Tetrahydro-pyrrolopyridiii-, Tetrahvdro-pyrazolopyridin-, Tetrahydro-imidazopyridin- und Tetrahydro-triazolopyridin-Derivate und ihre Verwendung

Die Erfindung betrifft neue Tetrahydro-pyrrolopyridin-, Tetrahydro-pyrazolopyridin-, Tetrahydro- imidazopyridin- und Tetrahydro-triazolopyridin-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von thromboembolischen Erkrankungen.

Die Blutgerinnung ist ein Schutzmechanismus des Organismus, mit dessen Hilfe Defekte in der Gefäßwand rasch und zuverlässig „abgedichtet" werden können. So kann ein Blutverlust ver- mieden bzw. minimiert werden. Die Blutstillung nach Gefäßverletzung erfolgt im wesentlichen durch das Gerinnungssystem, bei dem eine enzymatische Kaskade komplexer Reaktionen von Plasmaproteinen ausgelöst wird. Hierbei sind zahlreiche Blutgerinnungsfaktoren beteiligt, von denen jeder, sobald aktiviert, die jeweils nächste inaktive Vorstufe in ihre aktive Form überfuhrt. Am Ende der Kaskade steht die Umwandlung des löslichen Fibrinogens in das unlösliche Fibrin, so dass es zu einem Blutgerinnsel kommt. Traditionell unterscheidet man bei der Blutgerinnung zwischen dem intrinsischen und dem extrinsischen System, die in einem abschließenden gemeinsamen Reaktionsweg münden. Hierbei kommt dem Faktor Xa, der aus dem Proenzym Faktor X gebildet wird, eine Schlüsselrolle zu, da er beide Gerinnungswege verbindet. Die aktivierte Serin- protease Xa spaltet Prothrombin zu Thrombin. Das entstandene Thrombin wiederum spaltet seiner- seits Fibrinogen zu Fibrin. Durch anschließende Quervernetzung der Fibrin-Monomere kommt es zur Bildung von Blutgerinnseln und damit zur Blutstillung. Darüber hinaus ist Thrombin ein potenter Auslöser der Thrombozytenaggregation, die ebenfalls einen erheblichen Beitrag bei der Hämostase leistet.

Die Hämostase unterliegt einem komplexen Regulationsmechanismus. Eine unkontrollierte Aktivierung des Gerinnungssystems oder eine defekte Hemmung der Aktivierungsprozesse kann die Bildung von lokalen Thrombosen oder Embolien in Gefäßen (Arterien, Venen, Lymphgefäßen) oder Herzhöhlen bewirken. Dies kann zu schwerwiegenden thromboembolischen Erkrankungen führen. Darüber hinaus kann eine Hyperkoagulabilität - systemisch - bei einer Verbrauchskoagulo- pathie zur disseminierten intravasalen Gerinnung führen. Thromboembolische Komplikationen treten ferner auf bei mikroangiopathischen hämolytischen Anämien, extrakorporalen Blutkreisläufen, wie Hämodialyse, sowie Herzklappenprothesen.

Thromboembolische Erkrankungen sind die häufigste Ursache von Morbidität und Mortalität in den meisten industrialisierten Ländern [Heart Disease: A Textbook of Cardiovascular Medicine, Eugene Braunwald, 5. Auflage, 1997, W.B. Saunders Company, Philadelphia].

Die aus dem Stand der Technik bekannten Antikoagulantien, d.h. Stoffe zur Hemmung oder Verhinderung der Blutgerinnung, weisen verschiedene, oftmals gravierende Nachteile auf. Eine effiziente Behandlungsmethode bzw. Prophylaxe von thromboembolischen Erkrankungen erweist sich in der Praxis deshalb als sehr schwierig und unbefriedigend.

Für die Therapie und Prophylaxe von thromboembolischen Erkrankungen findet zum einen Heparin Verwendung, das parenteral oder subkutan appliziert wird. Aufgrund günstigerer pharmakokinetischer Eigenschaften wird zwar heutzutage zunehmend niedermolekulares Heparin bevorzugt; allerdings können auch hierdurch die im folgenden geschilderten bekannten Nachteile nicht vermieden werden, die bei der Therapierung mit Heparin bestehen. So ist Heparin oral unwirksam und besitzt nur eine vergleichsweise geringe Halbwertszeit. Da Heparin gleichzeitig mehrere Faktoren der Blutgerinnungskaskade hemmt, kommt es zu einer unselektiven Wirkung. Darüber hinaus besteht ein hohes Blutungsrisiko, insbesondere können Hirnblutungen und Blutungen im Gastrointestinaltrakt auftreten, und es kann zu Thrombopenie, Alopecia medico- mentosa oder Osteoporose kommen [Pschyrembel, Klinisches Wörterbuch, 257. Auflage, 1994, Walter de Gruyter Verlag, Seite 610, Stichwort „Heparin"; Römpp Lexikon Chemie, Version 1.5, 1998, Georg Thieme Verlag Stuttgart, Stichwort „Heparin"].

Eine zweite Klasse von Antikoagulantien stellen die Vitamin K-Antagonisten dar. Hierzu gehören beispielsweise 1,3-Indandione, vor allem aber Verbindungen wie Warfarin, Phenprocoumon, Dicumarol und andere Cumarin-Derivate, die unselektiv die Synthese verschiedener Produkte bestimmter Vitamin K-abhängiger Gerinnungsfaktoren in der Leber hemmen. Durch den Wirkmechanismus bedingt, setzt die Wirkung aber nur sehr langsam ein (Latenzzeit bis zum Wirkeintritt 36 bis 48 Stunden). Die Verbindungen können zwar oral appliziert werden, aufgrund des hohen Blutungsrisikos und des engen therapeutischen Indexes ist aber eine aufwendige individuelle Einstellung und Beobachtung des Patienten notwendig [J. Hirsh, J. Dalen, D.R. Anderson et al., „Oral anticoagulants: Mechanism of action, clinical effectiveness, and optimal therapeutic ränge" Chest 2001, 119, 8S-21S; J. Ansell, J. Hirsh, J. Dalen et al., „Managing oral anticoagulant therapy" Chest 2001, 119, 22S-38S; P.S. Wells, A.M. Holbrook, N.R. Crowther et al, „Inter- actions of warfarin with drugs and food" Ann. Intern. Med. 1994, 121, 676-683].

In jüngster Zeit ist ein neuer Therapieansatz für die Behandlung und Prophylaxe von thrombo- embolischen Erkrankungen beschrieben worden. Ziel dieses neuen Therapieansatzes ist die Inhibierung von Faktor Xa. Entsprechend der zentralen Rolle, die Faktor Xa in der Blutgerinnungskaskade spielt, stellt Faktor Xa eines der wichtigsten Targets für antikoagulatorische Wirkstoffe dar [J. Hauptmann, J. Stürzebecher, Thrombosis Research 1999, 93, 203; S.A.V. Raghavan, M. Dikshit, „Recent advances in the Status and targets of antithrombotic agents" Drugs Fut. 2002, 27,

669-683; H.A. Wieland, V. Laux, D. Kozian, M. Lorenz, „Approaches in anticoagulation: Rationales for target positioning" Curr. Opin. Investig. Drugs 2003, 4, 264-271; UJ. Ries, W. Wienen, „Serine proteases as targets for antithrombotic therapy" Drugs Fut. 2003, 28, 355-370; L.-A. Linkins, J.I. Weitz, „New anticoagulant therapy" Annu. Rev. Med. 2005, 56, 63-77; A. Casimiro-Garcia et al., „Progress in the discovery of Factor Xa inhibitors" Expert Opin. Ther. Patents 2006, 15, 119-145].

Dabei ist gezeigt worden, dass verschiedene, sowohl peptidische wie nicht-peptidische Verbindungen in Tiermodellen als Faktor Xa-Inhibitoren wirksam sind. Eine große Anzahl von direkten Faktor Xa-Inhibitoren ist bislang bekannt [J .M. Walenga, W.P. Jeske, D. Hoppensteadt, J. Fareed, ,,F actor Xa Inhibitors: Today and beyond" Curr. Opin. Investig. Drugs 2003, 4, 272-281; J. Ruef, H.A. Katus, „New antithrombotic drugs on the horizon" Expert Opin. Investig. Drugs 2003, 12, 781- 797; M.L. Quan, J.M. Smallheer, „The race to an orally active Factor Xa inhibitor: Recent advances" Curr. Opin. Drug Discovery & Development 2004, 7, 460-469]. Weiterhin sind nicht-peptidische, niedermolekulare Faktor Xa-Inhibitoren beispielsweise auch in WO 03/026652 und WO 03/049681 beschrieben.

Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung neuer alternativer Verbindungen mit vergleichbarer oder verbesserter Wirkung und besserer Löslichkeit in wässrigen Lösungen, zur Bekämpfung von Erkrankungen, insbesondere von thromboembolischen Erkrankungen, bei Menschen und Tieren.

Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der Formel

in welcher

n für die Zahl 1 , 2 oder 3 steht,

X für N oder CH steht,

für N oder CR ⁵ steht,

wobei

- A -

R ⁵ für Wasserstoff, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Hydroxy, Hydroxy- methyl, Hydroxyethyl, Amino, Aminomethyl, Aminoethyl, C _r C ₄ -Alkyl, C]-C ₄ - Alkoxy, C _r C ₄ -Alkoxymethyl, C _r C ₄ -Alkoxyethyl, C _r C ₄ -Alkylamino, C _r C ₄ -Alkyl- aminomethyl, Ci-C ₄ -Alkylaminoethyl, C ₃ -C ₆ -Cycloalkyl, Hydroxycarbonyl, Hydroxycarbonylmethyl, Hydroxycarbonylethyl, Aminocarbonyl, Aminocarbonyl- methyl, Aminocarbonylethyl, C _r C ₄ -Alkoxycarbonyl, C]-C ₄ -Alkoxycarbonyl- methyl, C _! -C ₄ -Alkoxycarbonylethyl, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyloxy, C _r C ₄ -Alkylamino- carbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonylmethyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonylethyl, C ₁ -C ₄ -Alkylcarbonylamino, Ci-Q-Alkylcarbonylaminomethyl, Q-GrAlkylcarb- onylaminoethyl, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyl-(Ci-C ₄ -alkyl)amino, C _r C ₄ -Alkylcarbonyl-

(Ci-C ₄ -alkyl)aminomethyl, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyl-(Ci-C ₄ -alkyl)aminoethyl, Amino- sulfonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminosulfonyl, Ci-C ₄ -Alkylsulfonyl oder Tetrazolyl steht,

R ¹ für Wasserstoff, Cyano, Hydroxy, C _r C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyl, C ₃ -C ₆ - Cycloalkylcarbonyl, Phenylcarbonyl, A- bis 7-gliedriges Heterocyclylcarbonyl oder 5- oder 6-gliedriges Heteroarylcarbonyl steht,

R ² für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Cyano, Hydroxy, Amino, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, C _r C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, C _r C ₄ -Alkoxymethyl, Ci-C ₄ -Alkylamino, C ₃ -C ₆ -Cycloalkyl, Aminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl oder Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl steht,

R ³ für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Cyano, Hydroxy, Amino, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, C ₁ -C ₄ -AIlCyI, C _r C ₄ -Alkoxy, C _r C ₄ -Alkoxymethyl, Ci-C ₄ -Alkylamino, C ₃ -C ₆ -Cycloalkyl,

Aminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl oder Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl steht,

R ⁴ für Phenyl, Pyridyl, Pyrazinyl, Pyrimidinyl oder Pyridazinyl steht,

wobei Phenyl substituiert ist mit einem Substituenten R ⁶ und einem Substituenten R ⁷ ,

wobei

R ⁶ für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Cyano, Amino, Ethinyl, Aminomethyl, Ci-

C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, C ₃ -C ₆ -Cycloalkyl, C ₃ -C ₆ -Cycloalkyloxy, Aminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl, Aminosulfonyl oder Methylcarb- onylaminosulfonyl steht,

und

R ⁷ für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Ci-C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, C ₃ -C ₆ -Cycloalkyl oder C ₃ -C ₆ -Cycloalkyloxy steht,

und

wobei Pyridyl, Pyrazinyl, Pyrimidinyl und Pyridazinyl substituiert sind mit einem

Substituenten R ⁸ und/oder einem Substituenten R ⁹ oder mit zwei verschiedenen Substituenten R ⁸ oder mit zwei verschiedenen Substituenten R ⁹ ,

wobei

R ⁸ an ein Kohlenstoffatom gebunden ist, das nicht einem Stickstoffatom im Ring benachbart ist, und für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Cyano, Amino,

Ethinyl, Aminomethyl, C]-C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, C ₃ -C ₆ -Cycloalkyl oder C ₃ -C _ö -Cycloalkyloxy steht,

und

R ⁹ an ein Kohlenstoffatom gebunden ist, das einem Stickstoffatom im Ring benachbart ist, und für Wasserstoff, Amino, Ethinyl, Ci-C ₄ -Alkyl, Q-C ₄ -

Alkylamino, Cs-C _ö -Cycloalkyl oder C ₃ -C ₆ -Cycloalkylamino steht,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, die von Formel (I) umfassten Verbindungen der nachfolgend genannten Formern und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausführungsbeispiele genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in stereo- isomeren Formen (Enantiomere, Diastereomere) existieren. Die Erfindung umfasst deshalb die Enantiomeren oder Diastereomeren und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren.

Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegende Erfindung sämtliche tautomere Formen.

AIs Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind, jedoch beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.

Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säureadditionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethan- sulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluor- essigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Malein- säure und Benzoesäure.

Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C- Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolarnin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N-Methyl- morpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin und N-Methylpiperidin.

Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungs- mittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt. Als Solvate sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung Hydrate bevorzugt.

Außerdem umfasst die vorliegende Erfindung auch Prodrugs der erfindungsgemäßen Verbindungen. Der Begriff "Prodrugs" umfasst Verbindungen, welche selbst biologisch aktiv oder inaktiv sein können, jedoch während ihrer Verweilzeit im Körper zu erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden (beispielsweise metabolisch oder hydrolytisch).

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:

Alkyl per se und "Alk" und "Alkyl" in Alkoxy. Alkylamino, Alkylcarbonyl, AlkoxycarbonvU Alkylcarbonyloxy. Alkylaminocarbonyl. Alkylcarbonylamino, Alkylaminosulfonyl und Alkyl- sulfonyl steht für einen linearen oder verzweigten Alkylrest mit in der Regel 1 bis 4, bevorzugt 1 oder

2 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl und tert.-

Butyl.

Alkoxy steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, Isopropoxy und tert.- Butoxy.

Alkylamino steht für einen Alkylaminorest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) AJkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylamino, Ethylamino, n-

Propylamino, Isopropylamino, tert.-Butylamino, NN-Dimethylamino, N,N-Diethylamino, N-Ethyl-N- methylamino, N-Methyl-N-n-propylamino, N-Isopropyl-N-n-propylamino und N-tert.-Buty\-N- methylamino. Ci-C ₃ -Alkylamino steht beispielsweise für einen Monoalkylaminorest mit 1 bis 3

Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminorest mit jeweils 1 bis 3 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.

Alkylcarbonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonyl, Ethylcarbonyl, n-Propyl- carbonyl, Isopropylcarbonyl und tert.-Butylcarbonyl.

Alkoxycarbonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, n-Prop- oxycarbonyl, Isopropoxycarbonyl und tert.-Butoxycarbonyl.

Alkylcarbonyloxy steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonyloxy, Ethylcarbonyloxy, n- Propylcarbonyloxy, Isopropylcarbonyloxy und tert-Butylcarbonyloxy.

Alkylaminocarbonyl steht für einen Alkylaminocarbonylrest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylaminocarbonyl, Ethylaminocarbonyl, n-Propylaminocarbonyl, iso-Propylaminocarbonyl, tert.-Butylaminocarbonyl, N,N-Dimethylaminocarbonyl, NN-Diethylaminocarbonyl, N-Ethyl-N-methylaminocarbonyl, N- Methyl-N-n-propylaminocarbonyl, N-iso-Propyl-N-n-propylaminocarbonyl und N-tert.-Butyl-N- methylaminocarbonyl. Ci-Cs-Alkylaminocarbonyl steht beispielsweise für einen Monoalkylamino- carbonylrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminocarbonylrest mit jeweils 1 bis 3 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.

Alkylcarbonylamino steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonylamino, Ethylcarbonyl- amino, n-Propylcarbonylamino, Isopropylcarbonylamino und te/t-Butylcarbonylamino.

Alkylaminosulfonyl steht für einen Alkylarninosulfonylrest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylaminosulfonyl, Ethylaminosulfonyl, n-Propylaminosulfonyl, iso-Propylaminosulfonyl, tert.-Butylaminosulfonyl, N,N-Dimethylaminosulfonyl, NN-Diethylaminosulfonyl, N-Ethyl-N-methylaminosulfonyl, N-Methyl- N-n-propylaminosulfonyl, N-iso-Propyl-N-n-propylaminosulfonyl und N-ter/.-Butyl-N-methylamino-

sulfonyl. C _r C ₃ -Alkylaminosulfonyl steht beispielsweise für einen Monoalkylaminosulfonylrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminosulfonylrest mit jeweils 1 bis 3 Kohlen- stoffatomen pro Alkylsubstituent.

Alkylsulfonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylsulfonyl, Ethylsulfonyl, n-Propyl- sulfonyl, Isopropylsulfonyl und tert.-Butylsulfonyl.

Cvcloalkyl steht für eine Cycloalkylgruppe mit in der Regel 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, bevorzugt mit 3 bis 5 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclo- pentyl und Cyclohexyl.

Heterocvclyl steht für einen monocyclischen, heterocyclischen Rest mit in der Regel 4 bis 7 Ringatomen und bis zu 3, vorzugsweise bis zu 2 Heteroatomen und/oder Heterogruppen aus der

Reihe N, O, S, SO, SO ₂ . Die Heterocyclyl-Reste können gesättigt oder teilweise ungesättigt sein.

