La présente invention concerne des nouveaux analogues du résorcinol sulfide, du résorcinol sulfoxyde et du résorcinol sulfone correspondant à la formule générale (I) :

(i) dans laquelle : X = S, SO ou SO _2, et ; l'un des radicaux Ri et R ₂ représente un atome d'hydrogène et l'autre un radical :

* alkyle linéaire ou ramifié en Ci à Ci s éventuellement substitué par un ou plusieurs atome(s) d'halogène,

* alkényle linéaire ou ramifié en C ₂ à Ci s en particulier un groupe allyle, ou un groupe 3,3 diméthylallyle, ou un groupe géranyle ou un groupe farnésyle, éventuellement substitué par un ou plusieurs atome(s) d'halogène,

* un aralkyle, en particulier benzyle, éventuellement substitué par un ou plusieurs groupe(s) alkoxy en Ci à C ₆ , ou

* COR ₃ ou CONHR ₃ , mais non simultanément, où R ₃ représente un radical :

> alk) _' Je Uneaire ou ramifié en Ci à C ₁₈ éventuellement substitué par un ou plusieurs atome(s) d'halogène, s> dlkemle hrséajre vu ranπfie en C ₂ à C ₁₈ , éventuellement substitué par un ou plusieurs atome(s) d'halogène, ^ un aruikvie en particulier beo/> le, éventuellement substitue par un ou plusieurs groupe(s) alkoxy en Ci à C ₆ , s- un aralkényle éventuellement substitué par un ou plusieurs groupe(s) alkoxy en Ci à C ₆ et/ou groupe(s) OH, ou bien &> un radical an Ic, en particulier pherr>le ovcntudlcment substitue par un ou plusieurs group(e) alkoxy en Ci à C ₆ . Le terme « alkyle » représente des chaînes hydrocarbonées aliphatiques linéaires ou ramifiées saturées et comprenant le nombre de d'atomes de carbone spécifié.

Le terme «alkényle » représente des chaînes hydrocarbonées aliphatiques linéaires ou ramifiées insaturées et comprenant le nombre d'atomes de carbone spécifié par exemple un groupe allyle ou un groupe 3,3 diméthylallyle ou un groupe géranyle ou un groupe farnésyle.

Le terme « alkoxy » représente une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée comprenant le nombre d'atomes de carbone spécifié et un atome d'oxygène par exemple un groupe méthoxy, ou un groupe éthoxy, ou un groupe propoxy ou un groupe butoxy.

Le terme « aryle » représente tout cycle carboné aromatique monocyclique ou bicyclique, comme par exemple le phényl ou le naphtyle.

Le terme « aralkyle » désigne un aryle lié par un alkyle, par exemple un benzyle, éthylphényle, propylphényle. Le terme « aralkényl » désigne un aryle lié par un alkényle, par exemple un l'acrylate de phényle ou le (4-méthoxyphényl)acrylate ou le (3, A- diméthoxyphényl)acrylate.

Le terme « halogène » représente un fluor, chlore, brome ou iode.

Le terme « oléoyle » représente le radical univalent dérivé de l'acide oléique par la perte du groupe OH.

Le terme « linoléoyle » représente le radical univalent dérivé de l'acide linoléique par la perte du groupe OH.

Le terme « alpha-linolénoyle » représente le radical univalent dérivé de l'acide alpha- linolénique par la perte du groupe OH. Le terme « gamma-linolénoyle » représente le radical univalent dérivé de l'acide gamma- linolénique par la perte du groupe OH.

Le terme « coumaroyl » représente le 4-hydroxycinnamoyle.

Le terme « cafféoyle » représente le 3,4-dihydroxycinnamoyle.

Le terme « féruoyle » représente le 4-hydroxy-3-méthoxycinnamoyle. Le terme « sinapoyle » représente le 4-Hydroxy-3,5-diméthoxycinnamoyle. Parmi les composés de formule générale (I) faisant partie de la présente invention, une classe de composés particulièrement appréciée correspond aux composés de formule générale (I) dans laquelle X=S. De la même façon, la présente invention concerne particulièrement les composés de formule générale (I) dans laquelle X=S et R ₂ =H.

De façon préférée, les composés selon l'invention correspondent aux composés de formule (I) dans laquelle X=S, R ₂ = H et Rl est sélectionné parmi le groupe consistant en : un alkyle linéaire ou ramifié en Ci à Ci s ou un alkényle linéaire ou ramifié en C ₂ à Ci ₈ ou COR ₃ et CONHR ₃ . Selon un mode de réalisation de la présente invention, les composés de formule générale (I) sont ceux pour lesquels Ri représente :

- un alkyle linéaire ou ramifié en Ci à Cs et en particulier en C4 à Cs; ou

- un alkényle linéaire ou ramifié en C ₂ à Ci s choisi parmi un groupe allyle ou un groupe 3,3 diméthylallyle ou un groupe géranyle ou un groupe farnésyle; ou - un benzyle.

Selon l'invention, une classe de composés particulièrement appréciée de formule générale (I) correspond aux composés pour lesquels R ₃ représente :

- un alkyle linéaire ou ramifié en C ₇ à Ci 5 et en particulier en Cn à Ci 5 ; ou

- un alkényle linéaire ou ramifié en C ₁₀ à Ci s ; ou . un benzyle; ou

- un aralkényle choisi parmi l'acrylate de phényle ou le (4-méthoxyphényl)acrylate ou le (3, 4-diméthoxyphényl)acrylate; ou

- un phényle.

Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, les composés de formule générale (I) sont ceux dans lesquels COR ₃ représente /

- un oléoyle ou un linoléoyle ou un alpha- linolénoy le ou un gamma-linolénoyle.

Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, les composés de formule (I) sont ceux pour lesquels COR3 représente :

- un cinnamoyle substitué par un ou plusieurs groupe(s) alkoxy en Ci à C ₆ et/ou groupe(s) OH choisi parmi le coumaroyle ou le 4-methoxycinnamoyle ou le 3,4- diméthoxycinnamoyle ou le cafféoyle ou le féruoyle ou le sinapoyle. Selon un mode de réalisation de l'invention les composés de formule généraleent être choisis parmi les composés suivants:

- 4-(4-hydroxy-2-((2E,6E)-3,6,l l-triméthyldodéca-2,6,10- trienyloxy)phénylthio)benzène- 1 ,3-diol,

4-(4-hydroxy-2-(3-méthylbut-2-enyloxy)phénylthio)benzè ne- 1 ,3-diol, (E)-4-(2-(3,7-diméthylocta-2,6-diényloxy)-4-hydroxyphényl thio)benzène- 1,3-diol, 4-(2-butoxy-4-hydroxyphénylthio)benzène- 1 ,3-diol, - 4-(4-butoxy-2-hydroxyphénylthio)benzène-l,3-diol,

4-(4-hydroxy-2-(octyloxy)phénylthio)benzène- 1 ,3-diol, 4-(2-hydroxy-4-(octyloxy)phénylthio)benzène- 1 ,3-diol, 4-(2-(benzyloxy)-4-hydroxyphénylthio)benzène- 1 ,3-diol, 4-(4-(benzyloxy)-2-hydroxyphénylthio)benzène- 1 ,3-diol, - 4-(4-hydroxy-2-(4-méthoxybenzyloxy)phénylthio)benzène- 1 ,3-diol,

- 4-(2-(décyloxy)-4-hydroxyphénylthio)benzène- 1 ,3-diol, 4-(2-(hexadécyloxy)-4-hydroxyphénylthio)benzène- 1 ,3-diol, 2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl dodécanoate, 2-(2,4-dihydroxyphenylthio)-5-hydroxyphenyl palmitate, - 2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl octanoate,

