Substituierte Imidazo[l,2-alpyridincarboxamide und ihre Verwendung

Die vorliegende Anmeldung betrifft neue substituierte Imidazo[l,2-a]pyridincarboxamide, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung allein oder in Kombinationen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe von kardiovaskulären Erkrankungen.

Eines der wichtigsten zellulären Übertragungssysteme in Säugerzellen ist das cyclische Guanosin- monophosphat (cGMP). Zusammen mit Stickstoffmonoxid (NO), das aus dem Endothel freigesetzt wird und hormonelle und mechanische Signale überträgt, bildet es das NO/cGMP-System. Die Guanylatcyclasen katalysieren die Biosynthese von cGMP aus Guanosintriphosphat (GTP). Die bisher bekannten Vertreter dieser Familie lassen sich sowohl nach strukturellen Merkmalen als auch nach der Art der Liganden in zwei Gruppen aufteilen: Die partikulären, durch natriuretische Peptide stimulierbaren Guanylatcyclasen und die löslichen, durch NO stimulierbaren Guanylatcyclasen. Die löslichen Guanylatcyclasen bestehen aus zwei Untereinheiten und enthalten höchstwahrscheinlich ein Häm pro Heterodimer, das ein Teil des regulatorischen Zentrums ist. Dieses hat eine zentrale Bedeutung für den Aktivierungsmechanismus. NO kann an das Eisenatom des Häms binden und so die Aktivität des Enzyms deutlich erhöhen. Hämfreie Präparationen lassen sich hingegen nicht durch NO stimulieren. Auch Kohlenmonoxid (CO) ist in der Lage, an das Eisen-Zentralatom des Häms zu binden, wobei die Stimulierung durch CO deutlich geringer ist als die durch NO.

Durch die Bildung von cGMP und der daraus resultierenden Regulation von Phosphodiesterasen, Ionenkanälen und Proteinkinasen spielt die Guanylatcyclase eine entscheidende Rolle bei unterschiedlichen physiologischen Prozessen, insbesondere bei der Relaxation und Proliferation glatter Muskelzellen, der Plättchenaggregation und -adhäsion, der neuronalen Signalübertragung sowie bei Erkrankungen, welche auf einer Störung der vorstehend genannten Vorgänge beruhen. Unter pathophysiologischen Bedingungen kann das NO/cGMP- System supprimiert sein, was zum Beispiel zu Bluthochdruck, einer Plättchenaktivierung, einer vermehrten Zellproliferation, endothelialer Dysfunktion, Atherosklerose, Angina pectoris, Herzinsuffizienz, Myokardinfarkt, Thrombosen, Schlaganfall und sexueller Dysfunktion führen kann.

Eine auf die Beeinflussung des cGMP-Signalweges in Organismen abzielende NO -unabhängige Behandlungsmöglichkeit für derartige Erkrankungen ist aufgrund der zu erwartenden hohen Effizienz und geringen Nebenwirkungen ein vielversprechender Ansatz.

Zur therapeutischen Stimulation der löslichen Guanylatcyclase wurden bisher ausschließlich Verbindungen wie organische Nitrate verwendet, deren Wirkung auf NO beruht. Dieses wird durch Biokonversion gebildet und aktiviert die lösliche Guanylatcyclase durch Angriff am Eisen-Zentralatom des Häms. Neben den Nebenwirkungen gehört die Toleranzentwicklung zu den entscheidenden Nachteilen dieser Behandlungsweise.

In den letzten Jahren wurden einige Substanzen beschrieben, die die lösliche Guanylatcyclase direkt, d.h. ohne vorherige Freisetzung von NO stimulieren, wie beispielsweise 3-(5'-Hydroxymethyl-2'-furyl)-l- benzylindazol [YC-1; Wu et al., Blood 84 (1994), 4226; Mülsch et al., Brit. J. Pharmacol. 120 (1997), 681], Fettsäuren [Goldberg et al., J. Biol. Chem. 252 (1977), 1279], Diphenyliodonium-hexafluorphosphat [Pettibone et al., Eur. J. Pharmacol. 116 (1985), 307], Isoliquiritigenin [Yu et al., Brit. J. Pharmacol. 114 (1995), 1587] sowie verschiedene substituierte Pyrazol-Derivate (WO 98/16223).

Unter anderem in EP 0 266 890-A1, WO 89/03833-A1, JP 01258674-A [vgl. Chem. Abstr. 112: 178986], WO 96/34866-A1, EP 1 277 754-A1, WO 2001/096335, WO 2006/015737-A1, WO 2006/135667, WO 2008/008539-A2, WO 2008/082490-A2, WO 2008/134553-A1, WO 2010 /030538-A2, WO 2011/113606-A1 und WO 2012/165399-A1, WO 2014/068099, WO 2014/068104, WO 2014/068095, WO 2014/195333, WO 2015/082411, WO 2015/124544, WO 2015&140199, WO 2015/140254, WO 2015/165933, WO 2015/165970, WO 2015/165930, WO 2015/165931, WO2016/087343 sind verschiedene Imidazo[l,2-a]pyridin-Derivate beschrieben, die zur Behandlung von Erkrankungen verwendet werden können.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung war die Bereitstellung neuer Substanzen, die als Stimulatoren der löslichen Guanylatcyclase wirken, und als solche zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten geeignet sind und ein gleiches oder verbessertes therapeutisches Profil gegenüber den aus dem Stand der Technik bekannten Verbindungen aufweisen, wie beispielsweise hinsichtlich ihrer in-vivo Eigenschaften, wie beispielsweise ihrem pharmakokinetischem und pharmakodynamischem Verhalten, ihrer Löslichkeit und/oder ihres Metabolismus-Profils und/oder ihrer Dosis-Wirkungsbeziehung.

Die vorliegende Erfindung betrifft Verbindun en der allgemeinen Formel (I)

in welcher

A für CH ₂ , CD ₂ oder CH(CH ₃ ) steht, R ¹ für Phenyl steht, wobei Phenyl mit 1 bis 4 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Halogen, Cyano, Monofluormethyl, Difluormethyl, Trifluormethyl und (Ci-C i)-Alkyl substituiert sein kann, R ² für Wasserstoff, (Ci-C i)-Alkyl, Cyclopropyl, Monofluormethyl, Difluormethyl oder Trifluormethyl steht, eine Gruppe der Formel

steht, wobei

* für die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe steht,

L ¹ für eine Bindung, -C(R ^U R ¹² )-, Sauerstoff, Schwefel oder Stickstoff steht,

R ⁷ für Wasserstoff, (Ci-C i)-Alkyl oder Amino steht, worin (Ci-C i)-Alkyl mit 1 bis 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor, Difluormethyl, Trifluormethyl, Hydroxy und Amino substituiert sein kann,

R ⁸ für Wasserstoff oder (C i -C ₄ )-Alkyl steht, oder

R ⁷ und R ⁸ zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, einen 3- bis 5- gliedrigen Carbocyclus bilden, worin der 3- bis 5-gliedrige Carbocyclus bis zu zweimal mit Fluor substituiert sein kann,

R ⁹ für Wasserstoff, (Ci-C ₆ )-Alkyl, -NR ¹³ R ¹⁴ , -NS0 ₂ NR ¹⁵ R ¹⁶ , (C ₃ -C ₇ )-Cycloalkyl, (C ₄ -C ₇ )- Heterocyclyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl oder Phenyl steht, worin (Ci-C6)-Alkyl mit 1 bis 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor, Trifluormethyl, Difluormethoxy, Hydroxy, (Ci-C i)-Alkoxy, (C3-C7)- Cycloalkyl, (C ₄ -Cv)-Heterocyclyl und 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl substituiert sein kann, worin R für Wasserstoff, (Ci-C ₄ )-Alkyl oder (C ₃ -C ₇ )-Cycloalkyl steht, worin (C3-Cv)-Cycloalkyl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor oder Methyl substituiert sein kann, worin R für Wasserstoff oder (Ci-C i)-Alkyl steht, worin R 15 für Wasserstoff oder (Ci-C i)-Alkyl steht, und worin R für Wasserstoff oder (Ci-C i)-Alkyl steht, worin Phenyl mit 1 bis 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Halogen, Cyano, Monofluormethyl, Difluormethyl, Trifluormethyl und (C1-C4)- Alkyl substituiert sein kann, worin 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Halogen, Cyano, Monofluormethyl, Difluormethyl, Trifluormethyl und (Ci-C ₄ )-Alkyl substituiert sein kann, worin (C3-Cv)-Cycloalkyl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor oder Methyl substituiert sein kann, worin (C ₄ -Cv)-Heterocyclyl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor oder Methyl substituiert sein kann,

R ¹¹ für Wasserstoff, (Ci-C4)-Alkyl oder Amino steht, worin (Ci-C ₄ )-Alkyl mit 1 bis 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor, Difluormethyl, Trifluormethyl, Hydroxy und Amino substituiert sein kann,

R ¹² für Wasserstoff oder (Ci-C ₄ )-Alkyl steht, oder R ^u und R ¹² zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind einen 3- bis 5- gliedrigen Carbocyclus bilden, worin der 3- bis 5-gliedrige Carbocyclus bis zu zweimal mit Fluor substituiert sein kann, oder

R ⁷ und R ¹¹ zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind einen 3- bis 5- gliedrigen Carbocyclus bilden, worin der 3- bis 5-gliedrige Carbocyclus bis zu zweimal mit Fluor substituiert sein kann, oder

R ³ für eine Gruppe der Formel

steht, wobei

* für die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe steht, L ² für eine Bindung oder -C=C- steht,

R ¹⁰ für 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl oder (C5-Cv)-Heterocyclyl steht, worin 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl mit 1 bis 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Halogen, Trifluormethyl oder (Ci-C i)-Alkyl substituiert sein kann, und worin 5-gliedriges Heteroaryl mit (C5-Cv)-Cycloalkyl anneliert sein kann, worin (C5-Cv)-Cycloalkyl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Halogen oder (Ci-C i)-Alkyl substituiert sein kann, oder

R ³ für eine Gruppe der Formel

steht, wobei

R ¹⁷ für (Ci-C ₈ )-Alkyl steht, worin (Ci-Cg)-Alkyl mit Phenyl oder 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl substituiert sein kann, worin Phenyl mit 1 bis 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Halogen oder (Ci-C i)-Alkyl substituiert sein kann, worin 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl mit 1 bis 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Halogen oder (Ci-C i)-Alkyl substituiert sein kann,

R ⁴ für Wasserstoff steht,

R ⁵ für Wasserstoff, Chlor, Fluor, Difluormethyl, Trifluormethyl oder (Ci-C4)-Alkyl steht, R ⁶ für Wasserstoff oder Chlor steht, sowie ihre N-Oxide, Salze, Solvate, Salze der N-Oxide und Solvate der N-Oxide und Salze.

Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, die von Formel (I) umfassten Verbindungen der nachfolgend genannten Formeln und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausführungsbeispiele genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.

Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind, jedoch beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.

Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säureadditionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Ameisensäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.

Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkali- salze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C-Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N-Methylmorpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin und N-Methylpiperidin. Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt. Als Solvate sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung Hydrate bevorzugt.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in unterschiedlichen stereoisomeren Formen existieren, d.h. in Gestalt von Konfigurationsisomeren oder gegebenenfalls auch als Konformationsisomere (Enantiomere und/oder Diastereomere, einschließlich solcher bei Atrop- isomeren). Die vorliegende Erfindung umfasst deshalb die Enantiomere und Diastereomere und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/ oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren; vorzugsweise werden hierfür chromatographische Verfahren verwendet, insbesondere die HPLC-Chromatographie an achiraler bzw. chiraler Phase.

Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegende Erfindung sämtliche tautomere Formen.

Die vorliegende Erfindung umfasst auch alle geeigneten isotopischen Varianten der erfindungsgemäßen Verbindungen. Unter einer isotopischen Variante einer erfindungsgemäßen Verbindung wird hierbei eine Verbindung verstanden, in welcher mindestens ein Atom innerhalb der erfindungsgemäßen Verbindung gegen ein anderes Atom der gleichen Ordnungszahl, jedoch mit einer anderen Atommasse als der gewöhnlich oder überwiegend in der Natur vorkommenden Atommasse ausgetauscht ist. Beispiele für Isotope, die in eine erfindungsgemäße Verbindung inkorporiert werden können, sind solche von Wasserstoff, Kohlenstoff, Stickstoff, Sauerstoff, Phosphor, Schwefel, Fluor, Chlor, Brom und Iod, wie ² H (Deuterium), ³ H (Tritium), ¹³ C, ¹⁴ C, ¹⁵ N, ¹⁷ 0, ¹⁸ 0, ³² P, ³³ P, ³³ S, ³⁴ S, ³⁵ S, ³⁶ S, ¹⁸ F, ³⁶ C1, ⁸² Br, ¹²³ I, ¹²⁴ I, ¹²⁹ I und ¹³¹ I. Bestimmte isotopische Varianten einer erfindungsgemäßen Verbindung, wie insbesondere solche, bei denen ein oder mehrere radioaktive Isotope inkorporiert sind, können von Nutzen sein beispielsweise für die Untersuchung des Wirkmechanismus oder der Wirkstoff-Verteilung im Körper; aufgrund der ver- gleichsweise leichten Herstell- und Detektierbarkeit sind hierfür insbesondere mit ³ H- oder ¹⁴ C-Isotopen markierte Verbindungen geeignet. Darüber hinaus kann der Einbau von Isotopen, wie beispielsweise von Deuterium, zu bestimmten therapeutischen Vorteilen als Folge einer größeren metabolischen Stabilität der Verbindung fuhren, wie beispielsweise eine Verlängerung der Halbwertszeit im Körper oder eine Reduk- tion der erforderlichen Wirkdosis; solche Modifikationen der erfindungsgemäßen Verbindungen können daher gegebenenfalls auch eine bevorzugte Ausfuhrungsform der vorliegenden Erfindung darstellen. Isotopische Varianten der erfindungsgemäßen Verbindungen können nach den dem Fachmann bekannten Verfahren hergestellt werden, so beispielsweise nach den weiter unten beschriebenen Methoden und den bei den Ausführungsbeispielen wiedergegebenen Vorschriften, indem entsprechende isotopische Modifi- kationen der j eweiligen Reagentien und/ oder Ausgangsverbindungen eingesetzt werden.

Außerdem umfasst die vorliegende Erfindung auch Prodrugs der erfindungsgemäßen Verbindungen. Der Begriff "Prodrugs" bezeichnet hierbei Verbindungen, welche selbst biologisch aktiv oder inaktiv sein können, jedoch während ihrer Verweilzeit im Körper zu erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden (beispielsweise metabolisch oder hydrolytisch). Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:

In den Formeln der Gruppe, für die R ¹ stehen kann, steht der Endpunkt der Linie, an dem ein Zeichen * steht, nicht für ein Kohlenstoffatom beziehungsweise eine CH2-Gruppe, sondern ist Bestandteil der Bindung zu dem jeweils bezeichneten Atom, an das R ¹ gebunden sind. Im Sinne der vorliegenden Erfindung umfasst der Begriff "Behandlung" oder "behandeln" ein Hemmen, Verzögern, Aufhalten, Lindern, Abschwächen, Einschränken, Verringern, Unterdrücken, Zurückdrängen oder Heilen einer Krankheit, eines Leidens, einer Erkrankung, einer Verletzung oder einer gesundheitlichen Störung, der Entfaltung, des Verlaufs oder des Fortschreitens solcher Zustände und/oder der Symptome solcher Zustände. Der Begriff „Therapie" wird hierbei als synonym mit dem Begriff „Behandlung" verstanden.

Die Begriffe„Prävention",„Prophylaxe" oder„Vorbeugung" werden im Rahmen der vorliegenden Erfindung synonym verwendet und bezeichnen das Vermeiden oder Vermindern des Risikos, eine Krankheit, ein Leiden, eine Erkrankung, eine Verletzung oder eine gesundheitliche Störung, eine Entfaltung oder ein Fortschreiten solcher Zustände und/oder die Symptome solcher Zustände zu bekommen, zu erfahren, zu erleiden oder zu haben.

Die Behandlung oder die Prävention einer Krankheit, eines Leidens, einer Erkrankung, einer Verletzung oder einer gesundheitlichen Störung können teilweise oder vollständig erfolgen. Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen der Formel (I), in welcher

A für CH ₂ steht,

R ¹ für Phenyl steht, wobei Phenyl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor, Chlor oder Methyl substituiert sein kann,

R ² für Methyl steht,

R ³ für eine Gruppe der Formel

steht, wobei

* für die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe steht,

L ¹ für eine Bindung, -C(R ^U R ¹² )-, Sauerstoff oder Schwefel steht,

R ⁷ für Wasserstoff, (Ci-C i)-Alkyl oder Amino steht, worin (Ci-C i)-Alkyl mit Amino substituiert sein kann, R ⁸ für Wasserstoff steht, oder

R ⁹ für Wasserstoff, (Ci-C ₄ )-Alkyl, -NR ¹³ R ¹⁴ , -NS0 ₂ NR ¹⁵ R ¹⁶ , (C ₃ -C ₆ )-Cycloalkyl, (C ₄ -C ₆ )- Heterocyclyl, 5-oder 6-gliedriges Heteroaryl oder Phenyl steht, worin (Ci-C i)-Alkyl mit Fluor, Difluormethyl, Trifluonnethyl oder Methoxy substituiert sein kann, worin R ¹³ für Wasserstoff, Methyl, Ethyl oder (C3-C ₆ )-Cycloalkyl steht, worin (C3-C6)-Cycloalkyl bis zu zweimal mit Fluor substituiert sein kann, worin R für Wasserstoff oder Methyl steht, worin R 15 für Wasserstoff oder Methyl steht, und worin R ¹⁶ für Wasserstoff oder Methyl steht, worin Phenyl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor, Chlor, Cyano, Trifluormethyl und Methyl substituiert sein kann, worin 5-oder 6-gliedriges Heteroaryl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor, Chlor, Cyano, Trifluormethyl und Methyl substituiert sein kann, worin (C3-C6)-Cycloalkyl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor oder Methyl substituiert sein kann, worin (C3-C6)-Heterocyclyl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor oder Methyl substituiert sein kann,

R ¹¹ für Wasserstoff, (Ci-C i)-Alkyl oder Amino steht, worin (Ci-C i)-Alkyl mit Amino substituiert sein kann,

R ¹² für Wasserstoff steht, oder

R ⁷ und R ¹¹ zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind einen 3- bis 5- gliedrigen Carbocyclus bilden,

für eine Gruppe der Formel

J O steht, wobei

* für die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe steht, L ² für eine Bindung oder -C=C- steht,

R ¹⁰ für 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl oder (C5-Cv)-Heterocyclyl steht, worin 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor, Trifluormethyl oder Methyl substituiert sein kann, und worin 5-gliedriges Heteroaryl mit (C5-C6)-Cycloalkyl anneliert sein kann, worin (C5-C6)-Cycloalkyl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor oder Methyl substituiert sein kann, oder

R ³ für eine Gruppe der Formel

H

•%17 steht, wobei

R ¹⁷ für (Ci-C ₈ )-Alkyl steht, worin (Ci-Cg)-Alkyl mit Phenyl substituiert sein kann, worin Phenyl mit 1 bis 3 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor, Chlor oder Methyl substituiert sein kann,

R ⁴ für Wasserstoff steht,

R ⁵ für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ⁶ für Wasserstoff steht, sowie die Salze, Solvate und Solvate der Salze dieser Verbindungen.

