本发明属于医药化工领域， 涉及一种甾醇类衍生物、 其制备方法 及用途。 背景技术

红曲（ o/za ^fermented r ice)是以大米为原料， 经红曲霉 ( 0/7 C )发酵制成的一种紫红色米曲。 红曲古代称丹曲， 是将红曲 霉为主的曲母或酒曲接种于米饭上发酵而成， 其色赤红，故又名赤曲、 红米、 红大米、 红糟， 又因主产于福建等地， 故又名福曲、 福米等。

我国利用红曲菌的历史悠久， 从汉代起就用它制曲。 红曲是一味 食疗兼备的传统中药。 早在古代它已被广泛应用于食品着色、 酿酒、 发酵、 中医中药方面。 《饮膳正要》有红曲 "味甘、 平、 无毒" 、 "健 脾、 益气、 温中" ； 《本草纲目》有 "甘、 温、 无毒" 、 "治女人血 痛及产后恶血不净， 擂酒饮之良" ； 《本草衍义补遗》有 "活血、 消 食、 健脾暖胃、 治赤白下痢、 跌打损伤" 等记载。

上世纪 70 年代， 日本 Endo 教授首次从红色红曲霉（ Ο/½ r^er)中分离出生理活性物质莫纳克林 K (monacol in K)以来， 众多 国内外学者在红曲霉代谢产物中不断发现生理 活性物质， 包括 monaco l in 类化合物， 红曲色素， 降压成分 GABA 及抗氧化成分 dimerumic ac id及最近分离的一些萜类化合物等等。 随着现代生物化 学与药理学的发展， 红曲的降血脂、 降压、 降糖、 抗肥胖、 抗癌、 防 治老年痴呆及骨质疏松等功效不断被挖掘。 从而为传统的红曲增添了 新的内涵。

血脂康胶嚢是北京北大维信生物科技有限公司 自主研究的特制 红曲霉发酵制成的高效、 安全的国产现代调脂中药。 适应症为高脂血 症及动脉粥样硬化引起的心脑血管疾病的治疗 。 其主要作用机制为通 过抑制 3-羟基 -3-曱基戊二酰辅酶 A ( HMG-CoA )还原酶的活性， 可抑 制内源性胆固醇的合成，降低血清总胆固醇（ TC；)、血甘油三酯（ TG )、 低密度脂蛋白 （LDL ) 、 升高高密度脂蛋白 （HDL ) 水平。 血脂康胶嚢 是红曲的醇提取物， 它富含洛伐他汀等一系列天然他汀类化合物。 除 了他汀类化合物以外， 血脂康胶嚢中还含有色素类化合物、 异黄酮类 化合物、 醇类化合物、 20种氨基酸、不饱和脂肪酸及多种微量元素。 故尚需要发现新的具有降脂或抑制 HMG-Co A还原酶活性的化合物。

此外， 血脂康中还可能存在一些未知的抗癌成分。 故尚需要发现 新的具有抗癌作用的化合物。

肥胖症作为一种全身性内分泌代谢疾病， 在世界范围内成普遍趋 势。 它不但影响体态和活动， 而且与高脂血症、 动脉粥样硬化、 冠心 病、 糖尿病等疾病密切相关。 肥胖发生的原因是多方面的， 如遗传因 素、 环境因素、 饮食习惯等， 其中高脂饮食是导致肥胖的重要原因。 近年来， 药物治疗是治疗肥胖症的有效手段之一， 通过减少脂肪吸收 达到治疗目的。 胰和胃脂肪酶是肠道中脂肪消化吸收所必需的 。 食物 中的脂肪被水解为单酰甘油和游离脂肪酸后， 在肠道被吸收， 然后在 体内重新合成脂肪， 造成脂肪堆积， 最终可导致肥胖。 应用脂肪酶抑 制剂可有效抑制肠道中脂肪酶对脂肪的分解催 化作用， 达到减少脂肪 吸收、 控制和治疗肥胖的目的 （陈瑾等.肥胖的药物治疗研究进展.中 华中医药学刊， 2007， 25 (5) : 947-948; 吴静等. 肥胖的药物治疗进 展. 医学综述， 2006, 12 (11) : 693-693。 )

目前， 美国 FDA只批准了 2 种药物可以长期用于肥胖症治疗： s ibutramin (西布曲明，中枢神经作用减肥药）和 or l i s tat(奥利司他， 胃肠道脂肪酶抑制剂）。但这两种药都有明显 的不良反应： s ibutramin 的副作用主要有口渴、便秘、 头晕和失眠， or l i s tat的不良反应主要 是胃肠道症状， 常见的有腹泻腹痛、 油性斑点、 胃肠胀气等， 其长期 效果也有待于进一步评价。

因此， 目前亦尚需要发现新的具有抑制脂肪酶作用的 药物。 发明内容

本发明人经过深入的研究和创造性的劳动， 得到了一种 醇类衍 生物， 并且本发明人惊奇地发现， 本发明的化合物能够有效地抑制

HMG-CoA还原酶，从而具有作为降低或调节血� �或者预防和 /或治疗血 脂异常、 高血脂症、 高胆固醇血症、 或动脉粥样硬化的药物的潜力。 此外， 本发明人还惊奇地发现： 1 )本发明的化合物能够有效地抑制 癌细胞（肿瘤细胞）的增殖， 从而具有作为预防和 /或治疗和 /或辅助 治疗癌症的药物的潜力； 2 ) 本发明的化合物能够有效地抑制脂肪酶 的活性， 从而具有作为预防和 /或治疗和 /或辅助治疗肥胖症或肥胖症 相关疾病的药物的潜力。 由此提供了下述发明： 本发明的一个方面涉及式 I所示的化合物， 或其药学上可接受的 盐、 酯或醚，

其中，

选自 -0H、 =0 (羰基） 、 H、 和 d-C ₃ 烷基；

R ₂ 选自 -0H、 H、 和 d-C ₃ 烷基;

R ₃ 选自- 0H、 =0、 H、 和 C「C ₃ 烷基；

R ₄ 选自- 0H、 H、 和 d_C ₃ 烷基；

并且 Ri、 R ₂ 、 R ₃ 、 和 R ₄ 中任意的 0个、 1个、 2个、 3个或 4个为

-0H。

对于式 I化合物的酯或醚， 成酯或成醚的位点为 R ₂ 、 R ₃ 、 和 R ₄ 中任意的 0个、 1个、 2个、 3个或 4个。

在本发明的一个实施方案中， 或 =0 (欺基） ， R ₂ 、 R ₃ 和 R ₄ 均为 H。 根据本发明的任一项所述的化合物或其药学上 可接受的盐、 酯或 醚， 其为下面的式 I I 所示的化合物， 或其药学上可接受的盐、 酯或 醚，

式 I I。 式 I I 化合物的化学名为： 16, 22-环氧麦角 -5， 7-二烯 - 3， 20， 23， 25 - 四 醇 ( 16, 22-epoxy-ergos ta-5, 7-dien-3, 20, 23, 25-tetraol ) 。

根据本发明的任一项所述的化合物或其药学上 可接受的盐、 酯或 醚， 其中， 所述酯选自曱酸酯、 醋酸酯、 丙酸酯和磺酸酯； 所述醚为 叔丁基二曱基硅醚； 具体地， 所述磺酸酯基为对曱苯磺酯或三氟曱磺 本发明还涉及上述的式 I或式 I I化合物的水合物或溶剂化物。 本发明的另一方面涉及式 I或式 Π化合物的制备方法， 包括下 述步骤：

1 )取红曲和 /或红曲的醇提物（例如血脂康胶嚢内容物， 其为干 粉） ， 用 2 - 6倍体积的选自二氯曱烷、 乙酸乙酯、 丙酮、 曱醇、 乙 醇中的一种或多种有机溶剂作为溶剂超声提取 一次或多次， 每次 20 - 40分钟， 合并提取液， 除去溶剂， 得到精提物；

可选地， 所述醇提物可以如下方法制得： 用 2 - 6 倍体积的 50% - 100%乙醇或 50% - 100%曱醇作为溶剂超声提取一次或多次， 每次 20 - 40分钟， 合并提取液， 除去溶剂， 得到醇提物。

