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Patent Searching and Data


Title:
TETRACYCLIC ANTHRAQUINONE DERIVATIVES
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2014/059740
Kind Code:
A1
Abstract:
Disclosed are a compound as shown in formula (I) and pharmaceutically acceptable salts thereof. R1, R2, R3, R4, R5, W, and n are defined as in the description of the present application.

Inventors:
ZHANG, Hesheng (31-101 Xiao Yuan Xin Cun TEDA, Tianjin 7, 300457, CN)
HUO, Aihong (31-101 Xiao Yuan Xin Cun TEDA, Tianjin 7, 300457, CN)
LI, Zhenzhong (31-101 Xiao Yuan Xin Cun TEDA, Tianjin 7, 300457, CN)
Application Number:
CN2013/000233
Publication Date:
April 24, 2014
Filing Date:
March 06, 2013
Export Citation:
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Assignee:
TIANJIN HEMAY BIO-TECH CO., LTD (31-101 Xiao Yuan Xin Cun TEDA, Tianjin 7, 300457, CN)
TIANJIN MICHELE SCI-TECH DEVELOPMENT CO., LTD (Room 575, 12 West Keyan Rd.Nankai District, Tianjin 2, 300192, CN)
International Classes:
C07H15/252; A61K31/7056; A61P35/00; C07H19/044
Domestic Patent References:
WO2009099741A12009-08-13
Foreign References:
CN101555264A2009-10-14
Other References:
See also references of EP 2824108A4
None
Attorney, Agent or Firm:
INSIGHT INTELLECTUAL PROPERTY LIMITED (Suite 19A, 19B Tower A, InDo Building, No. 48A Zhichun Road,Haidian District, Beijing 8, 100098, CN)
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Claims:
权利要求书

1. 式 (I)所示的化合物及其药物可接受的

其中:

R1选自 H、 任意取代的烷基或任意取代的烷氧基;

R2选自 H、 任意取代的芳基、 任意取代的杂芳基、 任意取代的(亚 烷氧基) m烷基、 任意取代的杂环基、 任意取代的烷基或任意取代的磺 酰基;

R3选自 H、任意取代的芳基、任意取代的杂芳基、 任意取代的 (亚 烷氧基) m烷基、 任意取代的杂环基、 任意取代的烷基或任意取代的横 酰基;

或者 NR2R3表示任意取代的杂环基;

m选自 0、 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10或 11 ;

W选自 O或 NH;

R4选自 H、 F或任意取代的烷基;

R5选自 H、 F、 任意取代的烷基或 OR6, 其中 R6选自 H或任意取 代的四氢吡喃 -2-基;

n选自 1、 2或 3。

2. 式 (I)所示的化合物及其药物可接受的盐,

其中:

R1选自 H、 d.4烷基或 d.4烷氧基;

R2选自 H、 芳基、 杂芳基、 (d.4亚烷氧基) md.4烷基、 杂环基、

CM烷基或磺酰基;

R3选自 H、 芳基、 杂芳基、 (d.4亚烷氧基) md.4烷基、 杂环基、 d.4烷基或磺酰基;

或者 NR2R3表示杂环基;

m选自 0、 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10或 1 1 ;

W选自 0或 NH;

R4选自 H、 F或 CM烷基;

R5选自 H、 F、 CM烷基或 OR6, 其中 R6选自 H或四氢吡喃 -2-基; n选自 1、 2或 3。

3. 如权利要求 1或 2所述的化合物, 其中 R1选自 H或 OCH3。 4. 如权利要求 1至 3中任一权利要求所述的化合物, 其中 W i 自 0。

5. 如权利要求 1至 4中任一权利要求所述的化合物, 其中 R4选 自 CH3

6. 如权利要求 1至 5 中任一权利要求所述的化合物, 其中 R5选 自 OH或(四氢吡喃 -2-基)氧基。

7. 如权利要求 1至 6中任一权利要求所述的化合物, 其中 R2选 自 H、 甲基、 乙基、 (吗啡啉基甲基)苯基、 4- ((吗啡啉 -1-基)甲基)苯基、 (二甲氨基甲基)苯基、 4- ((二甲氨基)曱基)苯基、 2-(2- (二甲基氨基)乙氧 基)乙基、 吗啡淋 -1-基、 哌啶- 1-基、 四氢吡咯 -1-基、 4-(2-羟基乙基)哌 嗪 -1-基、 (4-曱基哌嗪) -1-基、 (4-乙基哌嗪) -1-基、 2- (四氢吡咯 -1-基) 乙基、 3- (四氢吡咯 -1-基)丙基、 (2- (吗啡啉 -1-基)吡啶) -4-基、 (2- (吗啡 啉 -1-基)吡啶) -5-基、 吡啶 -2-基、 吡啶 -3-基、 吡啶 -4-基、 (吡啶 -4-基) 甲基、 (吡啶 -3-基)曱基、 (吡啶 -2-基)甲基、 2- (吡啶 -4-基)乙基、 2- (吡 啶 -3-基)乙基、 2- (吡啶 -2-基)乙基、 2- (吡啶 -4-基)丙基、 2- (吡啶 -3-基) 丙基、 2- (吡啶 -2-基)丙基、 2-((4-磺酰氨基)苯基)乙基、 (3- (二曱氨基) 丙基)哌嗪 -1-基、 3-((4-磺酰氨基)苯基)丙基、 3-((4-曱基)哌嗪 -1-基)丙 基、 3-((4-乙基)哌嗪小基)丙基、 3-((4-丙基)哌嗪 -1-基)丙基、 2-((4-曱 基)哌嗪 -1-基)乙基、 2-((4-乙基)哌嗪 -1-基)乙基、 2-((4-丙基)哌嗪 -1-基) 乙基、 2- (二曱氨基)乙基、 2- (二乙氨基)乙基 2、 2- (二丙氨基)乙基、 2- (哌 啶 -1-基)乙基、 2- (吗啡啉 -1-基)乙基、 2- (四氢吡咯 -1-基)乙基、 3- (二甲 氨基)丙基、 3- (二乙氨基)丙基、 3- (二丙氨基)丙基、 3- (哌啶 -1-基)丙基、 3- (吗啡啉 -1-基)丙基、 3- (四氢吡咯 -1-基)丙基、 4- (二甲氨基)丁基、 4- (二 乙氨基)丁基、 4- (二丙氨基)丁基、 4- (哌啶 -1-基)丁基、 4- (吗啡啉 -1-基) 丁基、 4- (四氢 p比咯 -1-基)丁基、 2-(2_(2-(2_ (二曱氨基)乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙基、 2-(2_(2-(2_ (二乙氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2- (二丙氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2- (哌啶- 1 - 基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2- (吗啡啉- 1 -基)乙氧基)乙氧 基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2- (四氢吡咯- 1 -基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 基、 2_(2_(2_ (二曱氨基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2_(2_(2_ (二乙氨基)乙氧基) 乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (二丙氨基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (旅啶 -1- 基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (吗啡啉 -1-基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (四氢吡咯 -1-基)乙氧基)乙氧基)乙基、 6-嘌呤基、 甲磺酰基、苯 磺酰基、 吡嗪 -2-基、 嘧啶 -2-基、 2-羟基乙基、 2-(2-羟基乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、

2- (2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2_羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2_羟基乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-甲 氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 基或 2- (2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基。

8. 如权利要求 1至 7中任一权利要求所述的化合物, 其中 R3选 自 H、 曱基、 乙基、 (吗啡啉基甲基)苯基、 4- ((吗啡啉 -1·基)甲基)苯基、 (二曱氨基曱基)笨基、 4- ((二曱氨基)曱基)苯基、 2-(2- (二甲基氨基)乙氧 基)乙基、 吗啡啉 -1-基、 哌啶 -1-基、 四氢吡咯 -1-基、 4-(2-羟基乙基)哌 嗪 -1-基、 (4-甲基哌嗪) -1-基、 (4-乙基哌嗪) -1-基、 2- (四氢吡咯 -1-基) 乙基、 3- (四氢吡咯 -1-基)丙基、 (2- (吗啡啉 -1-基)吡啶) -4-基、 (2- (吗啡 啉 -1-基)吡啶) -5-基、 吡啶 -2-基、 吡啶 -3-基、 吡啶 -4-基、 (吡啶 -4-基) 甲基、 (吡啶 -3-基)曱基、 (吡啶 -2-基)曱基、 2- (吡啶 -4-基)乙基、 2- (吡 啶 -3-基)乙基、 2- (吡啶 -2-基)乙基、 2- (吡啶 -4-基)丙基、 2- (吡啶 -3-基) 丙基、 2-(P比啶 -2-基)丙基、 2-((4-磺酰氨基)苯基)乙基、 (3- (二曱氨基) 丙基)哌嗪 -1-基、 3-((4-磧酰氨基)苯基)丙基、 3-((4-曱基)哌嗪 -1-基)丙 基、 3-((4-乙基)哌嗪 -1-基)丙基、 3-((4-丙基)哌嗪 -1-基)丙基、 2-((4-曱 基)哌嗪小基)乙基、 2-((4-乙基)哌嗪 -1-基)乙基、 2-((4-丙基)哌嗪小基) 乙基、 2- (二甲氨基)乙基、 2- (二乙氨基)乙基 2、 2- (二丙氨基)乙基、 2- (哌 啶 -1-基)乙基、 2- (吗啡啉 -1-基)乙基、 2- (四氢吡咯 -1-基)乙基、 3- (二曱 氨基)丙基、 3- (二乙氨基)丙基、 3- (二丙氨基)丙基、 3- (哌啶 -1-基)丙基、

3- (吗啡啉 -1-基)丙基、 3- (四氢吡咯 -1-基)丙基、 4- (二曱氨基)丁基、 4- (二 乙氨基)丁基、 4- (二丙氨基)丁基、 4- (哌啶 -1-基)丁基、 4- (吗啡啉 -1-基) 丁基、 4- (四氢吡咯 -1-基)丁基、 2-(2-(2-(2- (二曱氨基)乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2- (二乙氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2_(2_(2-(2- (二丙氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2_(2_(2-(2- (哌啶- 1 - 基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2- (吗啡啉- 1 -基)乙氧基)乙氧 基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2-(四氢吡咯- 基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 基、 2-(2-(2- (二曱氨基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (二乙氨基)乙氧基) 乙氧基)乙基、 2-(2_(2_ (二丙氨基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2_(2-(2_ (哌啶小 基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (吗啡啉- 1 -基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (四氢吡咯 -1-基)乙氧基)乙氧基)乙基、 6-嘌呤基、 曱磺酰基、 苯 磺酰基、 吡嗪 -2-基、 嘧啶 -2-基、 2-羟基乙基、 2-(2-羟基乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2- (2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2-(2_(2-(2-(2- 基乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2_(2-(2-(2-(2-(2_(2-甲 氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 基或 2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基。

9. 如权利要求 1至 8中任一权利要求所述的化合物, 其中 NR2R3 选自哌啶 -1-基、吗啡啉 -1-基、四氢吡咯 -1-基、(4-(2-羟基乙基))哌嗪 -1- 基、 (4-甲基)哌嗪 -1-基、 (4_乙基)哌嗪 -1-基、 (4-丙基)哌嗪 -1-基、 4-(3- 羟基丙基)哌嗪 -1-基、 3- (吗啡啉 -1-基)丙基、 腺嘌呤 -1-基、 (4-(3- (二曱 氨基)丙基)哌嗪) -1-基、 (4-(2- (二曱氨基)乙基)哌嗪) -1-基、 (4-(3- (二乙 氨基)丙基)哌嗪) -1-基、 (4-(2- (二乙氨基)乙基)哌嗪) -1-基、 (4-(2- (哌啶 -1-基)乙基)哌嗪) -1-基、 (4-(3- (哌啶 -1-基)丙基)哌嗪) -1-基、 (4-(2- (吗啡 啉 -1-基)乙基)哌嗪) -1-基、 (4-(3- (吗啡啉 -1-基)丙基)哌嗪) -1-基、 (4-(2- (四氢吡咯 -1-基)乙基)哌嗪) -1-基或 (4-(3- (四氢吡咯 -1-基)丙基)哌 嗪) -1-基。

10. 化合物, 其选自

Z6

CCZ000/Cl0ZN3/X3d O SO/ OZ OAV £6

εεζοοο/ειοζΝ3/ΐ3<ι O SO/ OZ OAV ^6

CCZOOO/ClOZN3/X3d O SO/ OZ OAV

77) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基 -13-氧代 -14-(4-((4-(2-羟基)乙基)哌嗪 -1-基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

78) 10-((3,- (吡咯- 1 -基) -2, ,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氢 -6,8, 11 -三羟基 - 13-氧代- 14-(4-((3- (吗啡啉- 1 -基)丙基) 氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

79) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氢 -6,8, 1 三羟基 - 13-氧代- 14-(4-((4-甲基)哌嗪- 1 -基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1 -甲氧基 -5, 12-萘二酮乙酸盐;

80) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基 -13-氧代 -14-(4-(4-乙基哌嗪 -1-基) -4-氧 代-丁酸酯基 )-1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

81) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基 - 13-氧代 -14-(4-((3-(4-曱基哌嗪 -1-基) 丙基)氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

82) 10-((3, - (吡咯- 1 -基) -2,,3,,6, -三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基-13-氧代-14-(4-((吡啶-4-基)甲基)氨 基 )_4-氧代-丁酸酯基 )-1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

83) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基-13-氧代-14-(4-((吡啶-3-基)曱基)氨 基) -4-氧代-丁酸酯基 )-1 -曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

84) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基-13-氧代-14-(4-(2-(吡啶-2-基)乙基)氨 基) -4-氧代-丁酸酯基 )-1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

85) 10-((3,- (吡咯 -1-基) _2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基-13-氧代-14-(4-(2-(吡啶-3-基)乙基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

86) 10-((3,-(吡咯-1-基)-2,,3,,6,-三去氧-3^1 &1 -来苏-己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基-13-氧代-14-(4-(2_(吡啶-4-基)乙基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

87) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基 -13-氧代 -14-(4-(4-(3- (二曱氨基)丙基) 哌嗪- 1 -基) -4-氧代 -丁酸酯基) - 1 -曱氧基 -5, 12-萘二酮乙酸盐;

89) 10-((3,-(吡咯-1-基)-2,,3,,6,-三去氧-&1 1^1 -来苏-己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基 -13-氧代 -14-(4-((2- (吗啡啉 -1-基)乙基) 氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

96) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基-13-氧代-14-(4-((2-(吗啡啉-1-基)乙基) 氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮磷酸盐; 以及

99) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氢 -6,8,11-三羟基 -13-氧代 -14-(4-((2- (吗啡啉 -1-基)乙基) 氨基) -4-氧代-丁酸酯基) - 1 -曱氧基 -5, 12-萘二酮盐酸盐。

11. 制备权利要求 1或 2所述的式 (I)所示的化合物的方法, 其包 括:

应得到式 (I)所示的化合物,

其中:

式 (II)所示的化合物中的 R W、 R4、 R5所表示的基团与式 (I)所 示的化合物中的 Ρλ W、 R4、 R5所表示的基团相同;

式 (III)所示的化合物中的 n与式 (I)所示的化合物中的 n所表示的 含义相同; 式 (III)所示的化合物中的 R7、 R8所表示的基团与式 (I)所示 的化合物中的 R2、 R3所表示的基团相同, 条件是 R7、 R8所表示的取 代基中不含有 NH或 NH2; 当 R7、 R8所表示的取代基中含有 NH或 NH2时, 式 (III)所示的化合物 N端带有氨基保护基并且经脱保护反应 得到式 (I)所示的化合物。

11. 如权利要求 10所述的方法, 其还包括加入活化剂, 所述活化 剂优选选自 HOSu、 HOAt、 HOBt 、 NHPI、 NHNI、 PFPOH、 HATU、

HBTU、 HCT、 HAPyU、 HBPyU、 TBTU、 TSTU、 TNTU、 BOP, PyBOP、 PyAOP、 DPP-CK DPP A DECP、 BOP-C1及其混合物。

12. 如权利要求 10或 11所述的方法, 其还包括加入催化剂, 所 述催化剂优选选自 4-二曱氨基吡啶、 4-吡咯烷基吡啶及其混合物。

13. 如权利要求 10至 12中任一权利要求所述的方法, 其中所述 氨基保护基选自 Fmoc、 Boc、 CBZ、 Tr、 Alloc, Teoc、 曱氧羰基、 乙 氧羰基、 Pht、 Tos、 Ns、 Tfa、 特戊酰基、 苯曱酰基、 Trt、 Dmb、 PMB 或 Bn。

14. 如权利要求 10至 13 中任一权利要求所述的方法, 其中所述 缩合剂选自 DC (:、 DIC、 EDCI、 HATU、 HBTU、 HCTU、 HAPyU. HBPyU、 TBTU、 TSTU、 TNTU、 BOP, PyBOP、 PyAOP, DPP-CK DPPA、 DECP、 BOP-C1及其混合物。

15. 如权利要求 10至 14中任一权利要求所述的方法, 其中所述 脱保护反应中使用的脱保护反应剂选自氢气、 NH3、 氨基乙醇、 二曱 胺、 二乙胺、 哌啶、 哌嗪、 DBU、 盐酸、 磷酸、 乙酸、 甲酸、 三氟乙 酸、 甲磺酸、 苯磺酸、 对曱苯磺酸及其混合物。

16. 如权利要求 10至 15中任一权利要求所述的方法, 其中所述 式 (III)所示的化合物由式 (IV)所示的化合物与 HNR7R8反应得到,

式 (IV) 其中:

式 (IV)所示的化合物中的 n与式 (I)所示的化合物中的 n表示的含 义相同;

