ - А), интерлейкина - 10 (ИЛ - 10). В отдельной серии экспериментов изучалась способность заявляемых соединений (в сравнении с прототипом) препятствовать индукции провоспалительного цитокина фактора некроза опухолей - альфа (ФНО - альфа) в ответ на синтетический олигодезоксинуклеотид CpG-ODN (имитирующий контакт клеток с бактериями). CpG-ODN вносился в среду культивирования до концентрации 19 мкг/мл одновременно с исследуемыми соединениями. ФНО - альфа определяли в культуральной жидкости также методом ELISA. Через 24 часа инкубации все заявляемые соединения (или прототип, соответственно) добавлялись в среду культивирования до концентрации 30 мкмоль/мл. Результаты исследования представлены в таблице 8.

Таблица 8.

Цитокининдуцирующая активность заявляемых соединений (в культуре мононуклеаров периферической крови человека.)

* Данные по индукции нормализованы, путем вычитания значений уровня спонтанной (в отсутствие заявляемых соединений или прототипа) продукции цитокинов из значений уровней индуцированных цитокинов.

Из данных таблицы видно, что заявляемые соединения проявляют гораздо большую цитокининдуцируюrцую активность в отношении отдельных

противовоспалительных интерлейкинов, а при увеличении длины алифатической цепи радикала заместителя у атома азота аминогруппы иона 1-aлкилaминo -1- дезоксиполиола в ряду «-этил; -пропил; -бyтил» цитокининдуцирующая активность увеличивается. Прототип, в отличие от заявляемых соединений оказал слабое тормозящее влияние на СрG-ОDN-индукцированный уровень фактора некроза опухоли — альфа. Также неожиданно оказалось, что L и D изомеры одного и того же вещества обладают различной активностью в отношении индукции определенных цитокинов. Так, например, соединение 11, (L - изомер) увеличивало уровень продукции интерлейкина - 10 только на 2112 пг/мл от спонтанной продукции, в то время как его D - изомерный вариант (соединение 1) увеличивал уровень продукции этого же цитокина на 2927 пг/мл. В отношении интерлейкина - 2 ситуация была обратной. Соединение 11 (L - изомер) индуцировало гораздо большее количество интерлейкина - 2, чем его D - изомер (соединение 1). Таким образом, заявляемые соединения обладают гораздо более выраженной цитокининдукцирующей активностью в отношении противоспалительных цитокинов и большей способностью подавлять синтез провоспалительных цитокинов, чем прототип, а спектр индуцируемых ими цитокинов имеет другой профиль, чем спектр цитокинов, индуцируемых прототипом.

ПРИМЕР 22. Иммуномодулирующая активности заявляемых соединений

Иммуномодулирующую активность заявляемых соединений исследовали в сравнении с прототипом при однократном внутривенном введении 0,2 M водных растворов крысам линии Вистар из расчета 8,0 x 10 ^"4 М/кг массы тела. Оценивались исходные параметры иммунной системы, а также после воздействия соединений: фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови, кислородзависимый метаболизм нейтрофилов периферической крови (на 3 день), уровень сывороточного интерферона (через 4 часа), количество CD 4 (+) и CD8 (+) лимфоцитов (на 3 день). Кислородзависимый метаболизм нейтрофилов оценивали с помощью люминол- зависимой хемилюминесценции (XJI). Измерения интенсивности XJI проводились на биохемилюминометре. Кислородзависимый метаболизм нейтрофилов крови оценивали по И _cyмм .- суммарному количеству импульсов, испускаемых 1 х 10 нейтрофилами в течение всего времени регистрации (30 мин) XJI -ответа. Уровень

сывороточного интерферона определяли биологическим методом (индекс защиты клеток в культуре от повреждения вирусом Сендай) по сравнению со стандартным препаратом интерферона, приводя затем значания активности к международным единицам (ME). Относительное содержание CD 4(+) и CD8(+) лимфоцитов определяли с помощью моноклональных антител на проточном цитофлюориметре. Также определяли изменение пролиферативного ответа культуры клеток цельной крови на стандартный митоген (фитогемаагглютинин) по степени (кратности) изменения включения в ДНК клеток [H ³ ]- тимидина при инкубации в течение 1 часа при 37 ⁰ C. Результаты исследования представлены в таблице 9.

Таблица 9. Иммуномодулирующая активность заявляемых соединений

* В знаменателе исходные значения, в числителе — значения после воздействия

Из анализа результатов видно, что заявляемые соединения значительно более активны, чем прототип по влиянию на все звенья иммунитета: уровень

индуцированного интерферона значительно выше, происходит более значительное увеличение соотношения T- хелперов/Т -супрессоров и пролиферативного ответа клеток белой крови на митоген. Кроме того, установлена положительная корреляция между интенсивностью ответа показателей иммунитета и длиной алифатического радикала - заместителя у атома азота аминогруппы 1-aлкилaминo -1-дeзoкcшioлиoлa

ПРИМЕР 23. Прямая противовирусная активность заявляемых соединений (против различных вирусов в культурах клеток)

Противовирусная активность заявляемых соединений в сравнении с прототипом была изучена в различных системах iп vitrо (таблица 10). Заявляемые соединения или прототип, соответственно, вносились в соответствующую культуру на 2-7 день после заражения культуры вирусом. Все сравниваемые соединения вносились в среду культивирования в отдельных экспериментах с определенным вирусом в эквимолярных количествах.

Таблица 10. Противовирусная активность заявляемых соединений

* ЦПД 50 - концентрация вируса, вызывающая гибель 50 процентов клеток культуры.

Из данных таблицы 10 следует, что в отличие от прототипа заявляемые соединения обладают более высокой эффективностью, а также иным спектром противовирусного действия, что, в частности, выражается в том, что они (в отличие от прототипа) значительно сильнее воздействуют на безоболочечные вирусы. При этом отмечается увеличение противовирусной активности в ряду заявляемых солей при увеличении длины алифатического радикала заместителя у атома азота аминогруппы иона 1-aлкилaминo -1-дeзoкcипoлиoлa.

ПРИМЕР 24. Противомикробная активность заявляемых соединений (на модели экспериментального микробного сепсиса).

В эксперименте использовали белых беспородных мышей весом 23-25 грамм. Всем группам мышей (по 10 мышей группе)- вводили в внутривенно в ретроорбитальный синус бактерии патогенного штамма Stарhуlососсиs аиrеиs VT- 2003R в дозе 1x10 ¹⁰ бактериальных клеток на мышь. Через 2 часа после инфицирования внутривенно однократно вводили исследуемые вещества. Группы с

1 по 6 получала заявляемые соединения (шифр 1, 5, 9, 2, а также их смеси), 7 - ая группа получала прототип, 8 группа получала растворитель (воду для инъекций), как группа негативного контроля. Заявляемые соединения (или их смеси) и прототип и вводили в одинаковой дозе 6 мг (считая на остаток 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты) на килограмм веса животного. Оценивали выживаемость животных в течение 32 часов после инфицирования. Результаты эксперимента приведены в таблице 11.

Таблица 11.

Противомикробная активность заявляемых соединений (на модели экспериментального микробного сепсиса).

* Все заявляемые соединения (или их смесь - группы 5 и 6) и прототип вводили в эквимолярных количествах, молярное соотношение заявляемых соединений в смесях (группа 5 и 6) - 1 : 1.

Из анализа данных таблицы 11 видно, что заявляемые соединения и их смеси обладают гораздо более выраженным противомикробным действием, чем прототип. При этом отмечается увеличение противомикробной активности в ряду заявляемых

солей при увеличении длины алифатического радикала заместителя у атома азота аминогруппы иона 1- алкиламиноl-дезоксиполиола. Кроме того, некоторые смеси заявляемых солей обладают несколько большим эффектом, чем эти соли по отдельности.

ПРИМЕР 25. Противогрибковая активность заявляемых соединений (на модели экспериментального грибкового сепсиса).

