PROCEDES DE PREPARATION, LEURS APPLICATIONS COMME

MEDICAMENTS ET LES COMPOSES PHARMACEUTIQUES LES

RENFERMANT

La présente invention concerne un alcaloïde triterpénique de formule générale suivante (I) :

Elle concerne en outre son procédé de fabrication et son utilisation à titre de médicament.

En un siècle, l'espérance de vie a augmenté de 25 ans. Ce vieillissement de la population s'est accompagné d'un accroissement des maladies liées à l'âge, au premier rang desquelles figure la maladie d'Alzheimer. Cette maladie touche 22 millions de personnes dans le monde et représente plus de 75 % des démences chez les personnes âgées. Elle affecte 5 % à 12 % des sujets âgés de plus de 65 ans et 25 % des plus de 85 ans. C'est la quatrième cause de mortalité en gériatrie. En France, on dénombre 135 000 cas de plus par an et actuellement 800 000 personnes environ sont atteintes.

La maladie d'Alzheimer se caractérise par des troubles du comportement et de la mémoire. Cette maladie atteint principalement les personnes âgées et est en pleine progression dans les pays industrialisés du fait de l'allongement de l'espérance de vie.

Selon l'hypothèse cholinergique, ces troubles de la mémoire sont associés à une perte des fonctions cholinergiques dans le cerveau suite à une diminution très importante en neuromédiateur acétylcholine. Actuellement le traitement symptomatique de la maladie

consiste à augmenter le taux en neurotransmetteur acétylcholine en inhibant l'acétylcholinestérase (AChE), enzyme responsable de la dégradation de l'acétylcholine. Parmi les quatre médicaments commercialisés pour le traitement de la maladie d'Alzheimer, trois sont des inhibiteurs de l'acétylcholinestérase. Ces composés sont l' Aricept® (donepezil) (commercialisé par Eisai), Exelon® (rivastigmine) (commercialisé par Novartis), Réminyl® (galanthamine) (commercialisé par Janssen). En 2004, l'Ebixa (mémantine) un antagoniste des récepteurs de l'acide gamma-aminobutyrique (GABA) protégeant les neurones contre un influx élevé et prolongé du calcium a été mis sur le marché par les laboratoires Lundbeck. Certains inhibiteurs de l'acétylcholinestérase commercialisés sont difficiles à préparer et présentent des effets secondaires. Par ailleurs, aucun inhibiteur de la butyrylcholinestérase ( BChE) n'est actuellement commercialisé.

L'AChE, en plus de ses fonctions catalytiques, possède des propriétés non classiques. Des études ont montré que le site périphérique de l'acétylcholinestérase était impliqué dans l'agrégation de la protéine β-amyloïde, protéine hautement neurotoxique dans le cas de la maladie d'Alzheimer. En effet si des molécules sont capables d'interagir avec le site périphérique de l'AChE, l'agrégation de la protéine β-amyloïde est très fortement diminuée. La synthèse d'inhibiteurs pouvant interagir simultanément avec les sites actif et périphérique de l'AChE présente donc un intérêt certain.

D'autre part, des données très récentes ont montré que la butyrylcholinestérase jouait également un rôle important dans le cas de la maladie d'Alzheimer en favorisant notamment l'agrégation de la protéine β-amyloïde. L'utilisation d'inhibiteurs de la BChE pourrait prévenir ce phénomène. Le buis des Baléares est une plante riche en alcaloïdes stéroïdiques de type triterpène tétracyclique. Au cours d'un criblage systématique des molécules de la chimiothéque de l'Institut de Chimie des Substances Naturelles (ICSN, Gif sur Yvette, France), les chercheurs ont identifié un puissant inhibiteur 1 de l'acétylcholinestérase. Le composé 1 est issu de la transformation chimique d'un alcaloïde, la N-3-

isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 isolée du buis des baléares (Buxus bakarica WiId) selon un nouveau protocole (cf. exemples 1 et 2).

composé (1) composé (2)

La N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 (D. Herlem-Gaulier et al, Bull. Soc. Chim. De France, 1966, 11, 3478-3486) a précédemment été extraite des feuilles du Buxus bakarica WiId dans les années 60 soit par chromatographies successives sur alumine désactivée avec un gradient d'élution soit par séparation des bases faibles et fortes des alcaloïdes bruts. Dans ce dernier cas, une séparation à contre-courant fastidieuse était nécessaire pour séparer le composé 2 de la N-3-benzoylcycloxobuxidine-F 6b.

La formule générale de la N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 telle que divulguée dans le document D. Herlem-Gaulier et al (1966) comporte une isomérie erronée sur le carbone 4. Les articles de J. Guilhem et al. (Tetrahedron Letters, 34, 2937-2938, 1975) et de M. Sangare et al (Tetrahedron Letters, 22 et 23, 1791-1794, 1975) décrivent la formule générale du composé 2 dans laquelle l'isomérie au niveau du carbone 4 a été corrigée.

D'autre part, une étude RMN ¹³ C (125 MHZ, CDCl ₃ ) (HMBC HMQC) du composé 2 a permis de corriger le déplacement chimique des carbones 1, 4, 5, 7, 17, 19 et 20 erronés dans la publication de Sangare et al. Dans le cadre de la présente invention, le composé 2 a été isolé selon un nouveau protocole permettant d'éviter l'utilisation de chromatographies (très laborieuses sur de grosses quantités) ainsi que le procédé à contre-courant précédemment cité.

Ce procédé permet d'envisager des perspectives intéressantes de scale-up en milieu industriel.

Par ailleurs, la synthèse du composé 1 a été décrite par pyrolyse de 2 en présence d'hydroxyde de tétraméthylammonium à 210°C sous 0,01 mmHg (D. Herlem-Gaulier et al, Bull. Soc. chimique de France, 1968, 2, 763-773 ; voir également les articles de J. Guilhem et al. (1975) et de M. Sangare et al (1975) pour l'isomérie correcte au niveau du carbone 4).

Enfin, les inventeurs ont découvert de façon surprenante un nouveau procédé plus simple de synthèse du composé 1 à partir du composé 2 utilisant une seule étape. D'autres composés présentant une activité inhibitrice de l'AChE ont été préparés de façon originale à partir de l'alcaloïde précurseur (2), très abondant à l'état naturel, isolé à partir des feuilles du Buis des Baléares.

Certains de ces composés sont déjà connus en tant que tels mais pas dans leur application thérapeutique.

Ainsi, l'article de F. Khuong-Huu et al (Bull. Soc. Chim. De France, 1, 258-262, 1969) décrit les composés de formules suivantes :

De même, l'article de D. Herlem-Gaulier et al (Bull. Soc. Chim. De France, 2,

763-773, 1968) décrit les composés de formules suivantes :

Ces composés tels que décrits dans les articles de F. Khuong-Huu et al (1969) et lem-Gaulier et al (1968) possèdent une isomérie erronée au niveau du carbone 4 ;

les articles de J. Guilhem et al. (1975) et de M. Sangare et al (1975) décrivent la bonne isomérie.

Le document Benechie et al., Tetrahedron., 1976, 32 :701-707 décrit notamment les composés 4b et 5b suivants :

4b , et 5b

Les inventeurs ont donc découvert que les alcaloïdes triterpéniques selon la présente invention agissent comme de puissants inhibiteurs de l'acétycholinestérase et de la butyrylcholinestérase, et peuvent donc être utilisés dans le traitement de la maladie d'Alzheimer et d'autres maladies du système nerveux central ainsi que dans le traitement de maladies du système nerveux périphérique. En outre, ces alcaloïdes peuvent être facilement obtenus à l'échelle industrielle.

Ainsi, selon un premier aspect, l'invention a pour objet un alcaloïde triterpénique de formule générale (I) suivante :

dans laquelle un des trois traits en pointillés présents dans les cycles a et b et un seul représente une liaison ;

R ₁ représente -CH ₂ X ₁ R ₇ , -CH=NR ₈ ou -CH=O dans lesquelles

X ₁ représente O, NH ou S ;

R ₇ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ -C ₁₀ , un alkyl (en

C ₁ à C ₁₀ ) phényle, un alkyl (en C ₁ -C ₁₀ ) carbonyle, un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ )- bisftrialkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) silyle] ou SO ₂ R ₉ , R ₉ représentant un alkyle en C ₁ à C ₁₀ ou un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle, à condition que R ₇ ne représente pas SO ₂ R ₉ lorsque X ₁ représente S ;

R ₈ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ -C ₁₀ , un alkyl (en

C ₁ à C ₁₀ ) phényle, un alkyl (en C ₁ -C ₁₀ ) carbonyle, un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ )- bisftrialkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) silyle] ou SO ₂ R ₉ , R ₉ représentant un alkyle en C ₁ à C ₁₀ ou un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle; R ₂ et R ₃ représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou

II ² ~-C— R ₁₀

, dans laquelle X ₂ représente O, NH ou S et R ₁₀ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ à C ₁₀ , un phényle, un cycloalkyle en C ₃ à C ₁₀ , ou un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle, à la condition qu'au moins l'un et un seul de R ₂ ou R ₃ représente un atome d'hydrogène, ou R ₂ est absent, R ₁ représente -CH ₂ X ₁ R ₇ et -NR ₃ et -X ₁ R ₇ pris ensemble représentent

dans laquelle R ₁₁ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ à C ₁₀ , un phényle, un cycloalkyle en C ₃ à C ₁₀ , un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle, ou R ₂ représente un atome d'hydrogène, R ₁ représente -CH ₂ X ₁ R ₇ et -NHR ₃ et -X ₁ R ₇ pris ensemble représentent

/ ^xr

~HN — CH \ R 11

dans laquelle R ₁₁ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ à C ₁₀ , un phényle, un cycloalkyle en C ₃ à C ₁₀ ou un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle, ou R ₂ représente un atome d'hydrogène, R ₁ représente - CH ₂ =NR ₈ et -NHR ₃ et pris ensemble représentent

dans laquelle R ₁₁ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ à C ₁₀ , un phényle, un cycloalkyle en C ₃ à C ₁₀ ou un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle ; R ₄ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ -C ₁₀ ou un radical -X ₃ R ₁₂ dans lequel X ₃ représente O, NH ou S, avantageusement O et R ₁₂ représente un atome d'hydrogène, un alkyl (en C ₁ -C ₁₀ ) carbonyle, un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle, un alkyl

(en C ₁ à C ₁₀ ) sulfonyle, un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényl sulfonyle ou un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ )-dialkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) silyle, avantageusement un atome d'hydrogène ; R ₅ représente le groupe N-oxyde N ⁺ OCH ₃ R ₁₃ Ou le groupe NCH ₃ R ₁₃ dans lesquels R ₁₃ représente un atome d'hydrogène, un cycloalkyle en C ₃ à C ₁₀ , un alkyle en C ₁ à C ₁₀ , un phényle ou un phtalimide, avantageusement -CH ₃ et

— -[^

⁶ représente =O ou -OR ₁₄ dans lequel R ₁₄ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ -C ₁₀ , un alkyl (en C ₁ -C ₁₀ ) carbonyle, un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle ou un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) sulfonyle; ou ses sels d'addition pharmaceutiquement acceptables, isomères, énantiomères, diastéréoisomères, ainsi que leurs mélanges, à l'exception des composés de formules suivantes :

Dans le cadre de la présente invention, on entend par « alkyle en C ₁ -C ₁₀ » tout radical hydrocarboné saturé monovalent linéaire ou ramifié, ayant de un à dix atomes de carbone compris. Les exemples de radicaux alkyle comprennent, mais ne sont pas limités à, les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, 1-éthylpropyle, sec-butyle, tert-butyle, n- butyle, n-pentyle, n-hexyle, etc.

On entend désigner par « alkyl (en C ₁ -C ₁₀ ) phényle » tout radical R'R", dans lequel R' est un radical alkyle en C ₁ -C ₁₀ tel que défini ici, et R" est un radical phényle. Les exemples de radicaux alkyl (en C ₁ -C ₁₀ ) phényle comprennent, mais ne sont pas limités à, les groupes phényléthyle, 3-phénylpropyle et similaires.

On entend désigner par « cycloalkyle en C ₃ -C ₁₀ » tout radical carbocyclique monovalent saturé consistant en un ou plusieurs cycles, de préférence deux cycles, de trois à dix atomes de carbone par cycle. Les exemples de radicaux cycloalkyle comprennent, mais ne sont pas limités à, les groupes cyclopropyle, cyclobutyle, 3-éthylcyclobutyle, cyclopentyle, cycloheptyle et similaires.

On entend désigner par « alkyl (en C ₁ -C ₁₀ ) carbonyle » dans la présente invention tout radical R-C(O)-, dans lequel R est un radical alkyle tel que défini ici. Les exemples de radicaux alkyl (en C ₁ -C ₁₀ ) carbonyle comprennent, mais ne sont pas limités à, les groupes acétyle, propionyle, n-butyryle, sec-butyryle, t-butyryle, iso-propionyle, etc..

On entend désigner par « alkyl (en C ₁ -C ₁₀ ) sulfonyle » dans la présente invention tout radical -S(O) ₂ -R, dans lequel R est un groupe alkyle tel que défini ici. Les exemples

d'alkylsulfonyle comprennent, mais ne sont pas limités à, les groupes méthylsulfonyle, propylsulfonyle et similaires.

Dans la présente invention, on entend désigner par « isomères » des composés qui ont des formules moléculaires identiques mais qui diffèrent par l'agencement de leurs atomes dans l'espace. Les isomères qui diffèrent dans l'agencement de leurs atomes dans l'espace sont désignés par « stéréoisomères ». Les stéréoisomères qui ne sont pas des images dans un miroir l'un de l'autre sont désignés par « diastéréoisomères », et les stéréoisomères qui sont des images dans un miroir non superposables sont désignés par « énantiomères », ou quelquefois isomères optiques. Un atome de carbone lié à quatre substituants non identiques est appelé un « centre chiral ».

« Isomère chiral » signifie un composé avec un centre chiral. Il comporte deux formes énantiomères de chiralité opposée et peut exister soit sous forme d'énantiomère individuel, soit sous forme de mélange d'énantiomères. Un mélange contenant des quantités égales de formes énantiomères individuelles de chiralité opposée est désigné par «mélange racémique».

Dans la présente invention, on entend désigner par « pharmaceutiquement acceptable » ce qui est utile dans la préparation d'une composition pharmaceutique qui est généralement sûr, non toxique et ni biologiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation vétérinaire de même que pharmaceutique humaine. On entend désigner par « sels pharmaceutiquement acceptables » d'un composé des sels qui sont pharmaceutiquement acceptables, comme défini ici, et qui possèdent l'activité pharmacologique souhaitée du composé parent. De tels sels comprennent :

(1) les sels d'addition d'acide formés avec des acides inorganiques tels que l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide sulfurique, l'acide nitrique, l'acide phosphorique et similaires ; ou formés avec des acides organiques tels que l'acide acétique, l'acide benzènesulfonique, l'acide benzoïque, l'acide camphresulfonique, l'acide citrique, l'acide éthane-sulfonique, l'acide fumarique, l'acide glucoheptonique, l'acide gluconique, l'acide glutamique, l'acide glycolique, l'acide hydroxynaphtoïque, l'acide 2- hydroxyéthanesulfonique, l'acide lactique, l'acide maléique, l'acide malique, l'acide mandélique, l'acide méthanesulfonique, l'acide muconique, l'acide 2-naphtalènesulfonique,

l'acide propionique, l'acide salicylique, l'acide succinique, l'acide dibenzoyl-L-tartrique, l'acide tartrique, l'acide p-toluènesulfonique, l'acide triméthylacétique, l'acide trifluoroacétique et similaires ; ou

(2) les sels formés lorsqu'un proton acide présent dans le composé parent soit est remplacé par un ion métallique, par exemple un ion de métal alcalin, un ion de métal alcalino-terreux ou un ion d'aluminium ; soit se coordonne avec une base organique ou inorganique. Les bases organiques acceptables comprennent la diéthanolamine, l'éthanolamine, N-méthylglucamine, la triéthanolamine, la trométhamine et similaires. Les bases inorganiques acceptables comprennent l'hydroxyde d'aluminium, l'hydroxyde de calcium, l'hydroxyde de potassium, le carbonate de sodium et l'hydroxyde de sodium.

Les sels pharmaceutiquement acceptables préférés sont les sels formés à partir d'acide chlorhydrique, d'acide trifluoroacétique, d'acide dibenzoyl-L-tartrique et d'acide phosphorique.

Il devrait être compris que toutes les références aux sels pharmaceutiquement acceptables comprennent les formes d'addition de solvants (solvates) ou les formes cristallines (polymorphes) tels que définis ici, du même sel d'addition d'acide.

Avantageusement, la formule générale (T) est telle que les atomes d'hydrogène sont positionnés de la manière suivante :

Selon un mode de réalisation particulier, l'alcaloïde triterpénique selon l'invention est tel que R ₁ représente -CH ₂ X ₁ R ₇

De préférence, l'alcaloïde triterpénique selon l'invention est tel que X ₁ représente O.

Selon un mode de réalisation préféré, l'alcaloïde triterpénique selon l'invention est représenté par la formule générale (H) suivante :

dans laquelle un des deux traits en pointillés présents dans les cycles a et b et un seul représente une liaison ;

______"R

R ₄ , R ₅ , R ₁₁ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus et X ₁ est tel que défini ci- dessus ou ses sels d'addition pharmaceutiquement acceptables, isomères, énantiomères, diastéréoisomères, ainsi que leurs mélanges.

Avantageusement, la formule générale (H) est telle que les atomes d'hydrogène sont positionnés de la manière suivante :

De manière encore préférée, l'alcaloïde triterpénique selon l'invention est tel que

— R représente =O.

Selon un autre mode de réalisation préféré, l'alcaloïde triterpénique selon l'invention est représenté par la formule générale QIT) suivante :

dans laquelle un des deux traits en pointillés présents dans les cycles a et b et un seul représente une liaison ; R ₄ , R ₅ et R ₁₁ sont tels que définis ci-dessus, X ₁ est tel que défini

— - _[ ^ ci-dessus, et ⁶ est tel que défini ci-dessus ; ou ses sels d'addition pharmaceutiquement acceptables, isomères, énantiomères, diastéréoisomères, ainsi que leurs mélanges.

Avantageusement, la formule générale (III) est telle que les atomes d'hydrogène sont positionnés de la manière suivante :

Selon un autre mode de réalisation, l'alcaloïde triterpénique est représentée par la formule générale (VIII) suivante :

dans laquelle un des trois traits en pointillés présents dans les cycles a et b et un seul représente une liaison ; R ₄ , R ₅ et R ₁₁ sont tels que définis précédemment, et

— 1_^

⁶ est tel que défini précédemment ; ou ses sels d'addition pharmaceutiquement acceptables, isomères, énantiomères, diastéréoisomères, ainsi que leurs mélanges.

Selon encore un autre mode de réalisation préféré, l'alcaloïde triterpénique selon l'invention est représenté par la formule générale (TV) suivante :

dans laquelle un des deux traits en pointillés présents dans les cycles a et b et un seul représente une liaison, R ₄ , R ₅ , R ₇ , X ₂ et R ₁₀ sont tels que définis ci-dessus, X ₁ est tel que défini ci-dessus, et ⁶ est tel que défini ci-dessus ; ou ses sels d'addition pharmaceutiquement acceptables, isomères, énantiomères, diastéréoisomères, ainsi que leurs mélanges.

Avantageusement, la formule générale (III) est telle que les atomes d'hydrogène sont positionnés de la manière suivante :

De manière encore préférée, l'alcaloïde triterpénique selon l'invention est tel que X ₂ représente O.

De manière encore plus préférée, l'alcaloïde triterpénique selon l'invention est tel que R ₁₀ ou R ₁₁ représentent indépendamment l'un de l'autre un alkyle en C ₁ à C ₁₀ , avantageusement ramifié.

De manière préférée entre toutes, l'alcaloïde triterpénique selon l'invention est choisi parmi l'un des composés de formules suivantes :

6h 7e

7h 8a

8c 8d

8e 8f

8h 8i ,et

32 33

38, 39

40, 51

52, 63

64, 68

70, 71

Selon un deuxième aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication du composé de formule générale (IVb) suivante :

- ^~ R dans laquelle R ₄ , R ₅ , R ₇ , R ₁₀ , X ₁ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus et X ₂ représente

O par réaction, du composé de formule (Vb) suivante :

^" R dans laquelle R ₄ , R ₅ , R ₇ , X ₁ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus

avec l'anhydride de formule R ₁₀ (CO) ₂ O dans laquelle R ₁₀ est tel que défini ci- dessus, avantageusement dans le méthanol.

Avantageusement, la formule générale (TVb) est telle que les atomes d'hydrogène sont positionnés de la manière suivante :

Avantageusement, la formule générale (Vb) est telle que les atomes d'hydrogène sont positionnés de la manière suivante :

Selon un mode de réalisation particulier, le composé de formule (Vb) est obtenu par hydrolyse acide, avantageusement dans MeOH avec H ₂ SO ₄ , du composé de formule (VI) suivante

^" R dans laquelle R ₄ , R ₅ , R ₇ , X ₁ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus.

Selon un mode de réalisation particulier, le procédé de fabrication du composé de formule générale (TVb) selon l'invention est tel que le composé de formule générale (VT) a la formule (2) suivante

Avantageusement, la formule générale (VT) est telle que les atomes d'hydrogène sont positionnés de la manière suivante : ",3

Selon un troisième aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication du composé de formule (2) comprenant les étapes successives suivantes : a) alcalinisation des feuilles broyées et séchées de Buxus bakarica WiId, b) extraction et macération dans un mélange CH ₂ Cl ₂ /EtOH pour obtenir un extrait solide, c) extraction dans du dichlorométhane à un pH compris entre 5,8 et 6 pour obtenir un extrait brut du composé de formule (2), d) purification du composé de formule (2), avantageusement par recristallisation dans l'acétone.

Ainsi, selon le nouveau protocole d'extraction, les alcaloïdes bruts ont été fractionnés par extraction à différents pH en milieu tamponné. Le composé 2 a été séparé des autres alcaloïdes par extraction à pH = 5,8-6,0. Ainsi à partir de 11 kg de feuilles broyées et séchées de Buxus bakarica WiId 140 g de N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 bruts ont été recueillis, et 100g de 2 purs ont été isolés après recristallisation dans l'acétone. Le rendement de l'extraction est très bon (0,9 %).

Selon un quatrième aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication des

composés de formule générale (lia) suivante

dans laquelle R ₄ , R ₅ , R ₁₁ , X ₁ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus comprenant les étapes successives suivantes : a) pyrolyse du composé de formule (TVb) dans laquelle R ₁₀ =R ₁₁ et R ₄ , R ₅ , R ₁₁ , X ₁ et

⁶ sont tels que définis ci-dessus, et R ₇ et X ₂ sont tels que définis ci- dessus, à une pression comprise entre 10 ^"3 mm Hg et 10 ^"1 mm Hg, avantageusement à une pression de 0,03 mm Hg, avec une température comprise entre 230 et 350° C, avantageusement entre 235 et 270°C pendant 3 heures à 24 heures, avantageusement pendant 3 heures. b) thermolyse du mélange obtenu à l'étape (a), à une pression comprise entre 10 ^"3 mm Hg et 10 ^"1 mm Hg, avantageusement à une pression de 0,03 mm Hg, avec une température comprise entre 230 et 350° C, avantageusement entre 235 et 270°C et en présence d'hydroxyde de tétraalkylammonium (alkyl=méthyl, éthyl, ou butyl), avantageusement d'hydroxyde de tétraéthylammonium.

Avantageusement, la formule générale (lia) est telle que les atomes d'hydrogène sont positionnés de la manière suivante :

Selon un cinquième aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication du composé de formule générale (lia) dans laquelle R ₅ représente -CH ₃ , R ₄ représente -OH,

⁶ représente =O, X ₁ représente O, R ₁₁ représente -CH(CH ₃ ) ₂ comprenant les étapes successives suivantes : a) pyrolyse du composé de formule (2) à une pression comprise entre 10 ^"3 et 10 ^"1 mm Hg, avantageusement 0,03 mm Hg, avec une température comprise entre 200 et 350° C, avantageusement 240°C, b) thermolyse du mélange obtenu à l'étape (a), à une pression comprise entre 10 ^"3 et 10 ^"1 mm Hg, avantageusement 0,05 mm Hg avec une température comprise entre 200 et 350° C, avantageusement 240°C en présence d'hydroxyde de tétraalkylammonium (alkyl=méthyl, éthyl, butyl), avantageusement d'hydroxyde de tétraéthylammonium.

Ainsi, la N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 1 a été synthétisée en deux étapes à partir de la N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 2. La thermolyse à 240°C sous 0,05 mmHg de 2 conduit à un mélange (82/18) de la N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 1 et du composé 3 résultant de l'ouverture du cyclopropane. Ce mélange est ensuite transformé en

1 avec un rendement de 74 % par chauffage à 240°C sous 0,05 mmHg en présence de cinq équivalents d'hydroxyde de tétraalkylammonium (alkyl=méthyl, éthyl, butyl), avantageusement d'hydroxyde de tétraéthylammonium.

La chromatographie sur alumine du mélange de 1 et de 3 permet de le transformer en uniquement 3 avec un rendement de 91 %.

Selon un sixième aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication du composé de formule générale (lia) dans laquelle R ₅ représente -CH ₃ , R ₄ représente -OH,

⁶ représente =O, X ₁ représente O, R ₁₁ représente -CH(CH ₃ ) ₂ par chauffage à une température entre 200 et 350° C, avantageusement 210°C du composé de formule (2) dans l'éthylène glycol en présence de NaOH.

Ainsi, la N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 1 peut être obtenue en une seule étape avec un rendement de 83 % par chauffage de 2 dans l'éthylène glycol à 210°C en présence de soude.

Selon un septième aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication des composés de formule générale (TVa) suivante

- ^~ R dans laquelle R ₄ , R ₅ , R ₇ , R ₁₀ , X ₁ , X ₂ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus comprenant les étapes successives suivantes : a) pyrolyse du composé de formule (TVb) dans laquelle R ₄ , R ₅ , R ₇ , R ₁₀ , X ₁ , X ₂ et

⁶ sont tels que définis ci-dessus, avantageusement à une pression comprise entre 10 ^"3 et 10 ^"1 mm Hg, avantageusement 0,03 mm Hg, avec une température comprise entre 200 et 350° C, avantageusement entre 235 et 270°C pendant 3 heures à 24 heures, avantageusement pendant 3 heures. b) Chromatographie sur alumine, ou cristallisation fractionnée, du mélange obtenu à l'étape (a).

Avantageusement, la formule générale (TVa) est telle que les atomes d'hydrogène sont positionnés de la manière suivante :

Selon un huitième aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication des composés de formule générale (IHa) suivante

- ^~ R dans laquelle R ₄ , R ₅ , R ₁₁ , X ₁ et sont tels que définis ci-dessus comprenant les étapes successives suivantes : a) hydrolyse acide dans du méthanol, avantageusement avec H ₂ SO ₄ à 90°C pendant 2 heures puis, après évaporation du méthanol à température ambiante, à 80°C pendant 1 heure, du composé de formule générale (TVa) dans laquelle

R ₄ , R ₅ , X ₁ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus et R ₇ , R ₁₀ et X ₂ sont tels que définis ci-dessus, pour obtenir le composé de formule (Va) suivante :

dans laquelle R ₄ , R ₅ , X ₁ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus et R ₇ est tel que défini ci- dessus; b) condensation, avantageusement à 50°C, du composé de formule (Va) avec le composé de formule R ₁₅ CHO dans laquelle R ₁₅ CH représente R ₁₁ et R ₁₁ est tel que défini ci-dessus.

Avantageusement, la formule générale (IHa) est telle que les atomes d'hydrogène et le radical R ₁₁ sont positionnés de la manière suivante :

Avantageusement, la formule générale (Va) est telle que les atomes d'hydrogène sont positionnés de la manière suivante :

Selon un neuvième aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication du composé de formule générale (Illb) suivante

dans laquelle R ₄ , R ₅ , R ₁₁ , X ₁ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus par condensation, avantageusement à 50°C, du composé de formule (Vb) dans laquelle R ₄ , R ₅ , X ₁ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus, et R ₇ est tel que défini ci-dessus avec le composé de formule R ₁₅ CHO dans laquelle R ₁₅ CH représente R ₁₁ et R ₁₁ est tel que défini ci-dessus.

Avantageusement, la formule générale (HIb) est telle que les atomes d'hydrogène et le radical R ₁₁ sont positionnés de la manière suivante :

Selon un dixième aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication du composé de formule (Hb) suivante

- ^~ R dans laquelle R ₄ , R ₅ , R ₁₁ , X ₁ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus par chauffage à une température comprise entre 200 et 350° C, avantageusement à 300°C en présence d'hydroxyde de tétraéthylammonium du composé de formule (VII) suivante

- ^~ R dans laquelle R ₁₀ = R ₁₁ et R ₄ , R ₅ , R ₁₁ , X ₁ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus et R ₇ et X ₂ sont tels que définis ci-dessus.

Avantageusement, la formule générale (Ilb) est telle que les atomes d'hydrogène sont positionnés de la manière suivante :

Avantageusement, la formule générale (VII) est telle que les atomes d'hydrogène sont positionnés de la manière suivante :

R

Selon un mode de réalisation particulier, le composé de formule (VII) est obtenu par réaction en présence d'un acide de Lewis, avantageusement TiCl ₄ dans le dichlorométhane, du composé de formule (IVb) dans laquelle R ₁₀ =R ₁₁ , R ₄ , R ₅ , R ₁₁ , X ₁ et

- ^~ R sont tels que définis ci-dessus et R ₇ et X ₂ sont tels que définis ci-dessus.

Selon un onzième aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication du composé de formule générale (TVb) suivante :

dans laquelle R ₅ , R ₁₀ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus, R ₄ représente -OR ₁₂ dans laquelle R ₁₂ est tel que défini ci-dessus, X ₁ représente NH, R ₇ représente H et X ₂ représente O comprenant les étapes successives suivantes :

- réaction du composé de formule générale (IX) suivante :

dans laquelle R ₅ , R ₁₀ , R ₁₂ et ⁶ sont tels que définis dans la formule générale

(TVb) ci-dessus avec la benzylamine en présence de sulfate de magnésium anhydre dans du dichlorométhane pour obtenir le composé de formule (X) suivante :

- ^~ R dans laquelle R ₅ , R ₁₀ , R ₁₂ et ⁶ sont tels que définis dans la formule générale

(EX) ci-dessus;

- réaction du composé de formule (X) avec du cyanoborohydrure de sodium et de l'acide acétique glaciale dans du méthanol pour obtenir un composé de formule

(XI) suivante :

dans laquelle R ₅ , R ₁₀ , R ₁₂ et ⁶ sont tels que définis dans la formule générale

(X) ci-dessus;

- réaction du composé de formule (XJ), en présence du catalyseur Pd/C à 30% dans du méthanol, avec du formiate d'ammonium ou sous pression d'hydrogène avec de l'acide acétique glacial à pH3 suivi d'une alcalinisation avec une solution amoniacale pour obtenir le composé de formule (TVb).

De préférence, le composé de formule (IX) dans laquelle R ₁₂ ne représente pas un atome d'hydrogène est obtenu par le procédé comprenant les étapes successives suivantes : - protection du groupe hydroxyle du composé de formule générale (TVb) suivante :

n dans laquelle, R ₅ , R ₁₀ , et ⁶ sont tels que définis ci-dessus, R ₇ représente H, et

X ₁ et X ₂ représentent O par réaction avec le composé de formule (R ₁₂ ) ₂ O dans laquelle R ₁₂ est tel que défini à ci-dessus mais ne représente pas un atome d'hydrogène dans un mélange pyridine/dichlorométhane pour obtenir le composé de formule générale (TVb) suivante :

dans laquelle, R ₅ , R ₁₀ , et ⁶ sont tels que définis ci-dessus R ₇ représente H, R ₁₂ est tel que ci-dessus mais ne représente pas un atome d'hydrogène et X ₁ et X ₂ représentent O;

- réaction du composé de formule (TVb) tel que défini ci-dessus avec du périodinane de Dess-Martin dans du dichlorométhane pour obtenir le composé de formule (TX) dans laquelle R ₁₂ ne représente pas un atome d'hydrogène.

De manière encore préférée, le composé de formule (IX) dans laquelle R ₁₂ représente un atome d'hydrogène est obtenu par la réaction de déprotection du composé de formule (IX) dans laquelle R ₁₂ ne représente pas un atome d'hydrogène.

Selon un douzième aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication du composé de formule (Ile) suivante :

dans laquelle R ₅ , R ₁₁ , et ⁶ sont tels que définis ci-dessus, X ₁ représente NH, R ₄ représente -OR ₁₂ et R ₁₂ est tel que défini dans la revendication 1 par réaction du composé de formule générale (TVb) suivante :

dans laquelle R ₁₀ = R ₁₁ , R ₅ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus, R ₄ représente

-OR ₁₂ dans laquelle R ₁₂ est tel que défini ci-dessus, X ₁ représente NH, R ₇ représente H et X ₂ représente O avec la triéthylamine dans du butanol.

Selon un treizième aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication d'un composé de formule (VIII) suivante :

dans laquelle R ₅ , R ₁₁ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus, R ₄ représente -OR ₁₂ et R ₁₂ est tel que défini ci-dessus par réaction du composé de formule générale (Wb) suivante :

dans laquelle R ₁₀ = R ₁₁ , R ₅ et ⁶ sont tels que définis ci-dessus, R ₄ représente

-OR ₁₂ dans laquelle R ₁₂ est tel que défini ci-dessus, X ₁ représente NH, R ₇ représente H et X ₂ représente O avec du formiate d'ammonium en présence du catalyseur Pd/C à 30% dans du méthanol.

