本发明涉及医药技术领域。 具体地说， 本发明提供用于治疗心 脑血管的药物丹参酮 II A磺酸钠水合物。 本发明还涉及本发明丹参 酮 II A磺酸钠 7j合物的制备和在心脑血管病治疗中应用本发� ��丹参 酮 II A磺酸钠 7j合物的用途或方法。 背景技术

丹参酮 II A ( tanshinonell A )是从我国中药丹参中提取得到的 (化学学报, 1978， 3: 199-206 )。丹参酮 II A磺酸钠是由丹参酮 II A ( Tanshinone ll A ), 经磺化后得到的， 药物的水溶性强， 疗效比丹 参酮 II A强。丹参酮 II A磺酸钠能明显抑制高钟引起的钙内流增加， 与传统的钙拮抗剂维拉帕米有相似的作用。 丹参酮 II A磺酸钠通过 对 KATP、 KCa的钾通道开放和钙通道阻滞的协同或联合作 用， 可 明显减少血管平滑肌上的自发电活动， 引起血管舒张， 在心血管疾 病的治疗中具有重要的应用价值。 到目前为止， 国内外公开的文献 仅报道了丹参酮 II A磺酸钠 ( Tanshinone II A Sulfonate sodium, C ₁₉ H ₁₇ Na0 ₆ S, 分子量： 396.39 ) ， 尚没有报道丹参酮 II A磺酸钠结 晶水合物及其制备方法和用途。 发明内容

本发明的发明人在研究中令人意外地发现， 含有结晶水的丹参 酮 II A磺酸钠 (即， 丹参酮 II A磺酸钠水合物）的引湿性远低于不含 结晶水的丹参酮 II A磺酸钠，并且含有结晶水的丹参酮 II A磺酸钠比 不含结晶水的丹参酮 II A磺酸钠更能稳定的存在， 便于储存和运输， 并在室温下具有良好的水溶性， 更易于制成水溶性的制剂。 此外， 与丹参酮 II A磺酸钠无水物相比，本发明的丹参酮 II A磺酸钠水合物 具有良好的滑动性， 从而改善制剂的可操作性。 基于上述发现 , 本― 发明的发明人完成了本发明。

一方面， 本发明提供丹参酮 Π A磺酸钠结晶水合物， 其分子式 为 C ₁₉ H ₁₇ Na0 ₆ S'nH ₂ 0, 其中 n=0.5 ~ 4.0。

在一个实施方案中， 本发明提供丹参酮 II A磺酸钠水合物， 其 分子式为 C ₁₉ H ₁₇ Na0 ₆ S'nH ₂ 0， 其中 n=0.5 ~ 3.0或 n=0.5 ~ 2.5。

在一个具体实施方案中，本发明提供丹参酮 II A磺酸钠水合物， 其中 n=2.5。

在另一个具体实施方案中， 本发明提供丹参酮 II A磺酸钠水合 物， 其中 η=1·5。

在另一个具体实施方案中， 本发明提供丹参酮 II Α磺酸钠水合 物， 其中 n=0.5。

本发明的丹参酮 II A磺酸钠水合物可具有不同的晶型， 例如， 从甲醇 -水、 乙醇-水或丙酮 -水为结晶或重结晶体系而制备出来的丹 参酮 II A磺酸钠 0.5、 1.5、 2.5、 3.5水合物的 X-射线粉末衍射图谱 可以有所不同。

另一方面， 本发明提供具有粉末 X射线衍射特征的丹参酮 II A 磺酸钠 1.5水合物。

在一个实施方案中，利用粉末 X射线衍射法测量，在衍射角 2Θ ( 3-80。 )测量范围内， 本发明的丹参酮 II A磺酸钠 0.5水合物可以 在包括如下 2Θ值的位置具有相应的特征值： 约 3.7， 7.6, 9.0， 9.6， 15.3, 22.0， 26.0, 27.6, 29.8。

在另一个实施方案中， 利用粉末 X射线衍射法测量， 在衍射角 2Θ ( 3-80。 )测量范围内， 本发明的丹参酮 II A磺酸钠 1.5水合物可 以在包括如下 2Θ值的位置具有相应的特征值： 约 3.7， 6.2, 7.3, 8.8, 9.2, 11.5, 14.7, 15.4, 17， 17.7, 20.6， 21.2, 25.9, 27.1 , 27.6, 在另一个实施方案中， 利用粉末 X射线衍射法测量， 在衍射角 2Θ ( 3-80。 )测量范围内， 本发明的丹参酮 II A磺酸钠 2.5 7j合物可 以在包括如下 2Θ值的位置具有相应的特征值： 约 3.7， 4.3, 6.2, 7.3, 8.8, 9.3, 11.5, 14.7, 15.4, 17, 17.7, 21.2, 25.9, 27.3, 27.6, 29.4。

再一方面， 本发明提供本发明丹参酮 II A磺酸钠结晶水合物的 制备方法， 该方法包括：

方法 A: 将丹参酮 ΠΑ于反应容器中， 加醋酸、 醋酐、 丙酸、 丙酸酐、 C1-C6低取代卤代烃， 包括二氯曱烷、 二氯乙烷、 氯仿、 四氯乙烷中的一种或者数种， 搅拌， 加醋酸、 醋酐、 丙酸、 丙酸酐 中的一种或者数种的硫酸或发烟硫酸或氯磺酸 的溶液，滴加完毕后， 在 30。C以下搅拌 0.1-6 h， 将反应物慢慢倒入水中， 加氯化钠、 碳酸 钠、 碳酸氢钠、 氢氧化钠一种或数种的溶液（优选其饱和溶液 ） ， 待沉淀充分析出， 过滤， 沉淀物用饱和氯化钠溶液或饱和硫酸钠溶 液洗一次或数次， 再用水或 C1-C6低分子醇， 包括甲醇、 乙醇、 异 丙醇的一种或数种洗一次或数次， 过滤， 用无水乙醇回流除去残存 的氯化钠， 浓缩， 所得的固体用水、 C1-C6低分子醇， 包括曱醇、 乙醇、 异丙醇等， C3-C6低级酮， 其中包括丙酮、 丁酮、 异己酮等， C2-C8的低级酯，其中包括醋酸丁酯、乙酸乙酯� ��甲酸乙酯等， C1-C6 低取代卤代烃， 包括二氯曱烷、 二氯乙烷、 氯仿等， C2-C6低级醚， 包括乙醚、曱乙醚、异丙醚等， C5-C10的直链或支链烷烃或环烷烃， 包括戊烷、 正己烷、 石油醚、 环己烷等， 芳香烃， 其中包括苯， 曱 苯等中的一种或几种， 进行结晶， 放置， 冷却， 待结晶析出， 过滤， 干燥， 得丹参酮 II A磺酸钠结晶水合物， 这种结晶过程进行一次或 数次， 以便获得纯化更高的产物； 或者

