Die vorliegende Erfindung betrifft ein Textilwaschverfahren. Insbesondere betrifft die Anmeldung ein mehrstufiges maschinelles Textilwaschverfahren in dessen Verlauf wasch- und reinigungsaktive Substanzen zeitversetzt dosiert werden.

Während derzeit insgesamt weniger als ein Drittel der Menschheit Zugang zu einer Textilwaschmaschine haben, ist die maschinelle Textilreinigung seit den 1970er Jahren in einigen Regionen der Erde das Standardverfahren zur Entfernung von Verschmutzungen und zur Auffrischung der Wäsche.

Sowohl die Maschinentechnik als auch die in den maschinellen Textilreinigungsverfahren eingesetzten Waschmittel sind in den vergangenen Jahrzehnten kontinuierlich entwickelt und im Hinblick auf ihr Leistungsvermögen und ihren ökologischen Fußabdruck verbessert worden. Wenn die Entwicklungsbemühungen anfänglich auf die Verbesserung der Einzelbestandteile des Wasch prozesses, beispielsweise die Textilwaschmaschine und deren Mechanik und Programme oder das Textilwaschmittel, gerichtet waren, steht in jüngster Zeit insbesondere auch die Verbesserung der Wechselwirkung dieser Bestandteile im Mittelpunkt des Interesses.

In der internationalen Anmeldung WO 2012/048911 A1 wird ein Waschverfahren unter Einsatz einer Textilwaschmaschine beschrieben, in dessen Verlauf die Textilien in einem Spülgang mit einer Spüllösung besprüht werden.

In dem europäischen Patent EP 3 428 336 B1 werden Waschverfahren mit einer Mindestdauer von 110 Minuten offenbart, in deren Rahmen der Waschflüssigkeit Verjüngungsmittel-haltige Waschmittel zugesetzt werden.

Das europäische Patent EP 2 711 413 B1 hat Waschverfahren zum Gegenstand, welche durch eine zeitversetzte Dosierung unterschiedlicher waschaktiver Substanzen gekennzeichnet sind.

Das europäische Patent EP 2 566 943 B1 offenbart die sensorgesteuerte zeitversetzte Dosierung von waschaktiven Substanzen, beispielsweise Peroxocarbonsäuren, in das Innere einer T exti Iwasch masch ine.

Auch vor dem Hintergrund der bisherigen Entwicklungen besteht weiterhin die technische Aufgabe, die Waschleistung von Textilwaschmitteln in Textilwaschmaschinen zu verbessern.

Zur Lösung dieser Aufgabe ist ein Waschverfahren für Textilien in einer Trommelwaschmaschine, umfassend die Schritte a) Bereitstellen einer Waschmaschine mit einem Waschprogramm, umfassend einen Hauptwaschgang der Dauer t«,; b) Einbringen von Textilien in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine; c) Einbringen einer wässrigen Flotte in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine; d) Einbringen einer ersten Waschmittelzusammensetzung, umfassend mindestens ein Tensid in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine im Hauptwaschgang zu einem Zeitpunkt 0 bis 10% t _w ; e) Einbringen einer zweiten Waschmittelzusammensetzung, umfassend, bezogen auf ihr Gesamtgewicht, i) mindestens 4 Gew.-% aktives Protease-Protein ii) mindestens 80 Gew.-% eines flüssigen Trägers in die wässrige Flotte des Hauptwaschgangs zu einem Zeitpunkt 11 bis 99% t _w .

Als Waschmaschine wird ein motorbetriebenes Gerät zur Reinigung von Textilien bezeichnet. Bevorzugt sind insbesondere Trommelwaschmaschinen mit einer um eine horizontale Achse drehbaren Wäschetrommel. Das erfindungsgemäße Verfahren eignet sich insbesondere zur Durchführung in einer Trommelwaschmaschine mit einem Laugenbehälter, einer innerhalb des Laugenbehälters angebrachte Wäschetrommel, als Wäschebehandlungsraum, sowie einer Abpumpvorrichtung, die zum Abpumpen wässriger Flotte aus dem Laugenbehälter eingerichtet ist.

In Schritt a) des Verfahrens wird eine Waschmaschine mit einem Waschprogramm, umfassend einen Hauptwaschgang der Dauer t _w bereitgestellt. Übliche Waschmaschine verfügen in der Regel über eine Mehrzahl, für die Reinigung unterschiedlicher Textilien vorgesehener Waschprogramme, welche neben einem Hauptwaschgang über Vorspül-, Spül- und/oder Schleudergänge verfügen können. Bevorzugte Waschprogramme umfassen einen Hauptwaschgang, mindestens einen Spülgang und mindestens einen Schleudergang. Alternative Waschprogramme weisen mindestens einen Vorwaschgang, einen Hauptwaschgang, mindestens einen Spülgang und mindestens einen Schleudergang auf.

Neben der auf die Wäsche wirkenden mechanischen Kräfte, dem eingesetzten Waschmittel und der in der Waschflotte erreichten Flottentemperatur hat die Dauer des Waschgangs, insbesondere des Hauptwaschgangs Einfluss auf die erzielte Reinigungsleistung. Vorzugsweise beträgt die Dauer t _w des in dem Waschverfahren eingesetzten Hauptwaschgangs 15 bis 400 Minuten, vorzugsweise 30 bis 240 Minuten und insbesondere 60 bis 180 Minuten.

Bei den in Schritt b) in den Wäschebehandlungsraum eingebrachten Textilien kann es sich beispielsweise um Baumwoll- oder Synthetiktextilien aber auch um Mischgewebe handeln.

In einer bevorzugten Ausführungsform des Waschverfahrens verfügt die Trommelwaschmaschine über eine Vorrichtung zur Erfassung des Gewichts der in Schritt b) eingebrachten Textilien. In einer beispielhaften Ausführungsform verfügt die Trommelwaschmaschine als Vorrichtung zur Erfassung der Textilgewichts über einen Beladungssensor. Der Einsatz eines solchen Sensors ermöglicht die direkte Ermittlung des Gewichts der in Schritt b) in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebrachten Textilien.

In einer bevorzugten Ausführungsform des Verfahrens wird mittels eines Beladungssensors das Gewicht der in Schritt b) in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebrachten Textilien ermittelt und auf Grundlage dieser Gewichtsinformation sowie gegebenenfalls weiterer Informationen, vorzugsweise sensorisch erfasster Informationen, ein Behandlungsparameter ermittelt. Bei dem Behandlungsparameter kann es sich beispielsweise um die Dauer des Wasch Programms Oder seiner Programmschritte wie dem Vorwaschgang, Hauptwaschgang oder Spülgang handeln. Alternativ betrifft der Behandlungsparameter die Temperatur der wässrigen Flotte, vorzugsweise die Temperatur der wässrigen Flotte im Hauptwaschgang. Besonders bevorzugt ist es, wenn der Behandlungsparameter die in Schritt d) und/oder e) eingebrachte Menge der ersten oder zweiten Waschmittelzusammensetzung betrifft.

Vorzugsweise ist das Waschprogramm derart ausgestaltet, dass das mittels der Vorrichtung erfasste Textilgewicht die Menge der in Schritt e) eingebrachten zweiten Waschmittelzusammensetzung beeinflusst.

Die Ermittlung des Behandlungsparameters kann durch Vergleich des ermittelten Textilgewichts mit Vergleichswerten und diesen Vergleichswerten zugeordneten Behandlungsparametern erfolgen. Entsprechende Vergleichswerte können in einer Datenbank hinterlegt sein

Der ermittelte Behandlungsparameter kann dem Benutzer zur Verfügung gestellt werden. Der Behandlungsparameter kann dem Benutzer auf einer Anzeige ausgegeben werden bzw. eine entsprechende Ausgabe kann ausgelöst werden, beispielsweise eine Ausgabe auf einem Bildschirm insbesondere in Textform und/oder eine akustische Ausgabe wie eine sprachliche Mitteilung. Der Benutzer kann dann die Behandlung durchführen. Alternativ oder zusätzlich hierzu kann in einer Ausgestaltung des Verfahrens der Behandlungsparameter an die Waschmaschine ausgegeben werden. Beispielsweise kann der Behandlungsparameter mindestens einen Parameter des Waschprogrammes repräsentieren, welcher an die Waschmaschine ausgegeben wird, so dass die Waschmaschine beispielsweise das entsprechende Waschprogramm als Voreinstellung übernimmt und der Benutzer die Reinigungsvorrichtung lediglich starten muss. Ebenso ist es denkbar, dass die Waschmaschine mit der Ausgabe das Waschprogramms automatisch durchführt. Die Waschmaschine kann beispielsweise über eine Dosierungsvorrichtung für Waschmittelzusammensetzungen verfügen, um die Menge der ersten und/oder zweiten Waschmittelzusammensetzung automatisch bereitzustellen. Im Ergebnis wird hiermit die Benutzerfreundlichkeit des Verfahrens verbessert. Die in Schritt c) in den Wäschebehandlungsraum eingebrachte wässrige Flotte weist vorzugsweise ein Volumen von 3 bis 40 I, vorzugsweise von 6 bis 30 I und insbesondere 8 bis 20 I auf.

Da das erfindungsgemäße Waschverfahren insbesondere bei hohen Wasserhärten überdurchschnittliche Reinigungsergebnisse erzielt, beträgt die Wasserhärte der in Schritt c) eingebrachten wässrigen Flotte vorzugsweise mehr als 14°dH, bevorzugt mehr als 17°dH und insbesondere mehr als 21 °dH.

In einer bevorzugten Ausführungsform des Waschverfahrens verfügt die Trommelwaschmaschine über eine Vorrichtung zur Erfassung der Wasserhärte der in Schritt c) eingesetzten wässrigen Flotte. In einer beispielhaften Ausführungsform verfügt die Trommelwaschmaschine als Vorrichtung zur Erfassung der Wasserhärte über einen Sensor zur Bestimmung der Wasserhärte. Der Einsatz eines solchen Sensors ermöglicht die direkte Ermittlung der Härte der in Schritt c) in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebrachten wässrigen Flotte.

In einer alternativen Ausführungsform wird die Härte der in Schritt c) in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebrachten wässrigen Flotte in indirekter Weise ermittelt. Einen indirekten Zugang zur Wasserhärte bietet beispielweise die Ermittlung des geografischen Standorts der Trommelwaschmaschine und Abgleich dieser Standortdaten mit den in einer Datenbank für unterschiedliche Standorte hinterlegte Wasserhärten. Die Standortdaten können durch den Nutzer beispielsweise in Form von Koordinaten oder den Koordinaten äquivalenten Informationen wie Postleitzahlen eingegeben werden oder automatisch durch die Waschmaschine selbst, beispielsweise durch ein GPS-Ortungssystem, bestimmt werden.