Selon un quatorzième aspect, l'invention a pour objet un alcaloïde triterpénique mule générale (I) suivante :

dans laquelle un des trois traits en pointillés présents dans les cycles a et b et un seul représente une liaison ;

R ₁ représente -CH ₂ X ₁ R ₇ , -CH=NR ₈ ou -CH=O dans lesquelles X ₁ représente O, NH ou S,

R ₇ représente un atome d'hydrogène, un alkyl en C ₁ -C ₁₀ , un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle, un alkyl (en C ₁ -C ₁₀ ) carbonyle, un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ )- bisftrialkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) silyle] ou SO ₂ R ₉ , R ₉ représentant un alkyle en C ₁ à C ₁₀ ou un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle, à condition que R ₇ ne représente pas SO ₂ R ₉ lorsque X ₁ représente S ;

R ₈ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ -C ₁₀ , un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle, un alkyl (en C ₁ -C ₁₀ ) carbonyle, un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ )- bisftrialkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) silyle] ou SO ₂ R ₉ , R ₉ représentant un alkyle en C ₁ à C ₁₀ ou un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle;

R ₂ et R ₃ représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou

II ² ~-C— R ₁₀

, dans laquelle X ₂ représente O, NH ou S et R ₁₀ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ à C ₁₀ , un phényle, un cycloalkyle en C ₃ à C ₁₀ , ou un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle, à la condition qu'au moins l'un et un seul de R ₂ ou R ₃ représente un atome d'hydrogène, ou R ₂ est absent, R ₁ représente -CH ₂ X ₁ R ₇ et -NR ₃ et -X ₁ R ₇ pris ensemble représentent

dans laquelle R ₁₁ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ à C ₁₀ , un phényle, un cycloalkyle en C ₃ à C ₁₀ , un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle, ou R2 représente un atome d'hydrogène, R ₁ représente -CH ₂ X ₁ R ₇ et -NHR ₃ et - X ₁ R ₇ pris ensemble représentent

dans laquelle R ₁₁ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ à C ₁₀ , un phényle, un cycloalkyle en C ₃ à C ₁₀ , un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle, ou R ₂ représente un atome d'hydrogène, R ₁ représente - CH ₂ =NR ₈ et -NHR ₃ et pris ensemble représentent

dans laquelle R ₁₁ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ à C ₁₀ , un phényle, un cycloalkyle en C ₃ à C ₁₀ ou un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle ;

R ₄ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ -C ₁₀ ou un radical -X ₃ R ₁₂ dans lequel X ₃ représente O, NH ou S, avantageusement O et R ₁₂ représente un atome d'hydrogène, un alkyl (en C ₁ -C ₁₀ ) carbonyle, un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle, un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) sulfonyle, un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényl sulfonyle ou un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) dialkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) silyle, avantageusement un atome d'hydrogène ; R ₅ représente le groupe N ⁺ OCH ₃ R ₁₃ ou le groupe NCH ₃ R ₁₃ dans lesquels R ₁₃ représente un atome d'hydrogène, un cycloalkyle en C ₃ à C ₁₀ , un alkyle en C ₁ à

C ₁₀ , un phényle ou un phtalimide, avantageusement -CH ₃ et

— 1_^

⁶ représente =O ou -OR ₁₄ dans lequel R ₁₄ représente un atome d'hydrogène, un alkyle en C ₁ -C ₁₀ , un alkyl (en C ₁ -C ₁₀ ) carbonyle, un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) phényle ou un alkyl (en C ₁ à C ₁₀ ) sulfonyle;

ou ses sels d'addition pharmaceutiquement acceptables, isomères, énantiomères, diastéréoisomères, ainsi que leurs mélanges, à titre de médicament.

Avantageusement, la formule générale (T) est telle que les atomes d'hydrogène sont positionnés de la manière suivante :

Avantageusement, tout alcaloïde triterpénique selon l'invention est utile à titre de médicament, y compris les composés de formules générales II, III et IV. La présente invention comprend des compositions pharmaceutiques, « ou médicaments », comprenant au moins un composé de la présente invention, ou un isomère individuel, un mélange racémique ou non-racémique d'isomères ou un sel pharmaceutiquement acceptable, ou un solvate de ceux-ci conjointement avec au moins un vecteur pharmaceutiquement acceptable, et éventuellement d'autres ingrédients thérapeutiques et/ou prophylactiques.

En général, les composés de la présente invention seront administrés en une quantité thérapeutiquement efficace par l'un quelconque des modes acceptés d'administration pour des agents qui servent des utilités similaires. Les gammes de posologies appropriées sont typiquement de 1 à 500 mg par jour, de préférence de 1 à 100 mg par jour, et de manière préférée entre toutes de 1 à 30 mg quotidien, en fonction de nombreux facteurs tels que la sévérité de la pathologie à traiter, l'âge et la santé relative du sujet, la puissance du composé utilisé, la voie et la forme d'administration, l'indication vers laquelle l'administration est dirigée, et les préférences

et l'expérience du praticien médical impliqué. L'homme du métier du traitement d'une telle pathologie sera capable, sans expérience indue et en se reposant sur sa connaissance personnelle et la description de cette demande, de s'assurer d'une quantité therapeutiquement efficace des composés de la présente invention pour une pathologie donnée. En général, les composés de la présente invention seront administrés en tant que formulations pharmaceutiques comprenant celles appropriées pour une administration orale (y compris buccale et sublinguale), rectale, nasale, topique, pulmonaire, vaginale ou parentérale (y compris intramusculaire, intraartérielle, intrathécale, sous-cutanée et intraveineuse) ou sous une forme appropriée pour une administration par inhalation ou insufflation. La manière préférée d'administration est généralement orale en utilisant un schéma posologique quotidien qui peut être ajusté selon le degré de l'affection.

Un composé ou des composés de la présente invention, conjointement avec un ou plusieurs adjuvants, vecteurs ou diluants classiques, peuvent être placés sous la forme de compositions pharmaceutiques et d'unités de prise. Les compositions pharmaceutiques et les formes galéniques unitaires peuvent se composer d'ingrédients classiques en des proportions classiques, avec ou sans autres composés ou principes actifs, et les formes galéniques unitaires peuvent contenir toute quantité efficace appropriée de l'ingrédient actif proportionné à la gamme posologique quotidienne prévue que l'on doit employer. Les compositions pharmaceutiques peuvent être employées sous forme de solides, tels que les comprimés ou les capsules remplies, de semi-solides, de poudres, de formulations à libération prolongée, ou de liquides tels que les solutions, les suspensions, les émulsions, les élixirs ou les capsules remplies pour une utilisation orale ; ou sous la forme de suppositoires pour une administration rectale ou vaginale ; ou sous la forme de solutions injectables stériles pour une utilisation parentérale. Les formulations contenant environ un (1) milligramme d'ingrédient active ou, plus largement, environ 0,01 à environ cent (100) milligrammes, par comprimé, sont en conséquence des formes galéniques unitaires représentatives appropriées.

Les composés de la présente invention peuvent être formulés dans une grande variété de formes galéniques pour une administration orale. Les compositions pharmaceutiques et les formes galéniques peuvent comprendre un composé ou des composés de la présente invention ou des sels pharmaceutiquement acceptables de ceux- ci en tant que composants actifs. Les vecteurs pharmaceutiquement acceptables peuvent être soit solides, soit liquides. Les préparations sous forme solide comprennent les poudres, les comprimés, les pilules, les capsules, les cachets, les suppositoires et les granules dispersibles. Un vecteur solide peut être une ou plusieurs substances qui peuvent également agir en tant que diluants, agents aromatisants, solubilisants, lubrifiants, agents de suspension, liants, conservateurs, agents de désagrégation de comprimés ou matériau encapsulant. Dans les poudres, le vecteur est généralement un solide finement divisé qui est un mélange avec le composant actif finement divisé. Dans les comprimés, le composant actif est généralement mélangé avec le vecteur ayant la capacité de liaison nécessaire en des proportions appropriées et compacté aux formes et taille souhaitées. Les poudres et les comprimés contiennent de préférence d'environ un (1) à environ soixante-dix (70) pour cent du composé actif. Les vecteurs appropriés comprennent, mais ne sont pas limités à, le carbonate de magnésium, le stéarate de magnésium, le talc, le sucre, le lactose, la pectine, la dextrine, l'amidon, la gélatine, la gomme adragante, la méthylcellulose, la carboxyméthylcellulose de sodium, une cire à faible point de fusion, le beurre de cacao et similaires. Le terme « préparation » est entendu comprendre la formulation du composé actif avec un matériau encapsulant tel qu'un vecteur, formant une capsule dans laquelle le composant actif, avec ou sans vecteur, est entouré par un vecteur, qui est en association avec celui-ci. De manière similaire, les cachets et les pastilles sont compris. Les comprimés, les poudres, les capsules, les pilules, les cachets et les pastilles peuvent être sous formes solides appropriées pour une administration orale.

D'autres formes appropriées pour une administration orale comprennent les préparations sous forme liquide comprenant les émulsions, les sirops, les élixirs, les solutions aqueuses, les suspensions aqueuses, ou les préparations sous forme solide qui

sont destinées à être converties rapidement avant utilisation en préparations sous forme liquide. Les émulsions peuvent être préparées en solutions, par exemple, dans des solutions aqueuses dans le propylène glycol ou peuvent contenir des agents émulsionnants tels que, par exemple, la lécithine, le monooléate de sorbitan ou la gomme arabique. Les solutions aqueuses peuvent être préparées en dissolvant le composant actif dans de l'eau et en ajoutant des colorants, des arômes, des agents stabilisants et épaississants appropriés. Les suspensions aqueuses peuvent être préparées en dispersant le composant actif finement divisé dans de l'eau avec une matière visqueuse, tels que les gommes naturelles ou synthétiques, les résines, la méthylcellulose, la carboxyméthylcellulose de sodium, et d'autres agents de suspension bien connus. Les préparations sous forme solide comprennent les solutions, les suspensions et les émulsions, et peuvent contenir, en plus du composant actif, des colorants, des arômes, des stabilisants, des tampons, des édulcorants artificiels et naturels, des dispersants, des épaississants, des agents de solubilisation, et similaires. Les composés de la présente invention peuvent être formulés pour une administration parentérale (par exemple par injection, par exemple injection en bol ou infusion continue) et peuvent être présentés sous forme galénique unitaire dans des ampoules, des seringues pré-remplies, des infusions de petit volume ou des conteneurs à doses multiples avec un conservateur ajouté. Les compositions peuvent prendre des formes telles que des suspensions, des solutions ou des émulsions dans des véhicules huileux ou aqueux, par exemple des solutions dans du polyéthylène glycol aqueux. Les exemples de vecteurs, diluants, solvants ou véhicules huileux ou non aqueux comprennent le propylène glycol, le polyéthylène glycol, les huiles végétales (par exemple l'huile d'olive), et les esters organiques injectables (par exemple l'oléate d'éthyle), et peuvent contenir des agents de formulation tels que les agents conservateurs, mouillants, émulsionnants ou de suspension, stabilisants et/ou dispersants. En variante, l'ingrédient actif peut être sous forme de poudre, obtenue par isolation aseptique de solides stériles ou par lyophilisation à partir d'une solution pour la constitution avant utilisation avec un véhicule approprié, par exemple de l'eau apyrogène stérile.

Les composés de la présente invention peuvent être formulés pour une administration topique à l'épiderme sous forme de pommades, de crèmes ou de lotions, ou en tant que timbre transdermique. Les pommades et les crèmes peuvent, par exemple, être formulées avec une base aqueuse ou huileuse avec l'addition d'agents épaississants et/ou de gélification appropriés. Les lotions peuvent être formulées avec une base aqueuse ou huileuse et contiendront également en général un ou plusieurs agents émulsionnants, agents stabilisants, agents dispersants, agents de suspension, agents épaississants ou agents colorants. Les formulations appropriées pour une administration topique dans la bouche comprennent les pastilles comprenant des agents actifs dans une base aromatisée, habituellement du saccharose et de la gomme arabique ou de la gomme adragante ; des pastilles comprenant l'ingrédient actif dans une base inerte tels que la gélatine et la glycérine ou le saccharose et la gomme arabique ; et des collutoires comprenant l'ingrédient actif dans un vecteur liquide approprié.

Les composés de la présente invention peuvent être formulés pour une administration en tant que suppositoires. Une cire à faible point de fusion, tel qu'un mélange de glycérides d'acides gras ou de beurre de cacao est tout d'abord fondue et le composant actif est dispersé de manière homogène, par exemple par agitation. Le mélange homogène fondu est ensuite versé dans des moules de taille commode, on le laisse refroidir et se solidifier. Les composés de la présente invention peuvent être formulés pour une administration nasale. Les solutions ou les suspensions sont appliquées directement à la cavité nasale par un moyen classique, par exemple, avec un compte-gouttes, une pipette ou une pulvérisation. Les formulations peuvent être réalisées en une forme unique ou à doses multiples. Dans le dernier cas d'un compte-gouttes ou d'une pipette, ceci peut être atteint par l'administration au patient d'un volume approprié prédéterminé de la solution ou de la suspension. Dans le cas d'une pulvérisation, ceci peut être atteint par exemple au moyen d'une pompe de pulvérisation atomiseur doseur.

Les composés de la présente invention peuvent être formulés pour une administration par aérosol, particulièrement au tractus respiratoire et comprenant

l'administration intranasale. Le composé aura en général une petite taille de particule, par exemple de l'ordre de cinq (5) microns ou moins. Une telle taille de particule peut être obtenue par des moyens connus dans l'art, par exemple par micronisation. L'ingrédient actif est formé dans un emballage mis sous pression avec un propulseur approprié tel qu'un chlorofluorocarbone (CFC), par exemple, le dichlorodifluorométhane, le trichlorofluorométhane ou le dichlorotétrafluoroéthane ou du dioxyde de carbone ou un autre gaz approprié. L'aérosol peut de manière commode également contenir un agent tensioactif tel que la lécithine. La dose de médicaments peut être régulée par une soupape doseur. En variante, les ingrédients actifs peuvent être produits en une forme de poudre sèche, par exemple un mélange de poudre du composé dans une base de poudre appropriée tels que le lactose, l'amidon, les dérivés d'amidon tels que l'hydroxypropylméthylcellulose et la polyvinyl-pyrrolidine (PVP). Le vecteur de poudre formera un gel dans la cavité nasale. La composition de poudre peut être représentée sous forme galénique unitaire par exemple dans des capsules ou des cartouches, par exemple, de gélatine ou de plaquettes à partir desquelles la poudre peut être administrée au moyen d'un inhalateur.

Les composés de la présente invention peuvent être formulés dans des dispositifs de délivrance de médicaments par voie transdermique ou sous-cutanée. Ces systèmes de délivrance sont avantageux lorsque la libération prolongée du composé est nécessaire et lorsque le fait de conformer un patient avec un schéma de traitement est crucial. Les composés dans des systèmes de délivrance transdermique sont fréquemment fixés à un support solide adhérent à la peau. Le composé d'intérêt peut également être combiné avec un améliorateur de pénétration, par exemple de l'azone (1- dodécylazacyeloheptan-2-one). Les systèmes de délivrance à libération prolongée sont insérés de manière sous-cutanée dans la couche sous-dermique par chirurgie ou injection. Les implants sous-dermiques encapsulent le composé dans une membrane soluble dans les liquides, par exemple du caoutchouc de silicone, ou un polymère biodégradable, par exemple le polyacide lactique.

Les préparations pharmaceutiques sont de préférence sous forme galénique unitaire. Dans une telle forme, la préparation est sous-divisée en doses unitaires

contenant des quantités appropriées du composant actif. La forme galénique unitaire peut être une préparation emballée, l'emballage contenant des quantités discrètes de préparation, tels que des comprimés emballés, des capsules et des poudres dans des flacons ou des ampoules. De même, la forme galénique unitaire peut être une capsule, un comprimé, un cachet ou une pastille elle-même, ou elle peut être le nombre approprié de l'un quelconque de ceux-ci sous forme emballée.

D'autres vecteurs pharmaceutiques appropriés et leur formulation sont décrits dans Remington, The Science and Practice of Pharmacy 1995, édité par E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19erne édition, Easton, Pennsylvanie.

Selon un mode de réalisation préféré, l'alcaloïde triterpénique à titre de médicament selon l'invention est caractérisé en ce qu'il est choisi parmi l'un des composés de formules suivantes :

7e 7h

8a 8c

8d 8e

8f 8h

8i 12

32 33

38, 39

40, 51

52, 63

64, 68

70, 71

Selon un autre mode de réalisation préféré, l'alcaloïde triterpénique selon l'invention est caractérisé en ce que le médicament est destiné à traiter un sujet atteint d'une maladie du système nerveux central ou périphérique.

Dans la présente invention, on entend désigner par « sujet » des mammifères et des non mammifères. Les mammifères signifient tout membre de la classe mammifère comprenant, mais n'étant pas limitée à, les humains, les primates non humains tels que les chimpanzés et autres singes et espèces de singes ; les animaux de la ferme tels que le bétail, les chevaux, le mouton, les chèvres et le porc ; les animaux domestiques tels que les lapins, les chiens et les chats ; les animaux de laboratoire y compris les rongeurs, tels que les rats, les souris et les cobayes ; et similaires. Les exemples de non mammifères comprennent, mais ne sont pas limités à, les oiseaux et similaires.

D'autre part, le terme « traiter » ou « traitement » d'un état pathologique utilisé dans la présente invention, comprend :

(1) prévenir l'état pathologique, à savoir amener les symptômes cliniques de l'état pathologique à ne pas se développer chez un sujet qui peut être exposé ou prédisposé à l'état pathologique, mais n'a pas encore subi ou affiché les symptômes de l'état pathologique;

(2) inhiber l'état pathologique, à savoir arrêter le développement de l'état pathologique ou de ses symptômes cliniques ; ou

(3) calmer l'état pathologique, à savoir entraîner une régression temporaire ou permanente de l'état pathologique ou de ses symptômes cliniques.

Dans la présente invention, on entend désigner par « maladie du système nerveux central ou périphérique » toute altération de l'état de santé du système nerveux central ou périphérique chez un sujet, attribuée à des causes internes ou externes, se traduisant par des symptômes et des signes, et se manifestant par une perturbations des fonctions ou par des lésions. On peut citer en tant qu'exemples, sans toutefois s'y limiter, la maladie d'Alzheimer, les troubles de la mémoire associés au vieillissement ou à la maladie d'Alzheimer, les troubles associés à la trisomie 21, la démence à corps de Lewy, la démence de Parkinson, la démence vasculaire, le délire, les blessures traumatiques du cerveau, la myasthénie d'origine congénitale ou auto-immune pour reverser des agents bloquants neuromusculaires agissant au niveau des récepteurs post-synaptiques musculaires et tout syndrome cholinergique dans lequel il y a une diminution de la quantité d'acétylcholinestérase libérée, l'épilepsie, une tumeur au cerveau, une maladie neurodégénérative telle que la maladie de Tay-Sachs, la maladie de Lesch-Nyan, la maladie de Huntington, la sclérose latérale amyotrophique (ou maladie de Lou Gehrig), le syndrome de Down, ou les neuropathies périphériques telles que la neuropathie périphérique diabétique.

Selon un mode de réalisation encore plus préféré, l'acaloïde triterpénique selon l'invention est caractérisé en ce que la maladie du système nerveux central ou périphérique est choisie dans le groupe constitué par la maladie d'Alzheimer, les troubles de la mémoire associés au vieillissement ou à la maladie d'Alzheimer, les troubles associés à la trisomie 21, la démence à corps de Lewy, la démence de Parkinson, la démence vasculaire, le délire, les blessures traumatiques du cerveau, la myasthénie d'origine congénitale ou auto-immune pour reverser des agents bloquants neuromusculaires agissant au niveau des récepteurs post-synaptiques musculaires et tout syndrome cholinergique dans lequel il y a une diminution de la quantité d'acétylcholinestérase libérée.

L'invention a encore pour objet l'utilisation d'un alcaloïde triterpénique selon la présente invention pour la fabrication d'un médicament destiné à traiter un sujet atteint

de la maladie d'Alzheimer, des troubles de la mémoire associés au vieillissement ou à la maladie d'Alzheimer, des troubles associés à la trisomie 21 , la démence à corps de Lewy, la démence de Parkinson, la démence vasculaire, le délire, les blessures traumatiques du cerveau, la myasthénie d'origine congénitale ou auto-immune pour reverser des agents bloquants neuromusculaires agissant au niveau des récepteurs post-synaptiques musculaires et tout syndrome cholinergique dans lequel il y a une diminution de la quantité d'acétylcholinestérase libérée.

Enfin, l'invention a pour objet une méthode de traitement d'un sujet atteint d'une maladie du système nerveux central ou périphérique, qui comprend l'administration d'un alcaloïde triterpénique selon la présente invention ou d'une composition pharmaceutique comprenant un tel alcaloïde.

Les exemples qui suivent sont destinés à illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée.

EXEMPLES

Exemple 1 : Isolement de la N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 ou

(20S)-3 -isobutyrylamino-9,19-cyclo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-5a,9 -pregnan-16a-ol-ll-one 2_:

C _3θ H ₅ oN ₂ 0 ₄

Aspect : solide incolore

Poids moléculaire : 502,73

1.1. Protocole d'extraction des alcaloïdes totaux.

1,5 kg de feuilles broyées et séchées de Buxus Bakarica WiId sont alcalinisées avec 600 ml d'une solution ammoniacale à 30 %. Une première extraction est réalisée, sous agitation, avec 10 1 d'un mélange de solvants CH ₂ Cl ₂ 9 / EtOH 1 pendant une nuit à température ambiante. Après filtration, cinq macérations successives sont effectuées avec 10 1 d'un mélange de solvants CH ₂ Cl ₂ 9 / EtOH 1, en agitant pendant trois heures à température ambiante entre chaque filtration.

Les phases organiques réunies sont évaporées sous vide pour fournir 240 g d'un extrait vert foncé. L'extrait est successivement repris avec 7 1 de dichlorométhane, lavé 10 fois avec 1 1 d'acide chlorhydrique 2N. Les phases aqueuses sont alcalinisées avec une solution ammoniacale à 30%, puis extraites avec 6x2 1 de dichlorométhane. Les phases organiques sont évaporées sous vide pour fournir 98 g d'une poudre brune.

A partir du marc épuisé par six extractions/macérations, un soxhlet est réalisé au dichlorométhane pendant vingt heures jusqu'à l'obtention d'un test de Meyer négatif. Chaque extrait est successivement repris avec 7 1 de dichlorométhane, lavé 10 fois avec 1 1 d'acide chlorhydrique 2N. Les phases aqueuses sont alcalinisées avec une solution ammoniacale à 30%, puis extraites avec 6x2 1 de dichlorométhane. Les phases organiques sont finalement évaporées et fournissent 7 g d'alcaloïdes. Ainsi, 105 g d'alcaloïdes totaux ont été isolés avec un rendement de 7 %. Cette expérience a aussi été réalisée sur un lot de 11 kg de feuilles broyées et séchées de Buxus Bakarica WiId à. l'usine d'extraction de l'I.C.S.N. à Gif-sur- Yvette.

1.2. Isolement de la N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 2. Préparation des solutions : 4 litres d'une solution tampon 1,0 M AcOH/ AcONa à pH = 5 sont préparés comme suit :

17,136 g (0.2348 mol) d'acide acétique glacial et 99,296 g (0,7151 mol) d'acétate de sodium sont dissous dans 1000 ml d'eau permutée.

Dissolution des alcaloïdes totaux dans les quatre phases aqueuses à pH = 5.

Une solution de 27,3 g d'alcaloïdes bruts dans 500 ml de dichlorométhane est lavée 4x1 1 de solution tampon à pH = 5. Puis, cette phase organique est successivement lavée avec 1 litre d'une solution ammoniacale à 10%, avec 1 litre d'une solution d'eau permutée et avec 1 litre d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, puis séchée sur du sulfate de magnésium anhydre et évaporée sous pression réduite. Ceci fournit un résidu de 1,74g.

Neutralisation progressive suivie d'extractions : Fractionnement des alcaloïdes.

Ensuite, le pH de chaque phase aqueuse contenant la solution de tampon de départ, dans laquelle les alcaloïdes sont présents, est augmenté d'1 unité de pH par ajout d'ammoniaque à 10 %. Les phases aqueuses sont alors successivement extraites avec 8 x 500 ml de dichlorométhane jusqu'à épuisement des alcaloïdes dans les phases aqueuses. Les 8 phases organiques sont alors successivement lavées avec 1 litre d'une solution ammoniacale à 10%, avec 1 litre d'une solution d'eau permutée et avec 1 litre d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, puis séchées sur du sulfate de magnésium anhydre et évaporées sous pression réduite. Ainsi, 3,19 g de N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 sont extraits à pH = 5,8 avec un rendement de 0,8 %. Le pH est mesuré à l'aide d'un pH-mètre étalonné.

On obtient à la fin le bilan massique suivant :

Cette expérience a aussi été réalisée sur un lot de 11 kg de feuilles broyées et séchées de Buxus Bakarica WiId à l'usine d'extraction de l'I.CS.N. à Gif-sur- Yvette et a permis d'isoler, après trituration de l'extrait à pH = 6 dans l'acétone, 100 g de N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 avec un rendement de 0,9% dont les caractéristiques spectroscopiques sont identiques à celles décrites par Herlem-Gaulier et al. (1968). PF (°C) : 257

[α] _D = + 69° (c = 1,01 ; 25°C, CHCl ₃ )

Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₀ H ₅₀ N ₂ O ₄ % : C : 71,67 ; H : 10,02 ; N : 5,57 ; O : 12,73 ; mesurée : C : 71,51; H : 10,14 ; N : 5,34 ; O : 12,87

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3434 (OH, NH) ; 1690 (C=O) ; 1654 et 1513 (CONH) ; 1096 (C-OH).

Masse (TE) : m/z : 502,1 (M ^+# ) ; 72,0 (Me-CH=N ⁺ (CH ₃ ) ₂ , pic de base). (ESI) : m/z : 503,4 ([M+H], 100) ; 504,4 (10). SMHR (ESI) calculée pour C ₃₀ H ₅₁ N ₂ O ₄ m/z = 503,3849 ; mesurée : 503,3852.

Remarque concernant le déplacement chimique des méthyles rattachés à l'azote N _B :

À 243°K, les N _B (CH ₃ ) ₂ ont pour déplacements chimiques 2,07 ppm et 2,30 ppm sous forme de deux singulets. A 300°K, l'inversion du doublet de l'azote est lente du fait d'une liaison hydrogène intramoléculaire entre l'azote NB et le proton de l'alcool rattaché en Cl 6. Les N _B (CH ₃ ) ₂ ont alors pour déplacements chimiques 2,20 ppm sous forme d'un singulet large. En RMN ¹³ C, aucun pic n'est observé à cette température.

Exemple 2 : Isolement de la N-3- isobutyrylcycloxobuxidine -Fl (ou (20S)-10(9-> l)abeo-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-(2'-isopropyl-4',4'- dihydro[3',l']oxazine)-5a ,9 -pregn-l(10)-èn-16a-ol-ll-one 1)

Aspect : solide jaune clair Poids moléculaire : 484,71

Schéma 1

1 ^Ie méthode : four à boules ou tube à sublimer

100 mg (0,20 mmol, 1,0 éq.) de N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 sont chauffés à 240°C sous 0,05 mmHg dans un four à boules ou un tube à sublimer. Un sublimât solide est obtenu en 3 heures. Le sublimât est un mélange de produit d'ouverture du cyclopropane 3 (18%) et de N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 1 (82%). À une solution du sublimât dans 2 ml de dichlorométhane sont ajoutés 515 mg (0,87 mmol, 5,0 éq.) d'une solution d'hydroxyde de tétraéthylammonium à 25 % dans le méthanol. Après évaporation sous vide, le résidu rouge chauffé à 240°C sous 0,05 mmHg pendant 3

heures fournit 71,6 mg de 1 sous forme d'un sublimât cristallin jaune clair avec un rendement de 74%. Il est également possible de réaliser cette synthèse avec l'hydroxyde de tétrabutylammonium 1 ,0 M dans le méthanol.

2 ^nde méthode : en solution dans le glycol À une suspension de 50 mg (0,10 mmol, 1,0 éq.) N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 dans 5 ml d'éthylène glycol fraîchement distillé sont ajoutés 0,8 mg de soude (0,02 mmol, 0,2 éq). Après 6 heures de chauffage à 215°C sous argon, le mélange est alcalinisé avec 60 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide pour fournir 40 mg de 1 sous forme d'un solide jaune clair avec un rendement de 83%.

PF ( ⁰ C) : 281,5

[0C]D = +71° (c = 0,8 ; 25°C, CHCl ₃ )

Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₀ H ₄₈ N ₂ O ₃ : C : 74,34 ; H : 9,98 ; N : 5,78 ; O : 9,90 ; mesurée C : 74,13 ; H : 9,91 ; N : 5,67 ; O : 9,97.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3433 (OH,) ; 1693 (C=O) ; 1513 (C=H) ; 1043 (C-OH). Masse (ESI) : m/z : 485,3 ([M+H], 95) ; 486,3 (100) ; 487,4 (50) ; 503,4 (2). SMHR (ESI) calculée pour C ₃₀ H ₄₉ N ₂ O ₃ m/z = 485,3743 ; mesurée : 485,3721. Exemple 3 : 10(9->l)abeo-N-3-isobutyrylcycloxobuxi-l(10)-ènedine-F 3 (ou

(20S)-10(9- > l)abeo-4a-hydroxyméthyl-3 -isobutyrylamino-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-5a,9 -pregn-l(10)-èn-16a-ol-ll-one 3}

C ₃₀ H ₅₀ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 502,73

1 méthode : en solution

Une suspension de 250 mg (0,49 mmol, 1 ,0 éq.) N-3-isobutyrylcycloxobuxidine- F 2 dans 20 ml d'éthylène glycol fraîchement distillé sur soude (concentration : 12 g/L) est chauffée à 160°C pendant 6 heures sous argon. Le mélange est ensuite alcalinisé avec 50 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement lavées avec 50 ml d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchées sur sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide. Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 98 / méthanol 2) pour fournir 105 mg de 3 sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'éther diéthylique avec un rendement de 42% dont les caractéristiques spectroscopiques sont identiques à celles décrites par Herlem-Gaulier, D. et al; (1968). 2 ^nde méthode : au four

100 mg (0,20 mmol, 1,0 éq.) de N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 sont chauffés à 240°C sous 0,05 mmHg dans un four à boules. Un sublimât est obtenu en 3 heures. Le sublimât solide est un mélange de produit désiré 3 (18%) et de N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F 1 (82%). Les résidus (culot et sublimât) réunis sont chromatographiés sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 98 / méthanol 2) pour fournir 91 mg de 3 sous forme d'une poudre

incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 91% dont les caractéristiques spectroscopiques sont identiques à celles décrites par Herlem-Gaulier, D. et al; (1968).

PF (°C) : 242

[α] _D = -46° (c = 1,0 ; 25°C, CHCl ₃ )

Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₀ H ₅₀ N ₂ O ₄ -O ₅ SH ₂ O : C : 70,45 ;

H : 9,98 ; N : 5,47 ; mesurée : C : 70,84 ; H : 9,71 ; N : 5,21.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3433 (OH, NH) ; 1693 (C=O) ; 1652 et 1513 (CONH) ; 1043 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 503,3 ([M+H], 100) ; 504,3 (90).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₀ H ₅₁ N ₂ O ₄ m/z = 503,3849 ; mesurée : 503,3852.

Exemple 4 : Synthèses d'analogues de la N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-

F l Afin de compléter des études pharmacologiques, des analogues de 1 ont été synthétisés et leurs activités antiacétylcholinestérasiques et antibutyrylcholinestérasiques mesurées.

4.1. Synthèse des composés 5, 6, 7 et 8

Le précurseur commun de ces analogues est la cycloxobuxidine 5, qui est obtenue par hydrolyse acide de la fonction amide de la N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 avec un rendement de 94% (Schéma 2).

2 I N-3-isobutyrylcycloxobuxidine

Schéma 2

Les amides 6 sont obtenus par réaction de l'aminé 5 avec différents anhydrides.

La pyrolyse des composés 6 sous 0,03 mmHg à haute température (235°C à 270°C) conduit quantitativement à des mélanges de composés 7 et 8 en proportion variable. Les chromatographies de ces mélanges (7 et 8) sur alumine basique permettent de les transformer en composé 7 correspondants par hydrolyse de la fonction dihydrooxazine présente sur les composés 8. Finalement, les composés 8 ont été obtenus par thermolyse du mélange des composés 7 et 8 correspondants sous 0,03 mmHg à température élevée

(235°C à 270°C) en présence d'hydroxyle de tétraéthylammonium avec de bons rendements (30-94%) (Schéma 3 ci-dessous) :

6a R = CH ₃ (79%)

6b R = C ₆ H ₅ (91%)

6c R = C ₂ H ₅ (80%)

6d R = C ₆ H ₁₁ (68%)

6e R = (S)-(CH ₃ )CH(C ₂ H ₅ ) (75%)

6f R = C ₄ H ₉ (79 %)

6g R = C ₆ H ₅ CH ₂ (67%)

6h rao- R = (CH ₃ )CH(C ₂ H ₅ ) (84%)

6i R = (C ₂ H ₅ )CH(C ₂ H ₅ ) (81%)

0,03 mmHg, 235°C à270°C thermolyse (four à boule), 3h

a R = CH ₃ (76%) 7a, 8a R = CH ₃ (98/2) b R = C ₆ H ₅ (85%) 7b, 8b R = C ₆ H ₅ (95/5) c R = C ₂ H ₅ (94%) 7c, 8c R = C ₂ H ₅ (64/36) d R = C ₆ H ₁₁ (73%) 7d, 8d R = C ₆ H ₁₁ (83/17) e R = (SHCH ₃ )CH(C ₂ H ₅ ) (80%) 7e, 8e R = (S)-(CH ₃ )CH(C ₂ H ₅ ) (85/15) f R = C ₄ H ₉ (85%) 7f, 8f R = C ₄ H ₉ (100/0) g R = C ₆ H ₅ CH ₂ (81%) 7g, 8g R = C ₆ H ₅ CH ₂ (74/26) h R = TaC-(CH ₃ )CH(C ₂ H ₅ ) (30%) 7h, 8h R = PaC-(CH ₃ )CH(C ₂ H ₅ ) (80/20) i R = (C ₂ H ₅ )CH(C ₂ H ₅ ) (49%) 7i, 8i R = (C ₂ H ₅ )CH(C ₂ H ₅ ) (90/10)

Chromatographie sur alumine

7a R = CH ₃ (88%)

7b R = C ₆ H ₅ (68%)

7c R = C ₂ H ₅ (71%)

7d R = C ₆ H ₁₁ (89%)

7e R = (S)-(CH ₃ )CH(C ₂ H ₅ ) (51%)

7f R = C ₄ H ₉ (88%)

7g R = C ₆ H ₅ CH ₂ (55%)

7h R = TaC-(CH ₃ )CH(C ₂ H ₅ ) (30%)

7i R = (C ₂ H ₅ )CH(C ₂ H ₅ ) (31%)

• Composé 5 : cycloxobuxidine-F 5 ou

(20S)-3 -amino-9,19-cyclo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-5a,9 -pregnan-î6a-ol-îî-one 5

C ₂₆ H ₄₄ N ₂ O ₃

Aspect : : solide incolore

Poids moléculaire: 432,64

A une solution de 821 mg (1,63 mmol, 1,0 éq.) de N-3-isobutyrylcyclobuxidine- F 2 dans 30 ml de méthanol sont ajoutés 30 ml (30,00 mmol, 18,4 éq.) d'une solution aqueuse d'acide sulfurique 2N lentement à température ambiante. Après 3 heures d'agitation à 90°C, le milieu réactionnel est refroidi à température ambiante et évaporé sous pression réduite au plus à 25°C. La liqueur obtenue est chauffée lh30 à 70°C. Elle se colore en jaune. Le mélange réactionnel est alcalinisé par 50 ml d'une solution ammoniacale à 10% et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement lavées avec 40 ml d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide. Le produit brut est recristallisé dans l'acétate d'éthyle. Après filtration, lavages et séchage sous pression réduite, 657 mg de 5 sous forme d'un solide incolore sont obtenus avec un rendement de 94%, dont les caractéristiques spectroscopiques sont identiques à celles décrites par Herlem-Gaulier, D. et al; (1968).