HNR7R8中 R2和 R3所表示的基团与式 (I)所示化合物中 R2和 R3所 表示的基团相同。 17. 如权利要求 16所述的方法, 其还包括加入碱性化合物, 所述 碱性化合物优选选自三乙胺、 吡啶、 二异丙基乙基胺、 三曱胺、 N-曱 基吡咯烷、 N-曱基哌 、 N-甲基吗啡啉、 N-乙基吡咯烷、 N-乙基哌啶、 N-乙基吗啡啉及其混合物。 18. 药物组合物, 其包含权利要求 1至 10中任一权利要求所述的 式 (I)所示的化合物或其药物可接受的盐, 以及药物可接受的载体。

19. 制剂, 其包含权利要求 1 至 10 中任一权利要求所述的式 (I) 所示的化合物或其药物可接受的盐, 以及药物可接受的载体。

20. 如权利要求 19所述的制剂,其为注射用制剂,优选普通粉针、 冻干粉针、 水针、 乳剂、 溶液剂或混悬剂。

21. 治疗和 /或预防肿瘤和 /或癌症的方法,其包括向需要所述方法 的个体给予治疗有效量的权利要求 1 至 10任一权利要求所述的式 (I) 所示的化合物或其药物可接受的盐, 或者给予治疗有效量的权利要求 18所述的药物组合物, 或者给予治疗有效量的权利要求 19或 20所述 的制剂。

22. 如权利要求 21 所述的方法, 其中所述肿瘤和 /或癌症选自肝 癌、 胃癌、 乳腺癌、 肺癌、 肠癌、 卵巢癌、 胰腺癌、 头颈部癌、 宫颈 癌、 肾癌、 黑色素瘤、 前列腺癌、 脑胶盾瘤、 各种血癌、 淋巴癌和多 发性骨髓癌。

Description:
四环蔥 θ¾衍生物

领域

本申请涉及有机化合物与药物化学领域。 具体地, 本申请涉及四 环蒽醌衍生物及其制备方法与应用。

^

四环蒽醌类抗生素是使用非常广泛的抗癌药物 , 尤其是阿霉素 (Doxorubicin)和柔红霉素(Daunorubicin)。 阿霉素对许多实体瘤有显著 疗效, 其中包括肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 肺癌、 卵巢癌和多种血癌。 柔 红霉素是用于治疗白血病的最有效药物之一。 然而, 由于其严重的骨 髓抑制、 心脏毒性以及消化道不良反应等副作用, 使它们的临床使用 受到一定的限制。 到目前为止, 已从自然界分离出或人工合成出许多 它们的衍生物。 概述

本申请一方面涉及式 (I)所示的化合物及其药物可接受的盐,

其中:

R 1 选自 H、 任意取代的烷基或任意取代的烷氧基; 确认本 R 2 选自 H、 任意取代的芳基、 任意取代的杂芳基、 任意取代的 (亚 烷氧基) m 烷基、 任意取代的杂环基、 任意取代的烷基或任意取代的碌 酰基;

R 3 选自 H、 任意取代的芳基、 任意取代的杂芳基、 任意取代的(亚 烷氧基) m 烷基、 任意取代的杂环基、 任意取代的烷基或任意取代的磺 酰基;

或者 NR 2 R 3 表示任意取代的杂环基;

m选自 0、 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10或 1 1 ;

W选自 O或 NH;

R 4 选自 H、 F或任意取代的烷基;

R 5 选自 H、 F、 任意取代的烷基或 OR 6 , 其中 R 6 选自 H或任意取 代的四氢吡喃 -2-基;

n选自 1、 2或 3。

本申请的另一方面涉及式 (I)所示的化合物及其药物可接受的盐,

其中:

R 1 选自 H、 C M 烷基或 d. 4 烷氧基;

R 2 选自 H、 芳基、 杂芳基、 (C M 亚烷氧基) m C M 烷基、 杂环基、 d. 4 烷基或横酰基;

R 3 选自 H、 芳基、 杂芳基、 (CM亚烷氧基) M C M 烷基、 杂环基、 C, -4 烷基或磺酰基;

或者 NR 2 R 3 表示杂环基;

m选自 0、 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10或 U ;

W选自 O或 NH;

R 4 选自 H、 F或 CM烷基;

R 5 选自 H、 F、 C M 烷基或 OR 6 , 其中 R 6 选自 H或四氢吡喃 -2-基; n选自 1、 2或 3。

本申请的再一方面涉及化合物, 其选自:

eCZOOO/flOlN3/I3d ΟίΆόδΟ/ί-ΙΟΖ ΟΛ

££IOOO/£lOZN3/13d 0^.6≤0/t^0Z OAV

77) 10-((3,- (吡咯 - 1 -基) -2,,3,,6, -三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基 -13-氧代 -14-(4-((4-(2-羟基)乙基)哌嗪 -1-基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

78) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,1 1-三羟基 -13-氧代 -14-(4-((3- (吗啡啉 -1-基)丙基) 氨基) -4-氧代-丁酸酯基 )- 1 -甲氧基 -5, 12-萘二酮乙酸盐;

79) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基 -13-氧代 -14-(4-((4-曱基)哌嗪 -1-基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

80) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氢 -6,8,1 1-三羟基 -13-氧代 -14-(4-(4-乙基哌嗪 -1-基) -4-氧 代-丁酸酯基 )-1-曱氧基 -5,12·萘二酮乙酸盐;

81) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基 - 13-氧代 -14-(4-((3-(4-甲基哌嗪 -1-基) 丙基)氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

82) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 - 6 8 ,1 1-三羟基 -13-氧代 -14-(4- ((吡啶 -4-基)甲基)氨 基) -4-氧代-丁酸酯基) - 1 -甲氧基 -5, 12-萘二酮乙酸盐;

83) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alpha L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氢 -6,8, 1 1 -三羟基 - 13-氧代 - 14-(4- ((吡啶 -3-基)甲基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

84) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氢 -6,8, 11 -三羟基 - 13-氧代 - 14-(4-(2- (吡啶 -2-基)乙基)氨 基) -4-氧代-丁酸酯基 )-1 -甲氧基 -5, 12-萘二酮乙酸盐;

85) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基-13-氧代- 14-(4-(2-(吡啶-3-基)乙基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

86) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,1 1-三羟基-13-氧代-14-(4-(2-(吡啶-4-基)乙基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

87) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,1 1-三羟基 -13-氧代 -14-(4-(4-(3- (二曱氨基)丙基) 哌嗪 -1-基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

89) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8, 1 1-三羟基-13-氧代-14-(4-((2-(吗啡啉-1-基)乙基) 氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) - 1-甲氧基 -5, 12-萘二酮乙酸盐;

96) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,1 1-三羟基-13-氧代-14-(4-((2-(吗啡啉-1-基)乙基) 氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮磷酸盐; 以及

99) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8, 9 ,10-四氢 -6, 8 ,U-三羟基 -13-氧代 -14-(4-((2- (吗啡啉 -1-基)乙基) 氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮盐酸盐。

本申请的另一方面涉及制备式 (I)所示的化合物的方法, 其包括:

式 (I)

式 (II) 式 (m) 将式 (II)所示的化合物与式 (III)所示的化合物在缩合剂的存在下反 应得到式 (I)所示的化合物,

其中:

式 (I)所示的化合物中 R 1 选自 H、 C M 烷基或 d. 4 烷氧基; R 2 选自 H、 芳基、 杂芳基、 (d. 4 亚烷氧基) md.4烷基、 杂环基、 C M 烷基或磺 酰基; R 3 选自 H、 芳基、 杂芳基、 (C M 亚烷氧基) m CM烷基、 杂环基、 ( 烷基或碌酰基; 或者 NR 2 R 3 表示杂环基; m选自 0、 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10或 11 ; W选自 0或 NH; R 4 选自 H、 F或 C M 浣 基; R 5 选自 H、 F、 C M 烷基或 OR 6 , 其中 R 6 选自 H或四氢吡喃 -2-基; n选自 1、 2或 3;

式 (Π)所示的化合物中的 R W、 R 4 、 R 5 所表示的基团与式 (I)所 示的化合物中的 R 1 W、 R 4 、 R 5 所表示的基团相同;

式 (III)所示的化合物中的 n与式 (I)所示的化合物中的 n所表示的 含义相同; 式 (III)所示的化合物中的 R 7 、 R 8 所表示的基团与式 (I)所示 的化合物中的 R 2 、 R 3 所表示的基团相同, 条件是 R 7 、 R 8 所表示的取 代基中不含有 NH或 NH 2 ; 当 R 7 、 R 8 所表示的取代基中含有 NH或 NH 2 时, 式 (III)所示的化合物 N端带有氨基保护基并且经脱保护反应 得到式 (I)所示的化合物。

本申请的又一方面涉及药物组合物, 其包含式 (I)所示的化合物或 其药物可接受的盐, 以及药物可接受的栽体。

本申请的再一方面涉及制剂, 其包含式 (I)所示的化合物或其药物 可接受的盐, 以及药物可接受的载体。

本申请的另一方面涉及治疗和 /或预防肿瘤和 /或癌症的方法,其包 括向需要所述方法的个体给予治疗有效量的式 (I)所示的化合物或其药 物可接受的盐, 或者给予治疗有效量的包含式 (I)所示的化合物或其药 物可接受的盐, 以及药物可接受的栽体的药物组合物, 或者给予治疗 有效量的包含式 (I)所示的化合物或其药物可接受的盐, 以及药物可接 受的栽体的制剂。

本申请的化合物及其盐在细胞水平具有良好的 抗癌和 /或抗肿瘤 活性, 同时具有良好的水溶性和稳定性, 在动物体上具有良好的耐受 性, 从而易于开发为临床药物。 附图简要说明

图 1示出了 3,-吡咯基阿霉素对实验动物体重的影响。

图 2示出了本申请实施例 96中的化合物对实验动物体重的影响。 图 3示出了 3,-吡咯基阿霉素 -14-氧-丁二酸单酯对实验动物体重的 影响。 详述

在以下的说明中, 包括某些具体的细节以对各个公开的实施方案 提供全面的理解。 然而, 相关领域的技术人员会认识到, 不采用一个 或多个这些具体的细节, 而采用其它方法、 部件、 材料等的情况下可 实现实施方案。

除非本申请中另外要求, 在整个说明书和其后的权利要求书中, 词语 "包括 (comprise)" 及其英文变体例如 "包括(comprises)" 和 "包 括 (comprising)" 应解释为开放式的、 含括式的意义, 即 "包括但不限 于,, 。

在整个本说明书中提到的 "一实施方案" 或 "实施方案" 或 "在 另一实施方案中" 或 "在某些实施方案中" 意指在至少一实施方案中 包括与该实施方案所述的相关的具体参考要素 、 结构或特征。 因此, 在整个说明书中不同位置出现的短语 "在一实施方案中" 或 "在实施 方案中" 或 "在另一实施方案中" 或 "在某些实施方案中" 不必全部 指同一实施方案。 此外, 具体要素、 结构或特征可以任何适当的方式 在一个或多个实施方案中结合。

应当理解, 在本申请说明书和附加的权利要求书中用到的 单数形 式的冠词 "一" (对应于英文 "a"、 "an"和" the")包括复数的对象, 除非 文中另外明确地规定。 因此, 例如提到的包括 "催化剂" 的反应包括 一种催化剂, 或两种或多种催化剂。 还应当理解, 术语 "或" 通常以 其包括 "和 /或" 的含义而使用, 除非文中另外明确地规定。

定义

由表明在所示化学基团中找到的碳原子总数的 简化符号在前面标 示本文中命名的某些化学基团。 例如, C 7 -C 12 烷基描述具有总数为 7至 12个碳原子的如下定义的烷基, 并且 C 4 -C 12 环烃基烷基描述具有总数 为 4至 12个碳原子的如下定义的环烃基烷基。简化符 中碳原子总数并 不包含可能存在于所述基团的取代基中的碳。

因此, 非另有相反的说明, 否则说明书及所附权利要求中所用的 下列术语具有以下的意思:

本申请所用的术语"烷基"是指直链或支链的烃 基团, 仅由碳与 氢原子组成, 不含有不饱和键, 具有一至十二个碳原子, 优选为一至 八个碳原子或一至六个碳原子,且其通过单键 连接至分子的其余部份, 例如甲基、 乙基、 正丙基、 1-甲基乙基 (异丙基)、 正丁基、 正戊基、 1 , 1 - 二曱基乙基 (叔丁基)、 3-甲基己基、 2-曱基己基等。

烷基基团可具有 1至 12个碳原子 (在本申请中每次出现时, 诸如 " 1 至 12" 的数值范围是指给定范围中的每一整数; 如 " 1至 12" 意为所述 烷基基团可由 1个碳原子、 2个碳原子、 3个碳原子等直至并包括 12个碳 原子, 尽管本定义还涵盖未指定数值范围的术语 "烷基" 的出现)。 烷 基基团还可以是具有 1至 10个碳原子的中等大小的烷基。烷基基团还可 以是具有 1至 5个碳原子的低级烷基。 本申请化合物的烷基基团可被指 定为 "C M 烷基" 或类似的指定。 仅以实例的方式, "C M 烷基" 表明 烷基链中存在 1至 4个碳原子, 即烷基链选自曱基、 乙基、 丙基、 异丙 基、 正丁基、 异丁基、 仲丁基或叔丁基。 烷基基团可以是任意取代的, 亦即取代或未取代的。 当被取代时, 取代基团是单独地并且独立地选自下列的一个 或多个基团: 环烃基、 芳基、 杂芳基、 杂脂环基、 羟基、 烷氧基、 芳氧基、 巯基、 烷硫基、 芳硫基、 ^基、 1¾代、 羰基、 疏代羰基、 0-氨基甲酰基、 N-氨基甲酰 基、 0-硫代氨基甲酰基、 N-硫代氨基甲酰基、 C-酰氨基、 N-酰氨基、 S-亚磺酰氨基、 N-亚磺酰氨基、 C-羧基、 0-羧基、 异氦酸根合 (isocyanato), 氰石巟基、异石克氰酸 4艮合 (isothiocyanato)、硝基、 甲硅烷基、 三卤代曱烷磺酰基、 -NR,R,,或包括单-和二-取代的氨基基团在内 的氨 基, 及其被保护的衍生物。 通常烃基基团包括但不限于曱基、 乙基、 丙基、 异丙基、 丁基、 异丁基、 叔丁基、 戊基、 己基、 乙烯基、 丙烯 基、 丁烯基、 环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基等等。 每当取代基被 描述为被 "任意取代的" 时, 取代基可被上述取代基之一取代。

"C M 烷基" 指含有一至四个碳原子的上述定义的烷基基团 。 CM 烷基基团可以如对烷基基团定义的那样被任意 地取代。

"CM烷基" 指含有一至六个碳原子的上述定义的烷基基团 。 d. 6 烷基基团可以如对烷基基团定义的那样被任意 地取代。

烷基" 指含有一至十二个碳原子的上述定义的烷基基 团。 烷基基团可以如对烷基基团定义的那样被任意 地取代。

"C 2 . 6 烷基" 指含有二至六个碳原子的上述定义的垸基基团 。 C 2 . 6 烷基基团可以如对烷基基团定义的那样被任意 地取代。

"C 3-6 烷基" 指含有三至六个碳原子的上述定义的烷基。 C 3 . 6 烷基 基团可以如对烷基基团定义的那样被任意地取 代。

"C 3 . 12 烷基" 指含有三至十二个碳原子的上述定义的烷基。 C 3 . 12 烷基基团可以如对烷基基团定义的那样被任意 地取代。

"C 6 . 12 烷基" 指含有六至十二个碳原子的上述定义的烷基。 C 6 . 12 烷基基团可以如对烷基基团定义的那样被任意 地取代。

"Cm烷基" 指含有七至十二个碳原子的上述定义的烷基。 C 7 . 12 烷基基团可以如对垸基基团定义的那样被任意 地取代。

在某些实施方案中, 烷基为 C 12 烷基。

在某些实施方案中, 烷基为 C,. 8 烷基。 在某些实施方案中, 烷基为 C 1-6 烷基。

在某些实施方案中, 烷基为 烷基。

本申请所用的 "烷氧基" 是指通式 -OR, 其中 R是上文所定义的烷 基, 如曱氧基、 乙氧基、 正丙氧基、 1 -甲基乙氧基 (异丙氧基)、 正丁氧 基、 异丁氧基、 仲丁氧基、 叔丁氧基、 戊氧基、 叔戊氧基等等。

在某些实施方案中, 烷氧基为 C ,_ 12 烷氧基。

在某些实施方案中, 烷氧基为 烷氧基。

在某些实施方案中, 烷氧基为。^烷氧基。

在某些实施方案中, 烷氧基为 CM烷氧基。

本申请所用的 "亚烷基" 指仅由碳和氢组成的, 并且具有一至八 个碳原子, 连接分子的其余部分与残基基团的直链或支链 二价烃链, 例如亚曱基、 亚乙基、 亚丙基、 正亚丁基。 亚烷基链可以通过链中的 一个碳或通过链中的任意二个碳与分子的其余 部分和残基基团相连。

在某些实施方案中, 亚烷基为 d. 12 亚烷基。

在某些实施方案中, 亚烷基为 C^ 8 亚烷基。

在某些实施方案中, 亚烷基为(^. 6 亚烷基。

在某些实施方案中, 亚烷基为^^亚烷基。

本申请所用的 "亚烷氧基" 是指通式 -OR, 其中 R是上文所定义的 亚烷基, 如亚曱氧基、 亚乙氧基、 亚正丙氧基、 亚异丙氧基、 亚正丁 氧基、 亚异丁氧基、 亚仲丁氧基、 亚叔丁氧基、 亚戊氧基、 亚叔戊氧 基等等。