Беспородным белым мышам (по 10 животных в группе) вводили внутривенно взвесь культуры грибов Сапdidа Аlbiсапs, полученных путем субкультивирования патогенного клинического изолята в дозе LD ₅₀ . На 3 -й день после инфицирования мышам внутривенно вводили сравниваемые вещества. Группы с 1-ой по 6 группа получала заявляемые соединения (номера соединений 6, 7, 8, 13, а также их смеси в различном молярном соотношении), 7 - ая группа получала прототип, 8 группа получала растворитель (воду для инъекций), как группа негативного контроля. Прототип и заявляемые соединения (или смеси заявляемых соединений) вводили в одинаковой дозе 6 мг (считая на остаток 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты) на килограмм веса животного. Оценивали выживаемость животных в течение 7 дней после инфицирования. Результаты эксперимента приведены в таблице 12.

Таблица 12.

Противогрибковая активность заявляемых соединений (на модели экспериментального грибкового сепсиса)

* Все заявляемые соединения (или их смесь - группы 5 и 6) и прототип вводили в эквимолярных количествах, молярное соотношение заявляемых соединений в смесях (группа 5 и 6) - 1:1 и 1:4, соответственно.

Из анализа данных таблицы 12 видно, что заявляемые соединения обладают гораздо более выраженным противогрибковым действием, чем прототип. При этом отмечается увеличение противогрибковой активности в ряду заявляемых солей при увеличении длины алифатического радикала заместителя (в ряду «-этил; пропил; - бyтил») у атома азота аминогруппы катиона 1-aлкилaминo -1-дeзoкcипoлиoлa. Кроме того, некоторые смеси заявляемых солей обладают несколько большим защитным эффектом, чем эти соли по отдельности.

ПРИМЕР 26. Противоопухолевая активность заявляемых соединений (при комбинированном лечении экспериментальной опухоли).

Исследования проводились на 60 мышах линии ВАLВ/С весом 20 — 25 г. Штамм AKATOH (аденокарцинома тонкого кишечника) перевивался в правый бок. На 7 день перевивки животные были разделены на 3 группы, по 20 мышей в каждой. Первая группа получала заявляемые соединения, растворенные в воде для инъекций в дозе 10 мг/кг веса (в пересчете на остаток 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты), через день, начиная с 7 дня после перевивки опухоли внутрибрюшинно, всего 7 инъекций, 2 группа получала прототип в той же (эквимолярной) дозе в том же растворителе и пути введения. Все животные получали также цитостатик циклофосфан в дозе 7 мг/кг веса тела, ежедневно, внутрибрюшинно, в течение 10 дней 3 группа служила негативным контролем и получала растворитель (воду для инъекций) по 0,4 мл на мышь ежедневно, внутрибрюшинно, также в течение 10 дней. Забой производили на 22 день после перевивки опухоли. Опухоль выделяли и определяли средний вес опухоли в каждой группе животных. Противоопухолевую активность препаратов определяли по индексу торможения роста опухоли. Индекс торможения в каждой группе вычисляли по формуле:

_т я _{T /o} / _{\ =} Cp. вес опухоли в гр. негативного контроля - ср. вес опухоли в группе

Cp. вес опухоли в группе негативного контроля

Для оценки токсичности регистрировали вес животного до начала введения веществ и сразу после окончания введения. Результаты представлены в таблице 13.

Таблица 13.

Противоопухолевая активность заявляемых соединений (при комбинированном лечении экспериментальной опухоли).

Из анализа данных, представленных в таблице 13, видно, что заявляемые соединения обладают гораздо более выраженным противоопухолевым действием, чем прототип, а токсические эффекты в группах, получавших заявляемые соединений (потеря массы тела) меньше. Выживаемость животных в группах, получавших заявляемые соединения, была значительно выше, чем в группе, получавшей прототип. При этом наблюдался эффект усиления противоопухолевой активности в ряду заявляемых солей параллельно с увеличением длины алифатического радикала заместителя у атома азота аминогруппы катиона (1- алкиламино -1-дeзoкcипoлиoлa).

ПРИМЕР 27. Противопаразитарная эффективность заявляемых соединений (на модели экспериментального описторхоза).

Эксперимент проведен на 60 золотистых хомяках (самцы весом 100 г), инвазированных реr оs по 50 метацеркарий О. fеliпеus. Начиная со вторых суток после инвазии в течение двух недель с интервалом 2 дня вводили заявляемые соединения в дозе 4 мг/кг веса (считая на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту) внутримышечно или , соответственно, прототип в той же дозе. Все вещества вводили в внутримышечно, растворенными в воде для инъекций (0,5 мл на животное). Негативным контролем служили животные с описторхозной инвазией (им вводился растворитель - вода для инъекций в том же объеме), а интактным контролем служили интактные здоровые золотистые хомяки. Функциональную активность нейтрофилов периферической крови оценивали по поглотительной способности в отношении латексных частиц диаметром 2,7 мкм (индекс Гамбургера - процент активных клеток, индекс Райта - средняя поглотительная способность отдельного нейтрофильного лейкоцита). Индикаторными показателями приживления метацеркарий О. fеliпеus считали количество яиц в одном грамме экскрементов животных и количество марит описторхисов в печени после декапитации золотистых хомяков. Результаты исследования представлены в таблице 14.

Таблица 14.

Противопаразитарная активность заявляемых соединений (на модели экспериментального описторхоза).

Из анализа данных видно, что заявляемые соединения обладают значительно большим влиянием на показатели фагоцитарной активности лейкоцитов и периферической крови, полностью угнетает приживляемость метацеркариев и, таким образом, обладают значительно более высокой противопаразитарной эффективностью, чем прототип.

ПРИМЕР 28. Противовоспалительная активность заявляемых соединений (на модели подавления воспалительной грануляции, вызванной подкожной имплантацией ватных шариков).

Использовались рандомбредные крысы линии Спрейг-Доули массой 160-220 г. Под анестезией кетаминбм (60 мг/кг внутрибрюшинно), два ватных шарика массой 30 мг каждый были имплантированы под кожу паховой области крыс. Заявляемые соединения или прототип, соответственно, вводились в водном растворе в дозе 20 мкмоль/кг веса тела животного (то есть 5 мг/кг, считая на остаток 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоты) в 1, 2, 5, 8 дни после имплантации. Контрольная группа получала растворитель (воду для инъекций) в объеме 0,25 мл в том же режиме. На 9 день животные были забиты эфирным наркозом, ватные шарики с окружающей гранулемой были выделены и высушены при 60 градусах Цельсия в течение 24 часов, а затем взвешены. Противовоспалительное действие оценивалось по способности заявляемых соединений или прототипа снижать массу грануляционной ткани и воспалительного инфильтрата по сравнению с таковыми в контрольной группе. Данные представлены в таблице 15.

Таблица 15.

Противовоспалительная активность заявляемых соединений

(на модели подавления воспалительной грануляции вызванной подкожной имплантацией ватных шариков).

Из данных таблицы видно, что заявляемый соединения обладают гораздо большей противовоспалительной и антисклеротической активностью, чем прототип.

ПРИМЕР 29. Радиопротективная и стресспротективная активность заявляемых соединений (на модели острой лучевой болезни, вызванной тотальным облучением).

Использовались крысы-самцах линии Вистар массой 210-230 г. Животные были распределены на 6 групп по 20 особей случайным образом. Заявляемые соединения (группа 1, 2, 3) или прототип (группа 4) вводили животным с помощью зонда в желудок в виде водных растворов, из расчета 1 ммоль/кг веса тела. Объем вводимых растворов составлял 0,2 мл на 100 г веса животного. Группе животных негативного контроля (негативный контроль - группа 5) внутрижелудочно вводили бидистиллированную воду того же объема, другая группа (интактный контроль - группа 6) также получала дистиллированную воду того же объема. Облучение осуществляли через 4 часа после введения препаратов тотально на рентгеновской

установке PУM-17 в дозе 6,5 Гр. Облучению подвергались все группы животных, кроме группы интактного контроля. Для оценки стресспротекторной активности соединений через 24 часа после облучения половину животных каждой группы взвешивали, проводили забой животных декапитацией, одновременно производили забор артериальной крови, тимуса, селезенки и надпочечников. Стресспротективную активность заявляемых соединений и прототипа, оценивали по динамике изменений относительных (по отношению к массе тела) масс селезенки, тимуса и надпочечников и отношению уровня кортизола сыворотки крови к уровню инсулина сыворотки крови (на 1-ые сутки после облучения). Для оценки радиопротективной активности соединений другую половину животных каждой группы забивали декапитацией на 7 день после облучения. Радиопротективную оценивали по динамике изменения показателей белой крови: абсолютному числу лейкоцитов, относительному количеству лимфоцитов и уровню гемоглобина (к 7-му дню). Результаты исследования представлены в таблице 16.

