苯乙烯基喹啉衍生物及其在治疗阿尔茨海默病 症中的应用 技术领域

本发明属于医药技术领域， 涉及新的苯乙烯基喹啉衍生物， 也涉及所述衍生物在治疗、 改善和 /或预防阿尔茨海默病症中的应用。 背景技术

阿尔茨海默症 （Alzheimer's Disease , AD ) 又称早老性痴呆， 是一种神经退行性疾病 {Goedert M. Science, 2006, ΊΊΊ-ΊΜ、。 主要表现为中枢神经系统的退化， 神经元胞内出现纤维 缠结和胞外出现老年斑的病理特征。 在临床上患者逐渐出现记忆力减退、 认知功能障碍、 行 为异常和社交障碍等。 通常病情呈进行性加重， 直到完全丧失独立生活能力。

AD 的发病率随着年龄增长快速上升。 美国公布的统计学结果显示， 65岁以上发病率约 为 8%， 75岁以上提高到 19% ， 85岁以上则高达 47% (Ferri CP. 2005, 2112-2117)。 目前， 全世界约有 2400多万的老年人患有不同程度的老年痴呆， 而且这个数字以每 20年翻一倍的 速度增长 (Reiiz C. Nature Reviews Neurology, 20Π， J 37- J 52) 。 我国最新人口普查表明， 60岁 以上的老人有 1.3 亿。随着我国逐渐步入老龄化社会，到 2050年，老龄人群将可能超过 4 亿， 占总人口的 1/4， 可能患有老年痴呆的人数将会十分庞大。

AD的发病周期长， 治疗难度大， 已成为威胁人类晚年健康的一大隐患。 统计数据表明， 仅在美国， 每年用于老年痴呆的防治费用就高达 1720亿美元 (Mw/o Alzheimers Dement, 2010, 158-194) 全球用于老年痴呆的预防和治疗的费用日渐成 为社会发展的沉重负担。因此， 对 AD 发病机制的深入探讨， 以及寻找新的治疗手段和设计开发有效的药物 ， 已成为亟待解 决的问题。

近来研究认为， β淀粉样蛋白 （β-amyloid ， Αβ ) 沉积形成的淀粉样斑块和异常磷酸化 的 tau 蛋白构成的神经纤维病变是 AD的发病重要原因。 20世纪 90年代 Hardy等提出的" β 淀粉样蛋白级联假说" (Baskin D.S. Archives ofNeurology, 1999, 1121-1123),该假说内容主要包 括： APP 代谢的变异、 Αβ的过量产生和积聚增加、 Αβ的寡聚化并沉积， 产生神经毒性、 在 金属离子和活性氧（reactive oxygen species ， OS ) 的共同作用下导致神经元细胞的凋亡及 痴呆。 Αβ的生成是通过淀粉样前体蛋白 （amyloid precursor protein, ΑΡΡ ) 的降解而产生的 (Kawahara M. Current Alzheimer Research, 2004, 87-95) 。 APP 是一种跨膜蛋白， 在体内各 组织中广泛存在， 在脑组织中表达最高。 APP 的降解有两种途径， 第一种为正常代谢途径， 主要由 α- 分泌酶参与，不产生 Αβ沉积，该途径对神经元损伤有保护作用。� �一种是产生 Αβ 的途径， 主要由 β和 γ- 分泌酶参与， 切割形成 Αβ ₄ 。和 Αβ ₄₂ 。 它们是淀粉样斑块的主要组成 物质，其中 Αβ ₄₂ 更容易沉积，神经毒性也较大 Zhou Y. Journal of Medicinal Chemistry, 2010, 5449-5466) 。 Αβ沉积的同时， 在金属离子的参与下， 产生自由基， 损伤神经系统。 上述结 果及其他研究均表明， Αβ所引起的级联反应在 AD 发病过程中占据着十分重要的地位。 因 此， 通过减少 Αβ 的生成和阻止 Αβ的沉积等途径来设计药物已成为 AD机制研究及药物研 发的热点。 随着人年龄增大， 机体清除自由基的能力降低， 体内积累的氧自由基显著增加并引发氧 化应激反应， 可对机体功能造成严重损伤（ mowwra A, J Neuropathol. Exp. Neurol. 2006, 631-64 Ω 。 在 AD 患者脑内， 也存在氧化应激损伤 iZawia N.K, Free. Radic. Biol. Med. 2009， 。大量研究表明， 自由基参与了老年斑形成、神经纤维缠结和神 经元死亡等 AD 关 键发病过程（ Goldsbury C, Aging. Cell. 2008, 7, 771-775) Perry, G等 (Ζ¾/Τ7， G. J Biomed. Biotechnol ., 2002, 720-723)研究发现， Αβ的神经毒性作用是通过氧化应激反应， 由自由基介 导产生的。 离体细胞试验结果表明 Αβ能促进氧自由基的生成， 从而破坏细胞膜的完整性， 最 终导致神经元的损伤。 抗氧化剂由于可以直接清除体内自由基， 消除氧化应激反应， 保护神 经细胞而成为防治 AD病的潜在药物之一 (7¾« D. X. Expert Opin. Ther. Pat. 2003, 13,

