以下、本発明を詳細に説明する。なお� �本明細書は、本願優先権主張の基礎となる� �国仮出願60/950,621号(2007年7月19日出願)及び米� ��仮出願60/951,493号(2007年7月24日出願)の明細書 及び図面の内容を包含する。

 本明細書において「患者」とは、動物、� ��ましくは哺乳動物である。

 本明細書において「哺乳動物」とは、ヒ� ��または非ヒト哺乳動物(たとえばマウス、ラ ット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ブ タ、イヌ、ウマ、ウシ、サルなど)を含む、� �乳動物として分類されるあらゆる動物を意� �する。好ましくは、本明細書における哺乳� �物はヒトである。この場合、「患者」とい� �用語は、成人および小児を含み、かつ男性� �よび女性を含む。小児は新生児、幼児、お� �び青年を含む。

 本明細書において「γ-セクレターゼ」とは� ��APPをその膜貫通領域内で開裂(分解)するこ� �によって、Aβの産生を司る酵素または複数� �子からなる複合体を意味する。当該複数分� �は、プレセニリン(Presenilin)、ニカストリン(N icastrin)、Aph-1およびPen-2の少なくとも1つの分� ��を含む。たとえば、
マウスPresenilin1(NM_008943)、ラットPresenilin1(D8236 3)、ヒトPresenilin1(NM_000021)、マウスPresenilin2(NM_ 011183)、ラットPresenilin2(NM_031087)、ヒトPresenilin 2(NM_000447)、マウスNicastrin(NM_021607)、ラットNica strin(NM_174864)、ヒトNicastrin(NM_015331)、マウスAph -1(NM_146104)、ラットAph-1(NM_001014255)、ヒトAph-1(N M_016022)、マウスPen-2(NM_025498)、ラットPen-2(NM_00 1008764)、ヒトPen-2(NM_172341)などが本発明のγ-セ クレターゼに含まれる。本発明のγ-セクレタ ーゼは、少なくとも生体内で機能するγ-セク レターゼと同様の酵素活性を有していれば、 各構成分子は完全長であっても、その部分配 列であってもよい。また、本発明のγ-セクレ ターゼは、γ-セクレターゼの変異体であって もよい。γ-セクレターゼの変異体は、完全長 の各構成分子に1~複数個(好ましくは1または� �個)のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/ま たは付加されてもよい、あるいはこれらの組 合せによるアミノ酸配列を含むポリペプチド であって、かつ生体内で機能するγ-セクレタ ーゼと同様の酵素活性を有するポリペプチド である。

 また、「γ-セクレターゼの生物学的に活� ��な断片」は、生体内で機能するγ-セクレタ� ��ゼと同様の酵素活性を有する断片であり、� ��とえば、APPやc-Metを開裂することができる� �片を意味する。

 本明細書において、用語「γ-セクレター� ��」は、「γ-セクレターゼの生物学的に活性� ��断片」の意味を含めて用いられる場合があ� ��。

 本明細書において、「c-Met」とは、レセプ� �ー型チロシンキナーゼファミリーの一つで� �り、ポストシナプスの形態形成の制御因子� �ある H epatocyte  G rowth  F actor (HGF)のレセプターとして公知のポリペプ チドである(Tyndall SJ, Walikonis RS. The receptor� �tyrosine kinase Met and its ligand hepatocyte growth  factor are clustered at excitatory synapses and can  enhance clustering of synaptic proteins. Cell Cycle.  2006 Jul;5(14):1560-8. Epub 2006 Jul 17.)。c-Metは� ��構造上、HGF結合ドメイン、膜貫通ドメイン� ��キナーゼ活性部位を含んでいる(Maulik G et  al., Cytokine Growth Factor Rev. 2002 Feb;13(1):41-59. )。

 本発明において、使用されるc-Metは、好� �しくは哺乳動物のc-Metである。たとえば、ヒ トc-Met(BC130420、X54559)、カニクイザル(Macaca mul atta)c-Met(XM_001101874)、チンパンジー(Pan troglodyt es)c-Met(XM_519326)、ラットc-Met(X96786、NM_031517、XM _346692、XM_347367)、マウスc-Met(Y00671、BC117969、NM _008591)、ウマ(Equus caballus)c-Met(XM_001501820)、ブ� ��(Sus scrofa)c-Met (NM_001038008)、ヤマイヌ(Canis l upus familiaris)c-Met (NM_001002963)、ウシ(Bos Taurus) c-Met(NM_001012999, XM_608832, XM_612507)などが本発� �のc-Metに含まれる。

 上記c-Metをコードする遺伝子およびc-Metポ リペプチドが本発明のc-Metに含まれる。各種� ��物由来のc-Metと塩基配列又はアミノ酸配列� �の対応関係を表1に示す。

 本発明において、c-Metは前記動物由来の� �リペプチド、組み換えポリペプチド、また� �合成ポリペプチドのいずれであってもよい� �

 本発明のc-Metは、好ましくは、少なくと� �c-Metのγ-セクレターゼ開裂部位を含んでさえ すれば、完全長であっても、その部分配列で あってもよい。

 また、本発明においてc-Metは、c-Metの変異 体であってもよい。c-Metの変異体は、完全長� ��c-Metに1~複数個(好ましくは1または数個)のア ミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付� �されてもよい、あるいはこれらの組合せに� �るアミノ酸配列を含むポリペプチドであっ� �、かつc-Metと機能的に実質的に同一なポリペ プチドである。

 「c-Metと機能的に実質的に同一なポリペ� �チド」は、c-Metの有する活性、例えば、γ-セ クレターゼ依存的に開裂活性を有するポリペ プチドを意味し、c-Metのγ-セクレターゼ開裂� ��位を少なくとも含むあらゆるc-Met誘導体が� �まれる。これらのポリペプチドは、c-Metを検 出、精製する上で特に有用である。

 
 本明細書において「置換」とは、好ましく� ��、ペプチドの活性を実質的に改変しないよ� ��に、1または複数個(好ましくは1または数個) のアミノ酸残基を、別の化学的に類似したア ミノ酸残基で置換える保存的置換を意味する 。例えば、ある疎水性残基を別の疎水性残基 によって置換する場合、ある極性残基を同じ 電荷を有する別の極性残基によって置換する 場合などが挙げられる。このような置換を行 うことができる機能的に類似のアミノ酸は、 アミノ酸毎に当該技術分野において公知であ る。具体例を挙げると、非極性(疎水性)アミ� ��酸としては、アラニン、バリン、イソロイ� ��ン、ロイシン、プロリン、トリプトファン� ��フェニルアラニン、メチオニンなどが挙げ� ��れる。極性(中性)アミノ酸としては、グリ� �ン、セリン、スレオニン、チロシン、グル� �ミン、アスパラギン、システインなどが挙� �られる。陽電荷をもつ(塩基性)アミノ酸とし ては、アルギニン、ヒスチジン、リジンなど が挙げられる。また、負電荷をもつ(酸性)ア� ��ノ酸としては、アスパラギン酸、グルタミ� ��酸などが挙げられる。

 前記の欠失、置換、挿入および/または付 加されてもよいアミノ酸の数は、たとえば1~3 0個、好ましくは1~20個、より好ましくは1~10個 、さらに好ましくは1~5個、特に好ましくは1~2 個である。

 前記の同一性は、c-Metと実質的に同一の� �能を有する限りc-Metのアミノ酸配列が同一で なくてもよいことを意味する。したがって、 c-Metと機能的に実質的に同一の活性(たとえば 、γ-セクレターゼ依存的に分解活性)を有す� �のであれば、c-Metのアミノ酸配列の相同性の 高低は問われるものではなく、由来する動物 の種も不問である。