Таблица 16.

Радиопротективная и стресспротективная активность заявляемых соединений (на модели острой лучевой болезни, вызванной тотальным облучением).

Из данных таблицы 16 видно, что заявляемые соединения защищают организм от облучения как в отношении стрессорных изменений (инволюции лимфоидных тканей, и гормональных сдвигов), так и от повреждающего действия облучения на клетки крови и/или их продукцию, в гораздо большей степени, чем прототип. При этом наблюдается положительная связь между длиной алифатического радикала у атома азота катиона (1- алкиламино -1 -дезоксиполиола) в ряду заявляемых соединений и степенью их стресспротективной/радиопротек� �ивной активности. Таким образом, заявляемые соединения обладают гораздо большей радиопротективной и стресспротективной активностью, чем прототип.

ПРИМЕР 30. Иммуномодулирующая эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении иммунодефицита у больных с тяжелой ожоговой травмой).

Иммуномодулирующие свойства заявляемого лекарственного препарата изучены в клинике при лечении вторичных иммунодефицитов, обусловленных тяжелым ожогом. Под наблюдением находилась группа из 54 больных (23 женщины и 31 мужчина) с ожоговой болезнью с тяжелой степенью ожоговой травмы (площадь поражения 22% - 38% поверхности тела - индекс Франка от 73 до 126 ед.) в возрасте от 28 до 43 лет. На фоне традиционной интенсивной терапии (например, инфузионно-трансфузионной терапии, антибактериальной терапии, применения препаратов улучшающих микроциркуляцию и реологические качества крови парентерального и энтерального питания, энтеросорбции, операций некротомии и аутодермопластики) больным проводили лечение либо заявляемым лекарственным препаратом (группа 1), либо прототипом (группа 2), при этом пациенты распределялись по группам случайным образом. Пациенты обеих групп были сопоставимы по полу, возрасту и тяжести ожоговой травмы, видам и схемам проводимой традиционной терапии. Начиная с 4 суток после травмы, препараты вводили курсом по схеме 1, 2, 4, 6, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26 сутки по 250 - 500 мг (считая на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту) внутривенно болюсно 1 раз в сутки. Определяли абсолютное и относительное количество T - лимфоцитов

хелперов (Tx) ₅ T - лимфоцитов супрессоров (Tc) и отношение их количества (Тх/Тс). Вычисляли степень изменения этих показателей относительно нормы (средних показателей здоровых доноров). Исследование иммунного статуса проводили на 3 сутки от момента травмы (до начала лечения заявляемым лекарственным препаратом или прототипом) и на следующий день после окончания курса лечения препаратами. Данные представлены в таблице 17.

Таблица 17. Иммуномодулирующая эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении иммунодефицита у больных с тяжелой ожоговой травмой).

При анализе данных видно, что заявляемый лекарственный препарат обладает большей эффективностью, чем прототип при меньшем числе побочных эффектов.

ПРИМЕР 31. Противобактериальная (противохламидийная) и иммуномодулирующая (иммунокорригирующая) эффективность заявляемого лекарственного препарата (у женщин с хроническими воспалительными заболеваниями придатков матки хламидийной этиологии).

Исследование противохламидийной и иммуномодулирующей активности заявляемого лекарственного препарата проводилась у женщин с хроническими

воспалительными заболеваниями придатков матки хламидийной этиологии. Диагноз был верифицирован с помощью полимеразной цепной реакции (TTTlP)- Все женщины (45 человек) были случайным образом распределены в 3 группы по 15 человек в каждой. Первая группа получала базовую антибактериальную терапию (Б AT): офлоксацин по 200 мг 2 раза в день в течение 15 дней. Второй группе на фоне БАТ назначался заявляемый лекарственный препарат в разовой дозе 250 мг (в пересчете на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту), третья группа на фоне БАТ получала прототип в разовой (= суточной) дозе 250 мг (в пересчете на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту). Оба препарата вводились в виде внутримышечных инъекций на Ij 2, 4, 6, 8, 11, 14, 17, 20, 23 сутки курса (всего 10 инъекций). Эффективность проводимой терапии оценивалась по продолжительности заболевания, динамике клинических и лабораторных показателей, частоте рецидивов заболевания. Всем пациенткам после окончания лечения проводился лабораторный контроль излеченности с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Первый контроль - сразу после завершения лечения, а заключительное контрольное исследование (контроль этиологического излечения), проводилось в конце 2-го месяца после окончания лечения. Кроме того, исследовались иммунологические показатели, учитывая иммунодефицит, закономерно сопровождающий течение хламидийной инфекции. Как интегральный показатель антибактриальной фагоцитирующей активности клеточного звена иммунитета оценивался также средний показатель количества цитоплазматических гранул полиморфноядерных лейкоцитов (ПЯЛ) периферической крови, прямо отражающий их способность к перевариванию поглощенных хламидий. Данные, отражающие эффективность лечения в трех группах пациенток представлены в таблице 18.

Таблица 18.

Противобактериальная (противохламидийная) и иммуномодулирующая

(иммунокорригирующая) эффективность заявляемого лекарственного препарата (у женщин с хроническими воспалительными заболеваниями придатков матки хламидийной этиологии).

При анализе данных таблицы 18 видно, что заявляемый препарат более эффективен, чем прототип при меньшем числе побочных эффектов. При этом показатели иммунной защиты резко улучшились после проведенной терапии заявляемым лекарственным препаратом, и это улучшение выражено намного сильнее, чем при лечении прототипом.

ПРИМЕР 32. Противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении острого вирусного гепатита А).

Заявляемый лекарственный препарат применялся при лечении острого вирусного гепатита А. В исследование включили 20 человек. Пациенты включались в группу, получавшую заявляемый лекарственный препарат или, соответственно, прототип случайным образом: 9 в группе, получавших заявляемый лекарственный препарат и 11 в группе, получавшей прототип. Препараты назначались ежедневно курсом в 1, 2,4, 6, 8, 11, 14, 17, 20, 23 дни (всего 10 инъекций) в дозе 250 мг внутривенно один раз в день (в пересчете на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту) в режиме монотерапии. Эффективность терапии оценивалась по длительности периода желтухи, продолжительности периода спленомеrалии, гепатомегалии, длительности ферментемии (аланинаминотрансфераза), диспепсии. Статистически значимых различий перед началом лечения в распределении пациентов в группах по полу, возрасту, начальному уровню ферментов не наблюдалось. Результаты исследования представлены в таблице 19.

Таблица 19.

Противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении острого вирусного гепатита А).

При анализе данных, представленных в таблице, видно, что в группе лечившихся заявляемым лекарственным препаратом отмечалась более выраженная положительная динамика в отношении биохимических и клинических показателей, чем в группе

пациентов, получавших лечение прототипом. Таким образом, заявляемый препарат более эффективен при лечении острого вирусного гепатита А, чем прототип, при меньшем числе побочных эффектов.

ПРИМЕР 33. Противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении острого вирусного гепатита В).

