L'invention concerne le domaine technique des complexes de lanthanide. En particulier, l'invention concerne des complexes de lanthanide comportant un agent chélatant, formé d'un macrocycle ou d'un ligand, et complexant un ion lanthanide, des agents chélatants correspondants, ainsi qu'un procédé de détection d'une biomolécule à l'aide dudit complexe de lanthanide.

Certains complexes de lanthanide luminescents présentent des propriétés spectroscopiques remarquables (bandes d'émission fines caractéristiques d'un métal donné et à longue durée de vie), et sont, de ce fait, des composés à très fort potentiel pour des applications en imagerie biologique (S.V. Eliseeva, J.-C. G. Bùnzli, Chem. Soc. Rev. 2010, 39, 189). Ces composés luminescents peuvent être utilisés seuls pour des applications en imagerie par microscopie de fluorescence mono- ou biphotonique, ou bien en conjonction avec un fluorophore approprié pour réaliser des expériences de FRET (Fôrster/Fluorescence Résonant Energy Transfer). Dans ce dernier cas, les complexes de lanthanide sont généralement sous la forme d'un complexe conjugué à une biomolécule. Ces deux techniques peuvent éventuellement être résolues en temps grâce à la durée de vie longue des lanthanides, ce qui constitue un avantage important pour améliorer la détection, en s 'affranchissant de signaux de fluorescence parasites à durée de vie courte (C. P. Montgomery B. S. Murray, E. J. New, R. Pal, D. Parker, Acc. Chem. Res. 2009, 42, 925 ; E. G. Moore, A. P. S. Samuel, K. N. Raymond, Acc. Chem. Res. 2009, 42, 542).

De tels composés de lanthanide luminescents ont déjà été décrits dans la littérature, et certains sont même commercialisés par Cisbio Bioassays, PerkinElmer ou Invitrogen. Ces dernières années, des complexes de lanthanide fonctionnalisés ont été développés, afin d'optimiser leurs propriétés spectroscopiques, de déplacer leur absorption vers le visible, optimiser leur absorption biphotonique, et améliorer leur solubilité en milieu aqueux.

En particulier, le document WO 2005/058877 décrit des complexes de lanthanide basés sur des cycles 1,4,7-triazacyclononane (TACN) dont trois atomes d'azote sont substitués par des chromophores constitués d'un dérivé de pyridine éventuellement substitué par un groupe réactif, afin de faciliter la conjugaison avec des biomolécules. L'objectif est de fournir des complexes fortement fluorescents, stables et facilement greffables à une biomolécule. Ce document décrit notamment un complexe de terbium de type TACN dont les trois atomes d'azote sont substitués par un groupe 2-carboxylate-4-(2,4,6-triméthoxyphényle)-pyridine (composé 22), mais n'indique pas la brillance mesurée pour ce composé.

Par ailleurs, certains des inventeurs ont précédemment décrit des complexes de terbium basés sur des cycles 1,4,7-triazacyclononane (TACN) dont trois atomes d'azote sont substitués par des chromophores constitués d'un dérivé de pyridine (V. Placide, A. T. Bui, A. Grichine, A. Duperray, D. Pitrat, C. Andraud, O. Maury, Dalton Trans. 2015, 44, 4918). Ce document décrit en particulier un complexe de terbium de type TACN dont les trois atomes d'azote sont substitués par un groupe 2-carboxylate-4-(4-méthoxyphényle)-pyridine, qui a une absorption intense, mais un rendement quantique et une brillance faibles.

Il subsiste donc un besoin de complexes de lanthanide présentant une bonne brillance, et en particulier lorsqu'ils sont excités dans la gamme spectrale d'intérêt de 330 nm à 350 nm, et plus particulièrement aux alentours de 337 nm (longueur d'onde correspondant aux sources laser souvent utilisées dans les dosages biologiques). La structure des complexes selon l'invention rend possible des variations chimiques permettant d'obtenir avantageusement une bonne solubilité et une bonne stabilité en milieu biologique, et permettant un greffage aisé sur une biomolécule.

La brillance est définie comme le produit de l'absorption à la longueur d'onde d'intérêt et du rendement quantique d'émission, et correspond à la quantité de lumière effectivement disponible pour l'expérience d'imagerie et/ou de FRET. Une brillance optimale permet d'optimiser le rapport signal/bruit, et donc d'augmenter la sensibilité de la détection et/ou de réduire la quantité de chromophore utilisé.

Les Demandeurs proposent de nouveaux complexes de lanthanide comportant un agent chélatant, formé d'un macrocycle ou d'un ligand, complexant un ion lanthanide Ln ³⁺ choisi parmi le terbium et le dysprosium, l'agent chélatant comprenant au moins un groupe de structure (B) suivante :

dans laquelle :

- -RI représente un hydrogène, un groupe -R6, ou un groupe électrodonneur -El,

- -R2 représente un hydrogène, un groupe -R7, ou un groupe électrodonneur -E2,

- -R3 représente un hydrogène, un groupe -R8, ou un groupe électrodonneur -E3,

-R4 et -R5, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre un hydrogène ou un groupe -R9 ou -OR9, - -El, -E2 et -E3 sont choisis indépendamment les uns des autres parmi les groupes -OR10, -SR10, -NH(CO)R10, -NH(CO)NR10R'10, -NH(CS)NR10R'10 et -NH(CS)NHR10,

- -R6, -R7, -R8, -R9, -RIO et R'10 identiques ou différents, représentent indépendamment les uns des autres un groupe (C1-C6) alkyle, éventuellement substitué par un groupe -XI ou un groupe -Y,

- -XI est un groupe réactif,

-Y est un groupe hydrosolubilisant,

étant entendu que :

o au moins l'un des substituants -R2 et -R3 n'est pas un hydrogène, o un seul des groupes -RI, -R2 et -R3 représente un groupe électrodonneur, o ledit agent chélatant comprend au plus un groupe réactif.

Les complexes de l'invention sont luminescents. La luminescence correspond à une émission de lumière consécutive à un apport d'énergie, en particulier un apport de lumière. Cet apport en énergie fait passer des atomes ou molécules dans un état « excité » se situant à une énergie supérieure à celle qu'ils possèdent dans leur état normal dit « fondamental ». C'est lors du retour à leur état fondamental qu'ils peuvent émettre de la lumière. De manière générale, les complexes de lanthanide sont sensibilisés par effet d'antenne et la nature de l'antenne organique contrôle l'absorption de la lumière et permet d'optimiser la luminescence du lanthanide (S. V. Eliseeva, J.-C. Bùnzli, Chem. Soc. Rev. 2010, 39, 189).

Les complexes selon l'invention ont l'avantage d'avoir une brillance élevée, notamment due à un rendement quantique très élevé, en particulier en milieu hydrophile et notamment en milieu aqueux. Sans vouloir être lié par une quelconque théorie, les inventeurs pensent que l'amélioration du rendement quantique, et l'optimisation de la brillance, des complexes de l'invention est due à la combinaison des effets électroniques et stériques des antennes (i.e. des groupes (B)). La présence d'un seul groupe électrodonneur permet d'améliorer significativement le rendement quantique. Ainsi, de manière surprenante, notamment par rapport au document WO-2005/058877, les inventeurs ont observé une chute drastique du rendement quantique lorsque plusieurs groupes électrodonneurs sont présents, comparé à un même complexe ne comportant qu'un seul groupe électrodonneur. De plus, il apparaît que l'introduction de groupements en position R2 et/ou R3 permet vraisemblablement d'éviter la rotation interne de l'antenne autour de la liaison pyridine-phényle qui contribue à augmenter les désexcitations non radiatives et conduit à une diminution du rendement quantique. Ainsi, l'encombrement stérique des groupes -R2 et/ou - R3, qui ne sont pas tous les deux des hydrogènes dans les complexes de l'invention, bloquerait cette rotation et serait donc important pour la brillance finale du complexe.

Par ailleurs, les complexes selon l'invention peuvent être pourvus d'un groupe réactif, pour être éventuellement conjugués par une liaison covalente à une molécule d'intérêt, telle qu'une biomolécule. Les complexes selon l'invention peuvent également être pourvus d'un ou plusieurs groupes hydrosolubilisants, ce qui permet alors d'améliorer leur solubilité en milieu hydrophile, et en particulier en milieu aqueux.

Dans le cadre de l'invention, on entend par « alkyle » une chaîne hydrocarbonée saturée, qui peut être linéaire ou ramifiée. A titre d'exemples de groupes alkyles comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, on peut citer les groupes méthyle, éthyle, n-propyle, iso-propyle, n-butyle, iso-butyle, tert- butyle, sec-butyle, n-pentyle, iso-pentyle, tert-pentyle, neo-pentyle, sec-pentyle, et n-hexyle.

De manière préférée dans le cadre de l'invention, le lanthanide Ln est le terbium. Les complexes de terbium sont en effet très lumineux.

Avantageusement, les complexes de lanthanide selon l'invention comprennent un groupe réactif, noté -X, -XI ou -X2, permettant son couplage par liaison covalente à une biomolécule. D'après la définition même de l'agent chélatant formant le complexe, un seul groupe réactif peut être présent.

Par « groupe réactif », on entend un groupe comprenant une fonction qui permet un greffage co valent sur une fonction susceptible de réagir et présente sur une bio molécule (aminé, alcool, thiol, acide carboxylique, insaturation...). Les différentes fonctions permettant une telle bio-conjugaison sont bien connues de l'homme de l'art et sont décrites, par exemple, dans Bioconjugate Techniques, G.T. Hermanson, 1996, 137-166.

Par « biomolécule », on entend les molécules d'intérêt biologique qu'il peut être avantageux de marquer grâce à un complexe luminescent. A titre d'exemple de biomolécules, on peut citer les protéines, les peptides, les anticorps, les antigènes, les brins d'ADN, la biotine et la streptavidine. Les protéines sont les biomolécules qui seront le plus souvent liées aux complexes de l'invention.

Dans le cadre de l'invention, le groupe réactif peut être choisi parmi -COOH, -NH ₂ , un acrylamide, une aminé activée, un ester activé, un aldhéhyde, un halogénure d' alkyle, un anhydride, une aniline, un azide, une aziridine, un acide carboxylique, un diazoalcane, un haloacétamide, une halotriazine, une hydrazine, un imido ester, un isocyanate, un isothiocyanate, un maléimide, un halogénure de sulfonyle, un thiol, une cétone, un halogénure d'acide, un ester d'hydroxysuccinimidyle, un ester de succinimidyle, un ester d'hydroxysulfosuccinimidyle, un azidonitrophényle, un azidophényle, un 3-(2-pyridyl dithio)-propionamide, un glyoxal, une triazine, un groupe acétylénique, et les groupes de formule : -

lesquels w est un entier appartenant à la gamme allant de 0 à 8 et v est égal à 0 ou 1 , et Ar est un hétérocycle à 5 ou 6 chaînons saturé ou insaturé, comprenant 1 à 3 hétéroatomes, éventuellement substitué par un atome d'halogène ; les groupes réactifs choisis parmi -COOH, -NH ₂ , les esters de succinimidyle, les haloacétamides, les azides, les hydrazines, les isocyanates et les maléimides étant préférés.

De préférence, les complexes selon l'invention comprennent au moins un et au maximum 15 groupes hydrosolubilisants, notés -Y, et avantageusement au moins 2, et de préférence de 2 à 9 groupes hydrosolubilisants, en particulier de 2 à 5, et de préférence 2 ou 3.

Par « groupe hydrosolubilisant », on entend un groupe qui comprend une fonction qui permet d'améliorer la solubilité en milieu hydrophile.

Dans le cadre de l'invention, le ou les groupes hydrosolubilisants -Y peuvent être choisis parmi les groupes -SO3 ^" , -COO ^" , sulfobétaïne et -0-[(CH2)2-0] _m -CH3, m étant un nombre entier allant de 1 à 10, de préférence m=3. Selon un mode de réalisation préféré, le ou les groupes hydrosolubilisants sont choisis parmi les groupes -0-[(CH2)2-0] _m -CH3, m étant un nombre entier allant de 1 à 10, de préférence m=3.

Par « sulfobétaïne », on entend un groupement bétaïne comportant une fonction -SO3 ^" en tant que fonction porteuse de la charge négative. Un groupe bétaïne est défini comme un groupement zwittérionique dans lequel l'atome portant la charge positive ne porte pas d'atome d'hydrogène et n'est pas adjacent à l'atome porteur de la charge négative. Dans le cadre de l'invention, on entend par sulfobétaïne, par exemple, les groupements zwittérioniques associant un cation ammonium, ou iminium aromatique, généralement pyridinium, imidazollium, et un groupement anio nique de type sulfonate. Le cation et l'anion sont espacés par au moins un chaînon CH ₂ , et de préférence par une chaîne alkyle bivalente (également nommé alkylène) comprenant de 1 à 4, voire de 1 à 6, atomes de carbone. A titre d'exemple de groupe sulfobétaïne, on peut citer les groupes de formule :

avec R qui représente un groupe alkyle de 1 à 6 atomes de carbone, et de préférence un méthyle ou éthyle, et q qui est égal à 1 , 2, 3, 4, 5 ou 6, et de préférence qui est égal à 1 ou 2. Le groupe -N(CH ₃ ) ₂ ⁺ -(CH ₂ )3-S03 ^" est préféré.

Lorsque les complexes selon l'invention comprennent un ou plusieurs groupes hydrosolubilisants, ceux-ci peuvent être sur n'importe quel substituant du groupe phényle du groupe de structure (B), i.e. sur -RI, -R2, -R3, -R4 et/ou -R5, ou plus précisément sur -R6, -R7, -R8, -R9, -RIO et/ou -R'10. De manière préférée, les groupes hydrosolubilisants sont en position ortho et/ou para par rapport au groupement pyridinyle du groupe de structure (B), i.e. sur -R6, -R7, -R8, -RIO et/ou -R'10, et de préférence en para.