1513-1543 。

大量数据证明脑内的生物金属离子如 Cu ²⁺ , F _e ²⁺ , Zn ²⁺ 可以促进氧化应激 （ROS ) 的发生 以及 Αβ的聚集 (>¾orr T., J. Am. Chem. Soc. 2007, 7453-7463), 而且研究还发现， AD患者后期脑 中都发现有这些金属离子的过度富集， 具有氧化还原作用的金属离子， 如铁离子和铜离子不 仅会导致 ROS 的产生， 而且会将这种氧化作用的危害传播扩散。 研究表明 , Αβ并不是自发地 聚集， 而是与脑中的过量金属 （；如 Cu ²⁺ , F _e ²⁺ , Zn ²⁺ )发生了一种年龄依赖性的作用， 它使 Αβ 沉淀为富含金属的斑块。 近十余年来， 人们运用多种方法， 诸如 EPR, NMR,Raman光谱， CD 谱， 荧光光谱， 电位滴定和聚集度测定等技术， 对金属离子， 特别是 Zn ²⁺ (Bush A. L, Science, 1994,1464— 1467、 , Cu Gaggelli E., Chem Rev, 2006, 7995— 2044)和 Αβ的相互作用进行了深 入研究。 体外实验表明，金属离子能促进 Αβ聚集体和淀粉样斑的形成 (Morg^ D. M" 2002， J Am. Chem. Soc, 2002,2644— 1264S)。 金属螯合剂能使 AD 脑的淀粉样斑块组织溶解， 同时减 轻 APP 转基因鼠的大脑 ? j.， N£ww?.， 2007， 665— 676)。基于这些研究， 未来合成具有金属离子鳌合作用的化合物成为 一种新的治疗 AD的策略。

由此可见， AD的各种发病机制并非单独起作用， 而是紧密联系， 相互影响， 形成了一个 复杂的发病机制网络。 此外， 多种针对单一靶点的药物如能直接与 Αβ 结合抑制老年斑形成 的小分子化合物 (Tramiprosate) 和 γ- 分泌酶抑制剂 Tarenflurbil在临床研究中治疗效果并不 理想。 分析其原因是忽视了 AD的发病机制是紧密联系和相互影响的。 研究发现， 当某一靶点 或活性通路被抑制后， 机体往往会通过其他通路进行补偿， 从而抵消药物的抑制作用。 而近 年来提出的多靶点药物治疗策略认为，如果药 物分子能够同时作用于疾病网络中的多个靶点 ， 并产生协同效应， 就可以达到最佳的治疗效果。 因此， 针对老年痴呆发病过程中涉及的多个 因素， 设计合成多功能小分子化合物， 可以同时作用于多个靶点， 产生协同效应， 达到最佳 的治疗效果的多靶点药物分子， 是当今药物研究的重要趋势之一。

在新奥尔良召开的 2000年神经科学年会上,研究者提出氯碘羟喹 (一种曾用于治疗旅行者 腹泻的抗生素, CQ)可能可以用来治疗阿尔茨海默病。 其机理可能是它能结合散布在阿尔茨海 默斑块周围的铜和锌,从而溶解斑块。实验表� �在所有供筛选的抗生素和消炎药中,氯碘羟喹� �� 能使阿尔茨海默病死者脑组织中阿尔茨海默斑 块溶解最有效的药物 Helmuth L, Science, 2000, 1273-1274)。将此药用于患阿尔茨海默病的幼鼠� �型后，发现与对照组相比所有实验鼠脑组织 阿尔茨海默斑块形成减少了，不仅如此,用药� �那些在成年鼠中已形成的阿尔茨海默斑块也� � 清除了。 这证明氯碘羟喹在活体中不仅能抑制阿尔茨海 默斑块形成,而且能清除已形成的斑 块。这些研究结果很振奋人心,给治疗阿尔茨� �默病带来了希望, CQ 有望成为第一个阻断金属 -Αβ作用的 AD 治疗药物， 已进入二期双盲临床试验阶段 (/ wc/? S.， P/wrwacc^jc/^trj, 2005， 178—179。 其他的此类化合物也正在积极研发之中，一种 基于 8-羟基喹啉结构的化合物 PBT2 已经通过一期临床试验 Masters C. L.， J Neurochem., 2006, Π00—Π25、。

基于此， 我们开发出一类乙烯基喹啉衍生物， 通过对下述一种或多种特性进行优化， 使 其具有更好的治疗阿尔茨海默病症的活性：

1. 抑制 Αβ聚集作用；

2. Αβ自身聚集的解聚作用；

3. 抑制金属诱导的 Αβ聚集作用；

4. 金属诱导的 Αβ聚集的解聚作用；

5. 抗氧化活性； 以及

6. 通过血脑屏障能力。

发明内容

本发明的目的是提供一类具有抑制 Αβ聚集、 Αβ自身聚集的解聚作用、 抑制金属诱导的 Αβ聚集、 金属诱导的 Αβ聚集的解聚作用以及抗氧化活性的苯乙烯� �喹啉衍生物； 抑制金属 诱导的 Αβ聚集、金属诱导的 Αβ聚集的解聚作用可说明苯乙烯基喹啉衍生� �作为金属螯合剂 的活性；

本发明的另一目的是提供所述苯乙烯基喹啉衍 生物在治疗、 改善和 /或预防阿尔茨海默病 症中的应用；

本发明提供了游离形式、盐形式或溶剂化物形 式的下列式 I所示的苯乙烯基喹啉衍生物:

式 I

式 I中的 、 R ₂ 、 R ₃ 、 、 R ₅ 彼此独立的为 H、 OH、 C _r C ₄ 的垸基、 被一个或多个卤原 子或一个或多个羟基或 d-C ₄ 的垸氧基取代的 d-C ₄ 的垸基、 d-C ₄ 的垸氧基、 卤素、 芳基或 N _{8 9} ; 其中 R ₈ 、 R ₉ 彼此独立的为 H、 d-C ₄ 的垸基、 被一个或多个卤原子或一个或多个羟基 或 d-C ₄ 的垸氧基取代的 d-C ₄ 的垸基；

式 I中的 选自 H、 C _r C ₄ 的垸基、 CONR ₁₍₎ R _{11 ;} 其中 R ₁₍₎ 、 彼此独立的为 H、 C1-C4 的垸基；

式 I中的 R ₇ 选自 H、 C _r C ₄ 的垸基、被一个或多个卤原子或一个或多 个羟基或 C _r C ₄ 的垸 氧基取代的 C _r C ₄ 的垸基、 卤素。

限制条件是：

( a) 、 R ₂ 、 R ₃ 、 、 R ₅ 、 、 R ₇ 不同时为 H;

(b ) R ₂ 、 R ₃ 、 、 、 R ₇ 同时为 H时， R、 R ₅ 不或不同时为 F; 在本文中采用的术语具有以下含义：

"垸基 "是指直链或支链的垸基， 例如， C _r C ₄ 的垸基， 如甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 仲丁基、 异丁基、 叔丁基。

"垸氧基"是指直链或支链的垸氧基， 例如， d-C ₄ 的垸氧基， 如甲氧基、 乙氧基、 正丙氧 基、 异氧丙基、 正丁氧基、 仲丁氧基、 异丁氧基、 叔丁氧基。。

"芳基"是指取代或未取代的苯基， 如未取代的苯基或者被一个或多个如 1-5 个取代基取 代的苯基， 取代基选自 OH、 d-C ₄ 的垸基、 d-C ₄ 的垸氧基、 卤素或 NR ₁₂ R _{13 ;} 其中 R ₁₂ 、 R ₁₃ 彼此独立的为 H、 d-C ₄ 的垸基。

通式 I的化合物能够形成酸加成盐， 特别是可药用酸加成盐。 通式 I化合物的可药用酸 加成盐包括下述酸的酸加成盐： 无机酸， 如氢卤酸， 如盐酸， 氢溴酸或氢碘酸， 硝酸、 硫酸、 磷酸； 和有机酸， 如甲酸、 乙酸、 丙酸、 丁酸、 苯甲酸、 邻羟基苯甲酸、 对羟基苯甲酸、 对 氯苯乙酸、 二苯基乙酸、 1-羟基萘 -2-甲酸、 3-羟基萘 -2-甲酸， 脂肪羟基酸如乳酸、 柠檬酸、 酒石酸或苹果酸， 二元羧酸如富马酸、 马来酸或琥珀酸， 以及磺酸如甲磺酸或苯磺酸。 这些 盐可根据公知的成盐方法由通式 I的化合物制备。

适宜的溶剂化为可作为药用的溶剂化物， 优选水合物。

本发明的苯乙烯基喹啉衍生物可通过化学合成 获得。 通常本发明的苯乙烯基喹啉衍生物 可通过以下反应式所示：

具体地说，本发明化合物是以 8-羟基喹啉或 2-甲基 -8-羟基喹啉或 2-氯 -8-羟基喹啉为起始 原料， 经氯甲基化得 E-1, E-1再与亚磷酸三乙酯反应得 E-2， E-2经氯甲基甲醚保护得 E-3，

E-3与含不同取代基的苯甲醛发生 Witting-Homer反应， 直接得苯乙烯基喹啉衍生物式 I或与 氨基甲酰氯或卤代烃反应得苯乙烯基喹啉衍生 物式 I。

本发明实施列中也描述了原料的制备， 或者可通过现有技术的类似方法获得必须原料 。 通过体外活性测试实验表明， 本发明的苯乙烯基喹啉衍生物式 I具有抑制 Αβ聚集、 Αβ 自身聚集的解聚作用、抑制金属诱导的 Αβ聚集、金属诱导的 Αβ聚集的解聚作用以及抗氧化 活性， 抑制金属诱导的 Αβ聚集、金属诱导的 Αβ聚集的解聚作用可说明苯乙烯基喹啉衍生� � 式 I作为金属螯合剂的活性， 因此本发明的苯乙烯基喹啉衍生物式 I可用于制备抗阿尔茨海 默病药物。

本发明还提供上述衍生物在制备治疗、 改善和 /或预防阿尔茨海默病药物中的应用。 本发明还提供一种用于治疗、 改善和 /或预防阿尔茨海默病的药物组合物； 该药物组合物 包含上述式 I化合物， 选择性地还包含药学上可接受的辅助剂， 选择性的还包含乙酰胆碱酯 酶抑制剂、 抗氧化剂、 抗炎剂或者神经保护剂。 该药物可以制成注射剂、 片剂、 胶囊剂、 丸 剂、 悬浮剂或乳剂的形式使用。 其给药途径可为口服、 经皮、 静脉或肌肉注射。 具体实施方式