Заявляемый лекарственный препарат применялся при лечении острого вирусного гепатита В. Диагноз вирусного гератита верифицировался с помощью полимеразной цепной реакции (обнаружение ДНК HBV). Всего в исследование включили 45 человек. Пациенты включались в группу, получавшую заявляемый лекарственный препарат или, соответственно, прототип случайным образом: 24 в группе пациентов, получавших завявляемое лекарственное средство и 21 в группе, получавшей прототип. Препараты назначались ежедневно курсом в 1, 2, 4, 6, 8, 11,14, 17, 20 , 23, 26, 29 дни в дозе 250 или 500 мг внутримышечно (в пересчете на 9-oкcoaкρидин-10- уксусную кислоту). Кроме терапии исследуемыми препаратами все пациенты получали одинаковое базовое лечение: дезинтоксикационную (гемодез) и витаминотерпию. Эффективность лечения оценивалась по длительности интоксикации, срокам нормализации размеров печени и биохимическим и серологическим показателям: длительности гипербилирубинемии и гилерферментемии, срокам исчезновения из сыворотки крови HBsAg и появления антител к HBeAg. Серологические маркеры в динамике (антигены: HBsAg, HBeAg; и антитела: апti-НВсоr IgM, апti - НВсоr - суммарные, апti-НВsАg, апti-НВеАg) определяли иммуноферментным методом. Не наблюдалось статистически значимых различий между группами в распределении пациентов по уровню ферментов, маркеров и вирусной нагрузке перед началом лечения, а также по получаемой суточной дозе препарата (250 мг или 500 мг), полу и возрасту,. Результаты исследования представлены в таблице 20.

Таблица 20.

Противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении острого вирусного гепатита В).

В группе, лечившихся заявляемым лекарственным препаратом отмечалась более выраженная положительная динамика в отношении маркеров вируса гепатита В, желтушный период и период цитолиза был значительно короче, чем в группе пациентов, получавших лечение прототипом. Кроме того, при исследовании больных через 2,5 месяца в группе, получавших заявляемый лекарственный препарат, не выявлено лиц, несущих в крови HBsAg, а группе, получавших прототип, такие больные выявлялись, что говорит о том, что заявляемый лекарственный препарат, в отличие от прототипа, предотвращает хронизацию вирусной инфекции. Таким образом, заявляемый лекарственный препарат более эффективен при лечении острого вирусного гепатита B ₅ чем прототип, при меньшем числе побочных эффектов, и, в отличие от прототипа, заявляемый лекарственный препарат предотвращает хронизацию вирусной инфекции.

ПРИМЕР 34. Противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препрарата (при лечении острого вирусного гепатита С).

Заявляемый лекарственный препарат применялся при лечении острого вирусного гепатита С. Диагноз вирусного гепатита С верифицировался с помощью полимеразной цепной реакции. Эффективность терапии оценивалась по изменению доли пациентов с различным уровнем РНК вируса в крови (высокий, средний и низкий уровень, полное отсутствие) и доли пациентов с различный уровнем сывороточной аланинаминтрансферазы (AJIT): более 7- ми верхних границ нормы (ВГН) и выше от 3 до 7 ВГН, от 2 -до 3 ВГН, более 1 но менее 2 ВГН, отl и менее ВГН. Всего в исследование включили 42 человека. Пациенты включались в группу, получавшую заявляемый лекарственный препарат или, соответственно, прототип случайным образом. Препараты назначались 1 раз в день курсом в 1, 2, 4, 6, 8, 11,14, 17, 20, 23, 26 дни (11 инъекций) в дозе 250 или 500 мг внутримышечно (в пересчете на 9- oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту). Кроме терапии сравниваемыми препаратами все пациенты получали базовое лечение гепатопротекторами в одинаковой дозе (фосфолив). За день до начала лечения и на следующий день после окончания курса у больных определяли уровень AJIT и число копий вируса в крови. Статистически значимых различий между группами перед началом лечения в распределении пациентов по получаемой суточной дозе препарата (250 мг или 500 мг), по полу, возрасту, уровню AJIT, вирусной нагрузке, длительности заболевания и генотипу вируса («lb - гeнoтип» и «нe 1 b гeнoтип») не было. Результаты исследования представлены в таблице 21.

Таблица 21.

Противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении острого вирусного гепатита С).

* ВГН - верхняя граница нормы соответствующего показателя.

Из анализа данных таблицы 21 видно, что заявляемый лекарственный препарат более эффективен при лечении острого вирусного гепатита С, чем прототип, при меньшем числе побочных эффектов.

ПРИМЕР 35. Противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении ВИЧ - инфекции).

Заявляемый лекарственный препарат применялся при лечении ВИЧ инфекции (стадии 2A-ЗB). Диагноз ВИЧ - инфекции верифицировался по наличию антител к ВИЧ, и полимеразной цепной реакции. Заявляемый лекарственный препарат или прототип, соответственно, назначались в виде таблеток по 0,15 г (в пересчете на 9- oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту), покрытых кишечно-растворимой оболочкой. Больные принимали по четыре таблетки одномоментно (то есть 0,6 г на прием в пересчете на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту) перорально один раз в сутки на 1, 2, 4, 6, 8, 11, 14, 17, 20, 23 день лечения и далее те же 4 таблетки один раз в три-пять дней в течение 2,5 месяцев. Пациенты включались в группу, получавшую заявляемый лекарственный препарат или, соответственно, прототип случайным образом. Всего пролечено 60 пациентов (30 в группе, получавшей заявляемый лекарственный препарат и 30 в группе, получавшей прототип). За неделю до начала лечения и через неделю после окончания курса у больных определялось число копий вируса в крови. Эффективность терапии оценивалась изменению доли пациентов в соответствующей группе с различным числом копий вируса (до l x l0 ⁴ ; oт l x l0 до З х lО ; oт З х lО ⁴ до 1 х 10 ⁵ ; выше l x l0 ⁵ ) в l мл сыворотки крови до и после лечения. Статистически значимых различий перед началом лечения в распределении пациентов между группами по полу, возрасту, вирусной нагрузке, длительности заболевания и стадии ВИЧ не отмечено. Результаты исследования представлены в таблице 22.

Таблица 22.

Противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении

ВИЧ — инфекции).

Из анализа данных таблицы 22 видно, что заявляемый лекарственный препарат более эффективен при лечении ВИЧ и профилактике ВИЧ - ассоциированных инфекций, чем прототип, при меньшем числе побочных эффектов.

ПРИМЕР 36. Противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении рецидивирующего генитального герпеса).

В исследование было включено 51 больных (22 мужчины и 29 женщин в возрасте от 24 до 45 лет) рецидивирующим генитальным герпесом, со средним показателем продолжительности ремиссии 1,5-2 месяца, частотой рецидивов 6 и более раз в год. Длительность рецидивов до лечения составляла 8-10 дней. Все пациенты прошли обследование, включавшее осмотр, идентификацию вируса простого герпеса 1-го и 2-го типа методом полимеразно-цепной реакции (ПНР) из отделяемого урогенитального тракта и очагов на месте высыпаний. До поступления на лечение у наблюдаемых больных были исключены другие заболевания передаваемые половым путем; сифилис, гонорея, трихомониаз, хламидиоз, микоплазмоз, урогенитальный кандидоз. Все пациенты случайным образом распределялись в две группы: 1 - я группа получала заявляемый лекарственный препарат, а 2 - я группа получала прототип. Оба лекарства вводились курсом, внутримышечно один раз в сутки в дозе 250 мг (считая на 9- oкcoaкpидин-10- уксусной кислоту), в дни: I ₃ 2, 4, 6 , 8 , 11, 14, 17, 20, 23 (всего 10 инъекций на курс). Лечение проводили в режиме монотерапии, начиная с первого дня очередного обострения. После проведенного курса лечения больные наблюдались в амбулаторных условиях в течение 6 месяцев. Критериями эффективности лечения в каждой группе служили изменение долей пациентов с различной длительностью и частотой рецидивов. Статистически значимых различий между группами перед началом лечения в распределении пациентов по полу, возрасту, частоте и длительности рецидивов не было. В таблице 23 представлены результаты исследования противовирусной эффективности заявляемого лекарственного препарата

Таблица 23

Противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении рецидивирующего генитального герпеса).

* В числителе - абсолютное число пациентов, в знаменателе - процент от общего числа.