4-(2,4-dihydroxyphénylthio)-3-hydroxyphényl octanoate, 2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl 3-phénylpropanoate,

- 4-(2,4-dihydroxyphénylthio)-3-hydroxyphényl 3-phénylpropanoate, 2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl 3-méthylbutanoate, - 4-(2,4-dihydroxyphénylthio)-3-hydroxyphényl 3-méthylbutanoate,

(9Z, 12Z)-2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl octadeca-9, 12- dienoate

(£)-2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl 3-(4- méthoxyphényl)acrylate, - (E)-2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl 3 -(3, 4- diméthoxyphényl)acrylate,

2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl octylcarbamate, - 2-(2,4-dihydroxyphénylsulfmyl)-5-hydroxyphényl dodécanoate,

(9Z, 12Z)-2-(2,4-dihydroxyphénylsulfinyl)-5-hydroxyphényl octadéca-9, 12- diénoate

4-(2-(décyloxy)-4-hydroxyphénylsulfinyl)benzène- 1 ,3-diol, 4-(2-(décyloxy)-4-hydroxyphénylsulfonyl)benzène- 1 ,3-diol, L'invention concerne également l'utilisation cosmétique des composés de formule (V), qui comprennent, en plus des nouveaux analogues de formule (I), le résorcinol sulfide, le résorcinol sulfoxyde et le résorcinol sulfone, et en particulier leur utilisation pour la dépigmentation de la peau, pour la mise en œuvre d'une méthode de traitement cosmétique du vieillissement cutané. Formule générale (V) :

(I') dans laquelle les radicaux X, Ri et R ₂ ont des significations identiques à celles données à propos de la formule (I), mais où Ri et R ₂ peuvent aussi représenter simultanément un atome d'hydrogène.

La présente invention concerne l'utilisation cosmétique des composés de formule générale (F) ou de formule (I) en tant que principe actif antioxydant ou en tant que principe actif dépigmentant. La présente invention a également pour objet l'utilisation des composés de formule générale (I) en tant que médicament et en particulier en tant que principe actif antibactérien.

L'invention vise également les compositions pharmaceutiques ou cosmétiques comprenant au moins un des composés de formule (I) ou de formule (V) en association avec au moins un excipient pharmaceutiquement ou cosmétiquement acceptable.

Dans la présente invention, on entend désigner par « pharmaceutiquement ou cosmétiquement acceptable » ce qui est utile dans la préparation d'une composition pharmaceutique ou cosmétique, qui est généralement sûr, non toxique et ni bio logiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation thérapeutique ou cosmétique, notamment par application topique.

L'objet de l'invention concerne une composition cosmétique caractérisée en ce que la quantité de composé de formule (I) ou de formule (T) varie entre 0,01% et 10% et de préférence de 0,1% à 5% en poids par rapport au poids total de la composition.

La présente invention concerne un procédé de blanchiment et/ou d'éclaircissement de la peau humaine et/ou des poils et/ou des cheveux comprenant l'application sur la peau et/ou les poils et/ou les cheveux d'une composition cosmétique contenant au moins un composé de formule (I) ou de formule (T) . La présente invention concerne une méthode de traitement et/ou de prévention cosmétique du vieillissement de la peau comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique contenant au moins un composé de formule (I) ou de formule

(T)

L'objet de l'invention s'étend également au procédé de synthèse des nouveaux composés de formule (I).

Selon une autre caractéristique de la présente invention, celle-ci concerne également un procédé de préparation d'un composé de formule générale (I) caractérisé en ce que l'on fait réagir le 4,4'-thiodibenzène-l,3-diol ou bien le 4,4'-sulfinylbis-l,3- benzènediol avec un halogénure de formule II :

HaI - Ri (II)

dans laquelle :

HaI représente un atome d'halogène, et Ri a la même signification que celle donnée précédemment à propos de la formule (I) à l'exception d'un atome d'hydrogène.

Selon une autre caractéristique de la présente invention, celle-ci concerne également un procédé de préparation d'un dérivé de résorcinol de formule (I) dans laquelle X représente SO ou SO ₂ , caractérisé en ce que l'on oxyde un composé de formule (I) dans laquelle X représente un atome de soufre, en particulier à l'aide d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène.

La présente invention sera mieux comprise en regard des exemples donnés ci- après à simple titre illustratif. I. Synthèse des composés de l'invention.

1) Synthèse des analogues du résorcinol sulfide.

- Exemple 1 (résorcinol sulfide) :

- 4,4'-thiodibenzene-l,3-diol

RMN ¹ R (400 MHz, DMSO-d6) : δ : 6,19 (dd, 2H) ; 6,34 (d, 2H) ; 6,87 (d, 2H) ; 9,41 (s large, 2H); 9,50 (s large, 2H).

RMN ¹³ C (100 MHz, DMSO d6) : δ :102,58; 107,52; 111,46; 133,90; 157,04; 158,37.

MS (ESI-) : 249,1 [M-H] ^"

A) Synthèse des éthers : Synthèse des éthers par couplage du résorcinol sulfide avec un halogénure d'alkyle

A une suspension de 4,4'-thiodibenzene-l,3-diol (résorcinol sulfide, 3g,

12 mmol, 4 éq.) et de carbonate de potassium (497 mg, 3,6 mmol, 1,2 éq.) dans 20 ml de DMF (=diméthylformamide) anhydre et sous azote, sont ajoutés 856 mg de bromure de farnésyle (3 mmol, 1 éq.) puis le mélange est agité à 80 ⁰ C pendant 6 heures. La réaction est suivie par CCM (=Chromatographie sur couche mince).

Après retour à température ambiante, le solvant est évaporé puis le résidu extrait avec un mélange Acétate d'éthyle/eau. La phase organique est lavée deux fois par de l'eau puis par une solution saturée en NaCl. Après séchage sur sulfate de magnésium, un solide est obtenu après évaporation du solvant. Le solide est lavé au DCM (=dichlorométhane) puis collecté pour fournir 2g de résorcinol sulfide de départ n'ayant pas réagi.

Le filtrat (DCM) est alors évaporé pour conduire à une huile purifiée sur silice par le mélange heptane/Acétate d'éthyle (95/5 à 50/50) ou par HPLC préparative. Le produit obtenu sous forme d'une huile incolore est séché sous vide une nuit. 730 mg sont alors obtenus avec un rendement de 55%.

La structure est déterminée par analyses RMN proton, carbone, HMBC, HMQC et NOESY. -Exemple 2 :

-4-(4-hydroxy-2-((2E,6E)-3,6,l l-triméthyldodéca-2,6,10- triényloxy)phénylthio)benzène

-1,3-diol

RMN ¹ U (500 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 1,58 (s, 3H) ; 1,60 (s, 3H) ; 1,66 (s, 3H) ; 1,73 (s, 3H) ; 1,96 (m, 2H) ; 2,04 (m, 2H) ; 2,09 (m, 2H) ; 2,14 (m, 2H) ; 4,56 (d, j = 6,4 Hz, 2H) ; 5,01 (s, IH, OH para S) ; 5,06 (s, IH, OH para S) ; 5,07 (m, IH) ; 5,11 (m, IH) ; 5,51 (t, IH) ; 6,29 (d, j = 8,5-2,4 Hz, IH) ; 6,32 (d, j = 8,2-2,7 Hz, IH) ; 6,38 (d, j = 2,4 Hz, IH) ; 6,42 (d, j = 2,7 Hz, IH) ; 7,08 (d, j = 8,5 Hz, IH) ; 7,33 (s, IH, OH ortho S) ; 7,38 (d, j = 8,5 Hz, IH).