以下具体实施方式说明本发明， 但并不限制本发明。

实施例 1 : 5-氯甲基 -8-羟基喹啉的合成（E-la

向 lOOmL的圆底瓶中加入 14.50 g ( 100 mmol) 8-羟基喹啉， 16mL浓盐酸， 16mL 37% 甲 醛溶液，冰浴下通入氯化氢气体 6h, 室温下搅拌 2h, 抽滤，水洗，真空干燥，得黄色固体 15.12 g， 产率 78%。 实施例 2: 2-甲基 -5-氯甲基 -8-羟基喹啉的 -lb)

向 lOOmL的圆底瓶中加入 15.92g ( 100 mmol) 2-甲基 8-羟基喹啉， 16mL浓盐酸， 16mL

37% 甲醛溶液， 冰浴下通入氯化氢气体 6h, 室温下搅拌 2h, 抽滤， 水洗， 真空干燥， 得黄色 固体 15.57 g， 产率 75%。 实施例 3: 2-氯 -5-氯甲基 -8-羟基喹啉 -2c)

具体实施步骤同实施例 1， 原料为 2-氯 -8-羟基喹啉， 得黄色固体， 产率 64% 。 实施例 4: 8-羟基 -5-喹啉甲基膦酸二乙酯的合成 （E-2a)

向 lOOmL的圆底瓶中加入 13.55 g (70 mmol) 5-氯甲基 -8-羟基喹啉（E-la), 36 mL亚磷酸 三乙酯， 加热回流反应 3h, 减压蒸馏除去过量的亚磷酸三乙酯， 硅胶柱层析分离， 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1洗脱， 得黄色油状物 16.95 g， 产率 82% 。 实施例 5: 2-甲基 -8-羟基 -5-喹啉甲基 成 （E-2b)

向 lOOmL的圆底瓶中加入 14.54 g (70 mmol) 2-甲基 -5-氯甲基 -8-羟基喹啉 (E-lb), 36 mL亚 磷酸三乙酯， 加热回流反应 3h, 减压蒸馏除去过量的亚磷酸三乙酯， 硅胶柱层析分离， 石油 醚： 乙酸乙酯 =1:1洗脱， 得黄色油状物 16 g， 产率 75% 。 实施例 6: 2-氯 -8-羟基 -5-喹啉甲基膦酸二乙酯的合成 （E-2c)

具体实施步骤同实施例 4，原料为 2-氯 -5-氯甲基 -8-羟基喹啉，得黄色油状物，产率 70% 实施例 7: 8-甲氧甲氧基 -5-喹啉甲基膦酸二乙酯的合成 （E-3a)

向 250 mL的圆底瓶中加入 16.95 g (57.4 mmol) 8-羟基 -5-喹啉甲基膦酸二乙酯 （E-2a), 100 mL干燥的二氯甲垸， 冰浴搅拌下加入 20 mL N,N-二异丙基乙胺， 然后慢慢滴加 6.7 mL氯甲 基甲醚， 慢慢升至室温， 搅拌反应 4h。 TLC监测反应完毕， 加二氯甲垸稀释， lM NaOH溶 液洗， 无水硫酸钠干燥， 旋干， 硅胶柱层析分离， 乙酸乙酯洗脱， 得黄色油状物 16.75 g， 产 率 86% 。 实施例 8: 2-甲基 -8-甲氧甲氧基 -5-喹啉甲基膦酸二乙酯的合成 （E-3b)

向 250 mL的圆底瓶中加入 16.24 g (52.5 mmol) 2-甲基 -8-羟基 -5-喹啉甲基膦酸二乙酯的 合成 （E-2b), 90 mL干燥的二氯甲垸，冰浴搅拌下加入 18 mL Ν,Ν-二异丙基乙胺，然后慢慢滴 加 6.1 mL氯甲基甲醚， 慢慢升至室温， 搅拌反应 4h。 TLC监测反应完毕， 加二氯甲垸稀释， lM NaOH溶液洗， 无水硫酸钠干燥， 旋干， 硅胶柱层析分离， 乙酸乙酯洗脱， 得黄色油状物 14.10 g， 产率 76% 。 实施例 9: 2-氯 -8-甲氧甲氧基 -5-喹啉甲基膦酸二乙酯的合成 （E-3c)

具体实施步骤同实施例 4， 原料为 2-氯 -8-羟基 -5-喹啉甲基膦酸二乙酯， 得黄色油状物， 产率 78% 。 实施例 10: (E)- 5-(4-氟苯乙烯基) -8- 成 （E-4a)

向 25 mL 的圆底瓶中加入 0.6780 g (2 mmol) 8-甲氧基甲氧基 -5-喹啉甲基膦酸二乙酯 (E-3a), 5 mL DMF ，冰浴下加入甲醇钠 0.324g (6 mmol), 搅拌 15min后， 加入对氟苯甲醛 0.2979g (2.4 mmol), 室温下搅拌 10min， 升温 80°C反应 12h, 倒入冰水中， 有黄色固体析出， 抽滤， 得黄色固体， 硅胶柱层析分离， 石油醚： 乙酸乙酯 =1 : 1洗脱， 得黄色固体 0.2351 g， 产率 38%。 实施例 11: (E)- 5-(4-甲氧甲氧基 -8-甲氧甲氧基喹啉的合成 （E-4b)