Selon un premier mode de réalisation, les complexes de lanthanide selon l'invention sont choisis parmi les complexes de lanthanide de formule (I) :

Chroml

Chrom3 (I)

dans lesquels :

Ln est un lanthanide choisi parmi Tb et Dy,

-A- représente -CH ₂ - ou -CH(LA-X2)-,

-LA- est une liaison covalente, ou un groupe (C 1-C20) alkylène, linéaire ou ramifié, contenant éventuellement une ou plusieurs doubles ou triples liaisons, et éventuellement substitué par un à trois groupes -S0 ₃ H, ou -LA- est un groupe (C5-C8) cycloalkylène ou un groupe (C6-C 14) arylène,

-X2 est un groupe réactif,

-Chroml, -Chrom2 et -Chrom3 sont identiques ou différents et choisis indépendamment les uns des autres parmi les groupes de formule (Bl) :

- -Rl, -R2, -R3, -R4, et -R5 sont tels que définis pour le groupe de formule (B),

-Z- représente -C- ou -P(Rz)-, et

-Rz représente un groupe phényle, benzyle, méthyle, éthyle, propyle, n-butyle, sec-butyle, iso-butyle ou tert-butyle, et de préférence un groupe phényle ou méthyle, étant entendu que si -A- est -CH(LA-X2)-, alors aucun des groupes -Chroml, -Chrom2 et -Chrom3 de formule (Bl) ne comprend de groupe -XI .

De préférence, dans les complexes de formule (I), -A- représente -CH ₂ -, et/ou -Z- représente -C-, et/ou -R4 représente un hydrogène, et/ou -R5 représente un hydrogène dans -Chroml, -Chrom2 et -Chrom3.

De préférence, dans les complexes de formule (I), -R4 et -R5 représentent des hydrogènes dans -Chroml, -Chrom2 et -Chrom3.

Selon un mode de réalisation préféré, les complexes de lanthanide (I) sont tels que -A- représente -CH ₂ -, -Z- représente -C- et -R4 = -R5 = H dans -Chroml, -Chrom2 et -Chrom3.

Selon un mode de réalisation, -Chroml, -Chrom2 et -Chrom3 sont identiques dans les complexes (I). Ces complexes seront nommés (la). Ces complexes (la) présentent alors l'avantage d'être plus faciles à synthétiser.

Selon un mode de réalisation, dans les complexes (la), -Rl représente un groupe électrodonneur -El tel que défini pour les groupes de formule (B), notamment choisi parmi les groupes -OR10 et -NH(CO)R10, -RIO étant tel que défini pour les groupes de formule (B). De préférence, -Rl représente un groupe -OR10, et en particulier -OMe ou -OPEG, dans les complexes (la).

Selon un mode de réalisation, dans les complexes (la), -R2 est un groupe -R7 tel que défini pour les groupes de formule (B). De préférence, dans les complexes (la), -R2 représente -Me.

Selon un mode de réalisation, dans les complexes (la), -R3 est avantageusement un hydrogène ou un groupe -R8 tel que défini pour les groupes de formule (B), préférentiellement -Me. De préférence, -R3 est un hydrogène dans les complexes (la). Selon un mode de réalisation particulier des complexes de formule (I), -Chroml, -Chrom2 et -Chrom3 sont identiques et tels que -RI représente un groupe -El, notamment choisi parmi les groupes -ORIO et -NH(CO)R10, -R2 est un groupe -R7, et en particulier -Me, et -R3 est un hydrogène ou un groupe -R8, de préférence -Me, -El, -R7, -R8 et -RIO étant tels que définis pour les groupes de formule (B).

Selon un mode de réalisation particulier des complexes de formule (I), -Chroml, -Chrom2 et -Chrom3 sont identiques et tels que -RI représente un groupe -ORIO, -R2 est un groupe -R7, et en particulier -Me, et -R3 est un hydrogène, -R7 et -RIO étant tels que définis pour les groupes de formule (B).

Selon un autre mode de réalisation, -Chroml et -Chrom2 sont identiques et -Chrom3 est différent de -Chroml et de -Chrom2. Ces complexes seront nommés (Ib).

Selon un mode particulier de réalisation, les complexes de lanthanide (Ib) sont tels que :

-A- représente -CH ₂ -,

-Chroml et -Chrom2 sont identiques et sont de structure (B2) :

(B2)

avec -RI ¹ , -R2 ¹ , -R3 ¹ , -R4 ¹ , -R5 ¹ et -Z ¹ - tels que définis respectivement pour RI, -R2, -R3, -R4, -R5 et -Z- dans les groupes de formule (B), étant entendu que Chroml et -Chrom2 ne comprennent pas de groupe réactif, et

- -Chrom3 est différent de -Chroml et de -Chrom2 et est de structure (B3) :

avec -RI ² , -R2 ² , -R3 ² , -R4 ² , -R5 ² et -Z ² - tels que définis respectivement pour RI, -R2, -R3, -R4, -R5 et -Z- dans les groupes de formule (B), étant entendu que -Chrom3 comprend un groupe réactif. Selon un mode de réalisation, dans les complexes (Ib), -RI ¹ représente un groupe -OR10 ¹ , de préférence -OMe ou -OPEG, ou un groupe -NH(CO)R10 ¹ , -RIO ¹ étant tel que défini pour -RIO dans le groupe de formule (B). De préférence, dans les complexes (Ib), -RI ¹ représente un groupe -OR10 ¹ , de préférence -OMe ou -OPEG, -RIO ¹ étant tel que défini pour -RIO dans le groupe de formule (B).

Dans les complexes (Ib), -RI ² représente avantageusement un groupe -NH(CO)R10 ² , ou, de préférence -OR10 ² , avec RIO ² qui est un groupe -0(C1-C6) alkyle substitué par un groupe -XI.

Dans les complexes (Ib), -R2 ¹ et -R2 ² , identiques ou différents, représentent avantageusement un groupe -R7 tel que défini pour les groupes de formule (B). De préférence, dans les complexes (Ib), -R2 ¹ et -R2 ² sont identiques et représentent, préférentiellement, -Me.

Dans les complexes (Ib), -R3 ¹ et -R3 ² , identiques ou différents, représentent un hydrogène ou un groupe -R8 tel que défini pour les groupes de formule (B). De préférence, dans les complexes (Ib), R3 ¹ et -R3 ² sont identiques et représentent -Me ou, préférentiellement, un hydrogène.

Selon un mode de réalisation particulier, dans les complexes (Ib), -RI ¹ représente un groupe

-OR10 ¹ , de préférence -OMe ou -OPEG, et -RI ² représente -OR10 ² , de préférence un groupe - 0(C1-C6) alkyle substitué par un groupe -XI, -RIO ¹ et -RIO ² étant tel que défini pour -RIO dans les groupes de formule (B).

Selon un mode de réalisation particulier, dans les complexes (Ib), -R2 ¹ et -R2 ² sont identiques et représentent un groupe -R7, et -R3 ¹ et -R3 ² sont identiques et représentent un hydrogène ou un groupe -R8 tel que -Me, les groupes -R7 et -R8 étant tels que définis pour les groupes de formule (B).

Selon un mode de réalisation particulier, dans les complexes (Ib), -R2 ¹ et -R2 ² sont identiques et représentent un groupe -R7 tel que défini pour les groupes de formule (B), et préférentiellement -Me, et -R3 ¹ et -R3 ² sont identiques et représentent un hydrogène.

Selon un mode de réalisation particulier des complexes de formule (Ib), -RI ¹ représentent un groupe -OR10 ¹ , de préférence -OMe ou -OPEG, -RI ² représente un groupe -OR10 ² , de préférence un groupe -0(C1-C6) alkyle substitué par un groupe -XI, -R2 ¹ et -R2 ² sont identiques et représentent un groupe -R7, de préférence -Me et -R3 ¹ et -R3 ² sont identiques et représentent un hydrogène, -RI ¹ , -RI ² , -R2 ¹ , -R2 ² , R3 ¹ , -R3 ² et -RIO ¹ tels que définis respectivement pour -RI, - RI, -R2, -R2, R3, -R3 et -RIO pour les groupes de formule (B).

Avantageusement, dans les groupes de formule (B), un des groupes -R2 ou -R3 représente un hydrogène. De même, dans les groupes de formule (Bl), un des groupes -R2 ¹ ou -R3 ¹ représente avantageusement un hydrogène. De même, dans les groupes de formule (B2), un des groupes - R2 ² ou R3 ² représente avantageusement un hydrogène.

En particulier, -Chroml, -Chrom2 et -Chrom3 sont identiques ou différents, et choisis indépendamment les uns des autres parmi les groupes de formule (B4) suivante :

avec -R7 et -El tels que définis pour les groupes de formule (B), -R7 représentant de préférence -Me, et -El représentant de préférence un groupe -OR10 ou -NH(CO)R10 éventuellement substitué par un groupe -Y ou un groupe -XI, RIO étant tel que défini pour les groupes de formule (B).

Selon un mode de réalisation particulier, les complexes de lanthanide (I) selon l'invention sont tels que :

- -RI ¹ est un groupe -0(C1-C6) alkyle substitué par un groupe -Y,

-RI ² est un groupe -0(C1-C6) alkyle substitué par un groupe -XI,

- -R2 ¹ et -R2 ² , identiques ou différents, représentent un groupe -R7 tel que défini pour les groupes de structure (B), et sont de préférence identiques et représentent, préférentiellement, un groupe (C1-C6) alkyle, notamment -Me, et

- -R3 ¹ , -R3 ² , -R4 ¹ , -R4 ² , -R5 ¹ et -R5 ² sont des hydrogènes.

Selon ce mode particulier de réalisation, les complexes de lanthanide sont de formule (Ib') :

ooc R7 ¹

avec A tel que défini pour les complexes (I), -R7 ¹ et -R7 ² tels que définis pour -R7 pour les groupes de formule (B), -RIO ¹ représentant un groupe (C1-C6) alkyle substitué par un groupe -XI et -RIO ² représentant un groupe (C1-C6) alkyle substitué par un groupe -Y. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, les complexes de lanthanide (I) sont choisis parmi les complexes suivants :

Un complexe de lanthanide particulièrement préféré est le complexe (Ia.2).

Selon un second mode de réalisation, les complexes de lanthanide selon l'invention sont choisis parmi les complexes de lanthanide de formule (II) : _{R1 1} Chrom4 _{R 2}

Chrom6 Chrom5

/ \ _ _

-OOC coo- dans lesquels :

Ln est un lanthanide choisi parmi Tb et Dy,

-Rll et -R12, identiques ou différents, sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi -XI, -Y, un atome d'hydrogène ou un groupe (C1-C6) alkyle,

-Chrom4-, -ChromS-, et -Chrom6-, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe de formule (B), tel que défini dans le cadre de l'invention.

De préférence, -R4 et/ou -R5 représente un hydrogène dans -Chrom4-, -ChromS- et -Chrom6-. De préférence, -R4 et -R5 représentent des hydrogènes dans -Chrom4-, -ChromS- et -

Chrom6-.

Selon un mode de réalisation, -Chrom4-, -ChromS- et -Chrom6- sont identiques. Ces complexes seront nommés (Ha).

Dans les complexes (Ha), -RI représente avantageusement un groupe électrodonneur -El tel que défini pour les groupes de formule (B), notamment choisi parmi les groupes -OR10 et -NH(CO)R10, -RIO étant tel que défini pour les groupes de formule (B). De préférence, -RI représente un groupe -OR10, et en particulier -OMe ou -OPEG dans les complexes (Ha).

Dans les complexes (Ha), -R2 est avantageusement un groupe -R7 tel que défini pour les groupes de formule (B). De préférence, -R2 représente -Me dans les complexes (Ha).

Dans les complexes (Ha), -R3 est avantageusement un hydrogène ou un groupe -R8 tel que défini pour les groupes de formule (B), préférentiellement -Me. De préférence, -R3 est un hydrogène dans les complexes (Ha).

Selon un autre mode de réalisation, les complexes de lanthanide (II), nommés (Ilb), sont tels que :

-ChromS- et -Chrom6- sont identiques et sont de structure (B10) :

avec -Rl ³ , -R2 ³ , -R3 ³ , -R4 ³ , et -R5 ³ tels que définis respectivement pour -RI, -R2, -R3, -R4, et -R5 dans les groupes de structure (B), étant entendu que -ChromS- et -Chrom6- ne comprennent pas de groupe réactif, et

-Chrom4- est différent d -ChromS- et de -Chrom6- et est de structure (Bll) :

avec -Rl ⁴ , -R2 ⁴ , -R3 ⁴ , -R4 ⁴ et -R5 ⁴ tels que définis respectivement pour -Rl, -R2, -R3, -R4 et -R5 dans les groupes de structure (B), étant entendu que -Chrom4- comprend un groupe réactif -XI.

Selon un autre mode de réalisation, les complexes de lanthanide (II), nommés (Ile) sont tels

-Chrom4- et -Chrom6- sont i structure (B12) :

(B12)

avec -Rl ⁵ , -R2 ⁵ , -R3 ⁵ , -R4 ⁵ et -R5 ⁵ tels que définis respectivement pour -Rl, -R2, -R3, -R4 et -R5 dans les groupes de formule (B), étant entendu que -Chrom4- et -Chrom6- ne comprennent pas de groupe réactif, et

- -ChromS- est différent de -Chrom4- et de -Chrom6- et est de structure (B13) :

avec -RI ⁶ , -R2 ⁶ , -R3 ⁶ , -R4 ⁶ et -R5 ⁶ tels que définis respectivement pour -RI, -R2, -R3, -R4 et -R5 dans les groupes de formule (B), étant entendu que -ChromS- comprend un groupe réactif -XI.

Avantageusement, dans les complexes (Ilb) et (Ile), -RI ³ et -RI ⁵ , lorsqu'ils sont présents, sont des groupes -0(C1-C6) alkyle ou -NH(CO)(Cl-C6) alkyle éventuellement substitué par un groupe -Y. De préférence dans les complexes (Ilb) et (Ile), -RI ³ et -RI ⁵ sont des groupes -0(C1-C6) alkyle éventuellement substitué par un groupe -Y, et en particulier -OMe ou -OPEG.

Avantageusement dans les complexes (Ilb) et (Ile), -RI ⁴ et -RI ⁶ , lorsqu'ils sont présents, représentent un groupe -0(C1-C6) alkyle ou NH(CO)(Cl-C6) alkyle substitué par un groupe -XI. De préférence dans les complexes (Ilb) et (Ile), -RI ⁴ et -RI ⁶ sont des groupes -0(C1-C6) alkyle éventuellement substitué par un groupe -XI.