PF (°C) : 242

[GC] _n = + 127° (c = 0,6 ; 25°C, CHCl ₃ )

Analyse élémentaire : calculée pour C ₂₆ H ₄₃ N ₂ O ₄ : C : 72,18 ; H : 10,25 ; N : 6,48 ; O : 11,09 mesurée : C : 71,99 ; H :10,22 ; N : 6,31 ; O : 11,28.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3018 (OH, NH) ; 1680 (C=O) ; 1615 (C-NH) ; 1095 (C- OH).

Masse (ESI) : m/z : 433,3 ([M+H], 100) ; 416,3 (10).

SMHR (ESI) calculée pour C ₂₆ H ₄₅ N ₂ O ₃ m/z = 433,3430 ; mesurée : 433,3425.

• Composé 6a : N-3-acétylcycloxobuxidine-F 6a ou

(20S)-3 -acétylamino-9,19-cyclo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-5a,9 -pregnan-lόa-ol-ll-one 6a

C ₂₈ H ₄₆ N ₂ O ₄ Aspect : poudre incolore Poids moléculaire: 474,68

A une solution de 240 mg (0,55 mmol, 1,0 éq.) de cycloxobuxidine-F 5 dans 10 ml de méthanol sont ajoutés 63 ml (0,66 mmol, 1,2 éq.) d'anhydride acétique. Après 5 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est neutralisé avec quelques gouttes d'une solution de bicarbonate de sodium à 10% (pH = 8), puis alcalinisé avec 50 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de

dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement lavées avec 30 ml d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide. Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3 puis dichlorométhane 98 / méthanol 2) pour fournir 210 mg de 6a sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 79%.

PF (°C) : 255

M _D = + 73° (c = 0,98 ; 25°C, CHCl ₃ )

Analyse élémentaire : calculée pour C ₂₈ H ₄₆ N ₂ O ₄ .0,5H ₂ O : C : 70,85 ; H : 9,77 ; N : 5,90 ; mesurée : C : 69,51; H : 9,61 ; N : 5,39

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3436 (OH, NH) ; 1656 (C=O) ; 1656 et 1513 (CONH) ; 1049 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 475,3 ([M+H], 100) ; 476,4 (15).

SMHR (ESI) calculée pour C ₂₈ H ₄₇ N ₂ O ₄ m/z = 475,3536 ; mesurée : 475,3511.

• Composé 6b : N-3-benzoylcycloxobuxidine-F 6b ou

(20S)-3 -benzoylamino-9,19-cyclo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-5a,9 -pregnan-lόa-ol-ll-one 6fc

C ₃₃ H ₄₈ N ₂ O ₄ Aspect : poudre incolore Poids moléculaire : 536,75

A une solution de 166 mg (0,38 mmol, 1,0 éq.) de cycloxobuxidine-F 5 dans 10 ml de méthanol sont ajoutés 95 mg (0,46 mmol, 1,1 éq.) d'anhydride d'acide benzoïque. Après 4 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est neutralisé avec quelques gouttes d'une solution de bicarbonate de sodium à 10% (pH = 8), puis alcalinisé avec 50 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont lavées avec 30 ml d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide. Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,8 / méthanol 0,2 puis dichlorométhane 98 / méthanol 2) pour fournir 156 mg de 6b sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 76% dont les caractéristiques spectroscopiques sont identiques à celles décrites par Herlem-Gaulier, D. et al (1968).

PF (°C) : 277

[α] _D = + 52° (c = 1,00 ; 25°C, CHCl ₃ ) Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₃ H ₄₈ N ₂ O ₄ -O ₅ SH ₂ O : C : 72,64 ; H : 9,04 ;

N :13,12 ; O : 5,13 ; mesurée : C : 72,87 ; H : 9,02 ; N : 12,97 ; O : 5,14.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3438 (OH, NH) ; 1645 (C=O) ; 1628 et 1518 (CONH) ; 1040 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 537,4 ([M+H], 100) ; 538,4 (15). SMHR (ESI) calculée pour C ₃₃ H ₄₉ N ₂ O ₄ m/z = 537,3692 ; mesurée : 537,3679.

• Composé 6c : N-3-propionylcycloxobuxidine-F 6c ou

(20S)-9,19-cyclo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14-diméthyl-20-diméthylamino-3 - propionylamino-5a,9 -pregnan-îόa-ol-îî-one 6c

C ₂₉ H ₄₈ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 488,70

A une solution de 300 mg (0,69 mmol, 1,0 éq.) de cycloxobuxidine-F 5 dans 10 ml de méthanol sont ajoutés 98 ml (0,76 mmol, 1,1 éq.) d'anhydride d'acide propionique. Après 4 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est neutralisé avec quelques gouttes d'une solution de bicarbonate de sodium à 10% (pH = 8), puis alcalinisé avec 50 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement lavées avec 30 ml d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide. Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3 / ammoniaque 0,05 puis dichlorométhane 98 / méthanol 2) pour fournir 269 mg de 6ç sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 80%.

PF (°C) : 221 Analyse élémentaire : calculée pour C ₂₉ H ₄₈ N ₂ O ₄ -O ₅ SH ₂ O : C : 70,02 ; H : 9,85 ;

N : 5,63 ; mesurée C : 70,63 ; H : 9,76 ; N : 5,21.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3434 (OH, NH) ; 1653 (C=O) ; 1653 et 1514 (CONH) ; 1049 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 489,3 ([M+H], 100) ; 295,2 (15) ; 490,3 (5). SMHR (ESI) calculée pour C ₂₉ H ₄₉ N ₂ O ₄ m/z = 489,3692 ; mesurée : 489,3655.

• Composé 6d : N-3-cyclohexanecarboxylcycloxobuxidine-F 6d ou

(20S)-3 -(cyclohexanecarboxylamino)-9,19-cyclo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a- diméthyl-20-diméthylamino-5a,9 -pregnan-lόa-ol-ll-one 6d

C ₃₃ H ₅₄ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 542,79

A une solution de 300 mg (0,69 mmol, 1,0 éq.) de cycloxobuxidine-F 5 dans 10 ml de méthanol sont ajoutés 182 mg (0,76 mmol, 1,1 éq.) d'anhydride de l'acide cyclohexane carboxylique. Après 4 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est neutralisé avec quelques gouttes d'une solution de bicarbonate de sodium à 10% (pH = 8), puis alcalinisé avec 50 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement lavées avec 30 ml d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide. Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3 puis dichlorométhane 98 / méthanol 2) pour fournir 225 mg de 6d sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 68%. PF (°C) : 293 [α] _D = + 61,9° (c = 1,09 ; 25°C, CHCl ₃ )

Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₃ H ₅₄ N ₂ O ₄ : C : 73,02 ; H : 10,03 ; N : 5,16 ; O : 11,79 ; mesurée : C : 72,76 ; H : 9,94 ; N : 5,07 ; O :11,68.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3434 (OH, NH) ; 1650 (C=O) ; 1650 et 1512 (CONH) ; 1050 (C-OH). Masse (ESI) : m/z : 543,4 ([M+H], 100) ; 544,5 (85).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₃ H ₅₅ N ₂ O ₄ m/z = 543,4162 ; mesurée : 543,4128.

• Composé 6e: (S)-N-3-secbutyrylcycloxobuxidine-F 6e ou (20S)-9,19-cyclo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-3 -

(2S-méthyïbutyrylamino)-5a,9 -pregnan-16a-ol-ll-one 6e

C ₃₁ H ₅₂ N ₂ O ₄

Aspect : solide incolore

Poids moléculaire : 516,76

A une solution de 300 mg (0,69 mmol, 1,0 éq.) de cycloxobuxidine-F 5 dans 10 ml de méthanol sont ajoutés 151 ml (0,76 mmol, 1,1 éq.) d'anhydride d'acide (S)-2- méthylbutyrique. Après 3 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est neutralisé avec quelques gouttes d'une solution de bicarbonate de sodium à 10% (pH =

8), puis alcalinisé avec 50 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec

3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement lavées avec 30 ml d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchées sur du sulfate

de sodium anhydre et évaporées sous vide. Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,5 / méthanol 0,5 puis dichlorométhane 98 / méthanol 2) pour fournir 266 mg de 6e sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 75%. PF (°C) : 262

[GC] _n = + 59,0° (c = 0,44 ; 21 °C, CHCl ₃ )

Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₁ H ₅₂ N ₂ O ₄ -O ₅ SH ₂ O : C : 70,85 ; H : 10,09 ; N :5,33 ; mesurée C : 71,45 ; H 9,88 ; N 5,23.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3434 (OH, NH) ; 1651 (C=O) ;1651 et 1511 (CONH) ; 1042 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 517,4 ([M+H], 100) ; 518,5 (75).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₁ H ₅₃ N ₂ O ₄ m/z = 517,4005 ; mesurée : 517,4024.

• Composé 6f : N-3-pivalylcycloxobuxidine-F 6f ou

(20S)-9,19-cyclo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-3 - (2,2-diméthylpropionylamino)-5a,9 -pregnan-16a-ol-ll-one 6[

C ₃₁ H ₅₂ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 516,76

A une solution de 300 mg (0,69 mmol, 1,0 éq.) de cycloxobuxidine-F 5 dans 10 ml de méthanol sont ajoutés 156 ml (0,76 mmol, 1,1 éq.) d'anhydride d'acide pivalique. Après 4 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est neutralisé avec quelques gouttes d'une solution de bicarbonate de sodium à 10% (pH = 8), puis alcalinisé avec 50 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement lavées avec 40 ml d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide. Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,5 / méthanol 0,5 puis dichlorométhane 98 / méthanol 2) pour fournir 282 mg de 6f sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 79%.

PF (°C) : 267

[α] _D = + 69,9° (c = 0,92 ; 25°C, CHCl ₃ )

Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₁ H ₅₂ N ₂ O ₄ .0,5H ₂ O : C : 70,85 ; H : 10,09 ; N 5,33 ; mesurée : C : 71,29 ; H : 9,93 ; N : 5,04.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3454 (OH, NH) ; 1637 (C=O) ; 1637 et 1514 (CONH) ; 1046 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 517,4 ([M+H], 100) ; 518,5 (75).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₁ H ₅₃ N ₂ O ₄ m/z = 517,4005 ; mesurée : 517,3986. • Composé 6g : N-3-phenylacétylcycloxobuxidine-F 6g ou

(20S)-9,19-cyclo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-3 - (phénylacétylamino)-5a,9 -pregnan-lόa-ol-ll-one 6g

C ₃₄ H ₅₀ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 550,77

A une solution de 300 mg (0,69 mmol, 1,0 éq.) de cycloxobuxidine-F 5 dans 10 ml de méthanol sont ajoutés une suspension de 194 mg (0,76 mmol, 1,1 éq.) d'anhydride de l'acide phénylacétique dans 5 ml de méthanol. Après 4 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est neutralisé avec quelques gouttes d'une solution de bicarbonate de sodium à 10% (pH = 8), puis alcalinisé avec 50 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement lavées par 30 ml d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3 puis dichlorométhane 98 / méthanol 2) pour fournir 255 mg de 6g sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 67%.

PF (°C) : 265,5 [α] _D = + 62,1° (c = 0,84 ; 25°C, CHCl ₃ )

Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₄ H ₅₀ N ₂ O ₄ : C : 74,14 ; H : 9,15 ; N : 5,09 ; O : 11,62 ; mesurée : C : 73,98 ; H : 9,12 ; N : 4,97 ; O :11,61.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3413 (OH, NH) ; 1650 (C=O) ; 1650 et 1516 (CONH) ; 1047 (C-OH). Masse (ESI) : m/z : 551,4 ([M+H], 100) ; 552,5 (90) ; 553,5 (10).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₄ H ₅₁ N ₂ O ₄ m/z = 551,3849 ; mesurée : 551,3816.

Composé 6h : N-3-secbutyrylcycloxobuxidine-F 6h ou

(20S)-9,19-cyclo-4a-bydroxymétbyl-4 ,14a-dimétbyl-20-dimétbylamino-3 (2-méthylbutyrylamino)-5a,9 -pregnan-lόa-ol-ll-one 6h _^

C ₃₁ H ₅₂ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 516,76

A une solution de 238 mg (0,55 mmol, 1,0 éq.) de cycloxobuxidine-F 5 dans 10 ml de méthanol sont ajoutés 113 mg (0,60 mmol, 1,1 éq.) d'anhydride d'acide 2- méthylbutyrique. Après 5 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est neutralisé avec quelques gouttes d'une solution de bicarbonate de sodium à 10% (pH = 8), puis alcalinisé avec 50 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,5 / méthanol 0,5 puis dichlorométhane 99 / méthanol 1) pour fournir 238 mg d'un mélange de deux diastéréoisomères (50/50) 6h sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 84%. PF (°C) : 255 Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₁ H ₅₂ N ₂ O ₄ : C : 72,05 ; H : 10,14 ; N :

5,42 ; O : 12,38 ; mesurée : C : 71,88 ; H 10,34 ; N : 5,31 ; O : 11,87.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3436 (OH, NH) ; 1699 (C=O) ; 1661 et 1508 (CONH) ; 1082 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 517,4 ([M+H], 100) ; 518,4 (70).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₁ H ₅₃ N ₂ O ₄ m/z = 517,4005 ; mesurée : 517,4001. II s'agit d'un mélange racémique de deux diastéréoisomères.

• Composé 6i : N-3-secpentyrylcycloxobuxidine-F 6i ou

(20S)-9,19-cyclo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-3 - (2-éthylbutyrylamino)-5a,9 -pregnan-îόa-ol-îî-one 6i

C ₃₂ H ₅₄ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 530,78

A une solution de 207 mg (0,48 mmol, 1,0 éq.) de cycloxobuxidine-F 5 dans 10 ml de méthanol sont ajoutés 113 mg (0,53 mmol, 1,1 éq.) d'anhydride d'acide 2- éthylbutyrique. Après 5 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est neutralisé avec quelques gouttes d'une solution de bicarbonate de sodium à 10% (pH = 8), puis alcalinisé avec 50 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide. Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,5 / méthanol

0,5 puis dichlorométhane 99 / méthanol 1) pour fournir 206 mg de 6i sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 81%.

PF (°C) : 251

Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₂ H ₅₄ N ₂ O ₄ : C 72,41 ; H 10,25 ; N 5,28 ; O 12,06 ; mesurée : C : 72,14 ; H :10,18 ;N : 5,23 ; O 11,99.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3433 (OH, NH) ; 1690 (C=O) ; 1650 et 1511 (CONH) ; 1048 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 531,3 ([M+H], 100) ; 532,3 (10). SMHR (ESI) calculée pour C ₃₂ H ₅₅ N ₂ O ₄ m/z = 531,4162 ; mesurée : 531,4163.

• Composé 7a : 10(9->l)abeo-N-3-acétylcycloxobuxi-l(10)-ènedine-F 7a ou (20S)-10(9-> l)abeo-3 -acétylamino-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-5a,9 -pregn-l(10)-èn-16a-ol-ll-one 7a

C ₂₈ H ₄₆ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire: 474,68

221 mg (0,46 mmol, 1,0 éq.) de dérivé N-3-acétylcycloxobuxidine-F 6a sont chauffés à 240°C sous 0,03 mmHg dans un four à boules. Un produit sublime en 3

heures. Le sublimât solide est un mélange du produit désiré 7a (98%) et de dihydrooxazine 8a (2%). Le sublimât est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3) pour fournir 79,4 mg de 7a sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 88 %.

PF (°C) : 253

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3435 (OH, NH) ; 1694 (C=O) ; 1654 et 1516 (CONH) ; 1043 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 475,3 ([M+H], 100) ; 476,3 (60).

SMHR (ESI) calculée pour C ₂₈ H ₄₇ N ₂ O ₄ m/z = 475,3536 ; mesurée : 475,3548.

• Composé 7b : 10(9->l)abeo-N-3-benzoylcycloxobuxi-l(10)-ènedine-F 7b ou

(20S)-10(9- > î)abeo-3 -benzoylamino-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl- 20-diméthylamino-5a,9 -pregn-l(10)-èn-16a-ol-ll-one 7b

C ₃₃ H ₄₈ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 536,75

180 mg (0,33 mmol, 1,0 éq.) de dérivé N-3-benzoylcycloxobuxidine-F 6b sont chauffés pendant 3 heures à 260°C sous 0,03 mmHg dans un four à boules. Aucun sublimât n'est obtenu. Le culot solide est un mélange du produit désiré 7b (95%) et de dihydrooxazine 8b (5%). Le culot est chromatographié sur colonne d'alumine Merck

d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3) pour fournir 126 mg de 7b sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 70 %.

PF (°C) : 289

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3435 (OH, NH) ; 1693 (C=O) ; 1644 et 1519 (CONH) ; 1042 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 537,3 ([M+H], 100) ; 538,4 (80).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₃ H ₄₉ N ₂ O ₄ m/z = 537,3692 ; mesurée : 537,3708.

• Composé 7c : 10(9->l)abeo-N-3-propionylcycloxobuxi-l(10)- ènedine-F 7c ou

(20S)-10(9-> l)abeo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-3 -propionylamino-5a,9 -pregn-î(îO)-èn-16a-ol-îî-one 7c

C ₂₉ H ₄₈ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 488,70

73,0 mg (0,15 mmol, 1,0 éq.) de dérivé N-3-propionylcycloxobuxidine-F 6ç sont chauffés à 240°C sous 0,03 mmHg dans un four à boules. Un sublimât est obtenu en 3 heures. Le sublimât solide est un mélange du produit désiré 7ç (64%) et de dihydrooxazine 8ç (36%). Le sublimât est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3) pour fournir 51,6 mg de

7ç sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 71 %.

PF (°C) : 229,5

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3433 (OH, NH) ; 1693 (C=O) ; 1653 et 1514 (CONH) ; 1044 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 489,2 ([M+H], 100) ; 490,3 (80).

SMHR (ESI) calculée pour C ₂₉ H ₄₉ N ₂ O ₄ m/z = 489,3692 ; mesurée : 489,3687.

• Composé 7d : 10(9->l)abeo-N-3- cyclohexanecarboxylcycloxobuxi- l(10)-ènedine-F 7d ou

(20S)-10(9- > l)abeo-3 -(cyclohexanecarboxyamino)-4a-hydroxyméthyl- 4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-5a,9 -pregn-l(10)-èn-16a-ol-ll-one 7d

C ₃₃ H ₅₄ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 542,79

85,0 mg (0,15 mmol, 1,0 éq.) de dérivé N-3- cyclohexanecarboxylcycloxobuxidine-F 6d sont chauffés à 260°C sous 0,03 mmHg dans un four à boules. Aucun sublimât n'est obtenu après 3 heures. Le culot est un mélange du produit désiré 7d (83%) et de dihydrooxazine 8d (17%). Le culot est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3) pour fournir 80,0 mg de 7d sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 89 %.

PF (°C) : 285

Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₃ H ₅₄ N ₂ O ₄ -O ₅ SH ₂ O : C : 71,86 ; H : 9,98 ; N : 5,08 ; mesurée : C : 72,13 ;H : 9,91 ; N 4,92.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3433 (OH, NH) ; 1693 (C=O) ; 1647 et 1512 (CONH) ; 1043 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 543,3 ([M+H], 100) ; 544,4 (70).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₃ H ₅₅ N ₂ O ₄ m/z = 543,4162 ; mesurée : 543,4158.

• Composé 7e: 10(9->l)abeo-N-3-(S)-secbutyrylcycloxobuxi-l(10)- ènedine-F 7e ou

(20S)-10(9-> l)abeo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-3 -(S-2-méthylbutyrylamino)-5a,9 -pregn-l(10)-èn-16a-ol-ll-one 7e

C ₃₁ H ₅₂ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 516,76

84,2 mg (0,16 mmol, 1,0 éq.) de dérivé N-3-(S)-secbutyrylcycloxobuxidine-F 6e sont chauffés à 240°C sous 0,03 mmHg dans un four à boules. Un sublimât est obtenu en 3 heures. Le sublimât est un mélange du produit désiré 7e (85%) et de dihydrooxazine 8e (15%). Le sublimât est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3) pour fournir 80,0 mg de 7e sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 95 %.

PF (°C) : 219

Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₁ H ₅₂ N ₂ O ₄ : C : 72,05 ; H : 10,14 ; N : 5,42 ; O :12,38 ; mesurée : C : 72,09 ; H : 10,06 ; N : 5,35 ; O : 12,32.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3433 (OH, NH) ; 1693 (C=O) ; 1649 et 1511 (CONH) ; 1043 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 517,3 ([M+H], 100) ; 518,4 (90).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₁ H ₅₃ N ₂ O ₄ m/z = 517,4005 ; mesurée : 517,3980.

• Composé 7f : 10(9->l)abeo-N-3-pivalylcycloxobuxi-l(10)-ènedine-F 7f ou

(20S)-ÎO(9-> î)abeo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-3 -(2^-diméthylpropionylamino)-5a,9 -pregn-l(10)-èn-16a-ol-ll- one 7f

C ₃₁ H ₅₂ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore Poids moléculaire : 516,76

72,2 mg (0,14 mmol, 1,0 éq.) de dérivé N-3-pivalylcycloxobuxidine-F 6f sont chauffés à 250°C sous 0,03 mmHg dans un four à boules. Un sublimât est obtenu en 3 heures. Le sublimât contient 100% du produit désiré 7f puis, est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3)

pour fournir 63,4 mg de 7f sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 88 %.

PF (°C) : 270

Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₁ H ₅₂ N ₂ O ₄ : C : 72,05 ; H : 10,14 ; N : 5,42 ; O : 12,38 ; mesurée C : 71,91 ;H : 10,16 ; N : 5,37 ; O : 12,11.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3454 (OH, NH) ; 1693 (C=O) ; 1639 et 1515 (CONH) ; 1044 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 517,3 ([M+H], 100) ; 518,4 (60).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₁ H ₅₃ N ₂ O ₄ m/z = 517,4005 ; mesurée : 517,3990.

• Composé 7g : 10(9->l)abeo-N-3-phénylacétylcycloxobuxi-l(10)- ènedine-F 7g ou

(20S)-10(9-> l)abeo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-3 -(phénylacétylamino)-5a,9 -pregn-î(îO)-èn-16a-ol-îî-one 7g

C ₃₄ H ₅₀ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 550,77

101,8 mg (0,18 mmol, 1,0 éq.) de dérivé N-3-phenylacétylcycloxobuxidine-F 6g sont chauffés à 270°C sous 0,03 mmHg dans un four à boules. Aucun sublimât n'est

obtenu après trois heures. Le culot est un mélange du produit désiré 7g (74%) et de dihydrooxazine 8g (26%). Le culot est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3) pour fournir 40,6 mg de 7g sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 55%.

PF (°C) : 261

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3411 (OH, NH) ; 1693 (C=O) ; 1648 et 1519 (CONH) ; 1044 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 551,3 ([M+H], 100) ; 552,3 (70).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₄ H ₅₁ N ₂ O ₄ m/z = 551,3817 ; mesurée : 551,3849.

• Composé 7h : 10(9->l)abeo-N-3-secbutyrylcycloxobuxi-l(10)- ènedine-F 7h ou

(20S)-10(9-> l)abeo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-3 -(2-méthylbutyrylamino)-5a,9 -pregn-î(îO)-èn-16a-ol-îî-one 7h

C ₃₁ H ₅₂ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 516,76

40,0 mg (0,07 mmol, 1,0 éq.) de dérivé N-3-secbutyrylcycloxobuxidine-F 7h sont chauffés à 250°C sous 0,08 mmHg dans un four à boules. Un sublimât est obtenu

en 3 heures. Le sublimât est un mélange du produit désiré 7h (80%) et de dihydrooxazine 8h (20%). Le sublimât est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99 / méthanol 1) pour fournir 12,0 mg de 7h sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 30%.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3433 (OH, NH) ; 1693 (C=O) ; 1650 et 1511 (CONH) ; 1012 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 517,3 ([M+H], 100) ; 518,4 (40) ; 499,4 (5).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₁ H ₅₃ N ₂ O ₄ m/z = 517,4005 ; mesurée : 517,4011.

Il s'agit d'un mélange racémique de deux diastéréoisomères.

• Composé 7i : 10(9->l)abeo-N-3-secpentyrylcycloxobuxi-l(10)- ènedine-F 7i ou

(20S)-10(9-> l)abeo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-3 -(2-éthylbutyrylamino)-5a,9 -pregn-î(îO)-èn-16a-ol-îî-one 7i

B\

C ₃₂ H ₅₄ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 530,78

40,0 mg (0,08 mmol, 1,0 éq.) de dérivé N-3-secpentyrylcycloxobuxidine-F 7i sont chauffés à 250°C sous 0,08 mmHg dans un four à boules. Un sublimât est obtenu en 3 heures. Le sublimât est un mélange du produit désiré 7i (90%) et de dihydrooxazine 8i (10%). Le sublimât est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III

(éluant : dichlorométhane 99 / méthanol 1) pour fournir 12,0 mg de 7i sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone avec un rendement de 31%.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3433 (OH, NH) ; 1693 (C=O) ; 1649 et 1510 (CONH) ; 1042 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 531,3 ([M+H], 100) ; 532,4 (50).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₂ H ₅₅ N ₂ O ₄ m/z = 531,4162 ; mesurée : 531,4173.

• Composé 8a : (20S)-10(9- > l)abeo-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-(2'-méthyl-4',4'-dihydro[3 ',r]oxazine)-5a,9 -pregn-l(10)-èn-16a-ol- 11-one 8a

C ₂₈ H ₄₄ N ₂ O ₃

Aspect : poudre jaune claire Poids moléculaire : 456,66

171 mg (0,36 mmol, 1,0 éq.) de dérivé N-3-acétylcycloxobuxidine-F 6a sont dissous dans le minimum de dichlorométhane (2 ml) puis sont ajoutés 1059 mg (1,80 mmol, 5,0 éq.) d'une solution d'hydroxyde de tétraéthylammonium à 25 % dans le méthanol. La solution se colore en jaune. Les solvants sont évaporés sous pression réduite. Le solide rouge foncé est séché puis chauffé à 240°C sous 0,03 mmHg dans un four à boules. Un sublimât est obtenu en 3 heures. Le culot a fondu et a jauni. Le sublimât est recristallisé dans l'acétone et 125 mg de 8a sous forme d'une poudre jaune claire sont isolés avec un rendement de 76 %. PF (°C) : 284 Analyse élémentaire : calculée pour C ₂₈ H ₄₄ N ₂ O ₃ IC : 73,64 ; H : 9,71 ; N :

6,13 ; mesurée C :73,25 ;H : 9,56 ; N 5,98.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3331 (OH, NH) ; 1694 (C=O) ; 1672 (C=N) ; 1039 (C-

OH).

Masse (ESI) : m/z : 457,4 ([M+H], 100) ; 458,4 (5).

SMHR (ESI) calculée pour C ₂₈ H ₄₅ N ₂ O ₃ m/z = 457,3430 ; mesurée : 457,3470.

• Composé 8b : (20S)-10(9- > l)abeo-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-(2'-phényl-4\4'-dihydro[3 ',r]oxazine)-5a,9 -pregn-l(10)-èn-16a-ol- 11-one 8b

Aspect : solide jaune clair

Poids moléculaire : 518,73

118 mg (0,22 mmol, 1,0 éq.) de dérivé N-3-benzoylcycloxobuxidine-F 6b sont dissous dans le minimum de dichlorométhane (2 ml)sont ajoutés 648 mg (1,10 mmol, 5,0 éq.) d'une solution d'hydroxyde de tétraéthylammonium à 25 % dans le méthanol. La solution est incolore. Les solvants sont évaporés sous pression réduite. Le solide rouge foncé est séché puis chauffé à 275°C sous 0,03 mmHg dans un four à boules. Aucun produit ne sublime en 3 heures. Le culot a fondu et a jauni. Le produit contenu dans le culot est recristallisé dans l'acétone et 97 mg de 8b sous forme d'une poudre jaune claire sont isolés avec un rendement de 85 %.

Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₃ H ₄₆ N ₂ O ₃ : C : 73,64 ; H : 9,71 ; N : 6,13 ; mesurée : C : 73,25 ; H : 9,56 ; N : 5,98.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3376 (OH, NH) ; 1694 (C=O) ; 1650 (C=N) ; 1027 (C-

OH).

Masse (ESI) : m/z : 519,4 ([M+H], 100) ; 520,4 (10).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₃ H ₄₇ N ₂ O ₃ m/z = 519,3587 ; mesurée : 519,3610.

• Composé 8c : (20S)-10(9- > l)abeo-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-(2'-éthyl-4\4'-dihydro[3 ',r]oxazine)-5a,9 -pregn-l(10)-èn-16a-ol- 11-one 8c

C ₂₉ H ₄₆ N ₂ O ₃

Aspect : solide jaune clair Poids moléculaire : 470,69

83 mg (0,17 mmol, 1,0 éq.) de N-3-propionylcycloxobuxidine-F 6ç sont chauffés à 240°C sous 0,03 mmHg dans un four à boules. Un sublimât est obtenu en 3 heures. Le sublimât est constitué d'un mélange de produit résultant de l'ouverture du cyclopropane 7ç (64%) et de dihydrooxazine 8ç (36%). À une solution du sublimât dans 2 ml de dichlorométhane sont ajoutés 500 mg (0,85 mmol, 5,0 éq.) d'une solution d'hydroxyde de tétraéthylammonium à 25 % dans le méthanol. Après évaporation sous vide, le résidu rouge chauffé à 240°C sous 0,03 mmHg pendant 3 heures fournit 75 mg de 8ç sous forme d'un sublimât cristallisé jaune clair avec un rendement de 94%.

PF (°C) : 282

Analyse élémentaire : calculée pour C ₂₉ H ₄₆ N ₂ O ₃ -O^SH ₂ O : C : 73,34 ; H

9,79 ; N 5,90 ; mesurée : C : 73,08 ;H : 9,74 ; N : 5,91.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3363 (OH, NH) ; 1694 (C=O) ; 1667 (C=N) ; 1040 (C-

OH).

Masse (ESI) : m/z : 471,3 ([M+H], 100) ; 472,4 (70).

SMHR (ESI) calculée pour C ₂₉ H ₄₇ N ₂ O ₃ m/z = 471,3587 ; mesurée : 471,3577.

• Composé 8d : (20S)-10(9- > l)abeo-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-(2'-cyclohexyl-4',4'-dihydro[3 ',î']oxazine)-5a,9 -pregn-î(10)-èn- 16a-ol-ll-one 8d

Aspect : solide jaune clair Poids moléculaire : 524,78

225 mg (0,41 mmol, 1,0 éq.) de N-3-cyclohexanecarboxylcycloxobuxidine-F 6d sont chauffés à 260°C sous 0,03 mmHg dans un four à boules. Aucun sublimât n'est obtenu en 3 heures. Le produit contenu dans le culot est constitué d'un mélange de produit résultant de l'ouverture du cyclopropane 7d (83%) et de dihydrooxazine 8d (17). À une solution du résidu composé du mélange précédemment obtenu dans 2 ml de dichlorométhane sont ajoutés 1085 mg (1,84 mmol, 5,0 éq.) d'une solution d'hydroxyde de tétraéthylammonium à 25 % dans le méthanol. Après évaporation sous vide, le résidu rouge chauffé à 260°C sous 0,03 mmHg pendant 3 heures fournit 150 mg de 8d sous forme d'un solide jaune clair dans le culot avec un rendement de 69%.

Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₃ H ₅₂ N ₂ O ₃ : C : 75,53 ;H : 9,91 ; N : 5,14 ; mesurée : C :75,74 ; H : 9,91 ; N : 5,14.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3433 (OH, NH) ; 1693 (C=O) ; 1659 (C=N) ; 1040 (C-

OH).

Masse (ESI) : m/z : 525,3 ([M+H], 100) ; 526,4 (40) ; 543,4 (50).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₃ H ₅₃ N ₂ O ₃ m/z = 525,4056 ; mesurée : 525,4041.

• Composé 8e : (20S)-10(9- > l)abeo-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-(2'-(S-l-méthylpropyl)-4\4'-dihydro[3 ',r]oxazine)-5a,9 -pregn- Î(10)-èn-î6a-ol-îî-one 8e

C ₃₁ H ₅₀ N ₂ O ₃

Aspect : solide jaune clair Poids moléculaire : 498,74

63 mg (0,12 mmol, 1,0 éq.) de N-3-(S)-secbutyrylcycloxobuxidine-F 6e sont chauffés à 253°C sous 0,04 mmHg dans un four à boules. Un sublimât est obtenu en 3 heures. Le culot est constitué de produit résultant de l'ouverture du cyclopropane 7e tandis que le sublimât est un mélange de ce produit 7e (85%) et de dihydrooxazine 8e (15%). À une solution composée du culot et du sublimât précédemment obtenus dans 2 ml de dichlorométhane sont ajoutés 364 mg (0,60 mmol, 5,0 éq.) d'une solution d'hydroxyde de tétraéthylammonium à 25 % dans le méthanol. Après évaporation sous vide, le résidu rouge chauffé à 253°C sous 0,04 mmHg pendant 3 heures fournit 49 mg de 8e sous forme d'un solide jaune clair sublimé avec un rendement de 80%.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3433 (OH, NH) ; 1694 (C=O) ; 1659 (C=N) ; 1040 (C- OH).

Masse (ESI) : m/z : 499,4 ([M+H], 100) ; 500,4 (50).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₁ H ₅₁ N ₂ O ₃ m/z = 499,3900 ; mesurée : 499,3917.

• Composé 8f : (20S)-10(9- > l)abeo-4 ,14a-diméthyl-20- dimétbylamino-(2'-(2,2-dimétbylétbyl)-4',4'-dibydro[3',r] oxazine)-5a,9 -pregn- l(10)-èn-16a-ol-ll-one 8[

C ₃₁ H ₅₀ N ₂ O ₃

Aspect : solide jaune clair Poids moléculaire : 498,74

73 mg (0,14 mmol, 1,0 éq.) de N-3-pivalylcycloxobuxidine-F 6f sont chauffés à 250°C sous 0,03 mmHg dans un four à boules. Aucun sublimât n'est obtenu. Le culot est constitué 100% de produit d'ouverture du cyclopropane 7f. À une solution du sublimât dans 2 ml de dichlorométhane sont ajoutés 416 mg (0,70 mmol, 5,0 éq.) d'une solution d'hydroxyde de tétraéthylammonium à 25 % dans le méthanol Après évaporation sous vide, le résidu rouge chauffé à 250°C sous 0,03 mmHg pendant 3 heures fournit 60,4 mg de 8f sous forme d'un solide jaune clair sublimé avec un rendement de 85%.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3373 (OH, NH) ; 1693 (C=O) ; 1655 (C=N) ; 1015 (C- OH).

Masse (ESI) : m/z : 499,4 ([M+H], 100) ; 500,4 (40).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₁ H ₅₁ N ₂ O ₃ m/z = 499,3900 ; mesurée : 499,3868.