具体实施步骤同实施例 10， 醛为对甲氧甲氧基苯甲醛， 黄色固体， 产率 52%。 实施例 12: (E)- 5-(3，5-二甲氧甲氧基苯乙烯基 -8-甲氧甲氧基喹啉的合成 （E-4c)

具体实施步骤同实施例 10， 醛为 1,3-二甲氧甲氧基苯甲醛， 黄色油状物， 产率 31%。 实施例 13: (E)- 5-(4-二甲氨基苯乙烯基 -8-甲氧甲氧基喹啉的合成 （E-4d)

具体实施步骤同实施例 10， 醛为 Ν,Ν-二甲氨基苯甲醛， 黄色固体， 产率 46% _t 实施例 14: (E)- 5-(4-二乙胺基苯乙 -8-甲氧甲氧基喹啉的合成 （E-4e)

具体实施步骤同实施例 10， 醛为 Ν,Ν-二乙氨基苯甲醛， 黄色固体， 产率 41% _t 实施例 15: (E)- 5-(4-甲氧基苯乙烯基) -8-甲氧甲氧基喹啉的合成（E-4f)

具体实施步骤同实施例 10， 醛为对甲氧基苯甲醛， 黄色固体， 产率 48% _t 实施例 16: (E)- 5-【4-(4-甲氧甲氧基)联苯乙烯基】 -8-甲氧甲氧基喹啉的合成 （E-4 _g )

具体实施步骤同实施例 10, 醛为 4- (4-甲氧甲氧基） 联苯甲醛， 黄色固体， 产率 43% c 实施例 17: (E)- 2-甲基 -5-(4-甲氧甲氧基苯乙烯基 )-8-甲氧甲氧基喹啉的合成 （E-4h) 具体实施步骤同实施例 10， 原料为 2-甲基 -8-甲氧甲氧基 -5-喹啉甲基膦酸二乙酯 (E-3b), 醛为对甲氧基甲氧基苯甲醛， 黄色固体， 产率 41%。 实施例 18: (E)- 2-氯 -5-(4-氯甲基苯乙烯基) -8-甲氧甲氧基喹啉的合成 （E-4i)

具体实施步骤同实施例 10， 原料为 2-氯 -8-甲氧甲氧基 -5-喹啉甲基膦酸二乙酯 (E-3c), 醛 为对氯甲基苯甲醛， 黄色固体， 产率 41%。

实施例 19: (E)-5-(4-氟苯乙烯基) -8- )

向 50 mL的圆底瓶中加入 0.3093 g(l mmol) (E)- 5-(4-氟苯乙烯基) -8-甲氧甲氧基喹啉的合 成 （E-4a), 10mL甲醇， lmL6M 盐酸溶液， 氩气保护， 回流反应 3h, 减压蒸馏除去甲醇， 加饱和 NaHC0 ₃ 溶液调 PH为 7-8， 乙酸乙酯萃取， 饱和食盐水洗， 水硫酸钠干燥， 旋干， 硅 胶柱层析分离， 乙酸乙酯 /石油醚 =1/1洗脱，得黄色固体 0.2255 g，产率 85% 。 ^ΝΜΪ ^ΟΟ MHz, CDC1 ₃ ) δ 8.79 (d,J=4.2 Hz, 1H), 8.56 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.72 (d,J= 8.1 Hz, 1H), 7.56 - 7.41 (m, 4H), 7.21(d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.02 (d, J= 15.8 Hz, 1H), 6.78 (d,J= 8.6 Hz, 2H)。 实施例 20: (E)-5-(4-羟基苯乙烯基 )-8- （2)

具体实施步骤同实施例 15， 原料为 (E)- 5-(4-甲氧甲氧基苯乙烯基 )-8-甲氧甲氧基喹啉 (E-4b)。黄色固体，产率 91% 。 ^J H NM (400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 8.80 (d, J= 4.1 Hz, 1H), 8.55 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.73 (d,J=8.0Hz, 1H), 7.55 (d,J= 16.0 Hz, 1H), 7.48 (dd,J= 10.7,6.6 Hz, 3H), 7.20 (d,J=8.1 Hz, 1H), 7.02 (d,J= 16.0 Hz, 1H), 6.87 (d,J=8.3 Hz, 2H)。 实施例 21: (E)-5-(3，5-二羟基苯乙烯基) -8-羟基喹啉的合成（3)

具体实施步骤同实施例 19， 原料为 (E)- 5-(3,5-二甲氧甲氧基苯乙烯基) -8-甲氧甲氧基喹 啉 (E-4c)， 黄色固体， 产率： 18%。 ^J H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.92 (s, 1H), 9.24 (s, 2H), 8.88 (s, 1H), 8.79 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.84 (d,J= 8.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.13 (d,J=7.9Hz, 1H), 7.00 (d,J= 16.0 Hz, 1H), 6.56 (s, 2H), 6.19(s, 1H)。 实施例 22: (E)-5-(4-二甲氨基苯乙烯基) -8-羟基喹啉的合成（4)