方法 B: 将丹参酮 II A于反应容器中， 加醋酸、 醋酐、 丙酸、 丙酸酐、 C1-C6低取代 ή代烃， 包括二氯曱烷、 二氯乙烷、 氯仿、 四氯乙烷中的一种或者数种， 搅拌， 加 C1-C6低取代卤代烃， 包括 二氯甲垸、 二氯乙烷、 氯仿、 四氯乙烷等中的一种或者数种的氯磺 酸溶液， 滴加完毕后， 在 30。C以下搅拌 0.1-6h， 将反应物慢慢倒入 水中， 分离有机层， 所得的水溶液层中加氯化钠、 碳酸钠、 碳酸氢 钠、 氢氧化钠一种或数种的饱和溶液， 放置， 待沉淀充分析出， 过 滤， 沉淀物用饱和氯化钠溶液或饱和硫酸钠溶液洗 一次或数次， 再 用水或 C1-C6低分子醇， 包括甲醇、 乙醇、 异丙醇等的一种或数种 洗一次或数次， 所得的固体用水、 C1-C6低分子醇， 包括曱醇、 乙 醇、 异丙醇等， C3-C6低级酮， 其中包括丙酮、 丁酮、 异己酮等， C2-C8的低级酯，其中包括醋酸丁酯、乙酸乙酯� ��甲酸乙酯等， C1-C6 低取代 ¾代烃， 包括二氯甲烷、 二氯乙烷、 氯仿等， C2-C6低级醚， 包括乙醚、 甲乙醚、异丙醚等， C5-C10的直链或支链烷烃或环烷烃， 包括戊烷、 正己烷、 石油醚、 环己垸等， 芳香烃， 其中包括苯， 曱 苯等中的一种或几种， 进行结晶， 放置， 冷却， 待结晶析出充分， 过滤， 干燥， 得丹参酮 II A磺酸钠结晶水合物， 这种结晶过程可进 行一次或数次。

在一个实施方案中， 制备丹参酮 II A磺酸钠水合物所用的结晶 或重结晶溶剂优选是水、 曱醇、 乙醇、 异丙醇， 丙酮、 丁酮、 异己 酮、 乙酸甲酯、 乙酸乙酯、 二氯曱烷、 氯仿、 乙醚、 异丙醚、 石油 醚和苯中的一种或几种。

本发明的产物的干燥方式可以为在不同温度（ 如 20-100。C )、 干燥时间 （1小时到数日）、 或附有其它干燥剂 （包括硅胶， 五氧化 二磷、 无水氯化钙、 无水硫酸钠等） 的环境条件下、 或使用常压或 减压的方式对最后的产物进行干燥。其干燥温 度优选在 60。C或以内。

再一方面， 本发明提供药物组合物， 其包含本发明的丹参酮 II A磺酸钠水合物， 以及药学上可接受的载体。

在一个实施方案中， 本发明的药物组合物被制备成注射用冻干 粉针制剂、 无菌分装粉针制剂、 大输液制剂、 小水针注射剂以及经 胃肠道给药的制剂等制剂。

用于经肠道给药制剂包括片剂、 胶囊、 颗粒剂， 其中可含有药 学上可接受的填充剂， 如淀粉、 变性淀粉、 乳糖、 微晶纤维素、 环 糊精、 山梨醇、 甘露醇、 磷酸钙、 氨基酸等； 药学上可接受的崩解 剂， 如淀粉、 变性淀粉、 微晶纤维素、 羧甲基淀粉钠、 交联聚乙烯 吡咯烷酮、 低取代羟丙基纤维素、 表面活性剂； 药学上可接受的润 湿剂和粘合剂， 如胶化淀粉、 曱基纤维素、 羧曱基纤维素、 乙基纤 维素、 聚乙烯吡咯烷酮、 海藻酸及其盐； 药学上可接受的润滑剂和 助流剂， 如硬脂酸、 硬脂酸镁、 聚乙二醇 4000 - 8000、 滑石粉、 微 粉硅胶、 十二烷基硫酸镁等； 药学上可接受的甜味剂和香精， 如阿 斯巴甜、 甜蜜素、 糖精钠、 三氯蔗糖、 食用香精等。

本发明的丹参酮 II A 磺酸钠水合物可以被制备成冻干粉针制 剂， 例如通过如下方法制备： 取丹参酮 II A磺酸钠水合物， 可以加 药学上可接受的助溶剂、 冻千支持剂或辅形剂、稳定剂、 注射用水， 搅拌使溶解，若需要，可用药学上可接受的酸 碱调节 pH为 3.5 ~ 8.5, 加活性碳0.005 ~ 0.5% ( \¥/¥ )搅拌15 ~ 451^11， 过滤， 补水， 无菌 过滤， 按 5 ~ 80mg /瓶（以主药计）分装， 冷冻干燥， 压塞， 得成品。

本发明的丹参酮 II A磺酸钠水合物还可以被制备成小容量注射 液， 例如通过如下方法制备： 丹参酮 II A磺酸钠水合物加注射用水 和药学上可接受的附加剂， 例如： 药学上可接受的 pH调节剂、 药 学上可接受的抗氧剂、 惰性气体， 过滤、 除菌制成灭菌小容量注射 液， 其 pH值在 3.5 ~ 8.5之间。