Bevorzugt sind 5- bis 7-gliedrige, monocyclische gesättigte Heterocyclylreste mit bis zu zwei

Heteroatomen aus der Reihe O, N und S, wie beispielhaft und vorzugsweise Tetrahydrofuranyl,

Pyrrolidinyl, Pyrrolinyl, Piperidinyl, Tetrahydropyranyl, Piperazinyl, Morpholinyl und Per- hydroazepinyl.

Heteroaryl steht für einen aromatischen, monocyclischen Rest mit 5 oder 6 Ringatomen und bis zu 4 Heteroatomen aus der Reihe S, O und N, beispielhaft und vorzugsweise für Thienyl, Furyl, Pyrrolyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Isoxazolyl, Isothiazolyl, Imidazolyl, Pyrazolyl, Pyridyl, Pyrimidinyl, Pyridazinyl und Pyrazinyl.

Wenn Reste in den erfindungsgemäßen Verbindungen substituiert sind, können die Reste, soweit nicht anders spezifiziert, ein- oder mehrfach substituiert sein. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung gilt, dass für alle Reste, die mehrfach auftreten, deren Bedeutung unabhängig voneinander ist. Eine Substitution mit ein, zwei oder drei gleichen oder verschiedenen Substituenten ist bevorzugt. Ganz besonders bevorzugt ist die Substitution mit einem Substituenten.

Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher

n für die Zahl 1 , 2 oder 3 steht,

X für N oder CH steht,

Y für N oder CR ⁵ steht,

wobei

R ⁵ für Wasserstoff, Cyano, Trifluormethyl, Hydroxymethyl, Aminomethyl, Ci-C ₄ - Alkyl, C,-C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkoxymethyl, C,-C ₄ -Alkylamino, C _r C ₄ -Alkyl- aminomethyl, C ₃ -C ₆ -Cycloalkyl, Hydroxycarbonyl, Hydroxycarbonylmethyl, Aminocarbonyl, Aminocarbonylmethyl, C _r C ₄ -Alkoxycarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxy- carbonylmethyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonylmethyl,

Ci-C-i-Alkylcarbonylamino, C ₁ -C ₄ -Alkylcarbonylaminomethyl, C _r C ₄ -Alkylcarb- onyl-(Ci-C ₄ -alkyl)amino, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyl-(Ci-C ₄ -alkyl)aminomethyl, Amino- sulfonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminosulfonyl, Ci-C ₄ -Alkylsulfonyl oder Tetrazolyl steht,

R ¹ für Wasserstoff, Cyano, Hydroxy oder Ci-C ₄ -Alkyl steht,

R ² für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Cyano, Hydroxy, Ci-C ₄ -Alkyl oder C _r C ₄ -Alkoxy steht,

R ³ für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Cyano, Hydroxy, C _r C ₄ -Alkyl, C _r C ₄ -Alkoxy, Q-C ₄ - Alkoxymethyl, Cyclopropyl, Aminocarbonyl, C _r C ₄ -Alkoxycarbonyl oder Q-C ₄ -Alkyl- aminocarbonyl steht,

R ⁴ für Phenyl, Pyridyl, Pyrazinyl, Pyrimidinyl oder Pyridazinyl steht,

wobei Phenyl substituiert ist mit einem Substituenten R ⁶ und einem Substituenten R ⁷ ,

wobei

R ⁶ für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Cyano, Ethinyl, Aminomethyl, Methyl, Ethyl, Methoxy, Ethoxy, Aminocarbonyl, Aminosulfonyl oder Methylcarb- onylaminosulfonyl steht,

R ⁷ für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy,

Methyl, Ethyl, Methoxy oder Ethoxy steht,

und

wobei Pyridyl, Pyrazinyl, Pyrimidinyl und Pyridazinyl substituiert sind mit einem Substituenten R ⁸ und/oder einem Substituenten R ⁹ oder mit zwei verschiedenen Sub- stituenten R ⁸ oder mit zwei verschiedenen Substituenten R ⁹ ,

wobei

R ⁸ an ein Kohlenstoffatom gebunden ist, das nicht einem Stickstoffatom im Ring benachbart ist, und für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Cyano, Ethinyl, Aminomethyl, Methyl, Ethyl, Methoxy oder Ethoxy steht,

R ⁹ an ein Kohlenstoffatom gebunden ist, das einem Stickstoffatom im Ring benachbart ist, und für Wasserstoff, Amino, Ethinyl, Methyl, Ethyl,

Methylamino oder Dimethylamino steht,

und

wobei R ⁸ , falls es vorhanden ist, an die para-Position und R ⁹ , falls es vorhanden ist, an die meta-Position zur Verknüpfungsstelle des Phenylrings gebunden ist,

oder

wobei R ⁸ , falls es vorhanden ist, an die meta-Position und R ⁹ , falls es vorhanden ist, an die para-Position zur Verknüpfungsstelle des Phenylrings gebunden ist,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher

n für die Zahl 1 oder 2 steht,

X für N steht,

Y für CR ⁵ steht,

wobei

R ⁵ für Wasserstoff, Cyano, Trifluormethyl, Hydroxymethyl, Aminomethyl, Methoxy, Methoxymethyl, Methylaminomethyl, Dimethylaminomethyl, Hydroxycarbonyl,

Aminocarbonyl, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, Methylaminocarbonyl, Dimethylaminocarbonyl oder Tetrazolyl steht,

R ¹ für Wasserstoff steht,

R ² für Wasserstoff steht,

R ³ für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Cyano, Methyl, Ethyl, n-Propyl, Methoxy, Ethoxy oder Methoxymethyl steht,

R ⁴ für 4-Methoxyphenyl, 3-Chlorphenyl, 3-Chlor-4-fluoφhenyl, 4-Chlorphenyl, 3-Methyl- phenyl, 3-Methyl-4-fluoφhenyl, 4-Methylphenyl, 4-Ethylphenyl, 3-Aminomethylphenyl, 3-Aminomethyl-4-fluoφhenyl, 3-Aminocarbonylphenyl, 5-Chloφyridin-2-yl, 5-Methyl- pyridin-2-yl, 5-Ethylpyridin-2-yl, 5-Methoxypyridin-2-yl, 5-Chlθφyrimidin-2-yl, 5-Me- thylpyrimidin-2-yl, 5-Ethylpyrimidin-2-yl, 5-Methoxypyrimidin-2-yl, 6-Methylpyridin-3- yl, 6-Ethylpyridin-3-yl, 6-Methylpyridazin-3-yl oder 6-Ethylpyridazin-3-yl steht,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher

n für die Zahl 1 steht,

X für N steht,

Y für CR ⁵ steht,

wobei

R ⁵ für Aminocarbonyl, Methoxycarbonyl oder Ethoxycarbonyl steht,

R ¹ für Wasserstoff steht,

R ² für Wasserstoff steht,

R ³ für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Cyano, Methyl oder Methoxy steht,

R ⁴ für 4-Methoxyphenyl steht,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher nfür die Zahl 1 steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher X für N und Y für CR ⁵ steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher X für N, Y für CR ⁵ und R ⁵ für Aminocarbonyl, Methoxycarbonyl oder Ethoxycarbonyl steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ¹ für Wasserstoff steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ² für Wasserstoff steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ³ für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Cyano, Methyl oder Methoxy steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ³ für Wasserstoff steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ² und R ³ für Wasserstoff stehen.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ⁴ für 4-Methoxyphenyl, 3-Chlor- phenyl, 4-Chlorphenyl, 3-Methylphenyl, 4-Methylphenyl oder 4-Ethylphenyl steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ⁴ für 4-Methoxyphenyl steht.

Die in den jeweiligen Kombinationen bzw. bevorzugten Kombinationen von Resten im einzelnen angegebenen Reste-Definitionen werden unabhängig von den jeweiligen angegebenen Kombina- tionen der Reste beliebig auch durch Reste-Definitionen anderer Kombinationen ersetzt.

Ganz besonders bevorzugt sind Kombinationen von zwei oder mehreren der oben genannten Vorzugsbereiche.

Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I), oder ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze, wobei

[A] die Verbindungen der Formel

in welcher n, X, Y, R ² , R ³ und R ⁴ die oben angegebene Bedeutung haben,

in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Säure mit Bromcyan zu Verbindungen der Formel (I), in welcher R ¹ für Wasserstoff steht, umgesetzt werden,

oder

[B] die Verbindungen der Formel

in welcher n, X, Y, R ² , R ³ und R ⁴ die oben angegebene Bedeutung haben, und

PG für eine Hydroxy-Schutzgruppe, vorzugsweise für Trimethylsilyl oder terf.-Butyldimethyl- silyl, steht,

in einem dreistufigen Verfahren zuerst in einem inerten Lösungsmittel mit Bromcyan, vorzugsweise in Gegenwart einer Base, zu Verbindungen der Formel

in welcher n, X, Y, R ² , R ³ und R ⁴ die oben angegebene Bedeutung haben, und

PG für eine Hydroxy-Schutzgruppe, vorzugsweise für Trimethylsilyl oder tert-Butyldimethyl- silyl, steht,

und anschließend durch Abspaltung der Schutzgruppe PG zu Verbindungen der Formel

in welcher n, X, Y, R ² , R ³ und R ⁴ die oben angegebene Bedeutung haben,

umgesetzt werden und in der dritten Stufe die Verbindungen der Formel (V) in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Säure zu Verbindungen der Formel (I), in welcher R ¹ für Wasserstoff steht, cyclisiert werden,

oder

[C] die Verbindungen der Formel (II) in der ersten Stufe mit Verbindungen der Formel

_R ^ (VI),

in welcher

R ¹ für Ci-C ₄ -Alkyl, C ₃ -C ₆ -Cycloalkylcarbonyl, Phenylcarbonyl, 4- bis 7- gliedriges Heterocyclylcarbonyl oder 5- oder 6-gliedriges Heteroarylcarbonyl steht,

umgesetzt werden und in der zweiten Stufe cyclisiert werden,

oder

[D] die Verbindungen der Formel (II) mit Verbindungen der Formel

in welcher

R ¹ für Cyano oder Ci-C ₄ -Alkyl steht, und

A für eine Abgangsgruppe, bevorzugt Phenoxy oder Methylthio, steht,

umgesetzt werden,

oder

[E] die Verbindungen der Formel (I), in welcher R ¹ für Wasserstoff steht, mit Hydroxylamin- Hydrochlorid zu Verbindungen der Formel (I), in welcher R ¹ für Hydroxy steht, umgesetzt werden.

Die Verbindungen der Formel (I), in welcher R ¹ für Wasserstoff steht, können gegebenenfalls mit den entsprechenden Lösungsmitteln und/oder Basen oder Säuren zu ihren Salzen, ihren Solvaten und/oder den Solvaten ihrer Salze umgesetzt werden.

Die freie Base der Salze kann zum Beispiel durch Chromatographie an einer Reversed Phase Säule mit einem Acetonitril- Wasser-Gradienten unter Zusatz einer Base erhalten werden, insbesondere durch Verwendung einer RP 18 Phenomenex Luna C 18(2) Säule und Diethylamin als Base, oder durch Lösen der Salze in einem organischen Lösungsmittel und Ausschütteln mit wässrigen Lösungen von basischen Salzen wie Natriumhydrogencarbonat.

Weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I) oder ihrer Solvate, bei dem Salze der Verbindungen oder Solvate der Salze der Verbindungen durch Chromatographie unter Zusatz einer Base in die Verbindungen überführt werden.

Die Umsetzung nach Verfahren [A] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -20 ⁰ C bis 50 ⁰ C bei Normaldruck.

Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Tetrahydrofuran, Dichlormethan oder Acetonitril oder Gemische dieser Lösungsmittel.

Säuren sind beispielsweise starke anorganische oder organische Säuren wie Fluorwasserstoff, Chlorwasserstoff, Bromwasserstoff, Methansulfonsäure, Trifluormethansulfonsäure oder Trifluor- essigsäure.

Die Umsetzung der ersten Stufe nach Verfahren [B] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -20 ⁰ C bis 50 ⁰ C bei Normaldruck.

Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Tetrahydrofuran, Dichlormethan oder Acetonitril oder Gemische dieser Lösungsmittel.

Basen sind beispielsweise anorganische Basen wie Alkali- oder Erdalkalicarbonate oder -hydro- gencarbonate wie Lithium-, Natrium-, Kalium-, Calcium- oder Cäsiumcarbonat oder Natrium- oder Kaliumhydrogencarbonat, oder Alkalihydride wie Natriumhydrid.

Die Abspaltung von Trimethylsilyl oder terf.-Butyldimethylsilyl als bevorzugt verwendete Hydroxy-Schutzgruppen (PG) in der zweiten Stufe nach Verfahren [B] erfolgt im Allgemeinen in Tetrahydrofuran als Lösungsmittel, vorzugsweise mit Hilfe von Tetra-n-butylammoniumfluorid (TBAF), bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0 ⁰ C bis 40 ⁰ C bei Normaldruck.

Die Umsetzung der dritten Stufe nach Verfahren [B] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -20 ⁰ C bis 50 ⁰ C bei Normaldruck.

Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Tetrahydrofuran, Dichlormethan oder Acetonitril oder Gemische dieser Lösungsmittel.

Säuren sind beispielsweise starke anorganische oder organische Säuren wie Fluorwasserstoff, Chlorwasserstoff, Bromwasserstoff, Methansulfonsäure, Trifluormethansulfonsäure oder Trifluor- essigsäure.

Die Umsetzung der zweiten und dritten Stufe nach Verfahren [B] erfolgt besonders bevorzugt unter Verwendung einer säurelabilen Hydroxy-Schutzgruppe, wie beispielsweise Trimethylsilyl oder terf.-Butyldimethylsilyl, in Gegenwart eines überschusses einer Säure als Eintopf-Reaktion, in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -20 ⁰ C bis 50 ⁰ C bei Normaldruck, ohne Isolierung der Zwischenstufe der Verbindungen der Formel (V).

Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Tetrahydrofuran, Dichlormethan oder Acetonitril oder Gemische dieser Lösungsmittel.

Säuren sind beispielsweise starke anorganische oder organische Säuren wie Fluorwasserstoff, Chlorwasserstoff, Bromwasserstoff, Methansulfonsäure, Trifluormethansulfonsäure oder Trifluor- essigsäure.

Die Umsetzung der ersten Stufe nach Verfahren [C] erfolgt im Allgemeinen in Analogie zu literaturbekannten Verfahren, wie beschrieben in z. B. A. Hetenyi et al, J. Org. Chem. 2003, 68, 2175-2182; D. Douglass, J. Am. Chem. Soc. 1934, 56, 719; F.B. Dains et al, J. Am. Chem. Soc. 1925, 47, 1981-1989 oder F.B. Dains et al., J. Am. Chem. Soc. 1922, 44, 2637-2643.

Die Umsetzung der zweiten Stufe nach Verfahren [C] erfolgt im Allgemeinen in Analogie zu literaturbekannten Verfahren, wie beschrieben in z. B. T. Shibanuma, M. Shiono, T. Mukaiyama, Chem. Lett. 1977, 575-576.

Die Umsetzung nach Verfahren [D] erfolgt im Allgemeinen in Analogie zu literaturbekannten Verfahren, wie beschrieben in z. B. N. Maezaki, A. Furusawa, S. Uchida, T. Tanaka, Tetrahedron 2001, 57, 9309-9316; G. Berecz, J. Reiter, G. Argay, A. Kaiman, J. Heterocycl. Chem. 2002, 39, 319-326; R. Evers, M. Michalik, J. Prakt. Chem. 1991, 333, 699-710; R. Mohr, A. Buschauer, W. Schunack, Arch. Pharm. (Weinheim Ger.) 1988, 321, 221-227; P. J. Garratt et al, Tetrahedron 1989, 45, 829-834 oder V.A. Vaillancourt et al, J. Med. Chem. 2001, 44, 1231-1248.

Die Umsetzung nach Verfahren [E] erfolgt im Allgemeinen in Analogie zu literaturbekannten Verfahren, wie beschrieben in z. B. G. Zinner, G. Nebel, Arch. Pharm. Ber. Dtsch. Ges. 1970, 303, 385-390.

Die Verbindungen der Formeln (VI) und (VII) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.

Die Verbindungen der Formel (II) sind bekannt oder können hergestellt werden, aus den Verbindungen der Formel (ET) durch Abspaltung der Schutzgruppe PG nach dem Fachmann bekannten Bedingungen.

Die Abspaltung von Trimethylsilyl oder tert-Butyldimethylsilyl als bevorzugt verwendete Hydroxy-Schutzgruppen (PG) erfolgt im Allgemeinen in Tetrahydrofuran als Lösungsmittel, vorzugsweise mit Hilfe von Tetra-n-butylammoniumfluorid (TBAF) oder Fluorwasserstoff, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0 ⁰ C bis 40 ⁰ C bei Normaldruck.

Die Verbindungen der Formel (IH) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel

in welcher X, Y und R ⁴ die oben angegebene Bedeutung haben,

mit Verbindungen der Formel

in welcher n, R , R und PG die oben angegebene Bedeutung haben,

unter Ulhnann-Reaktionsbedingungen umgesetzt werden.

Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln unter Zugabe eines Kupfer(I)- Salzes, einer Base und eines Diamin-Liganden, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 60 ⁰ C bis zum Rückfluss des Lösungsmittels bei Normaldruck.

Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise aprotische Lösungsmittel wie Toluol, Dioxan, Tetrahy- drofuran oder Dimethylformamid, bevorzugt ist Dioxan.

Kupfer(I)-Salze sind beispielsweise Kupfer(I)-iodid, Kupfer(I)-chlorid oder Kupfer(I)-oxid, bevorzugt ist Kupfer(I)-iodid.

Basen sind beispielsweise Kaliumphosphat, Kaliumcarbonat oder Cäsiumcarbonat, bevorzugt ist Kaliumphosphat.