RMN ¹³ C (125 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 16,04; 16,75; 17,69; 25,70; 26,20; 26,70; 39,54; 39,66; 65,99; 100,68; 102,31; 108,18; 108,33; 110,79; 115,32; 118,49; 123,62; 124,34; 131,38; 133,99; 135,50; 137,54; 142,24; 156,88; 158,09; 158,48; 158,73.

MS (APCI) : 455,2 [M+H] ⁺ Rf (1/1; Heptane/EtOAc) : 0,75

-Exemple 3:

- 4-(4-hydroxy-2-(3-méthylbut-2-enyloxy)phénylthio)benzène- 1 ,3-diol

A partir du l-Bromo-3-methylbut-2-ene (=halogénure d'alkyle)

H

RMN ¹ H (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 1,76 (s, 3H) ; 1,82 (s, 3H) ; 4,56 (d, 2H) ; 5,07 (m, 2H, 2xOH para S) ; 5,53 (t, IH) ; 6,30 - 6,45 (m, 4H) ; 7,09 (d, IH) ; 7,32 (s, IH) ; 7,40 (d, IH) .

MS (APCI+) : 319.0 [M+H] ⁺

- Exemple 4:

- (E)-4-(2-(3,7-diméthylocta-2,6-diényloxy)-4-hydroxyphényl thio)benzène-l,3-diol A partir du chlorure de géranyle

RMN ¹ R (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 1,62 (s, 3H) ; 1,68 (s, 3H) ; 1,75 (s, 3H) ; 2,13 (m, 2H) ; 4,59 (d, 2H) ; 4 ,80 (s, IH) ; 4 ,85 (s, IH) ; 5,11 (s, IH) ; 5,53 (t, IH) ; 6,30 - 6,45 (m, 4H) ; 7,09 (d, IH) ; 7,32 (s, IH) ; 7,41 (d, IH) .

MS (APCI+) : 386,9 [M+H] ⁺

- Exemple 5: - 4-(2-butoxy-4-hydroxyphénylthio)benzène-l,3-diol

A partir du 1-bromo -butane. Produit majoritaire (590 mg)

RMN ¹ R (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 1,01 (t, 3H) ; 1,53 (m, 2H) ; 1,88 (m, 2H) ; 4,02 (t, 2H) ; 4,78 (s large, 2H, 2 OH para S) ; 6,32 (m, 2H) ; 6,36 (s, IH) ; 6,45 (s, IH) ; 7,08 (d, IH) ; 7,29 (s, IH, OH ortho S) ; 7,40 (d, IH) .

MS (APCI+) : 307,0 [M+H] ⁺

- Exemple 6:

- 4-(4-butoxy-2-hydroxyphénylthio)benzène- 1 ,3-diol

A partir du 1-bromo -butane. Produit minoritaire (18 mg)

RMN ¹ U (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 1,02 (t, 3H) ; 1,44 (m, 2H) ; 1,72 (m, 2H) ; 3,90 (t, 2H) ; 6,34 (d, IH) ; 6,41 (d, IH) ; 6,43 (s, IH) ; 6,49 (s, IH) ; 7,25 (m, 3H) .

MS (APCI+) : 307,1 [M+H] ⁺

- Exemple 7:

- 4-(4-hydroxy-2-(octyloxy)phénylthio)benzène-l ,3-diol A partir du 1-bromo-octane. Produit majoritaire (1,3 g)

RMN ¹ R (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 0,91 (t, 3H) ; 1,30 (m, 8H) ; 1,47 (m, 2H) ; 1,88 (m, 2H) ; 3,99 (t, 2H) ; 4,90 (s large, 2H) ; 6,30 (d, IH) ; 6,35 (d, IH) ; 6,36 (s, IH) ; 6,45 (s, IH) ; 7,07 (d, IH) ; 7,32 (s large, IH) ; 7,41 (d, IH) .

MS (APCI+) : 363,2 [M+H]' - Exemple 8:

- 4-(2-hydroxy-4-(octyloxy)phénylthio)benzène-l ,3-diol A partir du 1-bromo-octane. Produit minoritaire (100 mg)

RMN ¹ R (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 0,87 (t, 3H) ; 1,27 (m, 8H) ; 1,41 (m, 2H) ; 1,72 (m, 2H) ; 3,90 (t, 2H) ; 6,34 (d, IH) ; 6,41 (d, IH) ; 6,44 (s, IH) ; 6,48 (s, IH) ; 7,25 (m, 3H) MS (APCI+) : 363,1 [M+H] ⁺

-Exemple 9:

- 4-(2-(benzyloxy)-4-hydroxyphénylthio)benzène- 1 ,3-diol

A partir du bromure de benzyle. Produit majoritaire (600 mg)

RMN ¹ U (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 4,80 (m large, 2H) ; 5,14 (s, 2H) ; 6,34 (m, 2H) ; 6,44 (s, 2H) ; 7,02 (d, IH) ; 7,08 (s, IH) ; 7,34 - 7,41 (m, 6H) .

MS (APCI+) : 341,1 [M+H] ⁺ - Exemple 10:

- 4-(4-(benzyloxy)-2-hydroxyphénylthio)benzène- 1 ,3-diol A partir du bromure de benzyle. Produit minoritaire (28 mg)

RMN ¹ U (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 5,00 (s, 2H) ; 6,34 - 6,57 (m, 4H) ; 7,28 - 7,39 (m, 7H) .

MS (APCI+) : 341,1 [M+H] ⁺

- Exemple 11 :

- 4-(4-hydroxy-2-(4-méthoxybenzyloxy)phénylthio)benzène- 1 ,3-diol

A partir du bromure de 4-methoxybenzyle. Produit majoritaire (600 mg)

RMN ¹ H (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 3,82 (s, 3H) ; 5,04 (s, 2H) ; 5,24 (m large, 2H) ; 6,34 (m, 2H) ; 6,44 (m, 2H) ; 6,92 (d, 2H) ; 7,03 (d, IH) ; 7,14 (s large, IH) ; 7,37 (m, 3H) . MS (APCI+) : 371,0 [M+H] ⁺ - Exemple 12:

- 4-(2-(décyloxy)-4-hydroxyphénylthio)benzène- 1 ,3-diol

Mode opératoire de l'exemple 2 mais avec 2 équivalents de résorcinol sulfide, 1 équivalent de 1-Iododécane 16 heures à température ambiante.

Le produit est obtenu sous la forme d'un solide blanc après purification avec un rendement de 83%.

RMN ¹ U (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ: 0,91 (t, 3H) ; 1,25 (m, 12H) ; 1,47 (m, 2H) ; 1,88 (m, 2H) ; 3,99 (t, 2H) ; 4,90 (s large, 2H) ; 6,30 (d, IH) ; 6,35 (d, IH) ; 6,36 (s, IH) ; 6,45 (s, IH) ; 7,07 (d, IH) ; 7,32 (s large, IH) ; 7,41 (d, IH) .

RMN ¹³ C (100 MHz, DMSO) : δ :13,89; 22,04; 25,39; 28,56; 28,65; 28,70; 28,89; 28,94; 31,24; 67,76; 100,18; 102,66; 107,47; 107,62; 107,98; 113,65; 130,42; 135,21; 156,83; 157,34; 158,20; 158,81MS (APCI+) : 391,1 [M+H] ⁺

- Exemple 13:

- 4-(2-(hexadécyloxy)-4-hydroxyphénylthio)benzène- 1 ,3-diol Même synthèse que SP02-131 à partir du 1-Iodo-hexadécane

Produit obtenu sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 84%.