• Composé 8g : (20S)-10(9- > l)abeo-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-(2'-(l-benzyl)-4',4'-dihydro[3 ',l']oxazine)-5a ,9 -pregn-l(10)-èn- 16a-ol-ll-one 8g

C ₃₄ H ₄₈ N ₂ O ₃

Aspect : solide jaune clair Poids moléculaire : 532,76

240 mg (0,43 mmol, 1,0 éq.) de N-3-phénylacétylcycloxobuxidine-F 6g sont chauffés à 260°C sous 0,03 mmHg dans un four à boules. Aucun sublimât n'est obtenu en 3 heures.Le produit contenu dans le culot est constitué d'un mélange de produit résultant de l'ouverture du cyclopropane 7g (74%) et de dihydrooxazine 8g (26%). À une solution composée du mélange précédemment obtenu dans 2 ml de dichlorométhane sont ajoutés 926 mg (1,57 mmol, 5,0 éq.) d'une solution d'hydroxyde de tétraéthylammonium à 25 % dans le méthanol. Après évaporation sous vide, le résidu rouge chauffé à 260°C sous 0,03 mmHg pendant 3 heures fournit 125 mg de 8g sous forme d'un solide jaune clair dans le culot avec un rendement de 55%. Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₄ H ₄₈ N ₂ O ₃ 1,5H ₂ O : C : 72,98 ; H : 9,12 ;

N : 5,00 ; mesurée C : 73,11 ; H : 8,98 ; N : 4,74.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3411 (OH, NH) ; 1694 (C=O) ; 1665 (C=N) ; 1039 (C- OH).

Masse (ESI) : m/z : 533,3 ([M+H], 100) ; 534,4 (50). SMHR (ESI) calculée pour C ₃₄ H ₄₉ N ₂ O ₃ m/z = 533,3743 ; mesurée : 533,3747.

• Composé 8h : (20S)-10(9-> l)abeo-4 ,14a-dimétbyl-20- diméthylamino-(2'-(l-méthylpropyl)-4',4' dihydro[3',l']oxazine)-5a,9 -pregn-l(lθ)- èn-16a-ol-ll-one Sh

C ₃₁ Hs ₀ N ₂ O ₃

Aspect : solide jaune clair Poids moléculaire : 498,74

105 mg (0,20 mmol, 1,0 éq.) de N-3-secbutyrylcycloxobuxidine-F 6f sont chauffés à 257°C sous 0,10 mmHg dans un four à boules. Un sublimât est obtenu en 3 heures. Le sublimât est constitué d'un mélange du produit désiré 7f (85%) et de dihydroxazine 8f (15%). À une solution du résidu (culot et sublimât) dans 2 ml de dichlorométhane sont ajoutés 597 mg (1,01 mmol, 5,0 éq.) d'une solution d'hydroxyde de tétraéthylammonium à 25 % dans le méthanol. Après évaporation sous vide, le résidu rouge chauffé à 260°C sous 0,1 mmHg pendant 5 heures fournit 30,0 mg d'un mélange de deux diastéréoisomères (50/50) 8f sous forme d'un solide jaune clair sublimé avec un rendement de 30%.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3361 (OH) ; 1695 (C=O) ; 1651 (C=N) ; 1097 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 499,3 ([M+H], 100) ; 500,4 (20) ; 559,4 (40) ; 250,2 (20).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₁ H ₅₁ N ₂ O ₃ m/z = 499,3900 ; mesurée : 499,3900.

Il s'agit d'un mélange racémique de deux diastéréoisomères.

• Composé 8i : (20S)-10(9-> l)abeo-4 ,14a-dimétbyl-20- dimétbylamino-(2'-(l-étbylpropyl)-4',4'-dibydro[3 ',l']oxazine)-5a,9 -pregn-l(10)-èn- 16a-ol-ll-one Si

Aspect : solide jaune clair Poids moléculaire : 512,76

85 mg (0,14 mmol, 1,0 éq.) de N-3-secpentyrylcycloxobuxidine-F 6i sont chauffés à 250°C sous 0,08 mmHg dans un four à boules. Le produit de départ sublime partiellement en 3 heures. Le sublimât est constitué d'un mélange du produit d'ouverture du cyclopropane 7i (90%) et de dihydrooxazine 8i (10%). À une solution du résidu (culot et sublimât) dans 2 ml de dichlorométhane sont ajoutés 472 mg (0,80 mmol, 5,0 éq.) d'une solution dliydroxyde de tétraéthylammonium à 25 % dans le méthanol Après évaporation sous vide, le résidu rouge chauffé à 260°C sous 0,1 mmHg pendant 3 heures fournit 40,0 mg de 8i sous forme d'un solide jaune clair sublimé avec un rendement de 49%.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3287 (OH) ; 1694 (C=O) ; 1658 (C=N) ; 1167 (C-OH). Masse (ESI) : m/z : 513,3 ([M+H], 100) ; 514,3 (80) ; 531,4 (10) ; 257,2 (20) ; 257,7 (10).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₂ H ₅₃ N ₂ O ₃ m/z = 513,4056 ; mesurée : 513,4045. 4.2. Synthèses des composés 9. U et 12 (tétrahydrooxazinesi

Les l', 2', 4', 4'-tétrahydrooxa2:ines 9 et 10 ont été préparées de façon originale. La condensation de l'isobutyraldéhyde avec la cycloxobuxidine-F 5 dans le 1,4 — dioxanne à 50°C conduit à la formation de 9 avec un rendement de 30% (Schéma 4).

Schéma 4

Le composé 11 est obtenu en deux étapes à partir de l'amide 3. En milieu acide, en présence d'acide sulfurique 2N et de méthanol, le groupement isobutyraldéhyde migre sur l'alcool primaire pour conduire à l'ester correspondant 10 qui est ensuite hydrolyse (Schéma 5).

Schéma 5

• Composé 9 : (20S)-9,19-cyclo-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino- (2' -isopropyl-1 ',2',4',4'-tétrahydro[3 \l']oxazine)-5a,9 -pregnan-16a-ol-ll-one 9

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire : 486,73

A une suspension de 87 mg (0,20 mmol, 1,0 éq.) de dérivé cycloxobuxidine-F 5 dans 15 ml de 1,4-dioxanne sont ajoutés 37 ml (0,40 mmol, 2,0 éq.) d'isobutyraldéhyde.

Après 12 heures d'agitation à 50°C, le milieu réactionnel est refroidi à température ambiante et évaporé sous pression réduite. La liqueur obtenue est alcalinisée avec 30 ml d'une solution de bicarbonate de sodium à 10% et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.Le produit brut (105 mg) est trituré dans l'éther diéthylique. Après filtration, lavages et séchage sous pression réduite, 28 mg de 9 sous forme d'une poudre incolore sont obtenus avec un rendement de 30%. IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3319 (OH, NH) ; 1663 (C=O) ; 1096 (C-OH).

Masse (ESI) : m/z : 487,3 ([M+H], 100) ; 488,4 (30).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₀ H ₅₁ N ₂ O ₃ m/z = 487,3900 ; mesurée : 487,3897.

• Composé 11 : 10(9->l)abeocycloxobuxi-l(10)-ènedine-F 11 ou (20S)-10(9-> l)abeo-3 -amino-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-5a,9 -pregn-l(10)-èn-16a-ol-ll-one 11

C ₂₆ H ₄₄ N ₂ O ₃

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire: 432,64

250 mg (0,50 mmol, 1,0 éq.) de N-3-isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 sont chauffés à 245°C sous 0,1 mmHg dans un four à boules. Un sublimât est obtenu en 3 heures. Le sublimât est un mélange de produit d'ouverture du cyclopropane 3 (18%) et

de dihydrooxazine 1 (82%). Le culot restant est constitué de produit d'ouverture du cyclopropane 3.À une solution de 250 mg du résidu composé du culot et du sublimât précédemment obtenus dans 15 ml de méthanol sont ajoutés 36 ml d'une solution aqueuse d'acide sulfurique 2N au goutte à goutte, à température ambiante. Après 2 heures d'agitation à 90°C, le milieu réactionnel est refroidi à température ambiante et évaporé sous pression réduite au plus à 25°C. La liqueur obtenue est chauffée Ih à 80°C. Elle se colore en jaune.Le mélange réactionnel est alcalinisé avec 40 ml d'une solution ammoniacale à 10% et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide. Le produit brut est trituré dans l'acétate d'éthyle. Après filtration, lavages et séchage sous pression réduite, 128 mg de 11 sous forme d'un solide incolore sont obtenus avec un rendement de 60%, dont les caractéristiques spectroscopiques sont identiques à celles décrites par Herlem-Gaulier, D. et al ; (1968).

PF (°C) : 266 Analyse élémentaire : calculée pour C ₂₆ H ₄₄ N ₂ O ₃ -O ₅ SH ₂ O : C : 70,71 ; H :

10,27 ; N : 6,34 ; O : 12,68 ; mesurée : C : 70,67 ; H :10,31 ; N : 6,19 ; O :12,08.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3383 (OH, NH) ; 1693 (C=O) ; 1602 (C-NH) ; 1038 (C- OH).

Masse (ESI) : m/z : 433,3 ([M+H], 100). SMHR (ESI) calculée pour C ₂₆ H ₄₅ N ₂ O ₃ m/z = 433,3430 ; mesurée : 433,3415.

• Composé 12 : (20S)-10(9- > l)abeo-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-(2' -isopropyl-1 \2\4\4'-tétrahydro[3 ',r]oxazine)-5a,9 -pregn-l(lθ)- èn-16a-ol-ll-one 12

Aspect : solide jaune clair Poids moléculaire : 486,73

A une suspension de 85 mg (0,20 mmol, 1,0 éq.) de dérivé 10(9- >l)abeocycloxobuxi-l(10)-ènedine-F 11 dans 10 ml de 1,4-dioxanne sont ajoutés 37 ml (0,40 mmol, 2,0 éq.) d'isobutyraldéhyde. Après 12 heures d'agitation à 50°C, le milieu réactionnel est refroidi à température ambiante et évaporé sous pression réduite. La liqueur obtenue est alcalinisée avec 40 ml d'une solution de bicarbonate de sodium à 10% et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.Le produit brut (94 mg) est trituré dans l'éther diéthylique. Après filtration, lavages et séchage sous pression réduite, 40 mg de 12 sous forme d'une poudre incolore sont obtenus avec un rendement de 42%. dont les caractéristiques spectroscopiques sont identiques à celles décrites par Herlem-Gaulier, D. et al; (1968). PF (°C) : 253 Analyse élémentaire : calculée pour C ₃₀ H ₅₀ N ₂ O ₃ : C : 74,03 ; H :10,35 ; N :

5,76 ; O : 9,86 ; mesurée :C : 73,38 ; H :10,54 ; N : 5,63 ;O : 9,93.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3442 (OH, NH) ; 1693 (C=O) ; 1044 (C-OH). Masse (ESI) : m/z : 487,4 ([M+H], 100).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₀ H ₅₁ N ₂ O ₃ m/z = 487,3900 ; mesurée : 487,3909. Exemple 5 : Synthèse des composés 13 à 32.

Synthèse des composés possédant une fonction modifiée en 29 :

Des composés possédant une fonction imine ou ester en position 29 ont été préparés à partir de l'alcool 2.

Le composé 2 en présence de bromure de benzyle conduit au composé 27 monobenzylé en position 29. Les composés 13 et 17 monoestérifiés sur la fonction alcool en 16 ont été obtenus par action de l'anhydride acétique ou pivalique sur le composé 2. La fonction alcool primaire des composés 13 et 17 est oxydée en aldéhyde correspondant 14 et 18. Ces aldéhydes conduisent aux imines 16 et 19 par réaction avec la benzylamine. On notera que les deux fonctions alcools primaire et secondaire du composé 2 sont estérifiées par action du chlorure de pivalyle pour former le composé 20 (Schéma 6).

(64%)

16Fk = COCH ₃ (90%)sεns purification 19 Fk = COGiH ₉ i purification

S ché ma 6

La fonction alcool primaire des esters 13 et 17 a été transformée en sulfonate par action du chlorure de tosyle ou de chlorure de methanesulfonyle pour former les produits 22 à 25 après protection préalable de la fonction aminé tertiaire en position 20 sous forme de sel par réaction avec l'acide p-toluènesulfonique (Schéma 7).

30miti

= PhCH ₃ (44%) PhCH ₃ (54%) = CH ₃ (13%) CH ₃ (36%)

Schéma 7

Réduction de la cétone en 11.

La fonction cétone du composé 5 a été réduite de façon diastéréosélective par action de IiAlH ₄ pour former l'acool 28 (Schéma 8).

S ché ma 8

Synthèse de la Nor-N-isobutyrylcyclobuxidine-F2 30.

Le composé 30 a été préparé en deux étapes à partir de la N- isobutyrylcycloxobuxidine-F 2. L'atome d'azote de 2 est oxydé en N-oxyde par action de l'acide p-chloroperbenzoique pour conduire avec un rendement de 79% au composé 29. Ce composé est ensuite soumis à une réaction de déméthylation non classsique en présence de sels de fer pour conduire au composé déméthylé 30 avec un rendement de 76% (Schéma 9) .

S ché ma 9

Synthèse d'un isomère de 1

La synthèse d'un composé isomère de 1 dans lequel une fonction cétone OC, β- éthylènique est présente a été réalisée en deux étapes. La première étape est une réaction d'ouverture du cyclopropane en présence d'un acide de lewis . La seconde étape consiste en la formation du cycle dihydrooxazine. L'énone 31 ainsi obtenue est ensuite chauffée à

haute température en présence d'hydroxyde de triéthylammonium pour conduire au composé pentacyclique 32.

5 eq. mmHg

Schéma 10

• Composé 13 : (20S)-16a -acétyl-3 -isobutyrylamino-9,19-cyclo-4a- hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-5a,9 -pregnan-11-one 13

C ₃₂ H ₅₂ N ₂ O ₅

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire: 544,77

À une solution de 1007 mg (2,0 mmol, 1,0 éq.) de N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 dans 100 ml de dichlorométhane et 30 ml de pyridine sont ajoutés 568 μl (6,0 mmol, 3,0 éq.) d'anhydride acétique. La solution est jaune claire. Après 2 jours d'agitation à température ambiante, le mélange est co-évaporé en présence de 1,2- dichloroéthane.

Le résidu, ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant : dichlorométhane 9 / méthanol 1) pour fournir 820 mg de 13_ sous forme d'une poudre incolore après recristallisation dans l'acétone avec un rendement de 75%.

PF (°C) : 312 Analyse élémentaire : pour C ₃₂ H ₅₂ N ₂ O ₅

Calculée pour C ₃₂ H ₅₂ N ₂ O ₅ % C 70,55 H 9,62 N 5,14

O 14,68

Trouvée % C 70,64 H 9,84 N 4,89 O

14,48 IR (diamant) Ï…(cm ⁴ ) : 3276 (OH, NH) ; 1729 (C=O ester) et 1667 (C=O) ; 1632 et 1555 (CONH) ; 1044 (C-OH). Masse

(ESI) : m/z : 545,4 ([M+H], 100) ; 546,4 (5) ; 503,4 (60). SMHR (ESI) calculée pour C ₃₂ H ₅₃ N ₂ O ₅ m/z = 545,3954 ; trouvée : 545,3960.

• Composé 14 : (20S)-16a-acétyl-3 -isobutyrylamino-9,19-cyclo-4a-formyl- 4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-5a,9 -pregnan-11-one 14

C ₃₂ H ₅₀ N ₂ O ₅

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire: 542,75

À une solution de 200 mg (0,36 mmol, 1,0 éq.) de 16-O-acétyl-N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F i3 dans 20 ml de dichlorométhane sont ajoutés 209 mg

(0,47 mmol, 1,3 éq.) de periodinane de Dess-Martin. La solution se trouble et devient rosé. Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 40 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (éluant : dichlorométhane 95 / méthanol 5) pour fournir 127 mg de IA sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 64%.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3497 (OH, NH) ; 2773 (CHO) ; 1728 (C=O) ; 1656 et 1517 (CONH) ;

1096 (C-OH).

Masse

(ESI) : m/z : 543,4 ([M+H], 100) ; 501,4 (5).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₂ H ₅₁ N ₂ O ₅ m/z = 543,3798 ; trouvée : 543,3784. • Composé 16 : (20S)-16a-acétyl-3 -isobutyrylamino-9,19-cyclo-4a- benzyliminométhyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-5a,9, -pregnan-11-one 16

C ₃₉ H ₅₇ N ₃ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire: 631,89

Sous argon, à une suspension de 60 mg (0,11 mmol, 1,0 éq.) d'aldéhyde i4 dans

2 ml de dichlorométhane sont ajoutés 50 mg de sulfate de magnésium anhydre et 12 μl

(0,11 mmol, 1,0 éq.) de benzylamine. Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est filtré puis évaporé sous vide pour fournir 65 mg de i6 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 92%.

IR (diamant) Ï…(cm ⁴ ) : 2939 (NH, C=N) ; 1730 (C=O ester) ; 1659 (C=O, CONH, C=C et C=N) ; 1532 (CONH) ; 1245 (C=C).

Masse (ESI) : m/z : 632,4 ([M+H], 50) ; 633,5 (5) ; 590,5 (10) ; 545,3 (100) ; 546,4

(50) ; 503,3 ( 80) ; 504,4 (10).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₉ H ₅₈ N ₃ O ₄ m/z = 632,4427 ; trouvée : 632,4443.

• Composé 17 : (20S)-16a -pivalyl-3 -acétylamino-9,19-cyclo-4a- hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-5a,9 -pregnan-11-one 17

C ₃₅ H ₅₈ N ₂ O ₅

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire: 586,85

A une solution de 400 mg (0,80 mmol, 1,0 éq.) de N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 dans 2,0 ml de pyridine sont ajoutés 0,48 ml (2,40 mmol, 3,0 éq.) d'anhydride pivalique. La solution est jaune claire. Après 5 heures d'agitation à 90°C, le mélange est co-évaporé en présence de 1,2-dichloroéthane.

Le résidu, ainsi obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (éluant : dichlorométhane 9 / méthanol 1) pour fournir 400 mg de Î7_ sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 85%.

IR (diamant) Ï…(cm ⁴ ) : 3434, 2972 (OH, NH) ; 1711 (C=O ester) ; 1655 et 1514 (C=O et

CONH) ; 1175 (C-OH).

Masse

(ESI) : m/z : 587,5 ([M+H], 100) ; 588,4 (5).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₅ H ₅₉ N ₂ O ₅ m/z = 587,4424 ; trouvée : 587,4417. • Composé 18 : (20S)-16a-pivalyl-3 -isobutyrylamino-9,19-cyclo-4a- formyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-5a,9 -pregnan-11-one 18

Aspect : poudre incolore Poids moléculaire: 584,83

A une solution de 74 mg (0,12 mmol, 1,0 éq.) de 16-O-pivalyl-N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F Î7_ dans 5 ml de dichlorométhane sont ajoutés 72 mg (0,16 mmol, 1,3 éq.) de periodinane de Dess-Martin. La solution se trouble et devient rosé.

Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 40 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (éluant : dichlorométhane 95 / méthanol 5) pour fournir 44 mg de i8 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 62%.

IR (diamant) Ï…(cm ⁴ ) : 2966 (NH, CHO) ; 1720 (C=O ester) ; 1665 et 1528 (C=O et CONH).

Masse

(ESI) : m/z : 585,4 ([M+H], 100) ; 586,4 (45).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₅ H ₅₇ N ₂ O ₅ m/z = 585,4267 ; trouvée : 585,4281. • Composé 19 : (20S)-16a-pivalyl-3 -isobutyrylamino-9,19-cyclo-4a- benzyliminométhyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-5a,9 -pregnan-11-one 19

C ₄₂ H ₆₃ N ₃ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire: 673,97

Sous argon, à une suspension de 113 mg (0,19 mmol, 1,0 éq.) d'aldéhyde i8 dans 3 ml de dichlorométhane sont ajoutés 94 mg de sulfate de magnésium anhydre et 21 μl (0,19 mmol, 1,0 éq.) de benzylamine. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est filtré puis évaporé sous vide pour fournir 119 mg de i9 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 92%.

IR (diamant) Ï…(cm ⁴ ) : 2966 (NH) ; 1720 (C=O ester) ; 1662 et 1532 (C=O et CONH) ; 1156 (C=Q.

Masse

(ESI) : m/z : 674,4 ([M+H], 100) ; 675,5 (10).

SMHR (ESI) calculée pour C ₄₂ H ₆₄ N ₃ O ₄ m/z = 674,4897 ; trouvée : 674,4885. • Composé 20 : (20S)-16a -pivalyl-3 -isobutyrylamino-9,19-cyclo-4a- pivalylméthyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-5a,9 -pregnan-11-one 20

C ₄₀ H ₆₆ N ₂ O ₆

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire: 670,96

A une solution de 400 mg (0,80 mmol, 1,0 éq.) de N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 dans 2,0 ml de pyridine sont ajoutés, au goutte à goutte, 0,3 ml (2,40 mmol, 3,0 éq.) de chlorure de pivalyle à température ambiante. La réaction est exothermique. La solution se trouble puis devient jaune claire. Le précipité formé se redissout en 30 minutes. Après 1 heure d'agitation à température ambiante, le mélange est co-évaporé en présence de 1,2-dichloroéthane.

Le résidu, ainsi obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (éluant : dichlorométhane 9 / méthanol 1) pour fournir 240,5 mg de 20 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 45%.

IR (diamant) Ï…(cm ⁴ ) : 3440, 2974 (OH, NH) ; 1715 (C=O ester) ; 1668 et 1507 (C=O et CONH) ; 1171 (C-OH).

Masse

(ESI) : m/z : 671,5 ([M+H], 100) ; 672,5 (5).

SMHR (ESI) calculée pour C ₄₀ H ₆₇ N ₂ O ₆ m/z = 671,4999 ; trouvée : 671,4985 • Composé 21 : Tosylate du (20S)-16a -acétyl-3 -isobutyrylamino-9,19- cyclo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylhydrogénoamino-5a,9 - pregnan-11-one 21

C ₃₉ H ₆₀ N ₂ O ₅ S

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire: 716,97

À une solution de 20 mg (0,04 mmol, 1,0 éq.) de 16-O-acétyl-N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 dans 2,0 ml de méthanol sont ajoutés 7 mg (0,04 mmol, 1,0 éq.) d'acide p-toluènesulfonique, en présence d'une pointe de spatule de sulfate de sodium anhydre, à température ambiante. Après 30 minutes d'agitation à température ambiante, la suspension est filtrée et évaporée sous pression réduite, pour fournir 26 mg de 2i sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 99%. IR (diamant) Ï…(cm ⁴ ) : 3492, 2931 (OH, NH) ; 1732 (C=O) ; 1642 et 1546 (CONH) ; 1120 (C-OH) ; 1381 et 1170 (S=O) ; 1032 (C-O) ; 816 (S-O).

Masse

(ESI) : m/z : 545,4 ([M+H], 100) ; 546,4 (5) ; 503,4 (50) ; 413,3 (10). SMHR (ESI) calculée pour C ₃₂ H ₅₃ N ₂ O ₅ + m/z = 545,3954 ; trouvée : 545,3939. • Composé 22 : (20S)-16a-pivalyl-3 -isobutyrylamino-9,19-cyclo-4a- tosylméthyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-5a,9 -pregnan-îî-one 22

C ₄₂ H ₆₄ N ₂ O ₇ S

Aspect : poudre jaune

Poids moléculaire: 741,03

A une solution de 100 mg (0,17 mmol, 1,0 éq.) de 16-O-pivalyl-N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F Î7_ et de 32 mg (0,17 mmol, 1,0 éq.) d'acide p- toluènesulfonique dans 3 ml de méthanol sont ajoutés une spatule de sulfate de sodium anhydre. La suspension est agitée 30 minutes, puis est filtrée et évaporée sous vide.

À une solution du sel précédemment obtenu dans 3 ml de pyridine sont ajoutés

99 mg (0,52 mmol, 3,0 éq.) de chlorure de tosyle. La solution se colore en jaune citron.

Après 5 heures d'agitation à 90°C, la solution est évaporée sous vide en présence de 1 ,2- dichloroéthane. Le résidu est repris avec 30 ml de dichlorométhane puis lavé avec 30 ml d'une solution d'hydrogénocarbonate de sodium à 10% (pH = 8) et extrait avec 3x30 ml

de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur plaque de silice préparative (éluant : dichlorométhane 9 / méthanol 1) pour fournir 55 mg de 22 _^ sous forme d'une poudre jaune avec un rendement de 44%.

• Composé 23 : (20S)-16a -acétyl-3 -isobutyrylamino-9,19-cyclo-4a- hydroxytosylméthyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-5a,9 -pregnan-îî-one 23

C ₃₉ H ₅₈ N ₂ O ₇ S

Aspect : poudre jaune

Poids moléculaire: 698,95

A une solution de 100 mg (0,18 mmol, 1,0 éq.) de 16-O-acétyl-N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F 13_ et de 35 mg (0,18 mmol, 1,0 éq.) d'acide p- toluènesulfonique dans 1,5 ml de méthanol sont ajoutés une spatule de sulfate de sodium anhydre. La suspension est agitée 30 minutes, puis filtrée et évaporée sous vide.

À une solution du sel précédemment obtenu dans 2,5 ml de pyridine sont ajoutés 91 mg (0,48 mmol, 2,6 éq.) de chlorure de tosyle. La solution se colore en jaune citron. Après 5 heures d'agitation à 100°C, la solution est évaporée sous vide en présence de 1,2-dichloroéthane. Le résidu est repris avec 20 ml de dichlorométhane puis lavé avec 30 ml d'une solution d'hydrogénocarbonate de sodium à 10% (pH = 8) et extrait avec

3x20 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est purifié sur 0,75 g de célite puis 0,75 g de florysil (trisilicate de magnésium). Enfin, le résidu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (éluant : dichlorométhane 9 / méthanol 1) pour fournir 64 mg de 23 sous forme d'une poudre jaune avec un rendement de 50%. IR (diamant) Ï…(cm ⁴ ) : 2932 (NH) ; 1729 (C=O ester) ; 1667 (CO, CONH et C=Q ; 1526 (CONH), 1244, (C=C) ; 1357 et 1174 (S=O) ; 1095 (C-O) ; 835 (S-O). Masse

(ESI) : m/z : 699,2 ([M+H], 100) ; 700,3 (30) ; 657,3 (45) ; 587,3 (30). SMHR (ESI) calculée pour C ₃₉ H ₅₉ N ₂ O ₇ S m/z = 699,4043 ; trouvée : 639,4039. • Composé 27 : (20S)-3 -isobutyrylamino9,19-cyclo-4a- benzylhydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-29-tosyle-5a,9 -pregnan- 16a-ol-ll-one 27

C ₃₇ H ₅₆ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire: 592,85

Sous argon, à une solution à O°C de 300 mg (0,59 mmol, 1,0 éq.) de N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 dans 2 ml de diméthylformamide sont ajoutés 0,22 ml (1,80 mmol, 3,0 éq.) de bromure de benzyle. La solution est agitée 10 minutes à 0°C. Puis, 60 mg d'hydrure de sodium (1,5 mmol, 2,5 éq.) sont ajoutés en plusieurs fois. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, l'excès d'hydrure de sodium est détruit avec du méthanol et la solution est concentrée en présence de toluène.

Le résidu est repris avec 20 ml de dichlorométhane puis lavé avec 30 ml d'une solution d'hydrogénocarbonate de sodium à 10% (pH = 8) et extrait avec 3x20 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (éluant : dichlorométhane 9 / méthanol 1) pour fournir 131 mg de 27_ sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 37%.

IR (diamant) Ï…(cm ⁴ ) : 3321, 2932 (OH, NH) ; 1649 (C=O et C=Q ; 1649 et 1531 (CONH) ; 1225 (C=C) ; 1092 (C-OH). Masse

(ESI) : m/z : 593,4 ([M+H], 100) ; 594,5 (10). SMHR (ESI) calculée pour C ₃₇ H ₅₇ N ₂ O ₄ m/z = 593,4318 ; trouvée : 593,4311.

• Composé 28 : (20S)-3 -amino-9,19-cyclo-4a-hydroxyméthyl-4 ,14a- diméthyl-20-diméthylamino-5a,9 -pregnan-16a,îî -diol-11-one 28

C ₂₆ H ₄₆ N ₂ O ₃

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire: 434,66

Sous argon, à une solution de 300 mg (0,69 mmol, 1,0 éq.) d'aminé 5 dans 25 ml de 1,4-dioxanne sont ajoutés 353 mg (9,01 mmol, 13,0 éq.) d'hydrure de lithium et d'aluminium. Après 12 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est hydrolyse avec 0,35 ml d'eau, puis 0,35 ml de soude 6N et 1,05 ml d'eau. La suspension grise se décolore et est filtrée puis évaporée sous vide pour fournir 190 mg de 28 sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'éther diéthylique avec un rendement de 63%. IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3382 (OH, NH) ; 1037 (C-OH).

Masse

(ESI) : m/z : 435,4 ([M+H], 100) ; 436,4 (5) ; 418,4 (10).

SMHR (ESI) calculée pour C ₂₆ H ₄₇ N ₂ O ₃ m/z = 435,3587 ; trouvée : 435,3581. • Composé 29 : (20S)-3 -isobutyrylamino-9,19-cyclo-4a- hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylazinoyl-5a,9 -pregnan-16a,ll -ol-ll- one 29

C ₃₀ H ₅₀ N ₂ O ₅

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire: 518,73

À une solution de 202 mg (0,40 mmol, 1,0 éq.) de N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 dans 6 ml de dichlorométhane sont ajoutés 95 mg (0,55 mmol, 1,4 éq.) d'acide m-chloroperbenzoïque. Après 30 minutes d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 40 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est trituré dans du diéthyléther pour fournir 165 mg de 29_ sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 79%.

IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3434 (OH, NH) ; 1655 (C=O) ; 1655 et 1513 (CONH) ; 1049 (C-OH).

Masse

(ESI) : m/z : 519,3 ([M+H], 100) ; 520,3 (10) ; 480,3 (20) ; 440,3 (30) ; 370,3 (20) ; 353,2 (10) ; 341,2 (25) ; 323,2 (25).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₀ H ₅₁ N ₂ O ₅ m/z = 519,3798 ; trouvée : 519,3770.

• Composé 30 : (20S)-3 -isobutyrylamino-9,19-cyclo-4a- hydroxyméthyl-4 ,14a-diméthyl-20-méthylamino-5a,9 -pregnan-lόa-ol-ll-one 30

Aspect : poudre incolore Poids moléculaire: 488,70

A une solution de 29,5 mg (0,06 mmol, 1,0 éq.) de N-oxyde 29_ dans 3 ml de méthanol sont ajoutés 32 mg (0,11 mmol, 2,0 éq.) de sulfate de fer II heptahydraté et 15 mg (0,06 mmol, 1 ,0 éq.) de chlorure de fer III hexahydraté. La solution est orange. Après 1 heure et 30 minutes d'agitation à température ambiante, le mélange est évaporé sous vide. Le résidu est alcalinisé avec 10 ml d'une solution de carbonate de sodium à 10%. Un précipité verdâtre se forme et est filtré sur célite. Le filtrat est rincé à l'eau puis au dichlorométhane. La solution filtrée est acidifiée par 30 ml d'une solution tampon acide acétique / acétate de sodium 1,0 M (pH = 4,8). Après 15 minutes d'agitation, la solution est alcalinisée avec 30 ml d'une solution ammonicale à 10% (pH = 10) et extrait avec 5x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement lavées avec 20 ml d'une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est trituré dans du diéthyléther pour fournir 21 mg de 30_ sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 76%. IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3434 (OH, NH) ; 1655 (C=O) ; 1655 et 1514 (CONH) ; 1093 (C-OH). Masse

(ESI) : m/z : 489,3 ([M+H], 100) ; 503,4 (40). SMHR (ESI) calculée pour C ₂₉ H ₄₉ N ₂ O ₄ m/z = 489,3692 ; trouvée : 489,3688.

• Composé 31 : (20S)-9(10-> 19)abeo-4a-bydroxymétbyl-3 - isobutyrylamino-4 ,14a-diméthyl-20-diméthylamino-5a,9 -pregn-l(10)-èn-16a-ol- 11-one 31

C ₃₀ H ₅₀ N ₂ O ₄

Aspect : poudre incolore

Poids moléculaire: 502,73

Sous argon, à une solution de 400 mg (0,80 mmol, 1,0 éq.) de N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F 2 dans 30 ml de dichlorométhane sont ajoutés, au goutte à goutte, 2,6 ml (24,0 mmol, 30,0 éq.) de chlorure de titane à — 78°C. La solution devient jaune. Après 30 minutes d'agitation à — 78°C, la solution est agitée à température ambiante. Le mélange se colore en vert foncé.

Après 2 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec

100 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x75 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement lavées avec une solution saturée en chlorure de sodium, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur alumine (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3) pour fournir 185 mg de 3J_ sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 46%. PF (°C) : 312

Analyse élémentaire : pour C ₃₀ H ₅₀ N ₂ O ₄

Calculée pour C ₃₀ H ₅₀ N ₂ O ₄ .0,5H ₂ O % C 70,41 H 10,05 N

5,47

Trouvée % C 70,84 H 9,71 N

5,21 IR (CHCl ₃ ) Ï…(cm ⁴ ) : 3434 (OH, NH) ; 1675 (C=O) ; 1651 (C=C et CONH) ; 1514 (CONH) ; 1040 (C-OH).

Masse

(ESI) : m/z : 503,3 ([M+H], 100) ; 504,4 (90). SMHR (ESI) calculée pour C ₃₀ H ₅₁ N ₂ O ₄ m/z = 503,3849 ; trouvée : 503,3843.

• Composé 32 : (20S)-9(10-> 19)abeo-4 ,14a-diméthyl-20- diméthylamino-(2'-isopropyl-4\4'-dihydro[3 ',r]oxazine)-5a,9 -pregn-l(10)-èn-16a- ol-11-one 32

Aspect : solide jaune clair

Poids moléculaire : 484,71

À une solution de 100 mg (0,20 mmol, 1,0 éq.) d'amide 3J_ dans 2 ml de dichlorométhane sont ajoutés 586 mg (1,00 mmol, 5,0 éq.) d'une solution d'hydroxyde de tétraéthylammonium à 25 % dans le méthanol. Après évaporation sous vide, le résidu rouge chauffé à 300°C sous 0,03 mmHg pendant 4 heures fournit 60 mg de 32 sous forme d'un solide jaune clair non sublimé avec un rendement de 62%.

Analyse élémentaire : pour C ₃₀ H ₄₈ N ₂ O ₃

Calculée pour C ₃₀ H ₄₈ N ₂ O ₃ .0,5H ₂ O % C 72,98 H lO ₅ OO N

5,67

Trouvée % C 72,61 H 9,65 N 5,64

Masse

(ESI) : m/z : 485,4 ([M+H], 100) ; 486,4 (10) ; 503,4 (20).

SMHR (ESI) calculée pour C ₃₀ H ₄₂ N ₂ O ₃ m/z = 485,3743 ; trouvée : 485,3702.