在某些实施方案中, 亚烷氧基为 0(<^_ 12 )亚烷基。

在某些实施方案中, 亚烷氧基为 0(d. 8 )亚烷基。

在某些实施方案中, 亚烷氧基为 0(^.6)亚烷基。

在某些实施方案中, 亚烷氧基为 0((^. 4 )亚烷基。

本申请所用的 "芳基" 是指具有完全离域的 π电子体系的碳环 (全 碳)或两个或多个稠合环 (共享两个相邻碳原子的环)。 芳基基团的实例 包括但不限于芴基、 苯基及萘基。 芳基基团例如可以具有五至十二个 碳原子。 本申请的芳基基团可以是取代的或未取代的。 当被取代时, 氢原子被一个或多个独立地选自下列取代基的 基团取代: 烷基、 环烃 基、 芳基、 杂芳基、 杂脂环基、 羟基、 被保护的羟基、 烷氧基、 芳氧 基、 巯基、 烷硫基、 芳硫基、 氰基、 素、 羰基、 硫代羰基、 O-氨基 甲酰基、 N-氨基甲酰基、 0-硫代氨基甲跣基、 N-硫代氨基曱酰基、 C- 酰氨基、 N-酰氨基、 S-亚磺酰氨基、 N-亚磺酰氨基、 C-羧基、 被保护 的 C-羧基、 0-羧基、 异氦酸根合、 氣硫基、 异硫氦酸根合、 硝基、 甲 硅烷基、 三! ¾代甲烷磺跣基、 - NR,R"(R,和 R"为本申请中定义的烷基) 或被保护的氨基。

在某些实施方案中, 芳基为 C 6 . 18 芳基。

在某些实施方案中, 芳基为 C 6 . 12 芳基。

在某些实施方案中, 芳基为 C 6 . 1() 芳基。

"杂芳基 (芳香杂环基)"是指 5-至 18-元芳香族环基团, 其包含一至 十七个碳原子与一至十个选自氮、 氧及硫的杂原子。 对于本发明的目 的, 杂芳基可为单环、 双环、 三环或四环的环系统, 其可包含稠合的 或桥接的环系统; 且在杂芳基中的氮、 碳或硫原子可任选地被氧化; 氮原子可任选地被季铵化。 实例包括但不限于氮杂基、 吖啶基、 苯并 咪唑基、 苯并噻唑基、 苯并吲哚基、 苯并二氧戊环基、 苯并呋喃基、 苯并噁唑基、 苯并噻唑基、 苯并噻二唑基、 苯并 [b][l,4]二氧杂环庚基、 1,4-苯并二噁烷基、 苯并萘并呋喃基、 苯并二氧戊环基、 苯并二噁烯 基、 苯并吡喃基、 苯并吡喃酮基、 苯并呋喃基、 笨并呋喃酮基、 笨并 噻吩基、 苯并三唑基、 苯并 [4,6]咪唑并 [l,2-a]吡啶基、 咔唑基、 噌啉 基、 二苯并呋喃基、 二苯并噻吩基、 呋喃基、 呋喃酮基、 异噻唑基、 咪唑基、 吲唑基、 吲哚基、 吲唑基、 异吲哚基、 二氢吲哚基、 异二氢 吲哚基、 异喹啉基、 中氮茚基、 异噁唑基、 萘基、 二氮杂萘基、 二唑 啉基、 2-氧代氮杂基、 噁唑基、 环氧乙烷基、 1-笨基 -1H-吡咯基、 吩嗪 基、 吩噻嗪基、 吩噁嗪基、 2,3-二氮杂萘基、 蝶啶基、 嘌呤基、 吡咯 基、 吡唑基、 吡啶基、 吡嗪基、 嘧啶基、 哒嗪基、 吡咯基、 喹唑啉基、 喹喔啉基、 喹啉基、 奎宁环基、 异喹啉基、 四氢喹啉基、 噻唑基、 噻 二唑基、 三唑基、 四唑基、 三嗪基及噻吩基。 除非本说明书中另外明 确述及, 术语"杂芳基"意为包括可任选地被一个或多个 立地选自下 列基团的取代基取代的杂芳基: 烷基、 环烃基、 芳基、 杂芳基、 杂脂 环基、 羟基、 被保护的羟基、 烷氧基、 芳氧基、 巯基、 烷硫基、 芳硫 基、 氰基、 素、 羰基、 硫代羰基、 0-氨基曱酰基、 N-氨基曱酰基、 0-硫代氨基曱酰基、 N-硫代氨基曱酰基、 C-酰氨基、 N-酰氨基、 S-亚 磺酰氨基、 N-亚磺酰氨基、 C-羧基、 被保护的 C-羧基、 0-羧基、 异^ 酸根合、 氛硫基、 异硫氛酸根合、 硝基、 曱硅烷基、 三 |¾代甲烷磧酰 基、 - NR,R"(R,和 R"为本申请中定义的烷基)或被保护的氨基。

在某些实施方案中, 杂芳基为 < 5 _ 18 杂芳基。

在某些实施方案中, 杂芳基为 (: 5 . 12 杂芳基。

在某些实施方案中, 杂芳基为( 5 . 1() 杂芳基。

本申请所用的 "杂环基" 指由碳原子和一至五个选自氮、 氧和硫 的杂原子组成的稳定的三至十二员的非芳香族 环基团。 这样的杂环基 基团的实例包括但不限于二氧环戊基、 十氢异喹啉基、 咪唑啉基、 咪 唑烷基、 异噻唑烷基、 异噁唑烷基、 吗啉基、 八氢吲哚基、 八氢异吲 哚基、 2-氧代哌嗪基、 2-氧代哌啶基、 2-氧代吡咯烷基、 噁唑烷基、 哌 啶基、 哌嗪基、 4-哌啶酮基、 吡咯烷基、 吡唑烷基、 噻唑烷基、 四氢 呋喃基、 三噻烷基、 四氢吡喃基、 硫代吗啉基、 噻吗啉基、 1-氧代-硫 代吗啉基和 1,1-二氧代-硫代吗啉基。 除非说明书中另有明确说明, 否 则术语 "杂环基" 旨在包括被一个或多个选自如下取代基的基团 所任 意取代的上述定义的杂环基: 环烃基、 芳基、 杂芳基、 杂脂环基、 羟 基、 烷氧基、 芳氧基、 巯基、 烷硫基、 芳硫基、 氦基、 代、 羰基、 硫代锬基、 0-氨基甲酰基、 N-氨基曱酰基、 O-硫代氨基曱酰基、 N-硫 代氨基曱酰基、 C-酰氨基、 N-酰氨基、 S-亚磺酰氨基、 N-亚磺酰氨基、 C-羧基、 0-羧基、 异氰酸根合、 氰硫基、 异硫氦酸根合、 硝基、 曱硅 烷基、 三卤代甲烷磺酰基、 -NR,R" (R,和 R"为本申请中定义的烷基) 或包括单-和二-取代的氨基基团在内的氨基, 及其被保护的衍生物。

在某些实施方案中, 杂环基为 (: 3 _ 18 杂环基。

在某些实施方案中, 杂环基为 (: 3 . 12 杂环基。

在某些实施方案中, 杂环基为 C 3 . 1Q 杂环基。

"磺酰基" 指 -S(=0) 2 R基团, 其中 R可以是上文定义的烷基、 环烃 基、 杂环基、 芳基、 杂芳基等基团。 磺酰基的实例包括但不限于 -S(=0) 2 CH 3 (曱磺酰基)、 -S(=0) 2 CF 3 、 -S(=0) 2 CH 2 CH 3 和 4-甲基苯磺酰 基 (甲苯磺耽基)。

"任意的" 或 "任意地" 指后续叙述的状况可能出现或可能不出 现, 并且该叙述包括所述事件或状况发生的情况和 不发生的情况。 例 如, "任意取代的芳基" 指芳基基团可能被取代或可能不被取代, 并 且该叙述包括取代的芳基基团和未取代的芳基 基团。

"药物可接受的栽体" 包括但不限于已经被美国食品与药品管理 局认可的而可用于人类或动物的任何佐剂、 载体、 赋形剂、 助流剂、 甜味剂、 稀释剂、 防腐剂、 染料 /着色剂、 香味增强剂、 表面活性剂、 润湿剂、 分散剂、 助悬剂、 稳定剂、 等渗压剂、 溶剂或乳化剂等对组 成药物组合物无副作用的各种形式的载体。

"药物可接受的盐" 包括 "药物可接受的酸加合盐" 和 "药物可 接受的碱加合盐" 。

"药物可接受的酸加合盐" 指保持游离碱的生物学有效性和性质 的那些盐, 所述酸加合盐是在生物学或其它方面合适的并 且是使用无 机酸或有机酸来形成的, 所述无机酸例如但不限于盐酸、 氢溴酸、 硫 酸、 硝酸、 磷酸等, 所述有机酸例如但不限于乙酸、 2,2-二氯乙酸、 己二酸、 褐藻酸、 抗坏血酸、 天冬氨酸、 笨磺酸、 苯羧酸、 4-乙酰胺 基苯羧酸、 樟脑酸、 樟脑 -10-磺酸、 癸酸、 己酸、 辛酸、 碳酸、 肉桂 酸、 柠檬酸、 环己烷基氨基磺酸、 十二烷基硫酸、 乙烷 - 1,2-二磺酸、 乙烷磺酸、 2-羟基乙烷磧酸、 曱酸、 富马酸、 粘酸、 龙胆酸、 葡庚糖 酸、 葡糖酸、 葡糖醛酸、 谷氨酸、 戊二酸、 2-氧代-戊二酸、 甘油磷酸、 乙醇酸、 马尿酸、 异丁酸、 乳酸、 乳糖醛酸、 月桂酸、 马来酸、 苹果 酸、 丙二酸、 扁桃酸、 甲烷磺酸、 黏酸、 萘 - 1,5-二磺酸、 萘 -2-磺酸、 1-羟基 -2-萘甲酸、 烟酸、 油酸、 乳清酸、 草酸、 棕榈酸、 双羟萘酸、 丙酸、 焦谷氨酸、 丙酮酸、 水杨酸、 4-氨基水杨酸、 癸二酸、 硬脂酸、 丁二酸、 酒石酸、 硫氛酸、 对甲苯磺酸、 三氟乙酸、 十一碳烯酸等。

"药物可接受的碱加合盐" 指保持游离酸的生物学有效性和性质 的那些盐, 所述碱加成盐是在生物学或其它方面合适的。 向游离酸中 加入无机碱或有机碱来制备这些盐, 由无机碱衍生的盐包括但不限于 钠、 钾、 锂、 铵、 钙、 镁、 铁、 锌、 铜、 锰、 铝盐等。 优选的无机盐 为铵、 钠、 钾、 钙及镁盐。 由有机碱衍生的盐包括但不限于伯、 仲和 叔胺的盐、 包括天然存在的取代的胺在内的取代的胺、 环胺和碱性离 子交换树脂的盐, 例如氨、 异丙胺、 三曱胺、 二乙胺、 三乙胺、 三丙 胺、 二乙醇胺、 乙醇胺、 二曱氨基乙醇、 2-二甲氨基乙醇、 2-二乙氨 基乙醇、 二环己胺、 赖氨酸、 精氨酸、 组氨酸、 咖啡因、 普鲁卡因、 海巴明、 胆碱、 甜菜碱、 苄胺、 苯乙二胺、 乙二胺、 葡萄糖胺、 曱基 葡糖胺、 可可碱、 三乙醇胺、 氨基丁三醇、 嘌呤、 哌嗪、 哌啶、 N-乙 基哌啶、 聚胺树脂等。 特别优选的有机碱是异丙胺、 二乙胺、 乙醇胺、 三甲胺、 二环己胺、 胆碱和咖啡因。

"药物组合物" 指本申请化合物与通常被本领域所接受的将生 物 活化化合物输送至诸如人类等哺乳动物的介质 所形成的制剂。 这样的 介质包括所有药物可接受的栽体、 稀释剂或赋形剂。

"治疗有效量" 指当对哺乳动物, 优选对人类给药时, 本申请化 合物足以有效治疗(如下定义)哺乳动物的, 优选人类的肿瘤和 /或癌症 的量。 根据化合物、 疾病状态及其严重性、 以及待治疗哺乳动物的年 龄, 构成 "治疗有效量" 的本申请化合物的量将会不同, 但是本领域 的技术人员根据其自身的知识以及本公开可以 依惯例确定本申请化合 物的量。

本文所用的 "进行治疗" 或 "治疗" 涵盖患有相关疾病或病症的 哺乳动物, 优选人类中治疗相关的疾病或疾病状态, 并且包括:

(i) 预防疾病或疾病状态在哺乳动物中发生,尤其 是当该哺乳动物 易感于所述疾病状态, 但尚未被诊断出患有这种疾病状态时;

(ii) 抑制疾病或疾病状态, 即阻止其发生; 或者

(iii) 緩解疾病或疾病状态, 即使疾病或疾病状态消退。

在整个治疗过程中, 体内给药可以以单次给药、 连续或间歇给药 (例如以分割的剂量以适宜的间隔给药)的方 来进行。 测定最有效的 给药方式和剂量的方法是本领域技术人员公知 的, 并随着治疗所用的 制剂、 治疗的目的、 所治疗的靶细胞以及所治疗的个体而改变。 可以 进行单次或多次给药, 剂量水平和模式由主治医师进行选择。 具体实施方式

一方面, 本申请涉及式 (I)所示的化合物及其药物可接受的盐

其中:

R 1 选自 H、 任意取代的烷基或任意取代的烷氧基;

R 2 选自 H、 任意取代的芳基、 任意取代的杂芳基、 任意取代的(亚 烷氧基) m 烷基、 任意取代的杂环基、 任意取代的烷基或任意取代的礒

R 3 选自 H、 任意取代的芳基、 任意取代的杂芳基、 任意取代的(亚 烷氧基) m 烷基、 任意取代的杂环基、 任意取代的烷基或任意取代的磺 酰基;

或者 NR 2 R 3 表示任意取代的杂环基;

m选自 0、 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10或 1 1 ;

W选自 0或 NH;

R 4 选自 H、 F或任意取代的烷基;

R 5 选自 H、 F、 任意取代的烷基或 OR 6 , 其中 R 6 选自 H或任意取 代的四氢吡喃 -2-基;

n选自 1、 2或 3。 另一方面, 本申请涉及式 (I)所示的化合物及其药物可接受的盐,

其中:

R 1 选自 H、 烷基或 d. 4 烷氧基;

R 2 选自 H、 芳基、 杂芳基、 (C M 亚烷氧基) m C M 烷基、 杂环基、 C M 烷基或横酰基;

R 3 选自 H、 芳基、 杂芳基、 (C M 亚烷氧基) m C M 烷基、 杂环基、 烷基或磺酰基;

或者 NR 2 R 3 表示杂环基;

m选自 0、 1、 2、 3、 4、 5、 6> 7、 8、 9、 10或 11 ;

W选自 O或 NH;

R 4 选自 H、 F或 C M 烷基;

R 5 选自 H、 F、 C M 烷基或 OR 6 , 其中 R 6 选自 H或四氢吡喃 -2-基; n选自 1、 2或 3。

在某些实施方案中, 式 (I)所示的化合物中 R 1 选自 H或 OCH 3

在某些实施方案中, 式 (I)所示的化合物中 W选自 o。

在某些实施方案中, 式 (I)所示的化合物中 R 4 选自 CH 3

在某些实施方案中, 式 (I)所示的化合物中 R 5 选自 OH或(四氢吡喃 -2-基)氧基。

在某些实施方案中, 式 (I)所示的化合物中 R 2 选自 H、 曱基、 乙基、 (吗啡啉基甲基)苯基、 4- ((吗啡啉 -1-基)甲基)苯基、 (二甲氨基甲基)笨 基、 4- ((二甲氨基)曱基)苯基、 2-(2- (二曱基氨基)乙氧基)乙基、 吗啡啉 -1-基、 哌啶 -1-基、 四氢吡咯 -1-基、 4-(2-羟基乙基)哌嗪 -1-基、 (4-甲基 哌嗪) -1-基、 (4-乙基哌嗪) -1-基、 2- (四氢吡咯 -1-基)乙基、 3- (四氢吡咯 -1-基)丙基、 (2- (吗啡啉 -1-基)吡啶) -4-基、 (2- (吗啡啉 -1-基)吡啶) -5-基、 吡啶 -2-基、 吡啶 -3-基、 吡啶 -4-基、(吡啶 -4-基)甲基、(吡啶 -3-基)曱基、 (吡啶 -2-基)甲基、 2- (吡啶 -4-基)乙基、 2- (吡啶 -3-基)乙基、 2- (吡啶 -2- 基)乙基、 2- (吡啶 -4-基)丙基、 2- (吡啶 -3-基)丙基、 2- (吡啶 -2-基)丙基、 2-((4-磺酰氨基)苯基)乙基、 (3- (二甲氨基)丙基)哌嗪 -1-基、 3-((4-磺酰 氨基)苯基)丙基、 3-((4-曱基)哌嗪 -1-基)丙基、 3-((4-乙基)哌嗪 -1-基)丙 基、 3-((4-丙基)哌嗪 -1-基)丙基、 2-((4-曱基)哌嗪 -1-基)乙基、 2-((4-乙 基)哌嗪 -1-基)乙基、 2-((4-丙基)哌嗪 -1-基)乙基、 2- (二甲氨基)乙基、

2- (二乙氨基)乙基 2 、 2- (二丙氨基)乙基、 2- (哌啶 -1-基)乙基、 2- (吗啡啉 -1-基)乙基、 2- (四氢吡咯 -1-基)乙基、 3- (二曱氨基)丙基、 3- (二乙氨基) 丙基、 3- (二丙氨基)丙基、 3- (哌啶 -1-基)丙基、 3- (吗啡啉 -1-基)丙基、