RMN ¹ R (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 0,88 (t, 3H) ; 1,2 (m, 24H) ; 1,47 (m, 2H) ; 1,84 (m, 2H) ; 3,92 (t, 2H) ; 5,31 (s large, 2H) ; 6,27 (dd, IH) ; 6,33 (s, IH) ; 6,36 (d, IH) ; 6,45 (s, IH) ; 7,05 (d, IH) ; 7,38 (s large, IH) ; 7,41 (d, IH) . RMN ¹³ C (100 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 14,11; 22,68; 25,95; 28,89; 29,35; 29,56; 29,61; 29,66; 29,70; 31,91; 69,22; 100,39; 102,29; 108,19; 108,54; 110,89; 115,01; 133,93; 137,49; 156,88; 158,19; 158,40; 158,44. MS (ESI-) : 473,2 [M-H]

B) Synthèse des esters a) Voie 1 : Couplage à partir du résorcinol sulfide

A une solution de 4,4'-thiodibenzène-l,3-diol (résorcinol sulfide, Ig, 4 mmol, 4 éq.) et de triéthylamine (177 μl , 1,2 mmol, 1,2 éq.) dans 20 ml de THF (tétrahydrofuranne) anhydre et sous azote, sont ajoutés goutte à goutte 219 mg de chlorure de lauroyle (1 mmol, 1 éq.) puis le mélange est agité à température ambiante pendant 1 heure. La réaction est suivie par CCM.

Après retour à température ambiante, le solvant est évaporé puis le résidu extrait avec un mélange Acétate d'éthyle/eau. La phase organique est lavée deux fois par de l'eau puis par une solution saturée en NaCl. Après séchage sur sulfate de magnésium, un solide est obtenu après évaporation du solvant. Le solide est lavé au DCM puis collecté pour fournir 510 mg de résorcinol sulfide de départ n'ayant pas réagi.

Le filtrat (DCM) est alors évaporé pour conduire à une huile purifiée sur silice par le mélange cyclohexane/acétate d'éthyle (9/1) ou par HPLC (chromatographie en phase liquide à haute performance) préparative. Le produit obtenu sous forme d'une huile incolore est séché sous vide une nuit. Le produit se solidifie à froid. 260 mg sont alors obtenus sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 60%.

- Exemple 14 :

- 2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl dodécanoate

RMN ¹ R (500 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 0,86 (t, J = 7 Hz, 3H) ; 1,32 (m, 17H) ; 1,79 (q, J = 7,6 Hz, 2H) ; 2,63 (t, J = 7,5 Hz, 2H) ; 5,30 (s, IH) ; 5,35 (s, IH) ; 6,38 (dd, J = 8,4 et 2,6 Hz, IH) ; 6,45 (d, J = 2,7 Hz, IH) ; 6,48 (dd, J = 8,5 et 2,7 Hz, IH) ; 6,50 (d, J = 2,4 Hz, IH) ; 6,73 (d, J = 8,5 Hz, IH) ; 6,76 (s, IH) ; 7,35 (d, j = 8,5 Hz, IH).

RMN ¹³ C (125 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 14,12; 22,67; 24,83; 29,13; 29,22; 29,32; 29,44; 29,59; 31,89; 34,24; 103,01; 107,84; 108,72; 110,12; 114,67; 120,06; 130,45; 137,96; 148,93; 155,48; 158,48; 159,03; 172,98. MS (APCI) : 433,1 [M+H] ⁺ Rf (7/3 ; Heptane/EtO Ac) : 0,58

-Exemple 15:

- 2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl octanoate

A partir du chlorure d'octanoyle

RMN ¹ U (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 0,82 (t, 3H) ; 1,29 (m, 8H) ; 1,63 (m, 2H) ; 2,35 (t, 2H) ; 6,41 (d, IH) ; 6,49 (s, IH) ; 6,56 (s, IH) ; 6,57 (d, IH) ; 6,81 (d, IH) ; 7,39 (d, IH).

MS (APCI+) : 377,1 [M+H] ⁺

- Exemple 16: - 4-(2,4-dihydroxyphénylthio)-3-hydroxyphényl octanoate A partir du chlorure d'octanoyle

RMN ¹ R (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 0,88 (t, 3H) ; 1,33 (m, 8H) ; 1,72 (m, 2H) ; 2,53 (t, 2H) ; 6,36 (d, IH) ; 6,41 (s, IH) ; 6,58 (d, IH) ; 6,71 (s, IH) ; 7,31 (m, 2H). MS (APCI+) : 377,1 [M+H] ⁺

- Exemple 17:

- 2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl 3-phénylpropanoate A partir du chlorure d'hydro-cinnamoyle

RMN ¹ H (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 2,98 (t syst AB, 2H) ; 3,13 (t syst AB, 2H) ; 5,40 (s large, 2H) ; 6,41 (d, IH) ; 6,46 (s, IH) ; 6,48 (s, IH) ; 6,54 (d, IH) ; 6,79 (d, IH) ; 7,22 - 7,38 (m, 6H).

MS (APCI+) : 383,1 [M+H] ⁺

- Exemple 18:

- 4-(2,4-dihydroxyphénylthio)-3-hydroxyphényl 3-phénylpropanoate A partir du chlorure d'hydro-cinnamoyle

RMN ¹ U (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 2,86 (t syst AB, 2H) ; 3,04 (t syst AB, 2H) ; 6,36 (d, IH) ; 6,42 (s, IH) ; 6,50 (d, IH) ; 6,61 (s, IH) ; 7,22 - 7,38 (m, 7H). MS (APCI+) : 383,1 [M+H] ⁺

- Exemple 19:

- 2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl 3-méthylbutanoate A partir du chlorure d'isovaléroyle

RMN ¹ H (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 1,10 (d, 6H) ; 2,31 (m, IH) ; 2,53 (d, 2H) ; 4,79 (s large, IH) ; 4,87 (s large, IH) ; 6,42 (d, IH) ; 6,49 (s, IH) ; 6,56 (s, IH) ; 6,58 (d, IH) ; 6,76 (s, IH) ; 6,82 (d, IH) ; 7,40 (d, IH). MS (APCI+) : 335,0 [M+H] ⁺

- Exemple 20:

- 4-(2,4-dihydroxyphénylthio)-3-hydroxyphényl 3-méthylbutanoate A partir du chlorure d'isovaléroyle

RMN ¹ R (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 1,03 (d, 6H) ; 2,22 (m, IH) ; 2,40 (d, 2H) ; 4,75 (s large, 2H) ; 6,38 (d, IH) ; 6,46 (s, IH) ; 6,57 (d, IH) ; 6,69 (s, IH) ; 7,30 (m, 3H). MS (APCI+) : 335,1 [M+H] ⁺

- Exemple 21:

- (9Z, 12Z)-2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl octadeca-9, 12-dienoate A partir du chlorure de linoléoyle

RMN ¹ H (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 0,88 (t, 3H) ; 1,32 (m, 14H) ; 1,80 (m, 2H) ; 2,04 (m,

4H) ; 2,63 (t, 2H) ; 2,79 (t, 2H) ; 5,35 (m, 4H) ; 6,38 (d, IH) ; 6,45 (s, IH) ; 6,51 (m,

2H) ; 6,73 (d, IH) ; 7,35 (d, IH) .

MS (ESI) : 513,2 [M+H] ⁺

Rf (1/1; Heptane/EtOAc) : 0,75

b) Voie 2 : Couplage via Carbodiimide

A une solution de N-(3-Diméthylaminopropyl)-N'-éthylcarbodiimide hydrochloride (960 mg, 5 mmol) et de 4-DMAP (4-diméthylaminopyridine) (0,5 mmol) dans 20 ml de DMF anhydre sous N2 sont ajoutés 620 mg d'acide A-

Méthoxycinnamique (3,5 mmol) puis le mélange est agité 15 minutes. 3,5g de 4,4'- thiodibenzène-l,3-diol (résorcinol sulfide, 14 mmol, 4 éq.) sont ajoutés puis le mélange est agité à température ambiante pendant 4 jours.