Besonders bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen der Formel (I), in welcher

A für CH ₂ steht, R ¹ für Phenyl steht, wobei Phenyl mit 1 oder 2 Substituenten Fluor substituiert sein kann, R ² für Methyl steht, für eine Gruppe der Formel

steht, wobei

* für die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe steht,

L ¹ für eine Bindung, -C(R ^U R ¹² )-, Sauerstoff oder Schwefel steht,

R ⁷ für Wasserstoff, Methyl oder Amino steht,

R ⁸ für Wasserstoff steht, oder

R ⁹ für Wasserstoff, (G-C ₄ )-Alkyl, -NR ¹³ R ¹⁴ , -NS0 ₂ NR ¹⁵ R ¹⁶ , (C ₃ -C ₆ )-Cycloalkyl, (C ₄ -C ₆ )- Heterocyclyl, Pyrazolyl, Pydridyl oder Phenyl steht, worin (Ci-C i)-Alkyl mit Trifluormethyl substituiert sein kann, worin R ¹³ für Wasserstoff, Methyl, Cyclopentyl oder Cyclohexyl steht, worin R ¹⁴ für Wasserstoff oder Methyl steht, worin R ¹⁵ für Methyl steht, und worin R ¹⁶ für Wasserstoff Methyl steht, worin Phenyl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor oder Chlor substituiert sein kann,

R ^{1 1} für Wasserstoff oder Amino steht,

R ¹² für Wasserstoff steht, oder

R ⁷ und R ^u zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind einen 3- bis 5- gliedrigen Carbocyclus bilden, R ⁴ für Wasserstoff steht,

R ⁵ für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ⁶ für Wasserstoff steht,

sowie die Salze, Solvate und Solvate der Salze dieser Verbindungen.

Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind auchVerbmdungen der Formel (I), in welcher A für CH ₂ steht,

sowie die Salze, Solvate und Solvate der Salze dieser Verbindungen.

Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind auchVerbmdungen der Formel (I), in welcher R ¹ für Phenyl steht,

wobei Phenyl mit 1 oder 2 Substituenten Fluor substituiert sein kann,

sowie die Salze, Solvate und Solvate der Salze dieser Verbindungen.

Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind auchVerbmdungen der Formel (I), in welcher R ² für Methyl steht,

sowie die Salze, Solvate und Solvate der Salze dieser Verbindungen.

Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind auchVerbmdungen der Formel (I), in welcher R ³ für eine Gruppe der Formel

steht, wobei

* für die Anknüpfstelle an die Carbonylgruppe steht,

L ¹ für eine Bindung, -C(R ¹ 'R ¹² )-, Sauerstoff oder Schwefel steht,

R ⁷ für Wasserstoff, Methyl oder Amino steht,

R ⁸ für Wasserstoff steht, oder

R ⁹ für Wasserstoff, (Ci-C ₄ )-Alkyl, -NR ¹³ R ¹⁴ , -NS0 ₂ NR ¹⁵ R ¹⁶ , (C ₃ -C ₆ )-Cycloalkyl, (C ₄ -C ₆ )- Heterocyclyl, Pyrazolyl, Pydridyl oder Phenyl steht, worin (Ci-C i)-Alkyl mit Trifluormethyl substituiert sein kann, worin R ¹³ für Wasserstoff, Methyl, Cyclopentyl oder Cyclohexyl steht, worin R ¹⁴ für Wasserstoff oder Methyl steht, worin R ¹⁵ für Methyl steht, und worin R ¹⁶ für Wasserstoff Methyl steht, worin Phenyl mit 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe Fluor oder Chlor substituiert sein kann,

R ¹¹ für Wasserstoff oder Amino steht,

R ¹² für Wasserstoff steht, oder

R ⁷ und R ^u zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind einen 3- bis 5- gliedrigen Carbocyclus bilden, sowie die Salze, Solvate und Solvate der Salze dieser Verbindungen.

Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind auchVerbmdungen der Formel (I), in welcher R ⁴ für Wasserstoff steht, sowie die Salze, Solvate und Solvate der Salze dieser Verbindungen.

Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind auchVerbmdungen der Formel (I), in welcher R ⁵ für Wasserstoff oder Methyl steht, sowie die Salze, Solvate und Solvate der Salze dieser Verbindungen.

Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind auchVerbmdungen der Formel (I), in welcher R ⁶ für Wasserstoff steht, sowie die Salze, Solvate und Solvate der Salze dieser Verbindungen.

Die als bevorzugt genannten Restedefinitionen gelten sowohl für die Verbindungen der Formel (I) als auch in entsprechender Weise für alle Zwischenprodukte.

Weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I) dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel (II)

in welcher A, R ¹ , R ² , R ⁴ , R ⁵ und R ⁶ jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,

[A] in einem inerten Lösungsmittel unter Amidkupplungsbedingungen mit einer Carbonsäure der

Formel (III)

(ΠΙ),

in welcher R ³ die oben angegebene Bedeutungen hat,

umsetzt,

anschliessend gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen abspaltet, und die resultierenden Verbindungen der Formel (I) gegebenenfalls mit den entsprechenden (i) Lösungsmitteln und/oder (ii) Säuren oder Basen in ihre Solvate, Salze und/oder Solvate der Salze überführt, oder

[B] in einem inerten Lösungsmittel gegebenenfalls in Anwesenheit einer geeignten Base mit einer Verbindung der Formel (IV)

in welcher T ¹ für Phenyl oder para-Nitrophenyl steht,

zu einer Verbindung der Formel (V)

(V), in welcher A, R ¹ , R ² , R ⁴ , R ⁵ , R ⁶ und T ¹ jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben, umsetzt, und diese in einem inerten Lösungsmittel gegebenenfalls in Anwesenheit einer geeignten Base gegebenenfalls in einer Mikrowelle mit einer Verbindung der Formel (VI) umsetzt,

H

17

N-R

H

(VI),

in welcher R ¹⁷ die oben angegebenen Bedeutungen hat,

anschliessend gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen abspaltet, und die resultierenden

Verbindungen der Formel (I) gegebenenfalls mit den entsprechenden (i) Lösungsmitteln und/oder (ii) Säuren oder Basen in ihre Solvate, Salze und/oder Solvate der Salze überführt.

Das beschriebene Herstellverfahren kann durch die folgenden Syntheseschemata (Schema 1 und Schema 2) beispielhaft verdeutlicht werden:

Schema 1:

[a): Chlorameisensäurephenylester, Natriumcarbonat, THF, RT; b): Amin; THF/Pyridin, 100°C, Mikrowelle].

Die Verbindungen der Formeln (III) , (IV) und (VI) sind kommerziell erhältlich, literaturbekannt oder können in Analogie zu literaturbekannten Verfahren hergestellt werden.

Inerte Lösungsmittel für die Verfahrensschritte (II) + (III)— » ^■ (I) sind beispielsweise Ether wie Diethyl- ether, Dioxan, Tetrahydrofuran, Glykoldimethylether oder Diethylenglykoldimethylether, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Toluol, Xylol, Hexan, Cyclohexan oder Erdölfraktionen, Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan, 1 ,2-Dichlorethan, Trichlorethylen oder Chlorbenzol, oder andere Lösungsmittel wie Aceton, Essigsäureethylester, Acetonitril, Pyridin, Dimethyl- sulfoxid, NN-Dimethylformamid, NN-Dimethylacetamid, NN-Dimethylpropylenharnstoff (DMPU) oder N-Methylpyrrolidon (ΝΜΡ). Ebenso ist es möglich, Gemische der genannten Lösungsmittel zu verwenden. Bevorzugt sind Dichlormethan, Tetrahydrofuran, Dimethylformamid oder Gemische dieser Lösungsmittel. Als Kondensationsmittel für die Amidbildung in den Verfahrensschritte (II) + (III)—> (I) und eignen sich beispielsweise Carbodiimide wie NN'-Diethyl-, NN'-Dipropyl-, NN'-Diisopropyl-, NN'-Dicyclo- hexylcarbodiimid (DCC) oder N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (EDC), Phosgen-Derivate wie NN'-Carbonyldiimidazol (CDI), 1 ,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5- phenyl-l,2-oxazolium-3 -sulfat oder 2-fert.-Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, Acylamino- verbindungen wie 2-Ethoxy-l-ethoxycarbonyl-l,2-dihydrochinolin, oder Isobutylchlorformiat, Propan- phosphonsäureanhydrid (T3P), l-Chlor-NN,2-trimethylpropl-en-l-amin, Cyanophosphonsäurediethyl- ester, Bis-(2-oxo-3 -oxazolidinyl)-phosphorylchlorid, Benzotriazol- 1 -yloxy-tris(dimethylamino)phospho- nium-hexafluorphosphat, Benzotriazol- 1 -yloxy-tris(pyrrolidino)phosphonium-hexafluorphosphat (PyBOP), 0-(Benzotriazol-l-yl)-NNN',N'-tetramethyluronium-tetrafluorb orat (TBTU), 0-(Benzotriazol- l-yl)-NNN',N'-tetramethyluronium-hexafluorphosphat (HBTU), 2-(2-Oxo-l-(2H)-pyridyl)-l,l,3,3-tetra- methyluronium-tetrafluorborat (TPTU), 0-(7-Azabenzotriazol-l -yl)-N,N,N'N'-tetramethyluronium-hexa- fluorphosphat (HATU) oder 0-(lH-6-Chlorbenzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetramethyluronium-t etrafluorborat (TCTU), gegebenenfalls in Kombination mit weiteren Hilfsstoffen wie 1 -Hydroxybenzotriazol (HOBt) oder N-Hydroxysuccinimid (HOSu), sowie als Basen Alkalicarbonate, z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat oder -hydrogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine, z.B. Triethylamin, N-Methyl- morpholin, N-Methylpiperidin oder NN-Diisopropylethylamin. Bevorzugt wird TBTU in Verbindung mit N-Methylmorpholin, HATU in Verbindung mit NN-Diisopropylethylamin oder l-Chlor-NN,2- trimethylprop- 1 -en- 1 amin verwendet. Die Kondensationen (II) + (III)—> (I) und wird im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von -20°C bis +100°C, bevorzugt bei 0°C bis +60°C durchgeführt. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder bei erniedrigtem Druck erfolgen (z.B. von 0.5 bis 5 bar). Im Allgemeinen arbeitet man bei Normaldruck.

Alternativ kann die Carbonsäure der Formel (III) auch zunächst in das entsprechende Carbonsäurechlorid überführt werden und dieses dann direkt oder in einer separaten Umsetzung mit einem Amin der Formel (II) zu den erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden. Die Bildung von Carbonsäurechloriden aus Carbonsäuren erfolgt nach den dem Fachmann bekannten Methoden, beispielsweise durch Behandlung mit Thionylchlorid, Sulfurylchlorid oder Oxalylchlorid in Gegenwart einer geeigneten Base, beispielsweise in Gegenwart von Pyridin, sowie optional unter Zusatz von Dimethylformamid, optional in einem geeigneten inerten Lösemittel.

Inerte Lösungsmittel für die Verfahrensschritte (V) + (VI) — » ^■ (I) sind beispielsweise Diethylether, Tetrahydrofuran, Dioxan, Dichloromethan, Acetonitril, DMF, NMP, DMSO und deren Gemische. Bevorzugt wird Tetrahydrofuran verwendet. Als Basen für den Verfahrensschritt (V) + (VI)—> (I) eignen sich Pyridin, DMAP, Trialkylamine, z.B. Triethylamin, N-Methylmorpholin, N-Methylpiperidin oder NN-Diisopropylethylamin und DBU. Bevorzugt wird Pyridin verwendet.

Die Reaktion erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von 0°C bis +150°C, bevorzugt bei +20°C bis +120°C in einer Mikrowelle. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder bei erniedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. von 0.5 bis 5 bar).

Die Verbindungen der Formel (II) sind literaturbekannt oder können hergestellt werden, indem [A} eine Verbindung der Formel (VII)

in welcher R ⁴ , R ⁵ und R ⁶ jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,

in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer geeigneten Base mit einer Verbindung der

Formel (VIII)

R ¹

I

^X (VIII),

in welcher A und R ¹ jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben und

X ¹ für eine geeignete Abgangsgruppe, insbesondere Chlor, Brom, Iod, Mesylat, Triflat oder Tosylat, steht, zu einer Verbindung der Formel (IX)

in welcher A, R ¹ , R ⁴ , R ⁵ und R ⁶ jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,

umgesetzt wird, und diese anschliessend in einem inerten Lösungsmittel mit einer Verbindung Formel (X)

in welcher X ² für Chlor oder Brom steht und in welcher R ² die oben angegebenen Bedeutung hat, zu einer Verbindung der Formel (XI)

in welcher A, R ¹ , R ² , R ⁴ , R ⁵ und R ⁶ jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben, umgesetzt wird, diese dann durch Umsetzung mit 3-Methylbutylnitrit in einem geeigneten inerten Lösungsmittel zunächst in eine Verbindung der Formel (XII) überführt wird,

in welcher A, R ¹ , R ² , R ⁴ , R ⁵ und R ⁶ jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben, und diese dann in einem inertem Lösungsmittel in Gegenwart von Zink und Essigsäure umsetzt, und anschliessend gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen abspaltet, oder

[B] eine Verbindung der Formel (XIII)

in welcher A, R ¹ , R ² , R ⁴ , R ⁵ und R ⁶ jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben, in einem inerten Lösungsmittel mit Diphenylphophorazidat in Anwesenheit von tert-Butanol und einer geeigneten Base, zu einer Verbindung der Formel (XIV)

(XIV),

in welcher A, R ¹ , R ² , R ⁴ , R ⁵ und R ⁶ jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben, umgesetzt wird und man anschliessend die Schutzgruppe unter dem Fachmann bekannten Verfahren abspaltet.

Die beschriebene Verfahren werden durch die nachfolgende Schemata (Schema 3 und Schema 4) beispielhaft verdeutlicht: Schema 3:

[a): i) NaOMe, MeOH, RT; ii) DMSO, RT; b): EtOH, Rf; c): 3-Methylbutylnitrit, Dioxan, 100°C; d): Zn, Essigsäure, H2O, RT].

Schema 4:

[a): Diphenylphophorazidat, Triethylamin, Toluol, tert.-Butanol, 75°C; b): Salzsäure, MeOH, RT].

Die Synthese der Verbindungen der Formel (XIII) ist in WO2016/087343 (Verbindung III) beschrieben.

Inerte Lösungsmittel für den Verfahrensschritt (VII) + (VIII)— » ^■ (IX) sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan, Trichlorethylen oder Chlorbenzol, Ether wie Diethylether, Dioxan, Tetrahydrofuran, Glykoldimethylether oder Diethylenglykoldimethyl- ether, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Toluol, Xylol, Hexan, Cyclohexan oder Erdölfraktionen, Alkohole wie Methanol, Ethanol, fert-Butanol, oder andere Lösungsmittel wie Aceton, Methylethylketon, Essigsäureethylester, Acetonitril, NN-Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid, NN- Dimethylpropylenharnstoff (DMPU), N-Methylpyrrolidon (ΝΜΡ) oder Pyridin. Ebenso ist es möglich, Gemische der genannten Lösungsmittel einzusetzen. Bevorzugt wird Methanol, Dimethylformamid oder Dimethylsulfoxid verwendet.

Als Basen für den Verfahrensschritt (VII) + (VIII)—> (IX) eignen sich die üblichen anorganischen oder organischen Basen. Hierzu gehören bevorzugt Alkalihydroxide wie beispielsweise Lithium-, Natriumoder Kaliumhydroxid, Alkali- oder Erdalkalicarbonate wie Lithium-, Natrium-, Kalium-, Calcium- oder Cäsiumcarbonat gegebenenfalls unter Zusatz eines Alkaliiodids wie beispielsweise Natriumiodid oder Kaliumiodid, Alkali-Alkoholate wie Natrium- oder Kaliummethanolat, Natrium- oder Kaliumethanolat oder Natrium- oder Kalium-tert.-butylat, Alkalihydride wie Natrium- oder Kaliumhydrid, Amide wie Natriumamid, Lithium- oder Kalium-bis(trimethylsilyl)amid oder Lithiumdiisopropylamid, oder organische Amine wie Triethylamin, N-Methylmorpholin, N-Methylpiperidin, NN-Diisopropylethylamin, Pyridin, l,5-Diazabicyclo[4.3.0]non-5-en (DBN), l,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en (DBU) oder 1,4- Diazabicyclo[2.2.2]octan (DABCO ^® ). Bevorzugt wird Kaliumcarbonat, Cäsiumcarbonat oder Natriummethanolat verwendet.