不拘于理论的限制， 由于血脂康本身是红曲的醇提物， 因此可以 直接用红曲为原料， 提取步骤与血脂康胶嚢内容物干粉基本相同， 但 红曲中的该化合物的含量相对低。 所述红曲的具体菌株并不特别限 定， 包括任一属于红曲的菌种或菌株。 血脂康胶嚢（例如北大维信生 产） 可以通过医院或药店购买得到。

2 )将步骤 1 )得到的精提物进行硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱；石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50 - 25: 75、 0: 100;

3)取步骤 2)中的石油醚 -乙酸乙酯为 50:50 - 25:75的洗脱部分， 经 C18反相柱色谱进行分离， 用曱醇 -水进行梯度洗脱， 曱醇-水的体 积比依次为 10: 90、 50:50 - 75:25、 100: 0;

4)取步骤 3)中的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分用半制备 高效液相色语纯化， 以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55 ) 为流动相， C18半制备柱为固定相， 收集 9.2 min的色谱峰部分； 和

5 )将步骤 4 ) 的产物进行冷冻干燥， 得到式 I或式 II化合物。 根据本发明的任一项所述的制备方法， 其满足如下的（1) - (9) 中的任一项或者多项：

(1) 步骤 1) 中， 所述有机溶剂优选为二氯曱烷；

( 2 ) 步骤 1 ) 中， 所述超声提取进行 3次；

( 3) 步骤 1) 中， 通过减压浓缩除去溶剂；

( 4 )步骤 2 )中，石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50、 25: 75、 0: 100;

(5) 步骤 3) 中， 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50或 25: 75的洗脱部分；

本发明人通过试验发现， 石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50 - 25: 75的洗 脱部分都含有本发明的化合物。

(6)步骤 3)中， 曱醇 -水的体积比依次为 10:90、 50: 50、 75:25、 100: 0;

( 7 ) 步骤 4 ) 中， 取步骤 3) 中的曱醇 -水为 50: 50或 75: 25的 洗脱部分；

本发明人通过试验发现， 曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分都 含有本发明的化合物。 ( 8 ) 步骤 4 ) 中， 将收集的 9.2 min的色语峰部分合并； 和

( 9) 步骤 5 ) 中， 冷冻干燥的条件是： 冷阱温度 -40 至 -85°C， 真空度 0 - 100 Pa; 优选为冷阱温度 -50至 -82.7°C，真空度 2 - 13 Pa; 更优选为冷阱温度 -82.7°C， 真空度 2 Pa, 或冷阱温度 _50°C，真空度

8.5 Pa。 本发明的再一方面涉及式 Π化合物的制备方法， 包括下述步骤： 以六羟基麦角甾醇为底物， 如（3， 16， 20， 22， 23， 25-六羟基麦角 甾醇， 简称为化合物 A) ， 在对曱苯磺酸一水合物或 2, 4, 6-三异丙 基

化合物 A 式 II

化合物 A 可参照中国专利公开 CN101469014A ( 申请号为 200710304346.0 ) 的制备方法制得。

在本发明的一个实施方案中， 化合物 A与对曱苯磺酸一水合物的 摩尔比为 5: 1-2: 1; 具体地， 化合物 A与对曱苯磺酸一水合物在曱 苯溶液中， 经过回流反应 5-10小时制得式 II化合物。

在本发明的一个实施方案中， 化合物 A与 2,4,6-三异丙基磺酰氯 的摩尔比为 5: 1-2: 1; 具体地， 化合物 A与 2，4，6-三异丙基磺酰氯 在吡啶溶液中，于 30°C - 70 °C的温度下反应 10 - 30小时制得式 II化合 物。

式 II化合物在一定条件下， 可生成不同的衍生物， 例如酯类衍 生物， 包括但不限于： 醋酸酯、 磺酸酯。

所述酯类衍生物可以通过使式 II化合物与常用酸肝、 酰氯、 磺 酰氯、磺酸反应制得。与酸酐反应的催化剂可 选自吡啶、浓硫酸、 NaHC0 ₃ 等 例如：

式 II 化合物的四乙酸酯 （相当于式 I 所示的化合物中， -OC (=0) - CH ₃ )的制备方法为： 将式 11化合物在催 化量的浓¾酸下， 以乙酸酐作为反应试剂和溶剂， 于 40- 80°C下反应 1 -3小时后制得。

式 II 化合物的四对曱苯磺酯 （相当于式 I所示的化合物中， = = =¾=- OTs)的制备方法为： 将摩尔比为 1: 4-1: 8的式 II 化合物与对曱苯磺酰氯， 以三乙胺为除酸剂， 在二氯甲烷中于 20°C - 40 °C反应制得。

式 II化合物的四 (三氟曱磺酸酯）（相当于式 I所示的化合物中， - ) 的制备方法为： 将摩尔比为 1: 4-1: 6 的 式 II化合物与三氟曱磺酸酐，在二氯曱烷中与吡� ��在 20°C - 30°C下反 应 1-5小时制得。

式 II化合物在一定条件下， 亦可生成硅醚类衍生物， 例如式 II 化合物的叔丁基二曱基硅醚。 例如：

式 II化合物的四 (叔丁基二曱基硅醚）（相当于式 I所示的化合物 中， R^R^RfR TBDMSO - ) 的制备方法为： 将摩尔比为 1: 4 的 式 II化合物与氢化钠在四氢呋喃中反应后， 与叔丁基二曱基氯硅烷在 20 °C - 40°C下反应 1-3小时制得。 本发明的再一方面涉及一种提取物， 其含有本发明的式 Π化合 物。

根据本发明任一项所述的提取物， 其为血脂康胶嚢内容物干粉的 提取物或者红曲的提取物。

根据本发明任一项所述的提取物， 其中式 Π 化合物的含量为 0.0001— 5% (w/w) 、 0.001— 2% (w/w)或 0.001— 1% (w/w) 。 式 II 化合物的含量也可以通过将本发明的提取物通 过适当浓缩进行调整。 所述浓缩可以通过本领域人员知悉的方法进行 。

根据本发明任一项所述的提取物， 其为如下的 （1)至（3) 中的 任一项：

( 1 )上述的步骤 1 ) 至 2 ) 中制得的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50 - 25: 75的洗脱部分；优选石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50或 25: 75的洗脱 部分； 进一步优选石油醚 -乙酸乙酯为 25: 75的洗脱部分。

( 2 )上述的步骤 1 )至 3 ) 中制得的曱醇 -水为 50: 50 - 75: ² 5的 洗脱部分； 优选曱醇 -水为 75: 25的洗脱部分； 和

( 3 )上述的步骤 1 ) 至 4 ) 中制得的 9. 2 min的色语峰部分。 本发明的再一方面涉及一种组合物， 其包含式 I或式 Π的化合 物、 和 /或本发明中任一项所述的提取物； 可选地， 还包括药学上可 接受的载体或辅料。 具体地， 所述组合物为药物组合物。

通常本发明药物组合物含有 0. 1 - 90重量％的式 I或式 I I化合 物和 /或其可药用盐。 药物组合物可根据本领域已知的方法制备。 用 于此目的时， 如果需要， 可将式 I或式 I I化合物和 /或其可药用盐与 一种或多种固体或液体药物赋形剂和 /或辅剂结合， 制成可作为人用 的适当的施用形式或剂量形式。