3- (四氢吡咯 -1-基)丙基、 4- (二曱氨基)丁基、 4- (二乙氨基)丁基、 4- (二 丙氨基)丁基、 4- (哌啶 -1-基)丁基、 4- (吗啡啉 -1-基)丁基、 4- (四氢吡咯 -1-基)丁基、 2-(2-(2-(2- (二曱氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基 2-(2-(2-(2- (二乙氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基 2-(2-(2-(2- (二丙氨 基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2- (哌啶 -1-基)乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2- (吗啡啉 -1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-( 2 _(2-( 2 _ (四氢吡咯- 1 -基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2 _( 2 _( 2 _ (二曱 氨基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (二乙氨基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (二丙氨基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (哌啶- 1 -基)乙氧基)乙 氧基)乙基、 2-(2-(2- (吗啡啉 -1-基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (四氢 吡咯 -1-基)乙氧基)乙氧基)乙基、 6-嘌呤基、 甲磺酰基、 苯磺酰基、 吡 嗪 -2-基、 嘧啶 -2-基、 2-羟基乙基、 2-(2-羟基乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧 )乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2- 1^乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基 乙 氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基) 乙基、 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-甲 氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 基或 2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基

在某些实施方案中, 式 (I)所示的化合物中 R 3 选自 H、 甲基、 乙基、

(吗啡啉基曱基)苯基、 4- ((吗啡啉 -1-基)甲基)苯基、 (二曱氨基甲基)苯 基、 4- ((二曱氨基)甲基)苯基、 2-(2- (二甲基氨基)乙氧基)乙基、 吗啡啉 -1-基、 哌啶 -1-基、 四氢吡咯 -1-基、 4-(2-羟基乙基)哌嗪 -1-基、 (4-曱基 哌嗪) -1-基、 (4-乙基哌嗪) -1-基、 2- (四氢吡咯 -1-基)乙基、 3- (四氢吡咯 -1-基)丙基、 (2- (吗啡啉 -1-基)吡啶) -4-基、 (2- (吗啡啉 -1-基)吡啶) -5-基、 吡啶 -2-基、 吡啶 -3-基、 吡啶 -4-基、(吡嗳 -4-基)曱基、(吡啶 -3-基)甲基、 (吡啶 -2-基)曱基、 2- (吡啶 -4-基)乙基、 2- (吡啶 -3-基)乙基、 2- (吡啶 -2- 基)乙基、 2- (吡啶 -4-基)丙基、 2- (吡啶 -3-基)丙基、 2- (吡啶 -2-基)丙基、 2-((4-磺酰氨基)苯基)乙基、 (3- (二甲氨基)丙基)哌嗪 - 1-基、 3-((4-磺酰 氨基)苯基)丙基、 3-((4-曱基)哌嗪 -1-基)丙基、 3-((4-乙基)哌嗪 -1-基)丙 基、 3-((4-丙基)哌嗪 - 1-基)丙基、 2-((4-甲基)哌嗪 -1-基)乙基、 2-((4-乙 基)哌嗪 -1-基)乙基、 2-((4-丙基)哌嗪 -1-基)乙基、 2- (二曱氨基)乙基、

2- (二乙氨基)乙基 2 、 2- (二丙氨基)乙基、 2- (哌啶 -1-基)乙基、 2- (吗啡啉 -1-基)乙基、 2- (四氢吡咯 -1-基)乙基、 3- (二曱氨基)丙基、 3- (二乙氨基) 丙基、 3- (二丙氨基)丙基、 3- (哌啶 -1-基)丙基、 3- (吗啡啉 -1-基)丙基、

3- (四氢吡咯 -1-基)丙基、 4- (二曱氨基)丁基、 4- (二乙氨基)丁基、 4- (二 丙氨基)丁基、 4- (哌啶 -1-基)丁基、 4- (吗啡啉 -1-基)丁基、 4- (四氢吡咯 -1-基)丁基、 2-(2-(2-(2- (二甲氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基 2-(2-(2-(2- (二乙氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基 2-(2-(2-(2- (二丙氨 基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-( 2 _( 2 _ (哌啶- 1 -基)乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2- (吗啡啉 -1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2- (四氢吡咯- 1 -基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (二甲 氨基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (二乙氨基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (二丙氨基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2- (哌啶- 1 -基)乙氧基)乙 氧基)乙基、 2-(2-(2- (吗啡啉 -1-基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-( 2 - (四氢 吡咯 -1-基)乙氧基)乙氧基)乙基、 6-嘌呤基、 曱磺酰基、 苯磺酰基、 吡 嗪 -2-基、 嘧啶 -2-基、 2-羟基乙基、 2-(2-羟基乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧 )乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙 基)乙氧基)乙氧基)乙 氧基)乙氧基)乙氧基)乙基、 2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基) 乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基) 乙基、 2-( 2 -( 2 -( 2 -( 2 _(2-( 2 - (2-甲 氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 基或 2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基

在某些实施方案中, 式 (I)所示的化合物中 NR 2 R 3 选自哌啶 -1-基、 吗啡啉 -1-基、 四氢吡咯 -1-基、 (4-(2-羟基乙基))哌嗪 -1-基、 (4-曱基)哌 嗪 -1-基、 ( 4 -乙基)哌嗪 - 1-基、 ( 4 _丙基)哌嗪 -1-基、 4 _(3-羟基丙基)哌嗪 -1-基、 3- (吗啡啉 -1-基)丙基、 腺嘌呤 -1-基、 (4-(3- (二甲氨基)丙基)哌 嗪) -1-基、 (4-(2- (二甲氨基)乙基)哌嗪)小基、 (4-(3- (二乙氨基)丙基)哌 嗪) -1-基、 (4-(2- (二乙氨基)乙基)哌嗪) -1-基、 (4-(2- (哌啶 -1-基)乙基)哌 嗪)小基、 (4-(3- (哌啶 -1-基)丙基)哌嗪)小基、 (4-(2- (吗啡啉 -1-基)乙基) 哌嗪) -1-基、 (4-(3- (吗啡啉 -1-基)丙基)哌嗪) -1-基、 (4-(2- (四氢吡咯 -1- 基)乙基)哌嗪) - 1 -基或 (4-(3 - (四氢吡咯 - 1 -基)丙基)哌嗪) - 1 -基。

又一方面, 本申请涉及化合物, 其选自:

序号 n NR" R

££Z000/£10Z 13/I3d O SO/ OZ OAV 9Z

£CZOOO/ClOZM3/X3d 9Z

f£ZOOO/eiOIN3/13d 請 OAV

77) 10-((3,- (吡咯 - 1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8, 9 , 10-四氢 _ 6 ,8, 1 1 -三羟基 - 13-氧代 - 1 4 _( 4 -(( 4 -( 2 _羟基)乙基)哌嗪 小基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

78) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氢 -6,8, 1 1 -三羟基 - 13-氧代- 14- (4-((3- (吗啡啉- 1 -基)丙基) 氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

79) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,1 1-三羟基-13-氧代-14-(4-((4-甲基)哌嗪-1-基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

80) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氢 -6,8, 1 1 -三羟基 - 13-氧代- 14-(4-(4-乙基哌嗪- 1 -基) -4-氧 代-丁酸酯基 )-1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

81) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氢 -6,8,11-三羟基-13-氧代-14-(4-((3-(4-曱基哌嗪-1- 基) 丙基)氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

82) 10-((3,-(吡咯-1-基)-2,,3,,6,-三去氧-31 11&1 -来苏-己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,1 1-三羟基 -13-氧代 -14-(4- ((吡啶 -4-基)曱基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

83) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氛 -6,8, 1 1 -三羟基 - 13-氧代- 14-(4- ((吡啶 -3-基)曱基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) - 1 -曱氧基 -5, 12-萘二酮乙酸盐;

84) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基-13-氧代-14-(4-(2-(吡啶-2-基)乙 基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

85) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6, 8 , U-三羟基 -13-氧代 -14-(4-(2- (吡啶 -3·基)乙基)氨 基) -4-氧代-丁酸酯基 )- 1 -曱氧基 -5, 12-萘二酮乙酸盐;

86) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8, 9 , 10-四氢 _ 6 , 8 ,1 1-三羟基 -13-氧代 -14-( 4 -( 2 _ (吡啶 - 4 _基)乙基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

87) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氢 -6,8, 1 1 -三羟基 - 13-氧代- 14-(4-(4-(3- (二甲氨基)丙基) 哌嗪- 1 -基) -4-氧代-丁酸酯基) - 1 -甲氧基 -5, 12-萘二酮乙酸盐;

89) 10-((3,-(吡咯-1-基)-2,,3,,6,-三去氧-&1 1131 -来苏-己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氢 -6,8,1 1-三羟基-13-氧代-14-(4-((2-(吗啡啉-卜基)乙基 氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐;

96) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,1 1-三羟基-13-氧代-1 4 -(4-((2-(吗啡啉-1-基)乙基) 氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮磷酸盐; 以及

99) 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,1 1-三羟基 -13-氧代 -14- (4-((2- (吗啡啉 -1-基)乙基) 氨基) -4-氧代-丁酸酯基 )- 1 -曱氧基 -5, 12-萘二酮盐酸盐。

再一方面, 本申请涉及制备式 (I)所示的化合物的方法, 其包括:

式 (II) 式 (III) 将式 (II)所示的化合物与式 (III)所示的化合物在缩合剂的存在下反 应得到式 (I)所示的化合物,

其中:

式 (I)所示的化合物中 R 1 选自 H、 C M 烷基或 d. 4 烷氧基; R 2 选自

H、 芳基、 杂芳基、 (C M 亚烷氧基) 烷基、 杂环基、 (^. 4 烷基或碓 酰基; R 3 选自 H、 芳基、 杂芳基、 (C M 亚烷氧基) m C 4 烷基、 杂环基、 。 1-4 烷基或碩酰基; 或者 NR 2 R 3 表示杂环基; m选自 0、 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10或 1 1 ; W选自 O或 NH; R 4 选自 H、 F或 C M 坑 基; R 5 选自 H、 F、 d. 4 烷基或 OR 6 , 其中 R 6 选自 H或四氢吡喃 -2-基; n选自 1、 2或 3;

式 (II)所示的化合物中的 R'、 W、 R 4 、 R 5 所表示的基团与式 (I)所 示的化合物中的 R W、 R 4 、 R 5 所表示的基团相同; 式 (III)所示的化合物中的 n与式 (I)所示的化合物中的 n所表示的 含义相同; 式 (III)所示的化合物中的 R 7 、 R 8 所表示的基团与式 (I)所示 的化合物中的 R 2 、 R 3 所表示的基团相同, 条件是 R 7 、 R 8 所表示的取 代基中不含有 NH或 NH 2 ; 当 R 7 、 R 8 所表示的取代基中含有 NH或 NH 2 时, 式 (III)所示的化合物 N端带有氨基保护基并且经脱保护反应 得到式 (I)所示的化合物。

在某些实施方案中, 制备式 (I)所示的化合物的方法还包括加入活 化剂。

能够用于本申请的制备式 (I)所示的化合物的方法的活化剂的示例 性的实例包括但不限于 N-羟基琥珀酰亚胺 (HOSu)、 羟基 -7-偶氮苯并 三氮唑(HOAt)、 1-羟基苯并三唑(HOBt)、 N-羟基邻苯二甲酰亚胺 (NHPI)、 N-羟基 -1,8-萘二甲酰亚胺 (NHNI)、 五氟苯酚 (PFPOH)、 2-(7- 偶氮笨并三氮唑) -Ν,Ν,Ν',Ν'-四甲基脲六氟磷酸酯 (HATU)、笨并三氮唑 -N,N,N,,N,-四曱基脲六氟磷酸盐 (HBTU)、 6-氯苯并三氮唑 -1,1,3,3-四 曱基脲六氟磷酸酯 (HCTU)、 0-(7-氮杂苯并三氮唑 -1-基) -二(四氢吡咯 基)碳錯六氟磷酸盐 (HAPyU)、 0- (苯并三氟唑 -1-基) -二 (四氢吡咯基)碳 鏘六氟碑酸盐 (HBPyU)、 0-苯并三氮唑 -N,N,N',N '-四甲基脲四氟硼酸 (TBTU)、 2-琥珀酰亚胺基 -1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯 (TSTU)、 2-(5- 降水片稀 -2,3-二甲酰亚胺基) -1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸季铵盐 (TNTU)、 苯并三氮唑 -1-基氧基三 (二曱基氨基)磷錯六氟磷酸盐 (BOP)、 六氟磷酸笨并三唑 -1-基 -氧基三吡咯烷基磷 (PyBOP)、(3H-1,2,3-三唑并 [4,5-b]吡啶 -3-氧基)三 -1-吡咯烷基鳞六氟磷酸盐 (PyAOP)、 二苯基次膦 酰氯 (DPP-C1)、 叠氮磷酸二笨酯 (DPP A)、 氰基磷酸二乙酯 (DECP)、 ^ (2-氧代 -3-噁唑烷基)次磷酰氯 (BOP-C1)及其混合物。

能够用于本申请的制备式 (I)所示的化合物的方法的缩合剂的示例 性的实例包括但不限于二环己基碳二亚胺 (DCC:)、 二异丙基碳二亚胺 (DIC)、 1-(3-二甲胺基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 (EDCI)、 2-(7-偶氮苯并三 氮唑)-N,N,N,,N,-四 曱基脲六氟磷酸酯(HATU)、 苯并三氮唑 -N,N,N,,N,-四甲基脲六氟磷酸盐 (HBTU)、 6-氯苯并三氮唑 -1,1,3,3-四 曱基脲六氟磷酸酯 (HCTU)、 0-(7-氮杂笨并三氮唑 -1-基) -二(四氢吡咯 基)碳鏘六氟 磷酸盐 (HAPyU)、 0- (笨并三氮唑 -1-基) -二(四氢吡咯基) 碳鎗六氟磷酸盐 (HBPyU)、0-笨并三氮唑 -Ν,Ν,Ν',Ν'-四甲基脲四氟硼酸 (TBTU)、 2-琥珀酰亚胺基 -1,1,3,3-四曱基脲四氟硼酸酯 (TSTU)、 2-(5- 降水片烯 -2,3-二甲酰亚胺基) -1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸季铵盐 (TNTU),苯并三氮唑 -1-基氧基三 (二甲基氨基)磷鏘六氟磷酸盐 (BOP)、 六氟磷酸苯并三唑 -1-基 -氧基三吡咯烷基磷 (PyBOP)、(3H-1,2,3-三唑并

[ 4 5 _b]吡啶 _ 3 -氧基)三 -1-吡咯烷基鳞六氟磷酸盐 (PyAOP)、 二苯基次膦 酰氯 (DPP-C1)、 叠氮磷酸二苯酯 (DPP A)、 氦基磷酸二乙酯 (DECP)、 双 (2-氧代 -3-噁唑烷基)次磷酰氯 (BOP-C1)及其混合物。

在某些实施方案中, 制备式 (I)所示的化合物的方法还包括加入催 化剂。

能够用于本申请的制备式 (I)所示的化合物的方法的催化剂的示例 性的实例包括但不限于 4-二甲氨基吡啶、 4-吡咯烷基吡啶及其混合物。

能够用于本申请的制备式 (I)所示的化合物的方法的氮保护基的示 例性的实例包括但不限于 Fmoc (芴曱氧羰基)、 Boc (叔丁氧羰基)、 CBZ (苄氧羰基)、 Tr (三苯曱基)或 Alloc (烯丙氧羰基)、 Teoc (三曱基硅乙 氧羰基)、 曱氧羰基、 乙氧羰基、 Pht (邻苯二曱酰基)、 Tos (对甲笨磺酰 基)、 Ns (邻 /对硝基苯磺酰基)、 Tfa (三氟乙酰基)、特戊酰基、笨甲酰基、 Trt (三苯曱基)、 Dmb(2,4-二甲氧基苄基)、 PMB (对曱氧基苄基)、 Bn (苄 基)。

能够用于本申请的制备式 (I)所示的化合物的方法的脱保护反应剂 的示例性的实例包括但不限于氢气、 NH 3 、 氨基乙醇、 二甲胺、 二乙 胺、 哌啶、 哌嗪、 DBU、 盐酸、 磷酸、 乙酸、 曱酸、 三氟乙酸、 甲磺 酸、 苯磺酸、 对甲苯磺酸及其混合物。

在某些实施方案中, 制备式 (I)所示的化合物的方法中所述式 (III) 所示的化合物由式 (IV)所示的化合物与 HNR 7 R 8 反应得到,

式 (IV) 其中:

式 (IV)所示的化合物中的 n与式 (I)所示的化合物中的 n表示的含 义相同;

HNR 7 R 8 中 R 2 和 R 3 所表示的基团与式 (I)所示化合物中 R 2 和 R 3 所 表示的基团相同。

在某些实施方案中, 制备式 (III)所示的化合物的方法还包括加入 碱性^ 1合物。

能够用于本申请制备式 (III)所示的化合物的方法的碱性化合物的 示例性实例包括但不限于三乙胺、 吡啶、 二异丙基乙基胺、 三曱胺、

N-甲基吡咯烷、 N-甲基哌啶、 N-曱基吗啡啉、 N-乙基吡咯烷、 N-乙基 哌啶、 N-乙基吗啡啉及其混合物。

又一方面, 本申请涉及药物组合物, 其包含式 (I)所示的化合物或 其药物可接受的盐, 以及药物可接受的载体,

其中:

R 1 选自 H、 C M 烷基或 C M 烷氧基;

R 2 选自 H、 芳基、 杂芳基、 (d.4亚烷氧基) m C M 烷基、 杂环基、

Ci, 4 烷基或磺酰基;

R 3 选自 H、 芳基、 杂芳基、 (d. 4 亚烷氧基) m C M 烷基、 杂环基、 C M 烷基或磺酰基;

或者 NR 2 R 3 表示杂环基;

m选自 0、 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10或 1 1 ;

W选自 O或 NH;

R 4 选自 H、 F或 C M 烷基;

R 5 选自 H、 F、 C M 烷基或 OR 6 , 其中 R 6 选自 H或四氢吡喃 -2-基; n选自 1、 2或 3。

另一方面, 本申请涉及制剂, 其包含式 (I)所示的化合物或其药物 可接受的盐, 以及药物可接受的栽体,

其中:

R 1 选自 H、 C 1-4 烷基或 C 1-4 烷氧基;

R 2 选自 H、 芳基、 杂芳基、 (C 4 亚烷氧基) M C M 烷基、 杂环基、 CM烷基或磺酰基;

R 3 选自 H、 芳基、 杂芳基、 (C M 亚烷氧基) m C M 烷基、 杂环基、 C, .4烷基或磺酰基;

或者 NR 2 R 3 表示杂环基;

m选自 0、 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10或 1 1 ;

W选自 O或 NH;

R 4 选自 H、 F或 C M 烷基;

R 5 选自 H、 F、 C M 烷基或 OR 6 , 其中 R 6 选自 H或四氢吡喃 -2-基; n选自 1、 2或 3。

在某些实施方案中,包含式 (I)所示的化合物或其药物可接受的盐, 以及药物可接受的栽体的制剂为注射用制剂。

能够用于本申请的制剂的示例性实例包括但不 限于普通粉针、 冻 千粉针、 水针、 乳剂、 溶液剂和混悬剂。

再一方面, 本申请涉及治疗和 /或预防肿瘤和 /或癌症的方法, 其包 括向需要所述方法的个体给予治疗有效量的式 (I)所示的化合物或其药 物可接受的盐, 或者给予治疗有效量的包含式 (I)所示的化合物或其药 物可接受的盐, 以及药物可接受的栽体的药物组合物, 或者给予治疗 有效量的包含式 (I)所示的化合物或其药物可接受的盐, 以及药物可接 受的载体的制剂,

其中:

R 1 选自 H、 C M 烷基或 C M 烷氧基; R 2 选自 H、 芳基、 杂芳基、 (C M 亚烷氧基) m C M 烷基、 杂环基、 C M 烷基或橫酰基;

R 3 选自 H、 芳基、 杂芳基、 (d. 4 亚烷氧基) m C M 烷基、 杂环基、 C M 烷基或磺酰基;

或者 NR 2 R 3 表示杂环基;

m选自 0、 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10或 1 1 ;

W选自 0或 NH;

R 4 选自 H、 F或 C M 烷基;

R 5 选自 H、 F、 CM烷基或 OR 6 , 其中 R 6 选自 H或四氢吡喃 -2-基; n选自 1、 2或 3。

能够使用本申请所述方法治疗和 /或预防的肿瘤和 /或癌症的示例 性实例包括但不限于肝癌、 胃癌、 乳腺癌、 肺癌、 肠癌、 卵巢癌、 胰 腺癌、 头颈部癌、 宫颈癌、 肾癌、 黑色素瘤、 前列腺癌、 脑胶质瘤、 各种血癌、 淋巴癌和多发性骨髄癌。

本申请的化合物及其盐在细胞水平具有良好的 抗癌和 /或抗肿瘤 活性, 同时具有良好的水溶性和稳定性, 在动物体上具有良好的耐受 性, 从而易于开发为临床药物。 实施例

虽然任何本领域技术人员能够依据上述公开的 一般技术来制备本 申请化合物, 但为方便起见, 本说明书中的其它地方提供更加详细的 本申请化合物的合成技术。 另外, 本领域技术人员已知合成中所使用 的所有试剂及反应条件并且可以由普通的商品 来源获得。

缩写语

Su: 琥珀酰亚胺基; Bt: 苯并三氮峻 -1-基; At: 7-偶氮苯并三氮 唑 -1-基; Fmoc: 芴曱氧羰基; Boc: 叔丁氧羰基; CBZ: 苄氧羰基; Tr: 三曱基苯基; Alloc: 烯丙氧甲酰基; DBU: 1,8-二氮杂环 [5,4,0] 十一烯 -7; DIEA:二异丙基乙基胺; DMAP: 4-二曱氨基吡啶; EDC HC1: 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺盐酸盐; HOAt: N-羟基 -7-偶氮苯 并三氮唑; DCC: 二环己基碳亚胺; DIC: Ν,Ν-二异丙基碳二亚胺。 NCI-H446: 人类小细胞肺癌细胞株; BxPC-3: 人类胰腺癌细胞株; SK-OV-3: 人类卵巢癌细胞株; MDA-MB-453: 人类乳腺癌细胞株; 22Rvl : 人前列腺癌细胞株; A375: 人皮肤黑色素瘤细胞株; A431 : 人表皮癌细胞株; MCF-7 : 人乳腺癌细胞株; NCI-446 : 人小细胞肺 癌细胞林; NCI-H460 : 人大细胞肺癌细胞株; B16 : 小鼠黑色素瘤 细胞株; 786-0 : 人 1 透明细胞腺癌细胞株; DU-145 : 前列腺癌细 胞株; Hep3B : 肝癌细胞株; SK-Br-3 : 人乳腺癌细胞株; MTT: 四 氮唑蓝; McCoy's 5A: McCoy's 5A Medium; FBS: 胎牛血清; PBS: 磷酸緩冲液, pH 7.4; EDTA: 乙二胺四乙酸; DMSO: 二曱基亚砜; RPMI-1640: RPMI-1640 Medium; SRB: 横酰罗丹明; TCA: 三氯乙 酸; ddH 2 0: 双蒸水; Tris: 三羟曱基氨基甲烷; L15: Leibovitz's L-15 Medium; 化合物 A: 3,-吡咯基阿霉素 -14-氧-丁二酸单酯。

本申请中取代基编号如下所示:

制备例 1 : 3,-吡咯基阿霉素

10-((3, - (吡咯 - 1 -基) -2,,3,,6, -三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氢 -6,8, 11 -三羟基 -8-羟乙酕基- 1 -曱氧基 -5, 12-萘二酮

在 1 L的三口瓶中加入 3.076 g阿霉素(Doxorubicin)盐酸盐, 加入 300 mL蒸馏水和 300 mL 1,2-二氯乙烷, 30 ml 2,5-二曱氧基四氢呋喃和 6 mL冰醋酸。 氩气保护下加热回流 45 min, 反应结束。 反应液冷却降 温至室温,将反应液倒入 200 mL的冰水中,静置分液。有机相用 200 mL 饱和食盐水洗一次, 无水硫酸镁千燥, 过滤旋干; 水相在水浴搅拌下 加入 100 mL 5%碳酸氢钠水溶液, 用氯仿萃取 (50 mL χ 3), 合并氯仿 层, 氯仿层用 100 mL饱和食盐水洗一次, 过滤旋去溶剂, 所得粗品与 上述所得粗品合并,柱层析提纯, 氯仿: 甲醇 = 35: 1洗脱,得产品 2.91 g。 MS: 592(M-1) 制备例 2: 4-(4-硝基苄基)吗啡啉

将对硝基溴苄(72.084 g)加入反应瓶中, 加入二氯曱烷 (470 mL, 经分子筛千燥处理)溶解,再加入无水碳酸钾 (91.909 g), 于氩气保护下 冰浴降温, 20 min后将吗啡啉滴加入反应瓶中(约 30 min滴加完毕), 滴 加完毕撤去冰浴, 于室温下搅拌过夜。 反应完毕, 加入 150 mL水, 并 于搅拌下用 5%柠檬酸水溶液调节 pH至 4-5 , 静置分液后, 将有机相用 水洗后 (260 mL x 1), 用无水 MgS0 4 干燥半小时, 过滤, 滤液浓缩后用 油泵减压干燥, 得目标化合物 71.9 g, 产率 97.16%„ 制备例 3 : 4- (吗啡啉基曱基)苯胺

将 4-(4-硝基苄基)吗啡啉 (37.4 g)加入反应瓶中,加入无水乙醇 (520 mL), 机械搅拌, 再加入乙酸 (34mL), 油浴升温, 至 40。C时溶液溶清。 将铁粉 (48.002 g)加入 1N的盐酸 (HC1)(84 mL)中搅拌 10 min, 抽滤, 滤 饼用无水乙醇沖洗后加入反应瓶中, 油浴升温至回流, 并维持回流至 反应结束 (约 3 hr)。 反应结束后, 将反应液抽滤, 滤液浓缩后用乙酸乙 酯 (400 mL)及蒸馏水 (400 mL)溶解, 混 后静置分层, 将有机层弃去, 水相用二氯曱烷洗涤后(100 mL X 3), 用 NaOH固体调节 pH至 9, 溶液 中有大量棕色固体析出, 抽滤, 滤饼用蒸馏水冲洗后 (20 mL x 2)弃去, 滤液用氢氧化钠 (NaOH)调节 pH至 13后,用二氯甲烷萃取(100 mL χ 2), 有机相直接浓缩得目标化合物。 制备例 4: 5-(4- (吗啡啉甲基)苯基氨基) -5-氧代戊酸 将 4- (吗啡啉基甲基)苯胺 (960 mg)加入反应瓶中, 加入二氯曱烷 (7.6 mL, 经分子筛干燥处理)溶解, 氩气保护下开启搅拌。 将戊二酸肝 (741 mg)、 DIEA(1.1 mL)、 DMAP(62 mg)加入反应瓶中, 室温搅拌过 夜。 反应完毕, 加入 50 mL二氯甲烷及 30 mL蒸馏水, 用 NaOH固体调 节 pH至 13, 再次混匀后静置分液, 水相用 2N的 HC1调节 pH至 3 , 之后 冷冻干燥。 所得固体用无水乙醇 (50 mL)洗涤并过滤, 所得滤液浓缩后 用二氯甲烷复溶并再次浓缩以除去残留的无水 乙醇, 之后直接减压干 燥, 得目标化合物。 制备例 5: N,N-二甲基 (4-硝基苯基)曱胺 将对硝基溴苄 (6.291 g)加入反应瓶中, 加入二氯曱烷 (50 mL), 依 次加入无水碳酸钾(12.423 g)、 二甲胺盐酸盐 (4.891 g), 于室温下搅拌 过夜。 反应结束后, 将反应液抽滤, 滤饼用二氯曱烷(10 mL)沖洗, 滤 液用蒸馏水洗三次 (50 mL X 1 , 30 mL 2), 有机相直接浓缩并用油泵 减压干燥后得油状物 4.553 g。 制备例 6: 4- ((二甲氨基)曱基)苯胺

将 N,N-二曱基 (4-硝基苯基)甲胺 (4.553 g)加入反应瓶中, 加入无水 乙醇 (50 mL)溶解,加入乙酸 (5.2 mL),开启机械搅拌。将铁粉(11.339g) 加入 IN的 HC1(40 mL)中浸泡 10 min后, 抽滤, 滤饼用无水乙醇沖洗后 加入反应瓶中, 油浴升温至回流, 并维持回流至反应结束 (约 35 min)。 反应结束后将反应液抽滤, 滤饼用无水乙醇冲洗, 滤液浓缩后加入蒸 馏水(100 mL), 并用 NaOH调节 pH至 14, 出现大量析出, 抽滤, 滤液 用二氯曱烷萃取(100 mL X 1), 水相弃去, 有机相中加入蒸馏水 (60 mL), 并用 2N的 HCl调节 pH至 2, 混匀后静置分液, 有机相弃去, 将水 相用 NaOH调节 pH至 7, 并用二氯甲烷萃取 (40 mL χ 2), 水相弃去, 有 机相用蒸馏水洗一次 (40 mL X 1), 水相弃去, 有机相直接浓缩得目标 化合物。 制备例 7: 叔丁基 2-(2-羟基乙氧基)乙基氨基曱酸酯 将 2- (2-氨基乙氧基)乙醇(10,500 g)加入 250 mL单口烧瓶中, 加入 四氢呋喃 (25 mL)溶解。将无水碳酸钠(5.300 g)用蒸馏水 (30 mL)溶解并 加入单口烧瓶中, 冰浴降温。 将二碳酸二叔丁酯 (28.340 g)溶于四氢呋 喃 (70 mL)中并緩慢滴加入反应体系(约滴加 1 hr)。滴加完毕搅拌 1.5 hr。 反应结束, 将反应液抽滤, 滤饼用四氢呋喃沖洗两次后弃去, 滤液浓 缩后用乙酸乙酯(150 mL)及蒸馏水(100 mL)溶解, 混匀后静置分液, 水相再次用乙酸乙酯萃取两次(100 mL X 2), 合并所有有机相, 用无水 MgS0 4 干燥后过滤浓缩得目标化合物。 制备例 8: 2-(2-叔丁氧羰基氨基)乙氧基)乙基 -4-曱基笨磺酸酯 将叔丁基 2-(2-羟基乙氧基)乙基氨基曱酸酯 (20.5 g)及对曱苯磧酕 氯 (28.575 g)加入 250 mL单口烧瓶中, 加入四氢呋喃 (50 mL)溶解, 冰 浴降温。将氢氧化钠 (8.000 g)溶于 32 g蒸馏水中并滴加入反应瓶中,搅 拌过夜。反应完毕后将反应液浓缩(除去四氢 呋喃)后加入乙酸乙酯(150 mL)及蒸馏水(100 mL), 混勾后静置分液, 将有机相用饱和 NaCl洗一 次后用无水 MgS0 4 干燥 30 min, 过滤浓缩得油状物。 放置过夜后析出 固体, 抽滤, 滤饼用乙酸乙酯淋洗两次后得目标化合物。 制备例 9: 叔丁基 2-(2- (二甲基氨基)乙氧基)乙基氨基甲酸酯 将二甲胺盐酸盐 (30.922 g)加入反应瓶中, 加入蒸馏水 (50 mL)溶 解, 冰浴降温, 将 20%氢氧化钠水溶液 (76.885 g)滴加入反应瓶中。 搅 拌 20 min后, 将 2-(2-叔丁氧羰基氨基)乙氧基)乙基 4-甲基苯磺酸酯 (13.621 g)溶于无水乙醇(50 mL)及四氢呋喃 (30 mL)中, 并滴加入反应 瓶中, 反应过夜。 将反应瓶移至 40。C油浴中搅拌 2.5 hr。 反应结束后, 浓缩除去有机溶剂, 所得粗产品用乙酸乙酯萃取一次(150 mL X 1), 水 相用 NaOH调节 pH至 9后用乙酸乙酯萃取一次(100 mL χ 1), 合并有机 相, 用无水1^880 4 干燥30 1^1后, 过滤浓缩得目标化合物。 制备例 10: 2-(2- (二曱基氨基)乙氧基)乙基胺 将叔丁基 2-(2- (二甲基氨基)乙氧基)乙基氨基曱酸酯用二 曱烷 (70 mL)溶至反应瓶中, 氩气保护下冰浴降温, 将三氟乙酸(17 mL)滴 加入反应瓶中, 反应过夜。 反应结束后, 将反应液用蒸馏水 (100 mL) 萃取一次, 有机相弃去, 水相用 NaOH调节 pH至 13, 用二氯甲烷萃取 三次(150 mL X 3), 将有机相直接浓缩得目标化合物。 制备例 1 1 : 叔丁基-二 (2-羟乙基)氨基曱酸酯

将二羟乙基胺 (31.5 g)加入反应瓶中,并加入四氢呋喃(50 mL)及蒸 熘水 (50 mL)使之溶解; 将二碳酸二叔丁酯(85.0 g)用四氢呋喃(80 mL) 溶解, 并于冰浴下滴加入反应瓶中(耗时 2 hr), 滴加完毕搅拌至反应结 束 (约 1.5 hr)。 将反应液浓缩后用二氯甲烷 (200 mL)及蒸馏水 (150 mL) 溶解, 混勾后静置分层, 水层再用二氯曱烷萃取四次(100 mL X 4), 将 所有有机相合并浓缩后直接进行后续反应。 制备例 12: 叔丁基-二 (2-对甲苯磺酸酯基乙基)氨基曱酸酯 将叔丁基-二 (2-羟乙基)氨基甲酸酯 (61.5 g)、对甲笨磺酰氯 (137,2 g) 加入反应瓶中, 并加入四氢呋喃 (200mL)使之溶解; 水浴降温, 将 20% 氢氧化钠水溶液 (216 g)滴加入反应瓶中(耗时 70 min) , 水浴下搅拌过 夜。 反应结束后, 将反应液 pH用 20%NaOH水溶液调至 13, 并于 40。C 油浴下搅拌 2 hr。 将反应液浓缩后加入二氯甲烷 (250mL)溶解, 并用蒸 馏水(100 mL)洗一次, 有机相直接浓缩后得目标化合物粗品。 制备例 13: 叔丁基 二 (2- (二曱氨基)乙基)氨基曱酸酯

将二甲胺盐酸盐(U6.1 g)加入反应瓶中, 并加入蒸馏水 (60 mL)使 之溶解; 冰浴降温后将 20%氢氧化钠水溶液 (284,8 g)滴加入反应瓶中 (耗时 70 min); 滴加完毕并搅拌 20 min后, 将叔丁基-二 (2-对曱苯磺酸 酯基乙基)氨基甲酸酯 (73.2 g)用四氢呋喃 (200 mL)溶解并加入反应瓶 中,并于 40。C油浴下搅拌至反应结束。将反应液浓缩后 用乙酸乙酯 (250 mL)洗一次, 有机相用蒸馏水反萃二次(150 mL χ 2); 合并所有水相并 用 NaOH调 pH至 14, 用二氯甲烷萃取 7次 (200 mL χ 1, 150 mL 6), 将 7次二氯曱烷合并, 用无水 MgSO 4 干燥 30 min后过滤浓缩, 所得粗产品 经柱层析純化 (展开剂为 CHCl 3 :CH 3 OH =I 5: l)得目标化合物。 制备例 14: 二 (2- (二甲氨基)乙基)胺