 本発明の好ましい態様において、c-Metと� �能的に実質的に同一なポリペプチドは、c-Met のアミノ酸配列、例えば配列番号10からなる� ��リペプチド(ラットc-Met)のアミノ酸配列と、 好ましくは80%以上、より好ましくは85%以上、 さらに好ましくは90%以上、さらにより好まし くは95%以上、特に好ましくは98%以上、そして 最も好ましくは99%以上の相同性を有するアミ ノ酸配列であって、c-Metと実質的に同一の活� ��(たとえば、γ-セクレターゼ依存的に分解活 性)を有するものであり、そのような特徴を� �するのであれば、前記動物由来のポリペプ� �ド、組み換えポリペプチド、または合成ポ� �ペプチドのいずれであってもよい。

 
 前記の同一性は、当業者に公知の相同性検� ��プログラムを用いて算出される数値であれ� ��よく、たとえば全米バイオテクノロジー情� ��センター(NCBI)の相同性アルゴリズムBLAST(Basi c local alignment search tool)http://www.ncbi.nlm.nih.go v/BLAST/においてデフォルト(初期設定)のパラ� �ーターを用いることにより、算出すること� �できる。

 当該c-Metは、他のポリペプチドと融合さ� �た融合ポリペプチド、タグもしくは標識物� �付加したポリペプチド、またはそれ以外の� �飾を施されたポリペプチドの形態であって� �よい。これらのポリペプチドは、遺伝子組� �換え技術、部位指定突然変異誘発、突然変� �誘発剤処理(たとえばヒドロキシルアミン)、 または自動化したペプチド合成によって得る ことができる。

 当該c-Metのタグ付きポリペプチドとして� �に有用な系としては、ヘマグルチニン(HA)系� ��グルタチオン-S-トランスフェラーゼ(GST)系� �マルトース結合タンパク質系、6×ヒスチジ� �系、8×ヒスチジン系などが挙げられる。

 前記標識またはそれ以外の検出可能な部� ��を組み込む修飾としては、たとえばビオチ� ��標識、放射性標識、蛍光標識、化学的発光� ��識などがある。本発明のどのc-Metも、これ� �標識のうちの1つ、2つ、またはそれ以上を備 えることができる。

  
 本発明の好ましい態様のc-Metは、ラットc-Met であり、たとえば配列番号10または配列番号1 2のアミノ酸配列を含むポリペプチドである� �さらに本発明の好ましい態様のc-Metは、ラッ トc-MetのHAタグ付きポリペプチドである。た� �えば、ラットc-MetのC末端にHAタグをさらに備 えたポリペプチド(配列番号14)である(実施例1 )。もちろん、ヒトc-Met配列の全体または一部 、たとえば配列番号2または4のアミノ酸配列� ��含むポリペプチドや、表1に示す他の動物由 来のポリペプチド配列も、ラットc-Metと同様� ��用いることができる。

 本発明ではさらに、前記c-Metをコードす� �塩基配列を含むポリヌクレオチドを提供す� �。本発明のc-Metをコードするポリヌクレオチ ドは、c-Metと実質的に同一の活性(たとえば、 γ-セクレターゼ依存的に分解活性)を有する� �リペプチドをコードするポリヌクレオチド� �ある。本発明の好ましい態様において、本� �明のc-Metをコードするポリヌクレオチドは、 ラットc-Metをコードするポリヌクレオチドで� ��り、たとえば配列番号9または配列番号11の� ��リヌクレオチドである。さらに本発明の好� ��しい態様のc-Metをコードするポリヌクレオ� �ドは、ラットc-MetのHAタグ付きポリペプチド� ��コードするポリヌクレオチドである。たと� ��ば、ラットc-MetのC末端にHAタグをさらに備� �たポリペプチドをコードするポリヌクレオ� �ド(配列番号13)である(実施例1)。もちろん、� ��トc-Met配列の全体または一部、たとえば配� �番号1又は3の塩基配列、さらには、表1に示� �他の動物由来の塩基配列も、ラットc-Metと同 様に用いることができる。 

 本発明のc-Metをコードするポリヌクレオ� �ドは、前記c-Metの変異体またはc-Metの誘導体� ��コードするポリヌクレオチドでもよい。例� ��ば、配列番号9または配列番号11の塩基配列� ��、好ましくは80%以上、より好ましくは85%以� ��、さらに好ましくは90%以上、さらにより好� ��しくは95%以上、特に好ましくは98%以上、そ� ��て最も好ましくは99%以上の相同性(同一性)� �有する塩基配列を含み、かつc-Metと実質的に 同じ活性を有するポリペプチドをコードする ポリヌクレオチドを含む。

 また、本発明のc-Metをコードするポリヌ� �レオチドは、配列番号9または配列番号11の� �基配列からなるポリヌクレオチドと相補的� �塩基配列からなるポリヌクレオチドとスト� �ンジェントな条件下でハイブリダイズし、� �つc-Metと実質的に同じ活性を有するポリペプ チドをコードするポリヌクレオチドを含む。 ここで、ストリンジェントな条件は、ハイブ リダイゼーション後の洗浄条件として、例え ば、「2×SSC、0.1%SDS、42℃」、「1×SSC、0.1%SDS� �37℃」、よりストリンジェントな条件として は、例えば、「1×SSC、0.1%SDS、65℃」、「0.5×S SC、0.1%SDS、50℃」等の条件を挙げることがで� ��る。より詳細には、Rapid-hyb buffer(Amersham Lif e Science)を用いた方法として、68℃で30分以上 プレハイブリダイゼーションを行った後、プ ローブを添加して1時間以上68℃に保ってハイ ブリッド形成させ、その後、2×SSC、0.1%SDS中� �室温で20分の洗浄を3回、1×SSC、0.1%SDS中、37� �で20分の洗浄を3回、最後に、1×SSC、0.1%SDS中� ��50℃で20分の洗浄を2回行うことも考えられ� �。その他、例えばExpresshyb Hybridization Solution  (CLONTECH)中、55℃で30分以上プレハイブリダ� �ゼーションを行い、標識プローブを添加し� �37~55℃で1時間以上インキュベートし、2×SSC� �0.1%SDS中、室温で20分の洗浄を3回、1×SSC、0.1% SDS中、37℃で20分の洗浄を1回行うこともでき� ��。ここで、例えば、プレハイブリダイゼー� ��ョン、ハイブリダイゼーションや2度目の洗 浄の際の温度を上げることにより、よりスト リンジェントな条件とすることができる。例 えば、プレハイブリダイゼーション及びハイ ブリダイゼーションの温度を60℃、さらにス� ��リンジェントな条件としては68℃とするこ� �ができる。当業者であれば、このようなバ� �ファーの塩濃度、温度等の条件に加えて、� �の他のプローブ濃度、プローブの長さ、反� �時間等の諸条件を加味し、c-Metのアイソフォ ーム、アレリック変異体、及び対応する他種 生物由来の遺伝子を得るための条件を設定す ることができる。

 このようなポリヌクレオチドは、遺伝子� ��幅技術、ハイブリダイゼーション技術、遺� ��子組み換え技術などによって得ることがで� ��る。

 本明細書において「生物学的組成物」と� ��、γ-セクレターゼもしくはその生物学的に� ��性な断片、またはc-Metを含む組成物であれ� �特に限られず、たとえば、無細胞の再構成� �、哺乳動物またはその一部、あるいはAPPを� �剰発現するように操作したトランスジェニ� �ク非ヒト哺乳動物またはその一部などであ� �。

 本明細書において「γ-セクレターゼまた� ��その生物学的に活性な断片を含む第1の生物 学的組成物」または「c-Metを含む第2の生物学 的組成物」において、γ-セクレターゼおよび /またはc-Metは、内因性のものであっても、外 因性のものであってもよい。