Dans les complexes (Ilb) et (Ile), R2 ³ , -R2 ⁴ , -R2 ⁵ et -R2 ⁶ , lorsqu'ils sont présents, peuvent être identiques ou différents, et représenter un groupe -R7 tel que défini pour les groupes de formule (B). De préférence dans les complexes (Ilb) et (Ile), R2 ³ , -R2 ⁴ , -R2 ⁵ et -R2 ⁶ , lorsqu'ils sont présents, sont identiques et représentent, préférentiellement -Me.

Dans les complexes (Ilb) et (Ile), R2 ³ , -R2 ⁴ , -R2 ⁵ , et -R2 ⁶ , lorsqu'ils sont présents, peuvent être identiques ou différents et représenter un hydrogène ou un groupe -R8 tel que défini pour les groupes de formule (B), préférentiellement -Me. De préférence, R2 ³ , -R2 ⁴ , -R2 ⁵ , -R2 ⁶ , lorsqu'ils sont présents, sont identiques et représentent, préférentiellement un hydrogène.

Dans les complexes (Ilb) et (Ile), R3 ³ , -R3 ⁴ , -R3 ⁵ et -R3 ⁶ , lorsqu'ils sont présents, peuvent être identiques ou différents et représenter un hydrogène ou un groupe -R8 tel que défini pour les groupes de formule (B), préférentiellement -Me. De préférence, R3 ³ , -R3 ⁴ , -R3 ⁵ et -R3 ⁶ , lorsqu'ils sont présents, sont identiques et représentent un hydrogène.

De préférence dans les complexes (Ilb) et (Ile), -R3 ³ , -R3 ⁴ , -R3 ⁵ et -R3 ⁶ , lorsqu'ils sont présents, sont identiques et représentent avantageusement des hydrogènes, et -R2 ³ , -R2 ⁴ , -R2 ⁵ et - R2 ⁶ , lorsqu'ils sont présents, sont identiques et représentent chacun un groupe -R7, tel que défini pour les groupes de formule (B), de préférence -Me. En particulier, Chrom4-, -ChromS- et -Chrom6- sont identiques ou différents, et choisis indépendamment les uns des autres parmi les groupes de formule (B14) suivante :

(B14),

avec -R7 et -El tels que définis pour les groupes de formule (B), et -R7 représentant de préférence -Me et -El représentant de préférence un groupe -OR10 ou -NCO(NR10) éventuellement substitué par un groupe -Y ou un groupe -XI, RIO étant tel que défini pour les groupes de formule (B).

Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, les complexes de lanthanide (Ilb) sont tels que :

- -RI ³ est un groupe -0(C1-C6) alkyle éventuellement substitué par un groupe -Y,

-RI ⁴ est un groupe -0(C1-C6) alkyle substitué par un groupe -XI,

- -R2 ³ et -R2 ⁴ sont identiques ou différents, de préférence identiques, et représentent un groupe -R7, et en particulier un groupe (C1-C6) alkyle, et

- -R3 ³ , R3 ⁴ ,-R4 ³ ,-R4 ⁴ , -R5 ³ et -R5 ⁴ sont des hydrogènes.

Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, les complexes de lanthanide (Ile) sont tels que :

- -RI ⁵ est un groupe -0(C1-C6) alkyle éventuellement substitué par un groupe -Y,

-RI ⁶ est un groupe -0(C1-C6) alkyle substitué par un groupe -XI,

- -R2 ⁵ et -R2 ⁶ sont identiques ou différents, de préférence identiques, et représentent un groupe -R7, et en particulier un groupe (C1-C6) alkyle, et

- -R3 ⁵ , R3 ⁶ ,-R4 ⁵ ,-R4 ⁶ , -R5 ⁵ et -R5 ⁶ sont des hydrogènes.

L'invention a également pour objet les agents chélatants correspondant aux composés de lanthanide définis dans le cadre de l'invention, et ce quelle que soit leur variante de réalisation décrite. L'invention concerne aussi de tels macrocycles chélatants sous leur forme protégée selon la formule (III) et à de tels ligands chélatants sous leur forme protégée selon la formule (IV).

L'invention concerne également les agents chélatants de formule (III) :

avec -Chroml', -Chrom2', et -Chrom3', identiques ou différents, et choisis indépendamment les uns des autres parmi les groupes de formule (B5) :

avec RI, R2, R3, R4 et R5 tels que définis pour les complexes de lanthanide (I), et -R13 un groupe protecteur des fonctions acide (i.e. -Z(O)OH), tel qu'un alkyle, et notamment un méthyle, ou sous la forme d'un sel.

L'invention a aussi pour objet les agents chélatants de formule (IV) :

_{R1 1} Chrom4 _{R 2}

RaOOC COORa

Chrom6 Chrom5

/ \

R13COO COOR13 ( _j y)

avec -Chrom4-, -ChromS- et -Chrom6- tels que définis pour les complexes de lanthanide de formule (II), et -R13 un groupe protecteur des fonctions acide, tel qu'un alkyle, et notamment un méthyle, ou sous la forme d'un sel.

La préparation des complexes (I) et (II) selon l'invention met en œuvre des techniques et des réactions classiques connues de l'homme de l'art. Ils peuvent, notamment, être obtenus selon des procédés analogues à ceux décrits dans les exemples.

Les réactions de complexation sont, en général, menées avec un sel du lanthanide souhaité, notamment un chlorure, un nitrate ou un triflate, dans un solvant dissociant, notamment un alcool tel que le méthanol, le THF ou l'acétonitrile, ou encore dans un mélange de solvants, en présence généralement d'un carbonate, à une température comprise entre 25 et 80 °C, pendant une durée variant de 30 minutes à quelques heures. Les composés (III) et (IV) sont d'accès relativement aisé et classique, et peuvent être obtenus à un coût de préparation raisonnable. Les réactifs sont en effet disponibles dans le commerce ou facilement accessibles.

Les groupes fonctionnels éventuellement présents dans les composés de formule (III) et (IV), et dans les intermédiaires réactionnels, peuvent être protégés au cours des synthèses, soit sous forme permanente soit sous forme temporaire, par des groupes protecteurs qui assurent une synthèse univoque des composés attendus. Les réactions de protection et de déprotection sont effectuées selon des techniques bien connues de l'homme de l'art. Par groupe protecteur temporaire, on entend les groupes protecteurs tels que ceux décrits dans Protective Groups in Organic Synthesis, Greene T. W. et Wuts P. G. M., ed. John Wiley & Sons, 2006, et dans Protecting Groups, Kocienski P. J. 1994, Georg Thieme Verlag.

Selon la formule (I) est décrite la famille de complexes de lanthanide issus de la coordination d'un ligand macrocyclique de formule (III) après déprotection et libération des fonctions acide - Z(0)OH (acide dialkyle ou diaryle phosphinique lorsque -Z- = -P(Rz)- ou acide carboxylique lorsque -Z- = -C-).

Selon un premier mode de réalisation, -Chroml', -Chrom2', et -Chrom3' sont identiques. Selon ce mode de réalisation, l'agent chélatant de formule (III) peut être obtenu par alkylation d'un cycle de type TACN.3HC1 avec un intermédiaire de formule (B6) :

avec -A-, -RI, -R2, -R3, -R4,-R5 et -R13 tels que définis pour les agents chélatants (III), et

-LG représentant un groupe partant.

Par « groupe partant », on entend un groupe apte à se détacher du reste de la molécule dans les conditions réactionnelles, de sorte qu'un autre réactif réagisse avec le reste de la molécule pour former une nouvelle liaison avec l'atome de carbone portant initialement le groupe partant. La nature du groupe partant n'est pas limitée, et tout groupe partant connu de l'homme du métier peut convenir. A titre d'exemples, on peut citer les sulfonates, comme le mésylate ou le tosylate.

L'intermédiaire (B6) peut être préparé, selon des techniques bien connues de l'homme du métier, à partir de l'intermédiaire (B7) suivant :

avec -RI, -R2, -R3, -R4, -R5, -R13 et -Z- tels que définis pour l'intermédiaire (B6). L'intermédiaire (B7) peut être synthétisé à partir du réactif (B9), par formation d'un acide boronique (B8), suivie d'une réaction de Suzuki avec un dialkyl-4-halogéno-2,6- pyridinedicarboxylate :

avec -RI, -R2, -R3, -R4 et -R5 tels que définis pour l'intermédiaire (B7) et -hal représentant un halogène, comme -Br, -Cl ou -I.

Selon un second mode de réalisation, -Chroml' et -Chrom2' sont identiques, et -Chrom3' est différent de -Chroml' et -Chrom2'. Selon ce mode de réalisation, l'agent chélatant de formule (III) peut être préparé par alkylation de l'intermédiaire (III ') avec l'intermédiaire de formule (B6"), avec -RI", -R2", -R3", -R4", -R5", -R13", -Z" et -LG" tels que définis respectivement pour -RI, -R2, -R3, -R4, -R5, -R13, -Z et -LG pour l'agent chélatant de formule (III) :

(m)

L'intermédiaire (III ') peut être préparé par alkylation d'un cycle de type TACN.3HC1 avec l'intermédiaire de formule (Β6'), avec -RI', -R2', -R3', -R4', -R5', -R13', -Z' et -LG' tels que définis respectivement pour -RI, -R2, -R3, -R4, -R5, -R13, -Z et -LG pour l'agent chélatant

(III) :

Avantageusement, une des trois fonctions aminé du cycle de type TACN.3HC1 est protégée, via un groupe protecteur des fonctions aminé, préalablement à l'étape d'alkylation avec l'intermédiaire de formule (Β6') ; une étape de déprotection subséquente permettant de générer l'intermédiaire (ΙΠ').

Les intermédiaires (Β6') et (B6") peuvent être obtenus de manière analogue à l'intermédiaire

(B6).

Selon la formule (II) est décrite la famille de complexes de lanthanide issus de la coordination d'un ligand chélatant de formule (IV) après déprotection et libération des fonctions acide carboxylique. Pour la synthèse de ces composés, on pourra notamment se référer aux demandes WO 2013/026790 et WO 2013/092992 de Takalo.

L'invention concerne enfin un procédé de détection d'une biomolécule comprenant la détection de la luminescence d'un conjugué de ladite biomolécule avec un complexe luminescent tel que défini dans le cadre de l'invention, comprenant un groupe réactif, et obtenu par couplage de ladite bio molécule avec ledit complexe luminescent sur son groupe réactif.

La figure 1 présente le spectre d'absorption et d'émission du complexe Ia.4 dans l'eau à température ambiante.

La figure 2 présente le spectre d'émission du complexe Ia.6 dans un mélange méthanol/éthanol 4 : 1 à température ambiante.

La figure 3 représente des images de cellules fixées au PFA et marquées par le complexe Ia.2

(excitation biphotonique _ex = 720 nm), obtenues avec l'émission dans le visible du complexe Ia.2 (image de gauche) ou obtenue en lumière transmise DIC (image de droite).

La figure 4 représente des images de cellules fixées au PFA et marquées par le complexe Ia.5 (excitation biphotonique Àe _X = 720 nm), obtenues avec l'émission dans le visible du complexe Ia.5 (images a et c) ou obtenue en lumière transmise DIC (images b et d).

Les exemples ci-dessous permettent d'illustrer l'invention, mais n'ont aucun caractère limitatif.

Exemples Les abréviations ci-dessous sont utilisées dans les exemples qui vont suivre :

DCM : dichlorométhane ; DMF : diméthylformamide ;DMSO : diméthylsulfoxide ; Ms : mésyle ; n.d. : non déterminé ; PBS : phosphate buffered saline ; PEG : polyéthylène glycol ; PFA : paraformaldéhyde ; quant. : quantitatif ; TACN : Triazacyclononane ; THF : Tétrahydrofurane ; Ts : tosyle

Informations Générales :

Les spectres RMN (1H ¹³ C) ont été enregistrés sur un appareil Bruker Avance à une fréquence de 300 MHz ou 500,10 MHz, et 75 MHz ou 125,75 MHz, pour ^l H et ¹³ C respectivement. Les déplacements chimiques (δ) sont exprimés en partie par million (ppm) par rapport au triméthylsilane utilisé comme référence interne et en utilisant les solvants indiqués. Les constantes de couplage (J) sont exprimées en Hz et les notations suivantes sont utilisées : s (singulet), br (broad), d (doublet), t (triplet), dd (doublet de doublet), m (multiplet). Les spectres de masse haute résolution ont été enregistrés au centre commun de spectrométrie de masse de Lyon (Université Claude Bernard Lyon, Lyon, France) sur un appareil MicroTOFQII équipé avec une source ESI positive. Les chromatographies sur couche mince ont été réalisées sur des plaques de gel de silice sur feuilles d'aluminium (silica gel, Fluka) et révélées à l'aide d'une lampe UV (λ = 254 ou 365 nm) ou bien par coloration. Les purifications ont été réalisées par colonne chromatographique sur gel de silice (silica gel 0,035-0,070 mm, 60A). Les solvants utilisés pour les réactions ont été achetés chez Aldrich ou Acros Organics en tant que solvants secs ou extra sec et stockés sur tamis moléculaire 3Â et les réactifs utilisés ont été achetés chez Aldrich, Acros Organics ou Alfa Aesar. Les spectres d'absorption UV/Vis ont été enregistrés sur un spectromètre JASCO V670 ; les spectres d'émission sur un spectrofluorimètre JOBIN-YVON fluorolog 3. Les temps de rétention ont été réalisés sur un appareil Agilent Technologies 1260 équipé d'une colonne aWaters XBridge RP-C18 (3.5 μιη, 4.6 x 100 mm). Le système chromatographique utilisé est formiate d'ammonium 0.25M-MeCN (v/v) comme éluants : isocratique 15% MeCN (2 min), gradient linéaire 15 à 100% MeCN (16 min), isocratique 100% MeCN (4 min), à un débit de lmL.min ^"1 , détection UV à 210 et 252 nm. Les tests d'imagerie cellulaire ont été réalisés à partir d'une solution concentrée en complexe dans le DMSO afin d'obtenir une concentration finale en complexe de l'ordre de 1.10 ^"5 M dans le milieu cellulaire (PBS) avec < 1% DMSO. Les cellules T24 sont préalablement fixées au PFA. Les spectres d'absorption biphotonique ont été réalisés avec un microscope confocal à balayage laser LSM710 NLO (Cari Zeiss).