Diamin-Liganden sind beispielsweise 1 ,2-Diamine wie NN'-Dimethylethylendiamin.

Die Verbindungen der Formeln (VHI) und (K) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann durch das folgende Syntheseschema veranschaulicht werden:

Schema

Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches Wirkspektrum.

Sie eignen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren.

Bei den erfindungsgemäßen Verbindungen handelt es sich um selektive Inhibitoren des Blutgerinnungsfaktors Xa, die insbesondere als Antikoagulantien wirken.

Darüber hinaus verfügen die erfindungsgemäßen Verbindungen über günstige physikochemische Eigenschaften, wie beispielsweise eine gute Löslichkeit in Wasser und physiologischen Medien, was für ihre therapeutische Anwendung von Vorteil ist.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, vorzugsweise von thromboembo- lischen Erkrankungen und/oder thromboembolischen Komplikationen.

Zu den „thromboembolischen Erkrankungen" im Sinne der vorliegenden Erfindung zählen insbesondere Erkrankungen wie Herzinfarkt mit ST-Segment-Erhöhung (STEMI) und ohne ST- Segment-Erhöhung (non-STEMI), stabile Angina Pectoris, instabile Angina Pectoris, Reokklusio- nen und Restenosen nach Koronarinterventionen wie Angioplastie oder aortokoronarem Bypass, periphere arterielle Verschlusskrankheiten, Lungenembolien, tiefe venöse Thrombosen und Nierenvenenthrombosen, transitorische ischämische Attacken sowie thrombotischer und thrombo- embolischer Hirnschlag.

Die Substanzen eignen sich daher auch zur Prävention und Behandlung von kardiogenen Thrombo- embolien, wie beispielsweise Hirn-Ischämien, Schlaganfall und systemischen Thromboembolien und Ischämien, bei Patienten mit akuten, intermittierenden oder persistierenden Herzarrhythmien, wie beispielsweise Vorhofflimmern, und solchen, die sich einer Kardioversion unterziehen, ferner bei Patienten mit Herzklappen-Erkrankungen oder mit künstlichen Herzklappen. Darüber hinaus sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung der disseminierten intravasalen Gerinnung (DIC) geeignet.

Thromboembolische Komplikationen treten ferner auf bei mikroangiopathischen hämolytischen Anämien, extrakorporalen Blutkreisläufen, wie Hämodialyse, sowie Herzklappenprothesen.

Außerdem kommen die erfindungsgemäßen Verbindungen auch für die Prophylaxe und/oder Behandlung von atherosklerotischen Gefäßerkrankungen und entzündlichen Erkrankungen wie rheumatische Erkrankungen des Bewegungsapparats in Betracht, darüber hinaus ebenso für die

Prophylaxe und/oder Behandlung der Alzheimer'schen Erkrankung. Außerdem können die erfϊndungsgemäßen Verbindungen zur Inhibition des Tumorwachstums und der Metastasenbildung, bei Mikroangiopathien, altersbedingter Makula-Degeneration, diabetischer Retinopathie, diabetischer Nephropathie und anderen mikrovaskulären Erkrankungen sowie zur Prävention und Behandlung thromboembolischer Komplikationen, wie beispielsweise venöser Thromboembolien, bei Tumorpatienten, insbesondere solchen, die sich größeren chirurgischen Eingriffen oder einer Chemo- oder Radiotherapie unterziehen, eingesetzt werden.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können darüber hinaus auch zur Verhinderung von Koagulation ex vivo eingesetzt werden, z.B. zur Konservierung von Blut- und Plasmaprodukten, zur Reinigung/Vorbehandlung von Kathetern und anderen medizinischen Hilfsmitteln und Geräten, zur Beschichtung künstlicher Oberflächen von in vivo oder ex vivo eingesetzten medizinischen Hilfsmitteln und Geräten oder bei biologischen Proben, die Faktor Xa enthalten.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer antikoagulatorisch wirksamen Menge der erfindungsgemäßen Verbindung.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Verhinderung der Blutkoagulation in vitro, insbesondere bei Blutkonserven oder biologischen Proben, die Faktor Xa enthalten, das dadurch gekennzeichnet ist, dass eine antikoagulatorisch wirksame Menge der erfin- dungsgemäßen Verbindung zugegeben wird.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend eine erfindungsgemäße Verbindung und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe der zuvor genannten Erkrankungen. Als geeignete Kombinationswirkstoffe seien beispielhaft und vorzugsweise genannt:

• Lipidsenker, insbesondere HMG-CoA-(3-Hydroxy-3-meλylglutaryl-Coenzym A)-Reduktase- Inhibitoren;

• Koronartherapeutika/Vasodilatatoren, insbesondere ACE-(Angiotensin-Converting-Enzyme)- Inhibitoren; Aü-(Angiotensin II)-Rezeptor-Antagonisten; ß-Adrenozeptor- Antagonisten; alpha- 1-Adrenozeptor- Antagonisten; Diuretika; Calciumkanal -Blocker; Substanzen, die eine Erhöhung von cyclischem Guanosinmonophosphat (cGMP) bewirken, wie beispielsweise Stimulatoren der löslichen Guanylatcyclase;

• Plasminogen-Aktivatoren (Thrombolytika/Fibrinolytika) und die Thrombolyse/Fibrinolyse steigernde Verbindungen wie Inhibitoren des Plasminogen-Aktivator-Inhibitors (P AI-Inhibitoren) oder Inhibitoren des Thrombin-aktivierten Fibrinolyse-Inhibitors (TAFI-Inhibitoren);

• antikoagulatorisch wirksame Substanzen (Antikoagulantien);

• plättchenaggregationshemmende Substanzen (Plättchenaggregationshemmer, Thrombozytenaggregationshemmer);

• Fibrinogen-Rezeptor-Antagonisten (Glycoprotein-IIb/IIIa-Antagonisten);

• sowie Antiarrhythmika.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfin- dungsgemäße Verbindung, üblicherweise zusammen mit einem oder mehreren inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otisch oder als Implantat bzw. Stent.

Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.

Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende, die er- findungsgemäßen Verbindungen schnell und/oder modifiziert abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/oder amorphisierter und/oder gelöster

Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nicht-überzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen überzügen, die die

Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zer- fallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder

Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen.

Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern.

Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen oder -sprays, lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapsem, Suppositorien, Ohren- oder Augen- präparationen, Vaginalkapseln, wässrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelrnixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische Systeme (z.B. Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.

Bevorzugt sind die orale oder parenterale Applikation, insbesondere die orale Applikation.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Lactose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige PoIy- ethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natriumdodecyl- sulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und/oder Geruchskorrigentien.

Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 0.001 bis 1 mg/kg, vorzugsweise etwa 0.01 bis 0.5 mg/kg Körpergewicht zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Dosierung etwa 0.01 bis 100 mg/kg, vorzugsweise etwa 0.01 bis 20 mg/kg und ganz besonders bevorzugt 0.1 bis 10 mg/kg Körpergewicht.

Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt. So kann es in einigen Fällen ausreichend sein, mit weniger als der vorgenannten Mindest-

menge auszukommen, während in anderen Fällen die genannte obere Grenze überschritten werden muss. Im Falle der Applikation größerer Mengen kann es empfehlenswert sein, diese in mehreren Einzelgaben über den Tag zu verteilen.

Die nachfolgenden Ausfuhrungsbeispiele erläutern die Erfindung. Die Erfindung ist nicht auf die Beispiele beschränkt.

Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen.

A. Beispiele

Abkürzungen

DC Dünnschicht-Chromatographie

DCI direkte chemische Ionisation (bei MS)

DMF N,N-Dimethylformamid

DMSO Dimethylsulfoxid d Tag(e) d. Th. der Theorie (bei Ausbeute) ee Enantiomerenüberschuss eq. äquivalent(e)

ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS) h Stunde(n)

HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie

LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektroskopie min Minute(n)

MS Massenspektroskopie

NMR Kernresonanzspektroskopie

RP reverse phase (bei HPLC)

RT Raumtemperatur

Rt Retentionszeit (bei HPLC)

TBTU 0-(Benzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium-tetrafluo roborat

THF Tetrahydrofuran

LC-MS- und HPLC-Methoden

Methode 1: Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%- ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min → 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 50 ⁰ C; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 2: Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%- ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min

90% A → 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min → 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 50 ⁰ C; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 3: Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%- ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min → 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 50 ⁰ C; UV-Detektion: 208-400 nm.

Methode 4: Instrument: Micromass Platform LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Thermo HyPUPJTY Aquastar 3μ 50 mm x 2.1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100% A → 0.2 min 100% A → 2.9 min 30% A → 3.1 min 10% A → 5.5 min 10% A; Ofen: 50 ⁰ C; Fluss: 0.8 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 5: Instrument: HP 1100 mit DAD-Detektion; Säule: Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm; Eluent A: 5 ml Perchlorsäure (70%-ig) / 1 Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0 min 2% B → 0.5 min 2% B → 4.5 min 90% B → 6.5 min 90% B -> 6.7 min 2% B → 7.5 min 2% B; Fluss: 0.75 ml/min; Säulentemperatur: 30 ⁰ C; UV-Detektion: 210 nm.