具体实施步骤同实施例 19， 原料为 (E)- 5-(4-二甲氨基苯乙烯基) -8-甲氧甲氧基喹啉 (E-4d)o 黄色固体， 产率： 87% o ^J H NM (400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 8.79 (d,J= 4.2 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.72 (d,J= 8.1 Hz, 1H), 7.55 - 7.43 (m, 4H), 7.19 (d,J= 8.0 Hz, 1H), 7.02 (d,J = 15.8 Hz, 1H), 6.75 (d,J= 8.6 Hz, 2H), 3.00 (s, 6H)。 实施例 23: (E)-5-(4-二乙胺基苯乙烯基 -8-羟基喹啉的合成（5)

具体实施步骤同实施例 19， 原料为 (E)- 5-(4-二乙胺基苯乙烯基) -8-甲氧甲氧基喹啉 (E-4e)o 黄色固体， 产率： 82%。 ^l R NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 8.79 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.71 (d,J= 8.0 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 15.8, 7.1 Hz, 4H), 7.19 (d,J= 8.0 Hz, 1H), 7.00 (d, J= 15.9 Hz, 1H), 6.70 (d,J= 8.7 Hz, 2H), 4.30 (d,J= 6.8 Hz, 1H), 3.40 (q,J= 7.1 Hz, 4H), 1.20 (t,J= 7.1 Hz, 6H)。 实施例 24: (E)-5-(4-甲氧基苯乙烯 -8-羟基喹啉的合成（6)

具体实施步骤同实施例 19， 原料为 (E)-5-(4-甲氧基苯乙烯基) -8-甲氧基甲氧基喹啉 (E-4f)o黄色固体，产率： 88% o ^J H NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 8.80 (d,J= 4.2 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.72 (d,J= 8.1 Hz, 1H), 7.51 - 7.40 (m, 4H), 7.18 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.75 (d,J= 8.6 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H)。 实施例 25: (E)-5-【4-(4-羟基)联苯乙 基】 -8-羟基喹啉的合成（7)

具体实施步骤同实施例 19， 原料为 (E)-5-【4- (4-甲氧甲氧基） 联苯乙烯基】 -8-甲氧甲 氧基喹啉（E-4g)。黄色固体， 产率 86%。 ^NMR OOMHz, CDCl ₃ )S8.80(d,J=4.2Hz, 1H), 8.57 (d,J= 8.6 Hz, 1H), 7.72 (d,J= 8.1 Hz, 1H), 7.58 - 7.45 (m, 6H), 7.21 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.02 (d,J= 15.8 Hz, 1H), 6.95 - 6.87(m, 2H),6.78 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H)。 实施例 26: (E)- 2-甲基 -5-(4-羟基苯 -8-羟基喹啉的合成 （8)

具体实施步骤同实施例 19， 原料为 (E)- 2-甲基 -5-(4-甲氧甲氧基苯乙烯基 )-8-甲氧甲氧基 喹啉 (E-4h)。黄色固体，产率 90% ^J H NM (400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 8.42 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.65 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.52 (d, J= 15.9 Hz, 1H), 7.46 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.35 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.16 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.01 (d, J= 15.9 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 2.74 (s, 3H)。 实施例 27: (E)- 2-氯 -5-(4-氯甲基苯 -8-羟基喹啉的合成 （9)

具体实施步骤同实施例 19， 原料为 (E)- 2-氯 -5-(4-氯甲基苯乙烯基) -8-甲氧甲氧基喹啉 (Ε-4Ϊ) 。 黄色固体， 产率 90%。 ^ NMR OO MHz, CDC1 ₃ ) S 8.75 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.85 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 15.9 Hz, 1H), 7.66 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.51 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.23 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.18 (d, J= 15.9 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 2.74 (s, 3H)。 实施例 28: (E)-5-【4-(N，N-二甲氨基甲酰氧基)苯乙烯基】 -8-(N，N-二甲氨基甲酰氧基)喹啉 的合成 （10)

向 25 mL的圆底瓶中加入 0.1053 g (0.4 mmol) (E)- 5-(4-羟基苯乙烯基 )-8-羟基基喹啉 （2), 0.2763 g (2 mmol)碳酸钾， 0.1722 g (1.6 mmol) Ν,Ν-二甲氨基甲酰氯及 8mL乙腈， 室温下搅 拌反应 6h， 乙酸乙酯萃取， 饱和食盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 旋干， 硅胶柱层析分离， 得白 色固体，产率 90 NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 8.95 (d, J= 3.9 Hz, 1H), 8.51 (d, J= 8.6 Hz, 1H) 7.75 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.67 (d, J= 16.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.13 (dd, J= 21.7, 12.3 Hz, 4H), 3.13 (m, 12H)。 实施例 29: (E)- 5-(4-二甲氨基苯乙烯基) -8-甲氧基喹啉的合成 （11)

向 25 mL的圆底瓶中加入 0.1163 g (0.4 mmol) (E)- 5-(4-二甲氨基苯乙烯基) -8-羟基喹啉 (4)， 0.2763 g (2 mmol)碳酸钾， 0.0861g (0.8 mmol) Ν,Ν-二甲氨基甲酰氯及 8mL乙腈，室温下 搅拌反应 6h， 乙酸乙酯萃取， 饱和食盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 旋干， 硅胶柱层析分离， 得 白色固体， 产率 85% ^J H NM (400 MHz, CDC1 ₃ ) δ 8.93 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.26 (s, 1H), 7.10 (m, 4H), 4.10 (s, 3H).3.02 (s, 6H)。 实施例 30: 苯乙烯基喹啉衍生物对 P淀粉样蛋白 1-42 (Αβ _1-42 ) 聚集的抑制活性测试