Le solvant est évaporé puis le résidu purifié sur silice CHCl ₃ /MeOH (95/5) pour fournir 320 mg de produit pur sous la forme d'un solide blanc après évaporation et séchage à l'étuve à vide.

Rendement : 22% - Exemple 22 :

- (£)-2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5 -hydroxyphényl 3 -(4-méthoxyphényl)acrylate

RMN ¹ R (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 3,86 (s, 3H) ; 5,00 (s large, IH) ; 5,07 (s large, IH) ; 6,40 (dd, IH) ; 6,48 (d, IH) ; 6,60 (m, 2H) ; 6,64 (d, IH) ; 6,85 (d, IH) ; 6,95 (d, 2H) ; 7,40 (d, IH); 7,58 (d, 2H) ; 7,91 (d, IH). MS (APCI+) : 411,0 [M+H] ⁺ Rf (1/1; Heptane/EtOAc) : 0,14

- Exemple 23:

- (E)-2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5 -hydroxyphényl 3-(3,4-diméthoxyphényl)acrylate A partir de l'acide 3,4-Diméthoxycinnamique

RMN ¹ U (400 MHz, DMSO-d6) : δ : 3,82 (s, 3H) ; 3,84 (s, 3H); 6,22 (d, IH) ; 6,37 (d, IH) ; 6,61 (s, IH) ; 6,64 (d, IH) ; 6,77 (d, IH) ; 6,92 (m, 2H) ; 7,01 (d, IH) ; 7,31 (d, IH); 7,43 (s, IH) ; 7,72 (d, IH) ; 9,58 (m, 2H) ; 9,78 (m, IH). MS (ESI+) : 441,0 [M+H] ⁺ Rf (95/5; DCM/MeOH) : 0,66 C. Synthèse des carbamates

A une solution de 4,4'-thiodibenzène-l,3-diol (résorcinol sulfide, 5g, 20 mmol, 4 éq.) dans 40 ml de THF anhydre et sous azote, sont ajoutés goutte à goutte 0,88 ml d'octyl isocyanate (5 mmol, 1 éq.) puis le mélange est agité 9 heures au reflux. La réaction est suivie par CCM.

Après retour à température ambiante, le solvant est évaporé puis le résidu extrait avec un mélange Acétate d'éthyle/eau. La phase organique est lavée deux fois par de l'eau puis par une solution saturée en NaCl. Après séchage sur sulfate de magnésium, un solide est obtenu après évaporation du solvant. Le solide est lavé au DCM puis collecté pour fournir du résorcinol sulfide de départ n'ayant pas réagi.

Le filtrat (DCM) est alors évaporé pour conduire à une huile purifiée sur silice par le mélange cyclohéxane/acétate d'éthyle ou HPLC préparative. Le produit obtenu sous forme d'une huile incolore est séché sous vide une nuit. 540 mg sont alors obtenus sous la forme d'une huile incolore avec un rendement de 27%.

- Exemple 24 :

- 2-(2,4-dihydroxyphénylthio)-5-hydroxyphényl octylcarbamate

RMN ¹ R (400 MHz, CDCl ₃ ) : δ : 0,86 (t, 3H) ; 1,26 (m, 8H) ; 1,35 (m, 2H) ; 1,59 (m,

2H) ; 3,32 (m, 2H) ; 5,30 (t, IH) ; 5,93 (s large, IH) ; 6,23 (s large, IH) ; 6,35 (m, 2H) ;

6,41 (s, IH) ; 6,52 (s, IH) ; 6,63 (d, IH) ; 7,32 (s large, IH) ; 7,35 (d, IH) .

MS (ESI+) : 406,1 [M+H] ⁺ 2) Synthèse des analogues du résorcinol sulfoxyde

- Exemple 25 (résorcinol sulfoxyde) :

- 4,4'-sulfinyldibenzene-l,3-diol

RMN ¹ U (400 MHz, DMSO-d6) : δ : 6,32 (m, 4H) ; 7,10 (d, 2H) ; 9,82 (s large, 2H); 10,13 (s large, 2H).

MS (APCI) : 267,0 [M+H] ⁺

A) Synthèse des esters

Une suspension de 4,4'-sulfïnylbis-l,3-benzenediol (résorcinol sulfoxyde, 2,66g, 10 mmol, 4 éq.) dans 100 ml de THF anhydre est solubilisée à chaud et sous azote puis sont ajoutés après 5 minutes à température ambiante, 420 μL de triéthylamine (12 mmol, 1,2 eq). Une précipitation rapide est observée puis 547 mg de chlorure de lauroyle (2,5 mmol, 1 eq) sont ajoutés goutte à goutte. Le mélange est agité pendant 2 heures à température ambiante. La réaction est suivie par CCM.

Après retour à température ambiante, le solide est filtré puis le filtrat est évaporé pour conduire à une huile purifiée sur silice par le mélange heptane/Acétate d'éthyle (80/20 à 50/50) ou par HPLC préparative. Le produit est obtenu sous forme d'un solide blanc est séché sous vide une nuit. 511 mg sont alors obtenus avec un rendement de 46%.

- Exemple 26 : - 2-(2,4-dihydroxyphénylsulfinyl)-5-hydroxyphényl dodecanoate

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO-d6) : δ : 0,86 (t, 3H) ; 1,24 (m, 16H) ; 1,53 (m, 2H) ; 2,45 (m, 2H) ; 6,28 (d, IH) ; 6,33 (dd, IH) ; 6,53 (s, IH) ; 6,83 (dd, IH) ; 7,12 (d, IH) ; 7,43 (d, IH) ; 9,88 (si, IH); 10,19 (si, IH); 10,27 (si, IH).

MS (APCI+) : 449,2 [M+H] ⁺ Rf (1/1; Heptane/EtOAc) : 0,42

- Exemple 27> (9Z,12Z)-2-(2,4-dihydroxyphénylsulfinyl)-5-hydroxyphényl octadeca-

9,12-dienoate

A partir du chlorure de linoléoyle

RMN ¹ U (400 MHz, DMSO-d6) : δ : 0,84 (t, 3H) ; 1,29 (m, 14H) ; 1,55 (m, 2H) ; 2,00 (m, 4H) ; 2,42 (t, 2H) ; 2,76 (t, 2H) ; 5,33 (m, 4H) ; 6,28 (s, IH) ; 6,35 (ds, IH) ; 6,53 (s, IH) ; 6,82 (d, IH) ; 7,12 (d, IH) ; 7,43 (d, IH) ; 9,88 (s, IH); 10,19 (s, IH); 10,27 (s, IH).

MS (ESI) : 529,2 [M+H] ⁺ Rf (7/3; Heptane/EtOAc) : 0,45

B) Synthèse des éthers par oxydation des analogues du résorcinol sulfide

A une solution de l'exemple 12 (=4-(2-(decyloxy)-4- hydroxyphénylthio)benzène-l,3-diol) (320 mg) dans 10 ml d'acide acétique sont ajoutés 260 μL d'une solution de peroxyde d'hydrogène à 30% dans H ₂ O (2,5 mmol, 3 éq) puis le mélange est agité 3 heures à température ambiante. 50 mL d'eau sont ajoutés pour précipiter le produit. Le solide obtenu est collecté, puis repris dans de l'acétate d'éthyle puis cette phase organique est lavée à l'eau puis avec une solution saturé en chlorure de sodium. Après séchage sur MgSO4, le solvant est évaporé pour conduire à un solide beige séché une nuit à l'étuve à vide (50mbar, 50 ⁰ C). 310 mg de produit sont obtenus avec un rendement de 90%.