 内因性の場合は、前記動物またはその一� ��に由来するγ-セクレターゼまたはc-Metを含� �組成物であれば特に限られない。

 前記動物の一部は、たとえば前記動物の� ��織、その細胞、その細胞溶解物、その細胞� ��分画、またはその精製された膜などが挙げ� ��れる。当該細胞は、たとえば中枢神経系の� ��胞、脳由来の神経細胞、大脳皮質由来の神� ��細胞、大脳皮質由来の初代培養神経細胞、� ��馬由来の初代培養神経細胞などの神経細胞� ��またはグリア細胞などが挙げられる。また� ��γ-セクレターゼまたはc-Metは、哺乳動物ま� �はその一部に含有されたままの状態であっ� �もよいし、哺乳動物から調製された細胞溶� �物のγ-セクレターゼ分画またはc-Met分画であ ってもよい。当該細胞溶解物は、たとえばγ- セクレターゼまたはc-Metを含有する細胞を低� ��液もしくは界面活性剤による溶解、または� ��音波破砕もしくは物理的な破砕により調製� ��れたものであってもよく、場合によっては� ��カラムなどの精製手段を処置したものであ� ��てもよい。

 外因性の場合は、γ-セクレターゼを構成� ��る各分子をコードするポリヌクレオチドま� ��はc-Metをコードするポリヌクレオチドを含� �各発現ベクターの全てまたはその一部を用� �て、宿主細胞に発現させた場合の、γ-セク� �ターゼ発現細胞またはc-Met発現細胞であって もよいし、またはγ-セクレターゼ発現細胞に 由来する細胞溶解物のγ-セクレターゼ分画ま たはc-Met発現細胞に由来する細胞溶解物のc-Me t分画や細胞膜分画であってもよい。当該細� �溶解物は、たとえばγ-セクレターゼまたはc- Metを含有する細胞を低張液もしくは界面活性 剤による溶解、または超音波破砕もしくは物 理的な破砕により調製されたものであっても よく、場合によっては、カラムなどの精製手 段を処置したものであってもよい。当該発現 ベクターは、宿主細胞に形質転換またはトラ ンスフェクションされ、一過性に遺伝子を発 現するもの、または宿主細胞のゲノムに組み 込まれ、安定に遺伝子を発現するものであっ てもよい。

 本明細書において「形質転換」または「� ��ランスフェクション」とは、真核細胞また� ��微生物のDNA含量を変化させるあらゆる方法� ��意味する。たとえばリン酸カルシウムトラ� ��スフェクション、プロトプラスト融合トラ� ��スフェクション、エレクトロポレーション� ��ランスフェクション、DEAE-デキストラン処� �トランスフェクション、リポソームトラン� �フェクション、ポリブレントランスフェク� �ョン、直接マイクロインジェクショントラ� �スフェクションなどが挙げられる(Sambrook,et  al.,Molecular Cloning 3:16.30-16.31(1989))。

 前記発現ベクターを形質転換またはトラ� ��スフェクションされる宿主細胞は、遺伝子� ��発現することができる細胞または細胞株あ� ��いは微生物であればよく、公知の培養細胞� ��挙げられる。たとえば哺乳動物の細胞また� ��細胞株としては、HEK293細胞、チャイニーズ� ��ムスター卵巣(CHO)細胞、線維芽細胞、一次� �皮細胞(HUVEC細胞)、ヒト神経膠腫細胞、Hela細 胞、COS細胞、PC12細胞、リンパ芽球、メラノ� �マ細胞、ハイブリドーマ細胞、卵母細胞、� �たは胚性幹細胞など、または公知の微生物� �して、たとえば大腸菌、酵母など、または� �虫細胞(たとえばBmN4細胞)などが挙げられる� �

 前記形質転換またはトランスフェクショ� ��に使用される発現ベクターは、γ-セクレタ� ��ゼを構成する各分子をコードするポリヌク� ��オチドまたはc-Metをコードするポリヌクレ� �チドを含む限り、特に限定されるものでは� �く、用いる宿主細胞に応じて適宜選択した� �知の発現ベクターに、当該ポリヌクレオチ� �を挿入することにより得られるプラスミド� �挙げることができる。

 前記発現ベクターとしては、たとえば大� ��菌に対しては、pUC、pTV、pGEX、pKK、またはpTr cHisを;酵母に対しては、pEMBLYまたはpYES2を;CHO� ��胞、HEK293細胞およびCOS細胞に対しては、pcDN A3、pMAMneoまたはpBabe Puroを;BmN4細胞に対して� �、カイコ核多角体ウイルス(BmNPV)のポリヘド� ��ンプロモーターを有するベクター(たとえば pBK283)を挙げることができる。

 たとえば、哺乳動物の細胞では、強い転� ��活性を与えるのにCMV前初期プロモーター、� ��トロウイルスのプロモーター(たとえばMLVや MMTVからのLTR)、SV40、RSV LTR、HIV-1 LTR、HIV-2 LT Rのプロモーター、アデノウイルスのプロモ� �ター(たとえばE1A領域、E2A領域、MLP領域から� ��もの)、AAV LTR、カリフラワー・モザイク・� ��イルス、HSV-TK、トリ肉腫ウイルスのプロモ� ��ターなどがある。

 前記形質転換またはトランスフェクショ� ��された宿主細胞も、γ-セクレターゼを構成� ��る各分子をコードするポリヌクレオチドま� ��はc-Metをコードするポリヌクレオチドを含� �限り、特に限定されるものではなく、たと� �ば当該ポリヌクレオチドが宿主細胞の染色� �に組み込まれた形質転換体であることもで� �るし、当該ポリヌクレオチドを含むプラス� �ドの形で含有する形質転換体であることも� �きるし、またはγ-セクレターゼまたはc-Metを 発現していない形質転換体であることもでき る。当該形質転換体は、たとえば前記プラス ミドにより、あるいは、前記ポリヌクレオチ ドそれ自体により、所望の宿主細胞を形質転 換することにより得ることができる。

 前記のγ-セクレターゼおよび/またはc-Met� ��含有する細胞は、γ-セクレターゼおよび/ま たはc-Metを細胞膜表面に発現し得る限り、特� ��限定されるものではないが、たとえば、内� ��性のγ-セクレターゼおよび内因性のc-Metを� �現する細胞、一方が内因性で他方が外因性� �あるγ-セクレターゼおよびc-Metを発現する細 胞、あるいは外因性のγ-セクレターゼおよび 外因性のc-Metを共に発現する細胞である。こ� ��ような細胞は、γ-セクレターゼおよび/また はc-Metの発現が可能な条件下で培養すること� ��より得ることもできる。または、適当な細� ��に、γ-セクレターゼを構成する各分子をコ� ��ドするRNAおよび/またはc-MetをコードするRNA� ��注入し、γ-セクレターゼおよび/またはc-Met� ��発現が可能な条件下で培養することにより� ��ることもできる。

 前記細胞膜画分は、たとえば本発明のγ-� ��クレターゼまたはc-Metを発現する細胞を破� �した後、細胞膜が多く含まれる画分を分離� �ることにより得ることができる。細胞の破� �方法としては、たとえばホモジナイザーで� �胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダー� �たはポリトロンによる破砕、超音波による� �砕、あるいは、フレンチプレスなどで加圧� �ながら細いノズルから細胞を噴出させるこ� �による破砕などを挙げることができる。ま� �、細胞膜の分画方法としては、たとえば遠� �力による分画法、たとえば分画遠心分離法� �たは密度勾配遠心分離法を挙げることがで� �る。