所述药学上可接受的冻干支持剂或辅形剂可以 含有乳糖、 葡萄 糖、 甘露醇、 山梨醇、 木糖醇、 右旋糖酐、 氨基酸或其盐 （包括甘 氨酸、 牛磺酸、 精氨酸等）、 磷酸二氢钠、 磷酸氢二钠、 去氧胆酸钠 等的一种或几种。 所述药学上可接受的 pH调节剂可以是药学上可接受的无机酸 或有机酸、 无机碱或有机碱， 也可以是广义的路易斯酸或碱， 可以 含有一种或者几种， 可以是盐酸、 磷酸、 丙酸、 醋酸及醋酸盐、 如 醋酸钠等， 乳酸以及乳酸药用盐、 枸橼酸药用盐、 碳酸钠、 碳酸氢 钠、 碳酸氢钾、 氢氧化钠、 氢氧化钾、 磷酸盐、 酒石酸及其药用盐、 硼砂、 硼酸、 丁二酸、 己酸、 己二酸、 反丁烯二酸、 顺丁烯二酸、 三羟基氨基甲烷、 二乙醇胺、 乙醇胺、 异丙醇胺、 二异丙醇胺、 2- 氨基 -2- (羟曱基） 1， 3-丙二醇胺、 1， 2-己二胺、 N-曱基葡萄胺、 二异丙胺以及它们的盐， 多羟基羧酸及药用盐， 如葡萄糖醛酸、 葡 萄糖酸、 乳糖酸、 苹果酸、 苏糖酸、 葡庚糖酸、 氨基酸及氨基酸盐 等中的一种或者几种。

所述药学上可接受的抗氧剂和稳定剂可以是亚 硫酸、亚硫酸盐、 亚硫酸氢盐、 焦亚硫酸盐、 连二亚硫酸盐、 硫代硫酸盐， 有机硫化 合物硫脲、 谷胱甘肽、 二巯基丙醇、 巯基乙酸及盐、 硫代乳酸及盐、 硫代二丙酸及盐、 苯酚类化合物， 如没食子酸及盐、 咖啡酸、 咖啡 酸盐、 阿魏酸、 阿魏酸盐、 二叔丁基对苯酚、 2， 5-二羟基苯曱酸、 2， 5-二羟基苯甲酸盐、 苯 或其衍生物、 水杨酸或其盐； 氨基酸以 及其盐； 抗坏血酸及抗坏血酸盐、 异抗坏血酸及异抗坏血酸盐、 烟 酰胺、 酒石酸、 硝酸盐、 磷酸盐、 醋酸药用盐、 柠檬酸盐、 EDTA 及 EDTA盐、 如 EDTA二钠、 EDTA四钠、 N -二（2 -羟乙基）甘 氨酸、 α-环糊精、 Ρ-环糊精、 γ-环糊精、 葡糖基-环糊精（ G _r CYD )、 麦芽糖基 -β-环糊精、 羟丙基 Ρ-环糊精、 2-羟丙基 Ρ-环糊精

( 2-HP-P-CYD )、 3-羟丙基 β-环糊精（3-HP-P-CYD )、 磺丁醚 -β-环 糊精（ SBE-p-CD )， 如（ SBE ₇ -p-CD )、 SBE ₄ _p_CD等中的一种或者 几种。

所述药学上可接受的助溶剂可以是葡萄糖、 木糖醇、 山梨醇、 甘露醇、 烟酰胺、 N-甲基葡萄胺、 N-乙基葡萄胺、 磷酸及药学上可 接受的磷酸盐（可以是磷酸二氢钠、 磷酸氢二钠、 磷酸钠、 磷酸二 氢钾等）、 乳酸、 乳酸钠、 枸橼酸、 枸橼酸钠、 多羟基羧酸及药用盐 (如葡萄糖醛酸、 葡萄糖酸、 乳糖酸、 苹果酸、 苏糖酸、 葡庚糖酸 等或其药用盐）、 氨基酸及氨基酸盐（可以是盐酸精氨酸、 盐酸赖氨 酸等）、 盐酸、 硫酸、 酒石酸、 吐温 20-80、 泊洛沙姆（包括泊洛沙 姆 124, 188， 237, 338, 407等）、 聚乙二醇 200 - 2000、 乙醇、 乙 二醇、 丙三醇、 葡糖基-环糊精（ )、 麦芽糖基 -β-环糊精、 羟 丙基 Ρ-环糊精、 2-羟丙基 β-环糊精（ 2-HP-P-CYD )、 3-羟丙基 P-环 糊精（ 3-HP-p-CYD )、 磺丁醚 -β-环糊精（SBE-P-CD ), 如

( SBE ₇ -P-CD )> SBE ₄ -P-CD等、 以及水等中的一种或者几种。

所述药学上可接受的等渗调节剂可以是葡萄糖 、 果糖、木糖醇、 山梨醇、 甘露醇、 转化糖、 麦芽糖、 右旋糖酐、 氯化钠、 氯化钾、 乳酸钠等中的一种或几种。

本发明的丹参酮 II A磺酸钠水合物可作为钙拮抗剂用于预防或 治疗人和哺乳动物的冠心病、 心绞痛、 心肌梗死， 心律失常、 缺血 性脑病， 包括脑血栓、 脑栓塞； 末梢循环障碍疾病如各种动脉闭塞 症、 脉管炎、 糖尿病引起的微循环障碍、 高血压、 高脂血症等疾病。

再一方面， 本发明提供本发明的丹参酮 II A磺酸钠水合物在制 备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防人 和哺乳动物的冠心病、 心绞痛、 心肌梗死、 心律失常、 缺血性脑疾病、 末梢循环障碍疾病， 包括各种动脉闭塞症、 脉管炎、 糖尿病引起的微循环障碍、 高血压 或高脂血症。

可替代地， 本发明提供使用本发明的丹参酮 II A磺酸钠水合物 预防或治疗上述疾病的方法， 其包括将预防或治疗有效量的本发明 的丹参酮 II A磺酸钠水合物给予有此需要的受试者。

用量用法： 一般情况下， 于成人， 肌内注射： 5-80mg/次， 一日 1-2次。 静脉注射： 5-80mg/次， 以 25%葡萄糖注射液 20ml稀释。 静脉滴注： 5-80mg,以 5%葡萄糖注射液或 0.9%氯化钠注射液 250 - 500ml稀释， 一日 1-2次。 儿童减半量以上使用。 经胃肠道给药用 量用法： 10 ~ 70 kg体重的人或动物， 一般情况下 10 ~ 200mg/天， 分 1-3次给药； 儿童减半量以上使用。

参照中国药典（2005版）要求进行的引湿性试� �证明， 本发明

' 另外， 参照中国药典（2005版）要求进行的加速稳定� �试验证 明，本发明的丹参酮 II A磺酸钠结晶水合物比丹参酮 II A磺酸钠无水 物具有更好的存储稳定性， 因此能更长期地稳定存储。

