以下に本発明を詳細に説明する。
 本発明は、ω3PUFAs、その製薬学上許容しう� �塩およびエステルからなる群から選ばれる� �なくとも1つ、並びに、PDE4阻害薬、好ましく はPDE4特異性の高い阻害薬、さらに好ましく� �PDE4B特異性の高い阻害薬、特に式(I)で表され るピロロピリダジン誘導体、式(II)で表され� �ピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容し� �るそれらの塩およびそれらのプロドラッグ� �らなる群から選ばれる少なくとも1つの化合� ��を有効成分として併用する、NASHの予防/改� �または治療薬およびその使用方法である。� �発明の予防/改善または治療薬は、有効成分� ��、ω3PUFAs、その製薬学上許容しうる塩およ� �エステルからなる群から選ばれる少なくと� �1つ、並びに、PDE4阻害薬、特に式(I)で表され るピロロピリダジン誘導体、式(II)で表され� �ピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容し� �るそれらの塩およびそれらのプロドラッグ� �らなる群から選ばれる少なくとも1つの化合� ��を、組み合わせて用いる組み合わせ薬およ� ��その使用方法である。
 本発明において予防とは、疾患の発症を予� ��することのみでなく、発症時期を遅延させ� ��ことおよび発症率を低下させることも含む� ��
 本発明において改善とは、疾患の何らかの� ��ラメーターを改善することのみでなく、患� ��の自覚症状や生活の質(Quality of life)を改善 することを含む。また、本発明において治療 とは、既に疾患を発症した患者に薬物を投与 することのみでなく、疾患を発症するリスク の高い患者に薬物を投与する予防的治療も含 む。

 多価不飽和脂肪酸(PUFAs)は、分子内に複数 の炭素-炭素二重結合を有する脂肪酸と定義� �れ、二重結合の位置により、ω3、ω6などに� �類される。ω3PUFAsとしては、α-リノレン酸、 EPA、ドコサヘキサエン酸(以下、DHAと記す)な� ��が例示される。本発明で用いられる「PUFAs� �の語は、特に断らない限りは、多価不飽和� �肪酸だけでなく、その製薬上許容される塩� �あるいはエステル、アミド、リン脂質、グ� �セリドなどの多価不飽和脂肪酸誘導体も含� �意味で用いられる。

 本発明で用いられるω3PUFAsは、合成品、� �合成品または天然品のいずれでもよく、こ� �らを含有する天然油の形態でもよい。ここ� �、天然品とは、ω3PUFAsを含有する天然油から 公知の方法によって抽出されたもの、粗精製 されたもの、あるいはそれらを更に高度に精 製したものを意味する。半合成品は、微生物 などにより産生された多価不飽和脂肪酸を含 み、また該多価不飽和脂肪酸あるいは天然の 多価不飽和脂肪酸にエステル化、エステル交 換等の化学処理を施したものも含まれる。本 発明では、ω3PUFAsとして、これらのうちの1種 を単独で、あるいは2種以上を組み合わせて� �いることができる。

 本発明では、ω3PUFAsとして、具体的には� �EPA、DHA、α-リノレン酸およびこれらの製薬� �上許容しうる塩およびエステルが例示され� �。製薬学上許容しうる塩およびエステルは� �ナトリウム塩、カリウム塩などの無機塩基� �ベンジルアミン塩、ジエチルアミン塩など� �有機塩基、アルギニン塩、リジン塩などの� �基性アミノ酸との塩およびエチルエステル� �のアルキルエステルやモノ-、ジ-およびトリ -グリセリド等のエステルが例示される。好� �しくはエチルエステルであり、特にEPA-Eおよ び/またはDHA-Eが好ましい。