In einer bevorzugten Ausführungsform des Verfahrens wird mittels einer Vorrichtung zur Ermittlung der Wasserhärte die Wasserhärte der in Schritt c) in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebrachten wässrigen Flotte ermittelt und auf Grundlage dieser Wasserhärteinformation sowie gegebenenfalls weiterer Informationen, vorzugsweise sensorisch erfasster Informationen, ein Behandlungsparameter ermittelt. Bei dem Behandlungsparameter kann es sich beispielsweise um die Dauer des Waschprogramms Oder seiner Programmschritte wie dem Vorwaschgang, Hauptwaschgang oder Spülgang handeln. Alternativ betrifft der Behandlungsparameter die Temperatur der wässrigen Flotte, vorzugsweise die Temperatur der wässrigen Flotte im Hauptwaschgang. Besonders bevorzugt ist es, wenn der Behandlungsparameter die in Schritt d) und/oder e) eingebrachte Menge der ersten oder zweiten Waschmittelzusammensetzung betrifft.

Vorzugsweise ist das Waschprogramm derart ausgestaltet, dass die mittels der Vorrichtung erfassten Wasserhärten die Menge der in Schritt e) eingebrachten zweiten Waschmittelzusammensetzung beeinflusst. Die Ermittlung des Behandlungsparameters kann durch Vergleich der ermittelten Wasserhärte mit Vergleichswerten und diesen Vergleichswerten zugeordneten Behandlungsparametern erfolgen. Entsprechende Vergleichswerte können in einer Datenbank hinterlegt sein.

Der ermittelte Behandlungsparameter kann dem Benutzer zur Verfügung gestellt werden. Der Behandlungsparameter kann dem Benutzer auf einer Anzeige ausgegeben werden bzw. eine entsprechende Ausgabe kann ausgelöst werden, beispielsweise eine Ausgabe auf einem Bildschirm insbesondere in Textform und/oder eine akustische Ausgabe wie eine sprachliche Mitteilung. Der Benutzer kann dann die Behandlung durchführen. Alternativ oder zusätzlich hierzu kann in einer Ausgestaltung des Verfahrens der Behandlungsparameter an die Waschmaschine ausgegeben werden. Beispielsweise kann der Behandlungsparameter mindestens einen Parameter des Waschprogrammes repräsentieren, welcher an die Waschmaschine ausgegeben wird, so dass die Waschmaschine beispielsweise das entsprechende Waschprogramm als Voreinstellung übernimmt und der Benutzer die Reinigungsvorrichtung lediglich starten muss. Ebenso ist es denkbar, dass die Waschmaschine mit der Ausgabe das Waschprogramms automatisch durchführt. Die Waschmaschine kann beispielsweise über eine Dosierungsvorrichtung für Waschmittelzusammensetzungen verfügen, um die Menge der ersten und/oder zweiten Waschmittelzusammensetzung automatisch bereitzustellen. Im Ergebnis wird hiermit die Benutzerfreundlichkeit des Verfahrens verbessert.

Ein bevorzugter Anmeldungsgegenstand ist ein Wasch verfahren für Textilien in einer Trommelwaschmaschine, umfassend die Schritte a) Bereitstellen einer Waschmaschine mit einem Waschprogramm, umfassend einen Hauptwaschgang der Dauer t«,; b) Einbringen von Textilien in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine; c) Einbringen einer wässrigen Flotte in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine; d) Einbringen einer ersten Waschmittelzusammensetzung, umfassend mindestens ein Tensid in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine im Hauptwaschgang zu einem Zeitpunkt 0 bis 10% t _w ; e) Einbringen einer zweiten Waschmittelzusammensetzung, umfassend, bezogen auf ihr Gesamtgewicht, i) mindestens 4 Gew.-% aktives Protease-Protein ii) mindestens 80 Gew.-% eines flüssigen Trägers in die wässrige Flotte des Hauptwaschgangs zu einem Zeitpunkt 11 bis 99% t _w , wobei mittels einer Vorrichtung zur Ermittlung der Wasserhärte die Wasserhärte der in Schritt c) in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebrachten wässrigen Flotte ermittelt und durch Vergleich der ermittelten Wasserhärte mit Vergleichswerten und diesen Vergleichswerten zugeordneten Behandlungsparametern ein Behandlungsparameter ermittelt wird, welcher die in Schritt d) und/oder e) eingebrachte Menge der ersten oder zweiten Waschmittelzusammensetzung betrifft und die erste Waschmittelzusammensetzung in Schritt d) und/oder die zweite Waschmittelzusammensetzung in Schritt e) in einer dem ermittelten Behandlungsparameter entsprechenden Menge eingebracht wird. Ein besonders bevorzugter Anmeldungsgegenstand ist ein Waschverfahren für Textilien in einer Trommelwaschmaschine, umfassend die Schritte a) Bereitstellen einer Waschmaschine mit einem Waschprogramm, umfassend einen Hauptwaschgang der Dauer t«,; b) Einbringen von Textilien in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine; c) Einbringen einer wässrigen Flotte in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine; d) Einbringen einer ersten Waschmittelzusammensetzung, umfassend mindestens ein Tensid in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine im Hauptwaschgang zu einem Zeitpunkt 0 bis 10% t _w ; e) Einbringen einer zweiten Waschmittelzusammensetzung, umfassend, bezogen auf ihr Gesamtgewicht, i) mindestens 4 Gew.-% aktives Protease-Protein ii) mindestens 80 Gew.-% eines flüssigen Trägers in die wässrige Flotte des Hauptwaschgangs zu einem Zeitpunkt 11 bis 99% t _w , wobei mittels einer Vorrichtung zur Ermittlung der Wasserhärte die Wasserhärte der in Schritt c) in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebrachten wässrigen Flotte ermittelt und durch Vergleich der ermittelten Wasserhärte mit Vergleichswerten und diesen Vergleichswerten zugeordneten Behandlungsparametern ein Behandlungsparameter ermittelt wird, welcher die in Schritt e) eingebrachte Menge der zweiten Waschmittelzusammensetzung betrifft und die zweite Waschmittelzusammensetzung in Schritt e) in einer dem ermittelten Behandlungsparameter entsprechenden Menge eingebracht wird.

Die wässrige Flotte weist in Schritt c) vorzugsweise eine Temperatur Ti von 18 bis 25°C auf.

Die Beladung der Waschmaschine mit Textilien in Schritt b) und das Volumen der in Schritt c) eingebrachten wässrigen Flotte werden vorzugsweise derart aufeinander abgestimmt, dass das Gewichtsverhältnis von wässriger Flotte zu Textilien in Schritt c) oberhalb 1 :1 , vorzugsweise oberhalb 2:1 und insbesondere oberhalb 5:2 liegt.

Die erste Waschmittelzusammensetzung wird in Schritt d) zu einem Zeitpunkt 0 bis 10% t _w in den Wäschebehandlungsraum eingebracht. Mit anderen Worten befindet sich die erste

Waschmittelzusammensetzung bereits zu Beginn des Hauptwaschgangs in dem

Wäschebehandlungsraum (Zeitpunkt 0 t«,) oder wird innerhalb eines Zeitraums von 10% der Dauer t _w des Hauptwaschgangs in den Wäschebehandlungsraum eingebracht.

In einer ersten Verfahrensvariante wird die wässrige Flotte vor der ersten Waschmittelzusammensetzung in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebracht. Eine solche Verfahrensvariante ist beispielsweise mittels eines Vorspülgangs realisierbar, in dessen Verlauf die Textilien mit Wasser vorgespült und/oder eingeweicht jedoch noch nicht mittels der eigentlichen Waschmittelzusammensetzung gereinigt werden. Eine zweite Verfahrensvariante sieht den gleichzeitigen Eintrag der wässrigen Flotte und der ersten Waschmittelzusammensetzung in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine vor. Wird die wässrige Flotte bei Verzicht auf einen Vorspülgang beispielsweise durch die mit der ersten Waschmittelzusammensetzung befüllten Einspülschublade der Waschmaschine in den Wäschebehandlungsraum geleitet, so erfolgt der Eintrag von wässriger Flotte und erster Waschmittelzusammensetzung in die Wäschebehandlungsraum gleichzeitig.

Schließlich ist es auch möglich, dass die wässrige Flotte nach der ersten Waschmittelzusammensetzung in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebracht wird, beispielsweise indem die erste Waschmittelzusammensetzung in vorportionierter Form oder mittels einer Dosierhilfe vor Beginn des Waschprogramms direkt auf die Textilien aufgebracht wird.

Die in Schritt d) eingesetzte Tensid-haltige erste Waschmittelzusammensetzung ist vorzugsweise hochkonzentriert und umfasst, bezogen auf ihr Gesamtgewicht i) 50 bis 95 Gew. -% Tensid ii) weniger als 10 Gew.-% Wasser.

In besonders bevorzugten Ausführungsformen enthält die Tensid-haltige erste Waschmittelzusammensetzung 55 bis 92 Gew.-%, insbesondere 60 bis 88 Gew.-% Tensid.

Die in Schritt d) eingesetzte Tensid-haltige ersten Waschmittelzusammensetzung wird vorzugsweise aus einem in die Waschmaschine integrierten Behälter dosiert, welcher mit der mehrfachen des für die Durchführung eines Waschprogramms notwendigen Menge der ersten Waschmittelzusammensetzung befüllt ist.

Zur Gruppe der Tenside werden die nichtionischen, die anionischen, die kationischen und die amphoteren Tenside gezählt. Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können eines oder mehrere der genannten Tenside umfassen. Besonders bevorzugte Zusammensetzungen enthalten Tensid aus der Gruppe der anionischen und nichtionischen Tenside.