本发明采用硫磺素 Τ 结合实验考察衍生物对 Apw ₂ 聚集的抑制活性。具体操作步骤见参 考文献 Curr. Med. Chem. 2000, 3, 303-339

实验结果如表 1所示， 结果表明苯乙烯基喹啉衍生物对 Apw ₂ 聚集有一定的抑制作用。

表 1 化合物对 Apw ₂ 聚集的抑制作用

化合 ~~ 20μΜ对 Αβ _μ42 聚集的 化合物 20μΜ对 Αβ^聚集的 物 抑制率(％) 抑制率 (％)

1 15.2 7 75.2

2 70.6 8 49.5

3 68.5 9 42.5

4 52.8 10 2.5

5 57.7 11 18.2

6 32.5 龍 54.9 实施例 31: 苯乙烯基喹啉衍生物对 AP ₄₂ 自身聚集的解聚活性测试

本发明采用硫磺素 T 结合实验考察衍生物对 Apw ₂ 自身聚集的解聚活性，具体操作步骤 如下- 取 Αβ _1-42 蛋白溶液， 37°C孵育 24h后加化合物混匀， 37°C孵育 24h。 阴性对照为 Αβ _Μ2 蛋白溶液与磷酸盐缓冲溶液稀释共同孵育； 将孵育液转移至黑色 96孔培养板中， 加入 5μΜ 的硫磺素 Τ 溶液， 置暗处反应 5min， 测量荧光吸收值， 其中激发波长为 450 nm， 吸收波长 为 485 nm。以阴性对照中 Apw ₂ 与硫黄素 T结合后的荧光强度为对照，观察药物对 Apw ₂ 自 身聚集的解聚作用的影响。

实验结果如表 2所示， 结果表明苯乙烯基喹啉衍生物对 Api_ ₄₂ 自身聚集有一定的解聚作 用。

表 2 化合物对 Apw ₂ 自身聚集的解聚作用

化合物 20μΜ对 Αβ _μ42 自身 化合物 20μΜ对 Αβ _μ42 自身

聚集的解聚率 (％) 聚集的解聚率 (％)

1 18.2 5 61.7

2 69.2 6 31.3

3 71.1 7 75.1 65.4 51.7 解聚率 (％) 1 - F x lOO

F _k - F _b :加药孔的荧光值， F _h 空白孔 （只加磷酸缓冲盐） 的荧光值， F _t : 不加药孔的荧光值 实施例 32: 苯乙烯基喹啉衍生物对金属诱导的 AP ₄₂ 聚集的抑制活性测试

本发明采用硫磺素 T 结合实验考察衍生物对金属诱导的 Apw ₂ 聚集的抑制活性，具体操 作步骤如下：

取 Αβ _1-42 蛋白溶液，加 CuS0 ₄ 溶液混匀及化合物混匀 37°C孵育 24h。阴性对照一为 Αβ^ 蛋白溶液与 hepes缓冲溶液稀释共同孵育； 阴性对照二为 Api 蛋白溶液， CuS0 ₄ 溶液与 hepes缓冲溶液稀释共同孵育； 阳性对照为 Ap ^ ₂ 蛋白溶液 CuS0 ₄ 溶液与 CQ共同孵育。 24h 后， 将孵育液转移至黑色 96孔培养板中， 加入 5μΜ的硫磺素 T溶液， 置暗处反应 5min， 测 量荧光吸收值， 其中激发波长为 450 nm， 吸收波长为 485 nm。 以阴性对照二中 Apw ₂ 与硫 黄素 T结合后的荧光强度为对照， 观察药物对金属诱导的 Αβ^^ 聚集的影响。

实验结果如表 3所示， 结果表明苯乙烯基喹啉衍生物对金属诱导的 Ap _W2 聚集有一定的 抑制作用， 这一实验可说明苯乙烯基喹啉衍生物式 I作为金属螯合剂的活性。 表 3 化合物对金属诱导的 Apw ₂ 聚集的抑制作用

化合物 50μΜ对金属诱导的 化合物 50μΜ对金属诱导的

Αβ _1-42 聚集的抑制率 (％) Αβ^聚集的抑制率 (％)

1 39.3 5 79.4

2 80.4 7 85.7

3 83.4 8 48.2

4 76.4 CQ 66.7 实施例 33: 苯乙烯基喹啉衍生物对金属诱导的 AP ₄₂ 聚集的解聚活性测试

本发明采用硫磺素 T 结合实验考察衍生物对金属诱导的 Apw ₂ 聚集的解聚活性，具体操 作步骤如下：

取 Αβ ^ 蛋白溶液，加 CuS0 ₄ 溶液混匀， 37°C孵育 24h后加化合物混匀， 37°C孵育 24h。 阴性对照为 Αβ^ 蛋白溶液， CuS0 ₄ 溶液与 hepes缓冲溶液稀释共同孵育；阳性对照为 Αβ _1-42 蛋白溶液， CuS0 ₄ 溶液与 CQ共同孵育。 48h后， 将孵育液转移至黑色 96孔培养板中， 加入 5μΜ的硫磺素 T 溶液， 置暗处反应 5min， 测量荧光吸收值， 其中激发波长为 450 nm， 吸收 波长为 485 nm。 以阴性对照一中 与硫黄素 T结合后的荧光强度为对照，观察药物对金 属诱导的 Apw ₂ 聚集的解聚作用的影响。