 ω3PUFAsの純度は特に限定されないが、通� �、本剤組成物の全脂肪酸中のω3PUFAsの含量と して、好ましくは25質量%以上、さらに好まし くは50質量%以上、さらに好ましくは70質量%以 上、より好ましくは85質量%以上であり、とり わけ好ましくは本剤組成物がω3PUFAs以外の他� ��脂肪酸成分を実質的に含まない態様である� ��例えば、EPA-EおよびDHA-Eを用いる場合、EPA-E/ DHA-Eの組成比および全脂肪酸中のEPA-E+DHA-Eの� �量比は特に問わないが、好ましい組成比と� �て、EPA-E/DHA-Eは、0.8以上であることが好まし く、更に好ましくは、1.0以上、より好ましく は、1.2以上である。EPA-E+DHA-Eは高純度のもの� ��例えば、全脂肪酸およびその誘導体中のEPA- E+DHA-E含量比が40質量%以上のものが好ましく� �55質量%以上のものがさらに好ましく、84質量 %以上のものがさらに好ましく、96.5質量%以上 のものが更に好ましい。他の長鎖飽和脂肪酸 含量は少ないことが好ましく、長鎖不飽和脂 肪酸でもω6系、特にアラキドン酸含量は少な いことが望まれ、2質量%未満が好ましく、1質 量%未満がさらに好ましい。

 本発明の予防/改善または治療薬に用いら れるEPA-Eおよび/またはDHA-Eは、魚油あるいは� ��油の濃縮物に比べ、飽和脂肪酸やアラキド� ��酸等の心血管イベントに対して好ましくな� ��不純物が少なく、栄養過多やビタミンA過剰 摂取の問題もなく作用効果を発揮することが 可能である。また、エステル体のため主にト リグリセリド体である魚油等に比べて酸化安 定性が高く、通常の酸化防止剤添加により十 分安定な組成物を得ることが可能である。

 このEPA-Eは、日本において、閉塞性動脈硬� �症(ASO)および高脂血症治療薬として入手可能 な高純度EPA-E(96.5質量%以上)含有軟カプセル剤 (商品名エパデール:持田製薬社製)を用いるこ とができる。また、EPA-EとDHA-Eの混合物は、� �とえば、米国で高TG血症治療薬として市販さ れているロバザ(Lovaza:グラクソ・スミス・ク� ��イン:EPA-E約46.5質量%、DHA-E約37.5質量%含有す� ��軟カプセル剤)を使用することもできる。
 ω3PUFAsとして、精製魚油も使用できる。ま� �、ω3PUFAsのモノグリセリド、ジグリセリド、 トリグリセリドまたはこれらの組合せなども 好ましい態様の一つである。例えばインクロ メガ(lncromega)F2250、F2628、E2251、F2573、TG2162、TG 2779、TG2928、TG3525およびE5015(クローダ・イン� �ーナショナル・ピーエルシー(Croda Internationa l PLC, Yorkshire, England))、および EPAX6000FA、EPA X5000TG、EPAX4510TG、EPAX2050TG、EPAX7010EE、K85TG、K85 EEおよびK80EE (プロノバ・バイオファーマ(Pron ova Biopharma, Lysaker, Norway) )などの種々のω3PU FAs、その塩およびエステルを含有する製品が 市販されており、これらを入手して使用する こともできる。