Das anionische Tensid ist bevorzugt ausgewählt aus der Gruppe umfassend C9-13- Alkylbenzolsulfonsäuren, Olefinsulfonsäuren, Ci2-18-Alkansulfonsäuren, Estersulfonsäuren, Alk(en)ylsulfonsäuren, Fettalkohohlethersulfonsäuren und Mischungen daraus. Zusammensetzungen, die als anionisches Tensid Cg-13-Alkylbenzolsulfonsäuren und Fettalkoholethersulfonsäuren umfassen, weisen besonders gute, dispergierende Eigenschaften auf. Als Tenside vom Sulfonsäure-Typ kommen dabei vorzugsweise Cg- -Alkylbenzolsulfonsäuren, Olefinsulfonsäuren, das heißt Gemische aus Alken- und Hydroxyalkansulfonsäuren sowie Disulfonsäuren, wie man sie beispielsweise aus C12-18- Monoolefinen mit end- oder innenständiger Doppelbindung durch Sulfonieren mit gasförmigem Schwefeltrioxid und anschließende alkalische oder saure Hydrolyse der Sulfonierungsprodukte erhält, in Betracht. Geeignet sind auch Ci2-18-Alkansulfonsäuren und die Ester von a-Sulfofettsäuren (Estersulfonate), zum Beispiel die a-sulfonierten Methylester der hydrierten Kokos-, Palmkern- oder Talgfettsäuren. In besonders bevorzugten Waschverfahren enthält die ersten Waschmittelzusammensetzung anionisches Tensid aus der Gruppe aus der Gruppe der Cs-is-Alkylbenzolsulfonsäuren. Besonders bevorzugt ist der Einsatz von Alkylbenzolsulfonsäuren aus der Gruppe der C9-15- Alkylbenzolsulfonsäuren, insbesondere der Cg- -Alkylbenzolsulfonsäuren.

Alternativ, vorzugsweise jedoch in Kombination mit der Alkylbenzolsulfonsäure umfasst die ersten Waschmittelzusammensetzung anionisches Tensid aus der Gruppe aus der Gruppe der Alkylethersulfonsäuren.

Bevorzugt sind Alkylethersulfonsäuren mit der Formel Ri-O-(AO) _n -SO3H, wobei

Ri für einen linearen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituierten Alkylrest, vorzugsweise für einen linearen, unsubstituierten Alkylrest, besonders bevorzugt für einen Fettalkoholrest steht. Bevorzugte Reste Ri sind ausgewählt aus Decyl-, Undecyl-, Dodecyl-, Tridecyl-, Tetradecyl, Pentadecyl-, Hexadecyl-, Heptadecyl-, Octadecyl-, Nonadecyl-, Eicosylresten und deren Mischungen, wobei die Vertreter mit gerader Anzahl an C-Atomen bevorzugt sind. Besonders bevorzugte Reste Ri sind abgeleitet von Fettalkoholen mit 12 bis 18 C-Atomen, beispielsweise von Kokosfettalkohol, Talgfettalkohol, Lauryl-, Myristyl-, Cetyl- oder Stearylalkohol oder von Oxoalkoholen mit 10 bis 20 C-Atomen.

AO für eine Ethylenoxid- (EO) oder Propylenoxid- (PO) Gruppierung, vorzugsweise für eine Ethylenoxidgruppierung steht. Der Index n der Formel ist eine ganze Zahl von 1 bis 50, vorzugsweise von 1 bis 20 und insbesondere von 2 bis 10. Ganz besonders bevorzugt ist n 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8.

Als weiteren optionalen Bestandteil, welcher in der ersten Wasch mittelzusammensetzung vorzugsweise in Kombination mit den vorgenannten Alkylbenzolsulfonsäuren und Alkylethersulfonsäuren vorliegt, enthält das die erste Waschmittelzusammensetzung anionisches Tensid aus der Gruppe aus der Gruppe der Fettsäuren. Besonders bevorzugte Fettsäuren sind ausgewählt aus der Gruppe Caprylsäure, Caprinsäure, Laurinsäure, Myristinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure, Ölsäure, Linolsäure und deren Mischungen.

Bevorzugte in Schritt d) des Verfahrens eingesetzte erste Waschmittelzusammensetzungen enthalten, bezogen auf ihr Gesamtgewicht, 30 bis 90 Gew.-%, vorzugsweise 40 bis 80 Gew.-% und insbesondere 45 bis 70 Gew.-% anionisches Tensid. Der Gewichtsanteil des anionischen Tensids bestimmt sich unabhängig vom Neutralisationsgrad des Aniontensid in der ersten Waschmittelzusammensetzung als der Gewichtsanteil der Aniontensidsäure.

Als weiteren optionalen Bestandteil enthält die erste Waschmittelzusammensetzung nichtionisches Tensid, vorzugweise nichtionisches Tensid aus der Gruppe der ethoxylierten primären C6-18-Alkohole, vorzugsweise der ethoxylierten primären C6-18-Alkohole mit einem Alkoxylierungsgrad > 2, besonders bevorzugt der C12-14-Alkohole mit 4 EO oder 7 EO, der C9-11 -Alkohole mit 7 EO, der C13-15-Alkohole mit 5 EO, 7 EO oder 8 EO, der C13-15-Oxoalkohole mit 7 EO, der C12-18-Alkohole mit 5 EO oder 7 EO, insbesondere der C12-18-Fettalkohole mit 7 EO oder der C13-15-Oxoalkohole mit 7 EO.

Bevorzugte in Schritt d) des Verfahrens eingesetzte erste Waschmittelzusammensetzungen enthalten, bezogen auf ihr Gesamtgewicht, 7 bis 50 Gew.-%, vorzugsweise 12 bis 40 Gew.-% und insbesondere 15 bis 30 Gew.-% nichtionisches Tensid.

Eine Gruppe optionaler Bestandteile der ersten Waschmittelzusammensetzung bilden die polyalkoxylierte Amine mit einem gewichtsmittleren Molekulargewicht Mw im Bereich von 600 g/mol bis 10000 g/mol, welche erhältlich sind durch Umsetzung von Ammoniak oder primären Alkyl- oder Hydroxyalkylaminen, die ein Molekulargewicht unter 200 g/mol aufweisen, mit Alkylenoxiden. Der Gewichtsanteil dieser polylalkoxylierten Amine am Gesamtgewicht der ersten Waschmittelzusammensetzung beträgt vorzugsweise 0,5 bis 10 Gew.-%, besonders bevorzugt 1 bis 8 Gew.-% und insbesondere 2 bis 6 Gew.-%.

Bevorzugte polyalkoxylierte Amine weisen ein gewichtsmittleres Molekulargewicht M _w im Bereich von 1300 g/mol bis 6000 g/mol, insbesondere von 1400 g/mol bis 4500 g/mol auf. (Bei den hier und später gegebenenfalls für andere Polymere angegebenen mittleren Molekulargewichten handelt es sich um gewichtsmittlere Molekulargewichte M _w , die grundsätzlich mittels Gelpermeationschromatographie mit Hilfe eines Rl-Detektors bestimmbar sind, wobei die Messung zweckmäßig gegen einen externen Standard erfolgt.) Zu ihrer Herstellung kann man in bekannter Wiese von Ammoniak, einem Monoalkylamin, einem Monoalkyl-monoalkanolamin oder einem Monoalkyl-dialkanolamin oder einem Mono-, Di- oder Trialkanolamin, beispielsweise Triethanolamin, Methyl-, Ethyl-, Propyl- und Isopropyldiethanolamin, Methyl-, Ethyl-, Propyl- und Isopropyl-diisopropanolamin, Tripropanolamin, Triisopropanolamin, N,N-Di-(2-hydroxyethyl)cyclohexylamin, N,N-Di-(2-hydroxypropyl)cyclohexylamin, n-Butylamin, n-Hexylamin, n-Octylamin, Isopropylamin, sek-Butylamin, tert-Butylamin, Cyclohexylamin, 2-Ethylhexylamin, 2-Phenylethylamin und deren Mischungen, ausgehen, das mit einem Alkylenoxid, insbesondere ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Ethylenoxid, Propylenoxid, Butylenoxid und Mischungen daraus, umgesetzt wird, insbesondere mit einer Mischung enthaltend Propylenoxid und vorzugsweise Ethylenoxid, besonders bevorzugt mit Propylenoxid. Bei den so erhältlichen polyalkoxylierten Aminen kann es sich um Block- oder Random-Strukturen handeln. Besonders bevorzugt ist unter anderem ein polyalkoxyliertes Amin, erhältlich durch Propoxylierung von Triethanolamin, bevorzugt mit einer Länge der drei Seitenarme von jeweils 15 Propylenoxid-Einheiten. Ebenfalls bevorzugt ist auch ein polyalkoxyliertes Amin, erhältlich durch Propoxylierung von Triisopropanolamin, bevorzugt mit einer Länge der drei Seitenarme von jeweils 15 Propylenoxid- Einheiten. Ebenfalls geeignet sind polyalkoxylierte Monoalkylamine mit einer linearen, verzweigten oder cyclischen Alkylgruppe, wobei mit einem Alkylenoxid ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Ethylenoxid, Propylenoxid, Butylenoxid und Mischungen daraus alkoxyliert wird, bevorzugt mit einer Mischung enthaltend Propylenoxid, besonders bevorzugt mit Propylenoxid. Bevorzugt ist auch ein polyalkoxyliertes Amin, erhältlich durch Propoxylierung von tert-Butylamin, bevorzugt mit einer Länge der zwei Seitenarme von jeweils 12 Propylenoxid-Einheiten. Bevorzugte polyalkoxylierte Amine genügen der allgemeinen Formel, in der R für eine lineare, gegebenenfalls verzweigte oder gegebenenfalls cyclische Alkylgruppe mit 1 bis 12 C-Atomen oder einer Gruppe -(CH2CHR’O) _n -(CH2CHR“O) _m -H steht,

R‘ und R“ unabhängig voneinander für H, CH3 oder CH2CH3 stehen, n, n‘ und n“ unabhängig voneinander für Zahlen von 0 bis 30, vorzugsweise von 0 bis 10 und insbesondere 0 bis 5 stehen, und m, m‘ und m“ unabhängig voneinander für Zahlen von 0 bis 30, vorzugsweise von 5 bis 20 und insbesondere von 12 bis 16 stehen, mit der Maßgabe, dass die Summe n + n‘ + n“ + m + m‘ + m“ mindestens 14 ist, vorzugsweise im Bereich von 18 bis 100 und insbesondere im Bereich von 20 bis 70 liegt. Bevorzugt ist in den Verbindungen der Formel I mindestens einer der Reste R‘ und R“ eine CHs-Gruppe.

Als weiteren optionalen Bestandteil enthält die erste Waschmittelzusammensetzung ein polyalkoxyliertes Polyalkylenimin, das erhältlich ist durch Umsetzung von Polyalkyleniminen mit Alkylenoxiden, wobei Gewichtsanteile am Gesamtgewicht der ersten Waschmittelzusammensetzung von 0,5 bis 10 Gew.-%, vorzugsweise von 1 bis 8 Gew.-% und insbesondere von 2 bis 6 Gew.-% bevorzugt sind.