Ausgangsverbindungen

Beispiel IA

l-(4-Methoxyphenyl)-7-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-lH-pyrazolo[ 3,4-c]pyridin-3-carbonsäureethylester

Die Darstellung der Titelverbindung erfolgt analog zu dem in WO 03/049681 beschriebenen Verfahren (Beispiele 40-44).

Beispiel 2A

N-(2-{[tert.-Butyl(dimethyl)silyl]oxy}ethyl)-4-iodoanilin

Stufe a): 2-[(4-Iodphenyl)amino] ethanol

Eine Suspension aus 6.95 g (32.7 mmol, 4 eq.) Kaliumphosphat und 312 mg (1.6 mmol, 0.2 eq.) Kupfer(I)iodid in 50 ml absolutem Isopropanol wird unter Argon bei RT mit 500 mg (8.2 mmol) 2- Aminoethanol, 5.40 g (16.4 mmol, 2 eq.) 1 ,4-Diiodbenzol und 1.83 ml (32.7 mmol, 4 eq.) 1,2- Ethandiol versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 17 h bei 80 ⁰ C gerührt. Nach Abkühlen auf RT wird das Reaktionsgemisch filtriert und der Rückstand mit Isopropanol gewaschen. Die vereinigten Filtrate werden im Vakuum eingeengt. Die Titelverbindung wird mittels Flash-Chromatograhie (Kieselgel, Laufmittel: Dichlormethan/Methanol 200:1 -> 50:1) isoliert.

Ausbeute: 2.24 g (86% Reinheit, 89% d. Th.)

LC-MS (Methode 4): R, = 3.23 min;

MS (ESIpos): m/z = 264 [M+H] ⁺ ;

¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ = 7.31 (d, 2H), 6.43 (d, 2H), 5.74 (t, IH), 4.68 (t, IH), 3.52 (q, 2H), 3.05 (q, 2H).

Stufe b): N-(2-{[ter£-Butyl(dimethyl)süyl]oxy}ethyl)-4-iodoanilin

Eine Lösung aus 2.23 g (86% Reinheit, 7.3 mmol) 2-[(4-Iodphenyl)amino]ethanol in 50 ml Tetrahydrofuran wird unter Argon bei RT mit 993 mg (14.6 mmol, 2 eq.) Imidazol und 1.32 g (8.7 mmol, 1.2 eq.) tert.-Butyldimethylsilylchlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 18 h bei RT gerührt, mit weiteren 549 mg (3.6 mmol, 0.5 eq.) tert-Butyldimethylsilylchlorid versetzt und 2 h bei RT gerührt. Nach Zugabe von Wasser/Dichlormethan und Phasentrennung wird die wässrige Phase zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen werden mit Wasser und mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Die Titelverbindung wird mittels Flash- Chromatograhie (Kieselgel, Laufmittel: Cyclohexan/Ethylacetat 200:1 — > 100:1) isoliert.

Ausbeute: 2.6 g (96% Reinheit, 91% d. Th.)

LC-MS (Methode 3): R, = 3.45 min;

MS (ESIpos): m/z = 378 [M+H] ⁺ ;

¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ = 7.29 (d, 2H), 6.41 (d, 2H), 5.72 (t, IH), 3.66 (t, 2H), 3.09 (q, 2H), 0.82 (s, 9H), 0.0 (s, 6H).

Ausftihrungsbeispiele

Beispiel 1

6-[4-(2-Imino-l,3-oxazolidin-3-yl)phenyl]-l-(4-methoxyphe nyl)-7-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-lH- pyrazolo[3,4-c]pyridin-3-carboxamid-Methansulfonat

Stufe a): 6- {4-[(2- { [tert. -Butyl(dimethyl)silyl]oxy} ethyl)amino]phenyl} - 1 -(4- methoxyphenyl)-7-oxo-4,5 ,6,7-tetrahydro- 1 H-pyrazolo[3 ,4-c]pyridin-3 - carbonsäureethylester

Eine Suspension aus 295 mg (1.39 mmol, 2 eq.) Kaliumphosphat und 26 mg (0.14 mmol, 0.2 eq.) Kupfer(I)iodid in 9 ml absolutem Dioxan wird unter Argon bei RT mit 273 mg (96% Reinheit, 0.70 mmol, 1 eq.) 2-N-(2-{[tert.-Butyl(dimethyl)silyl]oxy}ethyl)-4-iodoaiύlin (Beispiel 2A), 233 mg (0.70 mmol) l-(4-Methoxyphenyl)-7-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-lH-pyrazolo[3,4 -c]pyridin-3- carbonsäureethylester (Beispiel IA) und 22 μl (0.21 mmol, 0.3 eq.) N,N-Dimethylethylendiamin versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 17 h unter Rückfluss gerührt. Nach Abkühlen auf RT wird das Reaktionsgemisch über Celite filtriert und der Rückstand mit Dioxan gewaschen. Die vereinigten Filtrate werden im Vakuum eingeengt. Die Titelverbindung wird mittels präparativer RP- ηPLC (CromSil C18, Acetonitril/Wasser-Gradient) isoliert.

Ausbeute: 244 mg (94% Reinheit, 58% d. Th.)

LC-MS (Methode 1): R _t = 3.14 min;

MS (ESIpos): m/z = 565 [M+H] ⁺ ;

¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 7.45 (d, 2H), 7.01 (d, 2H), 6.99 (d, 2H), 6.56 (d, 2H), 5.56 (t, IH), 4.32 (q, 2H), 3.93 (t, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.69 (t, 2H), 3.19-3.09 (m, 4H), 1.30 (t, 3H), 0.85 (s,

9H), 0.0 (s, 6H).

Stufe b): 6- {4-[(2- { [tert. -Butyl(dimethyl)silyl]oxy} ethyl)amino]phenyl} - 1 -(4- memoxyphenyl)-7-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-lH-pyrazolo[3,4-c]pyr idin-3- carbonsäure

Eine Lösung aus 244 mg (94% Reinheit, 0.41 mmol) 6-{4-[(2-{[tert.-Butyl(dimethyl)silyl]oxy}- ethyl)amino]phenyl } - 1 -(4-methoxyphenyl)-7-oxo-4,5 ,6,7-tetrahydro- 1 H-pyrazolo[3 ,4-c]pyridin-3 - carbonsäureethylester in 12 ml eines Gemisches aus Tetrahydrofuran/Wasser (3:1) wird bei RT mit 20 mg (0.81 mmol, 2 eq.) Lithiumhydroxid versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 5 h bei RT gerührt, mit Wasser verdünnt und mit 1 N Salzsäure auf pH 2 gestellt. Nach Zugabe von Ethylacetat und Phasentrennung wird die wässrige Phase dreimal mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wird ohne weitere Reinigung in der nächsten Reaktion eingesetzt.

Ausbeute: 220 mg (70% Reinheit, 74% d. Th.)

LC-MS (Methode 2): R _t = 3.06 min;

MS (ESIpos): m/z = 537 [M+η] ⁺ .

Stufe c): 6- {4-[(2- { [tert. -Butyl(dimethyl)silyl]oxy} ethyl)amino]phenyl} - 1 -(4- methoxyphenyl)-7-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-lH-pyrazolo[3,4-c]py ridin-3- carboxamid

Eine Lösung aus 195 mg (70% Reinheit, 0.25 mmol) 6-{4-[(2-{[tert.-Butyl(dimethyl)-silyl]oxy}- ethyl)amino]phenyl}-l-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-4,5,6,7-tetrah ydxo-lH-pyrazolo[3,4-c]pyridin-3- carbonsäure in 10 ml Dimethylformamid wird unter Argon bei RT mit 106 mg (0.28 mmol, 1.1 eq.) O-(7-Azabenzotriazol-l-yl)-N _r /V^ ₍ N'^/'-tetramethyluronium-ηexafluorophosphat (HATU), 39 mg (0.51 mmol, 2 eq.) Ammoniumacetat und 97 μl (0.56 mmol, 2.2 eq.) NN-Diisopropyl- ethylamin versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 21 h bei RT gerührt und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird in einem Gemisch aus gesättigter, wässriger Ammoniumchlorid-Lösung und Ethlyacetat aufgenommen. Nach Phasentrennung wird die wässrige Phase zweimal mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen werden mit Wasser und mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Die Titelverbindung wird mittels präparativer RP-HPLC (CromSil Cl 8, Acetonitril/ Wasser-Gradient) isoliert.

Ausbeute: 52 mg (38% d. Th.)

LC-MS (Methode 3): R ₁ = 2.90 min;

MS (ESIpos): m/z = 536 [M+H] ⁺ ;

¹ H-NMR (400 MHz, DMSOd ₆ ): δ = 7.68 (s, IH), 7.47 (d, 2H), 7.39 (s, IH), 7.02 (d, 2H), 6.98 (d, 2H), 6.55 (d, 2H), 5.54 (t, IH), 3.91 (t, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.69 (t, 2H), 3.19-3.08 (m, 4H), 0.85 (s, 9H), 0.0 (s, 6H).

