本発明者等は、鋭意検討を行い、非特異� ��反応の要因となるタンパク質等に対して、� ��記特異的結合物が標識された標識物質より� ��優先的に結合する物質を検出系内に導入し� ��非特異的反応の抑制を試みた。そして、こ� ��ような物質として、判定部に固定された捕� ��物質(抗体、抗原)と同じ産生動物種由来の� �じサブクラスを有する免疫グロブリン(以下� ��免疫グロブリンと略して記載することがあ� ��)を適用することとした。また、検出系内へ の免疫グロブリンの導入の具体的形態として 、試料と共に添加される展開液中に免疫グロ ブリンを混合するものと、予め試験片に免疫 グロブリンを保持するものの、2つの形態の� �ムノクロマトグラフィー用試験キットとし� �。

 本願に係る第1の発明は、被検物質を添加 する試料添加部、被検物質に特異的に反応す る特異的結合物が標識された標識物質を保持 する標識物質保持部、被検物質に特異的に反 応する特異的結合物が標識された標識物質を 捕捉する捕捉物質が固定された判定部、がク ロマトグラフィー媒体上に形成された試験片 と、前記被検物質を前記試験片上に展開させ るための展開液と、を備えるイムノクロマト グラフィー用試験キットにおいて、前記展開 液が、前記判定部の捕捉物質と同一の産生動 物種由来でありかつ同一のサブクラスを有す る免疫グロブリンを、展開液1mLに対し5~2000μg 含むことを特徴とするイムノクロマトグラフ ィー用試験キットである。

 また、本願に係る第2の発明は、被検物質を 添加する試料添加部、被検物質に特異的に反 応する特異的結合物が標識された標識物質を 保持する標識物質保持部、被検物質に特異的 に反応する特異的結合物が標識された標識物 質を捕捉する捕捉物質が固定された判定部、 がクロマトグラフィー媒体上に形成された試 験片と、前記被検物質を前記試験片上に展開 させるための展開液と、を備えるイムノクロ マトグラフィー用試験キットにおいて、前記 試験片の試料添加部及び/又は標識物質保持� �に、前記判定部に固定された捕捉物質と同� �の産生動物種由来でありかつ同一のサブク� �スを有する免疫グロブリンが、試料添加部� �び/又は標識物質保持部の表面積1cm ² に対し、0.6~250μg保持されていることを特徴� �するイムノクロマトグラフィー用試験キッ� �である。

 本願発明は、上記の通り、試験片の判定� ��に固定された捕捉物質(抗体等)と同一の産� �動種物由来でありかつ同一のサブクラスを� �する免疫グロブリンを検出系に導入するこ� �を特徴とする。ここで、留意すべきは、導� �する免疫グロブリンの産生動物種及びサブ� �ラスは、判定部の捕捉物質のみを考慮する� �のであり、標識物質保持部等の他の部位に� �持及び固定された抗体、抗原のサブクラス� �を基準とするものではない。これは、その� �由は定かではないが、判定部以外、例えば� �標識物質保持部に保持された標識物質上に� �持された抗体のサブクラス等と同一のサブ� �ラスを有する免疫グロブリンを適用した場� �、本発明よりも検出感度が劣ることが確認� �れていることによる。本発明の判定部の捕� �物質を基準とした免疫グロブリンを選択す� �ことで、非特異的反応による偽陽性が抑制� �れると共に、検出感度の向上を図ることが� �きる。

 免疫グロブリンは、その産生動物種とし� ��ヒト、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ウ� ��等があり、それぞれに所定範囲の免疫グロ� ��リンがある。ヒトの場合、IgG、IgM、IgA、IgD� ��IgEの5種類のクラスの免疫グロブリンがあり 、IgGにはIgG1~IgG4の4つのサブクラスが、IgAに� �IgA1とIgA2の2つのサブクラスがある。また、� �ウスの場合もIgG、IgM、IgA、IgD、IgEの5種類の� ��ラスの免疫グロブリンがあるが、サブクラ� ��を有するのはIgGのみであり、IgG1、IgG2a、IgG2 b、IgG3の4つのサブクラスがある。但し、検出 部の捕捉物質の産生動物種とサブクラスは、 イムノクロマトグラフィー試験片の検出対象 によって異なることから、本発明は上記何れ かの産生動物種、サブクラスのうちいずれか 一つのみに限定されるものではない。