Exemple 6 : Résultats Biologiques Les activités antiacétylcholinestérasiques (AChE isolée d'E/ectrvphocus ekctήcus) et antibutyrylcholinestérasiques (BChE isolée du sérum humain) ont été déterminées en utilisant la méthode spectroscopique d'Ellman (Ellman, G.L. et al; Biochem. Pharmacol. 1961, 7, 88-95). Les résultats sont résumés dans le tableau 1.

Les valeurs données pour la galanthamine, la tacrine et l'ésérine servent de référence (360 et 74 pour l'activité anti-AchE, et 18600, 58 et 800 pour l'activité anti- BchE).

Tableau 1. In vitro inhibition de l'acétylcholinestérase (AChE) isolée d' Electrophorus ekctήcus et de la butyrylcholinestérase de sérum humain (BChE) .

composé AChE BChE composé AChE BChE

^IC 50 ^IC 50

(nM) (nM)

1 31 > 1000 8e 13 > 1000

2 > 10000 > 10000 8f 225 > 10000

3 9380 7407 8g 4205 > 10000

5 > 5000 > 30000 8h 27 1535

6b > 10000 2215 8i 102 380

6d > 10000 > 5000 9 2377 > 10000

6g > 5000 30000 11 1498 > 10000

6h > 100000 121 12 823 > 10000

7b > 10000 1878 13 > 10000 > 1000

7d > 1000 4022 14 > 1000 > 1000

7c > 1000 > 10000 19 > 1000 1277

7e 105 > 10000 23 4368 > 100000

7f 4832 > 1000 27 16768 5197

7g > 1000 > 10000 28 >1000 2446

7h 120 1926 29 1418 > 1000

7i 3270 > 10000 32 112 1444

8a 676 > 10000

8b 7648 > 10000

8c 607 > 10000

8d 403 375 galanthamine 360 18 600 tacrine 74 58 eserine 800

Exemple 7 : Etude du composé 8e au niveau de la jonction neuromusculaire squelettique de Vertébrés.

Le composé 8e s'est révélé posséder un puissant effet inhibiteur de l'acetylcholinestérase in vitro, comme cela a été détaillé précédemment (Tableau 1). Pour vérifier l'efficacité et la spécificité du composé 8e au niveau d'une synapse cholinergique modèle les inventeurs ont testé ces effets au niveau des préparations neuromusculaires isolées de vertébrés (grenouille et souris) maintenus en survie. Pour ce faire, ils ont utilisé des techniques conventionnelles d'électrophysiologie cellulaire. Le composé 8e à des doses comprises entre 1-25 μM produit une prolongation du temps de demi-décroissance des réponses synaptiques (potentiels de plaque motrice provoqués par la stimulation nerveuse, et potentiels de plaque motrice miniature spontanés). Cette prolongation des potentiels synaptiques est observée lorsque les préparations neuromusculaires de souris sont placées dans un milieu de survie normal (Krebs-Ringer) contenant (mM : NaCl, 151; KCl, 5; MgCl ₂ , 1; CaCl ₂ , 2; glucose, 11 et HEPES-NaOH, 5 (pH 7,4), et lorsque le milieu de survie contient de faibles concentrations de CaCl ₂ (0,4-1 mM) et de fortes concentrations MgCl ₂ (4-8 mM) pour réduire la libération de l'acétylcholine. La prolongation des potentiels synaptiques à la jonction neuromusculaire reflète la durée de vie moyenne des canaux synaptiques ouverts par l'acétylcholine lors de leurs interactions avec les récepteurs nicotiniques du muscle squelettique. L'inhibition de l'acetylcholinestérase augmente la concentration d'acétylcholine au niveau de la fente synaptique, ce qui permet des liaisons répétitives de

l'acétylcholine à ces récepteurs, prolongeant ainsi la durée des réponses synaptiques. Les résultats électrophysiologiques obtenus confirment que le composé 8e possède bien un effet anticholinestérasique au niveau de préparations neuromusculaires isolées de souris. Des effets semblables ont été observés sur des jonctions neuromusculaires de grenouille. Aux concentrations qui prolongent la durée des potentiels synaptiques, et même à plus fortes concentrations (160-200 μM) le composé 8e n'a pas d'effet significatif sur le potentiel de repos des fibres musculaires. Donc l'inhibition de l'acétylcholinestérase par ce composé ne s'accompagne pas d'une dépolarisation de la membrane musculaire.

D'un point de vue pharmacologique, les inventeurs ont testé, dans un premier temps, l'aptitude du composé 8e à modifier la conduction nerveuse axonale. Les résultats obtenus indiquent que cette molécule, à des doses comprises entre 1 et 300 μM, ne modifie pas de façon apparente la conduction nerveuse au niveau des préparations neuromusculaires de souris.

Dans un deuxième temps, les inventeurs ont déterminé, par électrophysiologie, l'aptitude du composé 8e à interagir avec les récepteurs nicotiniques musculaires à l'acétylcholine. Les résultats obtenus montrent que le composé 8e, à la concentration de 80 μM, provoque une diminution de l'amplitude et un blocage des potentiels de plaque motrice miniatures (qui reflètent la libération d'un quantum d'acétylcholine). De plus, les réponses synaptiques (potentiels de plaque motrice), enregistrées en réponse à la stimulation du nerf moteur, et composés d'environ 40 quanta d'acétylcholine, sont également bloquées de 80 % par 160 μM du composé 8e, aussi bien sur des jonctions neuromusculaires de grenouille que de souris. L'ensemble de ces résultats met en évidence que le composé 8e produit un blocage de l'interaction de l'acétylcholine avec ses sites récepteurs musculaires. Ces résultats ne sont pas surprenants, car la plupart des agents anticholinestérasiques bloquent aussi les récepteurs nicotiniques musculaires à l'acétylcholine. Cependant il faut noter que l'effet bloquant des récepteurs nicotiniques musculaires à l'acétylcholine se produit à des concentrations nettement supérieures de celles nécessaires pour inhiber l'acétylcholinestérase de la jonction neuromusculaire squelettique, comme cela a été observé pour d'autres inhibiteurs de l'acétylcholinestérase, tels que la galanthamine et la tacrine.

Or le composé 8e est actif comme inhibiteur de l'AChE à partir de 13 nM. Il peut donc être utilisé en une quantité permettant d'inhiber l'AchE tout en ne bloquant pas les récepteurs nicotiniques musculaires à l'AChE. Donc les alcaloïdes triterpéniques selon l'invention ne présentent pas d'effets secondaires lorsqu'ils sont utilisés à une dose permettant d'inhiber l'AChE.

Exemple 8 : Synthèse des composés 33 à 76.

17 R ₂ = COC ₄ H ₉ 18 R ₂ = COC ₄ H ₉ (62%) 43 R ₂ = COC ₄ H ₉ (22%)

Schéma 11

3 étapes sur 2 étapes

Schéma 12

52

Schéma 13

NaHCO ₃ ZNa ₂ CO ₃

Schéma 14

76

Schéma 15

10

• Composé 33 : (20S)-10(9->l)abeo-20-méthylamino-4$,14ardiméthyl-(2'- isopropyl-3,29-dihydro-4H-[l,3]-oxazine)-5(x9$-pregn-l(10)-à ¨n-16(X—ol-ll-one 33

100 mg (0,20 mmol, 1,0 éq.) de IVor-IV-3-zj0butyrylcycloxobuxidine--F 30 sont chauffés à 273°C sous 0,09 mmHg dans un four à boules ou un tube à sublimer. Un sublimât solide est obtenu en 3 heures. À une solution du sublimât dans 2 ml de dichlorométhane sont ajoutés 600 mg (1,02 mmol, 5,0 éq.) d'une solution d'hydroxyde de tétraéthylammonium à 25 % dans le méthanol. Après évaporation sous vide, le résidu rouge chauffé à 273°C sous 0,09 mmHg pendant 3 heures fournit 56 mg de 33 sous forme d'un sublimât amorphe jaune clair avec un rendement de 60%.

I.R. (CHCl ₃ ) Ï…Ccnï ¹ ) : 3367 (OH, NH) ; 2964 (C-H) ; 1697 (C=O) ; 1667 (C=N et C=C) ; 1074 (C-O).

• Composé 34 : (20S)-20-diméthyfamino-3$-(isobutyrylamino)-9,19-cyclo-4a- hydroxyméthyl-4$,14a-diméthyl-5a,9$-pregnan-ll$,16a-diol-l l-one 34

À une solution de 127 mg (0,29 mmol, 1,0 éq.) d'aminé 28 dans 0,7 ml de dichlorométhane et de 0,3 ml de méthanol sont ajoutés 51 μl (0,30 mmol, 1,05 éq.) d'anhydride isobutyrique. La solution est jaune claire. Après 6 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 30 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est précipité dans l'éther diéthylique pour fournir 110 mg de 34 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 75%.

Analyse élémentaire : pour C ₃₀ H ₅₂ N ₂ O ₄ .0,5H ₂ O Calculée pour C ₃₀ H ₅₂ N ₂ O ₄ -O ₅ SH ₂ O % : C 70,14 H 10,4ON 5,45 Mesurée % : C 74,21 H 10,19N 5,14 I.R. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3275 (OH, NH) ; 2932 (CH, CH2) ; 1633 et 1551 (CONH) ; 1039 (C-O).

S . M . (E . S . I .) : m / z : 50 5 , 4 ( [ M + H ] , 1 00) ; 50 6 , 4 (30) . S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₀ H ₅₃ N ₂ O ₄ m/z = 505,4005 ; mesurée : 505,3992.

Composé 35 : (20S)-20-diméthylamino-3$-((S)-2-méthylbιdyrylamino)-9,19 -cyclo- 4a-hydroxyméthyte$,14a-diméthyl-5a,9$-pregnan-ll$,16a-diol -ll-one 35

À une solution de 131 mg (0,30 mmol, 1,0 éq.) d'aminé 28 dans 0,7 ml de dichlorométhane et de 0,3 ml de méthanol sont ajoutés 67 μl (0,31 mmol, 1,05 éq.) d'anhydride (S)-2-méthylbutyrique. La solution est jaune claire. Après 6 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 30 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est précipité dans l'éther diéthylique pour fournir 124 mg de 35 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 80%.

Analyse élémentaire : pour C3iH54N2θ4.0,5H2θ Calculée pour C ₃ IH ₅₄ N ₂ O ₄ -O ₅ SH ₂ O % : C 70,55 H 10,50N 5,31 Mesurée % : C 74,57 H 10,52N 4,77 LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3305 (OH, NH) ; 2932 (CH, CH2) ; 1641 et 1537 (CONH) ; 1038 (C-O). S. M. (E.S.I.) : m/z : 519,4 ([M + H], 100) ; 520,4 (10) ; 603,5

(10). S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃ iH ₅₅ N ₂ O ₄ m/z = 519,4162 ; mesurée : 519,4140.

• Composé 36 :(20S)-3$-isobutyrylamino-20-diméthylamino-9,19-cyclo-4$,14 ar diméthyl-4θj-hydroxyméthyl-16Qj-tosyl-5(X,9$-pregnan-ll-o ne36

Sous argon, à une solution de 52 mg (0,10 mmol, 1,0 éq.) de N-3- zsobutyrylcycloxobuxidine-F 2 et de 7 mg (0,07 mmol, 0,7 éq.) de diméthylaminopyridine dans 3 ml de pyridine sont ajoutés 60 mg (0,30 mmol, 3,0 éq.) de chlorure de tosyle. Après 12 heures d'agitation à température ambiante, la solution est co-évaporée en présence de 1,2- dichloroéthane. Le résidu est repris avec 30 ml de dichlorométhane puis lavé avec 30 ml d'une solution d'hydrogénocarbonate de sodium à 10% (pH = 8) et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur plaque de silice préparative (éluant : dichlorométhane 9 / méthanol 1) pour fournir 54 mg de 36 sous forme d'une poudre jaune avec un rendement de 80%.

I.R. (CHCl ₃ ) O(Cm ^"1 ) : 3434 (OH, NH) ; 1662 (C=O) ; 1662 et 1511 (CONH) ; 1096 (C-OH) ;

1354 et 1173 (C-OTs).

S.M. (E.S.I.) : m/z : 503,4 ([M+H], 100) ; 504,4 (10).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₇ H ₅₇ N ₂ O ₆ S m/z = 657,3937 ; mesurée : 657,3954.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,53 (3H, s, H30) ; 0,72 (3H, d, J = 6,0 Hz, H21) ; 0,76 (3H, s, H18) ; 0,84 (IH, m, H6β) ; 1,04

(IH, d, J= 4,0 Hz, H19α) ; 1,12 et 1,14 (6H, 2d, J = 6,6 Hz, H3' et H4') ; 1,16 (3H, s, H28) ;

1,24-1,67 (5H, m, Hlα, H2β, H7α, H7β et H2β) ; 1,52 (IH, d, J = 4,0 Hz, H19β) ; 1,78 (6H, s,

NB-CH3) ; 1,89-2,03 (5H, m, H15α, H2α, H6α, H8β, et H5α) ; 2,14-2,19 (2H, m, H15β, et

H17α) ; 2,27-2,50 (3H, m, H2', H20, Hlβ) ; 2,41 (3H, s, H37) ; 2,35 et 2,43 (4H, 2d, J = 17,3 Hz, H12α et H12β) ; 2,94 (IH, dd, J = 12,6 Hz et 13,4 Hz, H29a) ; 3,30 (IH, d, J =12,6 Hz, H29b) ; 3,94 (IH, m, H3α) ; 4,76 (IH, m, OH) ; 4,90 (IH, m, H16β) ; 5,59 (IH, d, J = 8,9 Hz, NAH) ; 7,28 et 7,73 (4H, système AB, HAr = 32, 33, 35 et 36). R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

9,9 (C21) ; 11,1 (C30) ; 17,7 (Cl 8) ; 18,3 (C6) ; 19,4 et 19,5 (C3' et C4') ; 20,1 (C28) ; 21,6 (C37) ; 24,3 (CT) ; 27,4 et 27,6 (C2 et Cl) ; 30,8 (Cl 9) ; 33,8 (C9) ; 35,6 (C2') ; 38,0 (ClO) ; 39,8 (NB-CH3) ; 41,1 et 41,4 (C5 et C8) ; 42,6 (Cl 5) ; 44,1 (C4) ; 44,5 (C13) ; 47,4 (C14) ; 50,6 (C3) ; 51,6 (C12) ; 55,6 (Cl 7) ; 59,2 (C20) ; 63,9 (C29) ; 88,1 (Cl 6) ; 127,9 et 129,2 (CAr = 32, 33, 35 et 36) ; 135,0 et 143,9 (CAr = 31 et 34) ; 178,6 (Cl') ; 210,8 (Cl 1).

• Composé 37 : 20S)-3$-isobutyrylamino-20-diméthylamino-9,19-cyclo-4$,14a- diméthyl-4a-hydroxyméthyl-\6a-mésyl-5a,9$-pregnan-ll-one 37

À une solution de 52 mg (0,10 mmol, 1,0 éq.) de iV-3-zj-obutyrylcycloxobuxidine-F 2 et de 9 mg (0,07 mmol, 0,7 éq.) de 4-diméthylaminopyridine dans 3,0 ml de pytidine sont ajoutés 24 μl (0,31 mmol, 3,0 éq.) de chlorure de mésyle. La solution se colore en jaune. Après 16 heures d'agitation à température ambiante, la solution est co-évaporée avec du 1,2-dichloroéthane. Le résidu est repris avec 20 ml de dichlorométhane puis lavé avec 25 ml d'eau permutée et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur plaque préparative de silice (éluant : dichlorométhane 9 / méthanol 1) pour fournir 50 mg de 37 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 83%.

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 2963 (CH, CH2) ; 1654 (C=O) ; 1654 et 1512 (CONH) ; 1261 (C-OMs) ;

1351, 1169 (OMs) ; 1097 (C-O).

S.M. (E.S.I.) : m/z : 581,3 ([M+H], 100) ; 582,3 (60) ; 583,4 (10).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃ IH ₅₃ N ₂ O ₆ S m/z = 581,3624 ; mesurée : 581,3607.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDC1 ₃ /D ₂ O), δppm : 0,57 (3H, s, H30) ; 0,85 (3H, s, Hl 8) ; 0,88 (3H, d, J = 6,9 Hz, H21) ; 0,95 (IH, m, H6β) ; 1,06 (IH, d, J = 3,0 Hz, H19β) ; 1,17 et 1,19 (6H, 2d, J = 6,4

Hz, H3' et H4') ; 1,21 (3H, s, H28) ; 1,26 (IH, m, Hlα) ; 1,30-1,53 (3H, m, H7α, H15α et H7β) ;

1,58 (IH, d, J = 3,0 Hz, H19α) ; 1,54-1,75 (3H, m, H2β, H2α et H6α) ; 1,95-2,23 (3H, m, H8β,

Hl 5β et H5α) ; 2,17 (6H, bs, NB-CH3) ; 2,29 (IH, dd, J = 5,5 Hz et 11,3 Hz, H17α) ; 2,40 (IH, dq, J = 6,4 Hz, HZ) ; 2,39 (IH, d, J = 17,1 Hz, H12β) ; 2,46 (IH, m, Hlβ) ; 2,51 (IH, m, H20) ; 2,56 (IH, d, J = 17,1 Hz, H12α) ; 2,96 (IH, d, 12,8 Hz, H29a) ; 3,02 (3H, s, H31) ; 3,34 (IH, d, J

= 12,8 Hz, H29b) ; 4,00 (IH, ddd, J = 4,5 Hz, 8,8 Hz et 10,6 Hz, H3α) ; 4,83 (IH, m, H16β) ;

5,35 (IH, d, J = 9,0 Hz, NAH).

R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDC1 ₃ /D ₂ O), δppm : 10,0 (C21) ; 11,2 (C30) ; 17,6 (Cl 8) ; 18,4 (C6) ;

19,5 et 19,6 (C3' et C4') ; 20,2 (C28) ; 24,5 (Cl) ; 27,6 (C2) ; 27,7 (Cl) ; 31,1 (C19) ; 33,9 (C9) ; 35,8 (C2') ; 37,3 (C31) ; 38,2 (ClO) ; 41,2 (C5) ; 41,7 (C8) ; 44,1 (Cl 5) ; 44,5 (C13) ; 44,6 (C4) ; 47,4

(C14) ; 50,7 (C3) ; 51,6 (C12) ; 55,1 (C17) ; 59,9 (C20) ; 64,0 (C29) ; 88,5 (C16) ; 178,5 (Cl') ; 210,8

(CIl).

Composé 38 : (20S) -20-diméthylamino-9,19-cyclo-4$,14a-diméthyl-16a-pivalyl- (2'-isopropyl-329-dihydro-4H-[l,3]-oxazine)-5a,9$-pregn-ll-o ne 38

Sous argon, à une solution de 412 mg (0,55 mmol, 1,0 éq.) de tosylate 22 dans 36 ml de DMF, sont ajoutés 65 mg (0,66 mmol, 1,2 éq) de diformylamidure de sodium. Après 5 heures d'agitation à 130 ⁰ C, le mélange est alcalinisé avec 30 ml d'une solution de bicarbonate de sodium à 10% (pH = 8) et extrait avec 3x20 ml d'éther diéthylique. Les phases organiques réunies sont successivement lavées avec 2x20ml d'une solution de bicarbonate de sodium à 10%, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide pour fournir 300 mg de 38 sous forme d'un solide jaune clair avec un rendement de 94%.

I.R. (CHCl ₃ ) Ï…(cm- ⁱ ) : 2965 (C-H) ; 1730 (C=O ester) ; 1667 (C=N et C=C) ; 1157 (C-O). S . M . (E . S . I .) : m / z : 569 , 4 ( [ M + H ] , 1 00) ; 693 , 5 (25) ; 763 , 5

(5) . S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₅ H ₅₇ N ₂ O ₄ m/z = 569,4318 ; mesurée : 569,4330.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,83 (3H, s, Hl 8) ; 0,87 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 0,92 (3H, s, H30) ; 1,06 et 1,07 (6H, 2d, J = 7,0 Hz, H3' et H4') ; 1,15 (IH, m, H6β) ; 1,21 (IH, d, J = 4,0 Hz, H19β) ; 1,23 (3H, s, H28) ; 1,35 (IH, m, Hlα) ; 1,37-1,53 (3H, m, H7α, H15α et H7β) ; 1,56 (IH, d, J = 4,0 Hz, H19α) ; 1,53-1,58 (3H, m, H2β) ; 1,95-2,19 (3H, m, H6α, H8β, H15β , H17α et H5α) ; 2,24 (6H, bs, NB-CH3) ; 2,26 (IH, dq, J = 7,0 Hz, HZ) ; 2,31 (IH, d, J = 17,1 Hz,

H12β) ; 2,42 (IH, m, Hlβ) ; 2,52 (IH, d, J = 17,3 Hz, H12α) ; 2,62 (IH, dq, J = 6,4 Hz et 10,9 Hz, H20) ; 4,09 (IH, ddd, J = 2,1 Hz, 7,3 Hz et 9,7 Hz, Hl 6β) ; 4,31 (IH, ddd, J = 4,2 Hz, 8,9 Hz et 12,4 Hz, H3α) ; 5,29 (IH, d, J = 9,1 Hz, NAH) ; 9,40 (IH, s, H29).

R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 7,8 (C30) ; 10,1 (C21) ; 18,0 (Cl 8) ; 19,4 et 19,9 (C3' et C4') ; 20,8 (C28) ; 21,2 (C6) ; 24,1 (C7) ; 27,5 (C2) ; 27,6 (Cl) ; 29,6 (C19) ; 34,1 (C9) ; 35,7 (C2') ; 35,9 (ClO) ; 41,5 (C8) ; 41,9 (C5) ; 42,8 (Cl 5) ; 44,6 (C13) ; 47,2 (C14) ; 49,7 (C3) ; 51,5 (C12) ; 56,0 (C17) ; 57,0 (C4) ; 62,2 (C20) ; 78,3 (C 16) ; 176,4 (Cl') ; 203,4 (C29) ; 210,9 (ClI).

• Composé 39 : (20S)-10(9->l)abeo-20-diméthylamino-4β,14a^diméthyl-16 a^pivalyl- (2'-isopropyl-3,29-dihydro-4H-[l,3]-oxazine)-5a,9$-pregn-l(1 0)-èn-ll-one 39

Sous argon, à une solution de 50 mg (0,10 mmol, 1,0 éq.) de dihydro-4H-(l,3)- oxazine 1 dans 1 ml de pyridine, sont ajoutés 13 μl (0,10 mmol, 1,0 éq) de chlorure de pivalyle. Après 2 heures et 30 minutes d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 30 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pΗ = 10) et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide pour fournir 45 mg de 39 sous forme d'un solide jaune clair avec un rendement de 77%.

I.R. (CHCl ₃ ) Ï…Ccm ¹ ) : 1720 (C=O ester) ; 1698 (C=O) ; 1671 (C=N et C=C) ; 1158 (C-O).

S . M . (E . S . I .) : m / z : 569 , 4 ( [ M + H ] , 1 00) ; 570 , 4 (30) ; 485 , 4

(5) ; 285 , 2 ( 1 0) .

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₅ H ₅₇ N ₂ O ₄ m/z = 569,4318 ; mesurée : 569,4301.

R.M.N. ¹ H (500 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,65 (3H, s, H18) ; 0,68 (3H, s, H30) ; 0,78 (3H, d, J = 6,9 Hz, H21) ; 1,04 et 1,06 (6H, 2d, J = 6,9 Hz, H3' et H4') ; 1,19 (3H, s, H28) ; 1,23-1,29

(2H, m, H6β et H7α) ; 1,26 (IH, dd, J = 5,7 Hz et 14,7 Hz, Hl 5α) ; 1,53 (IH, dd, J = 6,9 Hz et

12,0 Hz, H6α) ; 1,62 (IH, ddd, J = 3,8 Hz, 10,4 Hz et 10,7 Hz, H8β) ; 1,72 (IH, m, H2β) ;

1,79-1,83 (3H, m, H5α, H7β et H9α) ; 1,98 (1, m, H15β) ; 2,02 (IH, m, H19β) ; 2,06 (6H, s,

NB-CH3) ; 2,20 (IH, dd, J = 5,6 Hz et 11,4 Hz, H17α) ; 2,28 (IH, m, H2α) ; 2,34 (IH, dq, J = 6,9 Hz, H2') ; 2,36 (IH, d, J = 15,8 Hz, H12β) ; 2,38 (IH, m, H20) ; 2,52 (IH, bd, J = 15,8 Hz,

H12α) ; 3,16 (IH, dd, J = 6,3 Hz et 11,7 Hz, H3α) ; 3,29 (IH, d, J = 15,8 Hz, H19α) ; 3,67

(IH, d, J = 10,1 Hz, H29 ) ; 3,99 (IH, d, J = 10,1 Hz, H29 ) ; 4,98 (IH, dd, J = 5,7 Hz et

13,2 Hz, H16β) ; 5,53 (IH, m, Hl).

R.M.N. ¹³ C (125 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 9,62 (C30) ; 10,03 (C21) ; 17,84 (C18) ; 19,77 (C3' et C4') ; 19,84 (C28) ; 24,61 (C6) ; 27,17 (C33, C34 et C35) ; 30,73 (C2) ; 33,20 (C4) ; 33,52

(C7) ; 34,31 (C2') ; 37,11 (C19) ; 38,54 (C32) ; 40,64 (NB-CH3) ; 43,26 (C15) ; 46,41 (C14) ;

47,11 (C13) ; 49,56 (C5) ; 49,82 (C8) ; 50,31 (C12) ; 50,32 (C9) ; 54,07 (C17) ; 55,65 (C3) ;

59,61 (C20) ; 74,74 (C29) ; 78,94 (C16) ; 121,87 (Cl) ; 137,08 (ClO) ; 162,70 (Cl') ; 177,63

(C31) ; 211,23 (CIl).

• Composé 40 : (20S)-10(9->l)abeo-16a^acétyl-20-diméthylamino-4^,14a^d iméthyl- (2'-isopropyl-3,29-dihydro-4H-[l,3]-oxazine)-5q9$-pregn-l(10 )-èn-ll-one 40

Sous argon, à une solution de 50 mg (0,10 mmol, 1,0 éq.) de dihydro-4H-(l,3)- oxazine 1 dans 1 ml de pyridine, sont ajoutés 8 μl (0,11 mmol, 1,0 éq) de chlorure d'acétyle. Après 2 heures et 30 minutes d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 30 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pΗ = 10) et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide avec du 1,2-dichloroéthane pour fournir 37 mg de 40 sous forme d'un solide jaune clair avec un rendement de 70%.

I.R. (CHCl ₃ ) O(Cm ¹ ) : 2965 (C-H) ; 1729 (C=O ester) ; 1696 (C=O) ; 1670 (C=N et C=C) ; 1027 (C-O).

Composé 41: (20S)-3$4sobutyrylamino-20-diméthylamino-9,19-cyclo-4$,14a- diméthyl-4a-acétylméthyl-5a,9$-pregnan-16a-ol-ll-one41

À une solution refroidie à 5°C de 200 mg (0,39 mmol, 1,0 éq.) de ΛT-3- /j-obutyrylcycloxobuxidine-F 2 dans 25 ml d'acide acétique glacial sont ajoutés 5 ml (0,31 mmol, 3,0 éq.) d'acide chlorhydrique à 35%. Après 30 minutes d'agitation à température ambiante, la solution est évaporée sous vide. Le résidu est alcalinisé avec 40 ml d'une solution ammoniacale à 10% et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,8 / méthanol 0,2) pour fournir 168 mg de 41 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 77%.

Analyse élémentaire : pour C32H52N2O5

Calculée pour C ₃₂ H ₅₂ N ₂ O ₅ % : C 70,55 H 9,62 N 5,14

Mesurée % : C 70,01 H 9,44 N 4,83

LR. (CHCl ₃ ) «(cm- ¹ ) : 3439 (OH, NH) ; 2966 (CH, CH2) 1724 (C=O ester) ; 1667 et 1507 (C=O et CONH) ; 1095 (C-O).

S.M. (E.S.I.) : m/z : 545,5 ([M+H], 100) ; 546,5 (10) ; 624,5 (20).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₂ H ₅₂ N ₂ O ₅ m/z = 545,3954 ; mesurée : 545,3607. R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,67 (3H, s, H30) ; 0,78 (3H, s, Hl 8) ; 0,81 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 0,90 (IH, m, H6β) ; 0,97 (IH, d, J = 3,4 Hz, H19β) ; 1,05 et 1,06 (6H, 2d, J = 6,8 Hz, H3' et H4') ; 1,16 (3H, s, H28) ; 1,20 (IH, m, Hlα) ; 1,25-1,52 (4H, m, H7α, H15α, H7β et H2β) ; 1,49 (IH, d, J = 3,4 Hz, H19α) ; 1,66 (IH, m, H2α) ; 1,89-2,01 (5H, m, H6α, H8β, H15β, H5α et H17α) ; 2,05 (3H, s, H32) ; 2,18 (6H, bs, NB-CH3) ; 2,22 (IH, dq, J = 6,8 Hz, H2') ; 2,23 (IH, d, J = 17,2 Hz, H12β) ; 2,31 (IH, m, Hlβ) ; 2,46 (IH, d, J = 17,2 Hz, H12α) ; 2,55 (IH, dq, J = 6,4 Hz et 11,8 Hz, H20) ; 3,65 (IH, d, 11,7 Hz, H29a) ; 3,71 (IH, d, J = 11,7 Hz, H29b) ; 4,04 (IH, ddd, J = 2,6 Hz, 7,2 Hz et 9,2 Hz, Hl 6β) ; 4,11 (IH, ddd, J = 4,1 Hz, 8,1 Hz et 10,6 Hz, H3α) ; 5,24 (IH, d, J = 10,0 Hz, NAH).

R.M.N. «C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 9,9 (C21) ; 11,3 (C30) ; 17,8 (C18) ; 18,7 (C6) ; 19,4 et 19,9 (C3' et C4') ; 20,7 (C28) ; 21,0 (C32) ; 24,4 (C7) ; 27,5 (C2) ; 28,1 (Cl) ; 30,5 (C19) ; 34,2 (C9) ; 35,9 (C2') ; 37,3 (ClO) ; 41,6 (C4) ; 42,5 (C8) ; 42,6 (C5) ; 42,7 (Cl 5) ; 44,3 (C13) ; 47,0 (C14) ; 49,5 (C3) ; 51,4 (C12) ; 55,7 (C17) ; 61,9 (C20) ; 65,3 (C29) ; 78,2 (C16) ; 171,3 (C31) ; 176,3 (Cl') ; 211,3 (CIl).

• Composé 42: (20S)-16a-acétyl-3$-isobutyrylamino-20-diméthylamino-9,19- cyclo-4$,14a-diméthyl4a-acétylméthyl-5a,9$-pregnan-ll-one 42

À une solution de 200 mg (0,39 mmol, 1,0 éq.) de JV-3-zjobutyrylcycloxobuxidine-F 2 dans 1 ml de pytidine sont ajoutés 0,11 ml (1,19 mmol, 3,0 éq.) d'anhydride acétique. Après 48 heures d'agitation à température ambiante, la solution est évaporée sous vide en présence de 1,2- dichloroéthane.

Le résidu, ainsi obtenu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99 / méthanol 1) pour fournir 212 mg de 42 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 91%.

I.R. (CHCl ₃ ) Ï…(cm- ⁱ ) : 2965 (CH, CH2) ; 2359 (C-H) ; 1729 (C=O ester) ; 1666 et 1527 (C=O et CONH) ; 1229 et 1034 (C-O).

S.M. (E.S.I.) : m/z : 587,4 ([M+H], 100) ; 588,4 (5) ; 545,4 (20).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₄ H ₅₅ N ₂ O ₆ m/z = 587,4060 ; mesurée : 587,4063.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,74 (3H, s, H30) ; 0,82 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 0,85

(3H, s, H18) ; 0,98 (IH, m, H6β) ; 1,05 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19β) ; 1,13 et 1,14 (6H, 2d, J = 6,8 Hz, H3' et H4') ; 1,18 (3H, s, H28) ; 1,26 (IH, m, Hl α) ; 1,26-1,52 (5H, m, H6α, H7α, H15α, H7β et H2β) ; 1,58 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19α) ; 1,71-1,78 (2H, m, H2α, H8β) ; 2,00 (3H, s, H34) ; 2,02-

2,07 (2H, m, H5α et Hl 5β) ; 2,11 (3H, s, H32) ; 2,14 (6H, bs, NB-CH3) ; 2,23 (IH, dd, J = 5,8 Hz et 11,2 Hz, H17α) ; 2,31 (IH, dq, J = 6,8 Hz, HZ) ; 2,36 (IH, m, Hlβ) ; 2,39 (IH, d, J = 17,1 Hz, H12β) ; 2,47 (IH, dq, J = 6,4 Hz et 11,2 Hz, H20) ; 2,56 (IH, d, J = 17,1 Hz, H12α) ; 3,72 (IH, d, 11,7 Hz, H29a) ; 3,78 (IH, d, J = 11,7 Hz, H29b) ; 4,18 (IH, ddd, J = 4,1 Hz, 10,1 Hz et 12,1 Hz, H3α) ; 5,12 (IH, dd, J = 5,8 Hz et 7,9 Hz, H16β) ; 5,18 (IH, d, J = 10,4 Hz, NAH).

R.M.N. «C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 9,8 (C21) ; 11,4 (C30) ; 17,9 (C18) ; 18,8 (C6) ; 19,5 (C3' et C4') ; 20,0 (C28) ; 21,0 (C32) ; 21,2 (C34) ; 24,5 (C7) ; 27,5 (C2) ; 28,2 (Cl) ; 30,5 (C19) ; 33,8 (C9) ; 36,0 (CZ) ; 37,5 (ClO) ; 40,3 (NB-CH3) ; 41,5 (C8) ; 42,6 (C5 et C4) ; 43,0 (Cl 5) ; 44,5 (C13) ; 47,4 (Cl 4) ; 49,6 (C3) ; 51,9 (C12) ; 55,1 (ClI) ; 59,5 (C20) ; 65,4 (C29) ; 78,9 (Cl 6) ; 170,7 (C33) ; 171,3 (C31) ; 176,3 (Cl') ; 211,0 (ClI).