- Exemple 28 : - 4-(2-(décyloxy)-4-hydroxyphénylsulfïnyl)benzène-l,3-diol

RMN ¹ R (400 MHz, DMSO d6) : δ : 0,86 (t, 3H) ; 1,23 (m, 14H) ; 1,54 (m, 2H) ; 3,77-

3,92 (m, 2H) ; 6,26 (d, IH) ; 6,29 (s, IH) ; 6,40 (d, IH) ; 6,49 (dd, IH) ; 6,98 (d, IH) ;

6,76 (s, IH) ; 7,28 (d, IH) ; 9,80 (s, IH); 9,98 (s, IH); 10,06 (s, IH).

RMN ¹³ C (100 MHz, DMSO d6) : δ : 13,89; 22,03; 25,14; 25,38; 28,29; 28,64; 28,66;

28,90; 28,93; 31,25; 67,86; 99,86; 102,38; 107,12; 107,49; 120,17; 121,72; 127,19;

127,68; 156,82; 157,07; 160,95; 161,18.

MS (ESI+) : 407,2 [M+H] ⁺ Rf (1/1; Heptane/EtOAc) : 0,12

3) Synthèse des analogues du résorcinol sulfone

A) Synthèse du résorcinol sulfone A une solution de 4,4'-thiodibenzene-l,3-diol (résorcinol sulfide, 10 mmol, 2,5g) dans un mélange acétone/acide acétique (1/1, 60 mL) sont ajoutés 5,12 mL d'une solution de peroxyde d'hydrogène 30% dans H2O (30 mmol) puis le mélange est agité

72 heures à température ambiante.

Le solvant est évaporé puis le solide obtenu est repris par de l'acétate d'éthyle pour obtenir un solide blanc. Filtration du solide puis le filtrat est évaporé puis le résidu ainsi obtenu est purifié sur silice pour conduire à 320 mg d'un solide blanc - Exemple 29 :

- 4,4'-sulfonyldibenzène-l,3-diol (résorcinol sulfone)

RMN ¹ R (400 MHz, DMSO-d6) : δ : 6,24 (d, 2H) ; 6,33 (dd, 2H) ; 7,61 (d, 2H) ; 10,06 (s, IH); 10,16 (s, IH).

RMN 1 ¹ 3 ^J C (100 MHz, DMSO d6) : δ :102,73; 106,41; 117,98; 131,54; 157,14; 162,86.

Rf (9/1; DCM/MeOH) : 0,6

B) Synthèse des analogues du résorcinol sulfone par oxydation des analogues du résorcinol sulfide en résorcinol sulfone

A une solution de l'exemple 12 (=4-(2-(décyloxy)-4- hydroxyphénylthio)benzène-l,3-diol) (195 mg, 0,5 mmol) dans 10 ml d'acide acétique sont ajoutés 2,8 mL d'une solution de peroxyde d'hydrogène à 30% dans H ₂ O (25 mmol, 50 éq) puis le mélange est agité 48 heures à température ambiante.

50 mL d'eau sont ajoutés pour précipiter le produit. Le solide obtenu est collecté sur frite, puis lavé deux fois à l'eau puis deux fois au n-pentane. Le solide est alors séché une nuit à l'étuve à vide (50mbar, 50 ⁰ C) pour conduire à un solide blanc. 135 mg de produit sont obtenus avec un rendement de 64%.

- Exemple 30 :

- 4-(2-(decyloxy)-4-hydroxyphenylsulfonyl)benzene- 1 ,3-diol

RMN ¹ H (400 MHz, DMSO d6) : δ : 0,87 (tl, 3H) ; 1,26 (m, 14H) ; 1,44 (ml, 2H) ; 3,77 (ml, 2H) ; 6,22 (s, IH) ; 6,30 (d, IH) ; 6,35 (s, IH) ; 6,44 (d, IH) ; 7,59 (d, IH) ; 7,74 (d, IH); 9,97 (s, IH); 10,10 (s, IH); 10,30 (s, IH).

RMN ¹³ C (100 MHz, DMSO d6) : δ : 13,89; 22,02; 25,29; 28,25; 28,64; 28,75; 28,88; 28,92; 31,24; 67,96; 99,78; 102,66; 106,04; 106,28; 117,91; 119,88; 131,65; 131,82; 156,97; 157,69; 162,77; 163,15.

II Résultats des tests biologiques 1) Protocoles

A) Détermination de l'activité dépigmentante sur test in vitro acellulaire : test de l'inhibition de la tyrosinase) - Principe :

Ce test est utilisé pour évaluer l'activité dépigmentante des molécules testées. La tyrosinase est une enzyme limitante dans la mélanogénèse.

Elle appartient à la famille des oxydoréductases. Elle possède notamment la fonction : monophénol mono oxygénase (MPMO) et polyphénol oxydase (PPO).

Elle est synthétisée au niveau des mélanocytes. Elle est activée lors de sa migration vers les kératinocytes via les mélanosomes. Elle transforme la tyrosine en DOPA puis dopaquinone, ce qui conduit in fine à une polymérisation soit une production de pigments (voir schéma ci-dessous).

Mélanine

MPMO PPO

Le substrat : la L-tyrosine, est transformée en L-DOPA par la fonction monophénol mono oxygénase qui est transformée par la fonction polyphénol oxydase de la tyrosinase en dopaquinone. Cette dernière va s'auto-oxyder en dopachrome qui est mesuré en spectrophotométrie à 490 nm. Plus précisément, c'est l'activité tyrosinase globale (MPMOg) qui est mesurée puisque c'est le dopachrome in fine qui est dosé. Ainsi les produits testés sur MPMOg (= mesure de l'activité sur PPO et MPMO) peuvent cumuler l'inhibition des 2 fonctions,

inhiber uniquement la fonction MPMO stricto sensus (transformation de la tyrosine en DOPA) en complément du test PPO, pourraient inhiber PPO uniquement

- Conditions générales expérimentales :

Lecteur : Synergy HT programme : tyrosinase 280-490 cinétique : cinétique sur 45 min, lecture à t = lOminutes, Essais en 96 puits transparents, Tampon Phosphate - pH 6.8, Enzyme : mushroom tyrosinase - Sigma = T-3824Substrat : L-Tyrosine - Sigma = T- 3754, Témoin positif : Acide kojique (AK) - fiuka = 60890 (inhibiteur de référence)

- Molécules de référence pour le test :

Acide kojique : 9μM< IC 50 <20μM (PPO), 3μM< IC 50 <7μM (MPMO)

Vitamine C : 20μM< IC 50 <40μM (PPO)

Glutathion réduit : 55% inhibition à 25μM (PPO), IC 50 = 1-2 μM (MPMO) Hydroquinone : IC 50 = 3-4 μM (MPMO) Arbutine : 57% inhibition à 88μM (MPMO)

Ces molécules exogènes sont connues pour réguler négativement la mélanogenèse. L 'hydroquinone inhibe la synthèse de mélanine en se présentant comme substrat de la tyrosinase afin de détourner son activité. L'arbutine contenant de l' hydroquinone agit de la même manière. L'acide kojique diminue l'activité de la tyrosinase en inhibant l'hyperpigmentation induite par les UV. La vitamine C inhiberait la tyrosinase mais se comporterait également comme un réducteur puissant en empêchant la coloration de la mélanine par oxydation. La vitamine A diminue l'expression de la tyrosinase. B) Test du dosage de la mélanine dans des cellules B16-F10 :

- Principe :

II s'agit d'un test de mesure de la synthèse de mélanine par dosage colorimétrique sur une lignée cellulaire de mélanomes murins: la lignée B16-F10. Ce test permet d'évaluer le pouvoir dépigmentant de principes actifs.