A. PREPARATION DES COMPLEXES

Exemple 1 : Complexes d'Europium Ia-Ie

Schéma 1 : Synthèse des intermédiaires 5a-5e )

0%)

5a (85%) a (83%) 3a (5 %)

5b (91 %) b (90%) 3b (72%)

5c (quant.) c (58%) 3c ( 7%)

5d (quant.) d (98%) 3d (39%)

5e (quant.) 4e (56%) 3e (63%)

Les composés la (4-bromo-3-méthylanisole), le (l-bromo-3,5-diméthoxybenzène) et 2e (acide 2,4-dimethoxyphenylboronique) sont disponibles commercialement. Les composés lb et ld sont préparés à partir du phénol correspondant, tandis que le composé le est préparé à partir de l'aniline correspondante. Les acides boroniques 2a-2d sont ensuite obtenus selon une procédure bien connue de l'homme du métier. Les composés 3a-e sont obtenus par une réaction de couplage de Suzuki avec du diméthyl-4-iododipicolinate. Puis, une réaction de réduction puis de mésylation permet d'isoler les composés 5a-e.

Schéma 2 : Synthèse des complexes Ia-Ie

la Ri = OM e , F?2= e, R ₃ =H (quant.) 7a

Ib Pi = OPeg. P;- e . P ₃ =H (quant.) 7b

lC R^N H COM e, R ₂ =Me , R ₃ =H (83 %) 7c

ld R, = CPeg, R ₂ =R ₃ =Me (90%) 7d

le R ₁ = R ₂ =OM e , R ₃ =H (85 %) 7e

Une réaction d'alkylation du TACN.3HC1 par les dérivés mésylates 5a-e, dans des conditions classiques d'alkylation, suivie d'une étape de déprotection des fonctions acide carboxylique, permettent d'obtenir les com lexes de lanthanide Ia-Ie.

Composé lb lb

Le 4-bromo-3-methylphenol (1.0 g, 5.3 mmol) et K2CO3 (3,7 g, 27 mmol) sont séchés sous vide puis solubilisés dans la DMF sèche (20 mL). Après 30 minutes, le triethylene glycol methyl ether tosylate (2.55 g, 8 mmol) est ajouté dans le schlenck. Le mélange réactionnel est laissé sous agitation à 80°C pendant 5 jours. La solution est ensuite filtrée sur fritté P3, rincée avec CH2CI2 et concentrée sous vide. Le milieu est dilué dans AcOEt/Et20 et lavée avec H2O et NaCLat. La phase organique est séchée sur Na ₂ S0 ₄ , filtrée et évaporée. Le produit brut est ensuite purifié sur colonne chromatographique (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /AcOEt, 90/10 à 80/20) pour donner le produit pur sous forme d'huile incolore (1.62 g, 91%). Rf (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /AcOEt, 80/20) = 0.53 ; *H NMR (300 MHz, CDCb, δ): 7.38 (d, 1H, J = 8.7 Hz, H ⁶ ), 6.81 (d, 1H, J = 2.9 Hz, H ³ ), 6.62 (dd, 1H, J ₃ = 8.7 Hz, J ₄ = 2.9 Hz, H ⁵ ), 4.08 (t, 2H, J= 4.6 Hz, H ⁸ ), 3.83 (t, 2H, J= 4.6 Hz, H ⁹ ), 3.75-3.53 (m, 8H, H ¹⁰ /H ⁿ /H ¹² /H ¹³ ), 3.38 (s, 3H, H ¹⁴ ), 2.35 (s, 3H, H ⁷ ) ; ¹³ C NMR (100 MHz, CDC1 ₃ , δ): 158.2 (C ⁴ ), 138.9 (C ² ), 132.9 (C ⁶ ), 1 17.4 (C ³ ), 1 15.8 (C ¹ ), 1 13.8 (C ⁵ ), 72.1 (C ¹³ ), 71.0 (C ¹⁰ ), 70.8 (C ^{1 1} ), 70.8 (C ¹² ), 69.8 (C ⁹ ), 67.8 (C ⁸ ), 59.2 (C ¹⁴ ), 23.3 (C ⁷ ) ; HRMS (ESI) calculée pour Ci ₄ H ₂ 0520 [M+Na] ⁺ .

Dans un ballon, l'anhydride acétique (305 μί, 3.22 mmol) est ajouté à une solution de 4-bromo-3-methylaniline (500 mg, 2.69 mmol) dans CH2CI2 sec sous Argon. Le mélange est agité à température ambiante sous Argon jusqu'à la réaction complète (suivi CCM, éther de pétrole/acétate d'éthyle, 80/20). Après 4h, le mélange est lavé avec H ₂ 0 (3x). La phase organique est séchée sur Na ₂ S0 ₄ , filtrée sur coton et évaporée pour obtenir un solide blanc (506 mg, 82%). Rf (S1O2, CH ₂ Cl ₂ /AcOEt, 80/20) = 0.46 ; *H NMR (300 MHz, CDCI3, δ): 7.45-7.42 (m, 2H, H ⁶ /H ³ ), 7.19 (dd, 1H, J ₃ = 8.6 Hz, J ₄ = 2.4 Hz, H ⁵ ), 2.36 (s, 3H, H ⁷ ), 2.16 (s, 3H, H ⁹ ) ; ¹³ C NMR (75 MHz, CDCI3, δ): 169.0 (C ⁸ ), 138.5 (C ⁴ ), 137.2 (C ¹ ), 132.6 (C ³ ), 122.4 (C ⁶ ), 1 19.6 (C ² ), 1 19.2 (C ⁵ ), 24.5 (C ⁹ ), 23.1 (C ⁷ ) ; HRMS (ESI) calculée pour C ₉ HnBrNO 228.0024. Ex 228.0019 [M+H] ⁺ .

Composé ld ld

Le 4-bromo-3,5-dimethylphenol (1.30 g, 6.46 mmol) et K ₂ C0 ₃ (4.46 g, 9.68 mmol) sont séchés sous vide puis solubilisés dans la DMF sèche (12 mL). Un bullage d'Argon est effectué pendant 10 minutes et le triethylene glycol methyl ether tosylate (3.08 g, 9.68 mmol) est ajouté dans le schlenck. Le mélange réactionnel est laissé sous agitation à 80°C pendant 3 jours. Une extraction CH2CI2/H2O est ensuite effectuée, puis la phase organique est séchée avec NaCLat et Na ₂ S0 ₄ , filtrée et évaporée. Le produit brut est ensuite purifié sur colonne chromatographique (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /AcOEt, 100/0 à 80/20) pour donner une huile du produit pur (1.5 g, 67%). R _f (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /AcOEt, 95/5) = 0.38 ; *H NMR (300 MHz, CDCb, δ): 6.66 (s, 2H, H ³ ), 4.07 (t, 2H, J= 4.7 Hz, H ⁸ ), 3.82 (t, 2H, J= 4.7 Hz, H ⁹ ), 3.74-3.52 (m, 8H, H ¹⁰ /H ⁿ /H ¹² /H ¹³ ), 3.37 (s, 3H, H ¹⁴ ), 2.36 (s, 6H, H ⁷ ) ; ¹³ C NMR (75 MHz, CDCb, δ): 157.4 (C ⁴ ), 139.2 (C ¹ ), 1 18.5 (C ^2/6 ), 1 14.7 (C ^3/5 ), 72.1 (C ¹³ ), 71.0 (C ¹⁰ ), 70.8 (C ^{1 1} ), 70.7 (C ¹² ), 69.8 (C ⁹ ), 67.7 (C ⁸ ), 59.2 (C ¹⁴ ), 24.1 (C ⁷ ) ; HRMS (ESI) calculée pour Ci ₅ H ₂₃ BrNa0 ₄ 369.0672. Exp 369.0664 [M+Na] ⁺ .

Composé 2a

Le composé 2a a été préparé selon le protocole décrit dans "Substituent Effects on Oxidation- Induced Formation of Quinone Methidesfrom Arylboronic Ester Precursors ", Sheng Cao, Robin Christiansen, and Xiaohua Peng, Chem. Eur. J, 2013, 19, 9050 - 9058.

Composé 2b 2b

L'acétate de potassium sec (442 mg, 8.46 mmol) est solubilisé dans le DMSO sec (15 mL) sous Argon puis le bis(dipicolinato)diboron (572 mg, 2.25 mmol) et lb (500 mg, 1.50 mmol) sont ajoutés. La solution est placée sous bullage d'Argon pendant 20 minutes puis PdCl ₂ (dppf) ₂ (77 mg, 0.1 1 mmol) est ajouté. Le mélange réactionnel est mis à chauffer à 90°C sous Argon et sous agitation pendant 16h. Une extraction en série H ₂ 0/Et ₂ 0 est ensuite effectuée. Les phases organiques sont rassemblées, lavées avec NaCLat, séchées sur Na ₂ S0 ₄ , filtrées et évaporées sous vide. Le produit brut est ensuite purifié sur colonne (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /AcOEt, 90/10 à 80/20) afin d'obtenir le produit pur sous forme d'huile jaune (516 mg, 90%). Rf (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /AcOEt, 80/20) = 0.57 ; *H NMR (500 MHz, CDCb, δ): 7.69 (d, 1H, j = 8.1 Hz, H ⁶ ), 6.72-6.69 (m, 2H, H ³ /H ⁵ ), 4.13 (t, 2H, j= 4.7 Hz, H ⁸ ), 3.85 (t, 2H, j= 4.7 Hz, H ⁹ ), 3.75-3.53 (m, 8H, H ¹⁰ /H ⁿ /H ¹² /H ¹³ ), 3.38 (s, 3H, H ¹⁴ ), 2.50 (s, 3H, H ⁷ ), 1.32 (s, 12H, H ¹⁶ ) ; ¹³ C NMR (125 MHz, CDCb, δ): 161.1 (C ⁴ ), 147.3 (C ² ), 138.0 (C ⁶ ), 120.6 (C ¹ ), 1 16.4 (C ³ ), 1 10.9 (C ⁵ ), 83.3 (C ¹⁵ ), 72.1 (C ¹³ ), 71.0 (C ¹⁰ ), 70.8 (C ^{1 1} ), 70.8 (C ¹² ), 69.9 (C ⁹ ), 67.2 (C ⁸ ), 59.2 (C ¹⁴ ), 25.1 (C ¹⁶ ), 22.6 (C ⁷ ) ; HRMS (ESI) calculée pour C ₂₀ H ₃₃ BNaO ₆ 403.2262. Exp 403.2255 [M+Na] ⁺ . Composé 2c 2c

L'acétate de potassium (515 mg, 5.25 mmol) est mis à séché sous vide/Argon pendant lh puis le bis(pinacolato)diboron (668 mg, 2.63 mmol), le DMSO sec (6 mL) et le (400 mg, 1.75 mmol) sont ajoutés. Un bullage d'Argon dans le mélange est effectué pendant 20 min puis PdCi2(dppf)2.CH2Cl2 (100 mg, 0.12 mmol) est ajouté et le schlenck est fermé. La solution est mise à chauffer à 90° C sous Argon et sous agitation pendant 19h. Après retour à température ambiante, le mélange est filtré sur fritté P3 et rincé avec Et20. On procède ensuite à une extraction en série avec Η2θ/Εΐ2θ. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur Na2S0 ₄ , filtrées sur coton et évaporées. L'évaporation lente du CH2CI2 donne lieu à la formation de cristaux qui sont lavés plusieurs fois au CH2CI2 et séchés sous vide. La RMN ^J H montre l'obtention du produit attendu pur (240 mg, 50%). Rf (S1O2, CH ₂ Cl ₂ /AcOEt, 80/20) = 0.61 ; *H NMR (300 MHz, CDCb, δ): 7.72 (d, 1H J= 8 Hz, H ⁵ ), 7.33 (s, 1H, H ³ ), 7.30 (d, 1H, J= 8 Hz, H ⁶ ), 7.18 (s, 1H, NH), 2.51 (s, 3H, H ⁷ ), 2.16 (s, 3H, H ⁹ ), 1.33 (s, 12H, H ^{1 1} ) ; ¹³ C NMR (75 MHz, CDCb, δ): 168.7 (C ⁸ ), 146.4 (C ² ), 140.3 (C ⁴ ), 137.1 (C ⁶ ), 120.6 (C ³ ), 1 15.9 (C ⁵ ), 83.4 (C ¹⁰ ), 25.1 (C ⁹ ), 25.0 (C ^{1 1} ), 22.4 (C ⁷ ) ; HRMS (ESI) calculée pour Ci ₅ H ₂ 3BN0 ₃ 276.1768. Exp 276.1762 [M+H] ⁺ .

L'acétate de potassium sec (830 mg, 8.46 mmol) est solubilisé dans le DMSO sec (10 mL) sous Argon puis le bis(dipicolinato)diboron (1.07 g, 4.23 mmol) et ld (979 mg, 2.82 mmol) sont ajoutés. La solution est placée sous bullage d'Argon pendant 20 minutes puis PdCi2(dppf)2.CH2Ci2 (161 mg, 0.20 mmol) est ajouté. Le mélange réactionnel est mis à chauffer à 90°C sous Argon et sous agitation pendant 40h. Une extraction en série H2Û/Et20 est ensuite effectuée. Les phases organiques sont rassemblées, lavées avec NaCLat, séchées sur Na2S0 ₄ , filtrées et évaporées sous vide. Le produit brut est ensuite purifié sur colonne chromatographique (S1O2, CH2Ci2/AcOEt, 95/5 à 80/20) afin d'obtenir le produit pur sous forme d'huile (748 mg, 68%). R/(Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /AcOEt, 80/20) = 0.43 ; *H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ , δ): 6.51 (s, 2H, H ³ ), 4.09 (t, 2H, J= 4.7 Hz, H ⁸ ), 3.82 (t, 2H, J= 4.7 Hz, H ⁹ ), 3.74-3.53 (m, 8H, H ¹⁰ /H ⁿ /H ¹² /H ¹³ ), 3.37 (s, 3H, H ¹⁴ ), 2.37 (s, 6H, H ⁷ ), 1.36 (s, 12H, H ¹⁶ ) ; ¹³ C NMR (75 MHz, CDC1 ₃ , δ): 159.7 (C ⁴ ), 144.5 (C ^2/6 ), 113.2 (C ^3/5 ), 83.5 (C ¹⁵ ), 72.1 (C ¹³ ), 70.9 (C ¹⁰ ), 70.8 (C ¹¹ ), 70.7 (C ¹² ), 69.9 (C ⁹ ), 67.1 (C ⁸ ), 59.1 (C ¹⁴ ), 25.0 (C ¹⁶ ), 22.7 (C ⁷ ) ; HRMS (ESI) calculée pour C2iH ₃₅ BNa06417.2423. Exp 417.2417 [M+Na] ⁺ .