本发明的丹参酮 II A磺酸钠水合物为红色或砖红色或棕红色结 晶性粉末。 不同于丹参酮 II A磺酸钠无水物因潮解导致在处理时要 隔绝空气防止粘连等， 本发明的丹参酮 II A磺酸钠结晶水合物具有 良好的滑动性， 从而改善制剂的可操作性； 并使制备的固体制剂具 有良好的溶出性能， 使得其容易被吸收进入血液循环， 改善生物利 用度， 并有利于快速发挥其作用。 附图说明

图 1为丹参酮 Π Α磺酸钠 2.5水合物的热分析图谱。

图 2为丹参酮 II A磺酸钠 1.5 7j合物的热分析图谱。

图 3为丹参酮 II A磺酸钠 0.5水合物的热分析图谱。

图 4为丹参酮 II A磺酸钠 0.5 7j合物的粉末 X衍射图。

图 5为丹参酮 II A磺酸钠 1.5水合物的粉末 X衍射图。 具体实施方式 热分析方法

测试条件： Setaram公司 Setsys 16， NETZSCH STA449C , 样 品量 5mg左右， 升温速度： lOK/min, N ₂ 流速： 50ml/min, 温度： 一般为室温 ~ 400 'C左右。

令人意外的是，特征性的，本发明的水合物的 热分析 (TG-DTA 或者 TG-DSC)图谱的失重平台下具有对应的吸热峰， 热分析图谱显 示出丹参酮 II A磺酸钠的结晶水合物， 如其 0.5水合物、 1.5、 2.5水 合物等。 粉末 X衍射法

在武汉理工大学材料测试中心利用 D/ΜΧ-ΠΙΑ X射线衍射仪， 衍射角 2Θ, 扫描范围 3-80°, 测定了丹参酮 II A磺酸钠水合物的粉 末 X射线衍射图。 引湿试验

将丹参酮 II A磺酸钠水合物和丹参酮 II A磺酸钠无水物样品， ： 取丹参酮 Π Α磺酸钠无水物和本发明的水合物约 5 _g ， 置于干燥恒重 的表面亚中， 精密称重， 25。C、 相对湿度为 75 %， 分别于试验 0小 时和 48小时取样， 计算引湿增重的百分率。 结果显示， 丹参酮 Π Α 磺酸钠无水物引湿性比本发明的丹参酮 II A磺酸钠水合物高得多。 表 1. 引湿试验结果

取样时间（48小时) 与 0小时相比， 增重。 /。

丹参酮 II A磺酸钠 2.57 合物 1.25

丹参酮 II A磺酸钠 1.5 7J合物 4.12

丹参酮 II A磺酸钠 0.5 7J合物 7.96

丹参酮 II A磺酸钠无水物 11.43 稳定性实验

在 RH75%、 30°C避光的条件下， 将丹参酮 II A磺酸钠的结晶水 合物和丹参酮 Π A磺酸钠的无水物样品分别密闭与西林瓶中进� �加 速稳定性试验， 色谱条件： 色谱柱： Kromasil C ₁₈ (250mmx4.6mm, 5μιη) , 流动相： 曱醇 -0.0 ² mol/L 磷酸二氢钾溶液（磷酸调节 PH=4 )(60: 40)， 检测波长 271nm， 流速 lml/min， 测定有关物质增 加的幅度（结果见表 1 ~ 2 ) 。

表 2.加速稳定性试验结果

取样时间 (6月） 与 0月相比， 有关物质的倍数 丹参酮 II A磺酸钠 2.57J合物 0.31

丹参酮 II A磺酸钠 1.5 7j合物 0.25

丹参酮 II A磺酸钠 0.5 7j合物 0.34

丹参酮 II A磺酸钠无水物 1.21 表中结果证明， 本发明的丹参酮 IIA磺酸钠结晶水合物比丹参 酮 II A磺酸钠无水物更稳定得多。 实施例 1: 丹参酮 II A磺酸钠 2.5 7 合物的制备 将丹参酮 II A (市场上购买） 4克、 冰醋酸 30ml, 醋酐 45 ml 于干燥的三颈烧瓶中，搅拌使溶解， 滴加 36 ml体积比 1/1的冰醋酸 -浓硫酸的混合液， 控制温度 25。C以下， 搅拌反应 0.5-3小时， 将反 应物慢慢倒入水中， 加 20ml饱和氯化钠溶液， 待固体析出完毕， 抽 滤， 沉淀物用饱和氯化钠溶液洗 2次， 冷 95%乙醇洗 2次， 抽滤， 固体物用曱醇 5ml、 乙醇 12ml、 氯仿 10ml、 乙醚 20ml、 水 2ml的 溶剂进行重结晶， 置 o°c以下放置， 待结晶析出充分， 抽滤， 所得 固体再以曱醇 10ml氯仿 15ml-乙醚 15ml-水 1ml的溶剂重结晶， 置 0。C以下放置， 待结晶析出充分， 抽滤， 将结晶于 50。C左右千燥 6 小时，得红色结晶约 0.6g，熔点： 205-207°C ( ELECTROTHERMAL MELTING POINT APPARATUS, 未校正）； ^H2O _max 200、 228nm、 256nm、 271nm； 核磁共振氢谱 ^! Η-ΝΜΚ(300ΜΗζ , DMSO) δ7.86(1Η), δ7.57(1Η), δ3.08(2Η), δ2.33(3Η ), δ1.73(2Η), δ1.62(2Η), δ1.29(6Η), δ3.4的水峰在经重水交换后的氢 i普中消失； 核磁共振碳 谱 ( ¹³ C-NMR)总碳数 19个， ¹³ C-NMR(300MHz， DMSO): 6182.9, 6175.9, 5158.7, 6154.6, 6150.1, 6143.5, 6134.1, δ127.6, 6127.1 , 6120.6, 5120.3, 6117.5, 638.0, 635.0, δ32·1 ( 2个 C )， 630.2, δ19·4， 610.0(ppm); DEPT谱: 伯碳 3个： δ32·1 ( 2个 C ), 610.0; 仲碳 3 个： 638.0, 630.2, 619.4; 叔碳 2个。 ESI-MS: m/z: 396； EI: m/z: [M-Na]373, [M+Na]419; 红外光谱： v ^KBr _max αιΓ^Αό (宽）、 2958、 2929、 2867、 1674、 1644、 1578、 1463、 1429、 1364、 1331、 1217、 1144、 1120、 1076 1040、 923、 841、 709、 654； 卡氏法测定水分 为 10.46 %， 热分析： 平台失重约 10.26 %， 这与样品含有 2.5个结 晶水的结果（理论值 10.21 % )在误差范围内 （见附图 1 ) ， 元素分 析 理论值： C 51.70%, H5.02%, Na5.21%, S7.26%; 实测值： C 51.54%, H5.16%, Na5.08%, S7.39%。 实施例 2： 丹参酮 II A磺酸钠 3水合物的制备 按上法操作， 将结晶溶剂改为用乙醇、 氯仿、 乙醚、 水， 所用 比例近似上例， 将结晶固体物质在 30。C左右干燥 4小时， 得橙红色 结晶约 0.5g,熔点： 188-193°C(未校正）； k ^mo _ma 200、 228nm、 256nm、 271nm, ESI-MS: m/z: 396; EI: m/z: [M-Na]373, [M+Na]419; 卡氏法测定水分为 14.07 %， 热分析： 平台失重约 13.22 % (理论值 13.28 % ) 。 实施例 3: 丹参酮 II A磺酸钠无水物的制备 (对比例） 将实施例 2的物质在 80。C左右，在五氧化二磷存在下真空干燥 24-48小时左右或以上，得其无水物， 卡氏法测定无水物的水分含量 一般低于 1.3%。 实施例 4: 丹参酮 II A磺酸钠 1.5水合物的制备