Из результатов исследования, представленных в таблице 23, видно, что после лечения, проведенного заявляемым лекарственным препаратом, длительность рецидивов значительно сократилась, а межрецидивный период увеличился. При этом прототип оказал намного меньшее влияние на продолжительности рецидивов, а на частоту рецидивов прототип не оказал никакого влияния. Кроме того, при лечении заявляемым лекарственным препаратом с первого дня лечения наблюдалось выраженное снижение воспалительных проявлений, а число побочных эффектов было меньше, чем при лечении прототипом. Таким образом, заявляемый лекарственный препарат обладает большей противовирусной эффективностью при лечении рецидивирующего генитального герпеса.

ПРИМЕР 37. Противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при местном лечении орофациального герпеса).

В исследование было включено 74 больных (35 мужчин и 39 женщин) в возрасте от 18 до 55 лет с орофациальным герпесом. Диагноз герпетической инфекции устанавливали на основе типичной клинической картины, и верифицировали на основании положительной динамики нарастания титров антител к вирусу простого герпеса при исследовании в парных сывороток иммуноферментным методом. Все пациенты случайным образом распределяли в две группы; 1 - я группа получала заявляемый лекарственный препарат, а 2 — я группа получала прототип. Оба лекарства применяли в виде местной аппликации 5 мac.% (считая на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту) линимента. Препараты начинали наносить каждый раз сразу при начальных проявлениях рецидива герпеса (зуд) и продолжали наносить (5 раз в день) до окончания кожных проявления (корки) процессе каждого рецидива. Длительность лечения (наблюдения) составляла 6 месяцев. Критериями эффективности служили длительность рецидива орофациального герпеса, динамика числа элементов сыпи, динамика продолжительности периодов болезненности, зуда, жжения, отека и гиперемии. Статистически значимых различий между группами перед началом лечения в распределении пациентов по полу, возрасту, частоте и длительности рецидивов орофациального герпеса не было. В таблице 24 представлены результаты исследования противовирусной эффективности заявляемого лекарственного препарата.

Таблица 24

Противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при местном лечении орофациального герпеса).

*B числителе - показатель до лечения, в знаменателе показатель после лечения

Из результатов исследования, представленных в таблице 24, видно, что при лечении, проведенном заявляемым лекарственным препаратом, длительность рецидивов значительно ниже, а период болезненности, зуда, жжения, отека и гиперемии значительно короче, чем при лечении протипом. Кроме того, при анализе частоты рецидивов (числа рецидивов в год) при лечении заявляемым лекарственным препаратом была обнаружена тенденция к сокращению частоты рецидивов (с 7,2 до 6,8 в год), В группе лечившихся прототипом такого эффекта не наблюдали. Таким образом, заявляемый препарат более эффективен при лечении орофациального герпеса, чем прототип.

05

ПРИМЕР 38. Противовирусная эффектитвность заявляемого лекарственного препарата (при лечении инфекционного мононуклеоза).

В исследование было включено 44 пациентов, из них 30 мужчин и 14 женщин в возрасте от 18 до 24 лет с типичной клинической картиной заболевания (лихорадка, тонзиллит, аденопатия, увеличение селезенки и печени, сыпь), подтвержденной лабораторными (абсолютный лимфоцитоз с наличием атипических форм) и серологическими исследованиями (положительный тест на инфекционный мононуклеоз). Пациенты были случайным образом распределены в 2 группы: 22 пациента получали заявляемый лекарственный препарат и 22 пациента получали прототип в внутримышечно в одинаковой разовой (=cyтoчнoй) дозе 250 мг (в пересчете на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту) по схеме 1, 2, 4, 6, 8, 11, 14 дни. Эффективность терапии оценивалась по продолжительности периодов лихорадки, тонзиллита, аденопатии, спленомегалии, гепатомегалии. Не было различий между группами в распределении по возрасту полу, степени тяжести симптомов заболевания. Результаты исследования представлены в таблице 25.

Таблица 25

Противовирусная и иммуномодулирующая эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении инфекционного мононуклеоза).

Из анализа данных видно, что в группе пациентов, пролеченных заявляемым лекрственным средством продолжительность периода регистрации патологических симптомов гораздо короче, чем в группе пациентов, лечившихся прототипом. Таким образом, заявляемый лекарственный препарат имеет значительно более высокую эффективность, чем прототип, при меньшем числе побочных эффектов при лечении инфекционного мононуклеоза.

ПРИМЕР 39. Противомикробная и иммуномодулирующая эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении гнойных заболеваний).

В исследование было включено 16 пациентов, из них 10 мужчин и 6 женщин в возрасте от 34 до 55 лет с диагнозом флегмоны челюстно-лицевой области. Пациенты были случайным образом распределены в 2 группы. Обе группы пациентов получали стандартную антибактериальную терапию в течении 5 суток (цефотаксим, 3 грамма в сутки внутримышечно, разделенные на 4 введения). 8 пациентов получали прототип (группа 1) и 8 пациентов получали заявляемый лекарственный препарат. Препараты применялись перорально в виде таблеток, покрытых кишечнорастворимой оболочкой в одинаковой разовой (=cyтoчнoй) дозе 600 мг ( 4 таблетки 0,15 г в пересчете на 9- oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту) по схеме 1, 2, 4, 6, 8, 11, 14 дни. Не было различий между группами в распределении по возрасту полу, степени тяжести симптомов заболевания. Результаты исследования представлены в таблице 26.

Таблица 26

Противомикробная и иммуномодулирующая (иммунокоррегирующая) эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении гнойных заболеваний).

Из анализа данных видно, что заявляемый лекарственный препарат имеет значительно боле высокую эффективность, чем прототип, при меньшем числе побочных эффектов, оказывает более выраженное противомикробное и иммунокоррегирующее (иммуномодулирующее) действие при иммунодефиците, связанном с инфекцией, а также предотвращает появление резистентных штаммов микроорганизмов.

ПРИМЕР 40. Противогрибковая эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении онихомикоза).

Заявляемый лекарственный препарат применялся при лечении онихомикоза кистей и стоп. Всего в исследование включили 42 пациента в возрасте от 24 до 72 лет с длительностью заболевания более 1,5 лет. У 8 пациентов наблюдалось дистальное поражение кистей, у 4 - проксимальное, у 21 - дистальный онихомикоз стоп, у 9 - белый онихомикоз стоп. Пациенты включались в группу, получавшую заявляемый лекарственный препарат или, соответственно, прототип случайным образом: 22 в группе пациентов, получавших заявляемый лекарственный препарат и 20 в группе, получавшей прототип. Оба лекарства назначались в качестве монотерапии ежедневно курсом в 1, 2, 4, 6, 8, 11, 14, 17, 20, 23-й дни в дозе 250 мг внутримышечно (в пересчете на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту). В отдельных случаях при выраженном онихомикозе дополнительно назначались аппликации линиментов на пораженные участки (5 мacc.%, считая на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту) заявляемого лекарственного препарата или, соответственно, прототипа, в соответствующих группах пациентов. Препараты апплицировали на пораженную поверхность дважды в день в течение 1-20 дней курса лечения. Через 10 дней после последней инъекции курс повторяли. Сразу после окончания второго курса оценивали результат лечения (путем прямой микроскопии соскобов). Значимых различий между группами в распределении пациентов по полу, возрасту, длительности заболевания и режиме терапии не было. Результаты исследования представлены в таблице 27.

Таблица 27

Противогрибковая эффективность заявляемого лекарственного препарата

(при лечении онихомикоза).

*B числителе общее количество пациентов в подгруппе, в знаменателе - количество излечившихся, в скобках процент излечения.

Из данных таблицы следует, что при лечении грибковых поражений всех локализаций заявляемый препарат эффективнее, чем прототип, при меньшем числе побочных эффектов. Таким образом, заявляемый препарат более эффективен при лечении грибковых заболеваний, чем прототип, при меньшем числе побочных эффектов.

ПРИМЕР 41. Противоревматическая и противовоспалительная активность заявляемого лекарственного препарата (при лечении ревматоидного артрита).