Bei dem polyalkoxylierten Polyalkylenimin handelt es sich um ein Polymer mit einem Polyalkylenimin- Rückgrat, das an den N-Atomen Polyalkoxygruppen trägt. Es weist vorzugsweise ein gewichtsmittleres Molekulargewicht Mw im Bereich von 5000 g/mol bis 60000 g/mol, insbesondere von 10000 g/mol bis 22500 g/mol auf. Das Polyalkylenimin weist an den Enden primäre Aminofunktionen und im Inneren vorzugsweise sowohl sekundäre als auch tertiäre Aminofunktionen auf; gegebenenfalls kann es im Inneren auch lediglich sekundäre Aminofunktionen aufweisen, so dass sich nicht ein verzweigtkettiges, sondern ein lineares Polyalkylenimin ergibt. Das Verhältnis von primären zu sekundären Aminogruppen im Polyalkylenimin liegt vorzugsweise im Bereich von 1 :0,5 bis 1 :1 ,5, insbesondere im Bereich von 1 :0,7 bis 1 :1. Das Verhältnis von primären zu tertiären Aminogruppen im Polyalkylenimin liegt vorzugsweise im Bereich von 1 :0,2 bis 1 :1 , insbesondere im Bereich von 1 :0,5 bis 1 :0,8. Vorzugsweise weist das Polyalkylenimin ein gewichtsmittleres Molekulargewicht im Bereich von 500 g/mol bis 50000 g/mol, insbesondere von 550 g/mol bis 2000 g/mol auf. Die N-Atome im Polyalkylenimin sind vorzugsweise durch Alkylengruppen mit 2 bis 12 C-Atomen, insbesondere 2 bis 6 C-Atomen, voneinander getrennt, wobei nicht sämtliche Alkylengruppen die gleiche C-Atomanzahl aufweisen müssen. Besonders bevorzugt sind Ethylengruppen, 1 ,2-Propylengruppen, 1 ,3-Propylengruppen, und deren Mischungen. Die primären Aminofunktionen im Polyalkylenimin können 1 oder 2 Polyalkoxygruppen und die sekundären Aminofunktionen 1 Polyalkoxygruppe tragen, wobei nicht jede Aminofunktion alkoxygruppensubstituiert sein muss. Die durchschnittliche Anzahl von Alkoxygruppen pro primärer und sekundärer Aminofunktion im polyalkoxylierten Polyalkyenimin beträgt vorzugsweise 5 bis 100, insbesondere 10 bis 50. Bei den Alkoxygruppen im polyalkoxylierten Polyalkylenimin handelt es sich vorzugsweise um Ethoxy-, Propoxy- oder Butoxygruppen oder Mischungen aus diesen. Besonders bevorzugt sind polyethoxylierte Polyethylenimine. Die polyalkoxylierten Polyalkylenimine sind durch Umsetzung der Polyalkylenimine mit den Alkoxygruppen entsprechenden Epoxiden zugänglich. Gewünschtenfalls kann die endständige OH-Funktion zumindest einiger der Polyalkoxysubstituenten durch eine Alkylether-Funktion mit 1 bis 10, insbesondere 1 bis 3 C-Atomen, ersetzt sein.

Für den Einsatz in dem erfindungsgemäßen Waschverfahren werden vorzugsweise Waschmittelzusammensetzungen mit einem möglichst geringen Anteil nicht aktiver Inhaltsstoffe vorgesehen. Folglich ist es bevorzugt, wenn die ersten Waschmittelzusammensetzung weniger als 10 Gew.-%, vorzugsweise weniger als 6 Gew.-% und insbesondere weniger als 2 Gew.-% Wasser enthält. Mit sinkendem Anteil nicht aktiver Inhaltsstoffe nimmt nicht nur der Umfang der für die Verpackung, Lagerung und Transport der ersten Waschmittelzusammensetzung notwendigen Ressourcen ab, gleichzeitig nimmt auch das Volumen der pro Waschverfahrens eingesetzten ersten Waschmittelzusammensetzung ab und damit die Reichweite eines Vorrats be hä Iters, beispielsweise eines in die Waschmaschine integrierten Vorrats be hä Iters zu.

Für die Handhabbarkeit der ersten Waschmittelzusammensetzung, insbesondere deren Dosierung hat sich ein, auf das Gesamtgewicht der ersten Waschmittelzusammensetzung bezogener Gewichtsanteil von 0,5 bis 29 Gew.-%, vorzugsweise 4,5 bis 27 Gew.-% und insbesondere 10 bis 24 Gew.-% organischen Lösungsmittels als vorteilhaft erwiesen. Organischen Lösungsmitteln können im Waschverfahren reinigungsverstärkende Wirkungen zugerechnet werden. Dies gilt insbesondere bei Einsatz organischer Lösungsmittel aus der Gruppe der organischen Amine, vorzugsweise Monoethanolamin. Der Einsatz dieser hat nicht nur eine reinigungsverstärkende Wirkung, sondern ermöglicht zudem die partielle oder vollständige Neutralisation etwaiger in der ersten Waschmittelzusammensetzung enthaltener anionischer Tensidsäuren.

In einer bevorzugten Ausführungsform des Waschverfahrens umfasst die erste Waschmittelzusammensetzung anionisches Tensid aus der Gruppe der Cs-is-Alkylbenzolsulfonsäuren, der Alkylethersulfonsäuren und der Fettsäuren sowie eine in Bezug auf das anionische Tensid überstöchiometrische Menge organisches Amin, vorzugsweise Monoethanolamin.

Zusammenfassend sind Waschverfahren bevorzugt, bei denen die erste Waschmittelzusammensetzung in Schritt d), bezogen auf ihr Gesamtgewicht i) 30 bis 90 Gew.-%, vorzugsweise 40 bis 80 Gew.-% und insbesondere 45 bis 70 Gew.-% anionisches Tensid aus der Gruppe der Cs-is-Alkylbenzolsulfonsäuren, der Alkylethersulfonsäuren und der Fettsäuren, ii) 7 bis 50 Gew.-%, vorzugsweise 12 bis 40 Gew.-% und insbesondere 15 bis 30 Gew.-% nichtionisches Tensid aus der Gruppe der ethoxylierten primären C6-18-Alkohole, iii) 0,5 bis 29 Gew.-%, vorzugsweise 4,5 bis 27 Gew.-% und insbesondere 10 bis 24 Gew.-% organisches Lösungsmittel aus der Gruppe der organischen Amine iv) weniger als 10 Gew.-%, vorzugsweise weniger als 6 Gew.-% und insbesondere weniger als 2 Gew.-% Wasser enthält.

Die erste Waschmittelzusammensetzung wird in einer Verfahrensvariante in Schritt d) vorzugsweise zu einem Zeitpunkt 0 t _w in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebracht.

Mit größerem Vorzug wird die erste Waschmittelzusammensetzung in Schritt d) zu einem Zeitpunkt >0 bis 10% tw, vorzugsweise >0 bis 5% t _w in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebracht.

Dem gegenüber wird die zweite Waschmittelzusammensetzung in Schritt e) zu einem Zeitpunkt 20 bis 70% tw, vorzugsweise zu einem Zeitpunkt 25 bis 65% t _w , besonders bevorzugt zu einem Zeitpunkt 30 bis 60% tw in die wässrige Flotte eingebracht.

Die zweite Waschmittelzusammensetzung ist im Hinblick auf ihren Gehalt an aktivem Protease Enzym hochkonzentriert und umfasst bezogen auf ihr Gesamtgewicht, mindestens 4 Gew.-% aktives Protease- Protein sowie mindestens 80 Gew.-% eines flüssigen Trägers

Proteasen gehören zu den technisch bedeutendsten Enzymen. Für Wasch- und Reinigungsmittel sind sie die am längsten etablierten und in praktisch allen modernen, leistungsfähigen Wasch- und Reinigungsmitteln enthaltenen Enzyme. Sie bewirken den Abbau proteinhaltiger Anschmutzungen auf dem Reinigungsgut. Hierunter sind wiederum Proteasen vom Subtilisin-Typ (Subtilasen, Subtilopeptidasen, EC 3.4.21.62) besonders wichtig, welche aufgrund der katalytisch wirksamen Aminosäuren Serin-Proteasen sind. Sie wirken als unspezifische Endopeptidasen und hydrolysieren beliebige Säureamidbindungen, die im Inneren von Peptiden oder Proteinen liegen. Ihr pH-Optimum liegt meist im deutlich alkalischen Bereich. Subtilasen werden natürlicherweise von Mikroorganismen gebildet. Hierunter sind insbesondere die von Bacillus-Spezies gebildeten und sezernierten Subtilisine als bedeutendste Gruppe innerhalb der Subtilasen zu erwähnen.

Beispiele für die in Wasch- und Reinigungsmitteln bevorzugt eingesetzten Proteasen vom Subtilisin-Typ sind die Subtilisine BPN' und Carlsberg, die Protease PB92, die Subtilisine 147 und 309, die alkalische Protease aus Bacillus lentus, insbesondere aus Bacillus lentus DSM 5483, Subtilisin DY und die den Subtilasen, nicht mehr jedoch den Subtilisinen im engeren Sinne zuzuordnenden Enzyme Thermitase, Proteinase K und die Proteasen TW3 und TW7, sowie Varianten der genannten Proteasen, die eine gegenüber der Ausgangsprotease veränderte Aminosäuresequenz aufweisen. Proteasen werden durch aus dem Stand der Technik bekannte Verfahren gezielt oder zufallsbasiert verändert und so beispielsweise für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln optimiert. Dazu gehören Punkt-, Deletions- oder Insertionsmutagenese oder Fusion mit anderen Proteinen oder Proteinteilen. So sind für die meisten aus dem Stand der Technik bekannten Proteasen entsprechend optimierte Varianten bekannt. In bevorzugten Ausführungsformen des Verfahrens umfasst die zweite Waschmittelzusammensetzung, bezogen auf ihr Gesamtgewicht, 4 bis 18 Gew.-%, vorzugsweise 5 bis 15 Gew.-% und insbesondere 7 bis 12 Gew.-% aktives Protease-Protein. Die Konzentration an aktivem Protease-Protein in der zweiten Waschmittelzusammensetzung liegt damit um den Faktor 10 bis 40 oberhalb der Konzentration von aktivem Protease-Protein in üblichen kommerziell erhältlichen Waschmittelzusammensetzungen.