• Composé 43 : (20S)-3$-isobutyrylamino-20-méthylamino-9,19-cyclo-4$,14(k- diméthyl-4arformyl-16as-pivafyl-5a9$-pregnan-ll-one 43

À une solution de 500 mg (0,85 mmol, 1,0 éq.) de 16-O-pivalyl-N-3- isobutyrylcycloxobuxidine-F 17 dans 32 ml de dichlorométhane sont ajoutés 486 mg (1,11 mmol, 1,3 éq.) de periodinane de Dess-Martin sous atmosphère inerte. La solution se trouble et devient rosé. Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 40 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (éluant : dichlorométhane 90 / méthanol 10) pour fournir 130 mg de 43 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 22%.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,83 (3H, s, H18) ; 0,86 (3H, s, H30) ; 1,00 (3H, d, J = 6,6 Hz, H21) ; 1,01 (IH, m, H6β) ; 1,01 et 1,02 (6H, 2d, J = 6,8 Hz, H3' et H4') ; 1,09 (IH, m, H19α) ; 1,11 (3H, s, H28) ; 1,13 (9H, s , H33 H34 et H35); 1,22-1,51 (5H, m, Hlα, H7α, H15α, H7β et H2β) ; 1,53 (IH, d, J = 4,1 Hz, H19β) ; 1,71-1,77 (2H, m, H2 , H6α) ; 1,96-2,14 (3H, m, H8β, H15β et H5α) ; 2,18 (IH, dq, J = 6,8 Hz, H2') ; 2,28 (3H, s, NB-CH3) ; 2,43 (IH, d, J = 17,3 Hz, H12β) ; 2,34-2,51 (3H, m,

H20, H17α et Hlβ) ; 2,53 (IH, d, J = 17,3 Hz, H12α) ; 4,25 (IH, ddd, J = 4,2 Hz, 8,7 Hz et

12,2 Hz, H3α) ; 5,97 (IH, dd, J = 6,0 Hz, 7,5 Hz, H16β) ; 5.20 (IH, d, J = 9,0 Hz, NAH) ; 9,33

(IH, s, H29).

R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

7,6 (C30) ; 18,0 (C18) ; 18,5 (C21); 19,2 et 19,3 (C3' et C4') ; 19,8 (C28) ; 21,0 (C6) ; 24,0

(Cf) ; 27,0 (C33, C34 et C35) ; 27,2 (C2) ; 27,3 (Cl) ; 29,4 (C19) ; 33,2 (NB-CH3) ; 33,5 (C9) ;

35,6 (CT) ; 35,9 (ClO) ; 38,5 (C32) ; 40,9 (C5) ; 41,8 (C8) ; 43,6 (C15) ; 45,4 (C13) ; 47,0

(C14) ; 49,5 (C3) ; 51,6 (C12) ; 56,3 (Cl 7) ; 56,7 (C4) ; 56,9 (C20) ; 78,9 (C16) ; 176,3 (C31) ;

178,1 (Cl') ; 198,9 (C29) ; 203,3 (ClI).

• Composé 44 : (20S)-3β-isobutyiylamino-20-diméthylamino-9,19-cyclo-4β,1 4α- diméthyl-4α-formyl-5α, 9β-pr egnan- 16α-ol-ll-one 44

À une solution de 1000 mg (1,84 mmol, 1,0 éq.) d'aldéhyde 14 dans 23,0 ml de méthanol sont ajoutés une solution de 1953 mg (18,42 mmol, 10,0 éq.) de carbonate de sodium et 2321 mg (27,63 mmol, 15,0 éq.) d'hydrogénocarbonate de sodium dans 25,0 ml d'eau. Un précipité se forme. Après 3 heures d'agitation à température ambiante, la solution est diluée avec 50 ml d'eau et extraite avec 3x45 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est trituré dans l'acétate d'éthyle pour fournir 567 mg de 44 sous forme d'une poudre ocre avec un rendement de 61%.

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3284 (OH, NH) ; 2936 (CH, CH2) ; 2791 (CH=O) ; 1716 (C=O aldéhyde) ; 1661, 1636 et 1549 (C=O et CONH) ; 1095 (C-O).

S.M. (E.S.I.) : m/z : 501,4 ([M+H], 100) ; 502,4 (15).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₀ H ₄₉ N ₂ O ₄ m/z = 501,3692 ; mesurée : 501,3678.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,83 (3H, s, Hl 8) ; 0,87 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 0,92 (3H, s, H30) ; 1,06 et 1,07 (6H, 2d, J = 7,0 Hz, H3' et H4') ; 1,15 (IH, m, H6β) ; 1,21 (IH, d, J =

4,0 Hz, H19β) ; 1,23 (3H, s, H28) ; 1,35 (IH, m, Hl α) ; 1,37-1,53 (3H, m, H7α, H15α et H7β) ;

1,56 (IH, d, J = 4,0 Hz, H19α) ; 1,53-1,58 (3H, m, H2β) ; 1,95-2,19 (3H, m, H6α, H8β, H15β ,

H17α et H5α) ; 2,24 (6H, bs, NB-CH3) ; 2,26 (IH, dq,J = 7,0 Hz, H2') ; 2,31 (IH, d, J = 17,1 Hz,

H12β) ; 2,42 (IH, m, Hlβ) ; 2,52 (IH, d, J = 17,3 Hz, H12α) ; 2,62 (IH, dq, J = 6,4 Hz et 10,9 Hz, H20) ; 4,09 (IH, ddd, J = 2,1 Hz, 7,3 Hz et 9,7 Hz, Hl 6β) ; 4,31 (IH, ddd, J = 4,2 Hz, 8,9 Hz et 12,4 Hz, H3α) ; 5,29 (IH, d, J = 9,1 Hz, NAH) ; 9,40 (IH, s, H29).

R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 7,8 (C30) ; 10,1 (C21) ; 18,0 (Cl 8) ; 19,4 et 19,9 (C3' et C4') ; 20,8 (C28) ; 21,2 (C6) ; 24,1 (C7) ; 27,5 (C2) ; 27,6 (Cl) ; 29,6 (C19) ; 34,1 (C9) ; 35,7 (C2') ; 35,9 (ClO) ; 41,5 (C8) ; 41,9 (C5) ; 42,8 (Cl 5) ; 44,6 (C13) ; 47,2 (C14) ; 49,7 (C3) ; 51,5 (C12) ; 56,0 (C17) ; 57,0 (C4) ; 62,2 (C20) ; 78,3 (C 16) ; 176,4 (Cl') ; 203,4 (C29) ; 210,9 (ClI).

Composé 45 : (20S)-20-diméthylamino-3$-(isobutyrylamino)-9,19-cyclo-4a- benzyliminomethyl-4$,14a-diméthyl-5a,9$-pregnan-16a-ol-ll-o ne45

À une solution de 0,89 g (1,78 mmol, 1,0 éq.) d'aldéhyde 44 et de 900 mg de sulfate de magnésium anhydre dans 10 ml de dichlorométhane sont ajoutés 253 μl (2,31 mmol, 1,3 éq.) de benzylamine. Après 17 heures d'agitation à 55°C, la solution est filtrée sur célite et évaporée sous vide pour fournir 1,05 g de 45 sous forme d'une mousse jaune avec un rendement quantitatif.

I.R. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3386 (OH, NH) ; 2958 (CH, CH2) ; 1649 (C=O, C=N) ; 1649 et 1529 (CONH) ; 1451 (C=C Ar) ; 1227 et 1091 (C-OH).

S . M . (E . S . I .) : m / z : 590 , 4 ( [ M + H ] , 1 00) ; 59 1 , 4 ( 1 0) . S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₇ H ₅₆ N ₃ O ₃ m/z = 590,4322 ; mesurée : 590,4304. R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,77 (3H, s, H18) ; 0,81 (3H, d, J = 6,6 Hz, H21) ; 0,93 (IH, m, H6β) ; 0,93 et 0,96 (6H, 2d, J = 6,8 Hz, H3' et H4') ; 0,97 (3H, s, H30) ; 1,02 (IH, d, J = 4,0 Hz, H19α) ; 1,16 (3H, s, H28) ; 1,21- 1,44 (5H, m, Hlα, H2β, H7β, H7α et H15α) ; 1,50 (IH, m, H6α) ; 1,53 (IH, d, J = 4,0 Hz, H19β) ; 1,76 (IH, m, H2α) ; 1,82-2,07 (4H, m, H15β, H17α, H5α et H8β) ; 2,10 (IH, dq, J = 6,8 Hz, HZ) ; 2,19 (6H, s, NB-CH3) ; 2,25 (IH, d, J = 17,3 Hz, H12β) ; 2,31 (IH, ddd, J = 3,3 Hz, 3,6

Hz et 13,4 Hz, Hlβ) ; 2,45 (IH, d, J = 17,3 Hz, H12α) ; 2,55 (IH, dd, J = 6,8 Hz et 10,8 Hz, H20) ; 4,03 (2H, m, H3α et Hl 6β) ; 4,45 et 4,49 (2H, 2d système AB, 15,2 Hz, H31) ; 5,26 (IH, d, J = 9,2 Hz, NAH) ; 7,14-7,27 (5H, m, HAr=33-37) ; 7,49 (IH, s, H29). R.M.N. «C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

10,0 (C21) ; 10,2 (C30) ; 17,9 (C6 et C18) ; 19,3 et 19,6 (C3' et C4') ; 20,7 (C28) ; 24,2 (C7) ; 27,6 (C2) ; 27,7 (Cl) ; 29,8 (C 19) ; 34,3 (C9) ; 35,7 (C2') ; 36,7 (ClO) ; 41,3 (C8) ; 42,7 (Cl 5) ; 44,5 (C13) ; 44,8 (C5) ; 47,2 (C14) ; 50,0 (C4) ; 51,4 (Cl 2) ; 52,0 (C3) ; 55,9 (Cl 7) ; 62,1 (C20) ; 64,7 (C31) ; 78,2 (Cl 6) ; 126,7 (C35) ; 127,7 et 128,3 (C34-36 et C33-37) ; 139,5 (C32) ; 170,7 (C29) ; 176,0 (Cl') ; 210,9 (CIl).

• Composé 46 : (20S)-20-diméthylamino-3$-(isobutyrylamino)-9,19-cyclo-4a- benzylaminomethyl-4^,14a-diméthyl-5a,%-pregnan-16a-ol-ll-on e46

À une suspension de 2,98 g (5,05 mmol, 1,0 éq.) d'imine 45 dans 30 ml de méthanol sont ajoutés successivement 381 mg (6,06 mmol, 1,2 éq.) de cyanoborohydrure de sodium et 289 μl (5,05 mmol, 1,05 éq.) d'acide acétique glacial. Après 3 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 50 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x50 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur gel de silice (éluant : dichlorométhane 97,5 / méthanol 0,5 / ammoniac 2) pour fournir 2,64 g de 46 sous forme d'une poudre jaune avec un rendement de 88% sur deux étapes.

Analyse élémentaire : pour C37Hs7N3θ3.0,5H2θ

Calculée pour C ₃₇ H ₅₇ N ₃ O ₃ ASH ₂ O % : C 73,96 H 9,73 N 6,99 O 9,32

Mesurée % : C 74,14 H 9,63 N 7,13 O

9,11 I.R. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3312 (OH, NH) ; 2933 (CH, CH2) ; 1660 (C=O) ; 1660 et 1534 (CONH) ; 1452 (C=C Ar) ; 1226 et 1095 (C-OH).

S. M. (E.S.I.) : m/z : 592,5 ([M + H], 100) ; 593,5 (10) ; 296,7

(5).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₇ H ₅₈ N ₃ O ₃ m/z = 592,4478 ; mesurée : 592,4451. R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,51 (3H, s, H30) ; 0,65 (IH, m, H6β) ; 0,76 (3H, s, H18) ; 0,80 (3H, d, J = 6,6 Hz, H21) ; 1,07 (6H, 2d, J = 7,0 Hz, H3' et H4') ; 0,92 (IH, d, J = 3,4 Hz, H19α) ; 1,17 (3H, s, H28) ; 1,22-1,48 (4H, m, Hlα, H7, H2β et H15α) ; 1,45 (IH, d, J = 3,4 Hz, H19β) ; 1,60 (IH, m, H2α) ; 1,87-2,15 (5H, m, H15β, H17α,, H6α, H5α et H8β) ; 2,02 (IH, d, J = 13,0 Hz, H29) ; 2,19 (6H, s, NB- CH3) ; 2,14 (IH, d, J = 13,0 Hz, H29) ; 2,22 (IH, d, J = 17,1 Hz, H12β) ; 2,24 (IH, dq, J = 7,0 Hz, H2') ; 2,32 (IH, m, Hlβ) ; 2,44 (IH, d, J = 17,1 Hz, H12α) ; 2,55 (IH, dd, J = 6,6 Hz et 10,8 Hz, H20) ; 3,56 et 3,71 (2H, 2d système AB, 13,8 Hz, H31) ; 4,00 (IH, m, H3α) ; 4,03 (IH, m, H16β) ; 5,10 (IH, d, J = 10,0 Hz, NAH) ; 7,19-7,28 (5H, m, HAr=33-37). R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 9,9 (C21) ; 13,7 (C30) ; 17,8 (C18) ; 18,5 (C6) ; 19,5 et 20,2 (C3' et C4') ; 21,0 (C28) ; 24,5 (C7) ; 27,6 (C2) ; 28,4 (Cl) ; 31,0 (C19) ; 34,6 (C9) ; 36,0 (C2') ; 38,2 (ClO) ; 41,7 (C8) ; 42,1 (C5) ; 42,9 (Cl 5) ; 43,2 (C13) ; 44,5 (C4) ; 47,2 (C 14) ; 50,3 (C3) ; 51,5 (C 12) ; 52,9 (C29) ; 54,5 (C31) ; 55,8 (C17) ; 62,1 (C20) ; 78,4 (Cl 6) ; 126,5 (C35) ; 128,0 et 128,4 (C34-36 et C33-37) ; 141,2 (C32) ; 176,6 (Cl'); 211,6 (CIl).

• Composé 47 : (20S)-3$-isobutyrylamino-20-diméthylamino-9,19-cyclo-4θr benzylaminométhyl-4$,14aj-diméthyl-16θrpivalyl-5aβ$-preg nan-ll-one 47

À une solution de 100 mg (0,15 mmol, 1,0 éq.) d'imine 19 dans 0,5 ml de méthanol sont ajoutés 12 mg (0,18 mmol, 1,2 éq.) de cyanoborohydrure de sodium et 9 μl (0,16 mmol, 1,05 éq.) d'acide acétique glacial. Après 1 heure d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 30 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x20 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II- III (éluant : dichlorométhane 99,9 / ammoniaque 40% 0,1) pour fournir 58 mg de 47 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 58%.

I.R. (diamant) O(Cm ^"1 ) : 2964 (NH) ; 1720 (C=O ester) ; 1664 et 1530 (C=O et CONH) ; 1453

1365 1287 1229 1159 (C=CAr C-N C-O).

S.M. (E.S.I.) : m/z : 676,5 ([M+H], 100) ; 586,5 (5) ; 339,3 (25) ; 338,8 (100).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₄₂ H ₆₆ N ₃ O ₄ m/z = 676,5053 ; mesurée : 676,5053.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm : On ne voit pas NCH : Aucune corrélation n'est visible entre ce proton et les protons H36 sur le spectre COSY.

0,58 (3H, s, H30) ; 0,82 (3H, s, H18) ; 0,82 (IH, m, H6β) ; 0,84 (3H, d, J = 6.4 Hz, H21) ; 1,14 et 1,20 (6H, 2d, J = 6.8 Hz, H3' et H4') ; 1,19 (3H, s, H28) ; 1,21 (9H, s, H33, H34 et H35) ; 1,13 (IH, m, H19α) ; 1,24-1,56 (5H, m, Hlα, H7α, H15α, H7β et H2β) ; 1,55 (IH, d, J = 3,8

Hz, H19β) ; 1,72-1,85 (2H, m, H2α, H6α) ; 2,14 (6H, s, NB-CH3) ; 2,08 et 2,16 (2H, 2d, J =

12,4 Hz, H29) ; 1,90-2,20 (3H, m, H8β, Hl 5β et H5α) ; 2,37 (IH, m, H2') ; 2,20-2,49 (4H, m,

H17α, H20, Hlβ et H12β) ; 2,56 (IH, d, J = 17,3 Hz, H12α) ; 3,63 (2H, système AB, H36) ;

3,97 (IH, ddd, J = 4,5 Hz, 11.1 Hz et 12.7 Hz, H3α) ; 4,96 (IH, dd, J = 5,6 Hz et 7,5 Hz, H16β) ; 5,08 (IH, d, J = 9,8 Hz, NAH) ; 7,10-7,25 (5H, m, HAr = 38, 39, 40, 41 et 42).

R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

13,7 (C30) ; 17,8 (C18) ; 18,4 (C6) ; 19,5 (C21) ; 19,5 et 19,7 (C3' et C4') ; 20,2 (C28) ; 24,5

(C7) ; 27,2 (C33-35) ; 27,6 (C2) ; 28,4 (Cl) ; 30,9 (C19) ; 34,1 (C9) ; 36,0 (C2') ; 36,8 (ClO) ;

38,6 (C32) ; 40,6 (NB-CH3) ; 41,3 (C8) ; 42,1 (C5) ; 43,2 (C13) ; 43,6 (C15) ; 44,7 (C14) ; 47,4 (C4) ; 50,3 (C3) ; 52,0 (C29) ; 52,9 (C12) ; 54,6 (C36) ; 54,9 (C17) ; 59,5 (C20) ; 79,2

(C16) ; 126,6 (CAr = 40) ; 127,7 et 128,0 (CAr = 38, 39, 40 et 41) ; 139,5 (C37) ; 170,7 (C31) ;

176,0 (Cl') ; 211,4 (CIl).

• Composé 48 : (20S)-3$-isobutyrylamino-20-méthylamino-9,19-cyclo-4θr benzylaminométhyl-4$,14θj-diméthyl-16arpivalyl-5aβ$-preg nan-ll-one 48

À une solution de 100 mg (0,15 mmol, 1,0 éq.) d'imine 19 dans 0,5 ml de méthanol sont ajoutés 12 mg (0,18 mmol, 1,2 éq.) de cyanoborohydrure de sodium et 9 μl (0,16 mmol, 1,05 éq.) d'acide acétique glacial. Après 1 heure d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 30 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x20 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II- III (éluant : dichlorométhane 99 / ammoniaque 40% 1) pour fournir 35 mg de 48 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 35%.

I.R. (diamant) O(Cm ^"1 ) : 3316 (NH et NH-CH3) ; 1721 (C=O ester) ; 1662 et 1532 (C=O et

CONH) ; 1453 (C=C Ar) ; 1159-1029 (C-O).

S.M. (E.S.I.) : m/z : 676,5 ([M+H], 100) ; 586,5 (5) ; 339,3 (25) ; 338,8 (100).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₄₂ H ₆₆ N ₃ O ₄ m/z = 676,5053 ; mesurée : 676,5053.

Composé 49 : (20S)-20-diméthylamino-3$-(isobutyrylamino)-9,19-cyclo-4a- aminomethyl-4$,14a-diméthyl-5a,9$-pregnan-16a-ol-ll-one49

À une suspension de 817 mg (1,38 mmol, 1,0 éq.) d'aminé N-benzylée 46 dans 30 ml de méthanol anhydre dégazé à l'argon, sont ajoutés successivement 408 mg (50 % en masse par rapport à X) de palladium sur charbon à 30% et 435 mg (6,90 mmol, 5,0 éq.) de formate d'ammonium. Après 3 heures d'agitation à 40 ⁰ C, le mélange est filtré sur célite et évaporé sous vide. Le résidu obtenu est alcalinisé avec 40 ml d'une solution de carbonate de sodium à 10% (pH = 8) et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne de silice (éluant : dichlorométhane 96 / méthanol 2 / ammoniac 2) pour fournir 588 mg de 49 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 85% sur deux étapes.

P.F. ( ⁰ C) : 232°C

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3313 (OH, NH) ; 2934 (CH, CH2) ; 1650 (C=O) ; 1650 et 1536 (CONH) ; 1226 et 1094 (C-OH). S. M. (E.S.I.) : m/z : 502,4 ([M + H], 100) ; 503,4 (10) ; 296,7

(15) ; 251,7 ([M + 2H] /2,10) . S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₀ H ₅₂ N ₃ O ₃ m/z = 502,4009 ; mesurée : 502,4008.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,56 (3H, s, H30) ; 0,78 (3H, s, H18) ; 0,80 (3H, d, J = 6,6 Hz, H21) ; 0,87 (IH, m, H6β) ; 0,97 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19α) ; 1,08 et 1,10 (6H, 2d, J = 6,6 Hz, H3' et H4') ; 1,15 (3H, s, H28) ; 1,21- 1,48 (4H, m, Hl α, H7, H2β et H15α) ; 1,49 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19β) ; 1,62 (IH, m, H2α) ; 1,88- 2,00 (5H, m, H15β, Hl 7α,, H6α, H5α et H8β) ; 2,18 (6H, s, NB-CH3) ; 2,24 (IH, d, J = 17,1 Hz, H12β) ; 2,26 (IH, d, J = 13,9 Hz, H29a) ; 2,28 (IH, dq, J = 6,6 Hz, HZ) ; 2,38 (IH, d, J = 13,9 Hz, H29b) ; 2,39 (IH, m, Hlβ) ; 2,44 (IH, d, J = 17,1 Hz, H12α) ; 2,55 (IH, dd, J = 6,6 Hz et 10,9 Hz, H20) ; 3,99 (IH, m, H3α) ; 4,03 (IH, m, H16β) ; 5,13 (IH, d, J = 9,8 Hz, NAH). R.M.N. «C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 9,9 (C21) ; 13,7 (C30) ; 17,8 (C18) ; 18,5 (C6) ; 19,5 et 20,1 (C3' et C4') ; 21,0 (C28) ; 24,6 (C7) ; 27,7 (C2) ; 28,4 (Cl) ; 31,2 (C19) ; 34,4 (C9) ; 35,9 (C2') ; 38,1 (ClO) ; 41,7 (C8) ; 42,0 (C5) ; 42,9 (C15) ; 43,7 (C13) ; 44,5 (C4) ; 46,2 (C29) ; 47,1 (C14) ; 49,5 (C3) ; 51,5 (Cl 2) ; 55,8 (C17) ; 62,0 (C20) ; 78,3 (C 16) ; 176,8 (Cl') ; 211,5 (ClI).

Composé 50 : (20S)-3β-isobutyiylamino-20-cliniéthylamino-9,19-cyclo-4α -aminométhyl- 4β,14α-diméthyl-16α-pivalyl-5α,β-pregnan-ll-one 50

I^ méthode : Voie benzylamine, déprotection sous pression d'hydrogène

À une solution de 82 mg (0,12 mmol, 1,0 éq.) de benzylamine 47 dans 2 ml de méthanol sont ajoutés successivement 40 mg (50% en masse) dliydroxyde de palladium sur charbon. Le pH de la solution est ajusté à 3 avec de l'acide acétique glacial. Après 48 heures d'agitation à température ambiante sous une pression de 2 bar de dihydrogène, dans un appareil de Parr, le mélange est filtré sur célite et les solvants sont évaporés sous vide. Le résidu est alcalinisé avec 20 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x20 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,9 / ammoniaque 40% 0,1) pour fournir 23 mg de 50 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 32%.

2 ^nde méthode : Voie benzylamine, déprotection sous formiate d'ammonium

Sous argon, à une solution de 227 mg (0,33 mmol, 1,0 éq.) de benzylamine 47 dans 5 ml de méthanol sont ajoutés successivement 113 mg (50% en masse) de palladium sur charbon à 30% et 109 mg (1,73 mmol, 5,0 éq.) de formiate d'ammonium. Après 5 heures d'agitation à 65°C, le mélange est filtré sur célite et les solvants sont évaporés sous vide. Le résidu est alcalinisé avec 20 ml d'une solution d'hydrogénocarbonate de sodium à 10% (pH = 8) et extrait avec 3x20 ml de

dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,9 / ammoniaque 40% 0,1) pour fournir 24 mg de 50 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 12%.

3ème méthode : Voie bis(triméthylsilyl)méthylamine

Sous argon, à une solution de 65 mg (0,08 mmol, 1,0 éq.) d'aminé 56 dans 4 ml de méthanol sont ajoutés successivement 371 mg (0,67 mmol, 8,0 éq.) de nitrate de cérium IV ammoniacale. La solution est rouge. Après 4 jours d'agitation à température ambiante, la solution est devenue insolore et le mélange est alcalinisé avec 20 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x25 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3) pour fournir 37 mg de 50 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 55%.

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3320 (NH) ; 1720 (C=O ester) ; 1665 et 1530 (C=O et CONH) ; 1455

(C-H groupes alkyles) ; 1377 (CH ) ; 1159 (C-O). S.M. (E.S.I.) : m/z : 586,4 ([M+H], 100) ; 591,4 (40) ; 559,4 (40) ; 394,6 (40).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₅ H ₆₀ N ₃ O ₄ m/z = 586,4584 ; mesurée : 586,4579.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,66 (3H, s, H30) ; 0,82 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 0,85 (3H, s, Hl 8) ; 1,03 (IH, d, J = 3,6 Hz,

H19a) ; 1,06 (IH, m, H6b) ; 1,14 et 1,15 (6H, 2d, J = 6,8 Hz, H3' et H4 ⁵ ) ; 1,17 (3H, s, H28) ; 1,19 (9H, s, H33, H34 et H35) ; 1,24 (IH, m, HIa) ; 1,35 (IH, bd, J = 14,3 Hz, H15a) ; 1,36 (IH, m, H7a) ; 1,43 (IH, m, H7b) ; 1,49 (IH, m, H2b) ; 1,55 (IH, d, J = 3,6 Hz, H19b) ; 1,68 (IH, m,

H2a) ; 1,77 (IH, m, H6a) ; 1,98 (IH, m, H15b) ; 2,02 (IH, m, H5a) ; 2,05 (IH, m, H8b) ; 2,13

(6H, s, NB-CH3) ; 2,24 (IH, d, J = 12,3 Hz, H29a) ; 2,25 (IH, dd, J = 5,3 Hz et 11,2 Hz, H17a) ;

2,28 (IH, d, 12,3 Hz, H29b) ; 2,38 (IH, d, J = 17,0 Hz, H12b) ; 2,38 (IH, m, HIb) ; 2,42 (IH, dq, J = 6,8 Hz, H2 ⁵ ) ; 2,44 (IH, dd, J = 6,2 Hz et 11,2 Hz, H20) ; 2,54 (IH, d, J = 17,0 Hz, H12a) ;

3,98 (IH, ddd, J = 4,0 Hz, 10,3 Hz et 10,8 Hz, H3a) ; 5,05 (IH, dd, J = 5,3 Hz et 7,8 Hz, Hl 6b) ;

5,24 (IH, d, J = 8,9 Hz, NAH).

R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

9,9 (C21) ; 13,9 (C30) ; 17,8 (C18) ; 18,6 (C6) ; 19,5 et 19,8 (C3' et C4 ⁵ ) ; 20,2 (C28) ; 24,7 (C7) ; 27,2 (C33-35) ; 27,6 (CZ) ; 28,4 (Cl) ; 31,5 (Cl 9) ; 34,0 (C9) ; 36,0 (C2 ⁵ ) ; 38,0 (ClO) ; 38,6 (C32) ; 40,6 (NB-CH3) ; 41,4 (C8) ; 41,8 (C5) ; 43,6 (C15) ; 43,7 (C13) ; 44,7 (C14) ; 44,9 (C29) ; 47,4 (C4) ; 50,4 (C3) ; 52,0 (C12) ; 54,9 (C17) ; 59,5 (C20) ; 79,2 (C16) ; 170,7 (C31) ; 177,9 (Cl") ; 211,5 (CIl).

Composé 51 : (20S)-20-diméthylamino-9,19-cyclo-4$,14a-diméthyl-(2-isopr opyl-5$- méthyl-l,4,5,6-tétrahydro-pyrimidin-5-yl)-5a,9$-pregnan-16 a-ol-ll-one51

À une solution de 537 mg (1,07 mmol, 1,0 éq.) d'aminé 49 dans 50 ml de n-butanol est ajouté 299 μl (2,14 mmol, 2,0 éq.) de triéthylamine. Après 16 heures d'agitation à 120 ⁰ C, le mélange évaporé sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 95 / méthanol 5) pour fournir 331 mg de 51 sous forme d'un solide jaune avec un rendement de 64%.

P.F. ( ⁰ C) : 255°C

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3375-3143 (OH, NH) ; 2932 (CH, CH2) ; 1662 (C=O) ; 1629 et 1530 (C- N, C=N) ; 1039 (C-OH).

S. M. (E.S.I.) : m/z : 484,4 ([M + H], 100) ; 485,4 (5) ; 439,3

(5) ; 242,7 ([M + 2H/2], 30), 243,2 (5).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₀ H ₅₀ N ₃ O ₂ m/z = 484,3903 ; mesurée : 484,3904. R.M.N. ¹ H (500 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,67 (3H, s, H30) ; 0,77 (3H, s, H18) ; 0,80 (3H, d, J = 6,3 Hz, H21) ; 1,00 (IH, m, H6β) ; 1,01 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19α) ; 1,06 et 1,07 (6H, 2d, J = 6,9 Hz, H3' et H4') ; 1,15 (3H, s, H28) ; 1,16-

1,37 (3H, m, Hlα et H7) ; 1,42 (IH, dd, J = 3,2 Hz et 14,2 Hz, H15α) ; 1,49 (IH, m, H2β) ; 1,49 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19β) ; 1,62 (2H, m, H6α et H2α) ; 1,89-1,99 (3H, m, H15β, H17α et H5α) ; 2,03 (IH, m, H8β) ; 2,18 (6H, s, NB-CH3) ; 2,25 (IH, d, J = 17,0 Hz, H12β) ; 2,30 (IH, dq, J = 6,6 Hz, HZ) ; 2,31 (IH, m, Hlβ) ; 2,42 (IH, d, J = 17,0 Hz, H12α) ; 2,55 (IH, dd, J = 6,3 Hz et 10,8 Hz, H20) ; 2,92 (IH, d, J = 13,0 Hz, H29a) ; 3,10 (IH, d, J = 13,0 Hz, H29b) ; 3,11 (IH, m, H3α) ; 4,02 (IH, ddd, J = 2,3 Hz, 7,6 Hz et 14,2 Hz, Hl 6β) ; 4,23 (IH, bs, NcH/ NAH en échange).

R.M.N. ¹³ C (125,8 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

9,9 (C21) ; 11,6 (C30) ; 17,8 (Cl 8) ; 18,2 (C6) ; 20,5 (C3' et C4') ; 20,6 (C28) ; 24,2 (C7) ; 27,4 (C2 et Cl) ; 30,3 (C19) ; 34,3 (C5) ; 34,8 (C2') ; 34,9 (C9) ; 38,0 (ClO) ; 41,0 (C8) ; 42,7 (C 15) ; 44,6 (C 13) ; 47,2 (C14) ; 47,3 (C4) ; 51,5 (C 12) ; 54,2 (massif à faible intégration C3) ; 55,9 (C 17) ; 58,3 (massif à faible intégration C29) ; 62,0 (C20) ; 78,3 (Cl 6) ; 160,6 (Cl') ; 210,9 (ClI).

Composé 52 : (20S)-20-climéthylamino-9,19-cyclo-4β,14α-diméthyl-16α- pivalyl-(2'- isopfopyl-l'/3',3^9-tétfahydfopyfimidine)-5α, β-pregnan-11-one 52

I^ méthode : Formiate d'ammonium

Sous argon, à une solution de 66 mg (0,10 mmol, 1,0 éq.) de benzylamine 47 dans 2 ml de méthanol sont ajoutés successivement 66 mg (100% en masse) de palladium sur charbon à

30% et 62 mg (1,00 mmol, 10,0 éq.) de formiate d'ammonium. Après 16 heures d'agitation à 70 ⁰ C, le mélange est filtré sur célite et les solvants sont évaporés sous vide. Le résidu est alcalinisé avec 20 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 93,9 / ammoniaque 40% 0,1 / MeOH 6) pour fournir 18 mg de 52 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 33%.

2nde méthode : en solution dans le n-butanol

À une solution de 50 mg (0,08 mmol, 1,0 éq.) d'aminé 50 dans 2 ml de n-butanol est ajouté 24 ml (0,17 mmol, 2,0 éq.) de triéthylamine. Après 16 heures d'agitation à 120 ⁰ C, le mélange évaporé sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 95 / méthanol 5) pour fournir 29,5 mg de 52 sous forme d'un solide jaune avec un rendement de 61%.

P.F. ( ⁰ C) : 146

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 2932-2967 (CH) ; 1716 (C=O ester) ; 1663 et 1631 (C=O et C=N) ; 1459 (C-H groupes alkyles) ; 1366 (CH ₃ ) ; 1160 (C-O). S.M. (E.S.I.) : m/z : 568,4 ([M+H], 100) ; 569,4 (10) ; 484,4 (5). S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₅ H ₅₈ N ₃ O ₃ m/z = 568,4478 ; mesurée : 568,4507.

Remarque : Les téttahydro-pyrimidines sont en équilibre avec chacune de leur forme tautomère. En effet, l'étude des spectres RMN ¹³ C montre que les carbones C-3, C-4 et C-29 résonnent sous forme de massifs de très faible intensité. Cependant, le déplacement chimique de ces carbones est déterminé grâce à leurs corrélations avec les protons du méthyle en position 30, sur le spectre HMBC.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,74 (3H, s, H30) ; 0,83 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 0,86 (3H, s, Hl 8) ; 1,05 (IH, m, H6b) ; 1,13 et 1,14 (6H, 2d, J = 7,0 Hz, H3' et H4 ⁵ ) ; 1,16 (3H, s, H28) ; 1,18 (9H, s, H33, H34 et H35) ; 1,13 (IH, m, H19a) ; 1,25 (IH, m, HIa) ; 1,28 (IH, m, H7a) ; 1,31 (IH, m, H7b) ; 1,37 (IH, bd, J = 14,5 Hz, H15a) ; 1,45 (IH, m, H2b) ; 1,50 (IH, m, H2a) ; 1,65 (IH, d, J = 4,0 Hz, H19b) ; 1,67 (IH, m, H6a) ; 1,99 (IH, m, H5a) ; 2,02 (IH, m, H15b) ; 2,10 (IH, m, H8b) ; 2,14 (6H, s, NB- CH3) ; 2,25 (IH, dd, J = 5,6 Hz et 11,2 Hz, H17a) ; 2,37 (IH, dq, J = 7,0 Hz, H2 ⁵ ) ; 2,38 (IH, m, HIb) ; 2,43 (IH, J = 16,9 Hz, H12b) ; 2,47 (IH, dd, J = 6,4 Hz et 11,2 Hz, H20) ; 2,53 (IH, d, J = 16,9 Hz, H12a) ; 2,97 (IH, d, J = 13,0 Hz, H29a) ; 2,95 (IH, m, H3a) ; 3,16 (IH, d, J = 13,0 Hz, H29b) ; 5,06 (IH, dd, J = 5,6 Hz et 7,7 Hz, Hl 6b). R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

9,9 (C21) ; 11,6 (C30) ; 17,8 (C18) ; 18,2 (C6) ; 19,4 et 20,5 (C3' et C4 ⁵ ) ; 20,6 (C28) ; 24,2 (C7) ; 27,2 (C33-35) ; 27,3 (CZ) ; 27,3 (Cl) ; 30,2 (C19) ; 33,9 (C5) ; 33,9 (C9) ; 35,0 (C2 ⁵ ) ; 38,1 (ClO) ; 38,6 (C32) ; 40,6 (NB-CH3) ; 40,7 (C8) ; 43,4 (Cl 5) ; 44,8 (Cl 4) ; 47,3 (Cl 3) ; 47,4 (C4) ; 51,9 (Cl 2) ; 54,2 (C3) ; 55,0 (Cl 7) ; 58,3 (C29) ; 59,5 (C20) ; 79,1 (Cl 6) ; 160,5 (Cl ¹ ) ; 177,8 (C31) ; 210,7 (CIl).