将丹参酮 II A (市场上购买） 4 克、 丙酸 30ml， 丙酸酐 45ml 于三颈烧瓶中， 搅拌， 滴加 36ml体积比 1/1的冰醋酸 -浓硫酸的混 合液， 控制温度 25。C以下， 搅拌反应 0.5-3小时， 将反应物慢慢倒 入水中， 加 75ml饱和氯化钠溶液， 待固体析出完毕， 减压过滤， 沉 淀物用饱和氯化钠溶液洗 2次， 冷 75%乙醇洗， 抽滤， 所得固体用 无水乙醇回流，抽滤， 液体减压浓缩， 浓缩后的剩余物用甲醇 16ml、 氯仿 10ml、 乙酸乙酯 25ml、 7j 1.5ml、 丙酮 4ml重结晶， 置 0。C以 下放置， 待沉淀析出充分后， 抽滤， 固体并随后以近似比例的上述 溶剂再重结晶 1次， 置 o。c以下放置， 待沉淀析出充分后， 抽滤， 所得固体在 60。C左右真空干燥 4小时左右， 得红色结晶约 0.5 _g ; 熔 点： 214。C 分解（未校正）， 紫外光谱： 取其 5 _g /ml的水溶液， 照 分光光度法测定， 发现在波长 200nm、 228nm、 256nm与 271nm 处有最大吸收，以及 280nm的特征吸收；红外光谱: \^ _max cm ^! 3446 (宽）、 2959、 2932、 2867、 1674、 1646、 1578、 1537、 1480、 1463、 1429、 1364、 1331、 1219、 1144、 1120、 1077、 1042、 923、 844、 709、 653； 核磁共振氢谱 ^-NMRpOOMHz, DMSO) δ7·84(1Η)， δ7.54(1Η), δ3.06(2Η), δ2.34(3Η )， δ1.72(2Η)， δ1·62(2Η)， δ1.29(6Η) , 63.4的 7j峰在经重水交换后的氢谱中消失;核磁共振碳 谱 ("C-NMR) 总碳数 19个， ¹³ C-NMR(300MHz， DMSO): 6182.8, 6175.7, δ158.6， 6154.6, 6150.0, 6143.4, 6134.0, 6127.6, 6127.1 , 6120.6, 6120.3, 6117.5, 538.0, 635.0, δ32·1 ( 2个 C )， 630.1 , 619.3, 610.0(ppm); DEPT讲：伯碳 3个： δ32·1(2个 C), 610.0;仲碳 3个： δ38.0, 630.1, 619.3； 叔碳 2 个。 ESI-MS: m/z: 396； EI: m/z: [M-Na]373, [M+Na]419;卡氏法测定水分为 6.62 %，热分析：平台失重约 5.91 %， 这与样品含有 1.5个结晶水的结果（理论值 6.38 % )在误差范围内 (见附图 2)， 元素分析 理论值： C 53.90%, H4.76%, Na5.43%, S7.57%; 实测值： C 53.72%, H4.91%, Na5.27%, S7.43% ₀ 粉末 X射线衍射特征显示在附图 5中。 实施例 5: 丹参酮 II A磺酸钠 0.5水合物的制备 将丹参酮 II A (市场上购买） 3.5克、 丙酸 30ml， 丙酸酐 45 ml 于三颈烧瓶中， 搅拌， 滴加 36 ml体积比 1/1的丙酸 -浓硫酸的混合 液， 控制温度 25。C以下， 搅拌反应 0.5-3小时， 将反应物慢慢倒入 水中， 搅拌中緩慢滴加饱和碳酸钠溶液 5ml， 再加 60ml饱和氯化钠 溶液， 待固体析出完毕， 抽滤， 沉淀物用饱和氯化钠溶液洗 2次， 冷 50%乙醇洗， 抽滤， 结晶用无水乙醇回流， 过滤， 浓缩， 高度浓 缩物用甲醇 15ml、 氯仿 20ml、 乙酸乙酯 10ml、 水 lml结晶， 置 0°C 以下放置， 待沉淀析出充分后， 抽滤， 固体并随后以近似比例的上 述溶剂再重结晶 1次， 置 0。C以下放置， 待沉淀析出充分后， 抽滤， 所得固体在 60。C左右、 五氧化二磷存在下真空干燥 6小时左右， 得 红色结晶约 0.4 _g ; 熔点： 195-198'C 分解（未校正） ， 紫外光谱： 取其 5 g/ml的水溶液，照分光光度法测定， ^H2Q _max 200nm、 228nm、 256nm、 271nm； 核磁共振氢谱 iH-NMRpOOMHz， DMSO) δ7·85(1Η)， δ7.56(1Η), δ3.07(2Η), δ2.34(3Η), δ1·72(2Η)， δ1.62(2Η), δ1.29(6Η) ， 63.4 的水峰在经重水交换后的氢谱中消失； 核磁共振 碳谱 ( ¹³ C-NMR) 总碳数 19个， ¹³ C-NMR(300MHz， DMSO): 6182.9, 6175.9, 6158.7, 6154.6, 6150.1, 6143.5, 6134.1, 6127.6, 6127.1, 6120.6, 6120.3, 6117.5, 638.0, 635.0, δ32·1(2个 C)， 630.2, δ19.4， 810.0(ppm); DEPT谱： 伯碳 3个： δ32·1 ( 2个 C )， 610.0; 仲碳 3 个： 638.0, 630.2, 619.4; 叔碳 2个。 ESI-MS: m/z: 396； EI: m/z:

[M-Na]373, [M+Na]419; 红外光谱: v ^KBr _max cm 3486 (宽）、 2933、 1672、 1620、 1574、 1536、 1460、 1330、 1216、 1040、 922， 842、 656,卡氏法测定水分为 2.57 %，热分析 TG-DSC:平台失重约 2.14 %， 这与样品含有 0.5个结晶水的结果（理论值 2.22 % )在误差范围内 (见附图 3 ) ; 元素分析 理论值： C 56.29%, H4.48%, Na5.67%, S7.91%; 实测值：理论值： C 56.15%, H4.62%, Na5.48%, S7.76%. 粉末 X射线衍射特征显示在附图 4中。 实施例 6: 丹参酮 II A磺酸钠 1.5水合物的制备 将丹参酮 II A (市场上购买） 4克、 干燥的二氯曱烷 250ml和 干燥的四氯乙烷 50 ml于三颈烧瓶中， 搅拌使溶解， 滴加 6.5ml氯 磺酸 (先溶于 40ml干燥的二氯曱烷中）， 控制温度 10。C以下， 搅袢， TLC监控反应到反应物斑点基本消失， 将反应物慢慢倒入 40ml水 中， 分离出水层， 搅拌中緩慢滴加饱和碳酸钠溶液， 至 PH到 5左 右， 置 0。C以下放置， 待沉淀析出充分后， 抽滤， 所得固体用甲醇 约 16ml、 氯仿约 10ml、 乙酸乙酯约 25ml、 水约 lml、 丙酮约 2ml 进行结晶， 置 o。c以下放置， 待沉淀析出充分后， 抽滤， 所得固体 并随后以近似比例的上述溶剂再重结晶 1次， 置 o。c以下放置， 待 沉淀析出充分后， 抽滤， 所得固体在 60。C左右、 真空干燥 4小时左 右， 得红色结晶约 0.2 _g ; 熔点： 212 °C 分解（未校正） ， 紫外光谱 取其 5 g/ml的水溶液，照分光光度法测定，： ^H2 。 _max 200nm、 228nm、 256nm、271nm; ESI-MS: m/z: 396; EI: m/z: [M-Na]373, [M+Na]419; 核磁共振氢傳 ¹ H-NMR(300MHz, DMSO) δ7·84(1Η)， δ7·54(1Η), δ3.06(2Η), δ2.34(3Η ), δ1.72(2Η), δ1.62(2Η), δ1.29(6Η) ， 63.4 的水峰在经重水交换后的氢谱中消失； 核磁共振碳谱 ( ¹³ C-NMR) 总 碳数 19个， ¹³ C-NMR(300MHz DMSO): 5182.9, 6175.7, 6158.6, 6154.6, 6150.1 , 6143.4, 6134.0, 6127.6, 6127.1 , 6120.6, 6120.3, 6117.4, 638.0, 635.0, δ32·1 ( 2个 C )， 530.1 , 619.3, 610.0(ppm); 红外光谱： v ^KBr cm"3448 (宽）、 2959 2932 2867 1674 1646 1578 1537 1480 1463 1429 1364 1331 1218 1144 1120 1076 1042 923 844 709 654; 卡氏法测定水分为 6.57 % , 热 重分析 TG-DSC: 平台失重约 6.16 %， 这与理论值 6.38 %在误差范 围内。 实施例 7: 丹参酮 Π Α磺酸钠水合物冻干制剂的制备 取丹参酮 11 磺酸钠2.57_^合物58， 加甘露醇 15g， 磷酸二氢钠 4g, 酒石酸钠 2g、 抗坏血酸 lg EDTA二钠 0.02g， 加 30-50°C注射用 水 800ml左右， 搅抨使溶， 用 1-5M左右的柠檬酸和氢氧化钠溶液调 节 pH为 4.0 ~ 7.0,补注射用水至 1000ml,加活性碳 0.01 ~ 0.5% ( W/V ) 搅拌 15-30min， 过滤， 用 0.22微米微孔滤膜过滤或者采用截留相对 分子质量 6000 ~ 20000的超滤膜过滤， 测定半成品含量， 按 5 10mg/ 瓶或 20m _g /瓶（按主药的无水物计）分装， 真空冷冻干燥， 压塞， 得 冻干品。 实施例 8: 丹参酮 II A磺酸钠水合物冻干制剂的制备 取丹参酮 II A磺酸钠 1.57J合物或 0.5水合物 10g， 加山梨醇 20g, 磷酸二氢钠 4g， 柠檬酸钠 2g EDTA二钠 0.02g， 加 30-50 C注射用水 800ml左右， 搅拌使溶， 用 1-5M左右的柠檬酸和氢氧化钠溶液调节 pH为 5.0 ~ 7.5, 补注射用水至 1000ml, 加活性碳 0.01 ~ 0.5% ( W/V ) 搅拌 15-30min， 过滤， 用 0.22微米微孔滤膜过滤， 测定半成品含量， 按 10mg/瓶或 20mg/瓶或 40mg/瓶分装（按丹参酮 II A磺酸钠计）， 真 空冷冻干燥， 压塞， 得冻干品。 实施例 9: 丹参酮 II A磺酸钠水合物注射液的制备