将叔丁基-二 (2- (二曱氨基)乙基)氨基甲酸酯 (3.000 g)加入反应瓶 中, 并加入四氢呋喃 (20 mL), 水浴降温后, 将浓盐酸 (9.6 mL)滴加入 反应瓶中(耗时 15 min), 并于冰浴下搅拌至反应结束。将反应液浓缩除 去四氢呋喃后,用二氯甲烷 (50 mL)洗一次,有机相弃去,水相用 K 2 CO 3 调节 pH至 10, 并用二氯曱烷萃取四次(50 mL X 4), 合并四次二氯曱烷 层, 用无水 MgS0 4 干燥 30 min后过滤浓缩得目标化合物。 制备例 I 5 : 2-( 2 -(2-( 2 _叔丁氧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 将三缩四乙二醇(191.2 mL)、 DIEA(300 mL)加入事先通氩气保护 的反应瓶中, 加入二氯甲烷 (80 mL, 经分子筛干燥处理), 室温搅拌溶 解后冰浴降温, 将三苯基氯曱烷 (205.9 g)用二氯曱烷 (400 mL, 经分子 筛干燥处理)溶解后滴加入反应瓶中(耗时约 4 hr), 反应过夜。 反应结 束后, 将反应液依次用 5%柠檬酸水溶液洗四次 (500 mLx4)、 饱和 NaCl 水溶液洗一次 (250 mL X 1)、 无水 MgS0 4 干燥 30 min后过滤浓缩得目标 化合物。 制备例 16: 2-(2-(2-(2-叔丁氧基乙氧基)乙氧基)乙氧基) 基 -4-甲基苯磺 酸酯

将 2-( 2 _( 2 _(2-叔丁氧基乙氧基)乙氧基)乙氧基) 醇 ( 347 .5 g)、 对甲 苯磺酰氯 (227.7 g)加入反应瓶中, 并加入四氢呋喃 (200 mL)溶解,冰浴 下将 20%氢氧化钠水溶液 (318.8 g)滴加入反应瓶中(耗时 2 hr), 反应过 夜。 反应结束后, 将反应液浓缩除去四氢呋喃, 所得粗产品中加入乙 酸乙酯 (300mL)及蒸馏水 (50mL),混勾后静置分液,有机相用饱和 NaCl 水溶液 (200mL)洗一次后, 用无水 MgS0 4 干燥 30min, 过滤浓缩得目标 化合物。 制备例 17: 2-(2-(2-(2-(2-叔丁氧基乙氧基)乙氧基)乙氧基 乙基)异吲哚

-1.3-二酮 将 2-(2-(2-(2-叔丁氧基乙氧基)乙氧基)乙氧基) 基 4-曱基苯磺酸 酯 (373.7 g)、 邻苯二曱酰亚胺钾盐(175.7 g)加入反应瓶中, 并加入 DMF(350 mL, 经分子筛干燥处理)使之溶解, 油浴升温并维持于 65°C 至反应结束 (约 8 hr)。 将反应液浓缩后加入乙酸乙酯 (250 mL)及蒸馏水 (200 mL), 混匀后静置分液, 将有机相用饱和 NaCl水溶液(150 mL)洗 一次, 之后无水 MgS0 4 干燥 30 min过滤浓缩得粗产品。 将粗产品用无 水乙醇重结晶得目标化合物。 制备例 18: 2-(2-(2-(2-叔丁氧基乙氧基)乙氧基)乙氧基) 胺 将 2-(2-(2-(2-(2-叔丁氧基乙氧基)乙氧基)乙氧基 乙基)异吲哚 - 1,3- 二酮(193.515 g)加入反应瓶中, 并加入四氢呋喃 (350 mL)使之溶解,加 入 25%曱胺水溶液(127.410 g), 室温机械搅拌使之溶清, 反应过夜。 将 反应于油浴 40。C下搅拌 30 min后, 将反应液浓缩得白色固体, 将其用 乙酸乙酯 (300 mL)及蒸馏水 (250 mL)溶解, 混勾后静置分液, 将有机 相用饱和 NaCl水溶液 (200 mL)洗一次, 无水 MgS0 4 千燥 30 min后过滤 浓缩得目标化合物。 制备例 19: 2-(2-(2- (-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙醇盐酸盐 将浓盐酸(100.5mL)加入反应瓶中, 冰浴降温, 将 2-(2-(2-(2-叔丁 氧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙胺(123.7 g)用四氢呋喃(170 mL)溶解后 滴加入反应瓶中(耗时约 2 hr) , 反应过夜。 反应结束后, 将反应液浓缩 除去四氢呋喃, 所得粗产品用氯仿(150 mL)及蒸馏水(100 mL)溶解, 混匀后静置分液, 将水相直接浓缩得目标化合物。 制备例 20: 叔丁基 -2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基 氨基曱 酸酯

将 2-(2-(2- (-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙醇盐酸盐 (41.6 g)加入 反应瓶中, 并用蒸馏水 (80 mL)将其溶解, 冰浴降温, 将无水碳酸钠 (38.414 g)用蒸馏水 (200 mL)溶解并滴加入反应瓶中(耗时 1 hr), 然后将 二碳酸二叔丁酯(51.370 g)用四氢呋喃(120 mL)溶解后滴加入反应瓶中 (耗时 160 min), 反应过夜。 反应结束后, 将反应液抽滤, 滤液浓缩后 用乙酸乙酯(150 mL)萃取一次, 用二氯甲烷(150 mL)萃取一次, 合并 两次有机相, 用无水 MgS0 4 干燥 30 min过滤浓缩得目标化合物。 制备例 21: 叔丁基 -2-(2-(2-(2- (对曱基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基) 乙基氨基曱酸酯

将叔丁基 -2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基 氨基甲酸酯 (14.650 g)加入反应瓶中, 并加入四氢呋喃 (75 mL)使之溶解,将对甲笨 磺酰氯(11.439g)加入反应瓶中, 水浴降温, 将 20%氢氧化钠水溶液 (18.684 g)滴加入反应瓶中(耗时 15 min), 滴加完毕撤去水浴, 室温搅 拌至反应结束 (耗时约 5 hr)。 再向反应瓶中加入 20%氢氧化钠水溶液 (8.715 g)并于 40。C油浴下搅拌 2 hr, 所得溶液直接用于后续反应。 制备例 22:叔丁基 -2-(2-(2-(2- (二曱氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基 基曱酸酯

将二曱胺盐酸盐 (40.766 g)加入反应瓶中, 并加入蒸馏水 (60 mL) 使之溶解,冰浴降温,将 20%氢氧化钠水溶液(101.464 g)滴加入反应瓶 中, 然后将制备例 22中所得溶液加入反应瓶中, 并于 40°C油浴下搅拌 至反应结束。 将反应液浓缩除去四氢呋喃后, 加入二氯曱烷 (200 mL), 混匀后静置分液, 水相弃去, 将有机相中加入蒸馏水(100 mL)。 并用 2N的 HC1调节 pH至 3 , 混勾后静置分液, 水相直接浓缩得目标化合物。 制备例 23: 2-(2-(2-(2- (二曱氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基 盐酸盐 将叔丁基 -2-(2-(2-(2- (二甲氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基 基 甲酸酯 (8.629 g)加入反应瓶中, 并用四氢呋喃(10 mL)溶解,冰浴降温, 将浓盐酸 (20 mL)滴加入反应瓶中(耗时 20 min), 反应结束后, 将反应 液浓缩除去四氢呋喃, 加入蒸馏水 (50 mL)及二氯甲烷 (50 mL), 混匀 后静置分液, 水相直接浓缩得目标化合物。 制备例 24: 4-(4-(甲基磺酰基)氨基) -4-氧代丁酸 制备例 25 : 4-(4- (苯基磺酰基)氨基) -4-氧代丁酸 制备例 26: 4-(4- (吗啡啉甲基)苯基氨基) -4-氧代丁酸 制备例 27: 4-(4- ((二曱氨基)甲基)苯基氨基) -4-氧代丁酸 制备例 28: 5-(4- ((二甲氨基)甲基)苯基氨基) -5-氧代戊酸 制备例 29: 4-(2-(2- (―甲氨基)乙氧基)乙基氨基) -4-氧代丁酸 制备例 30: 5-(2-(2- (二甲氨基)乙氧基)乙基氨基) -5-氧代戊酸 制备例 31: 4-(4- (羟乙基)哌嗪- 1 -基) -4-氧代丁酸 制备例 32: 5-(4- (羟乙基)哌嗪 -1-基) -5-氧代戊酸 制备例 33: 4- ((吗啡啉- 1 -基)氨基) -4-氧代丁酸 制备例 34: 5- ((吗啡啉小基)氨基) -5-氧代戊酸 制备例 35 : 4-(3- (吗啡啉 - 1-基)丙基氨基) -4-氧代丁酸 制备例 36: 5-(3- (吗啡啉 - 1 -基)丙基氨基) -5-氧代戊酸 制备例 37: 4-((4-甲基哌嗪- 1 -基)氨基) -4-氧代丁酸 制备例 38: 5-((4-甲基哌嗪- 1 -基)氨基) -5-氧代戊酸 制备例 39: 4-(2- (四氢吡咯 - 1-基)乙基氨基) -4-氧代丁酸 制备例 40: 5-(2- (四氢吡咯 - 1-基)乙基氨基) -5-氧代戊酸 制备例 41 : 4-(3- (四氢吡咯 - 1-基)丙基氨基) -4-氧代丁酸 制备例 42: 5-(3- (四氢吡咯 - 1 -基)丙基氨基) -5-氧代戊酸 制备例 43 : 4-((6- (吗啡啉 -1-基)吡啶 -3-基)氨基) -4-氧代丁酸 制备例 44: 5-((6- (吗啡啉 - 1-基)吡啶 -3-基)氨基) -5-氧代戊酸 制备例 45 : 4- ((吡啶 -4-基)氨基) -4-氧代丁酸 制备例 46: 5- ((吡啶 -4-基)氨基) -5-氧代戊酸 制备例 47: 4- ((吡啶 -3-基)氨基) -4-氧代丁酸 制备例 48: 4- ((吡啶 -3-基)氨基) -4-氧代戊酸 制备例 49: 4- ((吡啶 -4-基)曱基氨基 )-4-氧代丁酸 制备例 50: 5- ((吡啶 -4-基)甲基氨基) -5-氧代戊酸 制备例 51: 4- ((吡啶 -3-基)曱基氨基 )-4-氧代丁酸 制备例 52: 5- ((吡啶 -3-基)甲基氨基) -5-氧代戊酸 制备例 53 : 4- ((吡啶 -2-基)甲基氨基) - 4 -氧代丁酸 制备例 54: 5- ((吡啶 -2-基)甲基氨基 )-5-氧代戊酸 制备例 55: 4-(2- (吡 -4-基)乙基氨基) -4-氧代丁酸 制备例 56: 5-(2- (吡啶 -4-基)乙基氨基) -5-氧代戊酸 制备例 57: 4-(2- (吡啶 -2-基)乙基氨基) -4-氧代丁酸 制备例 58: 5-(2- (吡啶 -2-基)乙基氨基) -5-氧代戊酸 制备例 59: 4-(2- (吡啶 -3-基)乙基氨基) -4-氧代丁酸 制备例 60: 5-(2- (吡啶 -3-基)乙基氨基) -5-氧代戊酸 制备例 61 : 4-(2-(4- (氨基磺酰基)苯基)乙基氨基) -4-氧代丁酸 制备例 62: 5-(2-(4- (氨基磺酰基)苯基)乙基氨基) -5-氧代戊酸 制备例 63: 4- (4-乙基哌嗪- 1 -基) -4-氧代丁酸 制备例 64: 5-(4-乙基哌嗪 - 1-基) -5-氧代戊酸 制备例 65 : 4- (嘌呤氨基) -4-氧代丁酸 制备例 66: 5- (嘌呤氨基) -5-氧代戊酸 制备例 67: 4-(4-(3- (二甲氨基)丙基)哌嗪- 1 -基) -4-氧代丁酸 制备例 68: 5-(4-(3- (二甲氨基)丙基)哌嗪 -1-基) -5-氧代戊酸 制备例 69: 4-(3-(4-甲基哌嗪- 1 -基)丙基氨基 )-4-氧代丁酸 制备例 70: 5-(3-(4-曱基哌嗪- 1 -基)丙基氨基 )-5-氧代戊酸 制备例 71: 4-(2- (二曱氨基)乙基氨基) -4-氧代丁酸 制备例 72: 5-(2- (二曱氨基)乙基氨基) -5-氧代戊酸 制备例 73: 4- (二 (2- (二曱氨基)乙基)氨基) -4-氧代丁酸 制备例 74: 5- (二 (2- (二曱氨基)乙基)氨基) -5-氧代戊酸 制备例 75: 4-(2-(2-(2-(2- (二曱氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基 基) -4-氧代丁酸 制备例 76: 5-(2-(2-(2-(2- (二曱氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基 基) -5-氧代戊酸 制备例 77: 4- ((吡嗪 -2-基)氨基) -4-氧代丁酸 制备例 78: 5- ((吡嗪 -2-基)氨基) -5-氧代戊酸 制备例 79: 4- ((吡啶 -2-基)氨基) -4-氧代丁酸 制备例 80: 5- ((吡啶 -2-基)氨基) -5-氧代戊酸 制备例 81 : 4- ((嘧啶 2-基)氨基) -4-氧代丁酸 制备例 82: 5- ((嘧啶 2-基)氨基) -5-氧代戊酸 制备例 83 : 4-(2-羟基乙基氨基 )-4-氧代丁酸 制备例 84: 5-(2-羟基乙基氨基 )-5-氧代戊酸 制备例 85: 4-(2-(2-羟基乙氧基)乙基氨基 )-4-氧代丁酸 制备例 86: 5-(2-(2-羟基乙氧基)乙基氨基) -5-氧代戊酸 制备例 87: 4- (二 (2- (羟基)乙基)氨基) -4-氧代丁酸 制备例 88: 5- (二 (2- (羟基)乙基)氨基) -5-氧代戊酸 制备例 89: 4-氨基 -4-氧代丁酸 制备例 90: 5-氨基 -5-氧代戊酸 制备例 91 : 4-甲氨基 -4-氧代丁酸 制备例 92: 5-甲氨基 -5-氧代戊酸 制备例 93 : 4-二甲氨基 -4-氧代丁酸 制备例 94: 5-二甲氨基 -5-氧代戊酸 制备例 95 : 4- (吗啡啉 -1-基) -4-氧代丁酸 制备例 96: 5- (吗啡啉 -1 -基) -5-氧代戊酸 制备例 97: 4- (哌啶 - 1-基) -4-氧代丁酸 制备例 98: 4- (四氢吡咯 -1-基) -4-氧代丁酸 制备例 99: 4-(2- (吗啡啉 - 1 -基)乙基氨基 )-4-氧代丁酸 制备例 100: 4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-^基乙氧基)乙氧基)乙氧 基)乙氧 基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基氨基) -4-氧代丁酸 制备例 101 : 4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基) 氧基)乙 氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 基氨基 )-4-氧代丁酸 制备例 102: 4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙 基)乙 氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 基氨基 )-4-氧代丁酸 制备例 103: 4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(甲氧基)乙氧基)乙氧 基)乙氧基) 乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基) 乙基氨基 )-4-氧代丁酸 制备例 104: 4-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 氨基 )-4-氧 代丁酸 实施例 1 : 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,1 1-三羟基-13-氧代-14-(4-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基) 乙氧基)乙氧基)乙基氨基) -4-氧代丁酸酯基) - 1 -甲氧基 -5, 12-萘二酮 将制备例 1的化合物 (99 mg)加入反应瓶中, 加入二氯曱烷 (5 mL, 经分子筛干燥处理)溶解, 加入制备例 104的化合物(82 mg)、 DMAP(8 mg), 于氩气保护下开启搅拌, 加入 EDC.HC1(50 mg), 室温反应过夜。

(CHC1 3 ):曱醇 (CH 3 OH) = 95: 5, 5 mL加 1滴冰乙酸), 得目标化合物。

MS: 867.1(M-1) 用实施例 1的制备方法合成表 1中的化合物, 其中取代基中虛线表 示连接键。

式 (I)

Si

££ί000/£10ίΝ3/Χ3Λ

(HI 's) idd s-ει = 9 '(Ηΐ 'sq) uidd A60"£l = 9 '(HI ' uiddoz,0'8 = 9 '(Ηΐ Ό uidd UL'L = S '(HI 'P) uidd ζ^ L = 9 OZ '(HZ mdd ςς -g = g '(HI 'P) uidd eZfL = 9 '(UZ ^dd 668'S = S '(HI 's) uidd \ ·ς = g '(HI 'S) uidd εες·£ = g '(HI 's) uidd teS'P = 9

'(HI £ ui) uidd z^z't = 9 '(Η 'ΡΡ) uidd 9£ 9-Ζ9\·ζ = 9

'(H†7 ';) uidd 999·£ = 9 ( (uz 'Ρ) ^dd zz 'z = s '(H£ 's) uidd 698'£=9 '(HI ' ) uidd p6f = 9 '(Ht 's) uidd z fZ = ς\

'(HZ 'PP) mdd 9i6'Z- 6L'Z = 9 '(H S VZ-9L£'\ = 9 HZ Ό uidd OVZ = § 'te 'Ρ) mdd 9^91 = § '(H£ 'P) uidd 6 I = S

(HI 's) tudd =δ (HI 's) uidd 61 £1 = 9 '(Η£ '^) uidd = g '(HZ 'ω) uidd gg^'L = 9 01 '(HI 'P) "Jdd 0f9'Z, = 9 '(HI 'Ρ) uidd β09'ί = 9 '(HI 'ui) uidd = 9