 本願に係る第1、第2の発明は、免疫グロ� �リンを混合、保持する部位のみが相違する� �のであり、それ以外の構成において相違す� �ものではない。以下、本発明に係るイムノ� �ロマトグラフィー用試験キットの展開液、� �験片の内容について説明するが、重複記載� �避けるために相違する点を明記しつつ述べ� �。

 展開液は、検体試料中の被検物質を試験� ��上に展開するための移動相となる液体であ� ��、溶媒と適宜の緩衝剤とからなる。溶媒は� ��が一般に用いられ、緩衝剤の好ましい例と� ��ては、従来のものと同様、リン酸塩、トリ� ��ヒドロキシメチルアミノメタン、グッドの� ��衝剤等を挙げることができる。また、これ� ��以外の添加剤を含むことができ、従来のも� ��と同様、ウシ血清アルブミン(以下BSAと言う )等のタンパク質成分、変性剤(例えば、尿素� ��グアニジン塩酸、チオシアン酸塩等、高分� ��ポリマー(例えば、カルボキシメチルセルロ ースなどの可溶性セルロース誘導体、ポリエ チレングリコール、ポリビニルアルコール、 ポリビニルピロリドン等))、塩基性化合物(例 えば、スペルミン、スペルミジン、硫酸プロ タミン等)を任意的に含んでいても良い。

 そして、展開液中に免疫グロブリンを添� ��する場合(本願第1の形態)、その添加量は、� ��記の通り、展開液1mLに対し5~2000μgとする。� ��加量については、10~1000μgが好ましく、50~500 μgがより好ましい。

 展開液と共にキットを構成する試験片は� ��クロマトグラフィー媒体上に試料添加部、� ��検物質に特異的に反応する特異的結合物が� ��識された標識物質を保持する標識物質保持� ��、捕捉物質が固定される判定部によって形� ��されたものが基本的構成となる。クロマト� ��ラフィー媒体は毛細管現象により検体試料� ��吸収し流動されることができるものであれ� ��、特に限定されるものではない。例えば、� ��トロセルロース、酢酸セルロース、ナイロ� ��、ポリエーテルスルホン、ポリビニルアル� ��ール、ポリエステル、ガラス繊維、ポリオ� ��フィン、セルロース等、これらのポリマー� ��ら選択される。

 試料添加部は、検体試料及び展開液を吸� ��し、連通する標識物質保持部にこれらを送� ��する部位である。試料添加部としては、上� ��したクロマトグラフィー媒体と同様の材質� ��パッドをクロマトグラフィー媒体上に貼り� ��ければ良い。

 標識物質保持部に保持される特異的結合� ��が標識された標識物質は、被検物質と特異� ��に反応し得る抗体、抗原等の特異的結合物� ��、これを標識するための標識物質とからな� ��標識複合体である。特異的結合物となる抗� ��としては、Prostate Specific Antigen(前立腺特異 抗原、PSA)、ヘリコバクター・ピロリ菌等の� �種抗原などが挙げられる。抗体としては、� �ノクローナル抗体及びポリクローナル抗体� �いずれでもよい。具体的には、抗大腸菌抗� �、抗ヒトアルブミン抗体、抗ヒト免疫グロ� �リン抗体、抗マイクログロブリン抗体、抗� �ンフルエンザ抗体などが挙げられる。これ� �抗体、抗原は1種類であってもよく、数種類� ��混合して用いることもできる。