Les cellules B 16-Fl O sont ensemencées dans des plaques 96 puits dans du milieu DMEM supplémenté de SVF (sérum de veau fœtal), et incubées 24 heures à

37°C, 5%CO2. Les cellules sont ensuite stimulées à l'α-MSH 0.1 μM (pour stimuler la synthèse de mélanine, la stimulation observée est d'environ 150%) et traitées 72 heures avec les actifs à tester. Chaque concentration d'actif est testée au moins en triplicata. La mélanine totale suivie de la mélanine intracellulaire dissoute dans du tampon de lyse sont alors dosées par lecture d'absorbance à 405 nm. Les protéines totales sont dosées dans le lysat et les résultats sont exprimés en mg mélanine / mg protéines. Le pourcentage d'activité est calculé comme suit : Moyenne normalisée du témoin - Moyenne normalisée du traité

% d'activité = x 100

Moyenne normalisée du témoin

Une valeur négative indique une inhibition, alors qu'une valeur positive indique une induction de la synthèse de mélanine.

- Conditions générales expérimentales :

- Matériel :

- Incubateur cellulaire à CO2 (Heraeus), Etuve, Centrifugeuse (Heraeus), Hotte à flux d'air laminaire, Plaques 96 puits à fond plat transparent - Falcon, Cônes stériles - Treff Lab, Polylabo,Mithras LB940 (Berthold Technologies)- 154/MIP A/003

- Matériel biologique :

- Lignée cellulaire B16-F10 entre PlO et P20 (mélanocytes murins) (ATCC, CRL-6475) - Réactifs :

- DMEM sans rouge de phénol (GlBCOBRL, 31053-028), Glutamax-I Supplément à 20OmM (GlBCOBRL, 35050-038), D-PBS (GlBCOBRL, 14190-094), Sérum de veau fœtal (Invitrogen, 10270-098), Trypsine-EDTA (GlBCOBRL, 25300-054), NaOH (Sigma, S8045-500G), DMSO (Sigma, 471267-1L), Nie, Phe - Melanocyte Stimulating Hormon (Sigma, M-8764) , Mélanine (Sigma, M-0418), BCA-COPPER (SlGMA, B9643 et C2284), BSA (SIGMA, P0914)

C) Test pour l'étude de la capacité antioxydante par chemiluminiscence (Photochem analytic Jena) - Principe :

Ce test est utilisé pour déterminer la capacité antioxydante des molécules. C'est une méthode qui génère des radicaux libres par un signal photochimique. L'intensité de l'oxydation est 1000 fois supérieure à celles obtenues en conditions normales.

La détection se fait par chemiluminescence. Elle permet l'évaluation de molécules ou extraits anti-oxydants hydrosolubles et liposo lubies.

Les résultats sont exprimés respectivement en quantité équivalente de vitamine C ou de Trolox (acide 6-Hydroxy-2,5,7,8-tétramethylchroman-2-carboxylique ). La sensibilité est de l'ordre de la nanomole.

L'activité anti-oxydante étudiée dans ce test représente la capacité à piéger spécifiquement les anions superoxydes par chemiluminescence.

Les résultats quantifiés sont exprimés en équivalent Trolox (standard) soit en « μg de produit pour lμg de Trolox ». Cela signifie qu'il faut une quantité x d'échantillon pour obtenir une activité équivalente à l'activité détectée pour lμg de standard. C'est un pouvoir anti-oxydant relatif à une référence, cela nous affranchit de la concentration testée.

- Génération de radicaux libres oxygénés :

Le radical superoxide : O ₂ ^"" est généré par une réaction photochimique :

L + hv (UV) + O ₂ > L* O ₂ > L ⁰⁺ + O ₂ ^°"

L*: luminol à l'état excité L ⁰⁺ : radical luminol - Détection du signal :

Une partie des anions superoxydes est quenchée par les anti-oxydants. Les radicaux libres restants sont quantifiés par chemiluminescence.

L ⁰⁺ + O ₂ ^°" > N2 AP* 2- AP ² - hv (luminescence)

AP* ^" : aminophtalate à l'état excité

D) Test de protection de l'acide linoléique suite à un stress UV.

- Cible : protection de l'acide linoléique en condition de Fenton, irradiation UV

L'acide linoléique appartient à la famille des acides gras polyinsaturés (AGPI). Sensible à l'oxydation, l'acide linoléique est une cible privilégiée pour les radicaux libres (RLO) dans les milieux biologiques. Lorsque les membranes biologiques sont exposées à un stress oxydant, les composants les plus affectés sont les phospho lipides constitués d'AGPI et le cholestérol. Leur dégradation conduit à la peroxydation lipidique et généralement à une déstructuration. La peroxydation lipidique est un processus auto catalytique qui implique généralement les RLO. La peroxydation lipidique est en partie responsable du vieillissement cutané.

La méthode employée pour évaluer la peroxydation lipidique repose sur le couplage de l'acide thiobarbiturique (TBA) et des produits secondaires de dégradation conduisant à des composés colorés détectables en spectrofluorométrie. Le composé secondaire essentiel de dégradation final est le malondialdehyde, MDA. Le MDA est un aldéhyde cancérigène et mutagène, il agit sur les protéines, et ADN. - Principe du test :

L'échantillon à tester est mis en contact avec l'acide linoléique dans un rapport poids/ poids. L'échantillon subit une irradiation 10 DEM (Dose Erythémale Minimale) en condition de Fenton à savoir en présence de H202 et de fer II dans un simulateur solaire.

Suite à l'irradiation, le réactionnel est repris dans le méthanol et dérivatisé à 90 ⁰ C avec le TBA. Le chromogène, le complexe MDA-TBA, représentatif de la production équimolaire de MDA se dose en fiuorimétrie (excitation à 525 nm, émission à 549 nm). Les résultats sont exprimés en unités de fluorescence, en fonction d'une gamme étalon de MDA-TBA puis exprimés en concentration du complexe MDA-TBA. Ensuite, le pourcentage du rapport MDA / Acide linoléique de départ (AL) est déterminé. Puis le pourcentage de protection d'acide linoléique est déterminé.

E) Détermination de la concentration minimale inhibitrice(CMI) :

Ce test est utilisé pour déterminer l'activité antibactérienne d'un composé.

Des tests ont été réalisés avec 4 souches de bactéries en utilisant le principe de microdilution. Les CMI sont déterminées par microméthode en milieu liquide. Les dilutions successives de raison 2 des produits tests dans le bouillon de culture (Trypcase Soja) sont réalisées en microplaques à 96 puits dans un volume final de 0,1 ml. Les puits sont ensemencés avec 0,01ml des suspensions bactériennes titrées à environ 10^ UFC/ml. Les microplaques sont incubées en conditions optimales de croissance et la CMI est lue visuellement.

2) Résultats : A) Détermination de l'activité dépigmentante sur test in vitro acellulaire : test de l'inhibition de la tyrosinase.

L'ensemble des résultats a été regroupé dans le Tableau 1 récapitulatif inséré plus loin. - Légende des résultats pour le test tyrosinase

B) Test du dosage de la mélanine dans des cellules B16-F10 :

Les résultats ont également été regroupés dans le Tableau 1 récapitulatif ci- après.

- Interprétation des résultats :

Une valeur négative indique une inhibition, alors qu'une valeur positive indique une induction de la synthèse de mélanine.

On constate que la majorité des composés testés présentent une bonne capacité d'inhibition de la synthèse de mélanine. L'invention concerne donc l'utilisation cosmétique pour la dépigmentation de la peau des composés de formule générale (I) ou

(T).

C) Test pour l'étude de la capacité antioxydante par chemiluminiscence (Photochem analytic Jena)

Les résultats ont également été regroupés dans le Tableau 1 récapitulatif ci- après.