UZ 's) mdd 08Z/9 = 9 '(H 'S) uidd 0Z6'S = 9 '(HI 's) uidd 6Ρ£·ς = 9 '(HI 'P) weld £ςζ·ς = § '(HI 'p) uidd 68TS = 9 '(HI 's) uidd zS6' = 9 '(HS 'ui) uidd £0£ = δ 'to 's) uidd £^6'£ = 9 '(HI 's) uidd 9 "£ = 9 '(HI 'P) uidd麵■£ = § '(HI (P) mdd L\6'Z = S '(Η∑: Ό dd ς^ζ = § ς '(RZ ' ) uidd ςος·ζ = 9 '(HI '^) ^dd ςι^ = 9 '(HI 'P) ujdd gzz'z = g '(HI 'ω) uiddon' = 9 '(HI ' ) mdd ^99*1 = § m 'Ρ) ujdd ς^Γΐ =§

fCl000/Cl0ZN3/X3d 实施例 76: 10-((3,- (吡咯 - 1 -基) -2,,3,,6, -三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,1 1-三羟基-13-氧代-14-(4-(2-(2-(二甲胺基)乙氧基) 乙氨基 )-4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐 将 10 mg实施例 6所得目标化合物溶于 10 ml氯仿, 搅拌溶解, 将 1 mg水乙酸溶于 10 ml氯仿滴入反应瓶中,继续续搅拌 10分钟后旋转蒸发 除去溶剂, 得目标化合物。

该化合物在水中的溶解度大于 9 mg/mU 用实施例 76的合成方法制备得到实施例 77至实施例 87和实施例 89 中的目标化合物。 实施例 77: 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,, 6 ,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,1 1-三羟基-13-氧代- 14-(4-((4-(2-羟基)乙基)哌嗪

-1-基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐

该化合物在水中的溶解度大于 10.6 mg/ml„ 实施例 78: 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,1 1-三羟基 -13-氧代 -14-(4-((3- (吗啡啉 -1-基)丙基) 氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) - 1-甲氧基 -5, 12-萘二酮乙酸盐

该化合物在水中的溶解度大于 22 mg/mU 实施例 79: 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基-13-氧代-14-(4-((4-甲基)哌嗪-1-基) 氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐

该化合物在水中的溶解度大于 5 mg/ml。 实施例 80: 10-((3, - (吡咯 - 1 -基) -2,, 3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基 - 13-氧代 -14-(4- (4-乙基哌嗪 -1-基) -4-氧 代-丁酸酯基 )-1-甲氧基 -5,12-蔡二酮乙酸盐 该化合物在水中的溶解度大于 11 mg/mL 实施例 81: 10-((3,- (吡咯 - 基 )-2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基 -13-氧代 -14-(4-((3-(4-曱基哌嗪小基) 丙基)氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐 该化合物在水中的溶解度大于 7mg/ml。 实施例 82: 10-((3, - (吡咯 - 1 -基) -2,, 3,,6, -三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢- 6,8,11-三羟基-13-氧代-14-(4-((吡啶-4-基)曱基) 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐 该化合物在水中的溶解度大于 6 mg/mL 实施例 83: 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基-13-氧代-14-(4-((吡啶-3-基)甲 )氨 基)- 4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐 该化合物在水中的溶解度大于 1 mg/ml。 实施例 84: 10-((3, - (吡咯 - 1 -基) -2,,3,,6, -三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基-13-氧代-14-(4-(2-(吡啶-2-基)乙 基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐 该化合物在水中的溶解度大于 12mg/ml。 实施例 85: 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基 -13-氧代 -14-(4-(2- (吡啶 -3-基)乙基)氨 基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐 该化合物在水中的溶解度大于 11 mg/ml。 实施例 86: 10-((3, - (吡咯- 1 -基) -2, ,3,,6, -三去氧 -alphal-L-来苏-己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基 -13-氧代 -14-(4-(2- (吡啶 -4-基)乙基)氨 基) -4-氡代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐 该化合物在水中的溶解度大于 3 mg/mh 实施例 87: 10-((3, - (吡咯 - 1 -基) -2, ,3, ,6, -三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基-13-氧代-14-(4-(4-(3-(二曱氨基) 基) 哌嗪 -1-基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐 该化合物在水中的溶解度大于 16 mg/mL 实施例 89: 10-((3,- (吡咯 -1-基) -2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9, 10-四氢 -6,8,1 1-三羟基 -13-氧代 -14-(4-((2- (吗啡淋 - 基)乙基) 氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮乙酸盐 实施例 96: 10-((3, - (吡咯 - 1 -基) -2, ,3,,6, -三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡喃基) 氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,1 1-三羟基 -13-氧代 -14-(4-((2- (吗啡啉 -1-基)乙基) 氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-甲氧基 -5,12-萘二酮磷酸盐 该化合物在水中的溶解度大于 26 mg/mL 实施例 96中的化合物在冷藏密封放置 9个月后进行 HPLC检测, 未 产生明显降解物, 其稳定性良好。 实施例 99: 10-((3,- (吡咯 - 基 )-2,,3,,6,-三去氧 -alphal-L-来苏 -己吡 喃基)氧) -7,8,9,10-四氢 -6,8,11-三羟基 -13-氧代 -14-(4-((2- (吗啡啉 -1-基) 乙基)氨基) -4-氧代 -丁酸酯基) -1-曱氧基 -5,12-萘二酮盐酸盐 生物学活性实施例

实施例 1 : SK-OV-3细胞生长抑制试验 (MTT检测) 一、 实验材料:

细胞株: SK-OV-3 (人类卵巢癌细胞株); MTT; 抗肿瘤化合物; DMSO。

二、 试剂与耗材:

培养基: 90% McCoy's 5A + 10% FBS; 胰酶 (以 PBS配制成 0.25% (w/v)的溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养板。

三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘 (10 cm);

2. 吸去培养液, 加 5 mL PBS洗 1-2遍;

3. 吸去 PBS , 加 1.5 mL 0.25%胰酶, 浸润细胞;

4. 吸去胰酶, 将培养盘转至孵箱, 37°C消化约 5 min;

5. 加 4.5 mL完全培养液, 终止消化, 以 l mL枪小心沖刷细胞, 并 制成均匀的细胞悬液,植入 96孔细胞培养板,每孔 4000个细胞 /100 μΐ; 在 37。C, 5% C0 2 条件下孵育过夜;第二天每孔加含化合物 的培养液 100 μΐ, 37°C, 5% C0 2 奈件下继续孵育 69 h;

6. 吸去培养液;

7. 每孔加 100 含 0.5 mg/mL MTT的无血清培养液, 孵育 3 h;

8. 轻轻吸去培养液;

9. 每孔加 100 L DMSO, 振荡溶解;

10. 490 nM下测定 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) X 100%

其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值;

n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 2. 实施例中部分化合物对 SK-OV-3细胞在 667 nM生长抑制活性

实施例 35 57.8 实施例 38 67.6 实施例 40 47.9 实施例 44 52.3 实施例 60 58.9 实施例 62 63.6 实施例 64 65.9 实施例 66 66.5 实施例 76 46.4 实施例 77 60.4 实施例 81 56.4 实施例 94 71.4 实施例 95 66.3 实施例 2: BxPc-3细胞生长抑制试验 (MTT检测)

一、 实验材料:

细胞株: BxPC-3 (人类胰腺癌细胞株); MTT; 抗肿瘤化合物; DMSO。

二、 试剂与耗材:

培养基: 90% RPMI-1640 + 10% FBS; 胰酶 (以 PBS配制成 0.25% (w/v)的溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养板。

三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加 5 mL PBS洗 1-2遍;

3. 吸去 PBS , 加 1.5 mL 0.25%胰酶, 浸润细胞;

4. 将培养盘转至孵箱, 37。C消化约 8 min;

5. 加 4.5 mL完全培养液, 终止消化, 以 l mL枪小心沖刷细胞, 并 制成均匀的细胞悬液,植入 96孔细胞培养板,每孔 5000个细胞 /100 μΐ; 在 37。C, 5% C0 2 奈件下孵育过夜;第二天每孔加含化合物 的培养液 100 μΐ, 37°C, 5% C0 2 奈件下继续孵育 70 h;

6. 吸去培养液;

7. 每孔加 100 含 0.5 mg/mL MTT的无血清培养液, 孵育 3 h; 8. 轻轻吸去培养液;

9. 每孔加 100 l DMSO, 振荡溶解;

10. 490 nM下测定 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) X 100% 其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值;

n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 3. 实施例中部分化合物对 BxPc-3细胞在 2000 nM生长抑制活性

实施例 3: NCI-H446细胞生长抑制试猃 (MTT检测) 一、 实验材料:

细胞林: NCI-H446 (人类小细胞肺癌细胞林); MTT; 抗肿瘤化合 物; DMSO。

二、 试剂与耗材:

培养基: 90% PMI-1640 + 10% FBS; 胰酶 (以 PBS配制成 0.25% (w/v)的溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养板。

三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加 5 mL PBS洗 1-2遍;

3. 吸去 PBS, 加 1.5 mL 0.25%胰酶, 浸润细胞;

4. 将培养盘转至孵箱, 37。C消化约 3min; 5. 加 3 mL完全培养液, 终止消化, 以 l mL枪小心沖刷细胞, 并制 成均勾的细胞悬液, 植入 96孔细胞培养板, 每孔 4000个细胞 /100 L; 在 37。C, 5% C0 2 条件下孵育过夜;第二天每孔加含化合物 的培养液 100 μΐ, 37°C, 5% C0 2 条件下继续孵育 70 h;

6. 吸去培养液;

7. 每孔加 100 含 0.5 mg/mL MTT的无血清培养液, 孵育 3 h;

8. 轻轻吸去培养液;

9. 每孔加 100 l DMSO, 振荡溶解;

10. 490 nM下测定 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) X 100%

其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值;

n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值. 表 4. 实施例中部分化合物对 NCI-H446细胞在 222 nM生长抑制活性

实施例 4: MDA-MB-453细胞生长抑制试验 (SRB检测) 一、 实验材料:

细胞株: MDA-MB- 453 (人类乳腺癌细胞株); SRB: 用 1%的水乙 酸配制成 0.4% (w/v)的工作液, 4°C下保存; 抗肿瘤化合物; DMSO。 二、 试剂与耗材:

培养基: 90% L15 + 10% FBS; 胰酶(以 PBS配制成 0.25% (w/v)的 溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养板。

三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加入 5 mL PBS洗板 1-2遍;

3. 加 1.5 mL 0.25%胰酶, 浸润细胞;

4. 吸去胰酶, 将培养盘转至孵箱, 37°C消化约 3 min;

5. 加 4 mL完全培养基, 终止消化, 以 l mL枪小心冲刷细胞, 并制 成均匀的单细胞悬液;植入 96孔细胞培养板,每孔 7000个细胞 /100 μί; 在 37。C, 5% C0 2 奈件下孵育过夜;第二天每孔加含化合物 的培养液 100 μL, 37°C, 5% C0 2 条件下继续孵育 69.5 h;

6. 吸去培养液,每孔加入 100 稀释至 10%的 TCA固定细胞, 4。C 冰箱放置 1 h;

7. 吸去 TCA固定液, 每孔加入 150 L ddH 2 0洗板 5次;

8. 洗尽固定液后, 室温下风干;

9. 每孔加入 60 SRB染色液, 室温下染色 15 min;

10. 吸去 SRB染色液, 每孔加入 150 1%的水乙酸洗板 5次;

1 1. 洗尽 SRB染色液后, 室温下风千;

12. 每孔加入 ΙΟΟ μΙ^ lO mM Tris, 振荡溶出 SRB;

13. 570 nM下测定其 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) X 100%

其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值;

n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值; NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 5. 实施例中部分化合物对 MDA-MB-453细胞在 2000 nM生长抑制活 性

实施例 5: 22Rvl细胞生长抑制试验 (SRB检测)

一、 实验材料:

细胞株: 22Rvl (人前列腺癌细胞株); SRB: 用 1%的水乙酸配制 成 0.4% (w/v)的工作液, 4。C下保存; 抗肿瘤化合物; DMSO。

二、 试剂与耗材:

培养基: 90% RPMI-1640 + 10% FBS; 胰酶 (以 PBS配制成 0.25% (w/v)的溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养板。

三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加入 5 mL PBS洗板 1-2遍;

3. 加 1.5 mL 0.25%胰酶, 浸润细胞;

4. 吸去胰酶, 将培养盘转至孵箱, 37°C消化约 3 min;

5. 加 4 mL完全培养基, 终止消化, 以 l mL枪小心冲刷细胞, 并制 成均勾的单细胞悬液;植入 96孔细胞培养板,每孔 7000个细胞 /100 μί; 在 37°C, 5% C0 2 条件下孵育过夜;第二天每孔加含化合物 的培养液 100 μί, 37°C, 5% C0 2 条件下继续孵育 73 h;

6. 吸去培养液, 每孔加入 100 稀释至 10%的 TCA固定细胞, 4。C 冰箱放置 1 h;

7. 吸去 TCA固定液, 每孔加入 150 L ddH20洗板 5 ;

8. 洗尽固定液后, 室温下风干;

9. 每孔加入 60 SRB染色液, 室温下染色 15 min;

10. 吸去 SRB染色液, 每孔加入 150 1%的;水乙酸洗板 5次;

11. 洗尽 SRB染色液后, 室温下风干;

12. 每孔加入 100 L lO mM Tris, 振荡溶出 SRB;

13. 570 nM下测定其 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) X 100%

其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值;

n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 6. 实施例中部分化合物对 22Rvl细胞在 222 nM生长抑制活性

实施例 6: A375细胞生长抑制试验 (MTT检测)

一、 实验材料:

细胞株: A375(人皮肤黑色素瘤细胞株); MTT: 四氮唑蓝; 抗肿 瘤化合物; 化合物 A: 3,-吡咯基阿霉素 -14-氧-丁二酸单酯; DMSO。 二、 试剂与耗材:

培养基: 90% DMEM + 10% FBS (胎牛血清); 胰酶 (以 PBS配制成 0.25% (w/v)的溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养板。 三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加 5 mL PBS洗 1-2遍;

3. 吸去 PBS, 加 1.5 mL 0.25%胰酶, 浸润 l min;

4. 将培养盘转至孵箱, 37。C消化约 5 min;

5. 加 3ml完全培养液, 终止消化, 以 l mL枪小心冲刷细胞, 并制 成均勾的细胞悬液, 植入 96孔细胞培养板, 每孔 3000个细胞 /100 μί; 在 37。C , 5% C0 2 条件下孵育过夜;第二天每孔加含化合物 的培养液 100 μL, 37°C, 5% C0 2 条件下继续孵育 72 h;

6. 吸去培养液;

7. 每孔加 100 含 0.5 mg/mL MTT的无血清培养液, 孵育 3 h;

8. 轻轻吸去培养液;

9. 每孔加 100 LDMSO, 振荡溶解;

10. 490 nM下测定 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) X 100%

其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值;

n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 7. 实施例中部分化合物对 A375细胞生长抑制活性 抑制活性 抑制活性 抑制活性 化合物 化合物 化合物

(IC 50 /nM) (IC 50 /nM) (IC 50 /nM) 化合物 A 207 实施例 6 67 实施例 89 48 实施例 81 67 实施例 97 28 实施例 99 35 实施例 7: A431细胞生长抑制试验 (MTT检测) 一、 实验材料:

细胞株: A431(人表皮癌细胞林); MTT: 四氮唑蓝; 抗肿瘤化合 物; 化合物 A: 3,-吡咯基阿霉素 -14-氧-丁二酸单酯; DMSO。

二、 试剂与耗材:

培养基: 45% DMEM +45% F12 + 10% FBS (胎牛血清); 胰酶 (以 PBS配制成 0.25% (w/v)的溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细 胞培养板。

三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加 5 mLPBS洗 1-2遍;

3. 吸去 PBS, 加 1.5 mL 0.25%胰酶, 浸润 1 min;

4. 将培养盘转至孵箱, 37°C消化约 5 min;

5. 加 3ml完全培养液, 终止消化, 以 l mL枪小心冲刷细胞, 并 制成均勾的细胞悬液, 植入 96孔细胞培养板, 每孔 2500个细胞 /100 L; 在 37。C, 5% C0 2 条件下孵育过夜; 第二天每孔加含化合物的培 养液 100 μΐ, 37°C, 5% C0 2 条件下继续孵育 72 h;

6. 吸去培养液;

7. 每孔加 100 含 0.5 mg/mLMTT的无血清培养液, 孵育 3 h;

8. 轻轻吸去培养液;

9. 每孔加 100 LDMSO, 振荡溶解;

10. 490 nM下测定 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) X 100% 其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值;

n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 8. 实施例中部分化合物对 A431细胞生长抑制活性

实施例 8: MCF-7细胞生长抑制试验 (SRB检测) 一、 实验材料:

细胞株: MCF-7 (人乳腺癌细胞株); SRB: 用 1%的冰乙酸配制成

0.4% (w/v)的工作液, 4。C下保存; 抗肿瘤化合物; 化合物 A: 3,-吡咯 基阿霉素 -14-氧-丁二酸单酯; DMSO。

二、 试剂与耗材:

培养基: 90% EMEM + 10% FBS;胰酶 (以 PBS配制成 0.25% (w/v) 的溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养板。

三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加入 5 mL PBS洗板 1-2遍;

3. 加 1.5 mL 0.25%胰酶, 浸润细胞;

4. 吸去胰酶, 将培养盘转至孵箱, 37°C消化约 3 min;

5. 加 4 mL完全培养基, 终止消化, 以 l mL枪小心冲刷细胞, 并 制成均匀的单细胞悬液,植入 96孔细胞培养板,每孔 10000个细胞 /100 μΐ; 在 37。C, 5% C0 2 条件下孵育过夜; 第二天每孔加含化合物的培 养液 ΙΟΟ μ 37°C, 5% C0 2 条件下继续孵育 73 h;

6. 吸去培养液, 每孔加入 100 μΐ稀释至 10%的 TCA固定细胞,

4。C冰箱放置 1 h; 7. 吸去 TCA固定液, 每孔加入 150 μL ddH 2 0洗板 5次;

8. 洗尽固定液后, 室温下风干;

9. 每孔加入 60 L SRB染色液, 室温下染色 15 min;