实验结果如表 4所示， 结果表明苯乙烯基喹啉衍生物对金属诱导的 Ap _W2 聚集有一定的 解聚作用。 表 4 化合物对金属诱导的 ₁ _ ₄₂ 聚集的解聚作用

化合物 50μΜ对金属诱导的 化合物 ~~ 50μΜ对金属诱导的 ~

Αβ _1-42 聚集的解聚率 (％) Αβ _1-42 聚集的解聚率 (％)

80.8

85.6

75.6

76.3 实施例 34: 苯乙烯基喹啉衍生物的抗氧化活性测试

本发明采用抗氧化能力指数测试法（ORAC-FL法� �考查衍生物的抗氧化能力活性。 具体 操作步骤见参考文献 J Agric. Food Chem. 2001, 49, 4619-4626及 Bioorg. Med. Chem., 2008, 16, 4252-4261

ORAC 值以每 μΜ 化合物相当于多少 μΜ Ίϊο1οχ。

实验结果如表 5所示， 结果表明苯乙烯基喹啉衍生物的体外抗氧化活 性是维生素 Ε类似 物 Trolox的 1.6-2.9倍。 表 5 化合物的 ORAC值

化合物 O AC 化合物 ORAC

1 1.2 7 1.9

2 2.1 8 1.8

3 2.5 9 0.8

4 1.9 10 1.2

5 2.9 8-羟基喹啉 2.4

6 1.4 实施例 35: 苯乙烯基喹啉衍生物清除细胞内活性氧 ROS能力的测定 (B org. Med. Chem 2011, 5596-5604) 本发明采用 DCFH-DA荧光探针法考查衍生物清除细胞内活性� � ROS的能力。所采用的细 胞是神经细胞株 SH-SY5Y, 具体操作步骤如下：

细胞接种于 96孔细胞培养黑板培养过夜， 加入待测样品， 培养 24 ho 去除培养基， 加 DCFH-DA, 避光培养 0.5 h。去除 DCFH-DA, 加入 t-BuOOH,避光培养 0.5 h。测量荧光吸收值， 其中激发波长为 485 nm， 吸收波长为 535 nm。

根据公式计算 t-BuOOH诱导神经细胞 SH-SY5Y产生的 ROS的百分比：

：加不同或不同浓度化合物处理组的荧光吸收 ， F _{hl t} '. 空白组的荧光吸收， 对照组的荧光吸收。

实验结果如表 6所示，结果表明苯乙烯基喹啉衍生物的能较� �的抑制 t-BuOOH诱导的神 经细胞 （SH-SY5Y) OS的产生。 表 6苯乙烯基喹啉衍生物抑制 t-BuOOH诱导的神经细胞 （SH-SY5Y) OS的产生 化合物 （Ι μΜ) ROS (%) 化合物 （Ι μΜ ) ROS ( % )

ϊ 79^6 5 28.2

2 35.1 7 23.5

3 93.2 8 31.6

4 39.4 8-羟基喹啉 101 实施例 36: 苯乙烯基喹啉衍生物通过血脑屏障能力的测定

取 4μ1 2% (PBL )溶液加于 MAIPs4550的 96孔板的疏水膜上， 定量吸取 200 μΐ待测样品 液（ 100μ _§ /ιη1)加入到 96孔板中的膜上方作为给药池，膜另一侧加入 300μ1缓冲盐 (ρΗ 7.4 PBS: 乙醇 =70:30)为接受池， 注意保持接受液与膜的充分接触； 室温静止 10h后， 小心移除给药池， 用 UV光谱仪测试接受池内化合物吸光度值 （250-500nm) ; 吸取 200μ1待测样品液与 300μ1 缓冲盐 (ρΗ 7.4 PBS :乙醇 =70:30)充分混匀，作为理论平衡溶液，测试其� �光度值（250-500nm)， 需要用 acceptor板测试；

根据公式计算 P _e 值：

V _A : 给药池体积， V _{a :} 接受池体积， 疏水膜表面积， t : 作用时间， [drug 池中化合物吸光度， 理论上接收池中化合物吸光度。 实验结果如表 7所示， 结果表明苯乙烯基喹啉衍生物能透过血脑屏障 或处于不确定状态， 具 有成药的可能性。

表 7 化合物 P _e 值

compounds Permeability(P _e 10" ⁶ cm s" ¹ ) compounds Permeability(P _e 10" ⁶ cm s" ¹ )

2 14.7±1.4(CNS+) 7 13.3±13(CNS+/-)

3 4.8±0.4 (CNS+) 8 16.8±2.3(CNS+)

4 3.5±0.3(CNS+/-) 9 12.3±1.1 (CNS+)

5 3.3±0.3(CNS+/-)

CNS+: 能通过血脑屏障

CNS+/-: 不确定