Composé 3a

Dans un schlenck, le diméthyl-4-iododipicolinate (300 mg, 0.934 mmol) et l'acide 2-méthyl,4-méthoxyphenylboronic (186 mg, 1.121 mmol) sont solubilisés dans la DMF sèche (15 mL) sous Argon. Après 30 minutes de bullage d'Argon dans le milieu, le fluorure de césium (355 mg, 2.335 mmol) et Pd(PPh ₃ )4 (cat.) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est laissé sous agitation à 90°C sous Argon pendant 17h. Le mélange est ensuite dilué dans CH ₂ C1 ₂ puis extrait avec H ₂ 0. La phase chlorée est évaporée et la phase aqueuse est extraite de nouveau avec AcOEt. La phase organique est lavée avec NaCLat., séchée sur Na ₂ S0 ₄ , filtrée et évaporée sous vide. Le produit brut obtenu est purifié sur 2 colonnes chromatographiques (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /acétone, 90/10 puis Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /AcOEt 98/2 à 95/5) afin d'obtenir le produit pur (159 mg, 54%). R/(Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /acétone, 80/20) = 0.82 ; *H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ , δ): 8.28 (s, 2H, H ^3/5 ), 7.24-7.20 (m, 1H, H ¹² ), 6.87-6.85 (m, 2H, H ⁿ /H ⁹ ), 4.04 (s, 6H, H ¹⁶ ), 3.86 (s, 3H, H ¹⁴ ), 2.32 (s, 3H, H ¹³ ) ; ¹³ C NMR (125 MHz, CDCI3, δ): 165.5 (C ¹⁵ ), 160.5 (C ¹⁰ ), 152.6 (C ⁴ ), 148.4 (C ^2/6 ), 137.0 (C ⁸ ), 131.0 (C ¹² ), 128.8 (C ⁷ ), 121.7 (C ^3/5 ), 116.6 (C ⁹ ), 112.1 (C ¹¹ ), 55.5 (C ¹⁴ ), 53.4 (C ¹⁶ ), 20.8 (C ¹³ ) ; HRMS ESI) calculée CivHnNNaOs 338.0999. Exp 338.0990 [M+Na] ⁺ .

Composé 3b 3b Le dimethyl 4-iodo-2,6-pyridinedicarboxylate sec (344 mg, 1.07 mmol) est solubilisé dans la DMF sèche (12 mL) et 2b (448 mg, 1.18 mmol) est ajouté sous Argon. La solution est placée sous bullage d'Argon pendant 30 minutes puis le fluorure de potassium (205 mg, 3.53 mmol) et Pd(dba)3tBu3PH.BF ₄ (43 mg, 0.08 mmol) sont ajoutés. Le mélange réactionnel est placé à 80°C sous agitation et sous Argon pendant 40h. Une extraction en série AcOEt/H ₂ 0 est ensuite effectuée. Les phases organiques sont lavées avec NaCLat, séchées sur Na ₂ S0 ₄ , filtrées et évaporées sous vide. Le produit brut est ensuite purifié sur colonne chromatographique (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /acétone, 95/5 à 90/10) pour obtenir le produit pur sous forme de solide blanc (343 mg, 72%). Rf (Si0 ₂ ,

CH ₂ Cl ₂ /acétone, 90/10) = 0.45 ; *H NMR (500 MHz, CDCb, δ): 8.26 (s, 2H, H ^3/5 ), 7.19 (d, 1H, J = 8.3 Hz, H ¹² ), 6.87 (d, 1H, J = 2.3 Hz, H ⁹ ), 6.86 (dd, 1H, J ₃ = 8.3 Hz, J ₄ = 2.3 Hz, H ¹¹ ), 4.17 (t, 2H, J = 4.7 Hz, H ¹⁴ ), 4.03 (s, 6H, H ²² ), 3.86 (t, 2H, J = 4.7 Hz, H ¹⁵ ), 3.76- 3.54 (m, 8H, H ¹⁶ /H ¹⁷ /H ¹⁸ /H ¹⁹ ), 3.38 (s, 3H, H ²⁰ ), 2.30 (s, 3H, H ¹³ ) ; ¹³ C NMR (125 MHz, CDCb, δ): 165.5 (C ²¹ ), 159.7 (C ¹⁰ ), 152.6 (C ⁴ ), 148.3 (C ^2/6 ), 136.9 (C ⁸ ), 130.9 (C ¹² ), 130.1 (C ⁷ ), 128.7 (C ^3/5 ), 1 17.3 (C ⁹ ), 1 12.7 (C ¹¹ ), 72.1 (C ¹⁹ ), 71.0 (C ¹⁶ ), 70.9 (C ¹⁷ ), 70.8 (C ¹⁸ ), 69.8 (C ¹⁵ ), 67.7 (C ¹⁴ ), 59.2 (C ²⁰ ), 53.4 (C ²² ), 20.8 (C ¹³ ) ; HRMS (ESI) calculée pour C23H30NO8 448.1966. Exp 448.1959

[M+H] ⁺ .

Composé 3c 3c

2c (200 mg, 0.73 mmol) et le dimethyl 4-iodo-2,6-pyridinedicarboxylate (212 mg, 0.66 mmol) sont préalablement séchés sous vide/ Argon puis la DMF sèche (15 mL) est ajoutée. La solution est dégazée pendant 20 min sous Argon et le fluorure de potassium (126 mg, 2.18 mmol) et Pd(dba)3tBu3PH.BF ₄ (27 mg, 0.05 mmol) sont ajoutés. Le mélange est placé à 80°C sous Argon pendant 3 jours. Après retour à température ambiante, du CH2CI2 est ajouté et la phase organique est lavée avec H ₂ 0 (3x) et NaCl saturé (lx). La phase organique est séchée sur Na ₂ S0 ₄ , filtrée et évaporée sous vide. Après évaporation lente d'un mélange DCM/MeOH, des cristaux sont obtenus et rincés avec un minimum de CH2CI2 afin d'obtenir le produit pur (107 mg, 47%). Rf (S1O2, CH ₂ Cl ₂ /MeOH, 95/5) = 0.55 ; *H NMR (300 MHz, CDCb, δ): 8.25 (s, 2H, H ^3/5 ), 7.96 (s, 1H, NH), 7.55 (s, 1H, H ⁹ ), 7.48 (d, 1H, J= 8.3 Hz, H ¹¹ ), 7.19 (d, 1H, J= 8.3 Hz, H ¹² ), 4.00 (s, 6H, H ¹⁷ ), 2.26 (s, 3H, H ¹³ ), 2.19 (s, 3H, H ¹⁵ ) ; ¹³ C NMR (75 MHz, CDCb, δ): 168.9 (C ¹⁴ ), 165.3 (C ¹⁶ ), 152.3 (C ⁴ ), 148.3 (C ^2/6 ), 139.2 (C ¹⁰ ), 136.2 (C ⁸ ), 133.0 (C ⁷ ), 130.2 (C ¹² ), 128.6 (C ^3/5 ), 121.9 (C ⁹ ), 117.8 (C ¹¹ ), 53.3 (C ¹⁷ ), 24.7 (C ¹⁵ ), 20.6 (C ¹³ ) ; HRMS (ESI) calculée pour C18H19N2O5 343.1288. Ex 343.1289 [M+H] ⁺ .

Composé 3d 3 _d

Le dimethyl 4-iodo-2,6-pyridinedicarboxylate sec (144 mg, 0.45 mmol) est solubilisé dans la

DMF sèche (5 mL) et 2d (195 mg, 0.50 mmol) est ajouté sous Argon. La solution est placée sous bullage d'Argon pendant 20 minutes puis le fluorure de césium (171 mg, 0.11 mmol) et Pd(PPli3)4 (52 mg, 0.05 mmol) sont ajoutés. Le mélange réactionnel est placé à 80°C sous agitation et sous Argon pendant 5 jours. Une extraction en série AcOEt/H ₂ 0 est ensuite effectuée. Les phases organiques sont lavées avec NaCLat, séchées sur Na ₂ S0 ₄ , filtrées et évaporées sous vide. Le produit brut est ensuite purifié sur colonne chromatographique (S1O2, CH ₂ Cl ₂ /acétone, 100% à 80/20) pour obtenir le produit pur sous forme d'huile (85 mg, 39%). R/ (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /acétone, 95/5) = 0.41 ; *H NMR (300 MHz, CDCb, δ): 8.08 (s, 2H, H ^3/5 ), 6.66 (s, 2H, H ⁸ ), 4.11 (t, 2H, J= 4.6 Hz, H ¹⁴ ), 3.99 (s, 6H, H ²² ), 3.83 (t, 2H, J= 4.6 Hz, H ¹⁵ ), 3.72-3.50 (m, 8H, H ¹⁶ /H ¹⁷ /H ¹⁸ /H ¹⁹ ), 3.34 (s, 3H, H ²⁰ ), 1.94 (s, 6H, H ¹³ ) ; ¹³ C NMR (75 MHz, CDCb, δ): 165.2 (C ²¹ ), 158.7 (C ¹⁰ ), 152.5 (C ⁴ ), 148.7 (C ^2/6 ), 136.5 (C ^8/12 ), 130.0 (C ⁷ ), 129.6 (C ^3/5 ), 114.0 (C ^9/n ), 72.0 (C ¹⁹ ), 70.9 (C ¹⁶ ), 70.7 (C ¹⁷ ), 70.6 (C ¹⁸ ), 69.7 (C ¹⁵ ), 67.4 (C ¹⁴ ), 59.0 (C ²⁰ ), 53.2 (C ²² ), 21.0 (C ¹³ ).

Composé 3e 3e

Dans un schlenck, le diméthyl-4-iododipicolinate (200 mg, 0.623 mmol) et l'acide

2,4-diméthoxyphenylboronic (125 mg, 0.685 mmol) sont solubilisés dans la DMF sèche (7 mL) sous Argon. Après 30 minutes de bullage d'Argon dans le milieu, le fluorure de potassium (119 mg, 2.056 mmol) et Pd(dba)3tBu3PH.BF ₄ (36 mg, 0.062 mmol) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est laissé sous agitation à 80°C sous Argon pendant 19h. Le mélange est ensuite dilué dans un mélange AcOEt/Et ₂ 0 puis extrait avec H ₂ 0 puis NaCLat. La phase organique est ensuite séchée sur Na ₂ S0 ₄ , filtrée et évaporée sous vide. Le solide brun obtenu est finalement purifié sur colonne chromatographique (Si0 ₂ , AcOEt/EP, 20/80 à 60/40, dépôt solide) afin d'obtenir le produit pur sous forme d'une solide beige (131 mg, 63%). R/(Si0 ₂ , EP/AcOEt, 60/40) = 0.73 ; *H NMR (300 MHz, CDCb, δ): 8.50 (s, 2H, H ^3/5 ), 7.40 (d, 1H, J = 8.5 Hz, H ¹² ), 6.63 (dd, 1H, J ₃ = 8.4 Hz, J ₄ = 2.4 Hz, H ¹¹ ), 6.58 (d, 1H, J = 2.4 Hz, H ⁹ ), 4.04 (s, 6H, H ¹⁶ ), 3.88 (s, 3H, H ¹³ ), 3.87 (s, 3H, H ¹⁴ ) ; ¹³ C NMR (100 MHz, CDCb, δ): 165.8 (C ¹⁵ ), 162.5 (C ¹⁰ ), 158.2 (C ⁸ ), 149.2(C ⁴ ), 148.1(C ^2/6 ), 131.6(C ¹² ), 128.4(C ^3/5 ), 118.6(C ⁷ ), 105.5(C ⁹ ), 99.2(C ⁿ ), 55.8(C ¹³ ), 55.7(C ¹⁴ ), 53.4 (C ¹⁶ ) ; HRMS (ESI) calculée pour CnHnNNaO 354.0948. Exp 354.0937 [M+Na] ⁺ .