Противоревматическую и противовоспалительную активность заявляемого лекарственного препарата исследовали при лечении ревматоидного артрита (PA). Лечение было проведено 46 больным PA в возрасте от 22 до 54 лет. Длительность заболевания составляла от 12 до 45 месяцев. У всех больных наблюдалась активная фаза болезни: с I степенью - 20 больных, со II степенью - 23, с III степенью - 3 пациента. Рентгенологическая стадия поражения PA суставов I степени наблюдалось у 21 больных, II степени - у 17, III степени - у 8. Ревматоидный фактор обнаруживался у

половины больных. У большинства больных (86,4 %) наблюдалась преимущественно суставная форма с локальными экссудативными или экссудативно-пролиферативными изменениями. После периода отмывки (3 дня) все пациенты случайным образом были распределены в две группы. Первая группа (23 человека) получала заявляемый лекарственной препарат в разовой (суточной) дозе 250 мг (считая на 9-oкcoaкpидин-10- уксусной кислоту) 4-мя курсами с интервалом между курсами 14 дней (1 курс представлял собой 5 внутримышечных инъекций по 1 разу в день в 1, 2, 4, 6, 8-й дни). Вторая группа (23 человека) получала прототип в той лее дозе (считая на 9- oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту) и режиме введения. Эффективность проводимой терапии оценивали на основании динамики длительности утренней скованности, числу воспаленных суставов, выраженности болей по визуально-аналоговой шкале боли (VAS). Заявляемый лекарственный препарат уменьшал выраженность субъективных и объективных симптомов воспаления в суставах: достоверно снижались интенсивность боли, число воспаленных суставов, скорость оседания эритроцитов и уровень ревматоидного фактора в крови. Прототип оказывал более слабое действие на указанные параметры. Результаты исследования представлены в таблице 28.

Таблица 28

Противоревматическая и противовоспалительная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении ревматоидного артрита).

Таким образом, заявляемый лекарственный препарат обладает более выраженным противоревматическим и противовоспалительным действием, чем прототип, при меньшем числе побочных эффектов.

ПРИМЕР 42. Противодистрофическая и противовоспалительная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении остеоартроза коленного сустава).

Эффективность заявляемого лекарственного препарата при дегенеративно- дистрофическом поражении суставов была продемонстрирована при остеоартрозе (OA) коленного сустава. В исследование включались лица в возрасте от 45 до 65 лет с верифицированным диагнозом одностороннего первичного (идиопатического) OA коленного сустава или OA посттравматической этиологии с II стадией OA по Кеllgrеп и Lаwrепсе. Все пациенты (42 человека) были случайным образом распределены в две группы (по 21 человеку в каждой). Перед началом терапии в течение 2 недель все пациенты не получали никаких средств специфического лечения OA, в том числе нестероидных противовоспалительных препаратов (период отмывки). Затем все пациенты были обследованы по визуально-аналоговой шкале боли (VAS) и шкале функциональной активности коленного сустава Клее iпjurу апd Оstеоаrthritis Оutсоmе Зсоrе (KOOS). Пациенты обеих групп имели сходные показатели степени ϊыраженности клинических проявлений и тяжести течения OA коленного сустава. Заявляемый лекарственный препарат либо прототип, соответственно, назначали iациентам в разовой дозе 250 мг (считая на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту) в шде внутримышечных инъекций 2-мя курсами из 5 инъекций на 1,2,4,6,8 день с iерерывом 14 дней между курсами. Обе группы получали в качестве базисной .ондропротективной терапии также препарат хондроитин сульфат (структум) в уточной дозе 1000 мг по 1 таблетке 500 мг 2 раза в день. Эффективность терапии щенивалась по проценту пациентов, «oтвeтившиx» на терапию. «Oтвeтoм» на лечение :читaли снижение балла по шкале KOOS на 20 или более баллов и/или снижение ιценки по шкале VAS на 2 см и более к окончанию курса лечения. Результаты ссследования представлены в таблице 29.

Таблица 29

Противодистрофическая и противовоспалительная эффективность заявляемого лекарственного средства (при лечении остеоартроза коленного сустава).

Из данных таблицы 29 видно, что симптомы воспаления коленного сустава, боли и двигательные нарушения гораздо менее выражены в группе, лечившихся заявляемым лекарственным препаратом, доля «oтвeтившиx» пациентов выше, нежели чем в группе, получавшей прототип. Таким образом, заявляемый лекарственный препарат гораздо эффективнее прототипа при лечении дегенеративно - дистрофической патологии суставов, при меньшем числе побочных эффектов.

ПРИМЕР 43. Противовоспалительная, иммунокоррегирующая и антибактериальная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении хронического неспецифического простатита).

Заявляемый лекарственный препарат применялся при лечении хронического неспецифического простатита. В исследование включили 60 человек мужского пола в возрасте 22 - 64 года, страдающих хроническим неспецифическим простатитом в торпидной фазе, а также в фазе латентного воспаления. Диагноз верифицировался на основании бактериологического исследования, клинико-лабораторных показателей и данных ультразвукового исследования. Пациенты включались в группу, получавшую

заявляемый лекарственный препарат или, соответственно, прототип случайным образом: 32 пациента в группе, получавшей заявляемый лекарственный препарат и 28 пациентов в группе, получавшей прототип. Препараты назначались ежедневно курсом в 1, 2, 4, 6, 8, 14, 17, 20, 23 дни в дозе 250 мг (в пересчете на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту) 1 раз в день в виде суппозиториев ректально в режиме монотерапии. Эффективность терапии оценивалась на 15 день от начала лечения по динамике индекса по шкале симптомов хронического простатита Национального института здоровья США (NIH-CPSI), а также изменению доли пациентов с бактериурией. Оценивались также иммунологические показатели до и после лечения: динамика в сыворотке крови и секрете предстательной железы уровня провоспалительных цитокинов - фактора некроза опухолей-альфа (ФНО-альфа), интерлейкина - 1-бeтa (ИЛ- 1 -бета), йнтерлейкина -6 (ИЛ-6) и противовоспалительного цитокина - интерлейкина 4 (ИЛ-4). Уровень цитокинов определяли методом ELISA. Также определялась фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови до и после лечения, а именно процент фагоцитоза (ПФ) и фагоцитарное число (ФЧ). . В соответствии со степенью нормализации показателей эффект терапии для каждого пациента оценивался как «oтличный» - снижение индекса NIH-CPSI более чем в 3 раза, «xopoший»- снижение индекса NIH-CPSI от 2 до 3 раз, «yдoвлeтвopитeльный» - снижение индекса NIH-CPSI от 1,5 до 2 раз или «нeт эффeктa»- снижение индекса NIH- CPSI до 1,5 раз. Значимых различий между группами перед началом лечения в распределении пациентов по индексу NIH-CPSI, полу, возрасту, наличию бактерий в моче не наблюдалось. Результаты исследования представлены в таблице 30.

Таблица 30

Противовоспалительная, иммунокоррегирующая и антибактериальная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении хронического неспецифического

^" простатита).

* Для лабораторных показателей указаны средние значения

В группе лечившихся заявляемым лекарственным препаратом отмечалась более выраженная положительная динамика клинических показателей в отличие от группы пациентов, получавших лечение прототипом. При этом уровень провоспалительных цитокинов как в крови, так и в секрете простаты снизился, а противовоспалительных, напротив, стал выше, и указанная динамика была более выражена в группе пациентов, получавших лечение заявляемым лекарственным препаратом, чем в группе получавших лечение прототипом. У 82 % от всех пациентов, в группе, получавших заявляемый лекарственный препарат, отмечено исчезновение возбудителя из мочи, тогда как в группе пациентов, получавших прототип, это отмечалось только у 30%. Таким образом, заявляемый лекарственный препарат обладает большим противовоспалительным, иммунокорригирующим и противобактериальным эффектом, чем прототип и более эффективен при лечении простатита, чем прототип, при меньшем числе побочных эффектов.

ПРИМЕР 44. Противоопухолевая эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении неходжкинских лимфом).