Die Reaktion erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von 0°C bis +120°C, bevorzugt bei +20°C bis +80°C, gegebenenfalls in einer Mikrowelle. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder bei erniedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. von 0.5 bis 5 bar).

Inerte Lösungsmittel für den Ringschluss (IX) + (X)— > (XI) sind die üblichen organischen Lösungsmittel. Hierzu gehören bevorzugt Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol, Isopropanol, n-Butanol, n- Pentanol oder tert-Butanol, oder Ether wie Diethylether, Tetrahydrofuran, 2-Methyltetrahydrofuran, Dioxan oder Glykoldimethylether, oder andere Lösungsmittel wie Aceton, Dichlormethan, 1,2- Dichlorethan, Acetonitril, Dimethylformamid oder Dimethylsulfoxid. Ebenso ist es möglich, Gemische der genannten Lösungsmittel einzusetzen. Bevorzugt wird Ethanol verwendet.

Der Ringschluss erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von +50°C bis +150°C, bevorzugt bei +50°C bis +100°C, gegebenenfalls in einer Mikrowelle. Der Ringschluss (IX) + (X)— > (XI) erfolgt optional in Gegenwart wasserziehender Reaktionszusätze, beispielsweise in Gegenwart von Molekularsieb (4Ä Porengröße) oder mittels Wasserabscheider. Die Umsetzung (IX) + (X)— > (XI) erfolgt unter Verwendung eines Überschusses des Reagenzes der Formel (X), beispielsweise mit 1 bis 10 Äquivalenten des Reagenzes (X), gegebenenfalls unter Zusatz von Basen (wie z.B. Natriumhydrogencarbonat) wobei die Zugabe dieses Reagenzes einmalig oder in mehreren Portionen erfolgen kann.

Inerte Lösungsmittel für den Verfahrensschritt (XI) + 3-Methylbutylnitrit—> (XII) sind beispielsweise Dioxan, THF, DMF oder NMP. Ebenso ist es möglich, Gemische der genannten Lösungsmittel einzusetzen. Bevorzugt wird Dioxan verwendet. Die Reaktion erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von 25°C bis +150°C, bevorzugt bei +60°C bis +120°C, gegebenenfalls in einer Mikrowelle. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder bei erniedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. von 0.5 bis 5 bar).

Inerte Lösungsmittel für den Verfahrensschritt (XII) + Zink + Essigsäure— » ^■ (II) sind beispielsweise Wasser, Methanol oder Ethanol. Ebenso ist es möglich, Gemische der genannten Lösungsmittel einzu- setzen. Bevorzugt wird Wasser verwendet.

Die Reaktion erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von 0°C bis +150°C, bevorzugt bei +0°C bis +80°C, gegebenenfalls in einer Mikrowelle. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder bei erniedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. von 0.5 bis 5 bar).

Inerte Lösungsmittel für den Verfahrensschritt (XIII) + Diphenylphophorazidat—> (XIV) sind beispiels- weise Benzol, Xylol, Toluol oder Chlorbenzol. Ebenso ist es möglich, Gemische der genannten Lösungsmittel einzusetzen. Bevorzugt wird Toluol verwendet.

Die Reaktion erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von 0°C bis +150°C, bevorzugt bei +25°C bis +120°C, gegebenenfalls in einer Mikrowelle. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder bei erniedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. von 0.5 bis 5 bar). Inerte Lösungsmittel für den Verfahrensschritt (XIV)— » ^■ (II) sind beispielsweise Diethylether, Dioxan, THF, Methanol, Ethanol oder Wasser. Ebenso ist es möglich, Gemische der genannten Lösungsmittel einzusetzen. Bevorzugt wird Methanol verwendet

Die Reaktion erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von 0°C bis +150°C, bevorzugt bei +0°C bis +60°C, gegebenenfalls in einer Mikrowelle. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder bei erniedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. von 0.5 bis 5 bar). Weitere erfindungsgemäße Verbindungen können gegebenenfalls auch hergestellt werden durch Umwandlungen von funktionellen Gruppen einzelner Substituenten, insbesondere den unter R ³ aufgeführten, ausgehend von den nach obigen Verfahren erhaltenen Verbindungen der Formel (I). Diese Umwandlungen werden nach üblichen, dem Fachmann bekannten Methoden durchgeführt und umfassen beispielsweise Reaktionen wie nukleophile und elektrophile Substitutionen, Oxidationen, Reduktionen, Hydrierungen, Übergangsmetall-katalysierte Kupplungsreaktionen, Eliminierungen, Alkylierung, Aminierung, Veresterung, Esterspaltung, Veretherung, Etherspaltung, Bildung von Carbonamiden, sowie Einführung und Entfernung temporärer Schutzgruppen.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen wertvolle pharmakologische Eigenschaften und können zur Vorbeugung und Behandlung von Erkrankungen bei Menschen und Tieren verwendet werden. Die erfindungsgemäßen Verbindungen eröffnen eine weitere Behandlungsalternative und stellen somit eine Bereicherung der Pharmazie dar.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen wirken als potente Stimulatoren der löslichen Guanylatcyclase, besitzen wertvolle pharmakologische Eigenschaften, und weist ein verbessertes therapeutisches Profil auf, wie beispielsweise hinsichtlich ihrer in-vivo Eigenschaften und/oder ihres pharmakokinetischen Verhaltens und/oder metabolischen Profils. Sie eignet sich daher zur Behandlung und/ oder Prophylaxe von Erkrankungen bei Menschen und Tieren.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen bewirken eine Gefäßrelaxation und eine Hemmung der Thrombozytenaggregation und führen zu einer Blutdrucksenkung sowie zu einer Steigerung des koronaren Blutflusses. Diese Wirkungen sind über eine direkte Stimulation der löslichen Guanylatcyclase und einen intrazellulären cGMP-Anstieg vermittelt. Außerdem verstärkt die erfindungsgemäße Verbindung die Wirkung von Substanzen, die den cGMP-Spiegel steigern, wie beispielsweise EDRF (endothelium-derived relaxing factor), NO-Donatoren, Protoporphyrin IX, Arachidonsäure oder Phenylhydrazin-Derivate.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich zur Behandlung und/oder Prophylaxe von kardio- vaskulären, pulmonalen, thromboembolischen und fibrotischen Erkrankungen.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können daher in Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von kardiovaskulären Erkrankungen wie beispielsweise Bluthochdruck (Hypertonie), resistente Hypertonie, akute und chronische Herzinsuffizienz, koronare Herzerkrankung, stabile und instabile Angina pectoris, periphere und kardiale Gefäßerkrankungen, Arrhythmien, Rhythmusstörungen der Vorhöfe und der Kammern sowie Überleitungsstörungen wie beispielsweise atrio -ventrikuläre Blockaden Grad I-III (AB-Block Till), supraventrikuläre Tachyarrhythmie, Vorhofflimmern, Vorhoffflattern, Kammerflimmern, Kammerflattern, ventrikuläre Tachyarrhytmie, Torsade de pointes- Tachykardie, Extrasystolen des Vorhoffs und des Ventrikels, AV-junktionale Extrasystolen, Sick-Sinus Syndrom, Synkopen, AV-Knoten-Reentrytachykardie, Wolff-Parkinson-White-Syndrom, von akutem Koronarsyndrom (ACS), autoimmune Herzerkrankungen (Perikarditis, Endokarditis, Valvolitis, Aortitis, Kardiomyopathien), Schock wie kardiogenem Schock, septischem Schock und anaphylaktischem Schock, Aneurysmen, Boxerkardiomyopathie (premature ventricular contraction (PVC)), zur Behandlung und/oder Prophylaxe von thromboembolischen Erkrankungen und Ischämien wie myokardiale Ischämie, Myokard- infarkt, Hirnschlag, Herzhypertrophie, transistorischen und ischämischen Attacken, Präeklampsie, entzündliche kardiovaskuläre Erkrankungen, Spasmen der Koronararterien und peripherer Arterien, Ödembildung wie beispielsweise pulmonales Ödem, Hirnödem, renales Ödem oder Herzinsuffizienz-bedingtes Ödem, peripheren Durchblutungsstörungen, Reperfusionsschäden, arterielle und venöse Thrombosen, Mikroalbuminurie, Herzmuskelschwäche, endotheliale Dysfunktion, zur Verhinderung von Restenosen wie nach Thrombolysetherapien, percutan-transluminalen Angioplastien (PTA), transluminalen Koronarangioplastien (PTCA), Herztransplantationen und Bypass-Operationen, sowie mikro- und makrovaskuläre Schädigungen (Vasculitis), erhöhte Spiegel von Fibrinogen und von LDL geringer Dichte sowie erhöhte Konzentrationen von Plasminogenaktivator-Inhibitor 1 (PAI-1), sowie zur Behandlung und/oder Prophylaxe von erektiler Dysfunktion und weiblicher sexueller Dysfunktion eingesetzt werden. Im Sinne der vorliegenden Erfindung umfasst der Begriff Herzinsuffizienz sowohl akute als auch chronische Erscheinungsformen der Herzinsuffizienz, wie auch spezifischere oder verwandte Krankheitsformen wie akut dekompensierte Herzinsuffizienz, Rechtsherzinsuffizienz, Linksherzinsuffizienz, Globalinsuffizienz, ischämische Kardiomyopathie, dilatative Kardiomyopathie, hypertrophe Kardiomyopathie, idiopathische Kardiomyopathie, angeborene Herzfehler, Herzinsuffizienz bei Herzklappenfehlern, Mitralklappenstenose, Mitralklappeninsuffizienz, Aortenklappenstenose, Aortenklappeninsuffizienz, Trikuspidalstenose, Trikuspidalinsuffizienz, Pulmonalklappenstenose, Pulmonalklappeninsuffizienz, kombinierte Herzklappenfehler, Herzmuskelentzündung (Myokarditis), chronische Myokarditis, akute Myokarditis, virale Myokarditis, diabetische Herzinsuffizienz, alkoholtoxische Kardiomyopathie, kardiale Speichererkrankungen, diastolische Herzinsuffizienz sowie systolische Herzinsuffizienz und akute Phasen der Verschlechterung einer bestehenden chronischen Herzinsuffizienz (worsening heart failure).

Darüber hinaus kann die erfindungsgemäße Verbindung auch zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Arteriosklerose, Lipidstoffwechselstörungen, Hypolipoproteinämien, Dyslipidämien,

Hypertriglyceridämien, Hyperlipidämien, Hypercholesterolämien, Abetelipoproteinämie, Sitosterolämie, Xanthomatose, Tangier Krankheit, Fettsucht (Adipositas), Fettleibigkeit (Obesitas) und von kombinierten Hyperlipidämien sowie des Metabolischen Syndroms eingesetzt werden.

Außerdem können die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von primärem und sekundärem Raynaud-Phänomen, von Mikrozirkulationsstörungen, Claudicatio, peripheren und autonomen Neuropathien, diabetischen Mikroangiopathien, diabetischer Retinopathie, diabetischen Geschwüren an den Extremitäten, Gangren, CREST-Syndrom, Erythematose, Onychomykose, rheumatischen Erkrankungen sowie zur Förderung der Wundheilung verwendet werden.

Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung urologischer Erkrankungen wie beispielsweise benignes Prostata-Syndrom (BPS), benigne Prostata-Hyperplasie (BPH), benigne Prostata Vergrösserung (BPE), Blasenentleerungsstörung (BOO), untere Harnwegssyndrome (LUTS, einschließlich Feiines Urologisches Syndrom (FUS)), Erkrankungen des Urogenital-Systems einschliesslich neurogene überaktive Blase (OAB) und (IC), Inkontinenz (UI) wie beispielsweise Misch-, Drang-, Stress-, oder Überlauf-Inkontinenz (MUI, UUI, SUI, OUI), Beckenschmerzen, benigne und maligne Erkrankungen der Organe des männlichen und weiblichen Urogenital-Systems. Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Nierenerkrankungen, insbesondere von aktuer und chronischer Niereninsuffizienz, sowie von akutem und chronischem Nierenversagen. Im Sinne der vorliegenden Erfindung umfasst der Begriff Niereninsuffizienz sowohl akute als auch chronische Erscheinungsformen der Niereninsuffizienz, wie auch zugrundeliegende oder verwandte Nierenerkrankungen wie renale Hypoperfusion, intradialytische Hypotonie, obstruktive Uropathie, Glomerulopathien, Glomerulonephritis, akute Glomerulonephritis, Glomerulosklerose, tubulointerstitielle Erkrankungen, nephropathische Erkrankungen wie primäre und angeborene Nierenerkrankung, Nierenentzündung, immunologische Nierenerkrankungen wie Nierentransplantatabstoßung, Immunkomplex -induzierte Nierenerkrankungen, durch toxische Substanzen induzierte Nephropathie, Kontrastmittel-induzierte Nephropathie, diabetische und nicht-diabetische Nephropathie, Pyelonephritis, Nierenzysten, Nephrosklerose, hypertensive Nephrosklerose und nephrotisches Syndrom, welche diagnostisch beispielsweise durch abnorm verminderte Kreatinin- und/oder Wasser-Ausscheidung, abnorm erhöhte Blutkonzentrationen von Harnstoff, Stickstoff, Kalium und/oder Kreatinin, veränderte Aktivität von Nierenenzymen wie z.B. Glutamylsynthetase, veränderte Urinosmolarität oder Urinmenge, erhöhte Mikroalbuminurie, Makroalbuminurie, Läsionen an Glomerula und Arteriolen, tubuläre Dilatation, Hyperphosphatämie und/oder die Notwendigkeit zur Dialyse charakterisiert werden können. Die vorliegende Erfindung umfasst auch die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Folgeerscheinungen einer Niereninsuffizienz, wie beispielsweise Lungenödem, Herzinsuffizienz, Urämie, Anämie, Elektrolytstörungen (z.B. Hyperkalämie, Hyponaträmie) und Störungen im Knochen- und Kohlenhydrat- Metabolismus.

Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen auch zur Behandlung und/oder Prophylaxe von asthmatischen Erkrankungen, pulmonaler arterieller Hypertonie (PAH) und anderen Formen der pulmonalen Hypertonie (PH), umfassend mit Linksherzerkrankung, HIV, Sichelzellanämie, Thromboembolien (CTEPH), Sarkoidose, COPD oder Lungenfibrose assoziierte pulmonale Hypertonie, der chronisch-obstruktive Lungenerkrankung (COPD), des akuten Atemwegssyndrom (ARDS), der akuten Lungenschädigung (ALI), der alpha- 1 -Antitrypsin-Defizienz (AATD), der Lungenfibrose, des Lungenemphysem (z.B. durch Zigarettenrauch induziertes Lungenemphysem) und der zystischen Fibrose (CF).

Die in der vorliegenden Erfindung beschriebenen Verbindungen stellen auch Wirkstoffe zur Bekämpfung von Krankheiten im Zentralnervensystem dar, die durch Störungen des NO/cGMP-Systems gekennzeichnet sind. Insbesondere sind sie geeignet zur Verbesserung der Wahrnehmung, Konzentrationsleistung, Lernleistung oder Gedächtnisleistung nach kognitiven Störungen, wie sie insbesondere bei Situationen/Krankheiten/Syndromen auftreten wie "Mild cognitive impairment", altersassoziierten Lern- und Gedächtnisstörungen, altersassoziierten Gedächtnisverlusten, vaskulärer Demenz, Schädel-Hirn-Trauma, Schlaganfall, Demenz, die nach Schlaganfällen auftritt ("post stroke dementia"), post-traumatischem Schädel-Hirn-Trauma, allgemeinen Konzentrationsstörungen, Konzentrationsstörungen bei Kindern mit Lern- und Gedächtnisproblemen, Alzheimer'scher Krankheit, Demenz mit Lewy-Körperchen, Demenz mit Degeneration der Frontallappen einschliesslich des Pick's- Syndroms, Parkinson'scher Krankheit, progressiver nuclear palsy, Demenz mit corticobasaler Degeneration, Amyolateralsklerose (ALS), Huntington'scher Krankheit, Demyelinisation, Multipler Sklerose, Thalamischer Degeneration, Creutzfeld-Jacob-Demenz, HIV-Demenz, Schizophrenie mit Demenz oder Korsakoff-Psychose. Sie eignen sich auch zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen des Zentralnervensystems wie Angst-, Spannungs- und Depressionszuständen, zentralnervös bedingten Sexualdysiunktionen und Schlafstörungen sowie zur Regulierung krankhafter Störungen der Nahrungs-, Genuss- und Suchtmittelaufnahme. Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen auch zur Regulation der cerebralen Durchblutung und stellen wirkungsvolle Mittel zur Bekämpfung von Migräne dar. Auch eignen sie sich zur Prophylaxe und Bekämpfung der Folgen cerebraler Infarktgeschehen (Apoplexia cerebri) wie Schlaganfall, cerebraler Ischämien und des Schädel-Hirn-Traumas. Ebenso können die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Bekämpfung von Schmerzzuständen und Tinnitus eingesetzt werden. Zudem besitzen die erfindungsgemäßen Verbindungen antiinflammatorische Wirkung und können daher als entzündungshemmende Mittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Sepsis (SIRS), multiplem Organversagen (MODS, MOF), entzündlichen Erkrankungen der Niere, chronischen Darmentzündungen (IBD, Crohn's Disease, UC), Pankreatitis, Peritonitis, rheumatoiden Erkrankungen, entzündlichen Hauterkrankungen sowie entzündlichen Augenerkrankungen eingesetzt werden. Desweiteren können die erfindungsgemäßen Verbindungen ebenfalls zur Behandlung und/ oder Prophylaxe von Autoimmunerkrankungen eingesetzt werden.