Stufe d): 6-{4-[(2-{[ter/.-Butyl(dimethyl)silyl]oxy}ethyl)(cyano)aπü no]phenyl}-l-(4- methoxyphenyl)-7-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-lH-pyrazolo[3,4-c]py ridin-3- carboxamid

Eine Lösung aus 51 mg (0.09 mmol) 6-{4-[(2-{[terf.-Butyl(dimemyl)silyl]oxy}ethyl)amino]- phenyl}-l-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-lH-pyra zolo[3,4-c]pyridin-3-carboxamid in 2.9 ml Tetrahydrofuran wird unter Argon bei RT mit 23 mg (0.28 mmol, 3 eq.) Natriumhydro- gencarbonat und 46 μl Bromcyan-Lösung (3 M in Dichlormethan, 0.14 mmol, 1.5 eq.) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 4 d bei 40 ⁰ C gerührt. Nach Zugabe von Wasser/Dichlormethan und Phasentrennung wird die wässrige Phase zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen werden mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung und mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Die Titelverbindung wird mittels präparativer RP-ηPLC (CromSil Cl 8, Acetonitril/Wasser-Gradient) isoliert.

Ausbeute: 37 mg (72% d. Th.)

LC-MS (Methode 3): R _t = 2.75 min;

MS (ESIpos): m/z = 561 [M+η] ⁺ ;

¹ H-NMR (400 MHz, DMSOd ₆ ): δ = 7.73 (s, IH), 7.51 (d, 2H), 7.45 (s, IH), 7.40 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 7.01 (d, 2H), 4.03 (t, 2H), 3.85 (s, 4H), 3.81 (s, 3H), 3.21 (t, 2H) ₅ 0.86 (s, 9H), 0.0 (s, 6H).

Stufe e): 6-[4-(2-Immo-l,3-oxazolidin-3-yl)phenyl]-l-(4-methoxyphenyl) -7-oxo-4,5,6,7- tetrahydro-lH-pyrazolo[3,4-c]pyridin-3-carboxamid-Methansulf onat

Eine Lösung aus 34 mg (0.06 mmol) 6-{4-[(2-{[terf.-Butyl(dimethyl)silyl]oxy}ethyl)-(cyano)- amino]phenyl}-l-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-l H-pyrazolo[3,4-c]pyridin-3- carboxamid in 2 ml Acetonitril wird bei RT mit 8 μl (0.12 mmol, 2.1 eq.) Methansulfonsäure versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 20 h bei RT gerührt und mit 2 ml Diethylether versetzt. Der entstehende Niederschlag wird filtriert, mit Diethylether gewaschen und im Vakuum getrocknet.

Ausbeute: 14.4 mg (46% d. Th.)

ηPLC (Methode 5): R, = 3.43 min;

MS (ESIpos): m/z = 447 [M+η] ⁺ (freie Base);

¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 9.60 (br. s, IH), 8.90 (br. s, IH), 7.74 (s, IH), 7.59-7.51 (m, 4H), 7.50 (d, 2H), 7.44 (s, IH), 7.00 (d, 2H), 4.84 (t, 2H), 4.25 (t, 2H), 4.08 (t, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.23 (t, 2H), 2.28 (s, 3H).

B. Bewertung der pharmakologischen Wirksamkeit

Die erfindungsgemäßen Verbindungen wirken insbesondere als selektive Inhibitoren des Blutgerinnungsfaktors Xa und hemmen nicht oder erst bei deutlich höheren Konzentrationen auch andere Serinproteasen wie Plasmin oder Trypsin.

Als „selektiv" werden solche Inhibitoren des Blutgerinnungsfaktors Xa bezeichnet, bei denen die IC ₅₀ -Werte für die Faktor Xa-Inhibierung gegenüber den IC ₅₀ - Werten für die Inhibierung anderer Serinproteasen, insbesondere Plasmin und Trypsin, um mindestens das 100-fache kleiner sind, wobei bezüglich der Testmethoden für die Selektivität Bezug genommen wird auf die im folgenden beschriebenen Testmethoden der Beispiele B.a.l) und B.a.2).

Die vorteilhaften pharmakologischen Eigenschaften der erfindungsgemäßen Verbindungen können durch folgende Methoden festgestellt werden:

a) Testbeschreibungen (in vitro)

a.l) Messung der Faktor Xa-Hemmung:

Die enzymatische Aktivität von humanem Faktor Xa (FXa) wird über die Umsetzung eines für den FXa-spezifischen chromogenen Substrats gemessen. Dabei spaltet der Faktor Xa aus dem chromo- genen Substrat p-Nitroanilin ab. Die Bestimmungen werden wie folgt in Mikrotiterplatten durchgeführt:

Die Prüfsubstanzen werden in unterschiedlichen Konzentrationen in DMSO gelöst und für 10 Minuten mit humanem FXa (0.5 nmol/1 gelöst in 50 mmol/1 Tris-Puffer [C,C,C-Tris(hydroxy- methyl)aminomethan], 150 mmol/1 NaCl, 0.1% BSA [bovine serum alburnine], pH = 8.3) bei 25°C inkubiert. Als Kontrolle dient reines DMSO. Anschließend wird das chromogene Substrat (150 μmol/1 Pefachrome ^® FXa der Firma Pentapharm) hinzugefügt. Nach 20 Minuten Inkubationsdauer bei 25°C wird die Extinktion bei 405 nm bestimmt. Die Extinktionen der Testansätze mit Prüfsubstanz werden mit den Kontrollansätzen ohne Prüfsubstanz verglichen und daraus die IC ₅₀ - Werte berechnet.

Repräsentative Wirkdaten aus diesem Test sind in der folgenden Tabelle 1 aufgeführt:

Tabelle 1

a.2) Bestimmung der Selektivität:

Zum Nachweis der selektiven FXa-Inhibition werden die Prüfsubstanzen auf ihre Hemmung anderer humaner Serinproteasen wie Trypsin und Plasmin hin untersucht. Zur Bestimmung der enzymatischen Aktivität von Trypsin (500 mU/ml) und Plasmin (3.2 nmol/1) werden diese Enzyme in Tris-Puffer (100 mmol/1, 20 mmol/1 CaCl ₂ , pH = 8.0) gelöst und für 10 Minuten mit Prüfsubstanz oder Lösungsmittel inkubiert. Anschließend wird durch Zugabe der entsprechenden spezifischen chromogenen Substrate (Chromozym Trypsin ^® und Chromozym Plasmin ^® ; Fa. Roche Dia- gnostics) die enzymatische Reaktion gestartet und die Extinktion nach 20 Minuten bei 405 nm bestimmt. Alle Bestimmungen werden bei 37°C durchgeführt. Die Extinktionen der Testansätze mit Prüfsubstanz werden mit den Kontrollproben ohne Prüfsubstanz verglichen und daraus die IC ₅₀ - Werte berechnet.

a.3) Bestimmung der antϊkoagulatorischen Wirkung:

Die antikoagulatorische Wirkung der Prüfsubstanzen wird in vitro in Human- und Kaninchenplasma bestimmt. Dazu wird Blut unter Verwendung einer 0.11 molaren Natriumcitrat-Lösung als Vorlage in einem Mischungsverhältnis Natriumcitrat/Blut 1:9 abgenommen. Das Blut wird unmittelbar nach der Abnahme gut gemischt und 10 Minuten bei ca. 2500 g zentrifugiert. Der überstand wird abpipettiert. Die Prothrombinzeit (PT, Synonyme: Thromboplastinzeit, Quick-Test) wird in Gegenwart variierender Konzentrationen an Prüfsubstanz oder dem entsprechenden Lösungsmittel mit einem handelsüblichen Testkit (Hemoliance ^® RecombiPlastin, Fa. Instrumentation Laboratory) bestimmt. Die Testverbindungen werden 3 Minuten bei 37°C mit dem Plasma inkubiert. Anschließend wird durch Zugabe von Thromboplastin die Gerinnung ausgelöst und der Zeitpunkt des Gerinnungseintritts bestimmt. Es wird die Konzentration an Prüfsubstanz ermittelt, die eine Verdoppelung der Prothrombinzeit bewirkt.

b) Bestimmung der antithrombotischen Wirkung (in vivo)

b.l) Arteriovenöses Shunt-Modell (Kaninchen):

Nüchterne Kaninchen (Stamm: Esd: NZW) werden durch intramuskuläre Gabe einer Rompun/ Ketavet-Lösung narkotisiert (5 mg/kg bzw. 40 mg/kg). Die Thrombusbildung wird in einem arteriovenösen Shunt in Anlehnung an die von CN. Berry et al. [Semin. Thromb. Hemost. 1996, 22, 233-241] beschriebene Methode ausgelöst. Dazu werden die linke Vena jugularis und die rechte Arteria carotis freipräpariert. Ein extracorporaler Shunt wird mittels eines 10 cm langen Venenkatheders zwischen den beiden Gefäßen gelegt. Dieser Katheder ist in der Mitte in einen weiteren, 4 cm langen Polyethylenschlauch (PE 160, Becton Dickenson), der zur Erzeugung einer

thrombogenen Oberfläche einen aufgerauhten und zu einer Schlinge gelegten Nylonfaden enthält, eingebunden. Der extrakorporale Kreislauf wird 15 Minuten lang aufrechterhalten. Dann wird der Shunt entfernt und der Nylonfaden mit dem Thrombus sofort gewogen. Das Leergewicht des Nylonfadens ist vor Versuchsbeginn ermittelt worden. Die Prüfsubstanzen werden vor Anlegung des extrakorporalen Kreislaufs entweder intravenös über eine Ohrvene oder oral mittels Schlund- sonde verabreicht.

c) Löslichkeitsassay

Benötigte Reagenzien:

• PBS-Puffer pH 7.4: 90.00 g NaCl p.a. (z.B. Merck Art. Nr. 1.06404.1000), 13.61 g KH ₂ PO ₄ p.a. (z.B. Merck Art. Nr. 1.04873.1000) und 83.35 g IN NaOH (z.B. Bernd Kraft GmbH Art. Nr.