 本発明において、PDE4阻害薬は、PDE4阻害活� �を有していれば良く、PDE4特異的阻害活性を� ��していることが好ましい。また、PDE4のアイ ソザイムの中で、PDE4Bに特異性の高い阻害薬� ��特に、PDE4B阻害活性強度/PDE4D阻害活性強度� �比率が大きなPDE4阻害薬が、嘔吐や嘔吐感の� ��作用発現を低減させるために好ましい。例� ��ば、PDE4Bに対する50%阻害活性濃度/PDE4Dに対� �る50%阻害活性濃度の比率が1以下、好ましく� ��0.1以下、さらに好ましくは0.05以下、より好 ましくは0.01以下である。
 PDE4阻害薬としては、式(I)で表されるピロロ ピリダジン誘導体、式(II)で表されるピラゾ� �ピリジン誘導体、国際公開第2006/004191号パン フレットに式(I)として記載されたピロロピリ ダジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの 塩およびそれらのプロドラッグからなる群か ら選ばれる少なくとも1つの化合物、ドクソ� �ィリン(Doxofylline、Instituto Biologico Chemioterapic o)、ロフルミラスト(roflumilast、 Altana Pharma)� �テトミラスト(tetomilast、大塚製薬)、シロミ� �スト(cilomilast)、デンブフィリン(Denbufylline)、 AWD12-281、GSK1271836およびGSK256066(GlaxoSmithklein )� ��アプレミラスト(Apremilast, Celgene Corp)、オグ レミラスト(Oglemilast, Glenmark Pharmaceuticals)、� �クラミラスト(Piclamilast Sanofi-Aventis)、リリミ ラスト(Lilimilast)およびダクサリプラム(daxalipr am)(Bayer)、ASP9831(アステラス製薬)、OX-914(Inflazy me Pharmaceuticals)、EHT-0202(ExonHit Therapeutics)、HT- 0712(Inflazyme Pharmaceuticals)、MEM-1414(Memory Pharmace uticals)、アロフィリン(arofyline, Almirall Lab)、A N-2728およびAN-2898(Anacor Pharmaceuticals)、HT-0712お よびOX-914(Inflazyme Pharmaceuticals)、SelCIDs、CC-1088 およびCC11050(Celgene Corp)、ONO-6126およびDE103(小 野薬品工業)、GPD1116(あすか製薬)、ELB353(Elbion) 、GRC3886およびGRC4039(Glenmark Pharmaceuticals)、AVE- 8112(Sanofi-Aventis)、4AZA-PDE4(4AZA Bioscience)、CR-3465 (Rottapharm SpA)、ロリプラム(Rolipram Schering AG)� ��UCB-101333-3、CDP-840、L-791943、L-826141およびSCH35 1591(UCB)、RO 20-1724およびRS-25344-000(Roche)、KF1951 4およびKW4490(協和発酵)、PLX-369、PLX-377およびP LX-456(Plexikon Inc)、CD-160130(Curacyte AG)、GP-0203(Ce ntre National de la Recherche Scientifique)、INDUS-820 10(Indus Biotech Pvt)、ND-1251およびND1510(Neuro3d SA )、RBX-10017876(Ranbaxy Laboratories)およびCHF5480(Chie si Farmaceutici)などが例示される。また、特にP DE4B阻害活性強度/PDE4D阻害活性強度の比率が� �きな阻害薬としては、Bioorg.Med.Chem.Lett.2009年, 19:3174-3176に記載されているピリミジン誘導体 である化合物1~35が例示される。
 好ましくは、式(I)で表されるピロロピリダ� ��ン誘導体、式(II)で表されるピラゾロピリジ ン誘導体、国際公開第2006/004191号パンフレッ� ��に式(I)として記載されたピロロピリダジン� ��導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およ� ��それらのプロドラッグからなる群から選ば� ��る少なくとも1つの化合物、ドクソフィリン 、ロフルミラスト、テトミラスト、シロミラ スト、GSK256066、オグレミラスト、ピクラミラ スト、リリミラスト、ASP9831、OX-914、EHT-0202、 HT-0712、MEM-1414、AN-2728、AN-2898、CC11050、DE103、E LB353、GRC4039が例示され、さらに好ましくは、 ASP9831、式(I)で表されるピロロピリダジン誘� �体、式(II)で表されるピラゾロピリジン誘導� ��、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそ� ��らのプロドラッグからなる群から選ばれる� ��なくとも1つの化合物が例示される。より好 ましくは、ASP9831、化合物1ないし5、製薬学上 許容しうるそれらの塩およびそれらのプロド ラッグからなる群から選ばれる少なくとも1� �の化合物が例示され、最も好ましくは、化� �物1ないし3、製薬学上許容しうるそれらの塩 およびそれらのプロドラッグからなる群から 選ばれる少なくとも1つの化合物が例示され� �。本発明において式(I)および式(II)で表され� ��化合物とは、特に断らない限りは、上記の� ��うな塩またはプロドラッグも含む意味で用� ��られる。

 式(I)あるいは式(II)で表される化合物は、 公知の方法、例えば国際公開第2004/063197号パ� ��フレットあるいは国際公開第2006/004188号パ� �フレットに記載された方法により製造する� �とができる。

 上記のようなω3PUFAsおよびPDE4阻害薬併用� ��本発明薬剤において、好ましい態様は、EPA- Eおよび/またはDHA-Eと式(I)あるいは式(II)で表� ��れる化合物との組合せである。