丹参酮 II A磺酸钠 2.57J合物或 1.57 合物或 0.5水合物（按干品 计） 5g， 葡萄糖酸钠 4g， 柠檬酸钠 2g, 抗坏血酸 lg、 丙二醇 3ml、 EDTA二钠 0.06g，避强光下加注射用水、通氮气、搅拌使� ��解， 1-5M 左右的拧檬酸和柠檬酸钠溶液调节 pH为 4.0 ~ 7.0， 加活性碳 0.01% ( W/V )搅拌 15 ~ 45min， 过滤， 补水至 2000ml， 用 0.22微米微孔滤 膜过滤或者釆用截留相对分子质量 6000 - 20000的超滤膜过滤，溶液 通氮气饱和， 按 10、 20mg或 40mg/支分装， 灭菌得成品。 实施例 10: 丹参酮 II A磺酸钠水合物注射液的制备 称取葡萄糖 300g加入注射用水中， 搅拌使溶解完全， 加入配液 量 0.5 %的活性炭， 加热 10-30分钟左右， 经砂滤棒过滤脱炭； 将丹 参酮 II A磺酸钠 1.57J合物 10g与上述滤液混合均匀， 加磷酸二氢钠 10g, 酒石酸钠 2g、 磺丁醚 -β-环糊精 lg， EDTA二钠 0.1g， 溶解完全 后， 加注射用水至 5000ml， 用 1-3M盐酸或乳酸或柠檬酸以及柠檬酸 钠溶液调节 pH值在 3.5-6.0的范围内， 加配液量 0.05 %的活性炭， 加 热搅拌 10-30 分钟左右， 过滤脱炭， 再经 0.22um微孔滤膜精滤或者 采用截留相对分子质量 6000 ~ 30000的超滤膜过滤一到两次，溶液通 高纯氮气饱和， 检验半成品含量、 pH值和澄明度等， 合格后溶液按 10、 20mg、 40mg或 80mg/支灌封， 灭菌， 包装即得。 实施例 11: 丹参酮 II A磺酸钠水合物氯化钠输液的制备

将丹参酮 II A磺酸钠 1.57J合物或 0.57J合物水合物 （按无水物 计） 20g、 氯化钠 425g、 枸橼酸钠 5g、 酒石酸 5g、 EDTA二钠 0.6g， 加入注射用水中， 溶液通高纯氮气饱和， 搅拌使溶解完全， 用枸橼 酸溶液和枸橼酸钠溶液调节 pH值在 3.5-6.5的范围内， 加注射用水至 50000ml, 加配液量 0.05 %的活性炭， 加热搅拌 10-30 分钟左右， 过 滤脱炭， 再经 0.22um 的膜精滤或者釆用截留相对分子质量 6000 ~ 20000的超滤膜过滤， 经半成品化验， 待其含量、 pH值和澄明度合 格后， 在高纯氮气下， 灌装于 50ml、 100ml或 250ml瓶或塑料袋中， 灭菌， 包装即得。 实施例 12: 丹参酮 II A磺酸钠水合物片或胶嚢（20mg/粒） 处方： 丹参酮 II A磺酸钠 2.5 7J合物 20g

微晶纤雉素 65 _g 乳糖 10g 低取代羟丙基纤维素 5g

P-环糊精 5g

5 % PVP -K30 ( 50%的乙醇水溶液） 适量 硬脂酸镁 2g

将丹参酮 II A磺酸钠 2.5 7j合物、微晶纤维素、乳糖、 P-环糊精、 低取代羟丙基纤维素过 100目筛，用 5 % PVP -K30的 50%的乙醇水 溶液适量为粘合剂制软材， 过 18 - 24 目筛制粒， 干燥， 过 14 - 20 目筛整粒后， 加硬脂酸镁混合， 濯装胶嚢或者压片。 实施例 13: 丹参酮 II A磺酸钠水合物片或胶嚢（ 50mg/粒 ) 处方： 丹参酮 II A磺酸钠 1.5 7j合物 50g

乳糖 165g

羧曱基淀粉钠 5g

5 % PVP -K30 ( 50%的乙醇水溶液） 适量

硬脂酸镁 2g

将丹参酮 II A磺酸钠 1.5水合物、 乳糖、 羧曱基淀粉钠过 100 目筛， 用 5 % PVP- k30的 50%的乙醇水溶液适量为粘合剂制软材， 过 18 -24目筛制粒， 干燥， 过 14 -20目筛整粒后， 加硬脂酸镁混 合， 灌装胶嚢或者压片。 )

将丹参酮 II A磺酸钠 0.5水合物、 微晶纤维素、 乳糖、 低取代 羟丙基纤维素过 100目筛， 用 5%羟丙基曱基纤维素的 50%的乙醇 水溶液适量为粘合剂制软材， 过 18 -24 目筛制粒， 干燥， 过 14- 20目筛整粒后， 加硬脂酸镁混合， 灌装胶嚢或者压片。 实施例 15: 丹参酮 II A磺酸钠水合物颗粒的制备 包括乳丹参酮 II A磺酸钠 47J合物或丹参酮 II A磺酸钠 37J合 物丹参酮 II A磺酸钠水合物等颗粒（ 50m _g /包）

处方： 丹参酮 II A磺酸钠水合物 50g (以无水物计） 甘露醇 155g

乳糖 20g

固体食用香精 lg

5%羟丙基曱基纤维素 适量

将丹参酮 II A磺酸钠水合物、 甘露醇、 乳糖、 食用香精过 100 目筛， 用 5%的羟丙基曱基纤维素的 50%乙醇水溶液适量为粘合剂 制软材， 过 18-24目筛制粒， 60。C以下干燥， 过 14-20目筛整粒 后， 分包装。 实施例 16: 药理学试验

1、 对氯化钙诱发大白鼠心律失常的作用

取 SD大鼠 50只， 雌雄不拘， 体重 226±31g， 随机分为 5组， 分别静脉注射给予生理盐水、奎尼丁、丹参酮 II A磺酸钠水合物（生 理盐水溶解） 6mg*kg ¹ . 3%戊巴比妥钠 ^m^kg 麻醉后， 仰卧位 固定于手术台上， 经舌静脉注射给药， 6min左右后， 快速静脉注射 ( 5s内推完 ) 2.5%氯化钙 lOOmg-kg ¹ ( 0.4ml/100g ), 记录出现室颤 及死亡动物数。

结果显示， 丹参酮 II A磺酸钠水合物组可明显抑制氯化钙诱发 大鼠室颤（p<0.05 )， 丹参酮 II A磺酸钠水合物组可明显抑制氯化钙 导致的大鼠心律失常死亡 (表 3)。 表 3. 丹参酮 II A磺酸钠水合物对氯化钙诱发大鼠心律失常的� �用 剂量 动物数 心律失常动物数 (n) 药物