Заявляемый лекарственный препарат применялся при комплексном лечении неходжкинских лимфом в сравнении с прототипом. Всего в исследование включили 54 человека в возрасте от 36 до 80 лет с морфологически верифицированным диагнозом и промежуточной степенью злокачественности. Пациенты включались в группу, получавшую заявляемое лекарственное средство или, соответственно, прототип случайным образом: 27 в группе, получавших заявляемый лекарственный препарат и 27 в группе, получавшей прототип. Препараты назначались ежедневно курсом в 1, 2, 4, 6, 8, 11, 14, 17 дни в дозе 500 мг внутримышечно (в пересчете на 9-oкcoaкpидин-10- уксусную кислоту). Кроме того, обе группы пациентов получали базисную индукционную полихимиотерпию (ПХТ) по схеме АЦОП (циклофосфан - 750 мг/ м ² в/в в 1-й день, винкристин - 1,4 мг/ м ² в/в в 1-й день, адриамицин - 50 мг/м ² в/в в 1-й день, преднизолон - 60 мг/ м ² в сутки внутрь с 1-го по 5-й день курса). Интервал между курсами ПХТ составлял 21 день. Лечение состояло из 6-8 курсов химиотерапии. Затем больные получали облучение зон, вовлеченных в процесс в суммарной очаговой дозе 30 — 50 Гр. Оценка ответа на ^" терапию проводилась согласно рекомендациям «International Wоrkiпg Grоuр tо Stапdаrdizе Rеsропsе Сritеriа fоr Nоп-Ноgkiп's Lуmрhоmаs, 1999». Различий между группами в распределении больных по полу,

возрасту, общему статусу по шкале ECOG, доли пациентов с экстранодальными поражениями и стадии заболевания не было. Результаты исследования представлены в таблице 31.

Таблица 31

Противоопухолевая эффективность заявляемого лекарственного препарата (при лечении неходжкинских лимфом)

*B скобках — процент от общего числа пациентов в группе.

Из представленных данных видно, что в группе пациентов, получавших заявляемый лекарственный средство доля лиц с полным ответом на терапию выше, чем в группе больных, получавших прототип, а доля лиц, не ответивших на лечение, меньше. Число побочных эффектов (аллергические проявления) были меньше в группе, получавших заявляемый препарат, чем в группе, получавшей прототип. Таким образом, заявляемый лекарственный препарат более эффективен при лечении опухолей, чем прототип, при меньшем числе побочных эффектов.

ПРИМЕР 45. Профилактическая противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при профилактике острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) или гриппа).

Профилактическая эффективность заявляемого лекарственного препарата в сравнении с протипом оценивалась по частоте заболеваний гриппом или ОРВИ в группе лиц, получавших соответственно заявляемый лекарственный препарат или прототип с группой лиц, не получавших никаких лекарств в эпидемический сезон. Заявляемый лекарственный препарат или прототип, соответственно, назначали

перорально в виде таблеток по 0,15 г (считая на 9-oкcoaкpидин -10- уксусную кислоту) на 1, 2, 4, 6, 8 дни и далее еще пять приемов с интервалом 72 часа. Детям в возрасте 4-6 лет назначали по одной таблетке, в возрасте 7-11 лет - по 1 или 2 таблетки, старше 12 - по 3 или 4 таблетки на прием один раз в сутки, взрослым - от 1 до 4 таблеток (т.е., например, разовая доза может составлять около 0,5 мг/кг). Распределение по возрасту, полу разовой и курсовой дозе во всех группах было сходным. Данные по исследованию представлены в таблице 32.

Таблица 32

Профилактическая противовирусная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при профилактике острых респираторных вирусных инфекций и гриппа).

Анализ данных показал, что в эпидемический сезон заболеваемость гриппом и ОРВИ среди лиц, не получавших никаких средств профилактики была высокой (72,7 %). Заболеваемость в группе, получавших прототип была ниже (64,3%). В группе, получавших заявляемый лекарственный препарат заболеваемость гриппом или ОРЗ составила всего 18,3%. При профилактическом назначении заявляемого лекарственного препарата какие-либо необычные общие и местные реакции и осложнения отсутствовали, а при приеме прототипа у 4 больных после наблюдали повышение температуры (3 человека) и крапивницу (1 человек). Таким образом, заявляемый лекарственный препарат обладает гораздо большей профилактической эффективностью в отношении вирусных инфекций, чем прототип и при этом при меньшем числе нежелательных явлений.

ПРИМЕР 46. Профилактическая противогрибковая эффективность заявляемого лекарственного препарата (при профилактике грибковых инфекций).

Для исследования профилактической противогрибковой эффективности заявляемого лекарственного препарата в сравнении с прототипом проведено исследование у больных, находящихся на лечении в отделениях интенсивной терапии (всего 60 человек) с длительностью пребывания в отделении интенсивной терапии не менее 7 дней. В исследование включались больные высокого риска развития грибковой инфекции с любым из следующих состояний (или их сочетанием): перфорация кишечника, несостоятельность анастомозов пищеварительного тракта, вторичный распространенный перитонит, хирургические вмешательства на поджелудочной железе, панкреонекроз, состояние после спленэктомии, продолжительная (более недели) искусственная вентиляция легких, продолжитель продолжительное (более недели) парентеральное питание, полиорганная недостаточность (дисфункция более двух систем), иммунокомпрометированные состояния (например, длительная кортикостероидная терапия). Пациенты распределялись случайным образом в две группы, одна группа получала прототип, а другая заявляемый лекарственный препарат. Критериями развития грибковой служил любой из следующих: кандидурия, однократное выделение Сапdidа из крови, выделение Сапdidа из любой стерильной анатомической зоны (кроме мочи), микроскопическая идентификация грибов из любого биологического материала. Заявляемый лекарственный препарат либо прототип, соответственно, применялись перорально. Препараты применялись в виде таблеток, покрытых кишечнорастворимой оболочкой, или парентерально (внутримышечно) в дозе 3-10 мг/кг массы тела (считая на остаток 9-oкcoaкpидин -10- уксусной кислоты) курсом один раз в сутки на 1, 2, 4, 6, 8, 11 дни курса терапии. Специфических противогрибковых препаратов пациенты не получали. Оценивалась частота развития грибковой инфекции. Данные представлены в таблице 32.

Таблица 32

Профилактическая противогрибковая эффективность заявляемого лекарственного препарата (при профилактике грибковых инфекций)

Из анализа таблицы 32 видно, что частота развития инфекции, вызванной грибками в группе пациентов, получавших заявляемый лекарственный препарат, была значимо ниже, чем в группе, получавшей прототип.

ПРИМЕР 47. Профилактическая противомикробная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при профилактике гнойно-воспалительных процессов).

Исследование профилактической противомикробной эффективности заявляемого лекарственного препарата в сравнении с прототипом проведено у больных с переломом нижней челюсти, обратившихся за медицинской помощью в поздние (4-6 суток) сроки от начала заболевания. Больным проводилось классическое ортопедическое лечение с репозицией и шинированием. Пациенты распределялись в две группы случайным образом. Одной группе сразу при поступлении в стационар назначался заявляемый лекарственный препарат, а другой группе больных назначался прототип в той же дозе: 8 мг/кг массы тела (считая на 9-oкcoaкρидин -10- уксусную кислоту) внутривенно однократно. Специфических противомикробных препаратов пациенты не получали. После операции оценивалась частота развития гнойных осложнений (в том числе гингивитов и остеомиелитов). Данные представлены в таблице 33.

Таблица 33

Профилактическая противомикробная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при профилактике гнойно-воспалительных процессов)

Из данных таблицы 33 видно, что частота развития гнойной микробной инфекции в группе пациентов, получавших заявляемый лекарственный препарат была значительно ниже, чем в группе, получавшей прототип.