本发明的式 I或式 Π化合物或其可药用盐或含有它的药物组合 物可以单位剂量形式给药， 给药途径可为肠道或非肠道， 如口服、 肌 肉、 皮下、 鼻腔、 口腔粘膜、 皮肤、 腹膜或直肠等。 给药剂型例如片 剂、 胶嚢、 滴丸、 气雾剂、 丸剂、 粉剂、 溶液剂、 混悬剂、 乳剂、 颗 粒剂、 脂质体、 透皮剂、 口含片、 栓剂、 冻干粉针剂等。 可以是普通 制剂、 緩释制剂、 控释制剂及各种微粒给药系统。 为了将单位给药剂 型制成片剂， 可以广泛使用本领域公知的各种载体。 关于载体的例子 是， 例如稀释剂与吸收剂， 如淀粉、 糊精、 硫酸钙、 乳糖、 甘露醇、 蔗糖、 氯化钠、 葡萄糖、 尿素、 碳酸钙、 白陶土、 微晶纤维素、 硅酸 铝等； 湿润剂与粘合剂， 如水、 甘油、 聚乙二醇、 乙醇、 丙醇、 淀粉 浆、 糊精、 糖浆、 蜂蜜、 葡萄糖溶液、 阿拉伯胶浆、 明胶浆、 羧曱基 纤维素钠、 紫胶、 曱基纤维素、磷酸鉀、 聚乙烯吡咯烷酮等； 崩解剂， 例如干燥淀粉、 海藻酸盐、 琼脂粉、 褐藻淀粉、 碳酸氢钠与枸橼酸、 碳酸钙、 聚氧乙浠、 山梨糖醇脂肪酸酯、 十二烷基磺酸钠、 曱基纤维 素、 乙基纤维素等； 崩解抑制剂， 例如蔗糖、 三硬脂酸甘油酯、 可可 脂、 氢化油等； 吸收促进剂， 例如季铵盐、 十二烷基硫酸钠等； 润滑 剂， 例如滑石粉、 二氧化硅、 玉米淀粉、 硬脂酸盐、 硼酸、 液体石蜡、 聚乙二醇等。 还可以将片剂进一步制成包衣片， 例如糖包衣片、 薄膜 包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。 为了将给药单元制成丸剂， 可以广泛使用本领域公知的各种载体。 关于载体的例子是， 例如稀释 剂与吸收剂， 如葡萄糖、 乳糖、 淀粉、 可可脂、 氢化植物油、 聚乙烯 吡咯烷酮、 Geluc ire、 高岭土、 滑石粉等； 粘合剂如阿拉伯胶、 黄蓍 胶、 明胶、 乙醇、 蜂蜜、 液糖、 米糊或面糊等； 崩解剂， 如琼脂粉、 干燥淀粉、 海藻酸盐、 十二烷基磺酸钠、 甲基纤维素、 乙基纤维素等。 为了将给药单元制成栓剂， 可以广泛使用本领域公知的各种载体。 关 于载体的例子是， 例如聚乙二醇、 卵磷脂、 可可脂、 高级醇、 高级醇 的酯、 明胶、 半合成甘油酯等。 为了将给药单元制成胶嚢， 将有效成 分式 I或式 I I化合物或其可药用盐与上述的各种载体混合� � 并将由 此得到的混合物置于硬的明明胶嚢或软胶嚢中 。 也可将有效成分式 I 或式 I I 化合物或其可药用盐制成微嚢剂， 混悬于水性介质中形成混 悬剂， 亦可装入硬胶嚢中或制成注射剂应用。 为了将给药单元制成注 射用制剂， 如溶液剂、 乳剂、 冻干粉针剂和混悬剂， 可以使用本领域 常用的所有稀释剂， 例如， 水、 乙醇、 聚乙二醇、 1, 3-丙二醇、 乙氧 基化的异硬脂醇、 多氧化的异硬脂醇、 聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。 另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制 剂中添加适量的氯化钠、 葡萄糖或甘油， 此外， 还可以添加常规的助溶剂、 緩冲剂、 pH调节剂 等。

此外， 如需要， 也可以向药物制剂中添加着色剂、 防腐剂、香料、 矫味剂、 甜味剂或其它材料。

本发明式 I或式 Π化合物或其可药用盐的给药剂量取决于许多 因素， 例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度， 患者或动物的性 别、 年龄、 体重及个体反应， 所用的具体化合物， 给药途径及给药次 数等。 上述剂量可以单一剂量形式或分成几个， 例如二、 三或四个剂 量形式给药。

本文所用的术语 "组合物" 意指包括包含指定量的各指定成分的 产品， 以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合 产生的任何产 口

可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际 剂量水平， 以便所 得的活性化合物量能有效针对具体患者、 组合物和给药方式得到所需 的治疗反应。 剂量水平须根据具体化合物的活性、 给药途径、 所治疗 病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往 病史来选定。 但是， 本 领域的做法是， 化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要 求的水 平开始， 逐渐增加剂量， 直到得到所需的效果。 本发明的再一方面涉及本发明的化合物或本发 明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物在制备降低或调节 血脂或者预防和 /或治 疗血脂异常、 高血脂症、 高胆固醇血症、 或动脉粥样硬化的药物中的 用途。

本发明的再一方面涉及本发明的化合物或本发 明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物在制备 HMG-CoA还原酶抑制剂中的用途。

本发明的再一方面涉及一种在体内或体外抑制 HMG-CoA还原酶的 方法， 包括使用有效量的本发明的化合物或本发明任 一项所述的提取 物或者本发明的组合物的步骤。

实验例 1的实验结果证明， 本发明的化合物具有抑制 HMG-CoA还 原酶的活性， 并且所述活性具有剂量依赖性。

本发明的再一方面涉及一种降低或调节血脂或 者预防和 /或治疗 和 /或辅助治疗血脂异常、 高血脂症、 高胆固醇血症、 或动脉粥样硬 化的方法， 包括给与有效量的本发明的化合物或本发明任 一项所述的 提取物或者本发明的组合物的步骤。 本发明的再一方面涉及本发明的化合物或本发 明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物在制备预防和 /或治疗和 /或辅助治疗癌 症的药物中的用途； 具体地， 所述癌症为结肠癌、 肝癌、 淋巴癌、 或 黑色素瘤。

本发明的再一方面涉及本发明的化合物或本发 明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物在制备抑制肿瘤细 胞的药物或者试剂中 的用途； 具体地， 所述肿瘤细胞为结肠癌细胞、 肝癌细胞、 淋巴癌细 胞或黑色素瘤细胞。

本发明的再一方面涉及一种抑制肿瘤细胞的方 法， 包括使用有效 量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐或 本发明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物的步骤； 具体地， 所述肿瘤细胞为结肠癌 细胞、 肝癌细胞、 淋巴癌细胞或黑色素瘤细胞。 具体地， 所述抑制肿 瘤细胞的方法为在体内或体外抑制肿瘤细胞的 方法。

实验例 2的实验结果证明， 本发明的化合物能够有效地抑制肿瘤 细胞。

本发明的再一方面涉及预防和 /或治疗和 /或辅助治疗癌症的方 法， 包括使用有效量的本发明的化合物或其药学上 可接受的盐或本发 明任一项所述的提取物或者本发明的组合物的 步骤； 具体地， 所述癌 症为结肠癌、 肝癌、 淋巴癌、 或黑色素瘤。 本发明的再一方面涉及本发明的化合物或本发 明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物在制备预防和 /或治疗和 /或辅助治疗肥 胖症或肥胖症相关疾病的药物或者减肥药物中 的用途； 具体地， 所述 肥胖症相关疾病为高脂血症、 动脉粥样硬化、 冠心病、 或糖尿病。

本发明的再一方面涉及本发明的化合物或本发 明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物在制备抑制脂肪酶 的药物或者试剂中的 用途。

本发明的再一方面涉及一种抑制脂肪酶的方法 ， 包括使用有效量 的本发明的化合物或其药学上可接受的盐或本 发明任一项所述的提 取物或者本发明的组合物的步骤。 具体地， 所述抑制脂肪酶的方法为 在体内或体外抑制脂肪酶的方法。

实验例 3的实验结果证明， 本发明的化合物能够有效地抑制脂肪 酵。

本发明的再一方面涉及一种预防和 /或治疗和 /或辅助治疗肥胖 症或肥胖症相关疾病的方法或者一种减肥的方 法， 包括给与有效量的 本发明的化合物或本发明任一项所述的提取物 或者本发明的组合物 的步骤； 具体地， 所述肥胖症相关疾病为高脂血症、 动脉粥样硬化、 冠心病、 或糖尿病。 当用于上述治疗和 /或预防和 /或辅助治疗时， 治疗和 /或预防和 / 或辅助治疗的有效量的一种本发明化合物可以 以纯形式应用， 或者以 药学可接受的酯或前药形式（在存在这些形式 的情况下）应用。 或者， 所述化合物可以以含有该目的化合物与一种或 多种药物可接受赋形 剂的药物组合物给药。 但应认识到， 本发明化合物和组合物的总日用 量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出 决定。 对于任何具体的 患者， 具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定 ， 所述因素包括 所治疗的障碍和该障碍的严重程度； 所采用的具体化合物的活性； 所 采用的具体组合物； 患者的年龄、体重、 一般健康状况、 性别和饮食； 所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和 排泄率；治疗持续时间； 与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的 药物； 及医疗领域公知 的类似因素。 例如， 本领域的做法是， 化合物的剂量从低于为得到所 需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量 ，直到得到所需的效果。 一般说来， 本发明式 I化合物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介� � 0. 001 - 1000 mg/kg体重 /天， 例如介于 0. 01 - 100 mg/kg体重 /天， 例如介于 0. 01 - 10 mg/kg体重 /天。