 また、標識物質としては、金コロイド等� ��金属コロイド、セレニウムコロイド等の非� ��属コロイド、着色樹脂粒子、染料コロイド� ��び着色リポソーム等の不溶性粒状物質等が� ��げられるが、金属コロイド、特に金コロイ� ��が好ましい。標識物質は、特異的結合物やB SA等の固定性、標識物質の分散性、イムノク� ��マトグラフィー試験片とした時の試薬感度� ��の観点から、好ましくは100nm以下であり、� �異的結合物やBSAを標識物質に保持する時の� �製の容易性の観点から、好ましくは10nm以上� ��ある。標識複合体は、標識物質に抗体、抗� ��等を固定(保持)させて形成されるものであ� �、免疫複合体の懸濁液を固相支持体に滴下� �乾燥させることで固定できる。また、免疫� �合体の懸濁液にパッドを浸漬させて固定し� �ものをクロマトグラフィー媒体上に貼り着� �ても良い。

 判定部に固定される捕捉物質は、標識物� ��保持部において被検物質と特異的結合物が� ��識された標識物質とが反応することにより� ��成される被検物質-標識物質複合体を、被検 物質と捕捉物質との結合を介した反応により 捕捉するものである。この捕捉物質の反応に 基づく呈色の度合いを肉眼で観察することに より、試料中の被検物質の有無を判定できる 。捕捉物質は、被検物質と特異的に反応し得 る抗体、抗原であり、この抗体、抗原を含む 溶液をクロマト膜媒体上に塗布・乾燥するこ とで固定される。

 尚、試験片の構成においては、上記試料� ��加部、標識物質保持部、判定部の他に、判� ��部を通過した未反応の標識物質を捕捉する� ��収部等から成る。また、試験片基材である� ��ムノクロマトグラフィー媒体には、通常、� ��溶液を吸収しないバッキングシートが用い� ��れる。

 そして、免疫グロブリンを試験片に保持� ��せる場合(本願の第2の形態)、免疫グロブリ� ��は、試料添加部、又は、標識物質保持部に� ��有させる。試料中のタンパク質等に対する� ��免疫グロブリン及び特異的結合物が標識さ� ��た標識物質の反応は競合的なものであるた� ��、免疫グロブリンを優先的に反応させるた� ��には、試料添加と同時又は直後に免疫グロ� ��リンを接触させる必要がある。免疫グロブ� ��ンの保持は、その溶液を保持部位に塗布・� ��燥させる。

 また、このようにイムノクロマトグラフィ� ��試験片の試料添加部又は標識物質保持部に� ��疫グロブリンを保持させる場合の保持量は� ��上記の通り、試料添加部及び/又は標識物質 保持部の表面積1cm ² に対し、0.6~250μgとする。この保持量につい� �は、1.3~125μgが好ましく、6.3~62.5μgがより好� �しい。尚、このように試験片の方に免疫グ� �ブリンを添加する場合、試料添加部又は標� �物質保持部のいずれかに添加すれば良いが� �双方に添加しても良い。

 本発明のイムノクロマトグラフィー用試� ��キットの使用方法は、従来のイムノクロマ� ��グラフィー用試験キットの使用方法と基本� ��に異なるものではない。検出に当たっては� ��検体試料を適宜に希釈した試料希釈液(試料 懸濁液)をイムノクロマトグラフィー試験片� �試料添加部に滴下する。この際、キットの� �開液を同時に滴下する。但し、展開液を(予� ��)試料希釈液に混合して検体液としこれを滴 下しても良い。展開液及び試料希釈液を滴下 後、反応を開始させて適当な時間が経過した 後に、判定部位を目視で観察するか又は発色 度測定装置で測定することにより、被検物質 を検出又は定量する。

 尚、本発明のキットを用いる被検物質は� ��免疫化学的反応により被検物質-標識物質複 合体を形成し得るものであれば特に制限され ない。例えば、細菌、インフルエンザウィル スなどのウイルス、あるいは腫瘍マーカー抗 原等が挙げられる。検体も限定されず、全血 、血清、血漿、尿、唾液、喀痰、汗、粘膜擦 過物等である。