La majorité des composés a une bonne activité antioxydante. L'échelle pour interpréter les résultats est la suivante :

La plupart des composés présentent des résultats comparables à la vitamine C. Tous les composés montrent des résultats inférieurs à lOOOμg de trolox (301μg étant le plus faible résultat obtenu avec le résorcinol sulfone) ; ils ont donc tous une activité anti-oxydante intéressante. L'invention concerne également l'utilisation cosmétique pour la prévention et/ou le traitement du vieillissement de la peau des composés de formule générale (I) ou (F).

D) Test de protection de l'acide linoléique suite à un stress UV

Les résultats ont également été regroupés dans le Tableau 1 récapitulatif ci- après. Le contrôle négatif est l'acide linoléique non stressé par les radiations UV et chimiquement : donc non irradié (NI). Il est représentatif de l'oxydation basale liée à l'environnement. Il correspond à la production basale non spécifique de MDA, et est très faible (de l'ordre de 7 10E-7 M).

Le contrôle positif est la quercétine qui a une protection quasi totale à 1% et qui protège partiellement (environ 50%) à 0.1%.

La dose de produit est exprimée en rapport poids/poids c'est-à-dire en pourcentage massique par rapport à la quantité initiale totale d'acide linoléique. Le taux maximal de MDA est déterminé par la condition UV + H202 + fer II (F).

Le pourcentage de protection d'acide linoléique représente : le rapport % de MDA en condition de stress maximale non-traité sur % de MDA en condition de stress traité par le produit.

Une molécule est considérée comme significativement active si son pourcentage de protection de l'acide linoléique est supérieur à 20%. L'ensemble des molécules testées est donc significativement actif. Tableau 1

E) Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) :

Les résultats ont été regroupés dans le Tableau 2. On considère qu'un composé présente une très bonne activité antibactérienne quand il présente une CMI inférieure à 1 ppm. L'activité antibactérienne est considérée comme bonne lorsque la CMI est comprise entre 1 ppm et 100 ppm. L'activité antibactérienne d'un composé est considérée comme moyenne quand elle est comprise entre 100 ppm et 1000 ppm.

Tableau (2)

Les composés testés présentent une activité antibactérienne significative. En particulier, les exemples 7 et 12 présentent une activité antibactérienne forte contre la souche Propionibacterium acnés.

III. Composition selon l'invention.

Dans une telle composition, le pourcentage du principe actif peut varier entre 0,01% et 10% en poids et de préférence de 0,1% à 5% en poids par rapport au poids total de la composition.

L'invention vise également les compositions pharmaceutiques ou cosmétiques comprenant au moins un des composés de formule (I) ou de formule (T) en association avec au moins un excipient pharmaceutiquement ou cosmétiquement acceptable

Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, les compositions pharmaceutiques ou cosmétiques comprennent au moins un des composés de formule (I) ou de formule (T) en association avec au moins un excipient pharmaceutiquement ou cosmétiquement acceptable et une phase grasse.

Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, les compositions pharmaceutiques ou cosmétiques comprennent au moins un des composés de formule (I) ou de formule (T) en association avec au moins un excipient pharmaceutiquement ou cosmétiquement acceptable et un emollient.

La présente invention concerne une composition cosmétique dépigmentante de la peau et/ou des cheveux et/ou des poils caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I) ou de formule (F). L'invention vise également une composition cosmétique anti-vieillissement de la peau, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I) ou de formule (V).

L'invention s'étend également à une composition pharmaceutique désinfectante de la peau caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I).

La composition selon l'invention peut comprendre en outre des adjuvants cosmétiques classiques notamment choisis parmi les phases grasses, les solvants organiques, les épaississants, les adoucissants, les opacifiants, les stabilisants, les émollients, les agents anti-mousse, les agents hydratants, les parfums, les conservateurs comme les parabens, les polymères, les charges, les séquestrants, les bactéricides, les absorbeurs d'odeur, les agents alcalinisants ou acidifiants, les tensio-actifs, les antiradicaux libres, les antioxydants, les vitamines E et C, les α-hydroxyacides, ou des eaux thermales comme l'eau thermale d'Avène ou tout autre ingrédient habituellement utilisé en cosmétique, en particulier pour la fabrication de compositions de ce type. La composition selon l'invention peut en outre comprendre une phase grasse. La phase grasse peut être constituée par une huile ou une cire ou leurs mélanges, et comprendre également les acides gras, les alcools gras et les esters d'acides gras. Les huiles peuvent être choisies parmi les huiles animales, végétales, minérales ou de synthèse et notamment parmi l'huile de vaseline, l'huile de paraffine, les huiles de silicone, volatiles ou non comme la dimethicone ; les isoparaffines, les polyoléfines, les huiles fluorées et perfiuorées. De même, les cires peuvent être choisies parmi les cires animales, fossiles, végétales ou de synthèse telles que les cires d'abeille, les cires de candelila, les cires de canauba, le beurre de karité, de la cire de pétrole (ou cire microcristalline), la paraffine, et leurs mélanges. La composition selon l'invention peut comprendre en outre un polyol miscible à l'eau à la température ambiante (environ 25°C), notamment choisi parmi les polyols ayant notamment de 2 à 20 atomes de carbones, de préférence ayant de 2 à 10 atomes de carbone, et préférentiellement ayant de 2 à 6 atomes de carbones, tels que la glycérine ; les dérivés de glycol tel que le propylène glycol, le butylène glycol, le pentylène glycol, l'hexylène glycol, le dipropylène glycol, le diéthylène glycol ; les éthers de glycol tels que les éthers d'alkyle en C1-C4 de mono-, di- ou tri-propylène glycol, les éthers d'alkyle en C1-C4 de mono-, di- ou tri-éthylène glycol ; et leurs mélanges. La composition selon l'invention peut également comprendre des agents épaississant ou des agents de modification de la rhéologie, tels que par exemple des uréthanes non ioniques éthoxylés hydrophobiquement modifiés, des acides polycarboxyliques épaississants tels que des copolymères d'acrylates/stéareth-20 méthacrylate, des carbomères, des copolymères d'acrylates réticulés et leurs mélanges.

La composition selon l'invention peut également comprendre des acides et des bases permettant d'ajuster la zone de pH de ladite composition. Les bases peuvent être minérales (soude, potasse, ammoniaque, etc.) ou organiques telles que la mono-, di- ou tri-éthano lamine, un aminométhylpropanediol, la N-méthyl-glucamine, les acides aminés basiques comme l'arginine et la lysine, et leurs mélanges.

La composition selon l'invention peut également comprendre des agents de conditionnement de la peau. Des exemples d'agents de conditionnement de la peau comprennent, sans y être limité, des émulsifiants anioniques, cationiques et non ioniques tels que le sulfate de lauryle de sodium, le sulfosuccinate de dioctyle de sodium, le stéarate de sodium, l'ester de sorbitane ; des acides gras éthoxylés ; des alcools gras éthoxylés tels que le trideceth-9 et le PEG-5 éthylhexanoate ; l'acide stéarique ; tout autre émulsifiant et agent de conditionnement connu de l'homme du métier ; et leurs mélanges.

La composition selon l'invention peut en outre contenir d'autres principes actifs conduisant à un effet complémentaire.

La composition selon l'invention peut être présentée sous n'importe quelle forme appropriée pour une application topique, notamment sur la peau et/ ou les cheveux. En particulier, elles peuvent se présenter sous la forme d'émulsions obtenues par la dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse, par exemple une émulsion huile- dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple, ou sous la forme d'un gel ou d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide, ou sous la forme d'une dispersion en présence de sphérules. La composition selon l'invention peut également être moins fluide et se présenter sous la forme d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'un masque, d'une poudre, d'un stick solide, ou éventuellement d'un aérosol, d'une mousse ou d'un spray.