Composé 4a

3a (180 mg, 0.571 mmol) est solubilisé dans un mélange CH ₂ Cl ₂ /MeOH (2/3 mL) puis refroidi à 0°C. NaBH ₄ (42 mg, 1.1 mmol) est ensuite ajouté et après 30 minutes, le milieu réactionnel est placé à température ambiante pendant 4h. La réaction est ensuite quenchée avec une solution HCl 1M. La phase organique est lavée avec H ₂ 0 (2x) puis NaCLat, séchée sur Na ₂ S0 ₄ , filtrée et évaporée. Le produit brut est ensuite purifié sur colonne chromatographique (S1O2, CH ₂ Cl ₂ /acétone 80/20 à 65/35) afin d'obtenir le produit pur sous forme de cristaux jaune pâle (136 mg, 83%). Rf (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /acétone, 80/20) = 0.25 ; *H NMR (500 MHz, CDCI3, δ): 8.01 (s, 1H, H ³ ), 7.46 (s, 1H, H ⁵ ), 7.17 (d, 1H, J = 8.8 Hz, H ¹² ), 6.85-6-81 (m, 2H, H ⁿ /H ⁹ ), 4.89 (d, 2H, J = 4.6 Hz, H ¹⁷ ), 4.01 (s, 3H, H ¹⁶ ), 3.85 (s, 3H, H ¹⁴ ), 3.31 (t, 1H, J = 4.6 Hz, OH), 2.29 (s, 3H, H ¹³ ) ; ¹³ C NMR (125 MHz, CDCI3, δ): 165.9 (C ¹⁵ ), 160.1 (C ⁶ , C ¹⁰ ), 151.8 (C ⁴ ), 147.1 (C ² ), 136.9 (C ⁸ ), 130.9 (C ⁷ ), 130.8 (C ¹² ), 125.0 (C ³ ), 124.6 (C ⁵ ), 116.5 (C ⁹ ), 111.9 (C ¹¹ ), 64.9 (C ¹⁷ ), 55.5 (C ¹⁴ ), 53.1 (C ¹⁶ ), 20.8 (C ¹³ ) ; HRMS (ESI) calculée pour Ci ₆ Hi ₈ N0 ₄ 288.1230. Exp 288.1220 [M+H] ⁺ . Cale pour Ci ₆ Hi ₇ NNa0 ₄ 310.1050. Exp 310.1038 [M+Na] ⁺ . Composé 4b 4b

3b (320 mg, 0.72 mmol) est solubilisé dans un mélange CIHbCk/MeOH (2.5 mL/4.5 mL). Après avoir placé le milieu à 0°C, NaBH ₄ (30 mg, 0.79 mmol) est ajouté et après 30 minutes, la solution est mise à température ambiante sous agitation pendant 3h. La réaction est quenchée par ajout d'une solution HCl 1M. Puis une extraction CH2CI2/H2O est effectuée. La phase organique est lavée avec NaClsat, séchée sur Na2S0 ₄ , filtrée et évaporée. Une purification sur colonne chromatographique (S1O2, CEbCk/MeOH, 98/2 à 97/3) est effectuée afin d'obtenir le produit pur sous forme d'huile incolore (270 mg, 90%). R/(Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /MeOH, 97/3) = 0.22 ; *H NMR (500 MHz, CDCb, δ): 7.99 (d, 1H, J = 0.9 Hz, H ³ ), 7.47 (s, 1H, H ⁵ ), 7.15 (d, 1H, J = 8.4 Hz, H ¹² ), 6.85 (d, 1H, J = 2.3 Hz, H ⁹ ), 6.83 (dd, 1H, J ₃ = 8.4 Hz, J ₄ = 2.3 Hz, H ¹¹ ), 4.89 (d, 2H, J = 3.9 Hz, H ²³ ), 4.16 (t, 2H, J= 4.7 Hz, H ¹⁴ ), 3.99 (s, 3H, H ²² ), 3.87 (t, 2H, J= 4.7 Hz, H ¹⁵ ), 3.72-3.54 (m, 8H, H ¹⁶ /H ¹⁷ /H ¹⁸ /H ¹⁹ ), 3.51 (m, 1H, OH), 3.37 (s, 3H, H ²⁰ ), 2.27 (s, 3H, H ¹³ ) ; ¹³ C NMR (125 MHz, CDCI3, δ): 165.9 (C ²¹ ), 160.3 (C ⁶ ), 159.3 (C ¹⁰ ), 151.8 (C ⁴ ), 147.1 (C ² ), 136.8 (C ⁸ ), 131.0 (C ⁷ ), 130.8 (C ¹² ), 125.0 (C ³ ), 124.6 (C ⁵ ), 117.2 (C ⁹ ), 112.5 (C ^{1 1} ), 72.1 (C ¹⁹ ), 71.0 (C ¹⁶ ), 70.9 (C ¹⁷ ), 70.8 (C ¹⁸ ), 69.9 (C ¹⁵ ), 67.6 (C ¹⁴ ), 64.9 (C ²³ ), 59.2 (C ²⁰ ), 53.1 (C ²² ), 20.8 (C ¹³ ) ; HRMS (ESI) calculée pour C22H ₃₀ NO ₇ 420.2017. Exp 420.2015 [M+H] ⁺ .

Composé 4c

3c est solubilisé dans un mélange CH2Cl2/MeOH et NaBH ₄ est ajouté à 0°C. Après 5 minutes, la solution est laissée à température ambiante et la monoréduction est suivie par CCM (S1O2, DCM/MeOH, 95/5). Au bout de 2h30, la réaction est quenchée par HCl 1M. La phase organique est ensuite lavée avec H2O et NaCLat, puis séchée sur Na2S0 ₄ , filtrée et évaporée. Le produit brut est purifié sur colonne chromatographique (S1O2, DCM/MeOH, 95/5) et une poudre blanche est obtenue (56 mg, 58%). R/ (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /MeOH, 95/5) = 0.30 ; *H NMR (300 MHz, CDCI3, δ): 7.98 (s, 1H, H ³ ), 7.48 (m, 2H, H ⁴ /H ⁹ /NH), 7.42 (d, 1H, J= 8.3 Hz, H ¹¹ ), 7.17 (d, 1H, J= 8.3 Hz, H ¹² ), 4.90 (s, 2H, H ¹⁸ ), 4.00 (s, 6H, H ¹⁷ ), 3.57 (s, 1H, OH), 2.26 (s, 3H, H ¹³ ), 2.20 (s, 3H, H ¹⁵ ) ; ¹³ C NMR (75 MHz, CDCb, δ): 168.7 (C ¹⁴ ), 165.8 (C ¹⁶ ), 160.4 (C ⁶ ), 151.4 (C ⁴ ), 147.1 (C ² ), 138.6 (C ¹⁰ ), 136.2 (C ⁸ ), 134.2 (C ⁷ ), 130.2 (C ¹² ), 124.7 (C ³ ), 124.4 (C ⁵ ), 121.9 (C ⁹ ), 117.7 (C ¹¹ ), 64.9 (C ¹⁸ ), 53.1 (C ¹⁷ ), 24.8 (C ¹⁵ ), 20.6 (C ¹³ ) ; HRMS (ESI) calculée pour C17H19N2O4315.1339. Exp 315.1342 [M+H] ⁺ .

Composé 4d 4d

3d (136 mg, 0.29 mmol) est solubilisé dans un mélange CH ₂ Cl ₂ /MeOH (50/50, 4 mL). Après avoir placé le milieu à 0°C, NaBH ₄ (42 mg, 1.11 mmol) est ajouté (coloration marron de la solution) et après 20 minutes, la solution est mise à température ambiante sous agitation pendant 6h. La réaction est quenchée par ajout d'une solution HC1 1M (4 mL). Puis une extraction CH ₂ C1 ₂ /H ₂ 0 est effectuée. La phase organique est lavée avec NaCLat, séchée sur Na ₂ S0 ₄ , filtrée et évaporée. Une purification sur colonne chromatographique (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /AcOEt, 70/30 à 50/50 puis 10% MeOH) est effectuée afin d'obtenir le produit pur (123 mg, 98%). R/(Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /AcOEt, 80/20) = 0.32 ; *H NMR (300 MHz, CDCb, δ): 8.08 (s, 1H, H ³ ), 7.79 (s, 1H, H ⁵ ), 6.63 (s, 2H, H ⁹ ), 4.87 (s, 2H, H ²³ ), 4.09 (t, 2H, J= 4.6 Hz, H ¹⁴ ), 3.93 (s, 3H, H ²² ), 3.81 (t, 2H, J= 4.6 Hz, H ¹⁵ ), 3.72-3.49 (m, 8H, H ¹⁶ /H ¹⁷ /H ¹⁸ /H ¹⁹ ), 3.33 (s, 3H, H ²⁰ ), 1.93 (s, 6H, H ¹³ ) ; ¹³ C NMR (75 MHz, CDCb, δ): 165.6 (C ²¹ ), 161.0 (C ⁶ ), 158.2 (C ¹⁰ ), 151.4 (C ⁴ ), 147.1 (C ² ), 136.4 (C ^8/12 ), 130.9 (C ⁷ ), 125.2 (C ^3/5 ), 113.6 (C ^9/n ), 71.8 (C ¹⁹ ), 70.7 (C ¹⁶ ), 70.5 (C ¹⁷ ), 70.4 (C ¹⁸ ), 69.6 (C ¹⁵ ), 67.2 (C ¹⁴ ), 64.6 (C ²³ ), 58.9 (C ²⁰ ), 52.7 (C ²² ), 20.8 (C ¹³ ) ; HRMS (ESI) calculée pour C ₂₃ H ₃₂ N07434.2173. Exp 434.2158 [M+H] ⁺ .

Composé 4e

3e (120 mg, 0.36 mmol) est solubilisé dans un mélange CH ₂ Cl ₂ /MeOH (2/3 mL) puis refroidi à 0°C. NaBH ₄ (15 mg, 0.40 mmol) est ensuite ajouté et après 15 minutes, le milieu réactionnel est placé à température ambiante pendant 4h. La réaction est ensuite quenchée avec une solution HCl 1M. La phase organique est lavée avec H ₂ 0 (2x) puis NaCLat, séchée sur Na ₂ S0 ₄ , filtrée et évaporée. Le produit brut est ensuite purifié sur colonne chromatographique (S1O2, CH ₂ Cl ₂ /acétone 80/20) afin d'obtenir le produit pur sous forme d'un solide beige (53 mg, 56%). R (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /acétone, 80/20) = 0.17 ; ¾ NMR (300 MHz, CDCb, δ): 8.21 (s, 1H, H ³ ), 7.67 (s, 1H, H ⁵ ), 7.33 (d, 1H, J = 8.3 Hz, H ¹² ), 6.60 (dd, 1H, J ₃ = 8.3 Hz, J ₄ = 2.4 Hz, H ¹¹ ), 6.57 (d, 1H, J = 2.4 Hz, H ⁹ ), 4.87 (d, 2H, J = 4.5 Hz, H ¹⁷ ), 4.00 (s, 3H, H ¹⁶ ), 3.87 (s, 3H, H ¹³ ), 3.84 (s, 3H, H ¹⁴ ), 3.42 (br, 1H, OH).

Composé 5a

4a (126 mg, 0.439 mmol) est solubilisé dans CH2CI2 sec (4 mL) et la triéthylamine (180 μί, 1.317 mmol) est ajoutée. Après avoir placé le milieu à 0°C, le chlorure de mésyle (50 μί, 0.702 mmol) est ajouté et après 5 minutes, le mélange réactionnel est placé à température ambiante pendant 30 minutes. La phase organique est lavée avec H ₂ 0, puis séchée sur Na ₂ S0 ₄ , filtrée et évaporée pour donner une huile jaune utilisée sans purification supplémentaire pour l'étape suivante (137 mg, 85%). R _f (Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /MeOH, 95/5) = 0.83 ; *H NMR (300 MHz, CDCI3, δ): 8.08 (s, 1H, H ³ ), 7.62 (s, 1H, H ⁵ ), 7.18 (m, 1H, H ¹² ), 6.86-6.82 (m, 2H, H ⁿ /H ⁹ ), 5.47 (s, 2H, H ¹⁷ ), 4.02 (s, 3H, H ¹⁶ ), 3.85 (s, 3H, H ¹⁴ ), 3.16 (s, 3H, H ¹⁸ ), 2.30 (s, 3H, H ¹³ ).

Composé 5b ²⁴ 5b 4b (282 mg, 0.67 mmol) est solubilisé dans CH2CI2 (8 mL) puis la triéthylamine (280 μί, 2.02 mmol) est ajoutée. Le milieu est placé à 0°C puis le chlorure de mésyle (80 μί, 1.08 mmol) est ajouté. Après 5 minutes, le mélange réactionnel est placé à température ambiante pendant 30 minutes. La phase organique est lavée avec H2O puis les phases aqueuses sont réextraites par CH2CI2. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur Na2S0 ₄ , filtrées et évaporées sous vide. Le produit brut est purifié sur colonne chromatographique (S1O2, CEbCk/MeOH, 98/2 à 96/4) afin d'obtenir le composé pur sous la forme d'une huile jaune pâle (304 mg, 91%). Rf (S1O2, CH ₂ Cl ₂ /MeOH, 95/5) = 0.49 ; *H NMR (500 MHz, CDCb, δ): 8.08 (d, 1H, J = 1.5 Hz, H ³ ), 7.62 (d, 1H, J = 1.5 Hz, H ⁵ ), 7.16 (d, 1H, J = 8.3 Hz, H ¹² ), 6.86 (d, 1H, J = 2.6 Hz, H ⁹ ), 6.84 (dd, 1H, J ₃ = 8.3 Hz, J ₄ = 2.6 Hz, H ¹¹ ), 5.46 (s, 2H, H ²³ ), 4.17 (t, 2H, J= 4.7 Hz, H ¹⁴ ), 4.01 (s, 3H, H ²² ), 3.88 (t, 2H, J= 4.7 Hz, H ¹⁵ ), 3.76-3.55 (m, 8H, H ¹⁶ /H ¹⁷ /H ¹⁸ /H ¹⁹ ), 3.38 (s, 3H, H ²⁰ ), 3.16 (s, 3H, H ²⁴ ), 2.28 (s, 3H, H ¹³ ) ; ¹³ C NMR (125 MHz, CDCI3, δ): 165.6 (C ²¹ ), 159.5 (C ¹⁰ ), 154.4 (C ⁶ ), 152.4 (C ⁴ ), 147.8 (C ² ), 136.9 (C ⁸ ), 130.8 (C ¹² ), 130.5 (C ⁷ ), 125.90 (C ³ ), 125.88 (C ⁵ ), 1 17.3 (C ⁹ ), 1 12.6 (C ^{1 1} ), 72.1 (C ¹⁹ ), 71.2 (C ²³ ), 70.9 (C ¹⁶ ), 70.8 (C ¹⁷ ), 70.1 (C ¹⁸ ), 69.9 (C ¹⁵ ), 67.8 (C ¹⁴ ), 59.2 (C ²⁰ ), 53.3 (C ²² ), 38.3 (C ²⁴ ), 20.8 (C ¹³ ) ; HRMS (ESI) calculée pour C2 ₃ H ₃₂ N0 ₉ S 498.1792 [M+H] ⁺ .

o

Composé 5c 5c

4c (56 mg, 0.18 mmol) est solubilisé dans CH2CI2 (4 mL) puis la triéthylamine 75 μί, 0.53 mmol) est ajoutée. Le mélange est placé à 0°C et le chlorure de mésyle (21 μί, 0.27 mmol) est ajouté. Après 5 minutes, la réaction est placée à température ambiante sous agitation pendant 40 minutes. Un lavage de la phase organique avec H2O est ensuite effectué et les phases aqueuses sont réextraites avec CH2CI2. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur Na2S0 ₄ , filtrées et évaporées sous vide. La RMN ^J H montre l'obtention du produit pur de manière quantitative (70 mg) et celui-ci est utilisé sans purification supplémentaire pour l'étape suivante. Rf (S1O2, CH ₂ Cl ₂ /MeOH, 95/5) = 0.64 ; *H NMR (300 MHz, CDCI3, δ): 8.04 (s, 1H, H ³ ), 7.89 (s, 1H, NH), 7.59 (s, 1H, H ⁴⁵ ), 7.51 (s, 1H, H ⁹ ), 7.46 (d, 1H, J= 8.3 Hz, H ¹¹ ), 7.16 (d, 1H, J= 8.3 Hz, H ¹² ), 5.43 (s, 2H, H ¹⁸ ), 3.99 (s, 6H, H ¹⁷ ), 3.14 (s, 3H, H ¹⁹ ), 2.25 (s, 3H, H ¹³ ), 2.19 (s, 3H, H ¹⁵ ).