Bevorzugte Proteasen umfassen a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% oder 98,8% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:3 , (i) an der Position, die der Position 101 entspricht, die Aminosäuresubstitution R101 E, und (ii) an den mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 45, 55, 58, 59, 61 , 87, 97, 98, 106, 117, 120, 124, 129, 136, 137, 143, 156, 161 , 163, 171 , 172, 185, 199, 205, 209, 222, 238, 244, 261 und 262 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R45E, R45D, R45Q, P55N, T58W, T58Y, T58L, Q59D, Q59M, Q59N, Q59T, G61 D, G61 R, S87E, G97S, A98D, A98E, A98R, S106A, S106W, N117E, H120V, H120D, H120K, H120N, S124M, P129D, E136Q, Q137H, S143W, S156D, S161T, S163A, S163G, Y171 L, A172S, N185Q, V199M, V205I, Y209W, M222Q, N238H, V244T, N261T und L262N, L262Q, L262D, L262E bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist; wobei die

Aminosäuresubstitutionskombination der Gruppe (ii) vorzugsweise aus der aus N238E-L262E, S156D- L262E, S3T-V4I-V205I, S3T-V4I-A228V, G195E-V199M, H120D-S163G-N261 D, N76D-A228V-N261 D, S3T-N76D-S156D-Y209W, Q137H-S141 H-R145H-N238E-L262E, Q137H-S141 H-R145H-S156D- L262E, N76D-Q137H-S141 H-R145H-A228V-N261 D, N76D-Q137H-S141 H-R145H-S163G-N238E, H120D-Q137H-S141 H-R145H-S163G-N261 D, S3T-N76D-Q137H-S141 H-R145H-S156D-Y209W bestehenden Gruppe ausgewählt ist; b) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:2 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:3, (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus P9T, N130D, N130V, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 61 , 62, 63, 89, 99, 101 , 131 , 156, 166, 170, 187, 188, 189, 211 und 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus Y6F, Y6W, F61 G, Q62N, S63Q, S89A, S89G, N99H, D101 S, D101 E, D101A, G131 H, G131Y, G131 F, S156R, G166A, G166M, G166L, G166I, K170R, K170G, N187D, N188G, S189T, S189L, S189I, S189R, S211 N, S211 Q, S224A, S224G bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, wobei die Protease vorzugsweise eine Aminosäuresubstitutionskombination aufweist, die aus der aus P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E, P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-

S224A-N252T-Q271 E, P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E, P9T-S89A- N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, P9T-S89A-N130D-T133A- N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E, P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, P9T- S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, P9T-S89A-D101 S-N130D-T133A-N144K-S189T- Y217M-S224A-N252T-Q271 E, P9T-S89A-D101 E-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A- N252T-Q271 E, P9T-S89A-D101 A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, P9T- S89A-N99H-N130D-T133A-N144K-K170R-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q2 71 E, P9T-S89A-N130D- T133A-N144K-S156R-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, P9T-S63Q-S89A-N130D-T133A-N144K- G166A-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, P9T-F61 G-Q62-N-S89A-N130D-T133A-N144K-N188G- S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E, Y6W-P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, Y6W-P9T- F61 G-Q62N-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, Y6W-P9T-S89A- N130D-T133A-N144K-N188G-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E bestehenden Gruppe ausgewählt ist; c) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:3 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% oder 98,8% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:3 (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 101 und 205 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R101 E und V205I, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 76, 138, 145, 156, 166, 167, 169, 177, 187, 189, 191 , 206, 209, 215, 218 oder 262 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N76D, N76E, N76Q, A138Q, R145L, R145W, R145Y, S156D, S156Q, S166G, Y167T, A169G, V177L, A187D, F189R, Q191 R, Q206A, Q206L, Q206S, Q206T, Y209K, Y209V, Y209W, A215K, A215W, N218S, N218T und L262D, L262E und L262Q bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, wobei die Protease vorzugsweise eine Aminosäuresubstitutionskombination aufweist, die aus der aus S3T-V4I-R101 E-V205I-Q206L-Y209W, S3T-V4I-R101 E-V205I-N218S, S3T-V4I-R101 E-V205I-N76D, S3T-V4I-R101 E-V205I-S156D-L262E, S3T-V4I-R101 E-V205I-Q206L-Y209W-S156D-L262E, S3T-V4I- R101 E-V205I-N76D-Q206L-Y209W, S3T-V4I-R101 E-V205I-N76D-S156D-Q206L-Y209W-L262E, S3T-V4I-R101 E-V205I-N76D-N218S, S3T-V4I-R101 E-V205I-N76D-S156D-Y209W-L262E, S3T-V4I- R101 E-V205I-N76D-Y209W, S3T-V4I-R101 E-V205I-N76D-S156D-Q206L-L262E, S3T-V4I-R101 E- V205I-N76D-Q206L, S3T-V4I-R101 E-V205I-S156D-Q206L-Y209W, S3T-V4I-R101 E-V205I-Q206L- Y209W-L262E, S3T-V4I-R101 E-V205I-A138Q-R145W-Y167T-Q206L, S3T-V4I-R101 E-V205I-N76D- R145Y-A215W-N218S-L262E, S3T-V4I-R101 E-V205I-N76D-S156D-Y209W-L262E; S3T-V4I-R101 E- V205I-Q206L-Y209W-A215K-S156D-L262E, S3T-V4I-R101 E-V205I-S156D-S166G-Q191 R-Q206L- Y209W-L262E, S3T-V4I-R101 E-V205I-S156D-A187D-F189R-Q206L-Y209W-L262E und S3T-V4I- R101 E-V205I-A138Q-S156D-V171 L-Q206L bestehenden Gruppe ausgewählt ist.

Im Hinblick auf die erzielte Reinigungsleistung, insbesondere auch bei hohen Wasserhärten oder hoher Beladung, hat es sich als vorteilhaft erwiesen, wenn das aktive Protease-Protein proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die mindestens 70% Sequenzidentität mit der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge aufweist und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:3 (i) an mindestens zwei, vorzugsweise drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 101 oder 205 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise drei Aminosäuresubstitutionen, ausgewählt aus den Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R101 E und V205I, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 76, 138, 145, 156, 166, 167, 169, 177, 187, 189, 191 , 206, 209, 215, 218 oder 262 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, insbesondere ausgewählt aus N76D, N76E, N76Q, A138Q, R145L, R145W, R145Y, S156D, S156Q, S166G, Y167T, A169G, V177L, A187D, F189R, Q191 R, Q206A, Q206L, Q206S, Q206T, Y209K, Y209V, Y209W, A215K, A215W, N218S, N218T, L262D, L262E und L262Q, aufweist.

Die erfindungsgemäßen Proteasen weisen enzymatische Aktivität auf, d.h. sie sind zur Hydrolyse von Peptiden und Proteinen befähigt, insbesondere in einem Wasch- oder Reinigungsmittel. Eine erfindungsgemäße Protease ist daher ein Enzym, welches die Hydrolyse von Amid/Peptidbindungen in Protein/Peptid-Substraten katalysiert und dadurch in der Lage ist, Proteine oder Peptide zu spalten. Ferner handelt es sich bei einer erfindungsgemäßen Protease vorzugsweise um eine reife (mature) Protease, d.h. um das katalytisch aktive Molekül ohne Signal- und/oder Propeptid(e). Soweit nicht anders angegeben beziehen sich auch die angegebenen Sequenzen auf jeweils reife (prozessierte) Enzyme.

Verfahren zur Bestimmung der Protease-Aktivität dem Fachmann auf dem Gebiet der Enzymtechnologie geläufig und werden von ihm routinemäßig angewendet. Beispielsweise sind solche Verfahren offenbart in Tenside, Band 7 (1970), S. 125-132. Alternativ kann die Protease-Aktivität über die Freisetzung des Chromophors para-Nitroanilin (pNA) aus dem Substrat suc-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L- Phe-p-Nitroanilid (AAPF) bestimmt werden. Die Protease spaltet das Substrat und setzt pNA frei. Die Freisetzung des pNA verursacht eine Zunahme der Extinktion bei 410 nm, deren zeitlicher Verlauf ein Maß für die enzymatische Aktivität ist (vgl. Del Mar et al., 1979). Die Messung erfolgt bei einer Temperatur von 25°C, bei pH 8,6, und einer Wellenlänge von 410 nm. Die Messzeit beträgt 5 min und das Messintervall 20 s bis 60 s. Die Protease-Aktivität wird üblicherweise in Protease-Einheiten (PE) angegeben. Geeignete Protease-Aktivitäten betragen beispielsweise 2,25, 5 oder 10 PE pro ml Waschflotte. Die Protease-Aktivität ist jedoch nicht gleich Null.

Ein alternativer Test zur Feststellung der proteolytischen Aktivität der erfindungsgemäßen Proteasen ist ein optisches Messverfahren, bevorzugt ein photometrisches Verfahren. Der hierfür geeignete Test umfasst die Protease-abhängige Spaltung des Substratproteins Casein. Dieses wird durch die Protease in eine Vielzahl kleinererTeilprodukte gespalten. Die Gesamtheit dieserTeilprodukte weist eine erhöhte Absorption bei 290 nm gegenüber nicht gespaltenem Casein auf, wobei diese erhöhte Absorption unter Verwendung eines Photometers ermittelt werden und somit ein Rückschluss auf die enzymatische Aktivität der Protease gezogen werden kann.

Die Proteinkonzentration kann mit Hilfe bekannter Methoden, zum Beispiel dem BCA-Verfahren (Bicinchoninsäure; 2,2‘-Bichinolyl-4,4‘-dicarbonsäure) oder dem Biuret- Verfahren (Gornall et al., J. Biol. Chem. 177 (1948): 751 -766) bestimmt werden. Die Bestimmung der Aktivproteinkonzentration kann diesbezüglich über eine Titration der aktiven Zentren unter Verwendung eines geeigneten irreversiblen Inhibitors und Bestimmung der Restaktivität (vgl. Bender et al., J. Am. Chem. Soc. 88, 24 (1966): 5890- 5913) erfolgen.

In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung ist die Protease ein frei vorliegendes Enzym. Dies bedeutet, dass die Protease mit allen Komponenten eines Mittels direkt agieren kann und, falls es sich bei dem Mittel um ein Flüssigmittel handelt, dass die Protease direkt mit dem Lösungsmittel des Mittels (z.B. Wasser) in Kontakt steht. In anderen Ausführungsformen kann ein Mittel Proteasen enthalten, die einen Interaktionskomplex mit anderen Molekülen bilden oder die eine "Umhüllung" enthalten. Hierbei kann ein einzelnes oder mehrere Protease Moleküle durch eine sie umgebende Struktur von den anderen Bestandteilen des Mittels getrennt sein. Eine solche trennende Struktur kann entstehen durch, ist allerdings nicht beschränkt auf, Vesikel, wie etwa eine Micelle oder ein Liposom. Die umgebende Struktur kann aber auch ein Viruspartikel, eine bakterielle Zelle oder eine eukaryotische Zelle sein. In verschiedenen Ausführungsformen kann ein Mittel Zellen von Bacillus pumilus oder Bacillus subtilis, die die erfindungsgemäßen Proteasen exprimieren, oder Zellkulturüberstände solcher Zellen enthalten.

Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung bedeutet das Merkmal, dass eine Protease die angegebenen Substitutionen aufweist, dass sie an der jeweiligen Position eine (der angegebenen) Substitution(en) enthält, d.h. zumindest die angegebenen Positionen nicht anderweitig mutiert oder, beispielsweise durch Fragmentierung der Protease, deletiert sind. In verschiedenen bevorzugten Ausführungsformen weisen die hierin beschriebenen Proteasen mit Ausnahme der explizit erwähnten Substitutionen die Sequenz von SEQ ID NO:1 auf, d.h. sind abgesehen von den substituierten Positionen 100% identisch zu der Sequenz gemäß SEQ ID NO:1 .

Die Bestimmung der Identität von Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen erfolgt durch einen Sequenzvergleich. Dieser Sequenzvergleich basiert auf dem im Stand der Technik etablierten und üblicherweise genutzten BLAST-Algorithmus (vgl. z.B. Altschul et al. (1990) Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215:403-410, und Altschul et al. (1997) Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs, Nucleic Acids Res., 25:3389-3402) und geschieht prinzipiell dadurch, dass ähnliche Abfolgen von Nukleotiden oder Aminosäuren in den Nukleinsäureoder Aminosäuresequenzen einander zugeordnet werden. Eine tabellarische Zuordnung der betreffenden Positionen wird als Alignment bezeichnet. Ein weiterer im Stand der Technik verfügbarer Algorithmus ist der FASTA-Algorithmus. Sequenzvergleiche (Alignments), insbesondere multiple Sequenzvergleiche, werden mit Computerprogrammen erstellt. Häufig genutzt werden beispielsweise die Clustal-Serie (vgl. z.B. Chenna et al. (2003) Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs, Nucleic Acid Res., 31 :3497-3500), T-Coffee (vgl. z.B. Notredame et al. (2000) T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments, J. Mol. Biol., 302:205-217) oder Programme, die auf diesen Programmen bzw. Algorithmen basieren. Ferner möglich sind Sequenzvergleiche (Alignments) mit dem Computer-Programm Vector NTI® Suite 10.3 (Invitrogen Corporation, 1600 Faraday Avenue, Carlsbad, Kalifornien, USA) mit den vorgegebenen Standardparametern, dessen AlignX-Modul für die Sequenzvergleiche auf ClustalW basiert, oder Clone Manager 10 (Verwendung der Scoring Matrix BLOSUM 62 für Sequenz-Alignment auf Aminosäureebene). Soweit nicht anders angegeben, wird die hierin angegebene Sequenzidentität mit dem BLAST-Algorithmus bestimmt.

Solch ein Vergleich erlaubt auch eine Aussage über die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen zueinander. Sie wird üblicherweise in Prozent Identität, das heißt dem Anteil der identischen Nukleotide oder Aminosäurereste an denselben oder in einem Alignment einander entsprechenden Positionen angegeben. Der weiter gefasste Begriff der Homologie bezieht bei Aminosäuresequenzen konservierte Aminosäure-Austausche in die Betrachtung mit ein, also Aminosäuren mit ähnlicher chemischer Aktivität, da diese innerhalb des Proteins meist ähnliche chemische Aktivitäten ausüben. Daher kann die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen auch Prozent Homologie oder Prozent Ähnlichkeit angegeben sein. Identitäts- und/oder Homologieangaben können über ganze Polypeptide oder Gene oder nur über einzelne Bereiche getroffen werden. Homologe oder identische Bereiche von verschiedenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen sind daher durch Übereinstimmungen in den Sequenzen definiert. Solche Bereiche weisen oftmals identische Funktionen auf. Sie können klein sein und nur wenige Nukleotide oder Aminosäuren umfassen. Oftmals üben solche kleinen Bereiche für die Gesamtaktivität des Proteins essenzielle Funktionen aus. Es kann daher sinnvoll sein, Sequenzübereinstimmungen nur auf einzelne, ggf. kleine Bereiche zu beziehen. Soweit nicht anders angegeben beziehen sich Identitäts- oder Homologieangaben in der vorliegenden Anmeldung aber auf die Gesamtlänge der jeweils angegebenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresäuresequenz.

Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung bedeutet die Angabe, dass eine Aminosäureposition einer numerisch bezeichneten Position in SEQ ID NO:1 entspricht daher, dass die entsprechende Position der numerisch bezeichneten Position in SEQ ID NO:1 in einem wie oben definierten Alignment zugeordnet ist. Weiterhin richtet sich die Zuordnung der Positionen nach dem reifen (maturen) Protein. Diese Zuordnung ist insbesondere auch anzuwenden, wenn die Aminosäuresequenz einer erfindungsgemäßen Protease eine höhere Zahl von Aminosäureresten umfasst als die Protease gemäß SEQ ID NO:1. Ausgehend von den genannten Positionen in der Aminosäuresequenz der Protease gemäß SEQ ID NO:1 sind die Veränderungspositionen in einer erfindungsgemäßen Protease diejenigen, die eben diesen Positionen in einem Alignment zugeordnet sind. Die Nummerierung etwaiger Sequenzänderungen richtet sich, sofern nichts anderes angegeben ist, in der vorliegenden Anmeldungen nach der Nummerierung gemäß SEQ ID NO:3.

Zusätzlich zu den vorstehend erläuterten Aminosäureveränderungen können erfindungsgemäße Proteasen weitere Aminosäureveränderungen, insbesondere Aminosäure-Substitutionen, -Insertionen oder -Deletionen, aufweisen. Solche Proteasen sind beispielsweise durch gezielte genetische Veränderung, d.h. durch Mutageneseverfahren, weiterentwickelt und für bestimmte Einsatzzwecke oder hinsichtlich spezieller Eigenschaften (beispielsweise hinsichtlich ihrer katalytischen Aktivität, Stabilität, usw.) optimiert. Ferner können erfindungsgemäße Nukleinsäuren in Rekombinationsansätze eingebracht und damit zur Erzeugung völlig neuartiger Proteasen oder anderer Polypeptide genutzt werden. Das Ziel ist es, in die bekannten Moleküle gezielte Mutationen wie Substitutionen, Insertionen oder Deletionen einzuführen, um beispielsweise die Reinigungsleistung von erfindungsgemäßen Enzymen zu verbessern. Hierzu können insbesondere die Oberflächenladungen und/oder der isoelektrische Punkt der Moleküle und dadurch ihre Wechselwirkungen mit dem Substrat verändert werden. So kann beispielsweise die Nettoladung der Enzyme verändert werden, um darüber die Substratbindung insbesondere für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln zu beeinflussen. Alternativ oder ergänzend kann durch eine oder mehrere entsprechende Mutationen die Stabilität oder katalytische Aktivität der Protease erhöht und dadurch ihre Reinigungsleistung verbessert werden. Vorteilhafte Eigenschaften einzelner Mutationen, z.B. einzelner Substitutionen, können sich ergänzen. Eine hinsichtlich bestimmter Eigenschaften bereits optimierter Proteasen, zum Beispiel hinsichtlich ihrer Stabilität bei Lagerung, kann daher im Rahmen der Erfindung zusätzlich weiterentwickelt sein.

Für die Beschreibung von Substitutionen, die genau eine Aminosäureposition betreffen (Aminosäureaustausche), wird hierin folgende Konvention angewendet: zunächst wird die natürlicherweise vorhandene Aminosäure in Form des international gebräuchlichen Einbuchstaben- Codes bezeichnet, dann folgt die zugehörige Sequenzposition und schließlich die eingefügte Aminosäure. Mehrere oder alternative Austausche innerhalb derselben Polypeptidkette werden durch Schrägstriche voneinander getrennt. "130D/V" bedeutet somit, dass die Position 130 zu D oder V mutiert ist. Bei Insertionen sind nach der Sequenzposition zusätzliche Aminosäuren benannt. Bei Deletionen ist die fehlende Aminosäure durch ein Symbol, beispielsweise einen Stern oder einen Strich, ersetzt oder vor der entsprechenden Position ein A angegeben. Beispielsweise beschreibt P9T die Substitution von Prolin an Position 9 durch Threonin, P9TH die Insertion von Histidin nach der Aminosäure Threonin an Position 9 und P9* oder AP9 die Deletion von Prolin an Position 9. Diese Nomenklatur ist dem Fachmann auf dem Gebiet der Enzymtechnologie bekannt.

Neben dem aktiven Protease-Protein umfasst die zweite Waschmittelzusammensetzung als wesentlichen weiteren Bestandteil einen flüssigen Träger. Der Gewichtsanteil des flüssigen Trägers am Gesamtgewicht der zweiten Waschmittelzusammensetzung beträgt, bezogen auf deren Gesamtgewicht, 80 bis 96 Gew.-%, vorzugsweise 85 bis 95 Gew.-% und insbesondere 85 bis 90 Gew.- %.

Der wässrige Träger der zweiten Waschmittelzusammensetzung umfasst vorzugsweise ein wässrigorganisches Lösungsmittelgemisch. Besonders bevorzugt ist der Einsatz von organischem Lösungsmittel aus der Gruppe Ethanol, n-Propanol, i-Propanol, Butanolen, Glykol, Propandiol, Butandiol, Methylpropandiol, Glycerin, Diglykol, Propyldiglycol, Butyldiglykol, Hexylenglycol, Ethylenglykolmethylether, Ethylenglykolethylether, Ethylenglykolpropylether, Ethylenglykolmono-n- butylether, Diethylenglykolmethylether, Diethylenglykolethylether, Propylenglykolmethylether, Propylenglykolethylether, Propylenglykolpropylether, Dipropylenglykolmonomethylether, Dipropy- lenglykolmonoethylether, Methoxytriglykol, Ethoxytriglykol, Butoxytriglykol, 1-Butoxyethoxy-2-propanol, 3-Methyl-3-methoxybutanol, Propylen-glykol-t-butylether, Di-n-octylether sowie deren Mischungen, insbesondere aus der Gruppe Propandiol, Glycerin und Ethanol.