 本発明において、有効成分の「併用」と� ��、有効成分を組合せて用いることであり、� �3PUFAsおよびPDE4阻害薬を共に含む配合剤とし� ��投与すること、および、ω3PUFAsとPDE4阻害薬� ��がそれぞれ別個の製剤として同時期にもし� ��は時間差をおいて別々に投与されることを� ��む。「別個の製剤として同時期にもしくは� ��間差をおいて別々に投与される」態様には� ��(1)ω3PUFAsを投与される患者に、PDE4阻害薬を� ��効成分として含有する組成物を投与する態� ��、および、(2)PDE4阻害薬を投与される患者に 、ω3PUFAs有効成分として含有する組成物を投� ��する態様が含まれる。また、「併用」とは� ��ずしも患者の体内、例えば血中において同� ��に存在する場合に限られないが、本発明に� ��いて「併用」とは、いずれか一方の薬剤の� ��用・効果が患者の体内に発現している状態� ��他方の薬剤を投与する使用態様をいう。本� ��明の予防/改善または治療薬を用いてNAFLDも� ��くはNASHに関連する疾患の予防/改善または� �療効果が得られるような使用態様である。� �ましくは、患者の体内、例えば血中におい� �同時に存在する使用態様が望ましく、また� �ましくは、患者に対して、一方の薬剤を投� �してから24時間以内に他方の薬剤を投与する 使用態様が好ましい。

 本発明の予防/改善または治療薬における 併用の形態は、特に限定されず、有効成分が 組み合わされていればよい。このような薬剤 の形態としては、例えば(1)有効成分を同時製 剤化して得られる単一の製剤の投与、(2)有効 成分を別々に製剤化して得られる2種類の製� �を組合せてキットとし、または組み合わせ� �いで別々に用意し、同一投与経路での同時� �与に使用する。(3)有効成分を別々に製剤化� �て得られる2種類の製剤を組合せてキットと� ��、または組み合わせないで別々に用意し、� ��一投与経路で時間差をおいて投与する。(4)� ��効成分を別々に製剤化して得られる2種類の 製剤を組合せてキットとし、または組み合わ せないで別々に用意し、異なる投与経路(同� �患者の異なる部位から投与する)で同時に投� ��する。(5)有効成分を別々に製剤化して得ら� ��る2種類の製剤を組合せてキットとし、また は組み合わせないで別々に用意し、異なる投 与経路(同一患者の異なる部位から投与する)� ��時間差をおいて投与する。

 これらの時間差をおいて投与する場合は� ��例えば、ω3PUFAsとPDE4阻害薬の順序での投与� ��または逆の順序での投与がある。同時に投� ��する場合、投与経路が同一であれば投与直� ��に両薬剤を混合してもよく、別々に投与し� ��も良い、また種々の目的で計画的に投与時� ��をずらして用いることができる。具体的な� ��としては、一方の薬剤を投与し、その効果� ��発現し始める時期もしくは十分に発現して� ��る間に、他方の薬剤を投与して作用させる� ��法がある。また、一方の薬剤、特にPDE4阻害 薬を徐放化して1日1回投与とし、他方の薬剤� ��特にω3PUFAsを1日複数回、例えば2ないし3回� �与としてもよいし、同様に1日1回投与として もよい。両薬ともに1日1回投与、さらには1日 1回同時投与あるいは配合剤とすれば、患者� �服薬の負担を軽減し、服薬コンプライアン� �が向上して予防/改善・治療効果および副作� ��軽減効果も増すことが期待され、好ましい� ��また、例えば、両薬剤を投与し、その効果� ��発現し始める時期もしくは十分発現してい� ��時期に、一方の薬剤の投薬を中止する方法� ��ある。薬剤の投薬を中止する場合には、段� ��的に薬剤の用量を減量してもよい。また、� ��えば、一方の薬剤の休薬期間に他方の薬剤� ��投与する方法が挙げられる。

 本発明のNASHの予防/改善または治療薬に� �、有効成分として少なくともω3PUFAsおよびPDE 4阻害薬の1種ずつを併用した治療効果が得ら� ��る態様で使用すれば、その使用態様は制限� ��れない。たとえば、ω3PUFAsおよびPDE4阻害薬� ��みを使用することを特徴とするもの、すな� ��ち、ω3PUFAsと、PDE4阻害薬とを組み合わせて� ��るNASHの予防/改善または治療薬のほか、さ� �に他の有効成分を組み合わせて使用するNASH� ��予防/改善または治療薬も含まれる。