根据本发明的化合物可以有效地预防和 /或治疗本发明所述的各 种疾病或病症。

本发明中， 术语 ' -( ₃ 烷基" 包括曱基、 乙基、 丙基和异丙基。 术语 "肥胖症" 包括但不限于单纯性肥胖（无明显内分泌、 代谢 的病因可寻， 与遗传、 饮食习惯等有关） 、 继发性肥胖（常是某些疾 病如肾上腺皮质功能亢进的一种， 可因疾病的治愈而消除） 。 所述肥 胖症可以是哺乳动物的肥胖症， 所述哺乳动物包括人或猪。

术语 "肥胖症相关疾病"包括但不限于高脂血症、动� ��粥样硬化、 冠心病、 或糖尿病等等。

术语 "脂肪酶" （ l ipase , 酶分类号 EC3. 1. 1. 3 ) 包括但不限于 哺乳动物的脂肪酶， 例如人的脂肪酶或猪的脂肪酶， 所述人的脂肪酶 以是人胰脂肪酶， 所述猪的脂肪酶可以是猪胰脂肪酶 （porc ine

术语 "有效量" 是指可在受试者中实现治疗、 预防、 减轻和 /或 緩解本发明所述疾病或病症的剂量。

本发明中， 对于某种成分的含量的百分比， 如果没有特别说明， 均指重量百分比 （w/w ) 。 本发明还涉及如下方面 1 - 22:

1. 如下的 （1 ) - ( 4 ) 中的任一项在制备预防和 /或治疗和 /或 辅助治疗癌症的药物中的用途； 具体地， 所述癌症为结肠癌、 肝癌、 淋巴癌、 或黑色素瘤，

( 1 ) 式 I所示的 盐，

其中，

选自 -0H =0、 H、 以及 d-C ₃ 烷基;

R ₂ 选自- 0H H、 以及 d-C ₃ 烷基；

R ₃ 选 ll _0H =0、 H、 以及 d-C ₃ 烷基;

R ₄ 选自 -OH H、 以及 d-C ₃ 烷基； 并且 、 R ₂ 、 R ₃ 、 和 R ₄ 中任意 2个、 3个或 4个同时为 -OH; (2) 式 II所示的 盐，

式 II

( 3)提取物， 其含有式 II化合物； 和

(4)组合物， 其含有上述的 （1) - ( 3) 中的任一项。

2. 第 1 方面中所述的 （1) - (4) 中的任一项在制备在体内或 体外抑制肿瘤细胞的药物或者试剂中的用途； 具体地， 所述肿瘤细胞 为结肠癌细胞、 肝癌细胞、 淋巴癌细胞或黑色素瘤细胞。

3. 根据第 1或 2方面所述的用途， 其中， 所述第 （3)项中的提 取物为红曲提取物和 /或红曲醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物） 的提 取物。

4. 根据第 3方面所述的用途， 其中， 所述第（3)项中的提取物， 其为如下的步骤 1 )至 2 )中制得的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50 - 25: 75 的洗脱部分；或如下的步骤 1 )至 3)中制得的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25 的洗脱部分； 或如下的步骤 1) 至 4) 中制得的 9.2 min的色语峰部 分：

1)取红曲和 /或红曲的醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物干粉） ， 用 2- 6 倍体积的选自二氯曱烷、 乙酸乙酯、 丙酮、 甲醇、 乙醇中的 一种或多种有机溶剂作为溶剂超声提取一次或 多次， 每次 20 - 40分 钟， 合并提取液， 除去溶剂， 得到精提物；

2 )将步骤 1 )得到的精提物进行硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱；石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50 - 25: 75、 0: 100;

3) 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50:50 - 25:75的洗脱部 分， 经 CI 8反相柱色谱进行分离， 用曱醇 -水进行梯度洗脱， 曱醇-水 的体积比依次为 10: 90、 50: 50 - 75:25、 100: 0; 和

4)取步骤 3)中的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分用半制备 高效液相色语纯化， 以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55 ) 为流动相， C18半制备柱为固定相， 收集 9.2 min的色谱峰部分。

5. 根据笫 4 方面所述的用途， 其特征在于 （1) - (8) 中的任 一项或者多项：

(1) 步骤 1) 中， 所述有机溶剂为二氯曱烷；

( 2 ) 步骤 1 ) 中， 所述超声提取进行 3次；

( 3) 步骤 1) 中， 通过减压浓缩除去溶剂；

( 4 )步骤 2 )中，石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50、 25: 75、 0: 100;

(5) 步骤 3) 中， 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50或 25: 75的洗脱部分；

(6)步骤 3)中， 曱醇 -水的体积比依次为 10:90、 50: 50、 75:25、 100: 0;

( 7 ) 步骤 4 ) 中， 取步骤 3) 中的曱醇 -水为 50: 50或 75: 25的 洗脱部分； 和

( 8 ) 步骤 4 ) 中， 将收集的 9.2 min的色谱峰部分合并。

6. 根据笫 1或 2方面所述的用途， 其中， 所述第 （4)项中的组 合物还包括药学上可接受的载体或辅料。

7. 一种在体内或体外抑制肿瘤细胞的方法， 包括使用有效量的 第 1方面中所述的 （1) - (4) 中的任一项的步骤； 具体地， 所述肿 瘤细胞为结肠癌细胞、 肝癌细胞、 淋巴癌细胞或黑色素瘤细胞。

8. 根据第 7方面所述的方法， 其中， 所述第 （3)项中的提取物 为红曲提取物和 /或红曲醇提物（例如血脂康胶嚢内容物）的� �取物。

9. 根据第 8方面所述的方法， 其中， 所述第（ 3)项中的提取物， 其为如下的步骤 1 )至 2 )中制得的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50 - 25: 75 的洗脱部分；或如下的步骤 1 )至 3)中制得的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25 的洗脱部分； 或如下的步骤 1) 至 4) 中制得的 9.2 min的色语峰部 分：

1)取红曲和 /或红曲的醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物干粉） ， 用 2- 6 倍体积的选自二氯曱烷、 乙酸乙酯、 丙酮、 甲醇、 乙醇中的 一种或多种有机溶剂作为溶剂超声提取一次或 多次， 每次 20 - 40分 钟， 合并提取液， 除去溶剂， 得到精提物；

2 )将步骤 1 )得到的精提物进行硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱；石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50 - 25: 75、 0: 100;

3) 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50:50 - 25:75的洗脱部 分， 经 C18反相柱色谱进行分离， 用甲醇 -水进行梯度洗脱， 甲醇-水 的体积比依次为 10: 90、 50: 50 - 75:25、 100: 0; 和

4)取步骤 3)中的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分用半制备 高效液相色语纯化， 以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55 ) 为流动相， C18半制备柱为固定相， 收集 9.2 min的色谱峰部分。

10. 根据第 9方面所述的方法， 其特征在于 （1) - (8) 中的任 一项或者多项：

(1) 步骤 1) 中， 所述有机溶剂为二氯曱烷；

( 2 ) 步骤 1 ) 中， 所述超声提取进行 3次；

( 3) 步骤 1) 中， 通过减压浓缩除去溶剂；

( 4 )步骤 2 )中，石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50、 25: 75、 0: 100;

(5) 步骤 3) 中， 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50或 25: 75的洗脱部分；

(6)步骤 3)中， 曱醇 -水的体积比依次为 10:90、 50: 50、 75:25、 100: 0;

( 7 ) 步骤 4 ) 中， 取步骤 3) 中的曱醇 -水为 50: 50或 75: 25的 洗脱部分； 和

( 8 ) 步骤 4 ) 中， 将收集的 9.2 min的色语峰部分合并。 11. 根据第 7 方面所述的方法， 其中， 所述第 （4) 项中的组合 物还包括药学上可接受的载体或辅料。

12. 如下的 （1) - (4) 中的任一项在制备预防和 /或治疗和 /或 辅助治疗肥胖症或肥胖症相关疾病的药物或者 减肥药物中的用途； 具 体地， 所述肥胖症相关疾病为高脂血症、 动脉粥样硬化、 冠心病、 或 糖尿病，