Weiterhin sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe fibrotischer Erkrankungen der inneren Organe, wie beispielsweise der Lunge, des Herzens, der Niere, des Knochenmarks und insbesondere der Leber, sowie dermatologischer Fibrosen und fibrotischer Erkrankungen des Auges, geeignet. Im Sinne der vorliegenden Erfindungen umfasst der Begriff fibrotischer Erkrankungen insbesondere die folgenden Begriffe Leberfibrose, Leberzirrhose, Lungenfibrose, Endomyocardfibrose, Nephropathie, Glomerulonephritis, interstitielle Nierenfibrose, fibrotische Schäden in Folge von Diabetes, Knochenmarksfibrose und ähnliche fibrotische Erkrankungen, Sklerodermie, Morphaea, Keloide, hypertrophe Narbenbildung (auch nach chirurgischen Eingriffen), Naevi, diabetische Retinopathie, proliferative Vitroretinopathie und Erkrankungen des Bindegewebes (z.B. Sarkoidose).

Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Bekämpfung postoperativer Narbenbildung, z.B. in Folge von Glaukom-Operationen.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können ebenfalls kosmetisch bei alternder und verhornender Haut eingesetzt werden.

Außerdem sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/ oder Prophylaxe von Hepatitis, Neoplasma, Osteoporose, Glaukom und Gastroparese geeignet.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herzinsuffizienz, Angina pectoris, Hypertonie, pulmonaler Hypertonie, Ischämien, Gefäßerkrankungen, Niereninsuffizienz, thromboembolischen Erkrankungen, fibrotischen Erkrankungen, Arteriosklerose, Demenzerkrankungen und erektiler Dysfunktion.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung und/ oder Prophylaxe von Herzinsuffizienz, Angina pectoris, Hypertonie, pulmonaler Hypertonie, Ischämien, Gefäßerkrankungen, Niereninsuffizienz, thromboembolischen Erkrankungen, fibrotischen Erkrankungen und Arteriosklerose.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herzinsuffizienz, Angina pectoris, Hypertonie, pulmonaler Hypertonie, Ischämien, Gefäßerkrankungen, Niereninsuffizienz, thromboembolischen Erkrankungen, fibrotischen Erkrankungen, Arteriosklerose, Demenzerkrankungen und erektiler Dysfunktion.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer wirksamen Menge von mindestens einer der erfindungsgemäßen Verbindungen.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herzinsuffizienz, Angina pectoris, Hypertonie, pulmonaler Hypertonie, Ischämien, Gefäßerkrankungen, Niereninsuffizienz, thromboembolischen Erkrankungen, fibrotischen Erkrankungen und Arteriosklerose, unter Verwendung einer wirksamen Menge von mindestens einer der erfindungsgemäßen Verbindungen.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können allein oder bei Bedarf in Kombination mit anderen Wirkstoffen eingesetzt werden. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend mindestens eine der erfindungsgemäßen Verbindungen und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe der zuvor genannten Erkrankungen. Als geeignete Kombinationswirkstoffe seien beispielhaft und vorzugsweise genannt:

• organische Nitrate und NO-Donatoren, wie beispielsweise Natriumnitroprussid, Nitroglycerin, Isosorbidmononitrat, Isosorbiddinitrat, Molsidomin oder SIN-1, sowie inhalatives NO;

• Verbindungen, die den Abbau von cyclischem Guanosinmonophosphat (cGMP) inhibieren, wie beispielsweise Inhibitoren der Phosphodiesterasen (PDE) 1, 2 und/oder 5, insbesondere PDE 5-Inhibi- toren wie Sildenafil, Vardenafil und Tadalafil;

• antithrombotisch wirkende Mittel, beispielhaft und vorzugsweise aus der Gruppe der Thrombozytenaggregationshemmer, der Antikoagulantien oder der profibrinolytischen Substanzen;

• den Blutdruck senkende Wirkstoffe, beispielhaft und vorzugsweise beispielhaft und vorzugsweise aus der Gruppe der Calcium-Antagonisten, Angiotensin AII-Antagonisten, ACE-Inhibitoren, NEP- Inhibitoren, Vasopeptidase-Inhibitoren, Endothelin-Antagonisten, Renin-Inhibitoren, alpha-

Rezeptoren-Blocker, beta-Rezeptoren-Blocker, Mineralocorticoid-Rezeptor-Antagonisten, Rho-Kinase- Inhibitoren sowie der Diuretika; und/oder

• den Fettstoffwechsel verändernde Wirkstoffe, beispielhaft und vorzugsweise aus der Gruppe der Thyroidrezeptor-Agonisten, Cholesterinsynthese-Inhibitoren wie beispielhaft und vorzugsweise HMG- CoA-Reduktase- oder Squalensynthese-Inhibitoren, der ACAT-Inhibitoren, CETP-Inhibitoren, MTP-

Inhibitoren, PPAR-alpha-, PPAR-gamma- und/oder PPAR-delta-Agonisten, Cholesterin- Absorptions- hemmer, Lipase-Inhibitoren, polymeren Gallensäureadsorber, Gallensäure-Reabsorptionshemmer und Lipoprotein(a)-Antagonisten.

Unter antithrombotisch wirkenden Mittel werden vorzugsweise Verbindungen aus der Gruppe der Thrombozytenaggregationshemmer, der Antikoagulantien oder der profibrinolytischen Substanzen verstanden.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Thrombozytenaggregationshemmer, wie beispielhaft und vorzugsweise Aspirin, Clopidogrel, Ticlopidin oder Dipyridamol, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Thrombin-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Ximelagatran, Dabigatran, Melagatran, Bivalirudin oder Clexane, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem GPIIb/IIIa-Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Tirofiban oder Abciximab, verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Faktor Xa-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Rivaroxaban (BAY 59- 7939), Edoxaban (DU- 176b), Apixaban, Otamixaban, Fidexaban, Razaxaban, Fondaparinux, Idraparinux, PMD-3112, YM-150, KFA-1982, EMD-503982, MCM-17, MLN-1021, DX 9065a, DPC 906, JTV 803, SSR-126512 oder SSR-128428, verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit Heparin oder einem low molecular weight (LMW)-Heparin-Derivat verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Vitamin K-Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Coumarin, verabreicht. Unter den Blutdruck senkenden Mitteln werden vorzugsweise Verbindungen aus der Gruppe der Calcium- Antagonisten, Angiotensin AII-Antagonisten, ACE-Hemmer, Endothelin- Antagonisten, Renin-Inhibitoren, alpha-Rezeptoren-Blocker, beta-Rezeptoren-Blocker, Mineralocorticoid-Rezeptor-Antagonisten sowie der Diuretika verstanden.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Calcium-Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Nifedipin, Amlodipin, Verapamil oder Diltiazem, verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem alpha- 1 -Rezeptoren-Blocker, wie beispielhaft und vorzugsweise Prazosin, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem beta-Rezeptoren-Blocker, wie beispielhaft und vorzugsweise Propranolol, Atenolol, Timolol, Pindolol, Alprenolol, Oxprenolol, Penbutolol, Bupranolol, Metipranolol, Nadolol, Mepindolol, Carazalol, Sotalol, Metoprolol, Betaxolol, Celiprolol, Bisoprolol, Carteolol, Esmolol, Labetalol, Carvedilol, Adaprolol, Landiolol, Nebivolol, Epanolol oder Bucindolol, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Angiotensin AII-Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Losartan, Candesartan, Valsartan, Telmisartan, Embursartan, Irbesartan, Olmesartan, Eprosartan oder Azilsartan oder einem dualen Angiotensin AII-Antagonisten/NEP -Inhibitor, wie beispielsweise und vorzugsweise LCZ696 (Valsartan/Sacubitril), verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem ACE-Hemmer, wie beispielhaft und vorzugsweise Enalapril, Captopril, Lisinopril, Ramipril, Delapril, Fosinopril, Quinopril, Perindopril oder Trandopril, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Endothelin-Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Bosentan, Darusentan, Ambrisentan, Avosentan, Macitentan, Atrasentan oder Sitaxsentan, verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Renin-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Aliskiren, SPP-600 oder SPP- 800, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Mineralocorticoid-Rezeptor-Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Spironolacton, Finerenon oder Eplerenon, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Schleifendiuretikum, wie beispielsweise Furosemid, Torasemid, Bumetanid und Piretanid, mit kaliumsparenden Diuretika wie beispielsweise Amilorid und Triamteren, mit Aldosteronantagonisten, wie beispielsweise Spironolacton, Kaliumcanrenoat und Eplerenon sowie Thiaziddiuretika, wie beispielsweise Hydrochlorothiazid, Chlorthalidon, Xipamid, und Indapamid, verabreicht. Unter den Fettstoffwechsel verändernden Mitteln werden vorzugsweise Verbindungen aus der Gruppe der CETP-Inhibitoren, Thyroidrezeptor-Agonisten, Cholesterinsynthese-Inhibitoren wie HMG-CoA- Reduktase- oder Squalensynthese-Inhibitoren, der ACAT-Inhibitoren, MTP-Inhibitoren, PPAR-alpha-, PPAR-gamma- und/oder PPAR-delta-Agonisten, Cholesterin- Absorptionshemmer, polymeren Gallensäureadsorber, Gallensäure-Reabsorptionshemmer, Lipase-Inhibitoren sowie der Lipoproteine- Antagonisten verstanden.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem CETP-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Torcetrapib (CP-529 414), Anacetrapib, JJT-705 oder CETP-vaccine (Avant), verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Thyroidrezeptor-Agonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise D-Thyroxin, 3,5,3'-Triiodothyronin (T3), CGS 23425 oder Axitirome (CGS 26214), verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem HMG-CoA-Reduktase-lnhibitor aus der Klasse der Statine, wie beispielhaft und vorzugsweise Lovastatin, Simvastatin, Pravastatin, Fluvastatin, Atorvastatin, Rosuvastatin oder Pitavastatin, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Squalensynthese-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise BMS-188494 oder TAK-475, verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem ACAT-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Avasimibe, Melinamide, Pactimibe, Eflucimibe oder SMP-797, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem MTP-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Implitapide, BMS-201038, R- 103757 oder JTT-130, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem PPAR-gamma-Agonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Pioglitazone oder Rosiglitazone, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem PPAR-delta-Agonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise GW 501516 oder BAY 68-5042, verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Cholesterin-Absorptionshemmer, wie beispielhaft und vorzugsweise Ezetimibe, Tiqueside oder Pamaqueside, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Lipase-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Orlistat, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem polymeren Gallensäureadsorber, wie beispielhaft und vorzugsweise Cholestyramin, Colestipol, Colesolvam, CholestaGel oder Colestimid, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Gallensäure-Reabsorptionshemmer, wie beispielhaft und vorzugsweise ASBT (= IBAT)-Inhibitoren wie z.B. AZD-7806, S-8921, AK-105, BARI- 1741, SC-435 oder SC-635, verabreicht.

Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Lipoprotein(a)-Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Gemcabene calcium (CI-1027) oder Nicotinsäure, verabreicht.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, üblicherweise zusammen mit einem oder mehreren inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otisch oder als Implantat bzw. Stent.

Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.

Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende, die erfindungsgemäßen Verbindungen schnell und/oder modifiziert abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nicht-überzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen. Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern.

Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen oder -sprays, lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- oder Augenpräparationen, Vaginalkapseln, wäßrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische Systeme (z.B. Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.

Bevorzugt sind die orale oder parenterale Applikation, insbesondere die orale Applikation.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Lactose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige Polyethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natriumdodecylsulfat, Polyoxysorbitan- oleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und/oder Geruchskorrigentien.

Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 0.001 bis 1 mg/kg, vorzugsweise etwa 0.01 bis 0.5 mg/kg Körpergewicht zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Dosierung etwa 0.001 bis 2 mg/kg, vorzugsweise etwa 0.001 bis 1 mg/kg Körpergewicht.

Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt. So kann es in einigen Fällen ausreichend sein, mit weniger als der vorgenannten Mindestmenge auszukommen, während in anderen Fällen die genannte obere Grenze überschritten werden muss. Im Falle der Applikation größerer Mengen kann es empfehlenswert sein, diese in mehreren Einzelgaben über den Tag zu verteilen.

Die nachfolgenden Ausführungsbeispiele erläutern die Erfindung. Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen.

A. Beispiele

Abkürzungen:

abs. absolut (= getrocknet)

aq. wässrige Lösung

ber. berechnet

Boc teri-Butyloxycarbonyl

br. Verbreitertes Signal (NMR Kupplungsmuster)

CAS-Nr. Chemical Abstracts Service Nummer

Cbz Benzyloxycarbonyl

δ Verschiebung im NMR Spektrum (Angabe in ppm)

d Dublett (NMR-Kupplungsmuster)

DC Dünnschichtchromatographie

DCI direkte chemische Ionisation (bei MS)

DMAP 4-NN-Dimethylaminopyridin

DMF Dimethylformamid

DMSO Dimethylsulfoxid

EDCI N-[3-(Dimethylamino)propyl]-N'-ethylcarbodiimid

d. Th. der Theorie (bei Ausbeute)

ent enantiomerenrein

eq. Äquivalent(e)

ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS)

Et Ethyl

gef. gefunden

h Stunde(n)

HATU N-[(Dimethylamino)(3H-[l,2,3]triazolo[4,5-b]-pyridin-3- yloxy)methylen]-N-methylmethanaminiumhexafluorophosphat

HOBT lH-Benzotriazol-l -ol

HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie

HRMS hochaufgelöste Massenspektrometrie

ID Innendurchmesser

konz. konzentriert LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektrometrie

LiHMDS Lithiumhexamethyldisilazid

m Multiplett

Me Methyl

min Minute(n)

MS Massenspektrometrie

NMR Kernresonanzspektrometrie

PDA Photodiodenarraydetektor

Pd2dba3 Tris-(dibenzylidenaceton)-dipalladium

Ph Phenyl

q Quartett (NMR Kupplungsmuster)

quint. Quintett (NMR Kupplungsmuster)

rac racemisch

rel relative Stereochemie

RF Retentionsfaktor (bei Dünnschichtchromatographie)

RT Raumtemperatur

R _t Retentionszeit (bei HPLC)

s Singulett (NMR Kupplungsmuster)

t Triplett (NMR Kupplungsmuster)

THF Tetrahydrofuran

TBTU (Benzotriazol-1 -yloxy)bisdimethylaminomethyliumfluoroborat

UPLC-MS Ultradruck-Flüssigchromatographiegekoppelte Massenspektrometrie

UV Ultraviolett-Spektrometrie

v/v Volumen zu Volumen- Verhältnis (einer Lösung)

Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen. Angaben zu Kopplungsmustern in NMR-Spektren sind beschreibender Natur, Kopplungsmuster höherer Ordnung werden nicht als solche beschrieben. LC-MS- und HPLC-Methoden:

Methode 1 (LC-MS):

Instrament: Micromass Quattro Premier mit Waters UPLC Acquity; Säule: Thermo Hypersil GOLD 1.9 μ 50 x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A -> 0.1 min 90% A -> 1.5 min 10% A -> 2.2 min 10% A Ofen: 50°C; Fluss: 0.33 ml/min; UV-Detektion: 210 nm

Methode 2 (LC-MS):

Instrament: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%>ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%>ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A -> 1.2 min 5% A -> 2.0 min 5% A Ofen: 50°C; Fluss: 0.40 ml/min; UV-Detektion: 210 - 400 nm.

Methode 3 (LC-MS):

Instrament: Micromass Quattro Premier mit Waters UPLC Acquity; Säule: Thermo Hypersil GOLD 1.9 μ 50 x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%>ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 97% A -> 0.5 min 97% A -> 3.2 min 5% A -> 4.0 min 5% A Ofen: 50°C; Fluss: 0.3 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 4 (präparative HPLC):

Chromatorex C18 10μ 250x20mm Gradient: A= Wasser + 0.5% Ameisensäure, B= Acetonitril, 0 min = 5% B, 3min = 5% B vorspülen ohne Substanz, dann Injektion, 5 min = 5% B, 25min = 30% B, 38 min = 30% B, 38.1min = 95% B, 43 min= 95% B, 43.01min= 5% B, 48.0min= 5% B Flussrate 20 ml/min, Wellenlänge 210 nm.

Methode 5 (präparative HPLC):

Chromatorex C18 10μ 250x20 mm Gradient: A= Wasser + 0.5% Ameisensäure, B= Acetonitril, 0 min = 5% B, 3 min = 5% B vorspülen ohne Substanz, dann Injektion, 5 min = 5% B, 25min = 50% B, 38 min = 50% B, 38.1min = 95% B, 43 min= 95% B, 43.01min= 5% B, 48.0 min= 5% B Flussrate 20 ml/min, Wellenlänge 210 nm. Methode 6 (präparative HPLC):

XBridge Prep. C18 5μ 50x19 mm Gradient: A= Wasser + 0.5% Ammoniumhydroxid, B = Acetonitril, 0min = 5% B, 3 min = 5% B vorspülen ohne Substanz, dann Injektion, 5 min = 5% B, 25 min = 50%> B, 38 min = 50% B, 38.1 min = 95% B, 43 min= 95% B, 43.01min= 5% B, 48.0 min= 5% B Flussrate 15 ml/min, Wellenlänge 210 nm

Methode 7 (LC-MS):

Instrument MS: Waters (Micromass) QM; Instrument HPLC: Agilent 1100 Serie; Säule : Agient ZORBAX Extend-C18 3.0x50mm 3.5-Micron; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.01 mol Ammoniumcarbonat, Eluent B: 1 1 Acetonitril; Gradient: 0.0 min 98% A -> 0.2min 98% A -> 3.0 min 5% A^ 4.5 min 5% A ; Ofen: 40°C; Fluss: 1.75 ml/min; UV-Detektion: 210 nm

Methode 8 (LC-MS):

Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 30 x 2 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%>ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%>ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A -> 1.2 min 5% A -> 2.0 min 5% A Ofen: 50°C; Fluss: 0.60 ml/min; UV-Detektion: 208 - 400 nm.