Composé 5d 5d

4d (123 mg, 0.28 mmol) est solubilisé dans CH2CI2 (5 mL) puis la triéthylamine (192 μί, 1.38 mmol) est ajoutée. Le milieu est placé à 0°C puis le chlorure de mésyle (53 μί, 0.68 mmol) est ajouté. Après 5 minutes, le mélange réactionnel est placé à température ambiante pendant 30 minutes. La phase organique est lavée avec H2O puis les phases aqueuses sont réextraites par CH2CI2. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur Na2S0 ₄ , filtrées et évaporées sous vide. Le produit obtenu est utilisé sans purification supplémentaire pour l'étape suivante. Rf (S1O2, CH ₂ Cl ₂ /MeOH, 95/5) = 0.76 ; *H NMR (300 MHz, CDCb, δ): 7.90 (s, 1H, H ³ ), 7.45 (s, 1H, H ⁵ ), 6.66 (s, 2H, H ⁹ ), 5.44 (s, 2H, H ²³ ), 4.12 (t, 2H, J= 4.6 Hz, H ¹⁴ ), 3.97 (s, 3H, H ²² ), 3.83 (t, 2H, J= 4.6 Hz, H ¹⁵ ), 3.74-3.51 (m, 8H, H ¹⁶ /H ¹⁷ /H ¹⁸ /H ¹⁹ ), 3.35 (s, 3H, H ²⁰ ), 3.13 (s, 3H, H ²⁴ ), 1.95 (s, 6H, H ¹³ ) ; ¹³ C NMR (75 MHz, CDCb, δ): 165.3 (C ²¹ ), 158.6 (C ¹⁰ ), 154.7 (C ⁶ ), 152.3 (C ⁴ ), 148.0 (C ² ), 136.5 (C ^8/12 ), 130.4 (C ⁷ ), 126.6/126.5 (C ³ /C ⁵ ), 1 13.9 (C ^9/n ), 71.9 (C ¹⁹ ), 70.9 (C ¹⁶ ), 70.7 (C ¹⁷ ), 70.6 (C ¹⁸ ), 69.7 (C ¹⁵ ), 67.4 (C ¹⁴ ), 59.0 (C ²⁰ ), 53.1 (C ²² ), 38.1 (C ²³ ), 31.6 (C ²⁴ ), 21.0 (C ¹³ ).

Composé 5e 5e

4e (60 mg, 0.198 mmol) est solubilisé dans CH2CI2 (3 mL) et la triéthylamine (83 μί, 0.593 mmol) )est ajoutée. Après avoir placé le milieu à 0°C, le chlorure de mésyle (24 μί, 0.317 mmol) est ajouté et après 5 minutes, le mélange réactionnel est placé à température ambiante pendant 30 minutes. La phase organique est lavée avec H ₂ 0, puis séchée sur Na ₂ S0 ₄ , filtrée et évaporée pour donner une huile jaune utilisée sans purification supplémentaire pour l'étape suivante (76 mg, quant.). R/(Si0 ₂ , CH ₂ Cl ₂ /MeOH, 95/5) = 0.76 ; *H NMR (300 MHz, CDC1 ₃ , δ): 8.29 (s, 1H, H ³ ), 7.86 (s, 1H, H ⁵ ), 7.35 (d, 1H, J = 8.4 Hz, H ¹² ), 6.61 (dd, 1H, J ₃ = 8.4 Hz, J ₄ = 2.3 Hz, H ¹¹ ), 6.57 (d, 1H, J = 2.3 Hz, H ⁹ ), 5.46 (s, 2H, H ¹⁷ ), 4.02 (s, 3H, H ¹⁶ ), 3.87 (s, 3H, H ¹³ ), 3.85 (s, 3H H ¹⁴ ), 3.14 (s, 3H, H ¹⁸ ).

Composé 6a

Le triazacyclononane (27 mg, 0.115 mmol) et le carbonate de sodium (122 mg, 1.15 mmol) sont solubilisés dans l'acétonitrile sec (7 mL). Après 10 minutes à température ambiante, 5a (130 mg, 0.356 mmol) est ajouté et le mélange réactionnel est chauffé à 60°C sous agitation pendant 24h puis à température ambiante pendant 24h. Le mélange est ensuite filtré sur fritté P3, rincé avec CH ₃ CN sec et les eaux mères sont évaporées. Le produit brut est purifié sur colonne chromatographique (A1 ₂ 0 ₃ , CH ₂ Cl ₂ /MeOH, 99/1 à 98/2) afin d'obtenir le produit pur sous forme d'un solide jaune pâle

(81 mg, 75%). R/(A1 ₂ 0 ₃ , CH ₂ Cl ₂ /MeOH, 95/5) = 0.58 ; *H NMR (500 MHz, CDCI3, δ): 7.94 (s, 3H, H ³ ), 7.68 (s, 3H, H ⁵ ), 7.09 (d, 3H, J = 8.2 Hz, H ¹² ), 6.79-6.75 (m, 6H, H ⁹ /H ⁿ ), 3.98 (s, 9H, H ¹⁶ ), 3.97 (s, 6H, H ¹⁷ ), 3.83 (s, 9H, H ¹⁴ ), 2.92 (s, 12H, H ¹⁸ ), 2.23 (s, 9H, H ¹³ ) ; ¹³ C NMR (125 MHz, CDCI3, δ): 166.2 (C ¹⁵ ), 161.1 (C ⁶ ), 159.9 (C ¹⁰ ), 151.2 (C ⁴ ), 147.3 (C ² ), 136.7 (C ⁸ ), 131.1 (C ⁷ ), 130.8 (C ¹² ), 127.0 (C ⁵ ), 124.7 (C ³ ), 116.3 (C ⁹ ), 111.8 (C ¹¹ ), 64.8 (C ¹⁷ ), 56.0 (C ¹⁸ ), 55.4 (C ¹⁴ ), 53.1 (C ¹⁶ ), 20.9 (C ¹³ ) ; HRMS (ESI) calculée pour C ₅ 4H62N ₆ 09 469.2284. Exp 469.2273 [M+2H] ⁺⁺ . Composé 6b 6b

Le triazacyclononane (93 mg, 0.39 mmol) et le carbonate de sodium (414 mg, 3.91 mmol) sont solubilisés dans l'acétonitrile sec (24 mL) sous Argon. Après 10 minutes à température ambiante, 5b (289 mg, 1.21 mmol) est ajouté et le mélange réactionnel est chauffé à 60°C sous agitation pendant 24h puis à température ambiante pendant 24h. Le mélange est ensuite filtré sur fritté P3, rincé avec CH3CN sec et les eaux mères sont évaporées. Le produit brut est purifié sur colonne chromatographique (AI2O3, CEbCk/MeOH, 99/1 à 95/5) afin d'obtenir le produit pur sous forme d'une huile jaune (176 mg, 34%). *H NMR (500 MHz, CDCb, δ): 7.92 (d, 3H,

J = 1.1 Hz, H ³ ), 7.67 (s, 3H, H ⁵ ), 7.07 (d, 1H, J = 8.4 Hz, H ¹² ), 6.81 (d, 1H, J = 2.4 Hz, H ⁹ ), 6.77 (dd, 1H, J ₃ = 8.4 Hz, J ₄ = 2.4 Hz, H ¹¹ ), 4.14 (t, 6H, J= 4.6 Hz, H ¹⁴ ), 3.96 (br s, 15H, H ²³ / H ²² ), 3.86 (t, 6H, J= 4.6 Hz, H ¹⁵ ), 3.74-3.53 (m, 24H, H ¹⁶ /H ¹⁷ /H ¹⁸ /H ¹⁹ ), 3.37 (s, 9H, H ²⁰ ), 2.91 (br s, 12H, H ²⁴ ), 2.21 (s, 9H, H ¹³ ) ; ¹³ C NMR (125 MHz, CDCI3, δ): 166.2 (C ²¹ ), 161.0 (C ⁶ ), 159.2 (C ¹⁰ ), 151.1 (C ⁴ ), 147.3 (C ² ), 136.7 (C ⁸ ), 131.3 (C ⁷ ), 130.7 (C ¹² ), 127.0 (C ⁵ ), 124.7 (C ³ ), 117.0 (C ⁹ ), 113.8 (C ¹¹ ), 72.1 (C ¹⁹ ), 71.0 (C ¹⁶ ), 70.8 (C ¹⁷ ), 70.7 (C ¹⁸ ), 69.8 (C ¹⁵ ), 67.6 (C ¹⁴ ), 64.7 (C ²³ ), 59.2 (C ²⁰ ), 55.9 (C ²⁴ ), 53.0 (C ²² ), 20.8 (C ¹³ ) ; HRMS (ESI) calculée pour C72H98N6O18 667.3463 Exp 667.34558 [M+2H] ²⁺ .

Composé 6c

5c sec (70 mg, 0.18 mmol) est solubilisé dans l'acétonitrile sec (3 mL) et Na ₂ C0 ₃ (67 mg, 0.63 mmol) est ajouté ainsi que le triazacyclononane (13.6 mg, 0.06 mmol). Après bullage d'Argon dans le milieu pendant 5 min, la mélange réactionnel est mis à chauffer à 60°C pendant 5 jours. Le mélange est ensuite filtré sur fritté P3, rincé avec CH3CN sec et les eaux mères sont évaporées. Le produit brut est purifié sur colonne chromatographique (A1 ₂ 0 ₃ , CH ₂ Cl ₂ /MeOH, 96/4) afin d'obtenir le produit pur sous forme d'une poudre blanche (47 mg, 81%). ¾ NMR (300 MHz, CDCI3, δ): 8.94 (s, 3H, NH), 7.88 (s, 3H, H ³ ), 7.54-7.45 (m, 9H, H ⁵ /H ⁹ /H ⁿ ), 7.07 (d, 1H, J= 8.3 Hz, H ¹² ), 3.98 (m, 15H, H ¹⁸ / H ¹⁷ ), 2.87 (s, 12H, H ¹⁹ ), 2.25 (s, 9H, H ¹³ ), 2.09 (s, 9H, H ¹⁵ ) ; ¹³ C NMR (75 MHz, MeOD, δ): 171.8 (C ¹⁴ ), 166.9 (C ¹⁶ ), 162.4 (C ⁶ ), 152.8 (C ⁴ ), 148.3 (C ² ), 140.7 (C ¹⁰ ), 136.9 (C ⁸ ), 134.9 (C ⁷ ), 131.0 (C ¹² ), 128.6 (C ³ ), 124.4 (C ⁵ ), 123.0 (C ⁹ ), 118.9 (C ¹¹ ), 65.0 (C ¹⁸ ), 57.0 (C ¹⁹ ), 53.3 (C ¹⁷ ), 24.05 (C ¹⁵ ), 20.9 (C ¹³ ) ; HRMS (ESI) calculée pour C57H64N9O9 1018.4822. Exp 1018.4782 [M+H] ^{+ ;} t _R = 8.33 min (méthode HPLC-MM-ACN, H ₂ 0/CH ₃ CN 85/15 à 0/100 en 16 min).

Composé 6d 6d

Le triazacyclononane (21.5 mg, 0.09 mmol) et le carbonate de sodium (95 mg, 0.90 mmol) sont solubilisés dans l'acétonitrile sec (5 mL). Après 5 minutes à température ambiante, 5d (143 mg, 0.28 mmol) est ajouté, un bullage d'Argon est effectué pendant 5 minutes et le mélange réactionnel est chauffé à 60°C sous agitation pendant 4 jours. Le mélange est ensuite filtré sur fritté P3, rincé avec CH3CN sec et les eaux mères sont évaporées. Le produit brut est purifié sur colonne chromatographique (AI2O3, CEbCk/MeOH, 100% à 97/3) afin d'obtenir le produit pur sous forme d'une poudre blanche (82 mg, 66%). ¾ NMR (300 MHz, CDCb, δ): 7.77 (s, 3H, H ³ ), 7.47 (s, 3H, H ⁵ ), 6.64 (s, 6H, H ⁹ ), 4.12 (t, 6H, J= 4.7 Hz, H ¹⁴ ), 3.94 (s, 9H, H ²² ), 3.91 (s, 6H, H ²³ ), 3.84 (t, 6H, J= 4.7 Hz, H ¹⁵ ), 3.74-3.52 (m, 24H, H ¹⁶ /H ¹⁷ /H ¹⁸ /H ¹⁹ ), 3.35 (s, 9H, H ²⁰ ), 2.82 (s, 12H, H ²⁴ ), 1.91 (s, 18H, H ¹³ ) ; ¹³ C NMR (75 MHz, CDCb, δ): 166.0 (C ²¹ ), 161.4 (C ⁶ ), 158.3 (C ¹⁰ ), 151.0 (C ⁴ ), 147.5 (C ² ), 136.5 (C ^8/12 ), 131.3 (C ⁷ ), 127.8 (C ⁵ ), 125.3 (C ³ ), 1 13.8 (C ^9/11 ), 72.0 (C ¹⁹ ), 70.9 (C ¹⁶ ), 70.7 (C ¹⁷ ), 70.6 (C ¹⁸ ), 69.8 (C ¹⁵ ), 67.4 (C ¹⁴ ), 64.6 (C ²³ ), 59.1 (C ²⁰ ), 55.6 (C ²⁴ ), 52.9 (C ²² ), 21.0 (C ¹³ ) ; HRMS (ESI) calculée pour C75H104N6O18 688.3698. Exp 688.3686 [M+2H] ²⁺ ; t _R = 13.09 min (méthode HPLC-MM-ACN, H2O/CH3CN 85/15 à 0/100 en 16 min).