 精製する場合、公知のタンパク質精製法� ��利用することができる。その方法には、1つ の段階として、細胞培地を粗分画してポリペ プチド分画と非ポリペプチド分画に分ける操 作が含まれる。カラムなどにより本発明のγ- セクレターゼまたはc-Metが他のポリペプチド� ��ら分離された後、クロマトグラフィ法また� ��電気泳動法を利用して所望のγ-セクレター� ��またはc-Metをさらに精製し、部分的精製ま� �は完全精製(または精製による均一化)する。 純粋なペプチドの調製、精製に特に適した分 析法は、たとえば硫酸アンモニウム、PEG、抗 体などを用いた沈降、または熱変性を行った 後の遠心分離;クロマトグラフィ・ステップ� �等電点電気泳動、ゲル電気泳動、SDS(Sodium do decyl sulfate)-ポリアクリルアミドゲル電気泳� �(SDS-PAGE)、これらの方法と他の方法の組み合� ��せなどの方法がある。クロマトグラフィ・� ��テップとしては、たとえばイオン交換クロ� ��トグラフィ、ゲル濾過クロマトグラフィ、� ��相クロマトグラフィ、ヒドロキシルアパタ� ��ト・クロマトグラフィ、アフィニティ・ク� ��マトグラフィ、高速タンパク質液体クロマ� ��グラフィ(FPLC)、高性能液体クロマトグラフ� ��(HPLC)または固定化金属アフィニティ・クロ� ��トグラフィ(IMAC)などが挙げられる。

 あるいは、予めγ-セクレターゼまたはc-Me tにタグを付けておき、当該タグを認識する� �ンパク質が結合している精製カラムに通す� �とで、所望のγ-セクレターゼまたはc-Metをカ ラム内に吸着させ、適当な流出溶媒を流すこ とで、カラムから脱着させて精製することも 可能である。

 各種精製ステップは、実施する順番を変� ��ても、あるいはいくつかのステップを省略� ��てもよい。分画の純度を評価する好ましい1 つの方法は、分画の比活性を計算し、それを 最初の抽出液の比活性と比較し、純度の大き さを計算して評価するというものである。

 本明細書において、「c-Metの開裂」とは� �γ-セクレターゼによってc-Metが切断を受けて 切断前の長さよりも短い断片になることを意 味する。「c-Met未分解物」とは、c-Metが開裂� �ない結果として生成されるポリペプチドで� �り、γ-セクレターゼにより分解される前の� �のを意味する。

 γ-セクレターゼによるc-Metの開裂をモニ� �ーするため、抗c-Met抗体、c-Metが開裂しない� ��果として生成されるc-Met未分解物を認識す� �抗体、またはc-Metが開裂する結果として生成 されるc-Met開裂産物を認識する抗体、好まし� ��はc-Metの細胞内領域を認識する抗体、さら� �好ましくはc-MetのC末端領域を認識する抗体� �を用いることができる。c-Metのタグ付きポリ ペプチド未分解物を検出する場合は、選択さ れたタグを認識する抗体を用いることができ る。たとえば、c-MetのC末端にHAタグを付けた� ��合、抗HAタグ抗体を用いてc-Metの未分解やc-M etの開裂を検出することができる。この場合� ��c-Metが開裂しない結果として生成されるc-Met のC末端の存在と濃度やc-Metが開裂する結果と して生成されるc-Metの C末端の存在と濃度を� ��らかにすることができる。

 本明細書において「APP」とは、β-アミロ� ��ド前駆体タンパク質(βAPP)またはその突然変 異体を意味する。APPは、多くの哺乳動物の多 種多様な細胞で発現される一回膜貫通型タン パク質であり、そのC末端領域にAβ領域を含� �ペプチドを意味する。ヒトにおいては第21番 染色体のロングアームに位置する同名の遺伝 子によってコードされ、3個の主要なアイソ� �イプが存在する(APP695、APP751およびAPP770)。APP 695、APP751およびAPP770はそれぞれ、695、751およ び770個のアミノ酸残基からなる。これらのア イソタイプとしては、たとえば、ヒトAPP695(NM _201414、NP_958817、P05067-4)、ヒトAPP751(NM_201413、N P_958816、P05067-8)、ヒトAPP770(NM_000484、NP_000475、 P05067-1、P05067)、マウスAPP695(NM_007471、NP_031497� �P12023-2)、マウスAPP751(P12023-3)、マウスAPP770(AY2 67348、AAP23169、P12023-1、P12023)、ラットAPP695(P085 92-2)、ラットAPP751(P08592-7)、ラットAPP770(NM_01928 8、NP_062161、P08592-1、P08592)が挙げられる。APP� �然変異体は、スウェーデンFAD二重突然変異� �、ロンドン突然変異体、バリン717→フェニ� �アラニン突然変異体、バリン717→イソロイ� �ン突然変異体、バリン717→グリシン突然変� �体が挙げられる。

 本明細書において「Aβ」とは、β-アミロ� ��ドタンパク質、アミロイドβタンパク質、β -アミロイドペプチド、アミロイドβペプチド またはアミロイドベータという用語を意味す る。たとえば、AβはヒトAPP695アミノ酸アイソ タイプの約33個~約44個のアミノ酸残基からな� ��ペプチドであり、そして好ましくはAPPの597� ��~640位のアミノ酸残基の一部または全部を含 むあらゆるペプチドを含むものであって、APP のN末端タンパク質分解、続いてC末端のタン� ��ク質分解によって産生される全てのペプチ� ��を意味する。Aβ40、Aβ42は、それぞれ40アミ� ��酸残基、42アミノ酸残基を含むペプチドで� �る。

 本明細書において「ノッチ」(Notch)とは、 細胞表面受容体のノッチ・ファミリーに属す るγ-セクレターゼの競合する基質である。た とえば、ヒトノッチ1(AF308602.1)、マウスノッ� �1 (NM_008714.2)、ラットノッチ1(NM_001105721.1)が� �げられる。造血においてノッチ-1は重要な機 能を担っているため、ノッチ-1のプロセシン� ��を抑制すると、免疫不全と貧血になる可能� ��がある。

  
 本明細書において「候補化合物」とは、化� ��物のスクリーニング方法において、試験さ� ��る化合物を意味する。候補化合物は、あら� ��る分子を使用することができるが、γ-セク� ��ターゼの活性、好ましくは哺乳動物のγ-セ� ��レターゼの活性を変化させることのできる� ��らゆる化合物が好ましい。候補化合物は、� ��とえば遺伝子ライブラリーの発現産物、天� ��または合成低分子化合物ライブラリー、核� ��(オリゴDNA、オリゴRNA)、天然または合成ペ� �チドライブラリー、抗体、細菌放出物質(細� ��の代謝により放出される物質を含む)、細胞 (微生物、植物細胞、動物細胞)抽出液、細胞( 微生物、植物細胞、動物細胞)培養上清、精� �または部分精製ペプチド、海洋生物、植物� �たは動物など由来の抽出物、土壌、ランダ� �ファージペプチドディスプレイライブラリ� �等に含まれる1つまたは複数の化合物である� ��前記化合物は新規な化合物であってもよく� ��公知の化合物であってもよい。さらに、前� ��化合物は、従来の化学的手段、物理的手段� ��よび/または生化学的手段により改変したも のであってもよく、たとえばアシル化、アル キル化、エステル化、アミド化などの直接的 化学修飾またはランダムな化学修飾に付して 構造的類似体に改変したものであってもよい 。前記化合物は、前記化合物のファーマコフ ォア検索、コンピューターを用いた構造比較 プログラムなどにより同定される化合物であ ってもよい。当該候補化合物は塩を形成して もよく、さらに当該候補化合物およびその塩 は溶媒和物(水和物含む)を形成していてもよ� ��。

 本明細書において「γ-セクレターゼによ� ��c-Metのプロセシングに影響を与える化合物� �とは、γ-セクレターゼによるc-Metの開裂活性 を阻害する化合物(γ-セクレターゼ阻害剤)、� ��たはγ-セクレターゼによるc-Metの開裂活性� �促進する化合物(γ-セクレターゼ促進剤)のい ずれかを意味する。ここで、γ-セクレターゼ 阻害剤にはそのアンタゴニストが含まれ、γ- セクレターゼ促進剤にはそのアゴニストが含 まれる。γ-セクレターゼ阻害剤およびγ-セク レターゼ促進剤には、γ-セクレターゼのc-Met� ��裂産物の切断部位を変化させ、ペプチドの� ��さの異なるc-Met開裂産物を生成させる化合� �も含まれる。