01030.4000) in einen 1 1 Messkolben einwiegen, mit Wasser auffüllen und ca. 1 Stunde rühren.

• Acetatpuffer pH 4.6: 5.4 g Natriumacetat x 3 H ₂ O p.a. (z.B. Merck Art. Nr. 1.06267.0500) in einen 100 ml Messkolben einwiegen, in 50 ml Wasser lösen, mit 2.4 g Eisessig versetzen, auf 100 ml mit Wasser auffüllen, pH- Wert überprüfen und falls notwendig auf pH 4.6 einstellen.

• Dimethylsulfoxid (z.B. Baker Art. Nr. 7157.2500)

• destilliertes Wasser

Herstellung der Kalibrierlösuneen:

Herstellung der Ausgangslösung für Kalibrierlösungen (Stammlösung): In ein 2 ml Eppendorf- Safe-Lock Tube (Eppendorf Art. Nr. 0030 120.094) werden ca. 0.5 mg des Wirkstoffes genau eingewogen, zu einer Konzentration von 600 μg/ml mit DMSO versetzt (z.B. 0.5 mg Wirkstoff + 833 μl DMSO) und bis zur vollständigen Lösung mittels eines Vortexers geschüttelt.

Kalibrierlösung 1 (20 μg/ml): 34.4 μl der Stammlösung werden mit 1000 μl DMSO versetzt und homogenisiert.

Kalibrierlösung 2 (2.5 μg/ml): 100 μl der Kalibrierlösung 1 werden mit 700 μl DMSO versetzt und homogenisiert.

Herstellung der Probenlösungen:

Probenlösung für Löslichkeit bis 10 g/l in PBS-Puffer pH 7.4: In ein 2 ml Eppendorf-Safe-Lock Tube (Eppendorf Art. Nr. 0030 120.094) werden ca. 5 mg des Wirkstoffes genau eingewogen und

zu einer Konzentration von 5 g/l mit PBS-Puffer pH 7.4 versetzt (z.B. 5 mg Wirkstoff + 500 μl PBS-PufferpH 7.4).

Probenlösung fiir Löslichkeit bis 10 g/l in Acetatpuffer pH 4.6: In ein 2 ml Eppendorf-Safe-Lock Tube (Eppendorf Art. Nr. 0030 120.094) werden ca. 5 mg des Wirkstoffes genau eingewogen und zu einer Konzentration von 5 g/l mit Acetatpuffer pH 4.6 versetzt (z.B. 5 mg Wirkstoff + 500 μl Acetatpuffer pH 4.6).

Probenlösung fiir Löslichkeit bis 10 g/l in Wasser: In ein 2 ml Eppendorf-Safe-Lock Tube (Eppendorf Art. Nr. 0030 120.094) werden ca. 5 mg des Wirkstoffes genau eingewogen und zu einer Konzentration von 5 g/l mit Wasser versetzt (z.B. 5 mg Wirkstoff + 500 μl Wasser).

Durchführung:

Die so hergestellten Probenlösungen werden 24 Stunden bei 1400 rpm mittels eines temperierbaren Schüttlers (z.B. Eppendorf Thermomixer comfort Art. Nr. 5355 000.011 mit Wechselblock Art. Nr. 5362.000.019) bei 20 ⁰ C geschüttelt. Von diesen Lösungen werden jeweils 180 μl abgenommen und in Beckman Polyallomer Centrifuge Tubes (Art. Nr. 343621) überführt. Diese Lösungen werden 1 Stunde mit ca. 223.000 *g zentrifugiert (z.B. Beckman Optima L-90K Ultracentrifuge mit Type 42.2 Ti Rotor bei 42.000 rpm). Von jeder Probenlösung werden 100 μl des überstandes abgenommen und 1:5, 1:100 und 1:1000 mit dem jeweils verwendeten Lösungsmittel (Wasser, PBS-Puffer 7.4 oder Acetatpuffer pH 4.6) verdünnt. Es wird von jeder Verdünnung eine Abfüllung in ein geeignetes Gefäß für die HPLC-Analytik vorgenommen.

Analytik:

Die Proben werden mittels RP-HPLC analysiert. Quantifiziert wird über eine Zwei-Punkt- Kalibrationskurve der Testverbindung in DMSO. Die Löslichkeit wird in mg/1 ausgedrückt.

Analysensequenz:

1. Kallibrierlösung 2.5 mg/ml

2. Kallibrierlösung 20 μg/ml

3. Probenlösung 1 : 5

4. Probenlösung 1 :100

5. Probenlösung 1:1000

HPLC-Methode für Säuren:

Agilent 1100 mit DAD (G1315A), quat. Pumpe (G1311A), Autosampier CTC HTS PAL, Degaser (G1322A) and Säulenthermostat (G1316A); Säule: Phenomenex Gemini C18, 50 x 2 mm, 5 μ; Temperatur: 40 ⁰ C; Eluent A: Wasser/Phosphorsäure pH 2; Eluent B: Acetonitril; Flussrate: 0.7 ml/min; Gradient: 0-0.5 min 85% A, 15% B; Rampe: 0.5-3 min 10% A, 90% B; 3-3.5 min 10% A, 90% B; Rampe: 3.5-4 min 85% A, 15% B; 4-5 min 85% A, 15% B.

HPLC-Methode für Basen:

Agilent 1100 mit DAD (G1315A), quat. Pumpe (G131 IA), Autosampier CTC HTS PAL, Degaser (G1322A) and Säulenthermostat (G1316A); Säule: VDSoptilab Kromasil 100 C18, 60 x 2.1 mm, 3.5 μ; Temperatur: 30 ⁰ C; Eluent A: Wasser + 5 ml Perchlorsäure/l; Eluent B: Acetonitril; Flussrate: 0.75 ml/min; Gradient: 0-0.5 min 98% A, 2% B; Rampe: 0.5-4.5 min 10% A, 90% B; 4.5-6 min 10% A, 90% B; Rampe: 6.5-6.7 min 98% A, 2% B; 6.7-7.5 min 98% A, 2% B.

C. Ausftihrungsbeispiele für pharmazeutische Zusammensetzungen

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überführt werden:

Tablette:

Zusammensetzung:

100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50 mg Maisstärke (nativ), 10 mg Polyvinylpyrrolidon (PVP 25) (Fa. BASF, Ludwigshafen, Deutschland) und 2 mg Magnesiumstearat.

Tablettengewicht 212 mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm.

Herstellung:

Die Mischung aus erfindungsgemäßer Verbindung, Lactose und Stärke wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser granuliert. Das Granulat wird nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat 5 Minuten gemischt. Diese Mischung wird mit einer üblichen Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben). Als Richtwert für die Verpressung wird eine Presskraft von 15 kN verwendet.

Oral applizierbare Suspension:

Zusammensetzung:

1000 mg der erfindungsgemäßen Verbindung, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg Rhodigel ^® (Xanthan gum der Firma FMC, Pennsylvania, USA) und 99 g Wasser.

Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 10 ml orale Suspension.

Herstellung:

Das Rhodigel wird in Ethanol suspendiert, die erfindungsgemäße Verbindung wird der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluß der Quellung des Rhodigels wird ca. 6 h gerührt.

Oral applizierbare Lösung:

Zusammenset2λing:

500 mg der erfindungsgemäßen Verbindung, 2.5 g Polysorbat und 97 g Polyethylenglycol 400. Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 20 g orale Lösung.

Herstellung:

Die erfindungsgemäße Verbindung wird in der Mischung aus Polyethylenglycol und Polysorbat unter Rühren suspendiert. Der Rührvorgang wird bis zur vollständigen Auflösung der erfindungs- gemäßen Verbindung fortgesetzt.

j.v.-Lösung:

Die erfindungsgemäße Verbindung wird in einer Konzentration unterhalb der Sättigungslöslichkeit in einem physiologisch verträglichen Lösungsmittel (z.B. isotonische Kochsalzlösung, Glucose- lösung 5% und/oder PEG 400-Lösung 30%) gelöst. Die Lösung wird steril filtriert und in sterile und pyrogenfreie Injektionsbehältnisse abgefüllt.