Das aktive Protease-Protein kann in der zweiten Waschmittelzusammensetzung mit mindestens einer reversiblen Inhibitorverbindung, die aus der aus Polyolen, insbesondere Glycerin und 1 ,2- Propylenglykol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester oder Derivate, insbesondere Phenylboronsäurederivate oder 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA), Verbindungen der Formeln (I) oder (II) wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6-Carbonsäuren und -OOC-NR ² 2, wobei R ² gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, vorzugsweise Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat, und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, kombiniert werden, um die Stabilität der Protease in Wasch- und Reinigungsmitteln weiter zu erhöhen.

Unter der Bezeichnung "Phenylboronsäurederivat" wird eine Verbindung mit der Formel (III) verstanden.

(III), wobei R Wasserstoff, eine Hydroxyl-, eine C1-6 Alkyl-, eine substituierte C1-6 Alkyl-, eine C1-6 Alkenyl oder eine substituierte C1-6 Alkenyl-Gruppe ist. Bevorzugt ist der Rest R in dem Phenylboronsäurederivat eine C1-6 Alkyl-Gruppe und hierunter weiter bevorzugt -CH3, -CH3CH2 oder - CH3CH2CH2 sein. Weiter bevorzugt ist der Rest R in dem Phenylboronsäurederivat Wasserstoff. Besonders bevorzugt ist das Phenylboronsäurederivat 4-Formyl-phenylboronsäure (4-FPBA).

Die eingesetzte reversible Inhibitorverbindung kann Borsäure sein.

Die eingesetzte reversible Inhibitorverbindung kann eine Verbindung der Formeln (I) oder (II) sein. (II), wobei R jeweils ausgewählt ist aus -COOH, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6- Dicarbonsäuren, Ci-e-Alkyl-substituierten oder unsubstituierten C2-6-Carbonsäuren und -OOC-NR ² 2, wobei R ² gleich oder verschieden und ausgewählt aus Ci-e-Alkyl oder H sind, sowie Salzen, Estern oder Derivaten davon, und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, sein, vorzugsweise ausgewählt aus der aus Benzoesäure, Phenylmalonsäure, Benzylmalonsäure, Phenylbernsteinsäure, Benzylbernsteinsäure, Methyl-3-Benzoylpropionat, (S)-3-Phenylbuttersäure und Benzylcarbamat bestehenden Gruppe.

Die zweite Waschmittelzusammensetzung ist vorzugsweise im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen. "Im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen" bedeutet in diesem Zusammenhang, dass die zweite Waschmittelzusammensetzung, bezogen auf ihr Gesamtgewicht, weniger als 2 Gew.-%, vorzugsweise weniger als 1 Gew.-%, weiter bevorzugt weniger als 0,5 Gew.-% und besonders bevorzugt weniger als 0,1 Gew.-%, borhaltige Verbindungen, enthält. In einer ganz besonders bevorzugten Ausführungsformen ist die zweite Waschmittelzusammensetzung frei von borhaltigen Verbindungen, d.h. sie enthalten keine borhaltigen Verbindungen, insbesondere keine Borsäure und/oder Phenylboronsäurederivate.

Die zweite Waschmittelzusammensetzung wird in Schritt e) des Verfahrens vorzugsweise aus einem in die Waschmaschine integrierten Behälter dosiert wird, welcher mit der mehrfachen des für die Durchführung eines Wasch Programms notwendigen Menge der zweiten Waschmittelzusammensetzung befüllt ist.

Die Dosierung der zweiten Waschmittelzusammensetzung in Schritt e) erfolgt vorzugsweise derart, dass die zweite Waschmittelzusammensetzung innerhalb eines Zeitraums von fünf Minuten, besonders bevorzugt von 2 Minuten und insbesondere von 1 Minute in die wässrige Flotte eingebracht wird.

Die wässrige Flotte weist in Schritt e) vorzugsweise eine Temperatur von 26 bis 64°C auf.

In einer bevorzugten Ausführungsform des Verfahrens wird vor dem Schritt e) kein Bleichmittel und keine Bleichmittel enthaltende Waschmittelzusammensetzung in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebracht. Die Dosierung von Bleichmittel oder Bleichmittel enthaltenden Waschmittelzusammensetzungen vor dem Schritt e) hat sich für die Reinigungswirkung als nachteilig oder zumindest unerheblich erwiesen.

Unter einem Bleichmittel sind insbesondere solche Verbindungen zu verstehen, die in wässrigem Medium Wasserstoffperoxid liefern. Unter den als Bleichmittel dienenden, in Wasser H2O2 liefernden Verbindungen haben das Natriumpercarbonat, das Natriumperborattetrahydrat und das Natriumperboratmonohydrat besondere Bedeutung. Weitere brauchbare Bleichmittel sind beispielsweise Peroxopyrophosphate, Citratperhydrate sowie H2O2 liefernde persaure Salze oder Persäuren, wie Persulfate beziehungsweise Perschwefelsäure. Brauchbar ist auch das Harnstoffperoxohydrat Percarbamid, das durch die Formel H2N-CO-NH2 H2O2 beschrieben werden kann. Insbesondere beim Einsatz der Mittel für das Reinigen harter Oberflächen, zum Beispiel beim maschinellen Geschirrspülen, können die Waschmittelportionseinheiten gewünschtenfalls auch Bleichmittel aus der Gruppe der organischen Bleichmittel enthalten, obwohl deren Einsatz prinzipiell auch bei Mitteln für die Textilwäsche möglich ist. Typische organische Bleichmittel sind die Diacylperoxide, wie zum Beispiel Dibenzoylperoxid. Weitere typische organische Bleichmittel sind die Peroxysäuren, wobei als Beispiele besonders die Alkylperoxysäuren und die Arylperoxysäuren genannt werden. Bevorzugte Vertreter sind (a) die Peroxybenzoesäure und ihre ringsubstituierten Derivate, wie Alkylperoxybenzoesäuren, aber auch Peroxy-a-Naphthoesäure und Magnesium-monoperphthalat, (b) die aliphatischen oder substituiert aliphatischen Peroxysäuren, wie Peroxylaurinsäure, Peroxystearinsäure, e-Phthalimidoperoxycapronsäure (Phthalimidoperoxy- hexansäure, PAP), o- Carboxybenzamidoperoxycapronsäure, N-Nonenylamidoperadipinsäure und N- Nonenylamidopersuccinate, und (c) aliphatische und araliphatische Peroxydicarbonsäuren, wie 1 ,12- Diperoxycarbonsäure, 1 ,9-Diperoxyazelainsäure, Diperoxysebacinsäure, Diperoxybrassyl- säure, die Diperoxyphthalsäuren, 2-Decyldiperoxybutan-1 ,4-disäure, N,N-Terephthaloyl-di(6- aminopercapronsäure). Bevorzugte Sauerstoffbleichmittel sind in partikulärer Form konfektioniert, wobei die Partikel eine Beschichtung aufweisen.

Nach Beendigung des Hauptwaschgangs zum Zeitpunkt 100% t _w wird die wässrige Flotte vorzugsweise aus dem Wäschebehandlungsraum abgepumpt.

Die Zusammensetzung einiger bevorzugter erster und zweiter Wasch mittelzusammensetzungen fürden Einsatz in dem erfindungsgemäßen Verfahren kann den folgenden Tabellen entnommen werden (Angaben in Gew.-% bezogen auf das Gesamtgewicht des Gelkörpers bzw. der Hüllsubstanz sofern nicht anders angegeben).

* wobei das aktive Protease-Protein proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die mindestens 70% Sequenzidentität mit der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge aufweist und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens zwei, vorzugsweise drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise drei Aminosäuresubstitutionen, ausgewählt aus den Aminosäuresubstitutionen 3T, 4I, 99E und 1991, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, insbesondere ausgewählt aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203KA//W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, aufweist

Durch diese Anmeldung werden u.a. die folgenden Gegenstände bereitgestellt:

1. Waschverfahren für Textilien in einer Trommelwaschmaschine, umfassend die Schritte a) Bereitstellen einer Waschmaschine mit einem Waschprogramm, umfassend einen Hauptwaschgang der Dauer t _w ; b) Einbringen von Textilien in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine; c) Einbringen einer wässrigen Flotte in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine; d) Einbringen einer ersten Waschmittelzusammensetzung, umfassend mindestens ein Tensid in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine im Hauptwaschgang zu einem Zeitpunkt 0 bis 10% t _w ; e) Einbringen einer zweiten Waschmittelzusammensetzung, umfassend, bezogen auf ihr Gesamtgewicht, i) mindestens 4 Gew.-% aktives Protease-Protein ii) mindestens 80 Gew.-% eines flüssigen Trägers in die wässrige Flotte des Hauptwaschgangs zu einem Zeitpunkt 1 1 bis 99% t _w . Waschverfahren nach Punkt 1 , wobei die Trommelwaschmaschine einen Laugenbehälter, eine innerhalb des Laugenbehälters angebrachte Wäschetrommel, als Wäschebehandlungsraum, sowie eine Abpumpvorrichtung, die zum Abpumpen wässriger Flotte aus dem Laugenbehälter eingerichtet ist, umfasst. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei das Waschprogramm einen Hauptwaschgang, mindestens einen Spülgang und mindestens einen Schleudergang umfasst. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei das Waschprogramm mindestens einen Vorwaschgang, einen Hauptwaschgang, einen mindestens Spülgang und einen mindestens Schleudergang umfasst. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die Dauer t _w des Hauptwaschgangs 15 bis 400 Minuten, vorzugsweise 30 bis 240 Minuten und insbesondere 60 bis 180 Minuten beträgt. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die wässrige Flotte in Schritt c) ein Volumen von 3 bis 40 I, vorzugsweise von 6 bis 30 I und insbesondere 8 bis 20 I aufweist. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die wässrige Flotte in Schritt c) eine Wasserhärte oberhalb 14°dH, vorzugsweise oberhalb 17°dH und insbesondere oberhalb 21 °dH aufweist. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die Trommelwaschmaschine über eine Vorrichtung zur Erfassung der Wasserhärte der in Schritt c) eingesetzten wässrigen Flotte verfügt, wobei das Waschprogramm vorzugsweise derart ausgestaltet ist, dass die mittels der Vorrichtung erfassten Wasserhärten vorzugsweise die Menge der in Schritt e) eingebrachten zweiten Waschmittelzusammensetzung beeinflusst. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei mittels einer Vorrichtung zur Ermittlung der Wasserhärte die Wasserhärte der in Schritt c) in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebrachten wässrigen Flotte ermittelt und durch Vergleich der ermittelten Wasserhärte mit Vergleichswerten und diesen Vergleichswerten zugeordneten Behandlungsparametern ein Behandlungsparameter ermittelt wird, welcher die in Schritt d) und/oder e) eingebrachte Menge der ersten oder zweiten Waschmittelzusammensetzung betrifft und die erste Waschmittelzusammensetzung in Schritt d) und/oder die zweite Waschmittelzusammensetzung in Schritt e) in einer dem ermittelten Behandlungsparameter entsprechenden Menge eingebracht wird. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei mittels einer Vorrichtung zur Ermittlung der Wasserhärte die Wasserhärte der in Schritt c) in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebrachten wässrigen Flotte ermittelt und durch Vergleich der ermittelten Wasserhärte mit Vergleichswerten und diesen Vergleichswerten zugeordneten Behandlungsparametern ein Behandlungsparameter ermittelt wird, welcher die in Schritt e) eingebrachte Menge der zweiten Waschmittelzusammensetzung betrifft und die zweite Waschmittelzusammensetzung in Schritt e) in einer dem ermittelten Behandlungsparameter entsprechenden Menge eingebracht wird. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei das Gewichtsverhältnis von wässriger Flotte zu Textilien in Schritt c) oberhalb 1 :1 , vorzugsweise oberhalb 2:1 und insbesondere oberhalb 5:2 beträgt. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die Trommelwaschmaschine über eine Vorrichtung zur Erfassung des Gewichts der in Schritt b) eingebrachten Textilien verfügt, wobei das Waschprogramm vorzugsweise derart ausgestaltet ist, dass das mittels der Vorrichtung erfasste Textilgewicht die Menge der in Schritt e) eingebrachten zweiten Waschmittelzusammensetzung beeinflusst. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die wässrige Flotte in Schritt c) eine Temperatur Ti von 18 bis 25°C aufweist. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die wässrige Flotte vor der ersten Waschmittelzusammensetzung in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebracht wird. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die wässrige Flotte gleichzeitig mit der ersten Waschmittelzusammensetzung in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebracht wird. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die wässrige Flotte nach der ersten Waschmittelzusammensetzung in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebracht wird. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung bezogen auf ihr Gesamtgewicht i) 50 bis 95 Gew. -% Tensid ii) weniger als 10 Gew.-% Wasser umfasst. Waschverfahren nach einem dervorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung, bezogen auf ihr Gesamtgewicht, 55 bis 92 Gew.-%, vorzugsweise 60 bis 88 Gew.-% Tensid enthält. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung anionisches Tensid aus der Gruppe aus der Gruppe der Cs-is-Alkylbenzolsulfonsäuren enthält. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung anionisches Tensid aus der Gruppe aus der Gruppe der Alkylethersulfonsäuren enthält. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung anionisches Tensid aus der Gruppe aus der Gruppe der Fettsäuren enthält. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung, bezogen auf ihr Gesamtgewicht, 30 bis 90 Gew.-%, vorzugsweise 40 bis 80 Gew.-% und insbesondere 45 bis 70 Gew.-% anionisches Tensid enthält. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung nichtionisches Tensid aus der Gruppe der ethoxylierten primären C6-18-Alkohole, vorzugsweise der ethoxylierten primären C6-18-Alkohole mit einem Alkoxylierungsgrad > 2, besonders bevorzugt der C12-14-Alkohole mit 4 EO oder 7 EO, der C9-11 -Alkohole mit 7 EO, der C13-15-Alkohole mit 5 EO, 7 EO oder 8 EO, der C13-15-Oxoalkohole mit 7 EO, der C12-18-Alkohole mit 5 EO oder 7 EO, insbesondere der C12-18-Fettalkohole mit 7 EO oder der C13-15-Oxoalkohole mit 7 EO enthält. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung, bezogen auf ihr Gesamtgewicht, 7 bis 50 Gew.-%, vorzugsweise 12 bis 40 Gew.-% und insbesondere 15 bis 30 Gew.-% nichtionisches Tensid enthält. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung polyalkoxyliertes Amin mit einem gewichtsmittleren Molekulargewicht Mw im Bereich von 600 g/mol bis 10000 g/mol, das erhältlich ist durch Umsetzung von Ammoniak oder primären Alkyl- oder Hydroxyalkylaminen, die ein Molekulargewicht unter 200 g/mol aufweisen, mit Alkylenoxiden, vorzugsweise in Gewichtsanteilen von 0,5 bis 10 Gew.-%, vorzugsweise von 1 bis 8 Gew.-% und insbesondere von 2 bis 6 Gew.-% enthält. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung polyalkoxyliertes Polyalkylenimin, das erhältlich ist durch Umsetzung von Polyalkyleniminen mit Alkylenoxiden, vorzugsweise in Gewichtsanteilen von 0,5 bis 10 Gew.-%, vorzugsweise von 1 bis 8 Gew.-% und insbesondere von 2 bis 6 Gew.-% enthält. 27. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung weniger als 6 Gew.-% und insbesondere weniger als 2 Gew.-% Wasser enthält.

28. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung bezogen auf ihr Gesamtgewicht 0,5 bis 29 Gew.-%, vorzugsweise 4,5 bis 27 Gew.-% und insbesondere 10 bis 24 Gew.-% organisches Lösungsmittel enthält.

29. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung organisches Lösungsmittel aus der Gruppe der organischen Amine, vorzugsweise Monoethanolamin, enthält.

30. Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung, bezogen auf ihr Gesamtgewicht i) 30 bis 90 Gew.-%, vorzugsweise 40 bis 80 Gew.-% und insbesondere 45 bis 70 Gew.-% anionisches Tensid aus der Gruppe der Cs-is-Alkylbenzolsulfonsäuren, der Alkylethersulfonsäuren und der Fettsäuren, ii) 7 bis 50 Gew.-%, vorzugsweise 12 bis 40 Gew.-% und insbesondere 15 bis 30 Gew.-% nichtionisches Tensid aus der Gruppe der ethoxylierten primären C6-18-Alkohole, iii) 0,5 bis 29 Gew.-%, vorzugsweise 4,5 bis 27 Gew.-% und insbesondere 10 bis 24 Gew.-% organisches Lösungsmittel aus der Gruppe der organischen Amine iv) weniger als 10 Gew.-%, vorzugsweise weniger als 6 Gew.-% und insbesondere weniger als 2 Gew.-% Wasser enthält.

31 . Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung kein Enzym enthält.

32.Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung in Schritt d) aus einem in die Waschmaschine integrierten Behälter dosiert wird, welcher mit der mehrfachen des für die Durchführung eines Waschprogramms notwendigen Menge der ersten Waschmittelzusammensetzung befüllt ist.

33.Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung in Schritt d) zu einem Zeitpunkt 0 t _w in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebracht wird.

34.Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die erste Waschmittelzusammensetzung in Schritt d) zu einem Zeitpunkt >0 bis 10% t _w , vorzugsweise >0 bis 5% t _w in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebracht wird. 35.Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die zweite Waschmittelzusammensetzung, bezogen auf ihr Gesamtgewicht, 4 bis 18 Gew.-%, vorzugsweise 5 bis 15 Gew.-% und insbesondere 7 bis 12 Gew.-% aktives Protease-Protein umfasst.

36.Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei das aktive Protease-Protein proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die mindestens 70% Sequenzidentität mit der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge aufweist und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens zwei, vorzugsweise drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, vorzugsweise drei Aminosäuresubstitutionen, ausgewählt aus den Aminosäuresubstitutionen 3T, 4I, 99E und 1991, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, insbesondere ausgewählt aus N74D/E/Q, A136Q, R143L/W/Y, S154D/Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A/L/S/T, Y203K/V/W, A209K/W, N212S/T und L256D/E/Q, aufweist.

37.Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die zweite

Waschmittelzusammensetzung, bezogen auf ihr Gesamtgewicht, 80 bis 96 Gew.-%, vorzugsweise 85 bis 95 Gew.-% und insbesondere 85 bis 90 Gew.-% flüssigen Träger umfasst.

38.Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die zweite

Waschmittelzusammensetzung als flüssigen Träger ein wässrig-organisches Lösungsmittelgemisch aufweist.

39.Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei der flüssige Träger der zweiten

Waschmittelzusammensetzung organisches Lösungsmittel aus der Gruppe Ethanol, n-Propanol, i-

Propanol, Butanolen, Glykol, Propandiol, Butandiol, Methylpropandiol, Glycerin, Diglykol, Propyldiglycol,

Butyldiglykol, Hexylenglycol, Ethylenglykolmethylether, Ethylenglykolethylether,

Ethylenglykolpropylether, Ethylenglykolmono-n-butylether, Diethylenglykolmethylether,

Diethylenglykolethylether, Propylenglykolmethylether, Propylenglykolethylether,

Propylenglykolpropylether, Dipropylenglykolmonomethylether, Dipropy-Ienglykolmonoethylether,

Methoxytriglykol, Ethoxytriglykol, Butoxytriglykol, 1-Butoxyethoxy-2-propanol, 3-Methyl-3- methoxybutanol, Propylen-glykol-t-butylether, Di-n-octylether sowie deren Mischungen, vorzugsweise aus der Gruppe Propandiol, Glycerin und Ethanol umfasst.

4O.Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die zweite Waschmittelzusammensetzung im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist

41 .Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die zweite Waschmittelzusammensetzung in Schritt e) aus einem in die Waschmaschine integrierten Behälter dosiert wird, welcher mit der mehrfachen des für die Durchführung eines Waschprogramms notwendigen Menge der zweiten Waschmittelzusammensetzung befüllt ist.

42.Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die zweite Waschmittelzusammensetzung in Schritt e) zu einem Zeitpunkt 20 bis 70% t _w , vorzugsweise zu einem Zeitpunkt 25 bis 65% t _w , besonders bevorzugt zu einem Zeitpunkt 30 bis 60% t _w in die wässrige Flotte eingebracht wird.

43.Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die zweite Waschmittelzusammensetzung in Schritt e) innerhalb eines Zeitraums von fünf Minuten, besonders bevorzugt von 2 Minuten und insbesondere von 1 Minute in die wässrige Flotte eingebracht wird.

44.Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei die wässrige Flotte in Schritt e) eine Temperatur von 26 bis 64°C aufweist.

45.Waschverfahren nach einem der vorherigen Punkte, wobei vor dem Schritt e) kein Bleichmittel und keine Bleichmittel enthaltende Waschmittelzusammensetzung in den Wäschebehandlungsraum der Waschmaschine eingebracht wird.