 本明細書において「塩」とは、薬学的に� ��容される塩を示し、前記化合物と薬学的に� ��容される塩を形成するものであれば特に限� ��されない。具体的には、たとえば好ましく� ��ハロゲン化水素酸塩(たとえばフッ化水素酸 塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩 など)、無機酸塩(たとえば硫酸塩、硝酸塩、� ��塩素酸塩、リン酸塩、炭酸塩、重炭酸塩な� ��)、有機カルボン酸塩(たとえば酢酸塩、シ� �ウ酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル� �塩、クエン酸塩など)、有機スルホン酸塩(た とえばメタンスルホン酸塩、トリフルオロメ タンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベ ンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩 、カンファースルホン酸塩など)、アミノ酸� �(たとえばアスパラギン酸塩、グルタミン酸� ��など)、四級アミン塩、アルカリ金属塩(た� �えばリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム� �など)、アルカリ土類金属塩(たとえばマグネ シウム塩、カルシウム塩など)などが挙げら� �る。

 本発明により、(a)c-Metの開裂を調べるア� �セイ方法と、(b)そのようなアッセイ方法を� �用して、候補化合物が、γ-セクレターゼに� �るc-Metのプロセシングに影響を与える化合物 であるか否かを評価する方法(スクリーニン� �方法)が提供される。すなわち、本発明の方� ��は、以下の通りである。

 本発明の態様である、γ-セクレターゼによ� ��c-Metのプロセシングに影響を与える化合物� �スクリーニングする方法は以下の工程(ステ� ��プ)を含む。
(i)候補化合物の存在下および非存在下で、γ- セクレターゼまたはその生物学的に活性なそ の断片を含む第1の生物学的組成物と、c-Metを 含む第2の生物学的組成物とを接触させ;
(ii)当該候補化合物の存在下と非存在下にお� �る、当該c-Metの開裂をそれぞれ測定し;
(iii)γ-セクレターゼによる当該c-Metの開裂に� �響を与える当該候補化合物を選択し;そして
(iv)前記(iii)で選択された候補化合物を、γ-セ クレターゼによるc-Metのプロセシングに影響� ��与える化合物であると同定する。

 本発明の方法は、γ-セクレターゼとc-Met� �含む適切な細胞系、またはγ-セクレターゼ� �c-Metを含むセルフリー系(細胞を含まない系)� ��実施することができる。

 γ-セクレターゼとc-Metを含む細胞系では� �内在性遺伝子発現細胞系であってもよいが� �外来性遺伝子を含む細胞系のいずれであっ� �もよい。候補化合物の存在下と非存在下で� �γ-セクレターゼとc-Metを含む細胞を適切な培 地で培養し、γ-セクレターゼによりc-Metが開� ��可能となる反応条件でインキュベーション� ��ることで、γ-セクレターゼを含む第1の生物 学的組成物と、c-Metを含む第2の生物学的組成 物とを接触させることができる。外来性遺伝 子を含む細胞系の場合は、その遺伝子が発現 できる培養条件で上記接触を実施することが できる。他のγ-セクレターゼの基質が開裂す る条件、たとえば当該基質がAPPである場合の 当業者に公知の反応条件を適用することもで きる。

 反応条件の例を以下に挙げる。内在性遺伝� ��発現細胞系では、初代培養神経細胞の場合� ��たとえば、MEM(Invitrogen)培地に, 5%FBS(Hyclone),� �1X B27 Supplement (Invitrogen ), 0.5mM L-Glutamine ( Invitrogen), 25μg/ml Insulin (SIGMA), および8μM Ar aC(SIGMA)を加えた5%CO ₂ 、37℃の培養条件である。外来性遺伝子を含� ��系では、HEK293細胞株の場合、たとえば、10%� �FBS(Hyclone) / DMEM(Invitrogen) で5% CO ₂ 、37℃の培養条件である。

 細胞を含まない系では、候補化合物の存� ��下と非存在下で、γ-セクレターゼまたはそ� ��生物学的に活性なその断片を含む第1の生物 学的組成物(たとえば、γ-セクレターゼを含� �細胞膜分画)を、c-Metを含む第2の生物学的組� ��物(たとえば、c-Metを含む細胞膜分画)と混合 することによってインキュベーションするこ とで、両者を接触させることができる。これ らはγ-セクレターゼによりc-Metが開裂可能と� ��る反応条件、たとえば10 mM HEPES, pH7.4, 150� �mM NaCl, 10% glycerol, 5 mM EDTA, 5 mM 1,10-phenan throline, 10 μg/ml phosphoramidon, Complete protease  inhibitor cocktail (Roche Biochemicals) (Tomita et al. , Molecular Neurodegeneration 2006 1:2)で混合する� �、または他のγ-セクレターゼの基質が開裂� �る条件、たとえば当該基質がAPPである場合� �当業者に公知の反応条件を適用し混合する� �とができる。γ-セクレターゼまたはc-Metは、 精製されたγ-セクレターゼまたはc-Met、その� ��物学的に活性な断片、そのアナログ、その� ��異体のいずれであってもよい。

 また、候補化合物は、一般的には、約1nM~ 1mM、通常約10μM~1mMの範囲の濃度で添加するこ とができる。

 γ-セクレターゼを含む第1の生物学的組成 物と、c-Metを含む第2の生物学的組成物とを上 記のように接触させることで、γ-セクレター ゼによるc-Metの開裂反応が生じる。

 γ-セクレターゼのc-Met開裂活性を変化さ� �る化合物を同定するため、候補化合物の存� �下と非存在下で上記の各ステップを実施し� �候補化合物の存在下でのγ-セクレターゼのc- Met開裂活性を、候補化合物の非存在下(コン� �ロール)での活性と比較することによってそ� ��候補化合物の開裂活性に対する能力を評価� ��る。これにより、γ-セクレターゼによるc-Me tの開裂を変化させる化合物を同定すること� �できる。

 すなわち、候補化合物の存在下でc-Metの� �または程度がいくらかでも変化するという� �は、候補化合物の存在下でγ-セクレターゼ� �c-Met開裂活性が変化したことの指標であり、 当該候補化合物を、γ-セクレターゼによるc-M etのプロセシングに影響を与える化合物とし� ��同定することができる。たとえば、コント� ��ールと比べてc-Met開裂産物を増加させる化� �物またはc-Met未分解物を減少させる化合物は 、γ-セクレターゼのc-Met分解活性の促進剤で� ��ると評価される。一方、コントロールと比� ��てc-Met開裂産物を減少させる化合物またはc- Met未分解物を増加させる化合物は、γ-セクレ ターゼの分解活性の阻害剤であると評価され る。本発明の方法により得られるγ-セクレタ ーゼの分解活性の促進剤は、ADの治療に有用� ��ある可能性がある。

 c-Metの開裂の解析は、c-MetのN末端断片とC� ��端断片の一方または両方について、開裂を� ��す指標を測定することで行われる。

 開裂を示す指標としては、抗c-Met抗体、c- Metが開裂しない結果として生成される、γ-セ クレターゼにより分解される前のc-Met誘導体( c-Met未分解物)を認識する抗体、c-Metが開裂す� ��結果として生成される、c-Met開裂産物を認� �する抗体、またはc-Metの細胞内領域を認識す る抗体を用いることができる。