Methode 9 (präparative HPLC):

Instrument MS: Waters, Instrument HPLC: Waters (Säule Waters X-Bridge C18, 18 mm x 50 mm, 5 μιη, Eluent A: Wasser + 0.05% Triethylamin, Eluent B: Acetonitril (ULC) + 0.05% Triethylamin, mit Gradient; Fluss: 40 ml/min; UV-Detektion: DAD; 210 - 400 nm). bzw.:

Instrument MS: Waters, Instrument HPLC: Waters (Säule Phenomenex Luna 5μ C18(2) 100A, AXIA Tech. 50 x 21.2 mm, Eluent A: Wasser + 0.05% Ameisensäure, Eluent B: Acetonitril (ULC) + 0.05% Ameisensäure, mit Gradient; Fluss: 40 ml/min; UV-Detektion: DAD; 210 - 400 nm).

Methode 10 (LC-MS): Instrument MS: Waters SQD; Instrument HPLC: Waters UPLC; Säule: Zorbax SB-Aq (Agilent), 50 mm x 2.1 mm, 1.8 μιη; Eluent A: Wasser + 0.025%) Ameisensäure, Eluent B: Acetonitril (ULC) + 0.025%) Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 98%A - 0.9 min 25%A - 1.0 min 5%A - 1.4 min 5%A - 1.41 min 98%A - 1.5 min 98%A; Ofen: 40°C; Fluss: 0.600 ml/min; UV-Detektion: DAD; 210 nm.

Methode 11 (MS): Instrament: Waters ZQ 2000; Elektrospray-Ionisierung; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; 25% A, 75% B; Fluss: 0.25 ml/min.

Methode 12 (DCI-MS):

Instrument: Thermo Fisher-Scientific DSQ; chemische Ionisierung; Reaktantgas Ammoniak; Quellentemperatur: 200°C; Ionisierungsenergie 70eV.

Methode 13 (LC-MS): Instrument MS: Waters (Micromass) Quattro Micro; Instrument HPLC: Agilent 1100 Serie; Säule: YMC- Triart C18 3 μ 50 x 3 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.01 mol Ammoniumcarbonat, Eluent B: 1 1 Acetonitril; Gradient: 0.0 min 100% A -> 2.75 min 5% A -> 4.5 min 5% A; Ofen: 40°C; Fluss: 1.25 ml/min; UV-Detektion: 210 nm. Methode 14 (GC-MS):

Instrument: Thermo Scientific DSQII, Thermo Scientific Trace GC Ultra; Säule: Restek RTX-35MS, 15 m x 200 μιη x 0.33 μιη; konstanter Fluss mit Helium: 1.20 ml/min; Ofen: 60°C; Inlet: 220°C; Gradient: 60°C, 30°C/min -> 300°C (3.33 min halten).

Methode 15 (LC-MS, analytisch): Instrument: Agilent MS Quad 6150; HPLC: Agilent 1290; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 x 2.1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%>ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A -> 0.3 min 90% A -> 1.7 min 5% A -> 3.0 min 5% A Ofen: 50°C; Fluss: 1.20 ml/min; UV-Detektion: 205 - 305 nm.

Methode 16 (LC-MS. analytisch): Instrument MS: Waters (Micromass) Quattro Micro; Instrument Waters UPLC Acquity; Säule : Waters BEH C18 1.7 μ 50 x 2.1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.01 mol Ammoniumformiat, Eluent B: 1 1 Acetonitril; Gradient: 0.0 min 95% A -> 0.1 min 95% A -> 2.0 min 15% A -> 2.5 min 15% A^ 2.51 min 10% A -> 3.0 min 10% A; Ofen: 40°C; Fluss: 0.5 ml/min; UV-Detektion: 210 nm. Methode 17 (LC-MS):

Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%>ige Ameisensäure , Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%>ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 95% A -> 6.0 min 5% A -> 7.5 min 5% A Ofen: 50°C; Fluss: 0.35 ml/min; UV-Detektion: 210 - 400 nm.

Methode 18 (LC-MS):

Gerätetyp MS: Waters ZQ; Gerätetyp HPLC: Agilent 1100 Series; UV DAD; Säule: Thermo Hypersil GOLD 3 μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100% A— > 3.0 min 10% A— > 4.0 min 10% A, Ofen: 55°C; Fluss 2ml/min; UV-Detektion: 210 nm.

Weitere Angaben:

Bei Aufreinigungen von erfindungsgemäßen Verbindungen per präparativer HPLC nach den oben beschriebenen Methoden, in denen die Elutionsmittel Zusatzstoffe wie beispielsweise Trifluoressigsäure, Ameisensäure oder Ammoniak enthalten, können die erfindungsgemäßen Verbindungen in Salz-Form, beispielsweise als Trifluoracetat, Formiat oder Ammonium-Salz anfallen, sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen ausreichend basische bzw. saure Funktionalitäten enthalten. Ein solches Salz kann durch verschiedene dem Fachmann bekannte Methoden in die entsprechende freie Base bzw. Säure überführt werden.

So können die Trifluoracetat-, Formiat- oder Ammonium-Salze durch Ausschütteln einer organischen Lösung oder Suspension mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung in die salzfreie Form überführt werden. Des Weiteren können Amidine als freie Verbindungen oder anteilig (abhängig von der Präparation bei Beteiligung von Essigsäure) als Acetat-Salze oder Acetat-Solvate vorliegen.

Wenn bei den im Folgenden beschriebenen Synthese-Intermediaten und Ausführungsbeispielen der Erfindung eine Verbindung in der Form eines Salzes der korrespondierenden Base bzw. Säure aufgeführt ist, so ist die exakte stöchiometrische Zusammensetzung eines solchen Salzes, wie es nach dem jeweiligen Herstell- und/oder Reinigungsverfahren erhalten wurde, in der Regel nicht bekannt. Sofern nicht genauer spezifiziert, sind daher Namens- und Strukturformel-Zusätze wie beispielsweise "Hydrochlorid", "Trifluoracetat", "Natrium-Salz" bzw. "x HCl", "x CF3COOH", "x Na ⁺ " bei solchen Salzen nicht stöchiometrisch zu verstehen, sondern haben allein deskriptiven Charakter bezüglich der enthaltenen salzbildenden Komponenten.

Sinngemäß gleiches gilt für den Fall, dass Synthese-Intermediate oder Ausführungsbeispiele oder Salze hiervon nach den beschriebenen Herstell- und/oder Reinigungsverfahren in Form von Solvaten, wie beispielsweise Hydraten, erhalten wurden, deren stöchiometrische Zusammensetzung (sofern definierter Art) nicht bekannt ist. Weiterhin können die erfindungsgemäßen sekundären Amide als Rotationsisomere/ Isomerengemische, insbesondere bei NMR-Untersuchungen, vorliegen. Reinheitsangaben beziehen sich in der Regel auf entsprechende Peak-Integrationen im LC/MS-Chromatogramm, können aber zusätzlich auch unter Zuhilfenahme des 'H-NMR-Spektrums ermittelt worden sein. Wenn keine Reinheit angegeben ist, handelt es sich in der Regel um eine 100%-Reinheit laut automatischer Peak-Integration im LC/MS- Chromatogramm oder die Reinheit wurde nicht explizit ermittelt.

Angaben zu Ausbeuten in % d. Th. sind in der Regel reinheitskorrigiert, sofern eine Reinheit <100% angegeben ist. Bei lösungsmittelhaltigen oder verunreinigten Chargen kann die Ausbeute formal ">100%" betragen; in diesen Fällen ist die Ausbeute nicht lösungsmittel- bzw. reinheitskorrigiert.

Alle Angaben in 'H-NMR-Spektren geben die Chemischen Verschiebungen δ in ppm an.

Die in den folgenden Paragraphen angegebenen Multiplizitäten von Protonensignalen in 'H-NMR- Spektren geben die jeweils beobachtete Signalform wieder und berücksichtigen keine Signalphänomene höherer Ordnung. In der Regel bezieht sich die Angabe zur chemischen Verschiebung auf das Zentrum des betreffenden Signals. Bei breiten Multipletts erfolgt die Angabe eines Intervalls. Durch Lösungsmittel oder Wasser verdeckte Signale wurden entweder tentativ zugeordnet oder sind nicht aufgeführt. Stark verbreiterte Signale - z.B. verursacht durch schnelle Rotation von Molekülteilen oder aufgrund von austauschenden Protonen - wurden ebenfalls tentativ zugeordnet (oft als breites Multiplett oder breites Singulett bezeichnet) oder sind nicht aufgeführt.

Die Methyl-Gruppe des chemischen Systems "2-Methylimidazo[l,2-a]pyrazin" erscheint in 'H-NMR- Spektren als Singulett (oftmals in DMSO-d6 und im Bereich von 2.40 - 2.60 ppm) und ist etweder klar als solches erkennbar, ist mit den Lösungsmittelsignalen überlagert oder liegt vollständig unter den Signalen der Lösungsmittel.

Schmelzpunkte und Schmelzbereiche, soweit angegeben, sind nicht korrigiert.

Für alle Reaktanden oder Reagenzien, deren Herstellung im Folgenden nicht explizit beschrieben ist, gilt, dass sie von allgemein zugänglichen Quellen kommerziell bezogen wurden. Für alle übrigen Reaktanden oder Reagenzien, deren Herstellung im Folgenden ebenfalls nicht beschrieben ist und die nicht kommerziell erhältlich waren oder von Quellen bezogen wurden, die nicht allgemein zugänglich sind, ist ein Verweis auf die veröffentlichte Literatur angegeben, in der ihre Herstellung beschrieben ist. Ausgangsverbindungen und Intermediate:

Beispiel 1A tert-Butyl-{8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l ,2-a]pyridin-3-yl}carbamat

12.0 g (36.1 mmol) 8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridin -3-carbonsäure (beschrieben in WO 2014068104, Beispiel 24A) wurden in 1093 ml Toluol vorgelegt, mit 328 ml tert- Butanol, 6.19 ml (44.4 mmol) Triethylamin und 8.56 ml (39.7 mmol) Diphenylphosphorazidat versetzt und über Nacht bei einer Innentemperatur von 70° - 75°C gerührt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch eingeengt und der Rückstand mittels Kieselgelchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 100/0, 100/1). Es wurden 3.32 g (20% d. Th., Reinheit 88%), 1.32 g (5% d. Th., Reinheit 55%) und 6.80 g (16% d. Th., Reinheit 25%) der Titelverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.72 min

MS (ESpos): m/z = 404 (M+H) ⁺

Beispiel 2A 8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridin -3-amin

3.32 g (7.24 mmol, Reinheit 88%) tert-Butyl- {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2- a]pyridin-3-yl}carbamat aus Beispiel 1A wurden in 38.4 ml Methanol vorgelegt und mit 38.4 ml (461 mmol) 37%-iger wässriger Salzsäure versetzt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch für 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde mit 90 ml Wasser versetzt und dreimal mit Dichlormethan gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit Natronlauge auf pH 12 gestellt und anschließend dreimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Es wurden 2.27 g (98% d. Th., Reinheit 95%>) der Titelverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 15): R _t = 0.79 min MS (ESpos): m/z = 304 (M+H) ⁺

Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) 5[ppm] : 2.175 (16.00), 2.242 (2.20), 2.256 (11.09), 2.258 (11.14), 4.489 (4.84), 5.235 (6.07), 6.473 (3.06), 7.186 (0.29), 7.196 (1.91), 7.207 (0.59), 7.216 (3.26), 7.225 (0.70), 7.236 (2.27), 7.245 (0.53), 7.509 (2.97), 7.531 (0.42), 7.542 (0.46), 7.548 (0.90), 7.552 (0.77), 7.569 (1.47), 7.586 (0.75), 7.590 (0.79), 7.607 (0.35). Beispiel 3A rac-Benzyl-[l-({8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimida zo[l,2-a]pyridin-3-yl}amino)-l - oxopropan-2-yl]carbamat

13.4 mg (0.06 mmol) rac-N-[(Benzyloxy)carbonyl] alanin wurden mit 19.3 mg (0.06 mmol) Bis(dimethylamino)(3-oxido-lH-benzotriazol-l -yl)methyliumtetrafluoroborat und 30 μΐ (0.274 mmol) 4-Methylmorpholin in 0.46 ml DMF vorgelegt und 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 20 mg (0.055 mmol, Reinheit 83%>) 8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2- a]pyridin-3-amin aus Beispiel 2A zur Reaktionslösung gegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Es wurden erneut 30.5 mg (0.137 mmol) raoN-[(Benzyloxy)carbonyl]alanin in 0.2 ml DMF gelöst, mit 43.9 mg (0.137 mmol) Bis(dimethylamino)(3-oxido-lH-benzotriazol-l - yl)methyliumtetrafluoroborat und 18 μΐ (0.164 mmol) 4-Methylmorpholin versetzt und für 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde die Lösung zur ersten Reaktionslösung gegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt.

In einer erneuten Reaktion wurden 24 mg (0.109 mmol) raoN-[(Benzyloxy)carbonyl] alanin in 0.46 ml DMF vorgelegt, mit 41.6 mg (0.109 mmol) HATU und 48 μΐ (0.274 mmol) N,N-Diisopropylethylamin versetzt und für 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 20 mg (0.055 mmol, Reinheit 83%) 8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridin -3-amin aus Beispiel 2A zur Reaktionslösung gegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt.

Beide Reaktionsgemische wurden zusammengegeben und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1%> TFA). Es wurden 41 mg der Zielverbindung (58% d. Th., Reinheit 79%) erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.78 min

MS (ESpos): m/z = 509 (M+H) ⁺

Beispiel 4A rac-tert-Butyl-[l -(4-chlo^henyl)-2-( {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridi n-3- yl} amino)-2-oxoethyl]carbamat Trifluoracetat

89 mg (0.31 mmol) rac-[(tert-Butoxycarbonyl)amino](4-chlorphenyl)essigsäure wurden in 0.5 ml DMF vorgelegt, mit 119 mg (0.31 mmol) HATU und 136 μΐ (0.78 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin versetzt und 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 50 mg (0.16 mmol, Reinheit 95%) 8- [(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l ,2-a]pyridin-3-amin aus Beispiel 2A zur Reaktionslösung gegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Acetonitril, Wasser und TFA versetzt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1% TFA). Es wurden 45 mg der Zielverbindung (42% d. Th.) erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.94 min

MS (ESpos): m/z = 571 (M-TFA+H) ⁺

Beispiel 5A rac-tert-Butyl-[2-(4-chlorbenzyl)-3-( {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l ,2-a]pyridin-3- yl} amino)-3-oxopropyl]carbamat Trifluoracetat

138 mg (0.44 mmol) rac-3-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]-2-(4-chlorbenzyl)propans� �ure wurden in 1.0 ml DMF vorgelegt, mit 167 mg (0.44 mmol) HATU und 273 μΐ (1.57 mmol) N,N-Diisopropylethylamin versetzt und 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 100 mg (0.31 mmol, Reinheit 95%) 8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l ,2-a]pyridin-3-amin aus Beispiel 2A zur Reaktionslösung gegeben und für 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Es wurden erneut 29 mg (0.09 mmol) rac-3-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]-2-(4-chlorbenzyl)propans� �ure in 0.2 ml DMF vorgelegt, mit 36 mg (0.09 mmol) HATU und 27 μΐ (0.16 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin versetzt und für 10 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde die Lösung zur ersten Reaktionslösung gegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Acetonitril, Wasser und TFA versetzt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1% TFA). Es wurden 142 mg der Zielverbindung (63% d. Th., Reinheit 99%) erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.94 min

MS (ESpos): m/z = 599 (M-TFA+H) ⁺ Beispiel 6A rac-tert-Butyl-[2-( {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridi n-3-yl}amino)-l-(4- fluorphenyl)-2-oxoethyl]carbamat Trifluoracetat

84 mg (0.31 mmol) rac-[(tert-Butoxycarbonyl)amino](4-fluorphenyl)essigsäure wurden in 0.5 ml DMF vorgelegt, mit 119 mg (0.31 mmol) HATU und 136 μΐ (0.78 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin versetzt und 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 50 mg (0.16 mmol, Reinheit 95%) 8- [(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridin-3 -amin aus Beispiel 2A zur Reaktionslösung gegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Acetonitril, Wasser und TFA versetzt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1% TFA). Es wurden 77 mg der Zielverbindung (63% d. Th., Reinheit 85%) erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.89 min

MS (ESpos): m/z = 555 (M-TFA+H) Beispiel 7A rac-N-alpha-[(benzyloxy)carbonyl]-4-chlor-N- {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2- a]pyridin-3-yl}phenylalaninamid Trifluoracetat

105 mg (0.31 mmol) rac-N-[(Benzyloxy)carbonyl]-4-chlorphenylalanin wurden in 0.5 ml DMF vorgelegt, mit 119 mg (0.31 mmol) HATU und 136 μΐ (0.78 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin versetzt und 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 50 mg (0.16 mmol, Reinheit 95%) 8- [(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridin-3 -amin aus Beispiel 2A zur Reaktionslösung gegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Acetonitril, Wasser und TFA versetzt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1% TFA). Es wurden 84 mg der Zielverbindung (71% d. Th., Reinheit 98%) erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.96 min

MS (ESpos): m/z = 619 (M-TFA+H) ⁺ Beispiel 8A rac-tert-Butyl-[2-(4-chlo^henyl)-3-( {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridi n-3- yl} amino)-3-oxopropyl]carbamat Trifluoracetat