( 1 ) 式 I所示的 盐，

其中，

选自- 0H、 =0、 H、 以及 d_C ₃ 烷基；

R ₂ 选自- 0H、 H、 以及 d_C ₃ 烷基；

R ₃ 选自- 0H、 =0、 H、 以及 d_C ₃ 烷基；

R ₄ 选自- 0H、 H、 以及 d_C ₃ 烷基；

并且 、 R ₂ 、 R ₃ 、 和 R ₄ 中任意 2个、 3个或 4个同时为 -OH; (2) 式 II所示的 盐，

式 Π;

( 3)提取物， 其含有式 II化合物； 和

(4)组合物， 其含有上述的 （1) - ( 3) 中的任一项。

13. 第 12 方面中所述的 （1) - (4) 中的任一项在制备在体内 或体外抑制脂肪酶的药物或试剂中的用途。

14. 根据第 12或 13方面所述的用途， 其中， 所述第 （3) 项中 的提取物为红曲提取物和 /或红曲醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物） 的提取物。

15. 根据第 14方面所述的用途， 其中， 所述第 （3)项中的提取 物， 其为如下的步骤 1 ) 至 2) 中制得的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50 - 25: 75的洗脱部分； 或如下的步骤 1)至 3)中制得的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分； 或如下的步骤 1)至 4) 中制得的 9.2min的色 谱峰部分：

1)取红曲和 /或红曲的醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物干粉） ， 用 2- 6 倍体积的选自二氯曱烷、 乙酸乙酯、 丙酮、 甲醇、 乙醇中的 一种或多种有机溶剂作为溶剂超声提取一次或 多次， 每次 20 - 40分 钟， 合并提取液， 除去溶剂， 得到精提物；

2 )将步骤 1 )得到的精提物进行硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱；石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50 - 25: 75、 0: 100;

3) 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50:50 - 25:75的洗脱部 分， 经 C18反相柱色谱进行分离， 用曱醇 -水进行梯度洗脱， 曱醇-水 的体积比依次为 10: 90、 50: 50 - 75:25、 100: 0; 和

4)取步骤 3)中的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分用半制备 高效液相色语纯化， 以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55 ) 为流动相， C18半制备柱为固定相， 收集 9.2 min的色谱峰部分。

16. 根据第 15 方面所述的用途， 其特征在于 （1) - (8) 中的 任一项或者多项：

(1) 步骤 1) 中， 所述有机溶剂为二氯曱烷；

( 2 ) 步骤 1 ) 中， 所述超声提取进行 3次；

( 3) 步骤 1) 中， 通过减压浓缩除去溶剂；

( 4 )步骤 2 )中，石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50、 25: 75、 0: 100;

(5) 步骤 3) 中， 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50或 25: 75的洗脱部分； (6)步骤 3)中， 曱醇 -水的体积比依次为 10:90、 50: 50、 75:25、 100: 0;

( 7 ) 步骤 4 ) 中， 取步骤 3) 中的曱醇 -水为 50: 50或 75: 25的 洗脱部分； 和

( 8 ) 步骤 4 ) 中， 将收集的 9.2 min的色借峰部分合并。

17. 根据第 12或 13方面所述的用途， 其中， 所述第 （4) 项中 的组合物还包括药学上可接受的载体或辅料。

18. —种在体内或体外抑制脂肪酶的方法， 包括使用有效量的第 I ² 方面中所述的 （1) - (4) 中的任一项的步骤。

19. 根据第 18方面所述的方法， 其中， 所述第 （3)项中的提取 物为红曲提取物和 /或红曲醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物） 的提取 物。

20. 根据第 19方面所述的方法， 其中， 所述第 （3)项中的提取 物， 其为如下的步骤 1 ) 至 2) 中制得的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50 - 25: 75的洗脱部分； 或如下的步骤 1)至 3)中制得的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分； 或如下的步骤 1)至 4) 中制得的 9.2 min的色 谱峰部分：

1)取红曲和 /或红曲的醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物干粉） ， 用 2- 6 倍体积的选自二氯曱烷、 乙酸乙酯、 丙酮、 甲醇、 乙醇中的 一种或多种有机溶剂作为溶剂超声提取一次或 多次， 每次 20 - 40分 钟， 合并提取液， 除去溶剂， 得到精提物；

2 )将步骤 1 )得到的精提物进行硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱；石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50 - 25: 75、 0: 100;

3) 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50:50 - 25:75的洗脱部 分， 经 C18反相柱色谱进行分离， 用曱醇 -水进行梯度洗脱， 曱醇-水 的体积比依次为 10: 90、 50: 50 - 75:25、 100: 0; 和

4)取步骤 3)中的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分用半制备 高效液相色语纯化， 以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55 ) 为流动相， C18半制备柱为固定相， 收集 9.2 min的色谱峰部分。

21. 根据第 20方面所述的方法， 其特征在于 （1) - (8) 中的 任一项或者多项：

(1) 步骤 1) 中， 所述有机溶剂为二氯曱烷；

( 2 ) 步骤 1 ) 中， 所述超声提取进行 3次；

( 3) 步骤 1) 中， 通过减压浓缩除去溶剂；

( 4 )步骤 2 )中，石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50、 25: 75、 0: 100;

(5) 步骤 3) 中， 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50或 25: 75的洗脱部分；

(6)步骤 3)中， 甲醇 -水的体积比依次为 10:90、 50: 50、 75:25、 100: 0;

( 7 ) 步骤 4 ) 中， 取步骤 3) 中的曱醇 -水为 50: 50或 75: 25的 洗脱部分； 和

( 8 ) 步骤 4 ) 中， 将收集的 9.2 min的色语峰部分合并。

22. 根据第 18方面所述的方法， 其中， 所述第 （4)项中的组合 物还包括药学上可接受的载体或辅料。 发明的有益效果

1. 本发明的化合物能够有效地抑制 HMG-CoA还原酶， 具有剂量 依赖性的抑制 HMG-CoA还原酶活性； 具有作为降低或调节血脂或者预 防和 /或治疗血脂异常、 高血脂症、 高胆固醇血症、 或动脉粥样硬化 的药物的潜力。

2. 本发明的化合物能够有效地抑制癌细胞（肿瘤 细胞）的增殖， 且抑制作用且呈浓度 -效应关系； 从而具有作为预防和 /或治疗和 /或 辅助治疗癌症的药物的潜力。

3. 本发明的化合物能够有效地抑制脂肪酶的活性 ， 且抑制作用 且呈浓度 -效应关系； 从而具有作为预防和 /或治疗和 /或辅助治疗肥 胖症或肥胖症相关疾病的药物或者减肥药物的 潜力。 附图说明

Fig. 1 式 II化合物对 HCT116细胞生长的抑制作用曲线。

Fig. 2 式 II化合物对 H22细胞生长的抑制作用曲线。

Fig. 3 式 II化合物对 HepG2细胞生长的抑制作用曲线。

Fig. 4 式 II化合物对 S180细胞生长的抑制作用曲线。

Fig. 5 式 II化合物对 YAC-1细胞生长的抑制作用曲线。

Fig. 6 式 II化合物对 THP1细胞生长的抑制作用曲线。

Fig. 7 式 II化合物对 U937细胞生长的抑制作用曲线。

Fig. 8 式 II化合物对 B16-F10细胞生长的抑制作用曲线。

Fig. 9 油酸吸光度工作曲线。 具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详 细描述， 但是本领 域技术人员将会理解， 下列实施例仅用于说明本发明， 而不应视为限 定本发明的范围。 实施例中未注明具体条件者， 按照常规条件或制造 商建议的条件进行。 所用试剂或仪器未注明生产厂商者， 均为可以通 过市购获得的常规产品。 实施例 1: 式 II化合物的制备（1)

操作步骤：

1)取血脂康胶嚢 （北大维信生产） 内容物干粉约 1 kg, 用 2- 6 倍体积的二氯甲烷为溶剂超声提取 3次， 每次 20 - 40分钟， 合并提 取液， 减压浓缩并回收溶剂， 得到二氯曱烷精提物 91 g。

2)取二氯曱烷精提物 50 g, 上硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱。 石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75:25， 50: 50， 25: 75， 0: 100。