 ここで、c-Metがタグ付の場合には、その� �グに対する結合物、たとえば抗体、を用い� �当該指標を検出することができる。

 たとえば、c-Metポリペプチドのタグ付き� �分解物を検出する場合、c-MetのC末端にヘマ� �ルチニン(HA)タグを付け、抗HAタグ抗体を用� �て検出することができる。この場合におい� �、HAタグを検出または定量することでc-Met未� ��解物として生成されるc-MetのC末端の存在と� ��度を明らかにすることができる。なお、c-Me tまたはタグ付のc-Metが標識された場合は、そ の標識を検出あるいは定量することで該未分 解物検出することができる。

 一方、c-Metポリペプチドの開裂産物を検� �する場合には、c-Metを発現している細胞から 膜画分を精製し、精製された膜画分を用いて γセクレターゼによる開裂反応をさせて、c-Me t開裂産物を膜画分から遊離させる。この反� �産物を遠心分離すると、c-Met未分解物は膜画 分へと沈殿するので、膜画分とそれ以外の分 画で区別することができ、遊離した断片を検 出することでc-Met開裂産物を検出することが� ��きる。この検出には、内在性c-Metの場合、c- Metの細胞内領域を認識する抗体を用い、また 、外来性のリコンビナントc-Metを用いる場合� ��、C末端にタグ配列を付加させたcDNAを用い� �リコンビナントc-Metを発現させ、そのタグを 認識する抗体を用いてc-Met開裂産物を検出す� ��。タグは、特に限定されない。たとえば、H A, Myc, FLAGなどを利用することができる。

 c-Metの抗体は、c-Metを認識する抗体であれ ば特に限定されないが、好ましくはc-Metの細� ��内領域を認識する抗体である。

 また、c-Metを認識する抗体は、当業者で� �れば免疫原(抗原)を動物に免疫し、モノクロ ーナル抗体の既存の一般的な製造方法に従っ て製造することができる。免疫原は、c-Metも� ��くはその断片、またはそれらにタグもしく� ��標識物を付加した融合タンパク質等を用い� ��ことができる。

 たとえば、当該抗原を、必要に応じてフ� ��イントアジュバント(Freund's Adjuvant)ととも� �、非ヒト哺乳動物に免疫する。ポリクロー� �ル抗体は、当該免疫感作動物から得た血清� �ら取得することができる。またモノクロー� �ル抗体は、当該免疫感作動物から得た当該� �体産生細胞と自己抗体産生能のない骨髄腫� �細胞(ミエローマ細胞)から融合細胞(ハイブ� �ドーマ)を調製し、当該ハイブリドーマをク� ��ーン化し、当該哺乳動物の免疫に用いた抗� ��に対して特異的親和性を示すモノクローナ� ��抗体を産生するクローンを選択することに� ��って製造される。ハイブリドーマからのモ� ��クローナル抗体の製造は、ハイブリドーマ� ��in vitroで培養するか、あるいは非ヒト哺乳� ��物、好ましくはマウスまたはラット、より� ��ましくはマウスの腹水中などでのin vivoで� �殖させ、得られた培養上清、または当該哺� �動物の腹水から単離することにより行うこ� �ができる。モノクローナル抗体の単離、精� �は、上述の培養上清あるいは腹水を、飽和� �酸アンモニウム、ユーグロブリン沈澱法、� �プロイン酸法、カプリル酸法、イオン交換� �ロマトグラフィー(DEAEまたはDE52など)、抗イ� ��ノグロブリンカラムあるいはプロテインAカ ラム等のアフィニティカラムクロマトグラフ ィーに供すること等により行うことができる 。当該モノクローナル抗体には、当該抗体を 構成する重鎖および/または軽鎖の各々のア� �ノ酸配列において、1または数個のアミノ酸� ��欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配� ��を有する重鎖および/または軽鎖からなるモ ノクローナル抗体も包含される。

 これにより、γ-セクレターゼとc-Metを候� �化合物の存在または非存在下でインキュベ� �ションし、γ-セクレターゼによるc-Metの開裂 を評価することができる。

 また、本発明の別の態様において、上述� ��れた本発明の方法と並行に、同時に、また� ��前後して、候補化合物が、APPおよび/または ノッチのプロセシングに影響を与えるか否か を評価することができる。たとえば、上述さ れた本発明の方法と並行に、同時に、または 前後して、APPまたはAPPのγ-セクレターゼによ る開裂部位を含むポリペプチド(APPγ-セクレ� �ーゼ開裂部位を含むポリペプチド)の開裂を� ��定する工程を含むことができる。また、さ� ��に、ノッチまたはノッチのγ-セクレターゼ� ��裂部位を含むポリペプチド(ノッチγ-セクレ ターゼ開裂部位を含むポリペプチド)の開裂� �測定する工程を含むことができる。

 これにより、たとえば、候補化合物が、A PPおよび/またはノッチのプロセシングに比較 してc-Metのプロセシングに選択的に作用する� ��否かを評価することができる。「選択的に� ��用する」とは、γ-セクレターゼによる基質c -Metの開裂が他の基質の開裂に比べてより抑� �効果を有するか、あるいは促進効果を有す� �ことを意味する。本態様により、具体的に� �、候補化合物が、c-Metのプロセシングにのみ 選択的に作用する化合物、APPのプロセシング にのみ選択的に作用する化合物、ノッチのプ ロセシングにのみ選択的に作用する化合物、 APPおよびc-Metのプロセシングに選択的に作用� ��る化合物などを同定することができる。す� ��わち、本発明の方法では、APPやノッチなど� ��知のγセクレターゼの基質に加えてc-Metに対 する切断活性を選択的に阻害あるいは活性化 させた化合物を得ることができる。よって、 γセクレターゼの特定の基質に対する切断機� ��を選択的に阻害あるいは活性化させた化合� ��を得ることができ、従来よりγセクレター� �の基質に対する選択性を高めた化合物を得� �ことが可能である。

 創薬の候補化合物としては、健常な動物� ��生体内での代謝活性と同様に作用する化合� ��あるいは当該代謝を調節する化合物が好ま� ��い。たとえば、γ-セクレターゼによるAPP開� ��活性の抑制によってAβ42の産生を抑制し、γ -セクレターゼによるc-Met開裂活性を抑制せず 、かつγ-セクレターゼによるノッチ開裂活性 は抑制しない化合物が好ましい。また、たと えば、γ-セクレターゼによるAPP開裂活性の促 進によってAβ40の産生を促進してAβ42の産生� �抑制し、γ-セクレターゼによるc-Met開裂活性 の促進によってc-Metの分解を促進し、かつγ-� ��クレターゼによるノッチ開裂活性は抑制し� ��い化合物が好ましい。

  
 このγ-セクレターゼによるAPP、ノッチ、ま� ��はAPPもしくはノッチのγ-セクレターゼ開裂� ��位を含むポリペプチドの開裂を測定する方� ��は、当業者に公知のアッセイ法を適用する� ��とができる(Song et al. PNAS 1999 96 6959-6963,� �Moehlmann et al. PNAS 2002 99 8025-8030)。たとえ� ��、候補化合物の存在下および非存在下で、� �-セクレターゼまたはその生物学的に活性な� ��片を含む第1の生物学的組成物を、APPまたは APPγ-セクレターゼ開裂部位を含むポリペプチ ドを含む生物学的組成物、あるいはノッチま たはノッチγ-セクレターゼ開裂部位を含むポ リペプチドを含む生物学的組成物に接触させ 、当該APPまたはAPPγ-セクレターゼ開裂部位を 含むポリペプチド、あるいはノッチまたはノ ッチγ-セクレターゼ開裂部位を含むポリペプ チドの開裂を測定することができる。当該測 定は、APPまたはAPPγ-セクレターゼ開裂部位を 含むポリペプチド、あるいはノッチまたはノ ッチγ-セクレターゼ開裂部位を含むポリペプ チドの開裂産物を測定するとよい。たとえば APPまたはAPPγ-セクレターゼ開裂部位を含むポ リペプチドの開裂産物としては、Aβが挙げら れ、その量を測定し、候補化合物の存在下お よび非存在下での量的変動を比較するとよい 。また、APPまたはAPPγ-セクレターゼ開裂部位 を含むポリペプチド、あるいはノッチまたは ノッチγ-セクレターゼ開裂部位を含むポリペ プチドの開裂産物を認識する公知の抗体を用 いて開裂の程度、開裂産物の量を測定するこ とができる。APPまたはAPPγ-セクレターゼ開裂 部位を含むポリペプチドの開裂産物を認識す る抗体としては、市販品(SIGMA、Chemicon)を用い ることができる。測定方法は、たとえばWester n Blotにより行なうことができる。ノッチま� �はノッチγ-セクレターゼ開裂部位を含むポ� �ペプチドの開裂産物を認識する抗体として� �、市販品(Santacruze)を用いることができる。� �定方法は、たとえばWestern Blotにより行なう� ��とができる。