131 mg (0.44 mmol) rac-3-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]-2-(4-chlorphenyl)propans� �ure wurden in 1.0 ml DMF vorgelegt, mit 167 mg (0.44 mmol) HATU und 273 μΐ (1.57 mmol) N,N-Diisopropylethylamin versetzt und 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 100 mg (0.31 mmol, Reinheit 95%) 8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridin -3-amin aus Beispiel 2A zur Reaktionslösung gegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Es wurden erneut 56 mg (0.19 mmol) rac-3-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]-2-(4-chlorphenyl)propans� �ure in 0.2 ml DMF vorgelegt, mit 71 mg (0.19 mmol) HATU und 55 μΐ (0.31 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin versetzt und für 20 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde die Lösung zur ersten Reaktionslösung gegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Acetonitril, Wasser und TFA versetzt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1%> TFA). Die sauberen Produktfraktionen wurden vereinigt und eingeengt. Es wurden 110 mg der Zielverbindung (50%> d. Th., Reinheit 100%) erhalten. Die weniger sauberen Produktfraktionen wurden ebenfalls vereinigt, eingeengt und nochmals mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1%) TFA). Es wurden nochmals 36 mg (15%> d. Th., Reinheit 91%>) der Zielverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 17): R _t = 2.92 min

MS (ESpos): m/z = 585 (M-TFA+H) ⁺

Beispiel 9A rac-tert-Butyl-[l -(4-chlo^henyl)-3-( {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridi n-3- yl} amino)-3-oxopropyl]carbamat Trifluoracetat

131 mg (0.44 mmol) rac-3-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]-3-(4-chlorphenyl)propans� �ure wurden in 1.0 ml DMF vorgelegt, mit 167 mg (0.44 mmol) HATU und 273 μΐ (1.57 mmol) N,N-Diisopropylethylamin versetzt und 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 100 mg (0.31 mmol, Reinheit 95%) 8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridin -3-amin aus Beispiel 2A zur Reaktionslösung gegeben und für 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Es wurden erneut 28 mg (0.09 mmol) rac-3-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]-3-(4-chlorphenyl)propans� �ure in 0.2 ml DMF vorgelegt, mit 36 mg (0.09 mmol) HATU und 27 μΐ (0.16 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin versetzt und für 10 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde die Lösung zur ersten Reaktionslösung gegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Acetonitril, Wasser und TFA versetzt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1% TFA). Es wurden 158 mg (71% d. Th., Reinheit 99%) der Zielverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.93 min MS (ESpos): m/z = 585 (M-TFA+H) ⁺

Beispiel 10A

3-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]pyridin-2-amin

51 g Natriummethanolat (953 mmol, 1.05 Äquivalente) wurden in 1000 mL Methanol bei RT vorgelegt, mit 100 g 2-Amino-3-hydroxypyridin (908 mmol, 1 Äquivalent) versetzt und 15 min bei RT gerührt. Die Reaktionsmischung wurde am Vakuum aufkonzentriert, der Rückstand in 2500 mL DMSO aufgenommen und mit 197 g 2,6-Difluorbenzylbromid (953 mmol, 1.05 Äquivalente) versetzt. Nach 4 h bei RT wurde das Reaktionsgemisch auf 20 L Wasser gegossen, für 15 min gerührt und der Feststoff ab filtriert. Der Feststoff wurde mit 1 L Wasser sowie 100 mL Isopropanol und 500 mL Petrolether nachgewaschen und im Hochvakuum getrocknet. Es wurden 171 g der Titelverbindung (78% d. Th) erhalten.

LC-MS (Methode 1): R _t = 0.67 min MS (ESpos): m/z = 237 (M+H) ⁺ Beispiel IIA

8 - [(2,6 -Difluorbenzyl) oxy] -2 -methylimidazo [1,2 -ajpyridin

12.0 g (50.8 mmol) 3-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]pyridin-2-amin aus Beispiel 10A und 6.93 ml (86.4 mmol) 1 -Chloraceton wurden mit 90 ml Ethanol versetzt und über Nacht unter Rückfluss gerührt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch zusammen mit Kieselgel eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Kieselgelchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Ethanol 50: 1 Dichlormethan/Methanol/Diethylamin 50: 1 :0.1 -» 40:1 :0.5 -» 30: 1 :0.5). Es wurden 6.26 g (45% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.58 min MS (ESpos): m/z = 275 (M+H) ⁺

^! H-NMR (400 MHz, DMSO-de) delta [ppm] : 2.268 (16.00), 5.265 (7.33), 6.714 (1.11), 6.733 (2.66), 6.749 (2.85), 6.761 (3.08), 6.764 (3.15), 6.780 (1.27), 7.195 (0.33), 7.204 (2.15), 7.225 (3.82), 7.245 (2.49), 7.254 (0.36), 7.539 (0.44), 7.556 (0.99), 7.561 (0.84), 7.577 (1.63), 7.594 (0.83), 7.599 (0.84), 7.616 (0.38), 7.644 (4.05), 8.079 (2.28), 8.081 (2.18), 8.095 (2.28), 8.097 (2.09).

Beispiel 12A

8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy] -2-methyl-3 -nitrosoimidazo[ 1 ,2-a]pyridin

800 mg (2.92 mmol) 8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2-methylimidazo[l,2-a]pyridin aus Beispiel I IA wurden in 15 ml Dioxan gelöst, mit 943 μΐ (7.00 mmol) 3-Methylbutylnitrit versetzt und für 30 Minuten bei 100 °C in der Mikrowelle gerührt. Die Reaktionslösung wurde eingeengt und der Rückstand mittels Kieselgelchromatographie gereinigt (Laufmittel: Cyclohexan/Essigsäureethylester 2: 1). Es wurden 621 mg (70% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 18): R _t = 1.95 min MS (ESpos): m/z = 304 (M+H)

Beispiel 13A

8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2-methylimidazo[l,2-a]pyridin- 3-amin

620 mg (2.04 mmol) 8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2-methyl-3-nitrosoimidazo[l,2-a]p yridin aus Beispiel 12A wurden in 7.16 ml (125 mmol) Essigsäure vorgelegt, mit 3.6 ml Wasser und 641 mg (9.81 mmol) Zink versetzt und für 75 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde über Celite filtriert, mit Dichlormethan nachgewaschen und das Filtrat vom Dichlormethan befreit. Der wässrige Rückstand wurde mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Methanol/Wasser- Gradient unter Zusatz von 0.1% TFA). Die Produktfraktionen wurden vereinigt und das organische Lösemittel abdestilliert. Der Rückstand wurde mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonat- Lösung versetzt und dreimal mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden einmal mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert, eingeengt und im Hochvakuum getrocknet. Es wurden 327 mg (55% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 18): R _t = 1.16 min

MS (ESpos): m/z = 290 (M+H) ⁺ Beispiel 14A

Phenyl-{8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2-methylimidazo[l,2-a] pyridin-3-yl}carbamat

2.20 g (7.61 mmol) 8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2-methylimidazo[l,2-a]pyridin-3-a min aus Beispiel 13A wurden in 100 ml THF gelöst und mit 0.806 g (7.61 mmol) Natriumcarbonat versetzt. Es wurden 2.86 ml (22.82 mmol) Chlorameisensäurephenylester zugetropft und die Mischung wurde 5 h bei RT gerührt. Das Gemisch wurde abfiltriert, eingedampft und anschließend mittels Kieselgelchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan Dichlormethan/Methanol = 80:20). Es wurden 1.62 g (32% d. Th.; Reinheit 62%) der Titelverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.77 min

MS (ESpos): m/z = 410 (M+H) ⁺

Ausführungsbeispiele Beispiel 1

2-(4-Chlo^henyl)-N-{8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimeth ylimidazo[l,2-a]pyridin-3-yl}acetamid

53 mg (0.31 mmol) (4-Chlorphenyl)essigsäure wurden in 0.5 ml DMF vorgelegt, mit 119 mg (0.31 mmol) HATU und 136 μΐ (0.78 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin versetzt und 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 50 mg (0.16 mmol, Reinheit 95%) 8-[(2,6- Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridin-3-amin aus Beispiel 2A zur Reaktionslösung gegeben und für 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Es wurden erneut 53 mg (0.31 mmol) (4- Chlorphenyl)essigsäure in 0.5 ml DMF vorgelegt, mit 119 mg (0.31 mmol) HATU und 68 μΐ (0.39 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin versetzt und für 10 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde die Lösung zur ersten Reaktionslösung gegeben und für 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Acetonitril, Wasser und TFA versetzt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1% TFA). Die Produktfraktionen wurden vereinigt, eingeengt und der Rückstand erneut mittels präparativer HPLC gereinigt (Säule XBridge C18, 5 μιη, 75 x 30 mm, Laufmittel: Milli-Q-Wasser, Acetonitril, 1% TFA in Wasser). Die Produktfraktionen wurden vereinigt und eingeengt. Der Rückstand wurde in Dichlormethan gelöst und zweimal mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonat- Lösung gewaschen. Die vereinigten wässrigen Phasen wurden zweimal mit Dichlormethan reextrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Es wurden 7 mg der Zielverbindung (10% d. Th., Reinheit 97%) erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.78 min

MS (ESpos): m/z = 456 (M+H) ⁺ Ή-NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ [ppm]: 2.100 (16.00), 2.248 (11.55), 3.760 (9.49), 5.261 (6.20), 6.721 (3.52), 7.201 (0.41), 7.209 (2.08), 7.225 (3.60), 7.241 (2.57), 7.247 (0.59), 7.290 (3.40), 7.403 (1.16), 7.409 (0.77), 7.415 (1.34), 7.421 (10.50), 7.426 (11.55), 7.431 (1.23), 7.438 (0.77), 7.443 (1.11), 7.549 (0.36), 7.562 (0.90), 7.565 (0.85), 7.579 (1.49), 7.592 (0.82), 7.596 (0.82), 7.609 (0.39), 9.915 (3.32).

Beispiel 2

-N-{8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimeth limidazo[l,2-a]pyridin-3-yl}alaninamid

41 mg (0.064 mmol, Reinheit 79%) rac-Benzyl-[l-({8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6- dimethylimidazo[l,2-a]pyridin-3-yl}amino)-l-oxopropan-2-yl]c arbamat aus Beispiel 3A wurden in 2.0 ml Ethanol gelöst, mit 24 μΐ TFA und 6.8 mg Palladium auf Aktivkohle (10% ig) versetzt und 2 Stunden bei Normaldruck hydriert. Die Reaktionslösung wurde über einen Millipore -Filter filtriert und das Filtrat eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Dickschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol = 10/1). Die isolierte Produktfraktion wurde lyophilisiert und erneut mittels Dickschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/2 N Ammoniak in Methanol = 20/1.5). Die Produktfraktion wurde mit Dichlormethan/2 N Ammoniak in Methanol gerührt, die Lösung mit wenig Trockeneis versetzt und eingeengt. Es wurden 9.7 mg (38% d. Th., Reinheit 94%) der Zielverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.43 min

MS (ESpos): m/z = 375 (M+H) ^{+ 1} H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) 8 [ppm]: 1.294 (8.12), 1.312 (8.19), 2.123 (16.00), 2.279 (11.36), 3.530 (0.63), 3.547 (2.07), 3.564 (2.03), 3.581 (0.60), 5.270 (6.43), 6.722 (3.65), 7.202 (0.37), 7.212 (1.99), 7.232 (3.56), 7.252 (2.32), 7.261 (0.36), 7.381 (3.28), 7.547 (0.37), 7.564 (0.88), 7.568 (0.81), 7.585 (1.44), 7.602 (0.77), 7.606 (0.78), 7.623 (0.33).

Beispiel 3 rac-2-Amino-2-(4-chlo^henyl)-N- {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridi n-3- yljacetamid

56 mg (0.082 mmol) rac-tert-Butyl-[l-(4-chlorphenyl)-2-({8-[(2,6-difluorbenzyl) oxy]-2,6- dimethylimidazo[l,2-a]pyridin-3-yl}amino)-2-oxoethyl]carbama t Trifluoracetat aus Beispiel 4A wurden mit 0.5 ml Dichlormethan und 0.5 ml Trifluoressigsäure versetzt und für 2.5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde eingeengt und der Rückstand mittels Dickschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan Methanol = 10/1). Das Produkt wurde isoliert und erneut mittels Dickschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/2N Ammoniak in Methanol = 10/1). Es wurden 25 mg (65%> d. Th., Reinheit 98%>) der Titelverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.56 min

MS (ESpos): m/z = 471 (M+H) + Ή-NMR (400 MHz, DMSO-de) δ [ppm]: 2.038 (16.00), 2.203 (11.94), 4.665 (3.76), 5.254 (6.45), 6.706 (3.79), 7.072 (3.51), 7.192 (0.40), 7.201 (2.10), 7.221 (3.83), 7.241 (2.52), 7.250 (0.64), 7.458 (3.93), 7.480 (5.81), 7.539 (0.48), 7.567 (5.85), 7.588 (4.21), 7.613 (0.50).

Beispiel 4 rac-3-Amino-2-(4-chlorbenzyl)-N- {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridi n-3- yljpropanamid

142 mg (0.197 mmol, Reinheit 99%) rac-tert-Butyl-[2-(4-chlorbenzyl)-3-( {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]- 2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridin-3-yl}amino)-3-oxopropyl]ca rbamat Trifluoracetat aus Beispiel 5A wurden mit 1.2 ml Dichlormethan und 1.2 ml Trifluoressigsäure versetzt und für 2.5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde eingeengt und der Rückstand mittels Dickschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol = 10/1). Das Produkt wurde isoliert und erneut mittels Dickschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/2N Ammoniak in Methanol = 10/1). Es wurden 62 mg (62% d. Th.) der Titelverbindung erhalten. LC-MS (Methode 2): R _t = 0.62 min

MS (ESpos): m/z = 499 (M+H)

Ή-NMR (400 MHz, DMSO-de) δ [ppm] : 0.000 (16.00), 1.995 (6.63), 2.210 (5.78), 2.812 (0.64), 2.842 (2.82), 2.869 (0.53), 5.249 (2.93), 6.681 (1.81), 6.925 (1.50), 7.190 (0.24), 7.200 (0.97), 7.220 (1.78), 7.240 (1.09), 7.252 (0.23), 7.284 (1.59), 7.305 (2.34), 7.379 (2.56), 7.400 (1.68), 7.538 (0.19), 7.557 (0.45), 7.575 (0.67), 7.596 (0.40), 7.615 (0.15).

Beispiel 5 rac-2-Amino-N- {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridi n-3-yl} -2-(4- fluorphenyl)acetamid

77 mg (0.098 mmol, Reinheit 85%) rac-tert-Butyl-[2-({8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6- dimethylimidazo[l,2-a]pyridin-3-yl}amino)-l-(4-fluorphenyl)- 2-oxoethyl]carbamat Trifluoracetat aus Beispiel 6A wurden mit 0.5 ml Dichlormethan und 0.5 ml Trifluoressigsäure versetzt und für 2.5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde eingeengt und der Rückstand mittels Dickschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol = 10/1). Das Produkt wurde isoliert und erneut mittels Dickschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/2N Ammoniak in Methanol = 10/1). Es wurden 31 mg (68% d. Th., Reinheit 98%>) der Titelverbindung erhalten. LC-MS (Methode 2): R _t = 0.52 min

MS (ESpos): m/z = 455 (M+H) ⁺

^! H-NMR (500 MHz, DMSO-de) δ [ppm]: 2.035 (16.00), 2.201 (10.53), 4.665 (4.03), 5.254 (5.65), 6.705 (3.34), 7.076 (3.12), 7.197 (0.33), 7.205 (1.90), 7.215 (2.72), 7.220 (3.67), 7.232 (4.78), 7.236 (3.19), 7.246 (1.09), 7.250 (2.38), 7.256 (0.35), 7.545 (0.32), 7.558 (0.78), 7.562 (0.75), 7.576 (3.31), 7.587 (2.88), 7.593 (2.87), 7.600 (1.01), 7.604 (2.19).

Beispiel 6 rac-4-Chlor-N-{8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidaz o[l,2-a]pyridm-3-yl}phenylalaninamid

60 mg (0.08 mmol, Reinheit 98%) rac-N-alpha-[(benzyloxy)carbonyl]-4-chlor-N- {8-[(2,6- difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridin-3-yl}ph enylalaninamid Trifluoracetat aus Beispiel 7A wurden mit 1.2 ml Trifluoressigsäure versetzt und über 7 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Acetonitril und Wasser versetzt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1%> TFA). Die Produktfraktionen wurden vereinigt und eingeengt. Der Rückstand wurde in Dichlormethan und wenig Methanol aufgenommen und zweimal mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung gewaschen. Die vereinigten wässrigen Phasen wurden zweimal mit Dichlormethan reextrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Es wurden 33 mg der Zielverbindung (84% d. Th., Reinheit 98%) erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.60 min

MS (ESpos): m/z = 485 (M+H) ⁺

^! H-NMR (400 MHz, DMSO-de) δ [ppm]: 2.045 (16.00), 2.250 (12.41), 2.840 (0.74), 2.858 (0.82), 2.874 (1.32), 2.892 (1.31), 2.958 (1.30), 2.974 (1.37), 2.991 (0.79), 3.007 (0.82), 3.689 (1.00), 3.706 (1.92), 3.723 (0.91), 5.258 (6.62), 6.705 (3.99), 7.077 (3.43), 7.198 (0.35), 7.208 (2.00), 7.228 (3.73), 7.247 (2.36), 7.257 (0.42), 7.309 (3.04), 7.330 (6.00), 7.369 (6.25), 7.390 (3.10), 7.544 (0.38), 7.561 (0.89), 7.582 (1.43), 7.602 (0.80), 7.619 (0.31).