3)取石油醚 -乙酸乙酯为 25: 75部分 5.0 g， 经 C18反相柱色谱 进行分离， 曱醇-水（ 10: 90-100: 0 )梯度洗脱得到 4 个部分（曱醇- 水 10: 90、 50: 50、 75: 25、 100: 0) ， 其中曱醇-水（ 75: 25 )洗脱 部分 1.3 g用半制备高效液相色谱纯化，以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55 ) 为流动相， 流速为 4 mL/min, C18半制备色谱柱（ 10 x 250 mm, 5μπι) 为固定相， DAD检测器检测波长为 270 nm， 收集 9.2 min的色 谱峰， 多次累加后浓缩， 冷冻干燥得该化合物约 40 mg。 实施例 2: 式 II化合物的制备（2)

操作步骤：

1)取红曲 5 kg, 用 2-6 倍体积的二氯曱烷为溶剂超声提取 3 次， 每次 20 - 40分钟， 合并提取液， 减压浓缩并回收溶剂， 得到二 氯曱烷精提物 78 g。

2)取二氯甲烷精提物 30 g， 上硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱。 石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75:25， 50: 50， 25: 75， 0: 100。

3)取石油醚 -乙酸乙酯为 25: 75部分 3.0 g， 经 C18反相柱色谱 进行分离， 曱醇-水（ 10: 90-100: 0 )梯度洗脱得到 4 个部分（曱醇- 水 10: 90、 50: 50、 75: 25、 100: 0) ， 其中曱醇-水（ 75: 25 )洗脱 部分 0.8 g用半制备高效液相色谱纯化，以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55) 为流动相， 流速为 4 mL/min, C18半制备色谱柱（ 10 x 250 mm, 5μπι) 为固定相， DAD检测器检测波长为 270 nm， 收集 9.2 min的色 谱峰， 多次累加后浓缩， 冷冻干燥得该化合物约 25 mg。 实施例 3: 式 II化合物的制备（3)

在反应瓶中加入曱苯（ 350 ml )，再加入化合物 A (4.4 g， 9.2 mmol) 和对曱苯磺酸一水合物 （0.59 g, 3.1 mmol )加热至回流并共沸除水 7 h， 反应后降至室温， 减压脱除溶剂， 然后硅胶柱层析纯化， 得粘 稠状的油状化合物， 即式 II化合物。 化合物 A 式 II 实施例 4: 式 II化合物的制备（4 )

在反应瓶中加入吡啶（ 100 ml )，再加入化合物 A (4.4 g， 9.2 mmol) 和 2， 4， 6 -三异丙基磺酰氯（0.93 g， 3.1 mmol)， 在 50°C反应 20 h， 减压脱除溶剂， 然后硅胶柱层析纯化， 得粘稠状的油状化合物， 即式 II

化合物 A 式 II 实施例 5: 化合物的结构鉴定

所用样品为实施例 1、 2、 3、 4制备的化合物。 结果证明实施例 1 - 4制备的化合物相同， 均为式 II化合物。

1. 化合物的理化数据

白色粉末， 旋光度： [a] ²⁵ _D -50.00 (c 0.118， CH ₂ C1 ₂ : MeOH = 1: 1) ;

UV光谱中有三个最大吸收峰，分别为 _ax (CH ₂ Cl ₂ : MeOH) = 271.6 nm _; 282.2 nm, 293.8 體。

FT-IR ( KBr, cm— ¹ )光语： 3392 ( -OH ) , 2969, 2933 (饱和碳氢）， 1652, 1647 ( C=C ) ， 1456， 1378 (偕二曱基） 。

2. 分子式的确定 HR-ESI-MS给出的 »A 483. 3104 [M+Na] ⁺ (ca l cd. 483. 3081， err 2. 3)，推断为该化合物的分子量为 460. 32。在 -MR和 ¹³ C-NMR显示， 共有 40个氢信号和 28个碳信号。 从 DEPT显示， 有 6个季碳， 10个 CH , 6个 CH ₂ 及 6个 CH ₃ 。 在 ¹³ C-NMR中， 117. 2 ppm, 119. 6 ppm, 139. 1 ppm及 140. 6 ppm 处有 4个烯碳信号。 与 HSQC图与 ¹³ C-NMR图结合分 析, 70. 5 ppm, 72. 4 ppm, 74. 5 ppm, 80. 4 ppm, 83. 8 ppm及 84. 4 ppm 处存在与氧原子相连的 6个碳。 结合分子量和 、 ¹³ C-NMR及 DEPT信 号图， 如果该化合物拥有 6个氧原子的话分子量超过 460. 32 , 由此推 断该化合物具有 5个氧原子和未体现氢谱信号的 4个氢原子。 从而可 以判断上述 5个氧原子中， 4个氧原子归属为 4个羟基， 另外第 5个 氧原子以醚的形式存在。 根据上述分析， 可以确定该分子中有 28 个 碳原子， 44个氢原子及 5个氧原子， 分子式为 C ₂₈ H ₄₄ 0 ₅ 。

3. 结构式的确定

分析该化合物的碳语 ( ¹³ C-NMR及 DEPT ) ， 有 28个碳原子， 其中 6个碳为曱基。 基于紫外吸收光语中 271. 6 nm， 282. 2 nm及 293. 8 nm 处的 3个最大吸收与麦角 醇类基本吻合，初步推断该化合物具有麦 角甾醇的骨架。从分子式可以计算得其不饱和 度为 7。从而可以推断： 该化合物除了 2个双键和 醇骨架 4个环的 6个不饱和处外， 还有一 个不饱和处而且此处只能是一个环， 由此可以判断该环是由第 5个氧 原子为中心形成的环氧环。 HSQC图与 HMBC相关信号图相结合分析， 与氧原子相连的 6个碳， 分别归属为 4个羟基相连的 4个碳（ 70. 5， 72. 4， 74. 5， 80. 4 ppm )及与剩下一个氧原子相连的 2个碳（83. 8， 84. 4 ppm)。 深入的 HMBC图分析， 可以推断第 5个环体系是由 C-16 (83. 8 ppm) , C-17 (66. 9 ppm) , C-20 (80. 4 ppm)， C-22 (84. 4 ppm)及氧 原子组成的 5元环。 这不但满足不饱和度， 而且还满足与氧原子相连 的碳原子数。 进一步分析质谱分析系统给出的分子量及分子 式， 证实 了上述分析。 综合上述分析可推测该新化合物为： 16， 22-环氧麦角甾 -5, 7 -二烯 _3， 20, 23, 25_四醇即 ( 16， 22_epoxy - ergos ta - 5， 7-d ien-3, 20, 23, 25-tet rao l ) 。 结构式为下面的式 I I所示：

式 I I

式 Ι

4. 式 I I化合物的 NMR数据

如下面的表 1所示。

表 1 : 式 I I化合物的 MR数据 （600MHz, CDC1 ₃ , / in Hz)

'H-NMR, ¹³ C-NMR, HMBC

No. DEPT

(ppm) (ppm) (H→C)

1. 28 (1H， m)

1 38. 4 CH ₂ ―

1. 90 (1H， m)

1. 48 (1H， m)

2 32. 1 CH ₂ ―

1. 89 (1H， m)

3 3. 62 (1H， m) 70. 5 CH ―

2. 39 (1H， m)

4 40. 9 CH ₂ ―

2. 46 (1H， m)

5 ― 140. 6 C ―

6 5. 56 (1H， m) 119. 6 CH 4, 7

7 5. 38 (1H， m) 117. 2 CH ―

8 ― 139. 1 C ―

9 1. 95 (1H， m) 46. 0 CH ― ― 37. 3 C ―

1. 60 (1H， m)

20. 8 CH ₂ ―

1. 77 (1H， m)

1. 25 (1H， m)

39. 3 CH ₂ ―

2. 08 (1H, m)

― 43. 0 C

1. 87 (1H， m) 54. 0 CH 13

1. 75 (1H， m)

34. 2 CH ₂ 14

2. 23 (1H， m)

4. 66 (1H， m) 83. 8 CH 13， 14， 15

1. 90 (1H， m) 66. 9 CH 20, 22

1. 12 (3H， s) 14. 6 CH ₃ 27, 12， 13， 14

0. 96 (3H， s) 16. 6 CH ₃ 9, 10, 1

― 80. 4 C ―

1. 43 (3H， s) 27. 8 CH ₃ 20, 22, 24

4. 19 (1H,

84. 4 CH 21, 24, 23, 20 brs)

3. 66 (1H，

brd, / = 9. 0 72. 4 CH 28, 24， 25, 20 Hz)