 本発明の方法には、多数の化合物を同時� ��試験する当業者に公知のハイスループット� ��スクリーニング(HTS)法も含まれる(US5876946、U S5902732、JayawickremeとKost,Curr. Opin. Biotechnol., 8 , pp.629-634, 1997, HoustonとBanks, Curr. Opin. Biote chnol., 8, pp.734-740, 1997)。

 本発明の方法には、公知のモデル動物の� ��用も含まれる。本発明のin vitroの方法によ� ��て選択された化合物を、たとえばAPPのプロ� ��シングおよび/またはADの非ヒトモデルを利� ��して、その化合物の生体内における効果を� ��析することができる。ADの非ヒトモデルと� �てたとえばAPPトランスジェニック非ヒト動� �モデルは当該分野で周知であり、たとえばTg 2576マウス(J. Neurosci. 21(2), 372-381, 2001、J. Cl in. Invest., 112, 440-449, 2003)を使用することが できる。また、Tg2576マウスに公知のγ-セクレ ターゼ阻害剤であるDAPT、(2S)-2-{[(3,5-Difluorophen yl)acetyl]amino}-N-[(3S)-1-methyl-2-oxo-5-phenyl-2,3-dihydro -1H-1,4-benzodiazepin-3-yl]propanamide(Alexis Biochemicals) 、もしくは本発明の化合物を投与したときの 脳内、脳脊髄液中、血清中の各Aβ量を測定す る方法(J. Pharmacol. Exp. Ther. 305, 864-871, 2003) による評価、γ-セクレターゼの活性が変化し たことの脳の変化(たとえばAβの産生量変化� �脳の萎縮程度)の病理学的検査、生存率、運� ��量、または摂食量を評価する方法などがあ� ��。

 本発明の方法によって同定される化合物� ��含む医薬組成物、好ましくは本発明のAD治� �剤は、患者に、種々の形態、経口または非� �口(たとえば静脈注射、筋肉注射、皮下投与� ��直腸投与、経皮投与)のいずれかの投与経路 で投与することができる。従って、本発明の 化合物を含有する医薬組成物は、単独で用い ることも可能であるが、投与経路に応じて慣 用される方法により薬学的に許容され得る担 体を用いて適当な剤形に製剤化することが可 能である。

 好ましい剤形としては、たとえば錠剤、� ��剤、細粒剤、顆粒剤、被覆錠剤、カプセル� ��、シロップ剤、トローチ剤などによる経口� ��、吸入剤、坐剤、注射剤(点滴剤を含む)、� �膏剤、点眼剤、眼軟膏剤、点鼻剤、点耳剤� �パップ剤、ローション剤、リポソーム剤な� �による非経口剤が挙げられる。

 これらの製剤の製剤化に用いる担体には� ��たとえば通常用いられる賦形剤、結合剤、� ��壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤や、必� ��により安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界� ��活性剤、pH調整剤、防腐剤、抗酸化剤、増� �剤、湿潤化剤、表面活性化剤、分散剤、緩� �剤、保存剤、溶解補助剤、無痛化剤などを� �用することができ、一般に医薬品製剤の原� �として用いられる成分を配合して常法によ� �製剤化することが可能である。使用可能な� �毒性のこれらの成分としては、たとえば大� �油、牛脂、合成グリセライドなどの動植物� �;たとえば流動パラフィン、スクワラン、固� ��パラフィンなどの炭化水素;たとえばミリス チン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソ プロピルなどのエステル油;たとえばセトス� �アリルアルコール、ベヘニルアルコールな� �の高級アルコール;シリコン樹脂;シリコン油 ;たとえばポリオキシエチレン脂肪酸エステ� �、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン� �肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビ� �ン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬� �ひまし油、ポリオキシエチレン-ポリオキシ� ��ロピレンブロックコポリマーなどの界面活� ��剤;たとえばヒドロキシエチルセルロース、 ポリアクリル酸、カルボキシビニルポリマー 、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロ リドン、メチルセルロースなどの水溶性高分 子;たとえばエタノール、イソプロパノール� �どの低級アルコール;たとえばグリセリン、� ��ロピレングリコール、ジプロピレングリコ� ��ル、ソルビトール、ポリエチレングリコー� ��などの多価アルコール(ポリオール);たとえ� ��グルコース、ショ糖などの糖;たとえば無水 ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、 ケイ酸アルミニウムなどの無機粉体;塩化ナ� �リウム、リン酸ナトリウムなどの無機塩;精� ��水などが挙げられる。

 賦形剤としては、たとえば乳糖、果糖、� ��ーンスターチ、白糖、ブドウ糖、マンニト� ��ル、ソルビット、結晶セルロース、二酸化� ��イ素などが、結合剤としては、たとえばポ� ��ビニルアルコール、ポリビニルエーテル、� ��チルセルロース、エチルセルロース、アラ� ��アゴム、トラガント、ゼラチン、シェラッ� ��、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、� ��ドロキシプロピルセルロース、ポリビニル� ��ロリドン、ポリプロピレングリコール・ポ� ��オキシエチレン・ブロックポリマー、メグ� ��ミンなどが、崩壊剤としては、たとえば澱� ��、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、炭� ��カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン� ��カルシウム、デキストリン、ペクチン、カ� ��ボキシメチルセルロース・カルシウムなど� ��、滑沢剤としては、たとえばステアリン酸� ��グネシウム、タルク、ポリエチレングリコ� ��ル、シリカ、硬化植物油などが、着色剤と� ��ては医薬品に添加することが許可されてい� ��ものが、矯味矯臭剤としては、ココア末、� ��ッカ脳、芳香散、ハッカ油、竜脳、桂皮末� ��どが、それぞれ用いられる。上記の成分は� ��それらの塩またはその溶媒和物であっても� ��い。

 たとえば経口製剤は、本発明の化合物に� ��形剤、さらに必要に応じてたとえば結合剤� ��崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤など� ��加えた後、常法によりたとえば散剤、細粒� ��、顆粒剤、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤な� ��とする。錠剤・顆粒剤の場合には、たとえ� ��糖衣、その他必要により適宜コーティング� ��ることはもちろん差支えない。シロップ剤� ��注射用製剤などの場合は、たとえばpH調整� �、溶解剤、等張化剤などとともに、また必� �に応じて溶解補助剤、安定化剤などを加え� �、常法により製剤化する。また、外用剤の� �合は、特に製法が限定されず、常法により� �造することができる。使用する基剤原料と� �ては、医薬品、医薬部外品、化粧品などに� �常使用される各種原料を用いることが可能� �あり、たとえば動植物油、鉱物油、エステ� �油、ワックス類、高級アルコール類、脂肪� �類、シリコン油、界面活性剤、リン脂質類� �アルコール類、多価アルコール類、水溶性� �分子類、粘土鉱物類、精製水などの原料が� �げられ、必要に応じ、pH調整剤、抗酸化剤、 キレート剤、防腐防黴剤、着色料、香料など を添加することができる。さらに、必要に応 じて血流促進剤、殺菌剤、消炎剤、細胞賦活 剤、ビタミン類、アミノ酸、保湿剤、角質溶 解剤などの成分を配合することもできる。こ の時の有効成分の担体に対する割合は、1~90� �量%の間で変動され得る。本発明に使用する� ��合物類、本発明に使用するペプチド類また� ��本発明に使用するポリヌクレオチド類を前� ��治療に使用する場合は、少なくとも90%以上� ��好ましくは95%以上、より好ましくは98%以上� ��さらに好ましくは99%以上に精製されたもの� ��使用するのが好ましい。