Beispiel 7 rac-3-Amino-2-(4-chlo^henyl)-N- {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridi n-3- yljpropanamid

143 mg (0.205 mmol) rac-tert-Butyl-[2-(4-chlorphenyl)-3-( {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6- dimethylimidazo[l,2-a]pyridin-3-yl}amino)-3-oxopropyl]carbam at Trifluoracetat aus Beispiel 8A wurden mit 0.75 ml Dichlormethan und 0.75 ml Trifluoressigsäure versetzt und für 40 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde eingeengt und der Rückstand mittels Dickschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol = 10/1). Das Produkt wurde isoliert und erneut mittels Dickschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/2N Ammoniak in Methanol = 10/1). Es wurden 57 mg (54% d. Th., Reinheit 94%) der Titelverbindung erhalten. LC-MS (Methode 2): R _t = 0.58 min

MS (ESpos): m/z = 485 (M+H) ⁺

^! H-NMR (400 MHz, DMSO-de) δ [ppm]: 2.048 (16.00), 2.217 (10.74), 2.865 (0.91), 2.879 (1.03), 2.896 (1.16), 2.910 (1.07), 3.178 (1.04), 3.201 (1.24), 3.209 (1.00), 3.231 (0.96), 3.801 (1.02), 3.815 (1.16), 3.824 (1.13), 3.838 (0.91), 5.258 (5.80), 6.713 (3.45), 7.192 (3.34), 7.203 (2.09), 7.223 (3.53), 7.243 (2.41), 7.410 (1.71), 7.415 (0.86), 7.431 (7.45), 7.445 (7.86), 7.461 (0.85), 7.466 (1.78), 7.540 (0.36), 7.557 (0.86), 7.561 (0.78), 7.578 (1.43), 7.595 (0.76), 7.599 (0.79), 7.616 (0.36).

Beispiel 8 rac-3-Amino-3-(4-chlo^henyl)-N- {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridi n-3- yljpropanamid

158 mg (0.224 mmol, Reinheit 99%) rac-tert-Butyl-[l-(4-chlorphenyl)-3-( {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]- 2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridin-3-yl}amino)-3-oxopropyl]ca rbamat Trifluoracetat aus Beispiel 9A wurden mit 1.4 ml Dichlormethan und 1.4 ml Trifluoressigsäure versetzt und für 2.5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde eingeengt und der Rückstand mittels Dickschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol = 10/1). Das Produkt wurde isoliert und erneut mittels Dickschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/2N Ammoniak in Methanol = 10/1). Es wurden 63 mg (57% d. Th., Reinheit 98%>) der Titelverbindung erhalten. LC-MS (Methode 17): R _t = 1.48 min MS (ESpos): m/z = 485 (M+H) ⁺

^! H-NMR (400 MHz, DMSO-de) δ [ppm]: 2.058 (16.00), 2.231 (13.36), 2.654 (0.33), 2.671 (0.58), 2.689 (2.36), 2.695 (2.50), 2.706 (2.38), 2.714 (2.13), 2.730 (0.30), 2.749 (0.28), 4.306 (1.08), 4.324 (2.04), 4.342 (1.00), 5.255 (6.72), 6.695 (4.11), 7.079 (3.56), 7.193 (0.56), 7.203 (2.30), 7.223 (4.14), 7.242 (2.63), 7.251 (0.59), 7.402 (3.22), 7.423 (6.39), 7.460 (6.23), 7.482 (3.05), 7.541 (0.48), 7.558 (0.98), 7.578 (1.55), 7.598 (0.89), 7.616 (0.36).

Beispiel 9

2-(4-Chlorphenyl)-N-{8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2-methyli midazo[l,2-a]pyridin-3-yl}acetamid

18.6 mg (0.11 mmol) (4-Chlorphenyl)essigsäure wurden mit 35 mg (0.11 mmol) Bis(dimethylamino)(3- oxido-lH-benzotriazol-l-yl)methyliumtetrafluoroborat und 55 μΐ 4-Methylmorpholin in 1 ml Dichlormethan vorgelegt und 10 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 29 mg (0.10 mmol, Reinheit 80%) 8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2-methylimidazo[l,2-a]pyridin-3-a min aus Beispiel 13A zur Reaktionslösung gegeben und 2 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde eingeengt und der Rückstand mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Methanol/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1% TFA). Die Produktfraktionen wurden eingeengt, der Rückstand in Essigsäureethylester gelöst, einmal mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung und einmal mit gesättigter wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet, filtriert, eingeengt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1%) TFA). Die Produktfraktionen wurden eingeengt, der Rückstand in Essigsäureethylester gelöst, einmal mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung und einmal mit gesättigter wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Es wurden 20 mg (46% d. Th.) der Zielverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.89 min

MS (ESpos): m/z = 442 (M+H) ⁺

Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ [ppm] : 2.135 (15.36), 3.769 (9.28), 5.279 (6.27), 6.781 (0.90), 6.800 (2.37), 6.820 (2.88), 6.822 (3.07), 6.839 (0.90), 7.189 (0.38), 7.204 (2.05), 7.224 (3.58), 7.244 (2.37), 7.253 (0.45), 7.392 (0.64), 7.401 (0.51), 7.417 (16.00), 7.432 (0.45), 7.439 (0.58), 7.506 (1.86), 7.510 (1.92), 7.522 (1.86), 7.525 (1.79), 7.540 (0.45), 7.556 (0.90), 7.560 (0.83), 7.578 (1.54), 7.594 (0.77), 7.599 (0.77), 7.615 (0.38), 10.019 (2.88). Beispiel 10

N- {8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy] -2-m th H^

138 mg (1.04 mmol) Aluminiumtrichlorid wurden in 8.0 ml 1,2-Dichlorethan suspendiert, mit 198 mg (1.04 mmol) (3,4-Difluorphenyl)acetylchlorid versetzt und 20 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 200 mg (0.69 mmol) 8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2-methylimidazo[l,2-a]pyridin- 3-amin Beispiel 13A hinzugegeben und über Nacht unter Rückfluss gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde eingeengt, der Rückstand in Essigsäureethylester aufgenommen und auf Eiswasser gegossen. Die wässrige Phase wurde zweimal mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden einmal mit gesättigter, wässriger Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und das Filtrat eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Kieselgelchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol = 100/1). Die Produktfraktionen wurden vereinigt, eingeengt, in Essigsäureethylester gelöst und dreimal mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung gewaschen. Anschließend noch einmal mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet, filtriert, das Filtrat eingeengt und im Hochvakuum getrocknet. Es wurden 106 mg (35% d. Th.) der Zielverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.83 min

MS (ESpos): m/z = 444 (M+H) ⁺ Ή-NMR (400 MHz, DMSO-de) δ [ppm] : 2.143 (16.00), 3.792 (8.37), 5.282 (6.54), 6.787 (0.81), 6.806 (2.43), 6.822 (4.18), 6.827 (3.32), 6.843 (0.86), 7.195 (0.43), 7.205 (2.54), 7.225 (4.54), 7.245 (3.10), 7.255 (0.52), 7.383 (0.83), 7.404 (1.54), 7.410 (0.97), 7.425 (1.45), 7.431 (2.08), 7.445 (0.82), 7.453 (1.48), 7.459 (0.80), 7.474 (0.74), 7.479 (0.71), 7.544 (2.04), 7.547 (2.02), 7.559 (2.59), 7.562 (2.54), 7.578 (1.62), 7.595 (0.86), 7.599 (0.94), 7.616 (0.36), 9.983 (3.38).

Beispiel 11 N-{8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylim^

yl)acetamid

28.6 mg (200 μmol) (2-Oxopyrrolidin-l-yl)essigsäure wurden auf einer MTP (Mikrotiterplatte) vorgelegt. 76 mg (200 μιηοΐ) [0-(7-Azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium- hexafluorphosphat] wurden in 400 μΐ Ν,Ν-Dimethylformamid gelöst und zur Carbonsäure gegeben. Die MTP wurde 10 Minuten bei Raumtemperatur geschüttelt. Anschließend wurden 30.3 mg (100 μιηοΐ) 8- [(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridin-3 -amin in 400 μΐ N,N-Dimethylformamid gelöst und zur Reaktionslösung gegeben, gefolgt von 50 μΐ (455 μιηοΐ) 4-Methylmorpholin. Die Reaktionslösung wurde über Nacht bei Raumtemperatur geschüttelt, abfiltriert und per LC/MS getrennt. Es wurden 8.4 mg (18% d. Th., Reinheit 90%) der Zielverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 10): R _t = 0.69 min

MS (ESpos): m/z = 429 (M+H) ⁺

Die folgenden Beispiele wurden in Analogie zu Beispiel 11 hergestellt:

IUPAC-Name

Struktur

Beispiel

Ausbeute

Analytische Daten

(6% d. Th.)

LC-MS (Methode 10): R _t = 0.83 min; m/z = 402 [M+H] ⁺ .

(2E)-N-{8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l, 2-a]pyridin-3-yl}-3- (pyridin-4-yl)acrylamid

C H 3Q

18

C H ₃

(25% d. Th.)

LC-MS (Methode 10): R _t = 0.70 min; m/z = 435 [M+H] ⁺ .

N- {8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridi n-3-yl}-5-methyl-lH- pyrazol-3 -carboxamid

19

C H ₃

(42% d. Th.)

LC-MS (Methode 10): R _t = 0.74 min; m/z = 412 [M+H] ⁺ .

20 N- {8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,6-dimethylimidazo[l,2-a]pyridi n-3-yl}-N ² ,N ² - dimethylglycinamid

IUPAC-Name

Struktur

Beispiel

Ausbeute

Analytische Daten

(46% d. Th.)

LC-MS (Methode 10): R _t = 0.78 min; m/z = 388 [M+H] ⁺ .

Beispiel 31 rac-1 -{8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2-methylimidazo[l,2-a]pyridin-3 -yl}-3-[l -(3,4- difluorphenyl)ethyl]harnstoff

150 mg (0.37 mmol) Phenyl- {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2-methylimidazo[l,2-a]pyridin-3- yl}carbamat aus Beispiel 14A wurden in 5 ml THF gelöst und mit 1.19 ml Pyridin und 58 mg (0.37 mmol) rac-1 - (3,4-Difluorphenyl)ethanamin versetzt. Das Gemisch wurde 1 h in der Mikrowelle bei 100°C gerührt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch eingedampft und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient). Es wurden 97 mg (55% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 8): R _t = 0.76 min MS (ESpos): m/z = 473 (M+H) ⁺ Beispiel 32 l- {8-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2-methylimidazo[l,2-a]pyridin-3- yl} -3-[(2S)-hexan-2-yl]harnstoff

150 mg (0.37 mmol) Phenyl- {8-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2-methylimidazo[l,2-a]pyridin-3- yl}carbamat aus Beispiel 14A wurden in 5 ml THF gelöst und mit 1.19 ml Pyridin und 37 mg (0.37 mmol) (2S)- Hexan-2-amin versetzt. Das Gemisch wurde 1 h in der Mikrowelle bei 100°C gerührt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch eingedampft und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient). Es wurden 73 mg (48% d. Th.) der Titelverbindung erhalten.

LC-MS (Methode 2): R _t = 0.83 min

MS (ESpos): m/z = 417 (M+H)

B. Bewertung der pharmakologischen Wirksamkeit

Es werden die folgenden Abkürzungen verwendet:

ATP Adenosintriphosphat

Brij35 Polyoxyethylen(23)laurylether

BSA Rinderserumalbumin

DTT Dithiothreitol

TEA Triethanolamin

Die pharmakologische Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann in folgenden Assays gezeigt werden:

B-l. Vermessung von sGC Enzymaktivität mittels PPi Nachweis

Lösliche Guanylylcyclase (sGC) setzt unter Stimulation GTP zu cGMP und Pyrophosphat (PPi) um. PPi wird mit Hilfe des in WO 2008/061626 beschriebenen Verfahrens nachgewiesen. Das im Test entstehende Signal nimmt mit fortschreitender Umsetzung zu und dient als Maß für die sGC- Enzymaktivität. Mit Hilfe einer PPi Referenzkurve kann das Enzym in bekannter Weise charakterisiert werden, z.B. hinsichtlich Umsatzrate, Stimulierbarkeit oder Michaelis Konstante.

Durchführung des Tests

Zur Durchführung des Tests wurden 29 μΕ Enzymlösung (0-10 nM lösliche Guanylylcyclase (hergestellt nach Hönicka et al., Journal of Molecular Medicine 77(1999)14-23), in 50 mM TEA, 2 mM Magnesiumchlorid, 0.1% BSA (FraktionV), 0.005% Brij 35, pH 7.5) in die Mikroplatte vorgelegt und 1 μΕ der Stimulatorlösung (0-10 μΜ 3-Morpholinosydnonimine, SIN-1, Merck in DMSO) hinzugegeben. Es wurde 10 min bei RT inkubiert. Anschließend wurden 20 μΐ Detektionsmix (1,2 nM Firefly Luciferase {Photinus pyralis Luziferase, Promega), 29 μΜ Dehydro-Luziferin (hergestellt nach Bitler & McElroy, Arch. Biochem. Biophys. 72 (1957) 358), 122 μΜ Luziferin (Promega), 153 μΜ ATP (Sigma) und 0,4 mM DTT ( Sigma) in 50 mM TEA, 2 mM Magnesiumchlorid, 0.1% BSA (Fraktion V), 0.005% Brij 35, pH 7,5) zugegeben. Die Enzymreaktion wurde durch Zugabe von 20 μΐ Substratlösung (1.25 mM Guanosin-5'-triphosphat (Sigma) in 50 mM TEA, 2 mM Magnesiumchlorid, 0.1%> BSA (Fraktion V), 0.005%) Brij 35, pH 7.5) gestartet und kontinuierlich luminometrisch vermessen. B-2. Wirkung an rekombinanter Guanylatcyclase-Reporterzelllinie

Die zelluläre Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen wird an einer rekombinanten Guanylat- cyclase-Reporterzelllinie, wie in F. Wunder et al., Anal. Biochem. 339, 104-112 (2005) beschrieben, bestimmt. Repräsentative MEC-Werte (MEC = minimal effektive Konzentration) für die erfindungsgemäßen Verbindungen sind in der nachstehenden Tabelle wiedergegeben (zum Teil als Mittelwerte aus Einzelbestimmungen) :

Tabelle A:

Beispiel MEC [μΜ] Beispiel MEC [μΜ]

1 0.3 15 10.0

2 10.0 16 10.0

3 3.0 17 1.0

4 10.0 18 3.0

5 3.0 19 10.0

6 10 20 3.0

7 3.0 21 3.0

8 3.0 22 3.0

9 1.0 23 10.0

10 1.0 24 3.0

11 3.0 25 10.0

12 0.3 26 3.0

13 0.3 27 3.0

14 3.0 28 1.0 Beispiel MEC [μΜ] Beispiel MEC [μΜ]

29 3.0 31 3.0

30 3.0 32 10.0

B-3. Gefäßrelaxierende Wirkung in vitro

Kaninchen werden durch Nackenschlag betäubt und entblutet. Die Aorta wird entnommen, von anhaftendem Gewebe befreit, in 1.5 mm breite Ringe geteilt und einzeln unter einer Vorspannung in 5 ml- Organbäder mit 37°C warmer, Carbogen-begaster Krebs-Henseleit-Lösung folgender Zusammensetzung gebracht (jeweils mM): Natriumchlorid: 119; Kaliumchlorid: 4.8; Calciumchlorid-Dihydrat: 1; Magnesiumsulfat-Heptahydrat: 1.4; Kaliumdihydrogenphosphat: 1.2; Natriumhydrogencarbonat: 25; Glucose: 10. Die Kontraktionskraft wird mit Statham UC2 -Zellen erfasst, verstärkt und über A/D- Wandler (DAS-1802 HC, Keithley Instruments München) digitalisiert sowie parallel auf Linienschreiber registriert. Zur Erzeugung einer Kontraktion wird Phenylephrin dem Bad kumulativ in ansteigender Konzentration zugesetzt. Nach mehreren Kontrollzyklen wird die zu untersuchende Substanz in jedem weiteren Durchgang in jeweils steigender Dosierung zugesetzt und die Höhe der Kontraktion mit der Höhe der im letzten Vordurchgang erreichten Kontraktion verglichen. Daraus wird die Konzentration errechnet, die erforderlich ist, um die Höhe des Kontrollwertes um 50% zu reduzieren (IC ₅ o-Wert). Das Standardapplikationsvolumen beträgt 5 μΐ, der DMSO-Anteil in der Badlösung entspricht 0.1%>.

B-4. Blutdruckmessung an narkotisierten Ratten

Männliche Wistar-Ratten mit einem Körpergewicht von 300 - 350 g werden mit Thiopental (100 mg/kg i.p.) anästhesiert. Nach der Tracheotomie wird in die Femoralarterie ein Katheter zur Blutdruckmessung eingeführt. Die zu prüfenden Substanzen werden als Lösungen entweder oral mittels Schlundsonde oder über die Femoralvene intravenös verabreicht (Stasch et al. Br. J. Pharmacol. 2002; 135: 344-355).

B-5. Radiotelemetrische Blutdruckmessung an wachen, spontan hypertensiven Ratten

Für die im Folgenden beschriebene Blutdruckmessung an wachen Ratten wird ein im Handel erhältliches Telemetriesystem der Firma DATA SCIENCES INTERNATIONAL DSI, USA eingesetzt. Das System besteht aus 3 Hauptkomponenten:

Implantierbare Sender (Physiotel® Telemetrietransmitter) Empfänger (Physiotel® Receiver), die über einen Multiplexer (DSI Data Exchange Matrix ) mit einem Datenakquisitionscomputer verbunden sind.