1. 75 (1H， m) 46. 4 CH 27， 28

― 74. 5 C ―

1. 20 (3H， s) 30. 3 CH ₃ 25, 24

1. 23 (3H， s) 24. 0 CH ₃ 25, 24 . 82 (3H， d, J

14. 0 CH ₃ 23, 25, 24 = 1. 1 Hz)

-" 表示不存在相关信号。 实施例 6: 式 II化合物的四乙酸酯的制备

将 20 mL的乙酸酐中， 化合物 A ( 4.23 g， 9.2 腿 ol ) 和 2滴浓 酸的混合液在水浴上加热至 50°C， 反应 2h。 冷却， 加饱和 NaHC0 ₃ 水溶液， 用曱苯提取 3 次， 旋蒸有机层得成品， 硅胶柱层析得式 II 化合物的四乙酸酯。 为防止构型反转也可用吡啶催化。 实施例 7: 式 II化合物的四对甲苯磺酯的制备

在干燥的 25 mL烧瓶中， 加入式 II化合物 （ 4.23 g， 9.2 腿 ol ) 与 5 Oml干燥二氯曱烷. 冷却至 0 °C ，投入对曱苯磺酰氯（ 10.56 g， 55.3 mmol) , 在搅拌下滴加三乙胺（ 7· 46 g， 73.6 mmol ) 。 滴加完 毕， 20°C搅拌 l h， 反应混合液水洗（ 50 mLx 3) ， 无水^ I酸钠干燥， 过滤， 蒸干溶剂得到粗品，快速柱层析得到式 II化合物的四对曱苯磺 酯。 实施例 8: 式 II化合物的四（三氟甲磺酸酯）的制备

在搅拌下将式 Π化合物 （ 4.23 g, 9.2 mmol )和吡啶（ 4.36 g， 55.2 mmol )依次加入盛有 50 mL干燥二氯曱烷的烧瓶中， 然后于室 温（ 25°C )緩慢滴加三氟曱磺酸酐（ 12.46 g， 44.2 mmol )， 约 20 min 加完， 反应 2h， 浓缩滤液， 残余物经硅胶柱层析， 分离得式 II化合 物的四（三氟甲磺酸酯）。 实施例 9: 式 II化合物的四（叔丁基二曱基硅醚）的制备

100 mL圓底烧瓶中加入 20 mL THF及 1.26 g矿物油包裹的 NaH (含量 70%， 36.8 mmol) ， 搅拌使 NaH充分分散， 滴加式 II化合物 ( 4.23 g， 9.2 mmol ) 的 THF ( 10 mL) ， 室温下剧烈搅拌反应 1 h。

TBDMS - C1 (叔丁基二曱基氯硅烷） ( 5.53 g, 36.8 mmol)溶于 10 mL THF 中， 搅拌下滴加至上述反应液中， 控制滴速， 使反应温度不致太高， 滴加完毕， 室温下继续搅拌反应 1.5 h。 反应液倒入水中， 用二氯曱 烷提取， 有机相水洗到中性， 饱和盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥。 滤液 浓缩， 柱层析分离， 得式 I I化合物的四（叔丁基二曱基硅醚）。 实验例 1 : HMG-CoA还原酶抑制活性实验

1. 实验材料

1. 1 药品

式 I I化合物 一- 实施例 1 - 4中所制备。

洛伐他汀标准品 一 购于 S igma。

1. 2 酶

大鼠肝脏微粒体 (HMG-CoA 还原酶） —— ， 可以商购， 也可以 参考如下的制备方法： 取出雄性大鼠的肝脏， 用 KESD緩冲液冲洗之 后， 1200g离心 15 min， 取上清液。 再用 105， OOOg离心 90 min两次 之后， 收集离心沉淀。 离心沉淀中加入 8. 3%甘油， 用 37 °C温浴加热 1 h。大鼠肝脏微粒体粗体物用饱和硫酸铵纯化� �收集 35-50%纯化部分。 可以将得到的纯化部分存放在 -80°C冰箱中。

1. 3 试剂

氯化鉀、 磷酸二氢鉀、 乙二胺四乙酸、 二硫苏糖醇 -— 购于北 京化学试剂公司；

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 （NADPH ) ― 购于 Merk;

3-羟基 -3-曱基戊二酰辅酶 A (HMG-CoA ) 购于 S i gma。

2. 实验方法

将式 I I化合物用 75%乙醇溶液溶解， 初浓度为 8. 0 mg/mL并逐级 稀释， 4. 0 mg/mL, 2. 0 mg/mL, 1. 0 mg/mL; 洛伐他汀为阳性对照， 用 75%乙醇溶液溶解， 浓度为 2. 0 mg/mL; 测定体系中总体积为 250 μΐ , 各成分的浓度为： 氯化鉀 200 mM, 磷酸二氢鉀 160 mM， 乙二胺 四乙酸 4 mM, 二¾苏糖醇 10 mM, 两个底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 和 3-羟基 -3-甲基戊二酰辅酶 A的浓度分别为 200 μΜ和 50 μΜ, ρΗό. 8， 酶加 30 μΐ, 4个试验组各加 10 不同浓度的新化合物溶液， 阳性 对照组加 10 μΐ洛伐他汀溶液， 空白对照组加 10 L75%乙醇溶液， 在 Versamax 酶标仪上 37 °C条件下检测 0D ₃₄ 。的动态变化。 通过检测 0D ₃₄ 。在 5分钟内下降的快慢（以斜率值表示） ， 来评价 HMG-CoA还原 酶活性的强弱， 进而评价酶抑制剂活性的强弱， 结果见表 2。

3. 实验结果

如下面的表 2所示。

表 2·· 酶抑制剂活性检测结果

* 空白对照为溶剂。

洛伐他汀是阳性对照。

实验结果表明， 本发明的化合物特别是式 II 化合物对 HMG-CoA 还原酶的活性有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC ₅ 。值约为 250 μ /ωΣ, 表明该化合物对 HMG-CoA还原酶的活性有较好的抑制作用。

进一步的研究发现， 式 II 化合物的酯类衍生物或者醚衍生物， 例如实施例 6- 9制备的 "式 II化合物的四乙酸酯、 式 II化合物的 四对曱苯磺酯、 式 II化合物的四（三氟曱磺酸酯）以及式 II化合物的 四（叔丁基二曱基硅醚）" 也具有类似的抑制 HMG-CoA还原酶的活性。 实验例 2: 式 II化合物的癌细胞抑制实验

1 实验材料

1.1 细胞株

HCT116及 H22 购于 Korean cell line bank, Seoul, Korea; S180, HepG-2, YAC-1, Thpl, U937及 B16-F10 购于中国科学院 典型培养物保藏委员会细胞库。

1.2 药品

实施例 1 - 4制备的新化合物 （式 II化合物） 。

1.3 试剂

MTT为购于 Amresco公司； RPMI1640和双抗购于 Sigma公司； 胎 牛血清 （FBS) 购于美国 Gibco公司； 其它试剂均为国产分析纯。

2 实验方法

取对数生长期的癌细胞， 以 2xl0 ⁴ 个 /孔， 接种于 96孔培养板， 加入药物至药物终浓度为： 500， 250, 125， 62.5， 31.25, 15.625 及 7.8125 g/mL，于 37°C， 5%C0 ₂ 细胞培养箱中培养 72h后加入 MTT 10 μΐ7孔， 于 37" 避光孵育 4 h， 去除培养液， 加入 15G μΐ DMS0或酸 化异丙醇， 振荡 5 min后， 于 570 nm波长测定 0D值。 重复 3次， 设 空白对照。 各种细胞株所用培养基都相同， 均为含 10%胎牛血清和 1% 双抗（青霉素和链霉素） 的 RPMI16 ⁴ 0培养基。

计算公式：

细胞存活率 = (实验组 0D值 /对照组 0D值） χ 100%。

实验步骤也可以参考杨秀伟等， 《马钱子生物碱成分的体外抗肿 瘤活性筛选》 ， 中国现代中药， 2006， 8 ( 9) : 11-13。

3 实验结果

3.1式 II化合物的体外抗癌 （结肠癌） 活性

结果如 Fig.1所示。 结果显示， 式 II化合物对人结肠癌细胞株 HCT116的生长有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 可见， 该化合物具 有防治结肠癌的潜力。