• Composé 54 : (20S)-3$4sobutyryfamino-20-diméthylamino-9,19-cyclo-4$,14a- diméthyl-4a-(Bis-(triméthylsilanyl)méthylimino)méthyl-16 a-pivalyl-5a,9$- pregnan-11-one 54

À une solution de 123 mg (0,21 mmol, 1,0 éq.) d'aldéhyde 18 dans 0,7 ml de dichlorométhane sont ajoutés 101 mg de tamis moléculaire 4 Â activé (83% en masse par rapport au produit de départ) et 53 mg (0,28 mmol, 1,3 éq.) de bis(triméthylsilyl)méthylamine. Après 24 heures d'agitation à 65°C, la solution est filtrée sur célite et évaporée sous vide, pour fournir 151 mg de 54 sous forme d'une poudre jaune avec un rendement de 97%.

I.R. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 2959 (CH, CH2) ; 1720 (C=O ester) ; 1668 et 1526 (C=O, C=N et

CONH) ; 1030 (C-O) ; 836 (Si-C). S.M. (E.S.I.) : m/z : 742,5 ([M+H], 100) ; 743,5 (40) ; 744,5 (5) ; 371,8 ([M+2H]/2, 80) ; 372,3

(35) ; 372,8 (10).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₄₂ H ₇₆ N ₃ O ₄ Si ₂ m/z = 742,5374 ; mesurée : 742,5353.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,00 (18H, s, H37-42) ; 0,75 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ;

0,76 (3H, s, Hl 8) ; 0,91 (3H, s, H30) ; 0,92 (IH, m, H6β) ; 0,98 (IH, m, H19β) ; 0,99 et 1,02 (6H, 2d, J = 7,0 Hz, H3' et H4') ; 1,07 (3H, s, H28) ; 1,11 (9H, s, H33-35) ; 1,16-1,40 (5H, m, Hlα,

H7α, H15α, H7β et H2β) ; 1,51 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19α) ; 1,59 (IH, s, H36) ; 1,68 (IH, m, H2α) ; 1,86-2,02 (4H, m, H6α, H8β, Hl 5β et H5α) ; 2,05 (6H, bs, NB-CH3) ; 2,08-2,20 (2H, m, H2' et Hl la) ; 2,32 (IH, d, J = 17,0 Hz, H12β) ; 2,33 (IH, m, Hlβ) ; 2,38 (IH, dq, J = 6,4 Hz et 11,8 Hz, H20) ; 2,48 (IH, d, J = 17,0 Hz, H12α) ; 3,89 (IH, ddd, J = 3,4 Hz, 9,8 Hz et 9,8 Hz, H3α) ; 4,96 (IH, dd, J = 5,3 Hz, 7,7 Hz, H16β) ; 5,29 (IH, d, J = 8,3 Hz, NAH) ; 7,19 (IH, s, H29).

R.M.N. «C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm : -1,1 et -0,9 (C37-42) ; 10,1 (C21) ; 11,3 (C30) ; 17,9 (Cl 8) ; 18,9 et 19,5 (C3' et C4') ; 20,2 (C6) ; 20,5 (C28) ; 24,4 (C7) ; 27,3 (C33-35) ; 27,4 (C2) ; 27,8 (Cl) ; 29,7 (C19) ; 31,7 (C36) ; 34,2 (C9) ; 35,8 (C2') ; 37,7 (ClO) ; 38,7 (C32) ; 40,8 (NB-CH3) ; 41,1 (C8) ; 43,5 (C15) ; 44,9 (C13) ; 45,5 (C5) ; 47,5 (C14) ; 48,4 (C4) ; 52,1 (C12) ; 53,9 (C3) ; 55,1 (C17) ; 59,7 (C20) ; 79,3 (C16) ; 164,7 (C29) ; 176,3 (C31) ; 178,0 (Cl') ; 210,8 (ClI).

• Composé 55 : (20S)-3β-isobutyiylamino-20-diméthylamino-9,19-cyclo-4β,1 4α- climéthyl-4α-(Bis-(triméthylsilanyl)méthylamino)méthyl- 5α,9β-pfegnan-16α-ol- 11-one 55

Sous argon, à une solution de 500 mg (0,92 mmol, 1,0 éq.) d'aldéhyde 16-0-acétylé 14 dans 0,5 ml de dichlorométhane sont ajoutés 415 mg de tamis moléculaire 4 Â activé (83% en masse par rapport au produit de départ) et 210 mg (1,20 mmol, 1,3 éq.) de bis(triméthylsilyl)méthylamine. Après 3 jours d'agitation à 65°C, la solution est filtrée et évaporée sous vide. À une solution du résidu obtenu dans 8 ml de méthanol sont ajoutés 138 mg (2,08 mmol, 2,3 éq.) de cyanoborohydrure de sodium et de 150 μl (2,62 mmol, 2,8 éq.) d'acide acétique glacial. Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 30 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10), ce qui saponifie le groupement acétyle en 16 et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 95 / méthanol 5) pour fournir 137 mg de 55 sous forme d'une poudre ocre avec un rendement de 25% sur trois étapes.

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3310 (OH, NH) ; 2948 (CH, CH2) ; 1660 et 1535 (C=O et CONH) ; 1094 (C-O) ; 837 (Si-C).

S.M. (E.S.I.) : m/z : 660,5 ([M+H], 40) ; 661,5 (10) ; 330,7 ([M+2H]/2, 100) ; 331,3 (35) ; 331,8 (5). S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₇ H ₇₀ N ₃ O ₃ Si ₂ m/z = 660,4956 ; mesurée : 660,4974.

R.M.N. ¹ H (500 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,04 et 0,06 (18H, 2s, H37-42) ; 0,59 (3H, s, H30) ; 0,80 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 0,82 (3H, s, Hl 8) ; 0,88 (IH, m, H6β) ; 1,00 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19β) ; 1,13 et 1,14 (6H, 2d, J = 6,8 Hz, H3' et H4') ; 1,21 (3H, s, H28) ; 1,24 (IH, s, H36) ; 1,26 (IH, m, Hlα) ; 1,40-1,53 (4H, m, H7α, H15α, H7β et H2β) ; 1,54 (IH, d,J = 3,8 Hz, H19α) ; 1,67 (IH, m, H2α) ; 1,98-2,06 (3H, m, H6α, H15β et H17α) ; 2,05 (IH, d, 12,9 Hz, H29a) ; 2,13 (6H, bs, NB- CH3) ; 2,22-2,34 (3H, m, H8β, H5α et Hlβ) ; 2,28 (IH, d, J = 17,0 Hz, H12β) ; 2,31 (IH, dq, J= 6,8 Hz et 11,2 Hz, H2') ; 2,50 (IH, d, J = 17,0 Hz, Hl 2α) ; 2,64 (IH, m, H20) ; 2,68 (IH, d, J = 12,9 Hz, H29b) ; 4,00 (IH, ddd, J = 4,1 Hz, 10,2 Hz et 11,0 Hz, H3α) ; 4,12 (IH, m, H16β) ; 5,13 (IH, d, J = 9,8 Hz, NAH). R.M.N. ¹³ C (125,8 MHz, CDCl ₃ ), δppm : -0,2 et 0,7 (C37-42) ; 10,2 (C21) ; 13,8 (C30) ; 18,0 (Cl 8) ; 19,0 (C6) ; 20,0 (C3' et C4') ; 20,8 (C28) ; 24,1 (Cl) ; 27,8 (Cl) ; 28,7 (C2) ; 30,3 (Cl 9) ; 34,9 (C9) ; 36,1 (C2') ; 38,4 (ClO) ; 41,2 (C8) ; 41,7 (C5) ; 41,9 (C36) ; 43,1 (C4) ; 44,0 (Cl 5) ; 44,8 (C13) ; 47,5 (C 14) ; 50,5 (C3) ; 51,7 (C 12) ; 56,1 (C 17) ; 58,5 (C29) ; 59,7 (C20) ; 79,1 (C 16) ; 176,3 (Cl') ; 211,5 (CIl).

• Composé 56 : (20S)-3$4sobutyryfamino-20-diméthylamino-9,19-cyclo-4$,14a- diméthyl-4a-(Bis-(triméthylsihnyl)méthylamino)méthyl-16a -pivalyl-5a,%- pregnan-11-one 56

À une solution de 150 mg (0,20 mmol, 1,0 éq.) d'imine 54 dans 0,7 ml de méthanol sont ajoutés 41 mg (0,61 mmol, 3,1 éq.) de cyanoborohydrure de sodium et de 35 μl (0,60 mmol, 3,0 éq.) d'acide acétique glacial. Après 44 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 30 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x25 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,7 / méthanol 0,3) pour fournir 84 mg de 56 sous forme d'une poudre ocre avec un rendement de 54% sur deux étapes.

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3307 (NH), 2959 (CH, CH2) ; 1722 (C=O ester) ; 1658 et 1528 (C=O et CONH) ; 1095 (C-O) ; 838 (Si-C).

S.M. (E.S.I.) : m/z : 744,6 ([M+H], 70) ; 745,6 (30) ; 746,6 (5) ; 372,8 ([M+2H]/2, 100) ; 373,3 (70) ; 373,8 (15).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₄₂ H ₇₈ N ₃ O ₄ Si ₂ m/z = 744,5531 ; mesurée : 744,5562. R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,04 et 0,05 (18H, 2s, H37-42) ; 0,60 (3H, s, H30) ; 0,83 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 0,85 (3H, s, Hl 8) ; 0,90 (IH, m, H6β) ; 1,02 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19β) ; 1,13 et 1,14 (6H, 2d, J = 6,8 Hz, H3' et H4') ; 1,15 (3H, s, H28) ; 1,19 (9H, s, H33-35) ; 1,24 (IH, s, H36) ; 1,22-1,52 (5H, m, Hl α, H7α, H15α, H7β et H2β) ; 1,57 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19α) ; 1,67 (IH, m, H2α) ; 1,98-2,08 (4H, m, H6α, H8β, H15β et H5α) ; 2,01 (IH, d, 12,8 Hz, H29a) ; 2,13 (6H, bs, NB-CH3) ; 2,22-2,34 (3H, m, H2', Hlβ et H17α) ; 2,38 (IH, d, J = 17,2 Hz, H12β) ; 2,46 (IH, dq, J = 6,4 Hz et 11,0 Hz, H20) ; 2,55 (IH, d, J = 17,2 Hz, H12α) ; 2,69 (IH, d, J = 12,8 Hz, H29b) ; 4,01 (IH, ddd, J = 4,0 Hz, 10,9 Hz et 11,0 Hz, H3α) ; 5,05 (IH, dd, J = 5,5 Hz, 7,7 Hz, H16β) ; 5,12 (IH, d, J = 10,0 Hz, NAH).

R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm : -0,3 et 0,7 (C37-42) ; 10,1 (C21) ; 13,7 (C30) ; 17,9 (C18) ; 18,9 (C6) ; 19,6 et 20,0 (C3' et C4') ; 20,0 (C28) ; 24,1 (C7) ; 27,3 (C33-35) ; 27,8 (Cl) ; 28,7 (C2) ; 30,0 (C19) ; 34,4 (C9) ; 36,1 (C2') ; 38,3 (ClO) ; 38,7 (C32) ; 40,8 (C36 et NB-CH3) ; 41,6 (C8) ; 41,9 (C5) ; 43,6 (C15) ; 44,0 (C4) ; 45,0 (C13) ; 47,6 (C14) ; 50,5 (C3) ; 52,2 (C12) ; 55,1 (C17) ; 58,5 (C29) ; 59,7 (C20) ; 79,4 (Cl 6) ; 176,3 (Cl') ; 178,0 (C31) ; 211,3 (ClI).

Composé 57 : (20S)-3^>-isobutyrylamino-20-diméthylamino-9,19-cyclo-4^ >,14a- diméthyl-4a-(Bis-(triméthylsilanyl)méthylamino)méthyl-16 a-(tert-Butyl-diméthyl- silanyloxy)-5a,9$-pregnan-ll-one 57

Sous argon, à une solution de 93 mg (0,14 mmol, 1,0 éq.) d'aminé 55 dans 2,0 ml de tétrahydrofurane sont ajoutés 276 mg (0,39 mmol, 2,8 éq.) d'imidazole et 36 mg (0,23 mmol, 1,7 éq.) de chlorure de &rô-butyldiméthylsilyle. Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 40 ml d'une solution d'hydrogénocarbonate de sodium à 10% (pH = 8) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 99,9 / méthanol 0,1) pour fournir 84 mg de 57 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 77%.

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3391 et 3112 (NH) ; 1666, 1653 et 1521 (C=O et CONH) ; 1093 (C-O) ; 1028 (Si-O-C) ; 833 (Si-C, Si-O).

S.M. (E.S.I.) : m/z : 774,6 ([M+H], 10) ; 387,8 ([M+2H]/2, 100) ; 388,3 (50) ; 388,8 (15). S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₄₃ H ₈₄ N ₃ O ₃ Si ₃ m/z = 774,5821 ; mesurée : 774,5862.

R.M.N. ¹ H (500 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,01 et 0,02 (6H, 2s, H31-32) ; 0,05 et 0,07 (18H, 2s, H38-

43) ; 0,60 (3H, s, H30) ; 0,79 (3H, s, Hl 8) ; 0,80 (3H, d, J = 6,3 Hz, H21) ; 0,88 (9H, s, H34-36) ;

0,90 (IH, m, H6β) ; 0,98 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19β) ; 1,15 et 1,16 (6H, 2d, J = 6,9 Hz, H3' et H4') ;

1,20 (3H, s, H28) ; 1,25 (IH, s, H37) ; 1, 27 (IH, m, Hlα) ; 1,39 (IH, m, H15α) ; 1,43-1,48 (3H, m, H7α, H7β et H2β) ; 1,56 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19α) ; 1,67 (IH, m, H2α) ; 1,81 (IH, dd, J = 7,6

Hz et 13,6 Hz ; Hl 5β ) ; 2,01 (IH, dd, J = 9,5 Hz et 8,8 Hz, H8β) ; 2,06 (IH, m, H5α, Hl 7α) ;

2,08 (IH, d, 12,9 Hz, H29a) ; 2,13 (6H, bs, NB-CH3) ; 2,19-2,22 (2H, m, Hl β et H6α) ; 2,31 (IH, dq, J = 6,9 Hz, H2') ; 2,34 (IH, d, J = 17,0 Hz, Hl 2β) ; 2,41 (IH, dq, J = 6,3 Hz et 12,0 Hz,

H20) ; 2,52 (IH, d, J = 17,0 Hz, H12α) ; 2,69 (IH, d, J = 12,9 Hz, H29b) ; 4,01 (IH, ddd, J = 4,1 Hz, 10,1 Hz et 12,2 Hz, H3α) ; 4,14 (IH, dd, J = 4,7 Hz, 7,6 Hz, Hl 6β) ; 5,10 (IH, d, J = 9,8 Hz,

NAH).

R.M.N. «C (125,7 MHz, CDCl ₃ ), δppm : -0,2 et 0,7 (C37-42) ; 10,3 (C21) ; 13,8 (C30) ; 17,9

(Cl 8) ; 19,0 (C6) ; 19,6 (C28) ; 20,0 (C3' et C4') ; 24,1 (C7) ; 26,1 (C34-36) ; 27,8 (Cl) ; 28,7 (C2) ;

29,4 (C19) ; 34,6 (C9) ; 36,1 (C2') ; 37,9 (ClO) ; 40,8 (C4 et NB-CH3) ; 41,4 (C37 et C5) ; 41,9 (C8) ; 44,0 (C13) ; 45,3 (C14) ; 46,0 (C15) ; 50,6 (C3) ; 52,5 (Cl 2) ; 58,5 (C29) ; 59,5 (Cl 7) ; 60,2

(C20) ; 76,9 (C16) ; 176,3 (Cl') ; 212,1 (ClI).

• Composé 59 : (20S)-16α-acétyl-3β-((S)-2-méthylbutyiylamino)-20-dimét hylamino- 9,19-cyclo-4α-formyl-4β,14α-diméthyl-5α, 9β-pr egnan-11-one 59

À une solution de 496 mg (0,96 mmol, 1,0 éq.) d'amide 6e dans un mélange de 48 ml de dichlorométhane et de 14 ml de pyridine sont ajoutés 136 μl (1,44 mmol, 1,5 éq.) d'anhydride acétique. Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est co-évaporé avec du 1,2-dichloroéthane. Le résidu est alcalinisé avec 40 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

À une solution de 519 mg (0,93 mmol, 1,0 éq.) du résidu précédemment obtenu dans 30 ml de dichlorométhane sont ajoutés 511 mg (1,21 mmol, 1,3 éq.) de periodinane de Dess-Martin. Après 1 heure d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 40 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 95 / méthanol 5) pour fournir 500 mg de 59 sous forme d'une poudre incolore après trituration dans l'acétone et avec un rendement de 91%, sur deux étapes.

P.F. ( ⁰ C) : 265°C

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3254 (OH, NH) ; 2926 (CH, CH2) ; 2856 (CH=O) ; 1718 (C=O ester) ; 1666 (C=O) ; 1638 et 1538 (CONH) ; 1255, 1017 (C-OH). S. M. (E.S.I.) : m/z : 557,4 ([M + H], 100) ; 558,4 (15) ; 515,4

(20). S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₃ H ₅₃ N ₂ O ₅ m/z = 557,3954 ; mesurée : 557,3948. R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,81 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 0,83 (3H, s, Hl 8) ; 0,84 (3H, t, J = 7,3 Hz, H4') ; 0,92 (3H, s, H30) ; 1,06 (IH, m, H6β) ; 1,06 (3H, d, J= 6,8 Hz, H5') ; 1,07 (IH, d, J = 3,6 Hz, H19α) ; 1,18 (3H, s, H28) ; 1,24-1,59 (5H, m, Hl α, H2β, H7β, H7α et H15α) ; 1,58 (IH, d, J = 4,2 Hz, H19β) 1,73- 1,82 (3H, m, H3' et H2α) ; 1,99 (3H, s, H32) ; 2,04 (IH, m, H15β) ; 2,13 (6H, s, NB-CH3) ; 1,95- 2,16 (4H, m, H2', H6α, H5α et H8β) ; 2,22 (IH, dd, J = 6,2 Hz et 10,0 Hz, H17α) ; 2,38 (IH, d, J = 17,0 Hz, H12β) ; 2,45 (2H, m, H20 et Hlβ) ; 2,56 (IH, d, J = 17,1 Hz, H12α) ; 4,34 (IH, ddd, J = 4,1 Hz, 8,9 Hz et 12,4 Hz, H3α) ; 5,11 (IH, dd, J = 6,2 Hz et 8,0 Hz, Hl 6β) ; 5,28 (IH, d, J = 9,1 Hz, NAH) ; 9,41 (IH, s, H29). R.M.N. «C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

7,8 (C30) ; 10,0 (C21) ; 11,8 (C4') ; 17,4 (C5') ; 18,0 (C18) ; 19,5 (C28) ; 21,1 (C6) ; 21,2 (C31) ; 24,2 (C7) ; 27,0 (C2) ; 27,5 (C3') ; 29,6 (Cl) ; 29,6 (C19) ; 33,7 (C9) ; 36,0 (ClO) ; 40,4 (NB-CH3) ; 41,3 (C2') ; 41,8 (C5) ; 43,0 (C15) ; 43,4 (C8) ; 44,6 (C13) ; 47,5 (CH) ; 50,0 (C3) ; 51,9 (C12) ; 55,3 (C17) ; 56,9 (C4) ; 59,6 (C20) ; 78,9 (C 16) ; 170,7 (C31) ; 175,9 (Cl') ; 203,5 (C29) ; 211,6 (ClI).

Composé 60 : (20S)-20-diméthylamino-3$-((S)-2-méthylbutyrylamino)-9,19- cyclo- 4a-formyl-4$, 14a-diméthyl-5a, 9 $-pregnan-16a-ol-l l-one60

À une solution de 1127 mg (2,02 mmol, 1,0 éq.) d'amide 59 dans 26 ml de méthanol préalablement chauffée à 40 ⁰ C pour une dissolution totale, est ajoutée une solution de 2542 mg (30,30 mmol, 15,0 éq.) d'hydrogénocarbonate de sodium et 2138 mg (20,20 mmol, 10,0 éq.) de carbonate de sodium dans 28 ml d'eau permutée. Un précipité se forme. Après 6 heures d'agitation à 60 ⁰ C, le mélange est dilué avec 50 ml d'eau et extrait avec 3x50 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 98 / méthanol 2) pour fournir 710 mg de 60 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 68% sur deux étapes.

P.F. ( ⁰ C) : 265°C

Analyse élémentaire : pour C33H52N2O5

Calculée pour C33H52N2O5 %: C 71,19 H 9,41 N 5,03 O 14,37 Trouvée %: C H N O

I.R. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3287 (OH, NH) ; 2935 (CH, CH2) ; 2709 (CH=O) ; 1717 (C=O aldéhyde) ; 1659 (C=O) ; 1640 et 1548 (CONH) ; 1229 et 1093 (C-OH).

S. M. (E.S.I.) : m/z : 515,4 ([M + H], 100) ; 516,4 (5).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C31H51N2O4 m/z = 515,3849 ; mesurée : 515,3831. R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,74 (3H, s, Hl 8) ; 0,77 (3H, t, J = 7,5 Hz, H4') ; 0,81 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 0,87 (3H, s, H30) ; 0,98 (IH, m, H6β) ; 1,00 (3H, d, J= 6,8 Hz, H5') ; 1,01 (IH, m, H19α) ; 1,18 (3H, s, H28) ; 1,24- 1,59 (7H, m, Hlα, H2β, H3', H7β, H7α et H15α) ; 1,50 (IH, d, J = 4,1 Hz, H19β) ; 1,69-1,78 (2H, m, H8β et H2α) ; 1,90 (IH, dd, J = 7,4 Hz et 10,8 Hz, Hl 7α) ; 1,95-2,16 (4H, m, H2', H6α, H5α et Hl 5β) ; 2,18 (6H, s, NB-CH3) ; 2,25 (IH, d, J = 17,3 Hz, Hl 2β) ; 2,36 (IH, ddd, J = 3,0 Hz, 4,7 Hz et 12,6 Hz, Hlβ) ; 2,47 (IH, d, J = 17,3 Hz, H12α) ; 2,55 (IH, dd, J = 6,8 Hz et 10,8 Hz, H20) ; 4,03 (IH, ddd, J = 2,8 Hz, 7,4 Hz et 10,0 Hz, H16β) ; 4,28 (IH, ddd, J = 4,2 Hz, 8,7 Hz et 12,4 Hz, H3α) ; 5,28 (IH, d, J = 9,1 Hz, NAH) ; 9,36 (IH, s, H29). R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

7,7 (C30) ; 10,0 (C21) ; 11,7 (C4') ; 17,3 (C5') ; 17,9 (C18) ; 20,7 (C28) ; 21,0 (C6) ; 24,0 (Cl) ; 27,3 (Cl) ; 27,5 (C3' et C2) ; 29,6 (C19) ; 34,0 (C9) ; 35,8 (ClO) ; 41,3 (C5) ; 41,7 (C8) ; 41,8 (NB-CH3) ; 42,6 (C15) ; 43,2 (C2') ; 44,4 (C13) ; 47,1 (Cl 4) ; 49,8 (C3) ; 51,4 (C12) ; 55,8 (C17) ; 56,8 (C4) ; 62,0 (C20) ; 78,2 (C16) ; 175,8 (Cl') ; 203,4 (C29) ; 210,9 (ClI).

Composé 61 : (20S)-20-diméthylamino-3$-((S)-2-méthylbutyrylamino)-9,19- cyclo- 4a-benzyliminomethyl-4β,14a-diméthyl-Sa,9β-pregnan-16a-ol -ll-one 61

Sous argon, à une suspension de 650 mg (1,26 mmol, 1,0 éq.) d'aldéhyde 60 et de 540 mg de sulfate de magnésium anhydre dans 5 ml de dichlorométhane sont ajoutés 179 μl (1,63 mmol, 1,3 éq.) de benzylamine. Après 10 heures d'agitation à 55°C, la solution est filtrée sur célite et évaporée sous vide pour fournir 793 mg de 61 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement quantitatif.

I.R. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3386 (OH, NH) ; 2958 (CH, CH2) ; 1649 (C=O, C=N) ; 1649 et 1529

(CONH) ; 1451 (C=C Ar) ; 1227 et 1091 (C-OH).

S . M . (E . S . I .) : m / z : 604 , 4 ( [ M + H ] , 1 00) ; 605 , 4 (55) ; 5 90 , 4 (30) .

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₈ H ₅₈ N ₃ O ₃ m/z = 604,4478 ; mesurée : 604,4468.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,73 (3H, t, J = 7,5 Hz, H4') ; 0,77 (3H, s, Hl 8) ; 0,81 (3H, d, J = 6,6 Hz, H21) ; 0,93 (IH, m,

H6β) ; 0,95 (3H, d, J= 6,8 Hz, H5') ; 0,98 (3H, s, H30) ; 1,01 (IH, d, J = 4,3 Hz, H19α) ; 1,16 (3H, s, H28) ; 1,24-1,59 (7H, m, Hl α, H2β, H3', H7β, H7α et H15α) ; 1,52 (IH, d, J = 4,3 Hz, H19β) ;

1,75 (IH, m, H2α) ; 1,82-2,07 (6H, m, Hl 5β, Hl 7α, H2', H6α, H5α et H8β) ; 2,19 (6H, s, NB-

CH3) ; 2,24 (IH, d, J = 17,3 Hz, H12β) ; 2,31 (IH, ddd, J = 3,2 Hz, 3,3 Hz et 13,2 Hz, Hlβ) ; 2,46 (IH, d, J = 17,3 Hz, H12α) ; 2,56 (IH, dd, J = 6,6 Hz et 12,0 Hz, H20) ; 4,03 (2H, m, H3α et Hl 6β) ; 4,43 et 4,50 (2H, 2d système AB, 14,1 Hz, H31) ; 5,25 (IH, d, J = 9,2 Hz, NAH) ; 7,14- 7,25 (5H, m, HAr=33-37) ; 7,50 (IH, s, H29). R.M.N. «C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

10,0 (C30) ; 10,3 (C21) ; 11,8 (C4') ; 17,1 (C5') ; 17,9 (C18) ; 20,6 (C6) ; 20,7 (C28) ; 24,2 (C7) ; 27,2 (C3') ; 27,5 (Cl) ; 27,7 (C2) ; 29,8 (C19) ; 34,3 (C9) ; 36,7 (ClO) ; 41,3 (C8) ; 42,7 (C15) ; 43,3 (C2') ; 44,5 (C13) ; 44,7 (C5) ; 47,1 (CH) ; 49,9 (C4) ; 51,4 (C12) ; 52,2 (C3) ; 55,8 (C17) ; 62,1 (C20) ; 64,7 (C31) ; 78,2 (C 16) ; 126,7 (C35) ; 127,7 et 128,3 (C34-36 et C33-37) ; 139,5 (C32) ; 170,9 (C29) ; 175,6 (Cl') ; 211,0 (CIl).

Composé 62 : (20S)-20-diméthylamino-3$-((S)-2-méthylbutyrylamino)-9,19- cyclo- 4a-benzylaminomethyl-4β,14a-diméthyl-Sa,9β-pregnan-16a-ol -ll-one 62

À une suspension de 770 mg (1,26 mmol, 1,0 éq.) d'imine 61 dans 7 ml de méthanol sont ajoutés successivement 102 mg (1,54 mmol, 1,2 éq.) de cyanoborohydrure de sodium et 39 μl (1,27 mmol, 1,05 éq.) d'acide acétique glacial. Après 3 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 50 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x50 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 98 / méthanol 1) pour fournir 618 mg de 62 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 81% sur deux étapes.

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3314 (OH, NH) ; 2932 (CH, CH2) ; 1660 (C=O) ; 1660 et 1529 (CONH) ; 1452 (C=C Ar) ; 1226 et 1094 (C-OH).

S . M . (E . S . I .) : m / z : 60 6 , 5 ( [ M + H ] , 1 00) ; 60 7 , 5 ( 1 0) . S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₈ H ₆₀ N ₃ O ₃ m/z = 606,4635 ; mesurée : 606,4634. R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,59 (3H, s, Hl 8) ; 0,83 (3H, s, H30) ; 0,88 (3H, d, J = 6,6 Hz, H21) ; 0,90 (3H, t, J = 7,3 Hz, H4') ; 0,95 (IH, m, H6β) ; 1,09 (IH, d, J = 3,4 Hz, H19α) ; 1,13 (3H, d, J= 6,8 Hz, H5') ; 1,25 (3H, s, H28) ; 1,25-1,50 (5H, m, Hl α, H3a', H7, H2β et H15α) ; 1,52 (IH, d, J = 3,4 Hz, H19β) ; 1,58-1,75 (2H, m, H3b' et H2α) ; 1,94-2,19 (6H, m, H15β, H17α, H2', H6α, H5α et H8β) ; 2,12 (IH, d, J = 12,2 Hz, H29) ; 2,25 (6H, s, NB-CH3) ; 2,27 (IH, d, J = 12,2 Hz, H29) ; 2,29 (IH, d, J = 17,1 Hz, H12β) ; 2,36 (IH, m, Hlβ) ; 2,52 (IH, d, J = 17,1 Hz, H12α) ; 2,62 (IH, dd, J = 6,6 Hz et 10,8 Hz, H20) ; 3,62 et 3,81 (2H, 2d système AB, 13,7 Hz, H31) ; 4,07 (IH, m, H3α) ; 4,11 (IH, m, Hl 6β) ; 5,19 (IH, d, J = 9,8 Hz, NAH) ; 7,18-7,35 (5H, m, HAr=33-37). R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 9,9 (C21) ; 12,1 (C4') ; 13,7 (C30) ; 17,7 (C5') ; 17,8 (C18) ; 18,4 (C6) ; 21,0 (C28) ; 24,4 (Cl) ; 27,5 (C3') ; 27,6 (Cl) ; 28,5 (C2) ; 31,0 (C19) ; 34,6 (C9) ; 38,2 (ClO) ; 41,6 (C8) ; 42,0 (C5) ; 42,9 (C15) ; 43,1 (C4) ; 43,7 (C2') ; 44,5 (Cl 3) ; 47,1 (CH) ; 50,5 (C3) ; 51,5 (C12) ; 52,9 (C29) ; 54,5 (C31) ; 55,8 (C17) ; 62,0 (C20) ; 78,4 (C16) ; 126,5 (C35) ; 128,0 et 128,4 (C34-36 et C33-37) ; 141,3 (C32) ; 176,1 (Cl') ; 211,6 (CIl).

Composé 63 : (20S)-20-diméthylamino-3$-((S)-2-méthylbutyrylamino)-9,19- cyclo- 4a-aminomethyl-4$,14a-diméthyl-5a,9$-pregnan-16a-ol-ll-one 63

Sous argon, à une suspension de 580 mg (0,96 mmol, 1,0 éq.) d'aminé N-benzylée 62 dans 20 ml de méthanol anhydre dégazé à l'argon, sont ajoutés successivement 290 mg (50 % en masse par rapport à 62) de palladium sur charbon à 30% et 311 mg (4,79 mmol, 5,0 éq.) de formate d'ammonium. Après 3 heures d'agitation à 40 ⁰ C, le mélange est filtré sur célite et évaporé sous vide. Le résidu obtenu est alcalinisé avec 40 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne de silice (éluant : dichlorométhane 98 / méthanol 1,9 / ammoniac 0,1) pour fournir 414 mg de 63 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 84% sur deux étapes.

I.R. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3314 (OH, NH) ; 2932 (CH, CH2) ; 1660 (C=O) ; 1660 et 1529 (CONH) ; 1452 (C=C Ar) ; 1226 et 1094 (C-OH).

S . M . (E . S . I .) : m / z : 60 6 , 5 ( [ M + H ] , 1 00) ; 60 7 , 5 ( 1 0) , S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₈ H ₆₀ N ₃ O ₃ m/z = 606,4635 ; mesurée : 606,4634. R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,63 (3H, s, H30) ; 0,84 (3H, s, Hl 8) ; 0,87 (3H, d, J = 6,6 Hz, H21) ; 0,92 (3H, t, J = 7,4 Hz, H4') ; 0,93 (IH, m, H6β) ; 1,04 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19α) ; 1,13 (3H, d, J= 6,8 Hz, H5') ; 1,22 (3H, s, H28) ; 1,26-1,57 (5H, m, Hl α, H3a', H7, H2β et H15α) ; 1,56 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19β) ; 1,59-1,74 (2H, m, H3b' et H2α) ; 1,95-2,13 (6H, m, H15β, H17α, H2', H6α, H5α et H8β) ; 2,24 (6H, s, NB-CH3) ; 2,31 (IH, d, J = 17,5 Hz, H12β) ; 2,36 (IH, d, J = 13,9 Hz, H29a) ; 2,41 (IH, m, Hlβ) ; 2,46 (IH, d, J = 13,9 Hz, H29b) ; 2,51 (IH, d, J = 17,5 Hz, H12α) ; 2,61 (IH, dd, J = 6,6 Hz et 10,9 Hz, H20) ; 4,06 (IH, m, H3α) ; 4,10 (IH, m, H16β) ; 5,24 (IH, d, J = 9,8 Hz, NAH).

R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 9,9 (C21) ; 12,1 (C4') ; 13,7 (C30) ; 17,6 (C5') ; 17,8 (C18) ; 18,5 (C6) ; 21,0 (C28) ; 24,6 (Cl) ; 27,5 (C3') ; 27,7 (Cl) ; 28,4 (C2) ; 31,2 (C19) ; 34,4 (C9) ; 38,1 (ClO) ; 41,7 (C8) ; 41,9 (C5) ; 42,9 (C15) ; 43,6 (CT et C4) ; 44,4 (C13) ; 46,2 (C29) ; 47,1 (C14) ; 49,7 (C3) ; 51,5 (Cl 2) ; 55,8 (Cl 7) ; 62,0 (C20) ; 78,3 (C16) ; 176,3 (Cl') ; 211,5 (ClI).

Composé 64 : (20S)-20-diméthylamino-9,19-cyclo-4$,14a-diméthyl-(2-(S)-s ec-butyl- 5$-méthyl-l,4,5,6Jétrahydro-pyrimidin-5-yl)-5a,9$-pregnan- 16a-ol-ll-one 64

À une solution de 300 mg (0,58 mmol, 1,0 éq.) d'aminé 63 dans 30 ml de n-butanol est ajouté 162 μl (1,15 mmol, 2,0 éq.) de triéthylamine. Après 16 heures d'agitation à 120 ⁰ C, le mélange évaporé sous vide. Le résidu obtenu est alcalinisé avec 30 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 95 / méthanol 5) pour fournir 210 mg de 64 sous forme d'une mousse jaune claire avec un rendement de 73%.