Die Telemetrieanlage ermöglicht eine kontinuierliche Erfassung von Blutdruck Herzfrequenz und Körperbewegung an wachen Tieren in ihrem gewohnten Lebensraum. Tiermaterial

Die Untersuchungen werden an ausgewachsenen weiblichen spontan hypertensiven Ratten (SHR Okamoto) mit einem Körpergewicht von >200 g durchgeführt. SHR/NCrl von Okamoto Kyoto School of Medicine, 1963 wurden aus männlichen Wistar Kyoto Ratten mit stark erhöhtem Blutdruck und weiblichen mit leicht erhöhtem Blutdruck gekreuzt und in der Fl 3 an die U.S. National Institutes of Health abgegeben.

Die Versuchstiere werden nach Senderimplantation einzeln in Makroion - Käfigen Typ 3 gehalten. Sie haben freien Zugang zu Standardfutter und Wasser.

Der Tag - Nacht - Rhythmus im Versuchslabor wird per Raumbeleuchtung um 6:00 Uhr morgens und um 19:00 Uhr abends gewechselt. Senderimplantation

Die eingesetzten Telemetriesender TAI 1 PA - C40 werden den Versuchstieren mindestens 14 Tage vor dem ersten Versuchseinsatz unter aseptischen Bedingungen chirurgisch implantiert. Die so instrumentierten Tiere sind nach Abheilen der Wunde und Einwachsen des Implantats wiederholt einsetzbar. Zur Implantation werden die nüchternen Tiere mit Pentobabital (Nembutal, Sanofi: 50mg/kg i.p. ) narkotisiert und an der Bauchseite weiträumig rasiert und desinfiziert. Nach Eröffnung des Bauchraumes entlang der Linea alba wird der flüssigkeitsgefüllte Meßkatheter des Systems oberhalb der Bifurcation nach cranial in die Aorta descendens eingesetzt und mit Gewebekleber (VetBonD TM, 3M) befestigt. Das Sendergehäuse wird intraperitoneal an der Bauchwandmuskulatur fixiert und die Wunde wird schichtweise verschlossen.

Postoperativ wird zur Infektionsprophylaxe ein Antibiotikum verabreicht (Tardomyocel COMP Bayer lml/kg s.c.)

Substanzen und Lösungen

Wenn nicht anders beschrieben werden die zu untersuchenden Substanzen jeweils einer Gruppe von Tieren (n = 6) per Schlundsonde oral verabreicht. Entsprechend einem Applikationsvolumen von 5 ml/kg Körpergewicht werden die Testsubstanzen in geeigneten Lösungsmittelgemischen gelöst oder in 0.5% iger Tylose suspendiert.

Eine Lösungsmittel- behandelte Gruppe von Tieren wird als Kontrolle eingesetzt. Versuchsablauf Die vorhandene Telemetrie - Meßeinrichtung ist für 24 Tiere konfiguriert. Jeder Versuch wird unter einer Versuchsnummer registiert (VJahr Monat Tag).

Den in der Anlage lebenden instrumentierten Ratten ist jeweils eine eigene Empfangsantenne zugeordnet (1010 Receiver, DSI ).

Die implantierten Sender sind über einen eingebauten Magnetschalter von außen aktivierbar. Sie werden bei Versuchsvorlauf auf Sendung geschaltet. Die ausgestrahlten Signale können durch ein Datenakquisitionssystem (Dataquest TM A.R.T. for WINDOWS, DSI ) online erfasst und entsprechend aufgearbeitet werden. Die Ablage der Daten erfolgt jeweils in einem hierfür eröffneten Ordner der die Versuchsnummer trägt.

Im Standardablauf werden über je 10 Sekunden Dauer gemessen Systolischer Blutdruck (SBP) Diastolischer Blutdruck (DBP) Arterieller Mitteldruck (MAP) Herzfrequenz (HR) Aktivität (ACT) Die Messwerterfassung wird rechnergesteuert in 5 Minuten Abständen wiederholt. Die als Absolutwert erhobenen Quelldaten werden im Diagramm mit dem aktuell gemessenen Barometer druck (Ambient Pressure Reference Monitor; APR-1) korrigiert und in Einzeldaten abgelegt. Weitere technische Details sind der umfangreichen Dokumentation der Herstellerfirma (DSI) zu entnehmen.

Wenn nicht anders beschrieben erfolgt die Verabreichung der Prüfsubstanzen am Versuchstag um 9.00 Uhr. Im Anschluss an die Applikation werden die oben beschriebenen Parameter 24 Stunden gemessen.

Auswertung

Nach Versuchsende werden die erhobenen Einzeldaten mit der Analysis-Software (DATAQUEST TM A. R.T. TM ANALYSIS) sortiert. Als Leerwert werden hier 2 Stunden vor Applikation angenommen, so dass der selektierte Datensatz den Zeitraum von 7:00 Uhr am Versuchstag bis 9:00 Uhr am Folgetag umfasst.

Die Daten werden über eine voreinstellbare Zeit durch Mittelwertbestimmung geglättet (15 Minuten Average) und als Textdatei auf einen Datenträger übertragen. Die so vorsortierten und komprimierten Messwerte werden in Excel-Vorlagen übertragen und tabellarisch dargestellt. Die Ablage der erhobenen Daten erfolgt pro Versuchstag in einem eigenen Ordner, der die Versuchsnummer trägt. Ergebnisse und Versuchsprotokolle werden in Papierform nach Nummern sortiert in Ordnern abgelegt.

Literatur:

Klaus Witte, Kai Hu, Johanna Swiatek, Claudia Müssig, Georg Ertl and Björn Lemmer: Experimental heart failure in rats: effects on cardiovascular circadian rhythms and on myocardial ß-adrenergic signaling. Cardiovasc Res 47 (2): 203-405, 2000; Kozo Okamoto: Spontaneous hypertension in rats. Int Rev Exp Pathol 7: 227- 270, 1969; Maarten van den Buuse: Circadian Rhythms of Blood Pressure, Heart Rate, and Locomotor Activity in Spontaneously Hypertensive Rats as Measured With Radio- Telemetry. Physiology & Behavior 55(4): 783-787, 1994. B-6. Bestimmung pharmakokinetischer Kenngrößen nach intravenöser und oraler Gabe

Die pharmakokinetischen Parameter der erfindungsgemäßen Verbindungen werden in männlichen CD- 1 -Mäusen, männlichen Wistar-Ratten und weiblichen Beagle-Hunden bestimmt. Die intravenöse Gabe erfolgt bei Mäusen und Ratten mittels einer speziesspezifischen Plasma/DMSO-Formulierung und bei Hunden mittels einer Wasser/PEG400/Ethanol-Formulierung. Die orale Gabe der gelösten Substanz mittels Schlundsonde wird in allen Spezies basierend auf einer Wasser/PEG400/Ethanol-Formulierung durchgeführt. Den Ratten wird zur vereinfachten Blutabnahme vor der Substanzgabe ein Silikonkatheter in die rechte Vena jugularis externa gelegt. Die Operation erfolgt mindestens einen Tag vor dem Versuch unter Isofluran-Narkose und unter Gabe eines Analgetikums (Atropin/Rimadyl (3/1) 0.1 mL s.c). Die Blutabnahme (in der Regel mehr als 10 Zeitpunkte) erfolgt in einem Zeitfenster, welches terminale Zeitpunkte von mindestens 24 bis maximal 72 Stunden nach Substanzgabe beinhaltet. Das Blut wird bei der Entnahme in heparinisierte Röhrchen geleitet. So dann wird mittels Zentrifugation das Blutplasma gewonnen und gegebenenfalls bis zur weiteren Bearbeitung bei -20°C gelagert.

Den Proben der erfindungsgemäßen Verbindungen, Kalibrierproben und Qualifier wird ein interner Standard zugesetzt (dies kann auch eine chemisch nicht verwandte Substanz sein) und es folgt eine Proteinfällung mittels Acetonitril im Überschuss. Nach Zugabe einer Puffer-Lösung, die an die LC- Bedingungen angepasst ist, und folgendem Vortexen wird bei 1000 g zentrifugiert. Der Überstand wird mittels LC-MS/MS unter Verwendung von C18-reversed-phase-Säulen und variablen Eluenten- Gemischen vermessen. Die Quantifizierung der Substanzen erfolgt anhand der Peakhöhen oder -flächen aus extrahierten Ionenchromatogrammen spezifischer selected ion monitoring-Experimente.

Aus den ermittelten Plasmakonzentration-Zeit- Verläufen werden die pharmakokinetischen Kenngrößen wie AUC, Cmax, ti 2 (terminale Halbwertszeit), F (Bioverfügbarkeit), MRT (Mean Residence Time) und CL (Clearance) mittels eines validierten pharmakokinetischen Rechenprogramms berechnet.

Da die Substanzquantifizierung in Plasma durchgeführt wird, muss die Blut/Plasma-Verteilung der Substanz bestimmt werden, um die pharmakokinetischen Parameter entsprechend anpassen zu können. Dazu wird eine definierte Menge Substanz in heparinisiertem Vollblut der entsprechenden Spezies für 20 min im Taumelrollenmischer inkubiert. Nach Zentrifugation bei 1000g wird die Konzentration im Plasma gemessen (mittels LC-MS/MS; s.o.) und durch Quotientenbildung der CBiut/Cpi _aS ma-Wert ermittelt.

B-7. Metabolismus-Untersuchung

Zur Bestimmung des Metabolismus-Profils der erfindungsgemäßen Verbindungen werden diese mit rekombinanten humanen Cytochrom P450 (CYP) Enzymen, Lebermikrosomen oder mit primären frischen Hepatozyten verschiedener Tierspezies (z.B. Ratte, Hund) als auch humanen Ursprungs inkubiert, um Informationen über einen möglichst kompletten hepatischen Phase I- und Phase Ii- Metabolismus sowie über die am Metabolismus beteiligten Enzyme zu erhalten und zu vergleichen.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen wurden mit einer Konzentration von etwa 0.1 -10 μΜ inkubiert. Dazu wurden Stammlösungen der erfindungsgemäßen Verbindungen mit einer Konzentration von 0.01 - 1 mM in Acetonitril hergestellt, und dann mit einer 1 : 100 Verdünnung in den Inkubationsansatz pipettiert. Die Lebermikrosomen und rekombinanten Enzyme wurden in 50 mM Kaliumphosphatpuffer pH 7.4 mit und ohne NADPH-generierendem System, bestehend aus 1 mM NADP ⁺ , 10 mM Glucose-6- phosphat und 1 Unit Glucose-6-phosphat Dehydrogenase, bei 37°C inkubiert. Primäre Hepatozyten wurden in Suspension in Williams E Medium ebenfalls bei 37°C inkubiert. Nach einer Inkubationszeit von 0 - 4h wurden die Inkubationsansätze mit Acetonitril abgestoppt (Endkonzentration ca. 30%) und das Protein bei ca. 15000 x g abzentrifugiert. Die so abgestoppten Proben wurden entweder direkt analysiert oder bis zur Analyse bei -20°C gelagert.

Die Analyse erfolgt mittels Hochleistungsflüssigkeits-Chromatographie mit Ultraviolett- und massen- spektrometrischer Detektion (HPLC-UV-MS/MS). Dazu werden die Überstände der Inkubationsproben mit geeigneten C18-reversed-phase-Säulen und variablen Eluenten-Gemischen aus Acetonitril und 10 mM wässriger Ammoniumformiat-Lösung oder 0.05 % Ameisensäure chromatographiert. Die UV- Chromatogramme in Verbindung mit massenspektrometrischen Daten dienen zur Identifizierung, Strukturaufklärang und quantitativen Abschätzung der Metabolite, und der quantitativen metabolischen Abnahme der erfindungsgemäßen Verbindung in den Inkubationsansätzen.

B-8. Caco-2 Permeabilitäts-Test

Die Permeabilität einer Testsubstanz wurde mit Hilfe der Caco-2 Zelllinie, einem etablierten in vitro Modell für Permeabilitätsvorhersagen an der gastrointestinalen Barriere, bestimmt (Artursson, P. and Karlsson, J. (1991). Correlation between oral drug absorption in humans and apparent drug permeability coefficients in human intestinal epithelial (Caco-2) cells. Biochem. Biophys.175 (3), 880-885). Die Caco-2 Zellen (ACC No. 169, DSMZ, Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen, Braunschweig, Deutschland) wurden in 24-Well Platen mit Einsatz ausgesät und 14 bis 16 Tage kultiviert. Für die Permeabilitätsstudien wurde die Testsubstanz in DMSO gelöst und mit Transportpuffer (Hanks Buffered Salt Solution, Gibco/Invitrogen, mit 19.9 mM Glukose und 9.8 mM HEPES) auf die finale Testkonzentration verdünnt. Um die Permeabilität von apikal nach basolateral (P _app A-B) der Testsubstanz zu bestimmen, wurde die Lösung mit der Testsubstanz auf die apikale Seite des Caco-2 Zellmonolayers gegeben und Transportpuffer auf die basolaterale Seite. Um die Permeabilität von basolateral nach apikal (P _app B-A) der Testsubstanz zu bestimmen, wurde die Lösung mit der Testsubstanz auf die basolaterale Seite des Caco-2 Zellmonolayers gegeben und Transportpuffer auf die apikale Seite. Zu Beginn des Experiments wurden Proben aus dem jeweiligen Donor- Kompartiment genommen, um die Massenbilanz sicher zu stellen. Nach einer Inkubation von zwei Stunden bei 37° C wurden Proben aus beiden Kompartimenten genommen. Die Proben wurden mittels LC-MS/MS analysiert und die apparenten Permeabilitätskoeffizienten (P _apP ) berechnet. Die Permeabilität von Lucifer Yellow wurde für jeden Zellmonolayer bestimmt, um die Integrität der Zellschicht sicher zu stellen. Die Permeabilität von Atenolol (Marker für niedrige Permeabilität) und Sulfasalazin (Marker für aktive Exkretion) wurde in jedem Testlauf als Qualitätskontrolle mitbestimmt.

B-9. hERG Kaliumstrom Assay

Der sogenannte hERG (human ether-a-go-go related gene) Kaliumstrom trägt wesentlich zur Repolarisierung des humanen kardialen Aktionspotentials bei (Scheel et al., 2011). Eine Inhibition dieses Stroms durch Pharmaka kann in seltenen Fällen potentiell letale Herzrhythmusstörungen zur Folge haben, und wird deshalb frühzeitig während der Arzneimittelentwicklung untersucht.

Der hier verwendete funktionelle hERG Assay basiert auf einer recombinanten HEK293 Zell-Linie, die das KCNH2(HERG)-Gen stabil exprimiert (Zhou et al., 1998). Diese Zellen werden mittels der "whole-cell voltage-clamp" Technik (Hamill et al., 1981) in einem automatisierten System (Patchliner™; Nanion, München, D) untersucht, welches die Membranspannung kontrolliert und den hERG Kalium-Strom bei Zimmertemperatur misst. Die PatchControlHT™ Software (Nanion) steuert Patchliner System, Datenerfassung und Datenanalyse. Die Spannungskontrolle erfolgt durch 2 EPC-10 quadro Verstärker unter Kontrolle der PatchMasterPro™ Software (beide: HEKA Elektronik, Lambrecht, D). NPC-16 Chips mit mittlerem Widerstand (~2 ΜΩ; Nanion) dienen als planares Substrat für die Voltage-Clamp Experimente.

NPC-16 Chips werden mit intra- und extrazellulärer Lösung (vgl. Himmel, 2007) sowie mit Zellsuspension befüllt. Nach Bildung eines Giga-Ohm- Seals und Herstellen des Ganzzell-Modus (einschliesslich mehrerer automatisierter Qualitätskontrollschritte) wird die Zellmembran auf das Haltepotential -80 mV geklemmt. Das nachfolgende Spannungsklemm-Protokoll ändert die Kommandospannung auf +20 mV (Dauer 1000 ms), -120 mV (Dauer 500 ms), und zurück zum Haltepotential -80 mV; dies wird alle 12 s wiederholt. Nach einer initialen Stabilisierungsphase (ca 5-6 Minuten) wird Testsubstanzlösung in aufsteigenden Konzentrationen (z.B. 0.1, 1, und 10 μιηοΙ/L) zupipettiert (Exposition ca 5-6 Minuten pro Konzentration), gefolgt von mehreren Auswaschschritten.

Die Amplitude des einwärtsgerichteten "Tail" -Stroms, der durch eine Potentialänderung von +20 mV auf -120 mV erzeugt wird, dient zur Quantifizierung des hERG Kaliumstroms, und wird als Funktion der Zeit dargestellt (IgorPro™ Software). Die Stromamplitude am Ende verschiedener Zeitabschnitte (z.B. Stabilisierungsphase vor Testsubstanz, erste/zweite/dritte Konzentration Testsubstanz) dient zur Erstellung einer Konzentrations-Wirkungs-Kurve, aus der die halbmaximale Hemmkonzentration IC50 der Testsubstanz errechnet wird.

Hamill OP, Marty A, Neher E, Sakmann B, Sigworth FJ. Improved patch-clamp techniques for high- resolution current recording from cells and cell-free membrane patches. Pfluegers Arch 1981; 391 :85-100.

Himmel HM. Suitability of commonly used excipients for electrophysiological in-vitro safety pharmacology assessment of effects on hERG potassium current and on rabbit Purkinje fiber action potential. J Pharmacol Toxicol Methods 2007; 56: 145-158.

Scheel O, Himmel H, Rascher-Eggstein G, Knott T. Introduction of a modular automated voltage- clamp platform and its correlation with manual human ether-a-go-go related gene voltage- clamp data. Assay Drag Dev Technol 2011 ; 9:600-607.

Zhou ZF, Gong Q, Ye B, Fan Z, Makielski JC, Robertson GA, January CT. Properties of hERG

Channels stably expressed in HEK293 cells studied at physiological temperature. Biophys J

1998; 74:230-241.