3.2 式 II化合物的体外抗癌 （肝癌） 活性

3.2.1如 Fig.2所示，式 II化合物对小鼠肝癌细胞株 H22的生长 有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC ₅ 。值约为 50 g/mL， 表明对 小鼠肝癌细胞增殖有良好的抑制作用。

3.2.2如 Fig.3所示，式 II化合物对人肝癌细胞株 HepG2的生长 有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC ₅ 。值约为 200 g/mL， 表明对 人肝癌细胞增殖有较好的抑制作用。

3.2.3如 Fig.4所示， 式 II化合物对小鼠肉瘤细胞株 S180的生 长有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。

可见， 该化合物具有防治肝癌的潜力。

3.3 式 II化合物的体外抗癌 （淋巴瘤） 活性

3.3.1如 Fig.5所示，式 II化合物对小鼠淋巴瘤细胞 YAC-1的生 长有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC ₅ 。值约为 62.5 g/mL， 表 明对小鼠淋巴瘤细胞增殖有良好的抑制作用。

3.3.2如 Fig.6所示， 式 II化合物对人单核淋巴瘤细胞 THP1的 生长有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC ₅ 。值约为 250 g/mL， 表 明对人单核淋巴瘤细胞增殖有较好的抑制作用 。 图 6

3.3.3如 Fig.7所示， 式 II化合物对人组织淋巴瘤细胞 U937的 生长有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC ₅ 。值约为 50 g/mL， 表 明对人组织淋巴瘤细胞增殖有良好的抑制作用 。

可见， 该化合物具有防治淋巴癌 （淋巴瘤） 的潜力。

3.4 式 II化合物的体外抗癌 （黑色素瘤） 活性

结果如 Fig.8所示。 结果显示， 式 II化合物对小鼠黑色素瘤细 胞 B16-F10的生长有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC ₅ 。值约为 62.5 μ /mL,表明对小鼠黑色素瘤细胞增殖有良好的抑� �作用。可见， 该化合物具有防治黑色素瘤的潜力。

综上可见， 本发明的化合物特别是式 II化合物对多种肿瘤细胞 具有有效的抑制作用， 具有预防和 /或治疗和 /或辅助治疗癌症的药物 的潜力。

进一步的研究发现， 式 II 化合物的酯类衍生物或者醚衍生物， 例如实施例 6- 9制备的 "式 II化合物的四乙酸酯、 式 II化合物的 四对曱苯磺酯、 式 II化合物的四（三氟曱磺酸酯）以及式 II化合物的 四（叔丁基二曱基硅醚）" 也具有类似的抑制肿瘤细胞的活性， 具有预 防和 /或治疗和 /或辅助治疗癌症的药物的潜力。 实验例 3: 脂肪酶抑制活性实验

1 实验材料

1.1 药品

式 II化合物。

奥利司他 (orlistat)― 购自金象大药房。

1.2 酶

猪胰脂肪酶 -— 购自 Sigma公司。

1.3 试剂

油酸 一 购自 Sigma公司。

曱苯、 橄榄油、 吡啶、 醋酸铜、 NaH ₂ P0 ₄ 、 K ₂ HP0 ₄ 均为国产分析纯。

2 实验方法

如下面的步骤所示， 也可以参考江慧芳， 王雅琴， 刘春国. 三种 脂肪酶活力测定方法的比较及改进. 化学与生物工程. 2007， 24 (8): 72-75; 和朱晓青， 吕敬慈， 霍世欣等. 荷叶生物碱对脂肪酶 的抑制作用. 上海大学学报（自然科学版） ， 2007， 13 (1):85-87。

2.1脂肪酸吸光度工作曲线的绘制：配制一系列 不同浓度的油酸- 曱苯溶液（ 0-3.5 mmol/L, 分别为 0、 0.225、 0.45、 0.675、 0.9、 1.125、 1.35、 1.8、 2.25、 2.7、 和 3.5 mmol/L) ， 分别取 4 mL于锥形瓶中， 加入 l mL显色剂， 磁力搅拌 3min， 油酸分子与铜离子生成绿色的络 合物， 离心后取上层有机相在 714 nm处测定吸光度。

2.2 酶溶液为 0.5 mg/mL 胰脂肪酶溶液； 緩沖液为 0.07M NaH ₂ P0-K ₂ HP0 ₄ 磷酸盐緩冲溶液（ pH 7.0 )； 显色剂为 5%醋酸铜溶液， 用吡啶调节 pH 6.1。

2.3 脂肪酶活力的测定：

取 3 mL 0.07 M磷酸盐緩冲液和 1 mL橄榄油， 放入水浴恒温磁 力搅拌器 37°C中预热 5 min, 加入 1.3 mL酶液（不加酶抑制剂为阴 性对照； 加 0.1 mg/mL奥利司他溶液 100 为阳性对照； 0.6、 0.9、 1.1、 1.3、 1.8 mg/mL式 II化合物溶液各加 100 μΐθ ， 磁力搅拌 10 min, 立即加入 8mL 曱苯， 继续搅拌 2 min， 终止反应， 同时萃取生 成的油酸。 将溶液转移至离心管中， 在 4000 rpm下离心 10 min， 有 机相和水相分层澄清。 取上层有机相 4 mL于小锥形瓶中， 加入 1 mL 显色剂， 在磁力搅拌器上搅拌 3 min, 产生的油酸与铜离子生成绿色 络合物。 4000 rpm 离心 10 min， 取上层含有油酸铜的曱苯溶液， 用 分光光度计在 714 nm波长处测其吸光度。 以相同方法制备不含脂肪 酶的空白溶液为参比， 对照油酸吸光度工作曲线， 即可求得脂肪酸的 浓度。

3 酶活定义和计算公式

脂肪酶酶活力单位定义为： 在一定条件下， 每分钟释放出 Ι μιηο ΐ 脂肪酸的酶量定义为 1个脂肪酶活力单位（U ) 。

按下式计算酶活： X = (cV) / (tV)

式中： X为脂肪酶活力, U/mL; c为脂肪酸浓度， μπιο Ι /mL; V为 脂肪酸溶液的体积， mL; V，为酶液的用量， mL; t为作用时间， min。

抑制率 = [ (脂肪酶活力 -抑制后脂肪酶活力） I 脂肪酶活力] X 100%

4 实验结果

4. 1 油酸吸光度工作曲线

如 F i g. 9所示。

4. 2酶抑制剂活性检测结果

如下面的表 3所示。

表 3: 酶抑制剂活性检测结果

抑制剂浓 抑制剂体 产生油

样品 酶活 抑制率 度 系终浓度 吸光值 酸浓度

名称 U/mL ( % )

(mg/mL) ( g/mU (mM)

空白

― ― 0. 6680 2. 75 1. 69 ― 对照

奥利

0. 1 1. 85 0. 2042 0. 81 0. 50 69. 84% 司他

式 I I 6 111 0. 5665 2. 32 1. 43 15. 38% 化合 9 166 0. 5035 2. 06 1. 27 24. 85% 物 11 203 0. 3998 1. 63 1. 00 40. 83%

13 240 0. 2743 1. 10 0. 68 59. 76%

18 333 0. 2611 1. 04 0. 64 62. 13% 其中酶活按照上面 3中的计算公式计算得到， 其中：

V = 8 mL; V = 1. 3 mL; t = 10 min。

实验结果表明， 本发明的化合物特别是式 I I化合物对脂肪酶的 活性具有较好的抑制作用， 其 IC ₅ 。值约为 220 μ ₈ , 并且抑制作用 呈浓度 -效应关系。 可见， 本发明的化合物具有预防和 /或治疗和 /或 辅助治疗肥胖症或肥胖症相关疾病的药物的潜 力。

进一步的研究发现， 式 I I 化合物的酯类衍生物或者醚衍生物， 例如实施例 6 - 9制备的 "式 I I化合物的四乙酸酯、 式 I I化合物的 四对曱苯磺酯、 式 I I化合物的四（三氟曱磺酸酯）以及式 I I化合物的 四（叔丁基二曱基硅醚）" 也具有类似的抑制脂肪酶的活性， 具有预防 和 /或治疗和 /或辅助治疗肥胖症或肥胖症相关疾病的药物� �潜力。

尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的 描述， 本领域技术人 员将会理解。 根据已经公开的所有教导， 可以对那些细节进行各种修 改和替换， 这些改变均在本发明的保护范围之内。 本发明的全部范围 由所附权利要求及其任何等同物给出。