 本発明の化合物を含有する本発明の医薬� ��成物の有効な投与量は、たとえば症状の程� ��、年齢、性別、体重、投与形態、塩の種類� ��疾患の具体的な種類などに応じて異なるが� ��通常、成人の場合は体重60kg、1日あたり経� �投与では約30μg~10g、好ましくは100μg~5g、さ� �に好ましくは100μg~100mgをそれぞれ1回または� ��回に分けて投与し、注射投与では約30μg~1g� �好ましくは100μg~500mg、さらに好ましくは100μ g~30mgをそれぞれ1回または数回に分けて投与� �る。投与経路の効率が異なることを考慮す� �ば、必要とされる投与量は広範に変動する� �とが予測される。たとえば経口投与は静脈� �射による投与よりも高い投与量を必要とす� �と予想される。小児に投与される場合は、� �量は成人に投与される量よりも少ない可能� �がある。こうした投与量レベルの変動は、� �業界でよく理解されているような、標準的� �験的な最適化手順を用いて調整することが� �きる。

 本明細書において「治療」とは、一般的に� ��所望の薬理学的効果および/または生理学的 効果を得ることを意味する。効果は、疾病お よび/または症状を完全にまたは部分的に防� �する点では予防的であり、疾病および/また� ��疾病に起因する悪影響の部分的または完全� ��治癒という点では治療的である。本明細書� ��おいて「治療」とは、患者、特にヒトの疾� ��の任意の治療を含み、たとえば以下の(a)~(c) の少なくとも一つの治療を含む: 
(a)疾病または症状の素因を持ちうるが、まだ 持っていると診断されていない患者において 、疾病または症状が起こることを予防するこ と;
(b)疾病症状を阻害する、すなわち、その進行 を阻止または遅延すること;
(c)疾病症状を緩和すること、すなわち、疾病 または症状の後退、消失、または症状の進行 の逆転を引き起こすこと。

 たとえば、ADの臨床学的症状としては、� �行性見当識障害、記憶喪失、および失語症� �挙げられ、最終的には、無能力、言語喪失� �よび無動が起こる。ADの病理学的徴候として は、たとえば、神経原繊維変化、老人斑およ びアミロイド血管障害の存在が挙げられる。 ADの進行を予防するとは、ADの臨床学的症状� �よび/または病理学的徴候の開始もしくはそ� ��以上の進行を予防することを意味すると解� ��される。たとえば、ADの臨床学的症状また� �病理学的徴候を有していない患者は、臨床� �的症状または病理学的徴候の進行を予防す� �ことができる。さらに、軽症のADを患う患者 は、それより重症のAD形態を発生するのを予� ��することができる。ADの進行を遅延させる� �は、AD関連症状および/または病理学的徴候� �開始時点を遅らせること、あるいは、臨床� �的症状および病理学的徴候の進行速度によ� �決定されるADの進行速度を遅くすることを意 味すると解釈される。ADの進行を逆転させる� ��は、AD症状の重症度を軽減する、すなわち� �患者のAD症状を重症から、より軽症へと変化 させることを意味すると解釈される。その際 、軽症への変化は、臨床学的症状または病理 学的徴候の減少により示される。

 患者のAD診断は、公知の種々の方法を用� �て実施することができる。典型的には、臨� �および病理学的評価を組み合わせて、ADを診 断する。たとえば、ADの進行または重症度は� ��ミニ精神状態検査(Mini Mental State Examination) (MMSE)(Mohsら(1996)Int Psychogeriatr 8:195-203)、アル� ��ハイマー病評価スケール-認識要素(ADAS-cog)(G alaskoら(1997)Alzheimer Dis Assoc Disord, 11 suppl 2: S33-9)、アルツハイマー病共同研究-日常生活� �作スケール(ADCS-ADL)(McKhannら(1984)Neurology 34:939 -944)、国立神経伝達障害研究所(National Institut e of Neurologic Communicative Disorders)および発作- アルツハイマー病および関連障害協会(Stroke-A lzheimer’s Disease and Related Disorders Association) (NINCDS-ADRDA)基準(Folsteinら(1975)J Psychiatr Res 12: 189-198、McKhannら(1984)Neurology 34:939-944、)を用い て、判定することができる。さらに、脳の様 々な領域について評価し、老人斑や神経原繊 維変化の頻度の推定を可能にする方法を用い ることができる(Braakら(1991)Acta Neuropathol 82:23 9-259;Khachaturian(1985)Arch Neuro 42:1097-1105;Mirraら(1 991)Neurology 41:479-486;ならびに、Mirraら(1993)Arch� �Pathol Lab Med 117:132-144)。

 本発明は、本発明の方法に用いるための� ��査キットとして、γ-セクレターゼによるc-Me tのプロセシングを測定するための検査キッ� �を提供する。

 当該キットには、γ-セクレターゼまたは� ��れを含む生物学的組成物と、c-Metを含む生� �学的組成物とが少なくとも含まれる。さら� �、当該キットには、c-Met以外のγ-セクレター ゼの基質(たとえば、APPおよび/またはノッチ) 、またはそれを含む生物学的組成物などを含 んでいてもよい。当該キットには、複数のγ- セクレターゼの基質を含むことが好ましく、 c-Metに加え、APPおよび/またはノッチが含まれ ることが好ましい。

 さらに、当該キットには、γ-セクレター� ��によるc-Metのプロセシングを検出する技術� �対応する器具や当該技術で使用される試薬� �説明書などが含まれていてもよい。γ-セク� �ターゼによるc-Metのプロセシングを検出する 技術としては、たとえばイムノブロッティン グ、ウエスタンブロッティング技術などが挙 げられる。これらの技術で使用される器具と しては、たとえば、反応容器、ブロッティン グメンブレンなどが挙げられ、当該技術で使 用される試薬としては、たとえば、緩衝液、 培養液、抗c-Met抗体などが挙げられる。

 当該キットにより、γ-セクレターゼによ� ��c-Metのプロセシングを測定することができ� �その結果、候補化合物がγ-セクレターゼに� �るc-Metのプロセシングに作用するか否かを評 価することができる。したがって、当該キッ トを、γ-セクレターゼによるc-Met のプロセ� �ングに影響を与える化合物をスクリーニン� �するための検査キットに代用することが可� �であり、本発明の検査キットには γ-セクレ ターゼによるc-Metのプロセシングを測定する� ��めの検査キットと同一構成からなるγ-セク� ��ターゼによるc-Met のプロセシングに影響を 与える化合物をスクリーニングするための検 査キットが含まれる。

 また、本発明は、c-Metのプロセシングの� �定、γ-セクレターゼ阻害剤をスクリーニン� �する方法またはテストする方法のための当� �キットの使用も含む。

 
Examples
 以下、さらに実施例、製造例により本発明� ��さらに詳細に説明するが、本発明はこれら� ��例に限定されるものではなく、当業者への� ��全な開示を提供するために示すものである� ��また、記載されたこれら実験が全てまたは� ��一行われた実験であることを意味または暗� ��するものでもない。ここで使用された数値( たとえば、量、温度、濃度など)に関して正� �さを保証するための努力がなされたが、あ� �程度の実験誤差および偏差が考慮され、本� �明の範囲を逸脱しない範囲で変化させても� �い。