10. 吸去 SRB染色液, 每孔加入 150 μΐ 1%的水乙酸洗板 5次;

11. 洗尽 SRB染色液后, 室温下风干;

12. 每孔加入 100 10 mM Tris, 振荡溶出 SRB;

13. 570 nM下测定其 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) X 100%

其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值;

n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 9. 实施例中部分化合物对 MCF-7细胞生长抑制活性

实施例 9: NCI-446细胞生长抑制试验 (MTT检测 ) 一、 实验材料:

细胞株: NCI-446 (人小细胞肺癌细胞株); MTT: 四氮唑蓝; 抗肿 瘤化合物; 化合物 A: 3,-吡咯基阿霉素 -14-氧-丁二酸单酯; DMSO。 二、 试剂与耗材:

培养基: 90% RPMI1640 + 10% FBS (胎牛血清); 胰酶 (以 PBS配 制成 0.25% (w/v)的溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养 板。

三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加 5 mL PBS洗 1-2遍; 3. 吸去 PBS , 加 1.5 ml 0.25%胰酶, 浸润 1 min;

4. 将培养盘转至孵箱, 37。(:消化约 3 1^11;

5. 加 3mL完全培养液, 终止消化, 以 l mL枪小心沖刷细胞, 并 制成均勾的细胞悬液, 植入 96孔细胞培养板, 每孔 4000个细胞 /100 μ!, 在 37。C, 5% C0 2 条件下孵育过夜; 第二天每孔加含化合物的培 养液 ΙΟΟ μ 37。C, 5% C0 2 奈件下继续孵育 72 h;

6. 吸去培养液;

7. 每孔力。 100 μL含 0.5 mg/mLMTT的无血清培养液, 孵育 3 h;

8. 轻轻吸去培养液;

9. 每孔力 p 100 l DMSO, 振荡溶解;

10. 490 nM下测定 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) X 100%

其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值;

n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 10. 实施例中部分化合物对 NCI-446细胞生长抑制活性

实施例 10: NCI-H460细胞生长抑制试验 (MTT检测) 一、 实验材料:

细胞株: NCI-H460 (人大细胞肺癌细胞株); MTT: 四氮唑蓝; 抗 肿瘤化合物; 化合物 A: 3,-吡咯基阿霉素 - 14-氧-丁二酸单酯; DMSO。 二、 试剂与耗材:

培养基: 90% RPMI1640 + 10% FBS (胎牛血清); 胰酶 (以 PBS配 制成 0.25% (w/v)的溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养 板。

三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加 5 mL PBS洗 1-2遍;

3. 吸去 PBS , 加 1.5 mL 0.25%胰酶, 浸润 1 min;

4. 将培养盘转至孵箱, 37。C消化约 3min;

5. 加 3 mL完全培养液, 终止消化, 以 l mL枪小心冲刷细胞, 并 制成均匀的细胞悬液, 植入 96孔细胞培养板, 每孔 2000个细胞 /100 L; 在 37。C, 5% C0 2 条件下孵育过夜; 第二天每孔加含化合物的培 养液 ΙΟΟ μί, 37°C , 5% C0 2 条件下继续孵育 72 h;

6. 吸去培养液;

7. 每孔加 100 μΐ含 0.5 mg/ml MTT的无血清培养液, 孵育 3 h;

8. 轻轻吸去培养液;

9, 每孔加 100 l DMSO, 振荡溶解;

10. 490 nM下测定 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) X 100%

其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值;

n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 11. 实施例中部分化合物对 NCI-460细胞生长抑制活性

实施例 1 1 : B16细胞生长抑制试验 (MTT检测) 一、 实验材料:

细胞株: B16 (小鼠黑色素瘤细胞株); MTT: 四氮唑蓝; 抗肿瘤 化合物; 化合物 A: 3,-吡咯基阿霉素 -14-氧-丁二酸单酯; DMSO。 二、 试剂与耗材:

培养基: 90% RPMI1640 + 10% FBS (胎牛血清); 胰酶 (以 PBS配 制成 0.25% (w/v)的溶液, 加入 0,53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养 板。

三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加 5 mL PBS洗 1-2遍;

3. 吸去 PBS , 加 1.5 mL 0.25%胰酶, 浸润 1 min;

4. 将培养盘转至孵箱, 37。C消化约 1 min;

5. 加 3 mL完全培养液, 终止消化, 以 l mL枪小心沖刷细胞, 并 制成均匀的细胞悬液, 植入 96孔细胞培养板, 每孔 2500个细胞 /100 μ 在 37°C, 5% C0 2 奈件下孵育过夜; 第二天每孔加含化合物的培 养液 100 μ1, 37°C, 5% C0 2 条件下继续孵育 72 h;

6. 吸去培养液;

7. 每孔加 100 μL含 0.5 mg/ml MTT的无血清培养液, 孵育 3 h;

8. 轻轻吸去培养液;

9. 每孔加 100 L DMSO, 振荡溶解;

10. 490 nM下测定 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) X 100% 其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值; n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 12. 实施例中部分化合物对 B16细胞生长抑制活性 抑制活性 抑制活性 抑制活性 化合物 化合物 化合物

(IC 50 /nM) (IC 50 /nM) (IC 50 /nM) 化合物 A 32 实施例 62 3 实施例 89 3 实施例 12: 786-0细胞生长抑制试验 (MTT检测) 一、 实验材料:

细胞林: 786-0 (人肾透明细胞腺癌细胞林); MTT: 四氮唑蓝; 抗 肿瘤化合物; 化合物 A: 3,-吡咯基阿霉素 -14-氧-丁二酸单酯; DMSO。 二、 试剂与耗材:

培养基: 90% RPMI1640 + 10% FBS (胎牛血清); 胰酶 (以 PBS配 制成 0.25% (w/v)的溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养 板。

三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加 5 mL PBS洗 1-2遍;

3. 吸去 PBS, 加 1.5 mL 0.25%胰醉, 浸润 1 min;

4. 将培养盘转至孵箱, 37°C消化约 1 min;

5. 加 3 mL完全培养液, 终止消化, 以 l mL枪小心沖刷细胞, 并 制成均勾的细胞悬液, 植入 96孔细胞培养板, 每孔 2000个细胞 /100 μΙ, 在 37°C, 5% C0 2 条件下孵育过夜; 第二天每孔加含化合物的培 养液 100 μί, 37°C, 5% C0 2 条件下继续孵育 72 h;

6. 吸去培养液;

7. 每孔加 100 μΐ含 0.5 mg/mL MTT的无血清培养液, 孵育 3 h;

8. 轻轻吸去培养液;

9. 每孔加 lOO L DMSO, 振荡溶解;

10. 490 nM下测定 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC- n)/(PC-NC) X 100%

其中: PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值;

n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 13. 实施例中部分化合物对 786-0细胞生长抑制活性

实施例 13 : DU-145细胞生长抑制试验 (MTT检测) 一、 实验材料:

细胞株: DU-145 (前列腺癌细胞株); MTT: 四氮唑蓝; 抗肿瘤化 合物; 化合物 A: 3,-吡咯基阿霉素 -14-氧-丁二酸单酯; DMSO。 二、 试剂与耗材:

培养基: 90% EMEM + 10% FBS (胎牛血清); 胰酶 (以 PBS配制成 0.25% (w/v)的溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养板。 三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加 5 mL PBS洗 1-2遍;

3. 吸去 PBS, 加 1.5 mL 0,25%胰酶, 浸润 1 min;

4. 将培养盘转至孵箱, 37°C消化约 1 min;

5. 加 3 mL完全培养液, 终止消化, 以 l mL枪小心冲刷细胞, 并 制成均勾的细胞悬液, 植入 96孔细胞培养板, 每孔 4000个细胞 / 100 μί; 在 37°C, 5% C0 2 条件下孵育过夜; 第二天每孔加含化合物的培 养液 ΙΟΟ μ 37°C , 5% C0 2 条件下继续孵育 72 h:

6. 吸去培养液;

7. 每孔力。 100 μL含 0.5 mg/ml MTT的无血清培养液, 孵育 3 h; 8. 轻轻吸去培养液;

9. 每孔加 100 L DMSO, 振荡溶解;

10. 490 nM下测定 OD值。 四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) X 100%

其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值;

n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 14. 实施例中部分化合物对 DU-145细胞生长抑制活性

实施例 14: Hep3B细胞生长抑制试验 (SRB检测) 一、 实验材料:

细胞株: Hep3B (肝癌细胞株); SRB: 用 1%的水乙酸配制成 0.4% (w/v)的工作液, 4。C下保存; 抗肿瘤化合物; 化合物 A: 3,-吡咯基阿 霉素 - 14-氧-丁二酸单酯; DMSO。

二、 试剂与耗材:

培养基: 90% RPMI-1640 + 10% FBS; 胰酶 (以 PBS配制成 0.25% (w/v)的溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养板。

三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加入 5 mL PBS洗板 1-2遍;

3. 加 1.5 mL 0.25%胰酶, 浸润细胞;

4. 吸去胰酶, 将培养盘转至孵箱, 37°C消化约 3 min;

5. 加 4 mL完全培养基, 终止消化, 以 l mL枪小心冲刷细胞, 并 制成均勾的单细胞悬液,植入 96孔细胞培养板,每孔 5000个细胞 /100 iL; 在 37。C, 5% C0 2 条件下孵育过夜; 第二天每孔加含化合物的培 养液 ΙΟΟμ 37°C, 5%C0 2 条件下继续孵育 72h;

6. 吸去培养液, 每孔加入 100 稀释至 10%的 TCA固定细胞, 4°C水箱放置 1 h;

7. 吸去 TCA固定液, 每孔加入 150 μΐ ddH 2 0洗板 5次;

8. 洗尽固定液后, 室温下风干;

9. 每孔加入 60 SRB染色液, 室温下染色 15 min;

10. 吸去 SRB染色液, 每孔加入 150 1%的冰乙酸洗板 5次;

11. 洗尽 SRB染色液后, 室温下风干;

12. 每孔加入 IOO L lOmMTris, 振荡溶出 SRB;

13.570 nM下测定其 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) l00%

其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值;

n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 15. 实施例中部分化合物对 Hep3B细胞生长抑制活性

实施例 15: SK-Br-3细胞生长抑制试验 (SRB检测) 一、 实验材料:

细胞株: SK-Br-3 (人乳腺癌细胞株); SRB: 用 1%的冰乙酸配制 成 0.4% (w/v)的工作液, 4。C下保存; 抗肿瘤化合物; 化合物 A: 3'- 吡咯基阿霉素 -14-氧-丁二酸单酯; DMSO。

二、 试剂与耗材:

培养基: 85% DMEM + 15% FBS;胰酶(以 PBS配制成 0.25% (w/v) 的溶液, 加入 0.53 mM EDTA); PBS; 96孔细胞培养板。

三、 实验方法:

1. 取正常培养的对数生长期细胞一盘(10 cm);

2. 吸去培养液, 加入 5 mL PBS洗板 1-2遍;

3. 加 1.5 mL 0.25%胰酶, 浸润细胞;

4. 吸去胰酶, 将培养盘转至孵箱, 37°C消化约 2 min;

5. 加 4 mL完全培养基, 终止消化, 以 l mL枪小心沖刷细胞, 并 制成均勾的单细胞悬液,植入 96孔细胞培养板,每孔 10000个细胞 / 100 μΐ; 在 37。C, 5% C0 2 条件下孵育过夜; 第二天每孔加含化合物的培 养液 ΙΟΟ μί, 37°C, 5% C0 2 奈件下继续孵育 72 h;

6. 吸去培养液, 每孔加入 100 稀释至 10%的 TCA固定细胞, 4°C水箱放置 1 h;

7. 吸去 TCA固定液, 每孔加入 150 μΐ ddH 2 0洗板 5次;

8. 洗尽固定液后, 室温下风干;

9. 每孔加入 60 L SRB染色液, 室温下染色 15 min;

10. 吸去 SRB染色液, 每孔加入 150 μΐ 1°/。的冰乙酸洗板 5次;

11. 洗尽 SRB染色液后, 室温下风干;

12. 每孔加入 100 lO mM Tris, 振荡溶出 SRB;

13. 570 nM下测定其 OD值。

四、 结果及处理:

1. 计算相对抑制率

化合物对细胞生长的抑制率 = (PC-n)/(PC-NC) X 100% 其中:

PC: 不加化合物的对照孔细胞正常生长后的 OD值; n: 加入化合物后的实验孔细胞生长后的 OD值;

NC: 不加化合物与细胞的空白孔的背景 OD值。 表 16. 实施例中部分化合物对 SK-Br-3细胞生长抑制活性 化合物 A 93 实施例 98 15 在小鼠体内 MTD (最大耐受剂量)实验

化合物最大耐受剂量试验

实验动物: ICR中小白鼠, 体重 18-22g, 购于北京维通利华实验 动物技术有限公司, 许可证号: SCXK (京) 2007-0001。

给药方案: 每只实验动物每隔三天尾静脉注射给予相应剂 量的受 试物一次各剂量拟定给药 5次具体给药次数依据动物情况而定, 详细 观察给药后 2小时内动物的表现情况, 给药后当天每隔 4小时观察一 次动物的表现, 每天记录动物的存活情况、 称重并观察其体表有无异 常。 在停药后第 14天处死实验动物并解剖观察。

1. 受试化合物 1 : 3,-吡咯基阿霉素:

1) 给药分组:

I组: (20mg/kg)组;

II组: (25mg/kg)组;

III组: (30mg/kg)组;

IV组: 溶剂对照组;

共 4组, 每组 10只雌雄各半。

2) 实验结果:

(1) 对实验动物体重的影响, 见附图 1。

(2) 对实验动物生存率的影响, 见表 17„ 表 17

剂 量 给药 总剂量 每组动物数 死亡动物数

死亡率 (%) (mg/kg) 次数 (mg/kg) V? (只) (只)

20 4 80 5/5 5/5 100

25 4 100 5/5 5/5 100

30 3 90 5/5 5/5 100 对照 4 0 5/5 0/0 0

注: S: 雄鼠; ?: 雌鼠 3) 实验结杲与讨论: 溶剂对照组实验动物体重正常增长, 没有死 亡; 20 mg/kg、 25 mg/kg给药 4次后实验动物陆续出现死亡、 30 mg/kg 在给药三次后实验动物陆续出现死亡, 死亡率均为 100%。 受试化合物 1在 q4d X 5给药方案下 MTD小于 20 mg/kg(0.0338 mmol/kg).

2. 受试化合物 2: 实施例 96中的化合物

1) 给药分组:

I组: (40mg/kg)组;

II组: (45mg/kg)组;

III组: (50mg/kg)组;

IV组: (55mg/kg)组;

V组: (60mg/kg)组;

共 5组, 每组 12只雌雄各半。

2) 实验结果:

(1) 对实验动物体重的影响, 见附图 2。

(2) 对实验动物生存率的影响, 见表 18。 表 18

剂 量 给药 总剂量 每组动物数 死亡动物数

死亡率 (%)

(mg/kg) 次数 (mg/kg) dv? (只) 7$ (只)

40 5 200 6/6 0/1 8.33

45 5 225 6/6 0/0(1 /2a) 0

50 5 250 6/6 0/0(1 /la) 0

55 5 275 6/6 5/4(5/3a) 25

60 5 300 6/6 3/4 53.85 注: β·· 雄鼠; ?: 雌鼠

a 表示实验动物在注射药物后立即死亡而非细胞 毒性原因死亡, 给药后立即死亡的实验动物不用于计算死亡率 (死亡率 = 非注射后立 即死亡的实验动物数 /(动物入组数 -立即死亡的实验动物数) X 100%) 3) 实验结果与讨论: 40 mg/kg剂量组有 1只实验动物死亡, 死亡 率为 8.33%, 经大体解剖观察各脏器未见明显异常但其皮肤 表面有多 处咬痕, 且体重无明显降低, 推测为非药物的细胞毒性因素造成的死 亡。 50 mg/kg剂量组有 2只实验动物在第 5次给药后立即死亡, 体重 无明显降低, 推测为非药物的细胞毒性因素造成的死亡。 受试化合物 2在 q4d X 5给药方案下 MTD为 50-55 mg/kg(0.0525-0.0578 mmol/kg)。

3. 受试化合物 3: 3,-吡咯基阿霉素 -14-氧 -丁二酸单酯

1) 给药分组:

I组: (30mg/kg)组;

II组: (40mg/kg)组;

III组: (50mg/kg)组;

IV组: (60mg/kg)组;

共 4组,每组 10只雌雄各半。

2) 实验结果:

(1)对实验动物体重的影响, 见图 3。

(2)对实验动物生存率的影响, 见表 19。 表 19

剂 量 给药 总剂量 每组动物数 死亡动物数

死亡率 (%)

(mg/kg) 次数 (mg/kg) (只) 67? (只)

30 5 150 5/5 0/1 10

40 5 200 5/5 3/2 50

50 5 250 5/5 5/5 100

60 5 300 5/5 5/5 100 注: 3: 雄鼠; ?: 雌鼠

3) 实验结果与讨论: 化合物 30 mg/kg、 40 mg/kg, 50 mg/kg、 60 mg/kg, 在此给药方案下对 ICR种小白鼠的致死率分别为 10%、 50%、 100%, 100%。 30 mg/kg组实验动物有一只实验动物死亡但是体重 有明显的降 ^^,说明 30 mg/kg组的这只死亡动物不排除是由于动物个 体差异的原因造成的。 受试化合物 3在 q4dx5给药方案下 MTD为接 近 30 mg/kg(0.0433 mmol/kg). 上述对本公开中涉及的发明的一般性描述和对 其具体实施方式的 描述不应理解为是对该发明技术方案构成的限 制。 本领域所属技术人 员根据本公开, 可以在不违背所涉及的发明构成要素的前提下 , 对上 增加、 减少或 la合, 形成、属于^述发明 其它的技术方案。' ' '