ПРИМЕР 48. Лечебная и профилактическая противопаразитарная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при энтеробиозе)

В исследование включено 42 ребенка в возрасте от 7 до 13 лет с энтеробиозом, выявленным микроскопически методом M. С. HaIl путем перианального соскоба с помощью кусочка целлофана, который затем подвергали микроскопии с целью обнаружения и идентификации яиц Епtеrоbius (Охуuris) vеrmiсulаris. Материал отбирали и исследовали трехкратно с интервалом в 1 день. Среди инвазированных клинические проявления были отмечены у 10 детей в виде перианального зуда (5 чел.), гиперемии перианальных складок (1 чел.), снижение аппетита (1 чел.). У 12 детей инвазия протекала на неблагоприятном фоне (упорное течение энтеробиоза, неблагополучный акушерско-гинекологический анамнез, перинатальные поражения центральной нервной системы, частые острые респираторные заболевания). Случайной выборкой из 44 человек с моноинвазией сформировали 2 группы. В 1 - ой группе (20 человек), в том числе 11 мальчик и 9 девочек - принимали заявляемый лекарственный препарат в один прием, через час после завтрака в виде таблеток, покрытых кишечно- растворимой оболочкой по 0,15 г (в пересчете на 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнyюкиcлoтy) не разжевывая. Суточная доза (=paзoвaя доза) составляла 0,3 г (=2 таблетки) для детей от 7 до 10 лет или 0,6 г (=4 таблетки) для детей старше 10 лет (т.е., например, при массе тела 10 кг, разовая доза составляла до 30 мг/кг). Во 2 группе (22 человека) в том числе 10 мальчик и 12 девочек - принимали прототип в один прием через час после завтрака в виде таблеток, покрытых кишечно-растворимой оболочкой по 0,15 г (в

пересчете на 9-oкcoaкpидин-10-yкcycнyюкиcлoтy) не разжевывая. Суточная доза (=paзoвaя доза) составляла 0,3 г (=2 таблетки) для детей от 7 до 10 лет или 0,6 г (=4 таблетки) для детей старше 10 лет. Различий между группами по распределению детей по возрасту, полу, отягощенности анамнеза не было. Эффективность проводимой терапии определяли путем девяти контрольных исследований кала на наличие яиц глистов по методике А. Дэвис (Dаvis, А., Dгаg Тrеаtmепt iп Iпtеstiпаl Неlmiпthiаsis, WHO, 1973.) на 8-14-й (ранняя терапевтическая эффективность) 16-21-я (поздняя терапевтическая эффективность) и 50-57-й (отдаленная терапевтическая эффективность) после курса лечения трехкратно с интервалами 1-2 дня. Эпидемиологический (профилактический) эффект лечения оценивался по частоте реинвазии (повторного заражения), которую определяли как процент вновь инвазированных от числа выздоровевших детей. Результаты исследования представлены в таблице 34.

Таблица 34

Лечебная и профилактическая противопаразитарная эффективность заявляемого лекарственного препарата (при энтеробиозе).

* В числителе — абсолютное число пациентов, в знаменателе процент от общего количества в группе.

Из анализа данных таблицы 34 видно, что заявляемый лекарственный препарат обладает гораздо более выраженной противопаразитарной эффективностью, чем прототип, как при лечении паразитарной инвазии, так и при профилактике повторного заражения паразитами.

ПРИМЕР 49. Клиническая эффективность заявляемого лекарственного препарата при профилактике гематологической и других видов токсичности, вызываемой химиотерапией.

В исследовании включили 62 пациента (34 мужчины и 28 женщин) с ϊерифицированным диагнозом немелкоклеточного рака легкого легких Шб - ГVб стадии (T2N1M0-TЗN2M1). У всех больных, на момент включения в исследование, амелись клинические, рентгенологические и лабораторные признаки прогрессирования ϊаболевания. Все пациенты случайным образом распределили по трем группам: 1-я группа (21 человек) получала до и во время курсов полихимиотерапии (ПХТ ) заявляемое лекарственное средство, 2 - я группа (21 человек) получала до и во время курсов ПХТ прототип, 3- группа (20 человек) получала только ПХТ. Курсы ПХТ проводились по схеме: цисплатин внутривенно в дозе 80 мг/м на 4 день курса, этопозид по внутривенно в дозе 100 мг/м ² с 1 по 3 день, нитруллин внутривенно в дозе 300 мг/м ² на 5 день курса. Все больные получили по 3 курса ПХТ. Применение обеих препаратов (заявляемого лекарственного препарата или прототипа, соответственно) начинали за 7 дней до проведения очередного курса ПХТ, препараты вводили внутривенно один раз в день через день болюсом в суточной дозе 10 мг/кг массы тела пациента до окончания курса ПХТ. Спавнительная оценка эффективности применения заявляемого лекарственного препарата в качестве средства профилактики гематологических и других видов токсических эффектов, вызываемых ПХТ, проводилась на основании анализа доли пациентов в каждой группе с зарегистрированными токсическими эффектами ПХТ. Степень токсичности определялась на основании критериев токсичности ВОЗ. Группы пациентов были однородны по возрасту, полу, стадии заболевания, распространенности процесса, индексам по шкалам Карновского и ECOG. Результаты исследования представлены в таблице 35.

Таблица 35

Клиническая эффективность заявляемого лекарственного препарата при профилактике гематологической и других видов токсичности, вызываемой химиотерапией.

* Абсолютное количество в группе (в скобках — процент)

Из данных таблицы 35 видно, что основным видом токсичности проводимой ПХТ была гематологическая токсичность. Нейтропения отмечена у 23,8%бoльныx из группы 1, у 47,6% пациентов из группы 2 и у 60,0% пациентов из группы 3. Нефротоксичность зафиксирована у 4,8% больных из группы 1, у 14,3% пациентов из группы 2 и у 25,0% из группы 3. Такая же закономерность наблюдалась при профилактике нейротоксичности ПХТ. Заявляемый лекарственный препарат эффективно препятствовал проявлению (в большей степени) гематологической токсичности, а также (в меньшей степени) других видов токсичности. Прототип обладал гораздо меньшими возможностями в отношении профилактики возникновения этих токсических явлений. Таким образом, заявляемый лекарственный препарат обладает гораздо более выраженной клинической эффективностью, чем прототип при профилактике гематологической . и других видов токсичности, вызываемой химиотерапией злокачественных опухолей.

ПРИМЕР 50. Клиническая эффективность заявляемого лекарственного препарата при профилактике и лечении осложнений лучевой терапии.

В исследование эффективности заявляемого лекарственного препарата при профилактике и лечении осложнений лучевой терапии включено 46 пациенток больных раком тела матки Iб-П стадии. Все пациентки случайным образом распределялись на две равные группы. Одна группа (группа лечения) за неделю до операции начала получать заявляемый лекарственный препарат в дозе 250 мг (считая на 9-oкcoaкpидин- 10-yкcycнyю кислоту) внутримышечно на 1, 2 ,4 ,6 дни (неделя перед операцией), а далее на 1, 2, 4,6 дни после операции. Другая группа (группа сравнения) получала прототип в той же дозе (считая на 9-oкcoaкpидинlO-yкcycнyю кислоту), режиме и пути введения. Всем больным выполнена экстирпация матки с придатками с интраоперационным облучением культи влагалища пучком быстрых электронов 6 МЭВ излучением малогабаритного бетатрона в разовой дозе 12 Гр. Процедура проводилась с экранированием мочевого пузыря и прямой кишки. Всем больным в послеоперационном периоде проведена гамма-терапия в стандартном режиме фракционирования дозы: разовая очаговая доза - 2,0 Гр, 5 фракций в неделю, суммарная очаговая доза 44-46 Гр на область параметрия. Курсовая суммарная доза, с учетом интраоперационного облучения 12 Гр и длительности перерыва в лечении после операции, соответствовала 62 Гр по изоэффекту. Профилактическую эффективность заявляемого лекарственного средства оценивали по частоте развития ранних лучевых реакций - циститов и ректитов, а лечебная эффективность по срокам купирования этих осложнений. Распределение больных по стадии заболевания, возрасту и срокам заболевания в обеих группах было сходным. В группе лечения частота лучевых ректитов и проктитов составила, 13,0 и 17,4 %, соответственно, а в группе сравнения - 43,5% и 52,2%. Средние сроки купирования симптомов лучевых ректитов и циститов (совокупно) в группе больных, получавших заявляемый лекарственный препарат, были в 1,5 раза короче, чем у больных в группе сравнения. Таким образом, заявляемый лекарственный препарат проявляет высокую эффективность, как при профилактике, так и при лечении осложнений, возникающих вследствие лучевой терапии, и эти свойства заявляемого лекарственного препарата выражены в большей степени, чем у прототипа.