Composé 6e

Le triazacyclononane (15 mg, 0.064 mmol) et le carbonate de sodium (68 mg, 0.64 mmol) sont solubilisés dans l'acétonitrile sec (4 mL). Après 10 minutes à température ambiante, 5e (76 mg, 0.198 mmol) est ajouté et le mélange réactionnel est chauffé à 60°C sous agitation pendant 24h puis à température ambiante pendant 5 jours. Le mélange est ensuite filtré sur fritté P3, rincé avec CH3CN sec et les eaux mères sont évaporées. Le produit brut est purifié sur colonne chromatographique (AI2O3, CH ₂ Cl ₂ /MeOH, 100% à 97/3) afin d'obtenir le produit pur sous forme d'une poudre blanche (41 mg, 65%). R _f (AI2O3, CH ₂ Cl ₂ /MeOH, 95/5) = 0.54 ; *H NMR (500 MHz, CDCb, δ): 8.15 (s, 3H, H ³ ), 7.92 (s, 3H, H ⁵ ), 7.25 (d, 3H, J = 8.0 Hz, H ¹² ), 6.54-6.49 (m, 6H, H ⁹ /H ⁿ ), 3.99 (s, 6H, H ¹⁷ ), 3.97 (s, 9H, H ¹⁶ ), 3.84 (s, 9H, H ¹³ ), 3.75 (s, 9H, H ¹⁴ ), 2.99 (s, 12H, H ¹⁸ ) ; ¹³ C NMR (125 MHz, CDCb, δ): 166.5 (C ¹⁵ ), 161.9 (C ¹⁰ ), 160.9 (C ⁶ ), 158.0 (C ⁸ ), 147.8 (C ⁴ ), 147.2 (C ² ), 131.4 (C ¹² ), 126.6 (C ⁵ ), 124.4 (C ³ ), 119.9 (C ⁷ ), 105.3 (C ⁹ ), 99.2 (C ¹¹ ), 65.0 (C ¹⁷ ), 56.2 (C ¹⁸ ), ¹³ ), 55.6 (C ¹⁴ ), 53.0 (C ¹⁶ ).

Composé 7c 7c 6c (47 mg, 0.05 mmol) est dissout dans le THF (3 mL) puis NaOH 1M (3 mL) est ajouté jusqu'à pH >12. Le mélange réactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 24h. Un suivi LC-MS permet d'observer la déprotection complète des esters méthyliques. Le produit est utilisé pour la complexation sans purification supplémentaire. HRMS (ESI) calculée pour C ₅ 4H ₅₈ N909 976.4352. Exp 976.4306 [M+H] ⁺ ; t _R = 6.24 min (méthode HPLC-MM-ACN, H2O/CH3CN 85/15 à 0/100 en 16 min).

Composé 7d 7d

6d (38.7 mg, 0.028 mmol) est dissout dans le tetrahydrofurane (3 mL) et NaOH 1M (3 mL) est ajouté jusqu'à pH 14. Le mélange réactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 6h30. Le suivi par spectrométrie de masse montre la disparition du produit de départ. Le mélange est utilisé pour l'étape de complexation sans purification supplémentaire. HRMS (ESI) calculée pour CvsHgsNeOis 667.3463. Exp 667.3461 [M+2H] ²⁺ ; t _R = 9.57 min (méthode HPLC-ESI-ACN, H2O/CH3CN 85/15 à 0/100 en 16 min).

Complexe la.l

Le ligand 6a (70 mg, 0.075 mmol) est dissout dans THF (10 mL) puis NaOH 1M (5 mL) est ajouté et la solution est agitée à température ambiante pendant lh30. Le pH est ensuite ajusté à pH 4 avec HC1 1M (5 mL) et le mélange est concentré sous vide. Le milieu est dilué avec MeOH puis le pH est ajusté à pH 8-9 à l'aide d'une solution de Na ₂ C03sat. Enfin, TbCl3.6H ₂ 0 (84 mg, 0.224 mmol) est ajouté et le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 72h. Le milieu est concentré sous pression réduite puis le complexe est précipité avec ajout d'H ₂ 0 (2 x) et centrifugé pour obtenir un solide blanc correspondant au complexe de terbium(III) (79 mg, quant.). HRMS (ESI) calculée pour CsiHssNeOgTb 526.1558.

Exp 526.1557 [M+2H] ⁺⁺ 1051.3011 [M+H] ⁺ .

Complexe Ia.2 Ia.2

Le ligand 6b (50 mg, 0.038 mmol) est solubilisé dans MeOH (5 mL) puis NaOH 1M (2 mL) est ajouté et la solution est laissée sous agitation à température ambiante pendant lh. Puis le pH est ajusté à pH 3-4 avec HC1 1M, puis à pH ~7 avec Na ₂ C03sat. TbCl3.6H ₂ 0 (21 mg, 0.056 mmol) est ajouté et la solution est laissée à température ambiante pendant une nuit. Après concentration sous pression réduite, le mélange est purifié par extractions/lavages avec DCM/H ₂ 0, et la phase organique évaporée pour donner le produit sous forme d'un solide jaune pâle (55 mg, quant.). HRMS (ESI) calculée pour 746.2557. Exp 746.2565 [M+2Na] ²⁺ ; t _R = 9.65 min (méthode HPLC-MM, H2O/CH3CN 85/15 à 0/100 en 16 min).

Complexe Ia.3 Ia.3

Le pH de la solution de 7c est ajusté à pH 6 par ajout d'une solution de HC1 1M puis TbCh.ôEbO est ajouté à température ambiante. Le milieu réactionnel est laissé sous agitation pendant 48h puis le THF est évaporé sous pression réduite. Le précipité formé est centrifugé dans H ₂ 0 (3x) afin d'éliminer l'excès de sels présents puis le solide blanc est séché sous vide (43 mg, 83%). HRMS (ESI) calculée pour C54H ₅₅ N90 ₉ Tb 1132.3371. Exp 1132.3323 [M+H] ⁺ , C ₅ 4H ₅₄ N909TbNa 1154.3190, Exp 1154.3133 [M+Na] ⁺ ; t _R = 6.67 min (méthode HPLC-MM-ACN, H2O/CH3CN 85/15 à 0/100 en 16 min).

Complexe Ia.4 Ia.4

Le pH de la solution 7d est ajusté à pH 6 avec HC1 1M puis TbCb.6H20 (12 mg, 0.031 mmol) est ajouté et la solution est laissée sous agitation à température ambiante pendant 6 jours. Le THF est ensuite évaporé et une extraction CH2CI2/H2O est effectuée. Les phases organiques sont rassemblées et évaporées pour obtenir le complexe de terbium(III) pur (38 mg, 90%). HRMS (ESI) calculée pour C72H ₉ 5N ₆ Oi8Tb 745.2973. Exp 745.2966 [M+2H] ²⁺ , C72H ₉ 4N ₆ Oi8TbNa 756.2882. Exp 756.2882 [M+H+Na] ²⁺ ; t _R = 9.64 min (méthode

HPLC-ESI-ACN-365, H2O/CH3CN 85/15 à 0/100 en 16 min).

Complexe 8 (hors invention)

Le ligand 6e (31 mg, 0.032 mmol) est dissout dans MeOH (5 mL) puis NaOH 1M (2 mL) est ajouté et la solution est agitée à température ambiante pendant 2h. Le pH est ensuite ajusté à pH 3- 4 avec HC1 1M (2 mL) puis à pH 7 à l'aide d'une solution de Na ₂ C03sat. TbCl ₃ .6H ₂ 0 (18 mg, 0.047 mmol) est enfin ajouté et le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 14h. Le milieu est concentré sous pression réduite puis le complexe est précipité avec ajout d'IHbO (2 x) et centrifugé. Puis le solide obtenu est de nouveau précipité dans Et20 et centrifugé pour obtenir un nouveau précipité blanc correspondant au complexe de terbium(III) (30 mg, 85%). MS Cale pour C ₅ iH ₅₃ N ₆ 0i2Tb 550.1488. Exp 550.1482 [M+2H] ²⁺ ; cale pour

561.1392. Exp 561.1405 [M+H+Na] ²⁺ ; cale pour C ₅ iH ₅ iN ₆ Na20i2Tb 572.1301. Exp 572.1323 [M+2Na] ²⁺ .

Exemple 2 : Complexe de Dysprosium Ia.5 et Ia.6

Complexe Ia.5 ^OPeg Ia.5

Le ligand 6b (50 mg, 0.038 mmol) est solubilisé dans MeOH (5 mL) puis NaOH 1M (2 mL) est ajouté et la solution est laissée sous agitation à température ambiante pendant lh. Puis le pH est ajusté à pH 3-4 avec HCl 1M, puis à pH ~7 avec Na ₂ C0 _3s at. Dy(N0 ₃ )3.5H ₂ 0 (20 mg, 0.056 mmol) est ajouté et la solution est laissée à température ambiante pendant une nuit. Après concentration sous pression réduite, le mélange est purifié par extractions/lavages avec DCM/H ₂ 0, et la phase organique évaporée pour donner le produit sous forme d'un solide jaune pâle (50 mg, 92%). HRMS (ESI) calculée pour 748.7577. Exp 748.7576 [M+2Na] ²⁺ .

Complexe Ia.6 Ia.6

6d (9 mg, 0.007 mmol) est dissout dans le tetrahydrofurane (2 mL) et NaOH 1M (2 mL) est ajouté jusqu'à pH 14. Le mélange réactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 24h. Le pH de la solution est ensuite ajusté à pH 6 avec HCl 1M puis DyCl ₃ .6H ₂ 0 (3.2 mg, 0.008 mmol) est ajouté et la solution est laissée sous agitation à température ambiante pendant 3 jours. Le THF est ensuite évaporé et une extraction CH2CI2/H2O est effectuée. Les phases organiques sont rassemblées et évaporées pour obtenir le complexe de dysprosium(III) pur (8 mg, 77%). HRMS (ESI) calculée pour C72H ₉ 3N ₆ Oi8DyNa2769.7811. Exp 769.7818 [M+2Na] ²⁺ , C72H93N ₆ Oi8DyNa ₃ 520.8505. Exp 520.8521 [M+3Na] ³⁺ ; t _R = 9.57 min (méthode HPLC-ESI- ACN-365, H2O/CH3CN 85/15 à 0/100 en 16 min).

B. EVALUATION DES COMPLEXES

Exemple 3 : propriétés spectroscopiques

Les propriétés des complexes Ia.l-Ia.6 et 8 ont été évaluées dans le méthanol (Tableau 1) et dans l'eau (Tableau 2). Ces propriétés ont été comparées à celles du complexe 9, décrit dans le document, Dalton Trans. 2015, 44, 4918, et de structure suivante :

Les mesures photophysiques des complexes montrent que les complexes de terbium Ia.l-Id.4 selon l'invention ont une absorption intense dans le méthanol (Tableau 1).

De plus, ces complexes possèdent des rendements quantiques très importants, et bien supérieurs à celui du complexe 9 hors invention, qui ne possède pas de substituant autre que des hydrogènes en alpha de la liaison pyridine-phényle (positions R2 et R3). La forte limitation, voire la suppression, de la rotation interne autour de la liaison pyridine-phényle permet ainsi d'améliorer signifïcativement le rendement quantique. La brillance des complexes selon l'invention est alors supérieure à celle du complexe 9.

Différents groupes électrodonneurs ont été testés : méthoxy, PEG ou amide. De moins bons résultats ont été observés avec un groupe amide (complexe Ia.3), en raison d'un moins bon rendement quantique, mais demeurent tout de même satisfaisants en termes de brillance.

En revanche, la présence d'un second groupe électrodonneur de type méthoxy sur le groupe phényle (complexe 8) provoque une chute du rendement quantique, comparé à un groupe méthyle (complexe Ia.l). L'introduction d'un second groupement méthyle a un effet majeur sur le coefficient d'extinction molaire avec une baisse de plus de 50 %. Ainsi, en dépit d'un rendement quantique excellent, Ia.4 présente une brillance à 330 nm inférieure à celle de son homologue Ia.2.

Les propriétés spectroscopiques des complexes Ia.2 et Ia.4 sont conservées dans l'eau (Tableau 2).

La brillance du complexe Ia.2 est très élevée, et comparable à celle du complexe TbLumi-4, issus des travaux du groupe de K. Raymond (J. Xu et al. J. Am. Chem. Soc. 2011, 133, 19900- 19910), qui figure parmi les meilleurs complexes actuellement sur le marché (Φ = 59%, £ de l'ordre de 25000 L.mol ^"1 . cm ^"1 et une brillance aux alentours des 15000 L.mol ^"1 . cm ^"1 ).

La figure 1 présente le spectre d'absorption et d'émission du complexe Ia.4 dans l'eau à température ambiante.

Tableau 1-propriétés photophysiques des complexes Ia.l-Ia.6, 8 et 9 mesurées dans le méthanol

Tableau 2 - propriétés photophysiques des complexes Ia.2 et Ia.4-Ia.6 mesurées dans l'eau

Les complexes de Dysprosium Ia.5 et Ia.6 présentent également des propriétés photophysiques remarquables, dans le méthanol et dans l'eau. Ces complexes sont parmi les complexes les plus brillants rapportés dans la littérature.

La figure 2 présente le spectre d'absorption et d'émission du complexe Ia.6 dans un mélange méthanol/éthanol à température ambiante.

Exemple 4 : imagerie cellulaire Le complexe Ia.2 a montré un intérêt important en imagerie par microscopie de fluorescence à un ou deux photons. La figure 3 représente des images de cellules fixées au PFA et marquées par le complexe Ia.2 (concentration = 10 ^"5 mol.L ¹ , excitation biphotonique, = 720 nm), qui montre bien son internalisation dans la cellule. Les spectres d'émission confirment la présence de Ia.2 à l'intérieur de la cellule et non dans le tampon.

La figure 4 représente des images de cellules T24 fixées au PFA et marquées par le complexe Ia.5 (concentration = 10 ^"5 mol.L ^"1 , excitation biphotonique, Àe _X = 720 nm). De même que pour le complexe Ia.2, P internalisation du complexe Ia.5 dans la cellule est confirmée par les spectres d'émission.