( mg-kg" ¹ ) ( n) 室颤 心脏停搏 生理盐水 Sml'kg ¹ 10 10 10 奎尼丁 13.5 10 6 4 本发明 2.5水合物 10 10 6 5 本发明 1.5水合物 10 10 5 6 本发明 0.5水合物 10 10 5 4

2、 对大鼠缺血再灌注的作用

Wistar雄性大鼠 36只， 体重 250 ~ 300g， 随机分为 3组： 假手术 组、 缺血再灌组和本发明药物组， 每组 12只。 本发明药物组： 采用 丹参酮 II A磺酸钠 1.57 合物的生理盐水腹腔给药， 剂量为 40m _g /k _g ， 每天两次， 连续 7天， 最后一次给药 60min后实施脑缺血手术； 假手 术组和缺血再灌组分别给以等容积的生理盐水 。

大鼠用 10%7]合氯醛 (3.5ml/kg)腹腔注射麻醉，仰卧位固定，参 照文献用 Zea Longa线拴改良法造模 [上海交通大学学报（医学版） 2007, 27(10): 1218-1222]； 假手术组栓线只插入 10mm， 其余步骤 同模型组， 动物苏醒后出现手术侧 Homer征和对侧体运动障碍即为 模型制备成功。 造模成功后本发明药物组一天给药 2次， 剂量同前， 假手术组和缺血再灌组分别给以等容积的生理 盐水。 造模后 2h抽出 线， 再灌注 24小时后处死大鼠， 迅速取脑称重。 低温下用生理盐水 制成 10%脑组织匀浆液，低温离心， 3000 r/min离心 10min，弃沉淀， 取上清液， 按市售测试 SOD、 MDA、 NO, NOS相应试剂盒的说明 书分别测定 SOD、 MDA、 NO、 NOS含量或活性， 结果见表 4。 表 4. 本发明药物对大鼠脑缺血再灌注脑组织中

NO、 NOS, MDA、 SOD的影响

NO mol/L) NOS(U/ml) MDA(nmol/ml) SOD(U/ml) 假手术组 22±6.41 18±5.14 1.56±0.47 279±22.62 缺血再瀵组 31±7.47 29±5.78 3.73±0.59 218±21.77 本发明药物组 24±6.35 22±5.31 2.26±0.62 245±21.59 结果表明，与假手术组相比，缺血再灌模型组 大鼠脑组织中 S0D 活性明显降低， MDA、 NO含量及 NOS活性明显增加 (P<0.01); 与缺 血再灌模型组相比，本发明药物组大鼠脑组织 中 SOD活性明显升高， NOS活性降低， MDA、 NO含量明显减少 (Ρ<0·01)。 将本发明的丹参 再灌上述试猃， 获得与丹参酮 II Α磺酸钠 1.5水合物相类似的结果。 这些结果证明，本发明药物通过对 NOS活性和 NO含量进行调节从而 发挥脑缺血再灌注损伤的保护作用。 3、 对钙反常心肌的保护作用

参照文献（徐叔云 等主编， 药理学试验方法第三版 p986-1000; 中国病理生理杂志. 1987， 3: 154-158 )构建豚鼠离体心脏灌流造成 心肌钙反常模型。 将体重为 280-360g的健康豚鼠 48只分为 6组， 每组 8只， ^^别为正常对照组， 钙反常组， 异搏定阳性对照组， 三 个给药组， 实验前禁食一夜， 肝素 0.5mg/k _g 腹腔内注射， 20分钟后 戊巴比妥钠 30mg/kg腹腔注射， 麻醉后开胸， 迅速取出心脏， 浸于 用水冷却的 Kreb's-Henseleit ( K-H )灌流液中， 主动脉插管后将心 脏放入恒温恒压离体心脏灌流装置， 参照文献（中国病理生理杂志. 1987, 3: 154-158 ), 于 37。C , 以 Langendrff 法灌流心脏， 三个给 药组分别为钙反常加 32m _g /L的本发明化合物， 正常对照组以含钙 Kreb's-Henseleit 液持续灌流 35min, 收集后 20min冠脉流出液， 其余 5组均以含钙 K-H液灌流 10min， 使心脏达稳定状态， 再以无 钙 K-H 液灌流 5min, 随后恢复含钙 K-H液灌 20min， 通过以上灌 流程序造成钙反常模型。其中阳性对照组全程 灌流液中加入 2.1m _g /L 异搏定， 给药组全程灌流液中分别加入 3211^/丹参酮11八磺酸钠水 合物。 收集恢复给钙 20min冠脉流出液， 参照文献测定所收集各组 冠脉流出液中的蛋白释放量 mg/min/g drywt以及心肌组织钙摄取量 pmol/g drywt。 发现与反常组相比结果差异呈现显著性 (P<0.01)， 见 表 5， 表 6。

表 5. 本发明化合物对钙反常心肌组织蛋白幹放量的 影响

每组豚鼠 蛋白释放量 ±S 蛋白释放 組别 给药剂量

数量 mg/min/ 干重 降低率％ 正常对照组 8 0.5±0.1

钙反常组 8 5.0±0.4 0 异搏定组 8 2.1 mg/L 2.6±0.2 48% 本发明的 2.5水合物 8 32 mg/L 2.5±0.2 50% 本发明的 1.5水合物 8 32 mg/L 2.4±0.3 52% 本发明的 0.5水合物 8 32 mg/L 2.4±0.2 52% 表 6. 本发明化合物对钙反常心肌组织钙摄取率的影 响 组别 每组豚鼠 给药剂量 钙摄取量 ±S 钙摄取 数量 μιηοΐ/min/ 干重 降低率％ 正常对照组 8 15.7±1.3

钙反常组 8 47.6±3.7 0 异搏定组 8 2.1 mg/L 36.9±2.5 22.5% 本发明的 2.5水合物 8 32 mg/L 35.4±3.1 25.6% 本发明的 1.5水合物 8 32 mg/L 35.2±2.8 26.1% 本发明的 0.5水合物 8 32 mg/L 34.5±2.4 27.5% 由此可见，本发明的化合物对心肌钙反常损伤 具有明显的保护作 用， 具有钙离子拮抗作用， 能抑制钙内流， 减轻钙反常过程中心肌 组织钙沉积和心肌损伤所致的蛋白释放。 可以理解， 从本专业角度， 很多细节的变化是可能的， 这并不 因此限制本发明范围和精神， 本发明并不限于上述实施例。