I.R. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3312 (OH, NH) ; 2932 (CH, CH2) ; 1665 (C=O) ; 1625 et 1518 (C-N,

C=N) ; 1039 (C-OH).

S . M . (E . S . I .) : m / z : 49 8 , 4 ( [ M + H ] , 1 00) ; 49 9 , 4 ( 1 0) .

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C31H52N3O2 m/z = 498,4060; mesurée : 498,4049. Remarque : II s'agit d'un mélange entre deux formes tautomères. Les azotes NA et Nc s'échangent un proton. En RMN ¹³ C, Les carbones C3 et C29 donnent des massifs d'intégration faible.

R.M.N. ¹ H (500 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,69 (3H, s, H30) ; 0,77 (3H, s, Hl 8) ; 0,80 (3H, d, J = 6,6 Hz, H21) ; 0,85 (3H, t,J = 7,6 Hz, H4') ; 1,01 (IH, m, H6β) ; 1,04 (3H, d, J= 6,8 Hz, H5') ; 1,07 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19α) ; 1,14 (3H, s, H28) ; 1,16-1,43 (6H, m, Hlα, H3a', H7, H2β et H15α) ; 1,50 (IH, m, H3a') ; 1,55 (IH, d, J = 3,8 Hz, H19β) ; 1,61 (IH, m, H2α) ; 1,98-2,02 (2H, m, H6α et H8β) ; 1,90 (IH, dd, J = 7,6 Hz et 10,7 Hz, H17α) ; 1,96 (IH, dd, J = 10,4 Hz et 14,0 Hz, H15β) ; 2,01-2,05 (2H, m, H5α et H2') ; 2,18 (6H, s, NB-CH3) ; 2,25 (IH, d, J = 17,7 Hz, H12β) ; 2,40 (IH, m, Hlβ) ; 2,42 (IH, d, J = 17,7 Hz, H12α) ; 2,55 (IH, dd, J = 6,6 Hz et 10,7 Hz, H20) ; 2,92 (IH, d, J = 13,9 Hz, H29a) ; 3,09 (IH, m, H3α) ; 3,11 (IH, d, J = 13,9 Hz, H29b) ; 4,02 (IH, m, Hl 6β) ; 4,23 (IH, bs, NAH ou NCH).

R.M.N. ¹³ C (125,8 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

9,9 (C21) ; 11,8 (C30) ; 12,2 (C4') ; 17,9 (C18) ; 18,2 (C6) ; 18,4 (C5') ; 20,6 (C28) ; 24,2 (C7) ; 27,5 (C3') ; 28,1 (Cl et C2) ; 30,3 (C19) ; 34,4 (C5 et C9) ; 38,0 (ClO) ; 41,0 (C8) ; 42,4 (C2') ; 42,7 (C15) ; 44,6 (C13) ; 47,2 (C4) ; 47,3 (C14) ; 51,5 (Cl 2) ; 55,5 (C3) ; 55,9 (C17) ; 58,1 (C29) ; 62,1 (C20) ; 78,3 (Cl 6) ; 159,8 (Cl') ; 211,0 (ClI).

• Composé 65 : (20S)-10(9->l)abeo-16θracétyl-3$-((S))-2-méthylbu1yryl amino)-20- diméthylamino-4β,14a^diméthyl-4a^hydroxyméthyl-5a9β-pre gn-l(10)-èn-ll-one 65

À une solution de 735,5 mg (1,42 mmol, 1,0 éq.) d'amide 7e dans 71 ml de dichlorométhane et de 21 ml de pyridine sont ajoutés 202 μl (2,13 mmol, 1,5 éq.) d'anhydride acétique. La solution est jaune claire. Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est co-évaporé en présence de 1,2-dichloroéthane. Le résidu est alcalinisé avec 30 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x20 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu, ainsi obtenu est cristallisé dans l'acétone pour fournir 169 mg de 65 sous forme de cristaux incolores. Les eaux mères sont évaporées sous vide et le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 9 / méthanol 1) pour fournir 378 mg de 65 sous forme d'une poudre incolore après recristallisation dans l'acétone avec un rendement total de 90%.

P.F. ( ⁰ C) : MANQUANT

Analyse élémentaire : pour C ₃₃ H ₅₄ N ₂ O ₅

Calculée pour C ₃₃ H ₅₄ N ₂ O ₅ % : C 70,93H 9,74 N 5,01 O 14,32

Mesurée % : C 70,82H 10,05 N 4,95 0 14,16

I.R. (diamant) «(cm ¹ ) : 3238 (OH, NH) ; 1731 (C=O ester) et 1698 (C=O) ; 1632 et 1552 (CONH) ; 1454 1377 1243 1034 (C-OH). S.M. (E.S.I.) : m/z : 559,4 ([M+H], 100) ; 560,4 (15).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₃ H ₅₅ N ₂ O ₅ m/z = 559,4111 ; mesurée : 559,4150. R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,47 (3H, s, H30) ; 0,70 (3H, s, H18) ; 0,82 (3H, d, J = 6,2 Hz, H21) ; 0,92 (IH, m, H6β) ; 0,95 (3H, t, J= 7,5 Hz, H4') ; 1,16 (3H, d, J = 6,8 Hz, H5') ; 1,22 (3H, s, H28) ; 1,40-1,96 (7H, m, H2β, H2', H3', H7β, H7α et H15α) ; 1,90 (IH, m, H19β) ; 2,01 (6H, s, NB-CH3) ; 2,35-2,45 (6H, m, H2α, H6α, H17α, H5α, H8β, H9α et H15β) ; 2,13 (3H, s, H32) ; 2,41 (IH, d, J = 15,6 Hz, H12β) ; 2,45 (IH, m, H20) ; 2,61 (IH, d, J = 15,6 Hz, H12α) ; 3,16 (IH, dd, J = 4,5 Hz et 12,4 Hz, H29a) ; 3,36 (IH, d, J = 14,3 Hz, H19α) ; 3,40 (IH, d, J = 10.9 Hz et 12.4 Hz, H29b) ;

4.08 (IH, ddd, J = 6,1 Hz, 9,0 Hz et 10,9 Hz, H3α) ; 4,66 (IH, dd, J = 4,5 Hz et 10,9 Hz, OH) ; 5,12 (IH, dd, J = 6,1 Hz et 8,0 Hz, H16β) ; 5,39 (IH, d, J = 8,9 Hz, NAH) ; 5,48 (IH, s, Hl). R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

9.9 (C30) ; 10,0 (C21) ; 12,1 (C4') ; 17,6 (C5') ; 17,9 (Cl 8) ; 18,0 (C28) ; 21,2 (C32) ; 25,0 (C6) ; 27,5 (C3') ; 30,1 (C2) ; 33,3 (CJ) ; 37,5 (C19) ; 40,1 (NB-CH3) ; 42,0 (C4) ; 42,7 (C15) ; 43,3 (C2') ; 43,5 (C5) ; 46,2 (C13) ; 47,3 (C14) ; 48,0 (C3) ; 49,7 (C8) ; 49,9 (C9) ; 50,3 (C12) ; 54,2 (C17) ; 59,6 (C20) ; 63,8 (C29) ; 78,7 (Cl 6) ; 117,9 (Cl) ; 139,9 (ClO) ; 170,6 (C31) ; 178,4 (Cl') ; 211,6 (ClI).

Composé 66 : (20S)-10(9-> l)abeo-16a-acétyl-3$-((S)-2-méthylbutyrylamino)-20- diméthylamino-4a-formyl-4β,14a-diméthyl-Sa,9β-pregn-l(10 )-èn-ll-one 66

À une solution de 159,5 mg (0,28 mmol, 1,0 éq.) d'amide 65 dans 3 ml de dichlorométhane sont ajoutés 162 mg (0,37 mmol, 1,3 éq.) de periodinane de Dess-Martin. Après 1 heure d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 30 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x25 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne de silice avec dépôt solide (éluant : dichlorométhane 95 / méthanol 5) pour fournir 122 mg de 66 sous forme d'une poudre incolore après recristallisation dans l'acétone et avec un rendement de 77%.

P.F. ( ⁰ C) : 215°C

Analyse élémentaire : pour C ₃₃ H ₅₂ N ₂ O ₅ .0,5 H2O

Calculée pour C ₃₃ H ₅₂ N ₂ O ₅ -O ₅ S H ₂ O % : C 70,05 H 9,44 N 4,95

Trouvée % : C 70,06 H 9,61 N 4,55 LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3374 (OH, NH) ; 2965 (CH, CH2) ; 2790 (CH=O) ; 1726 (C=O ester) ; 1697 (C=O) ; 1666 et 1529 (C=C et CONH) ; 1245, 1030 (C-OH). S.M. (E.S.I.) : m/z : 557,4 ([M+H], 100) ; 558,4 (15) ; 515,4 (15) ; 501,4 (5). S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₃ H ₅₃ N ₂ O ₅ m/z = 557,3954 ; mesurée : 557,3957.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,68 (3H, s, H18) ; 0,81 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 0,82 (3H, t, J = 7,3 Hz, H4') ; 0,83 (3H, s, H30) ; 1,06 (3H, d, J= 6,9 Hz, H5') ; 1,21 (3H, s, H28) ; 1,26-1,42 (3H, m, H6β, H7α et H15α) ; 1,51-1,65 (4H, m, H3', H8β et H6α) ; 1,77-1,90 (3H, m, H7β, H5α et H2β) ; 1,99 (3H, s, H32) ; 2,12 (6H, s, NB-CH3) ; 1,95-2,16 (3H, m, H19β, H15β et H9β) ; 2,24 (IH, dd, J = 5,8 Hz et 10,8 Hz, Hl 7α) ; 2,41 (IH, d, J = 15,1 Hz, Hl 2β) ; 2,33-2,48 (3H, m, H2', H20 et H2α) ; 2,60 (IH, d, J = 15,1 Hz, H12α) ; 3,40 (IH, d, J = 14,3 Hz, H19α) ; 4,47 (IH, ddd, J = 6,4 Hz, 9,3 Hz et 10,0 Hz, H3α) ; 5,10 (IH, dd, J = 6,2 Hz et 7,9 Hz, H16β) ; 5,27 (IH, d, J = 8,5 Hz, NAH) ; 5,54 (IH, s, Hl) ; 9,47 (IH, s, H29). R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

6,9 (C30) ; 10,1 (C21) ; 11,9 (C4') ; 17,4 (C5') ; 18,0 (C18 et C28) ; 21,3 (C31) ; 27,1 (C6) ; 27,4 (C3') ; 29,3 (C2) ; 33,2 (C7) ; 36,9 (Cl 9) ; 40,4 (NB-CH3) ; 42,8 (Cl 5) ; 43,3 (C2') ; 44,7 (C5) ; 46,4 (C14) ; 47,0 (C9) ; 47,4 (C14) ; 49,6 (C3) ; 50,0 (C8) ; 50,4 (C12) ; 54,4 (C17) ; 55,5 (C4) ; 59,7 (C20) ; 78,7 (C16) ; 120,1(Cl) ; 136,9 (ClO) ; 170,6 (C31) ; 176,2 (Cl') ; 204,5 (C29) ; 211,0 (ClI).

• Composé 67 : (20S)-10(9-> l)-abeo-20-diméthylamino-3$-((S)-2- méthylbtaytγlamino)-4a-formyl-4β,14a-diméthyl-Sa,9β-pre gn-l(10)-èn-16a-ol-ll- one 67

À une solution de 304 mg (0,54 mmol, 1,0 éq.) d'amide 66 dans 7 ml de méthanol préalablement chauffée à 40 ⁰ C pour une dissolution totale, est ajoutée une solution de 688 mg (8,18 mmol, 15,0 éq.) d'hydrogénocarbonate de sodium et 579 mg (5,46 mmol, 10,0 éq.) de carbonate de sodium dans 11,5 ml d'eau permutée. Un précipité se forme. Après 7 heures d'agitation à 55°C, le mélange est dilué avec 40 ml d'eau et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 98 / méthanol 2) pour fournir 237 mg de 67 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 84% sur deux étapes.

P.F. ( ⁰ C) : 265°C

Analyse élémentaire : pour C33H52N2O5 Calculée pour C ₃₃ H ₅₂ N ₂ O ₅ % : C 71,19 H 9,41 N 5,03 O 14,37

Trouvée % : C H N O

I.R. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3319 (OH, NH) ; 2931 (CH, CH2) ; 2787 (CH=O) ; 1722 (C=O aldéhyde) ; 1695 (C=O) ; 1649 et 1528 (CONH) ; 1214 et 1016 (C-OH).

S . M . (E . S . I .) : m / z : 51 5 ,3 ( [M + H ] , 1 00) ; 51 6 ,4 (45) ; 501 ,4

(5) .

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C31H51N2O4 m/z = 515,3849 ; mesurée : 515,3844. R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,62 (3H, s, Hl 8) ; 0,76 (3H, s, H30) ; 0,78 (3H, t, J = 7,4 Hz, H4') ; 0,81 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 1,00 (3H, d, J= 6,8 Hz, H5') ; 1,20 (3H, s, H28) ; 1,22-1,60 (6H, m, H3', H6α, H6β, H7β, et Hl 5α) ; 1,69-1,83 (4H, m, H2β, H7β, H8β et H5α) ; 1,84-2,01 (5H, m, H2', H9α, Hl 9β, Hl 5β et H7α) ; 2,17 (6H, s, NB-CH3) ; 2,29 (IH, d, J = 15,8 Hz, H12β) ; 2,36 (IH, m, H2α) ; 2,52 (IH, d, J = 15,8 Hz, H12α) ; 2,55 (IH, m, H20) ; 3,34 (IH, d, J = 14,3 Hz, H19α) ; 4,01 (IH, ddd, J = 2,5 Hz, 8,4 Hz et 8,5 Hz, Hl 6β) ; 4,40 (IH, ddd, J = 6,4 Hz, 7,1 Hz et 12,1 Hz, H3α) ; 5,22 (IH, d, J = 10,0 Hz, NAH) ; 5,48 (IH, s, Hl) ; 9,42 (IH, s, H29). R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

6,8 (C30) ; 10,0 (C21) ; 11,8 (C4') ; 17,3 (C5') ; 17,8 (C18) ; 18,8 (C28) ; 27,1 (C6) ; 27,3 (C3') ; 29,2 (C2) ; 33,2 (C7) ; 37,0 (C19) ; 42,4 (C15) ; 43,2 (C2') ; 44,6 (C8) ; 46,2 (C13) ; 46,8 (C5) ; 47,0 (C14) ; 49,6 (C3) ; 50,0 (C12) ; 50,3 (C9) ; 55,4 (C17 et C4) ; 62,0 (C20) ; 78,3 (C16) ; 119,9 (Cl) ; 136,8 (ClO) ; 176,1 (Cl') ; 204,5 (C29) ; 211,4 (ClI).

• Composé 68: (20S)-10(9->l)-abeo-20-diméthylamino-3$-((S)-2- méthylbutyrylamino)-4a-benzyliminomethyl-4^>,14a-diméth yl-5a,9^>-pregn-l(10)- èn-16a-ol-ll-one 68

Sous argon, à une suspension de 200 mg (0,39 mmol, 1,0 éq.) d'aldéhyde 67 et de 160 mg de sulfate de magnésium anhydre dans 2 ml de dichlorométhane sont ajoutés 55 μl (0,50 mmol, 1,3 éq.) de benzylamine. Après 7 heures d'agitation à 55°C, la solution est filtrée sur célite et évaporée sous vide pour fournir 272 mg de 68 sous forme d'une poudre jaune avec un rendement quantitatif.

I.R. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3309 (OH, NH) ; 2929 (CH, CH2) ; 1728 (C=O) ; 1695 (C=N) ; 1649 et

1532 (C=C, CONH) ; 1451 (C=C Ar) ; 1227 et 1091 (C-OH). S. M. (E.S.I.) : m/z : 604,4 ([M + H], 100) ; 605,4 (10) ; 646,5

(5).

S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₈ H ₅₈ N ₃ O ₃ m/z = 604,4478 ; mesurée : 604,4460.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,61 (3H, s, Hl 8) ; 0,75 (3H, t, J = 7,4 Hz, H4') ; 0,80 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 0,86 (3H, s, H30) ; 0,96 (3H, d, J= 7,0 Hz, H5') ; 1,19 (3H, s, H28) ; 1,21-1,62 (6H, m, H3', H6α, H6β, H7β, et

H15α) ; 1,67-1,83 (4H, m, H2β, H7β, H8β et H5α) ; 1,86-1,97 (4H, m, H2', H9α, H15β et H7α) ;

2.01 (IH, m, H19β) ; 2,06 (6H, s, NB-CH3) ; 2,28 (IH, d, J = 16,0 Hz, H12β) ; 2,33 (IH, m, H2α) ; 2,51 (IH, d, J = 16,0 Hz, H12α) ; 2,54 (IH, m, H20) ; 3,30 (IH, d, J = 14,5 Hz, H19α) ;

4.02 (IH, ddd, J = 2,0 Hz, 7,5 Hz et 7,9 Hz, H16β) ; 4,19 (IH, ddd, J = 6,2 Hz, 7,0 Hz et 13,0 Hz, H3α) ; 4,44 et 4,56 (2H, 2d système AB, J = 13,4 Hz, H31) ; 5,22 (IH, d, J = 9,0 Hz, NAH) ; 5,47 (IH, s, Hl) ; 7,15-7,28 (5H, m, HAr=33-37) ; 7,56 (IH, s, H29).

R.M.N. «C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

• Composé 69 : (20S)-10(9-> l)abeo-20-diméthylamino-3^,-((S)-2- méthylbutyrylamino)-4a-benzylaminomethyl-4^>,14a-diméth yl-5a,9^>-pregn-l(10)- èn-16a-ol-ll-one 69

À une suspension de 272 mg (0,39 mmol, 1,0 éq.) d'imine 68 dans 2 ml de méthanol sont ajoutés successivement 36 mg (0,54 mmol, 1,4 éq.) de cyanoborohydrure de sodium et 26 μl (0,45 mmol, 1,15 éq.) d'acide acétique glacial. Après 3 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est alcalinisé avec 40 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 98 / méthanol 1) pour fournir 173 mg de 69 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 73% sur deux étapes.

I.R. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3313 (OH, NH) ; 2961 (CH, CH2) ; 1695 (C=O) ; 1644 et 1530 (CONH) ; 1452 (C=C Ar) ; 1237 et 1095 (C-OH).

S . M . (E . S . I .) : m / z : 606 , 4 ( [ M + H ] , 1 00) ; 607 , 5 (20) , S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₈ H ₆₀ N ₃ O ₃ m/z = 606,4635 ; mesurée : 606,4636. R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,45 (3H, s, H30) ; 0,61 (3H, s, Hl 8) ; 0,80 (3H, d, J = 6,4 Hz, H21) ; 0,86 (3H, t, J = 7,4 Hz, H4') ; 1,06 (3H, d, J= 6,8 Hz, H5') ; 1,24 (3H, s, H28) ; 1,28-1,62 (6H, m, H3', H6α, H6β, H7β, et H15α) ; 1,67-1,76 (4H, m, H2β, H7β, H8β et H5α) ; 1,82 (IH, m, H19β) ; 1,88-2,08 (4H, m, H2', H9α, Hl 5β et H7α) ; 2,17 (6H, s, NB-CH3) ; 2,20 (IH, d, J = 12,5 Hz, H29) ; 2,27 (IH, d, J = 15,6 Hz, H12β) ; 2,32 (IH, d, J = 12,5 Hz, H29) ; 2,33 (IH, m, H2α) ; 2,52 (IH, d, J = 15,6 Hz, H12α) ; 2,62 (IH, m, H20) ; 3,23 (IH, d, J = 14,1 Hz, H19α) ; 3,48 et 3,78 (2H, 2d système AB, J = 13,6 Hz, H31) ; 4,02 (2H, m, H16β et H3α) ; 5,23 (IH, d, J = 9,6 Hz, NAH) ; 5,37 (IH, s, Hl) ; 7,12-7,27 (5H, m, HAr=33-37). R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 10,0 (C21) ; 12,0 (C4') ; 12,4 (C30) ; 17,6 (Cl 8) ; 17,7 (C5') ; 19,0 (C28) ; 25,2 (C6) ; 27,4 (C3') ;

30,7 (C2) ; 33,3 (C7) ; 37,5 (Cl 9) ; 40,5 (C4) ; 42,5 (Cl 5) ; 43,7 (C2') ; 44,7 (C5) ; 46,3 (Cl 3) ; 47,1 (CH) ; 48,0 (C3) ; 49,7 (C8) ; 50,1 (C12) ; 50,3 (C9) ; 52,6 (C29) ; 54,3 (C31) ; 55,4 (C17) ; 62,1 (C20) ; 78,4 (C16) ; 118,3 (Cl) ; 126,6 (C35) ; 128,0 et 128,4 (C34-36 et C33-37) ; 139,8 (ClO) ; 141,2 (C32) ; 176,4 (Cl') ; 212,0 (ClI).

• Composé 70 : (20S)-10(9-> l)-abeo-20-diméthylamino-3$-((S)-2- méthylbutyrylamino)-4a-aminomethyl-4$,14a-diméthyl-5a,9$-p regn-l(10)-èn-16a- ol-11-one 70

Sous argon, à une suspension de 296 mg (0,49 mmol, 1,0 éq.) d'aminé N-benzylée 69 dans 10 ml de méthanol anhydre dégazé à l'argon, sont ajoutés successivement 148 mg (50 % en masse par rapport à 69) de palladium sur charbon à 30% et 159 mg (2,43 mmol, 5,0 éq.) de formate d'ammonium. Après 3 heures d'agitation à 40 ⁰ C, le mélange est filtré sur célite et évaporé sous vide. Le résidu obtenu est alcalinisé avec 40 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x30 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide. Le résidu est chromatographié sur colonne de silice (éluant : dichlorométhane 90 / méthanol 9,9 / ammoniac 0,1) pour fournir 90 mg de 70 sous forme d'une poudre incolore avec un rendement de 36% sur deux étapes.

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3314 (OH, NH) ; 2932 (CH, CH2) ; 1660 (C=O) ; 1660 et 1529 (CONH) ; 1452 (C=C Ar) ; 1226 et 1094 (C-OH).

S . M . (E . S . I .) : m / z : 60 6 , 5 ( [ M + H ] , 1 00) ; 60 7 , 5 ( 1 0) , S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C ₃₈ H ₆₀ N ₃ O ₃ m/z = 606,4635 ; mesurée : 606,4634.

R.M.N. ¹ H (300 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

0,50 (3H, s, H30) ; 0,62 (3H, s, Hl 8) ; 0,81 (3H, d, J = 6,6 Hz, H21) ; 0,86 (3H, t, J = 7,4 Hz, H4') ; 1,05 (3H, d, J= 6,8 Hz, H5') ; 1,21 (3H, s, H28) ; 1,17-1,25 (2H, m, H6) ; 1,26-1,64 (4H, m, H3', H7β) ; 1,45 (IH, dd, J = 1,7 Hz et 13,8 Hz, H15α) ; 1,65-1,81 (3H, m, H2β, H8β et H5α) ; 1,82 (IH, m, H19β) ; 1,82-2,11 (3H, m, H9α, H170C, H15β et H7α) ; 2,04 (IH, m, HZ) ; 2,19 (6H, s, NB-CH3) ; 2,28 (IH, d, J = 15,3 Hz, H12β) ; 2,27 (IH, m, H2α) ; 2,46 (IH, d, J = 12,5 Hz, H29a) ; 2,50 (IH, d, J = 15,3 Hz, H12α) ; 2,56 (IH, d, J = 13,0 Hz, H29b) ; 2,57 (IH, m, H20) ; 3,27 (IH, d, J = 13,8 Hz, H19α) ; 4,04 (IH, m, H16β) ; 4,06 (IH, m, H3α) ; 5,30 (IH, d, J = 9,6 Hz, NAH) ; 5,41 (IH, s, Hl). R.M.N. ¹³ C (75,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

10,0 (C21) ; 12,0 (C4') ; 12,4 (C30) ; 17,6 (C5') ; 17,8 (Cl8) ; 19,0 (C28) ; 25,0 (C6) ; 27,4 (C3') ; 30,7 (C2) ; 33,4 (C7) ; 37,5 (C19) ; 41,1 (C4) ; 42,5 (Cl5) ; 43,6 (C2') ; 43,9 (C5) ; 45,6 (C29) ; 46,3 (C13) ; 47,1 (C14) ; 47,2 (C3) ; 49,8 (C12) ; 50,0 (C8) ; 50,2 (C9) ; 55,3 (C17) ; 62,1 (C20) ; 78,2 (C16) ; 118,8 (Cl) ; 139,2 (ClO) ; 176,8 (Cl') ; 211,8 (ClI).

Composé 71 : (20S)-10(9-> l)-abeo-20-diméthylamino-4$,14a-dimάhyl-(2-(S)-sec- butyl-5^-méthyl-l,4,5,6-tétrahydro-pyrimidin-5-yl)-5a,%-pr egnan-l(10)-èn-16a-ol- 11-one 71

À une solution de 61 mg (0,12 mmol, 1,0 éq.) d'aminé 70 dans 30 ml de n-butanol est ajouté 37 μl (0,26 mmol, 2,0 éq.) de triéthylamine. Après 16 heures d'agitation à 120 ⁰ C, le mélange évaporé sous vide. Le résidu obtenu est alcalinisé avec 30 ml d'une solution ammoniacale à 10% (pH = 10) et extrait avec 3x40 ml de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu est chromatographié sur colonne d'alumine Merck d'activité II-III (éluant : dichlorométhane 95 / méthanol 5) pour fournir 29 mg de 71 sous forme d'une mousse jaune claire avec un rendement de 49%.

P.F. ( ⁰ C) : 225°C

I.R. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3315 (OH, NH) ; 2930 (CH, CH2) ; 1694 (C=O) ; 1627 et 1518 (C=C,

C-N) ; 1039 (C-OH).

S . M . (E . S . I .) : m / z : 498 , 4 ( [ M + H ] , 1 00) ; 499 , 4 ( 1 0) . S.M.H.R. (E.S.I.) calculée pour C31H52N3O4 m/z = 498,4060 ; mesurée : 498,4043.

Remarque : II s'agit d'un mélange entre deux formes tautomères. Les azotes NA et Nc s'échangent un proton. En RMN ¹³ C, Les carbones C3 et C29 donnent des massifs d'intégration faible.

R.M.N. ¹ H (500 MHz, CDCl ₃ ), δppm : 0,63 (3H, s, Hl 8) ; 0,67 (3H, s, H30) ; 0,80 (3H, d, J = 6,3 Hz, H21) ; 0,85 (3H, t, J = 7,5 Hz,

H4') ; 1,04 (3H, d, J= 6,9 Hz, H5') ; 1,17 (3H, s, H28) ; 1,19-1,36 (3H, m, H3a' et H6) ; 1,48-1,62

(3H, m, H3b', H7) ; 1,44 (IH, dd, J = 1,9 Hz et 13,9 Hz, H15α) ; 1,67-1,75 (2H, m, H2) ; 1,83-

1,93 (3H, m, H9α, H170C et H15β) ; 1,97-2,04 (4H, m, H2', H5α, H8β et H19β) ; 2,19 (7H, s, NB-

CH3 et H2α) ; 2,28 (IH, d, J = 15,8 Hz, Hl 2β) ; 2,48 (IH, d, J = 15,8 Hz, Hl 2α) ; 2,57 (IH, dd, J = 6,3 Hz et 10,7 Hz, H20) ; 2,95 (IH, d, J = 12,9 Hz, H29a) ; 3,24 (IH, d, J = 15,8 Hz, H19α) ;

3,25 (IH, d, J = 12,9 Hz, H29b) ; 4,04 (IH, dd, J = 6,9 Hz et 7,3 Hz, Hl 6β) ; 4,17 (IH, bs, NAH ou NCH) ; 5,47 (IH, s, Hl).

R.M.N. ¹³ C (128,5 MHz, CDCl ₃ ), δppm :

10,0 (C21) ; 10,9 (C30) ; 12,2 (C4') ; 17,8 (Cl 8) ; 18,6 (C5') ; 18,8 (C28) ; 25,0 (C6) ; 28,2 (C3') ; 29,7 (C2) ; 33,1 (C4) ; 33,8 (C7) ; 37,5 (C19); 42,4 (C2') ; 42,5 (C15) ; 46,2 (C13) ; 47,1 (C14) ; 49,8

(C5) ; 50,1 (Cl 2) ; 50,4 (C9) ; 50,8 (C3) ; 51,0 (C8) ; 54,2 (C29) ; 55,5 (Cl 7) ; 62,0 (C20) ; 78,4

(C16) ; 120,1 (Cl) ; 138,5 (ClO) ; 159,9 (Cl') ; 211,9 (ClI).

Composé 75 : (20S)-20-cliinéthylamino-16α-acétyl-3β-isobutyîylamino- 9,19-cyclo- 4α-méthyléthanethioate-4β,14α-diméthyl-5α,9β-pregnan -ll-one 75

À une solution de 100 mg (1,78 mmol, 1,0 éq.) d'hydroxyde de potassium dans 1,5 mL d'éthanol sont ajoutés 126,8 μL (1,78 mmol, 1,0 éq.) d'acide thiolacétique. Après 20 minutes d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est évaporé et la poudre jaune obtenue est lavée avec du tétrahydrofurane pour fournir 203 mg de thioacétate de potassium sous forme de poudre jaune clair.

• 166,8 mg (1,46 mmol, 7,0 éq.) de thioacétate de potassium ainsi préparés sont additionnés à 145,8 mg (0,21 mmol, 1,0 éq.) de (20S)-16θC-acétyl-3β-isobutyrylamino-9,19-cyclo- 4θC-hydroxytosy]jÏ„iéthyl-4β,14θC-diméthyl-20-diméthyl amino-5θC,9β-pregnan-l 1-one dissous dans 5 mL de l,3-diméthyl-3,4,5,6-tétrahydro-2(lH)-pyrimidinone (DMPU) anhydre. Après 5 heures d'agitation à 100 ⁰ C, le mélange réactionnel est alcalinisé avec 20 mL d'une solution d'hydrogénocarbonate de sodium à 10% (pH = 8) et extrait avec 3x20 mL d'éther. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide. Le résidu obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (éluant : dichlorométhane 9,8/méthanol 0,2) pour fournir 70,1 mg de 75 sous forme d'une poudre jaune clair avec un rendement de 56%.

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 2930 (NH) ; 1730 (C=O) ; 1666 et 1529 (C=O ester, CONH et COS). S . M . (E . S . I .) : m / z : 603 , 4 ( [ M + H ] .

• Composé 76 : (20S)-20-climéthylamino-16α-acétyl-3β-isobutyiylamino-9, 19-cyclo-4α- mefcaptomethyl-4β,14α-diméthyl-5α,9β-pregnan-ll-one 76

C ₃₀ H ₅₀ N ₂ O ₃ S

Aspect : solide blanc

Poids mol culaire : 518,79

À une solution de 318,2 mg (0,53 mmol, 1,0 éq.) de (20S)-20-diméthylamino-16α-acétyl-3β- isobutyrylamino-9,19-cyclo-4α-méthyléthanethioate-4β,14Î ±-diméthyl-5α,9β-pregnan-ll-one dans 6 mL de méthanol est ajoutée une solution de 559,4 mg (5,27 mmol, 10,0 éq.) de carbonate de sodium et de 665,1 mg (7,92 mmol, 15,0 éq.) d'hydrogénocarbonate de sodium dans 6 mL d'eau permutée préalablement chauffée à 40 ⁰ C pour une dissolution totale. Un précipité se forme. Après 6 heures d'agitation à 65°C, le mélange est dilué avec 40 mL d'eau et extrait avec 3x40 mL de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (éluant : dichlorométhane 9/méthanol 1) pour fournir 229,9 mg de (20S)-20-diméthylamino-16α-acétyl-3β- isobutyrylamino-9,19-cyclo-4α-mercaptomethyl-4β,14α-dimé thyl-5α,9β-pregnan-ll-one sous forme d'une poudre blanche avec un rendement de 84%.

LR. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 3317 (OH) ; 2932 (NH) ; 2359 (SH) ; 1659 (C=O) ; 1659 et 1531 (CONH) ; 1039 (C-OH).

S. M. (E.S.I.) : m/z : 519,4 ([M + H].

Exemple 9 : Molécule soufrée

Schéma 14

(20S)-20-climéthylamino-16α-acétyl-3β-acétylamino-9, 19-cyclo-4α-thioacétylméthyl-

4β,14α-diméthyl-5α,9β-pregnan-ll-one 77

À une solution de 100 mg (1,78 mmol, 1,0 éq.) d'hydroxyde de potassium dans 1,5 ml d'éthanol sont ajoutés 126,8 μl (1,78 mmol, 1,0 éq.) d'acide thiolacétique. Après 20 minutes d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est évaporé et la poudre jaune obtenue est lavée avec du tétrahydrofurane pour fournir 203 mg de thioacétate de potassium sous forme de poudre jaune clair.

166,8 mg (1,46 mmol, 7,0 éq.) de thioacétate de potassium ainsi préparés sont additionnés à 145,8 mg (0,21 mmol, 1,0 éq.) de ?? dissous dans 5 mL de l,3-diméthyl-3,4,5,6- tétrahydro-2(lH)-pyrimidinone (DMPU) anhydre. Après 5 heures d'agitation à 100 ⁰ C, le mélange réactionnel est alcalinisé avec 20 ml d'une solution d'hydrogénocarbonate de sodium à 10% (pH = 8) et extrait avec 3x20 ml d'éther. Les phases organiques réunies sont successivement séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées sous vide.

Le résidu obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (éluant : dichlorométhane 9,8/méthanol 0,2) pour fournir 70,1 mg du produit sous forme d'une poudre jaune clair avec un rendement de 56%.

I.R. (diamant) O(Cm- ¹ ) : 2930 (NH) ; 1730 (C=O) ; 1666 et 1529 (C=O ester, CONH et COS). S . M . (E . S . I .) : m / z : 603 , 4 ( [ M + H ] .

Exemple 10 : Résultats biologiques complémentaires (cf. Exemple 6 pour détails)

Tableau 2 : composé AChE ^a composé AChE

IC ₅₀ (nM) IC ₅₀ (nM)

33 ^{"""""" """"""""} 54 ^{"""""""" """"""} TTδooδδ ^"

34 >100000 55 >100000

35 >100000 56 >100000

36 >100000 57 >100000

37 100000 59 >100000

38 181 60 >100000

39 198 61 >100000

40 112 62 100000

41 >100000 63 637

42 >100000 64 14

43 >100000 65 7937

44 >100000 66 >100000

45 >100000 67 >100000

46 33873 68 780

47 20057 69 >100000

48 17522 70 368

49 1342 71 28

50 1330 1 32

51 18 tacrine 74

52 29

76 43000