 望ましくは、ω3PUFAsおよびPDE4阻害薬を併� ��した治療効果が、併用の場合と同じ用量の� �3PUFAsおよびPDE4阻害薬を個々に用いて得られ� ��治療効果の和よりも大きな効果を得られる� ��様が好ましい。ここでの治療効果とは、NAFL DもしくはNASHに関連する疾患の予防/改善また は治療効果あるいは肝硬変や肝癌への進行抑 制であれば、特に限定されないが、例えば、 画像検査(超音波、CT、MRIなど)、肝生検ある� �は血漿中の繊維化マーカー(IV型コラーゲン� �ヒアルロン酸、TIMP-1等)により測定した肝繊� ��化の程度、血清ASTやALT値の減少、AST/ALT比の 減少、アディポネクチンの増加、TNFαやILの� �少、高感度CRPの減少、好中球数の減少や血� �酸化ストレスマーカー(フェリチン、チオレ� ��キシン)の減少、HOMA-IR改善などが例示され� �好ましくはTNFα、ILなどのアディポサイトカ� ��ンや高感度CRPの改善、繊維化マーカー(IV型� ��ラーゲン、ヒアルロン酸、TIMP-1等)や血中酸 化ストレスマーカー(フェリチン、チオレド� �シン)改善が例示される。その他のNAFLDもし� �はNASHに関連する生化学的・病理学的あるい� ��病態パラメーターにより予防/改善または治 療効果をモニタリングしてもよい。

 本発明の予防/改善または治療薬に用いら れるω3PUFAsおよびPDE4阻害薬の投与量および投 与期間は対象となる作用を現すのに十分な量 および期間とされるが、その剤形、投与方法 、1日当たりの投与回数、症状の程度、体重� �年齢等によって適宜増減することができる� �

 経口投与する場合は、例えばEPA-Eおよび/� ��たはDHA-Eとして0.1~10g/日、好ましくは0.3~6g/� �、よりに好ましくは0.6~4g/日、さらに好まし� ��は0.9~2.7g/日を1ないし3回に分けて投与する� �、必要に応じて全量を1回あるいは数回に分� ��て投与してもよい。また、PDE4阻害薬の投与 量に応じて減量することも可能である。投与 時間は食中ないし食後が好ましく、食直後(30 分以内)投与が更に好ましい。上記投与量を� �口投与する場合、投与期間は1年以上、好ま� ��くは2年以上、より好ましくは3.5年以上、更 に好ましくは5年以上であるが、NASHに関連す� ��病態あるいは生化学的指標などが継続して� ��る間、NASHの発症および/または再発の危険� �が高い状態が続いている間は投与を継続す� �ことが望ましい。また、例えば1日おきに投� ��する、1週間に2~3日投与する態様や、場合に より1日~3ヵ月程度、好ましくは1週間~1ヵ月程 度の休薬期間を設けることもできる。

 本発明の予防/改善または治療薬に用いら れるPDE4阻害薬の投与量は、その薬剤単独で� �用法・用量の範囲内で使用されることが好� �しいが、その種類、剤形、投与方法、1日当� ��りの投与回数は、症状の程度、体重、性別� ��年齢等によって適宜増減することができる� ��経口投与する場合は、例えば化合物1として 0.002~200mg/日、好ましくは0.02~20mg/日、さらに� �ましくは0.2~2mg/日を、化合物2あるいは3とし� ��0.001~100mg/日、好ましくは0.01~10mg/日、さらに 好ましくは0.1~1mg/日を、シロミラストとして0 .1~10000mg/日、好ましくは1~1000mg/日、さらに好� ��しくは10~100mg/日を、ロフルミラストとして0 .002~200mg/日、好ましくは0.02~20mg/日、さらに好 ましくは0.2~2mg/日を、1回ないし2回に分けて� �与するが、必要に応じて全量を数回に分け� �投与してもよい。医師の指示によっては、� �与開始日に、1日の推奨用量よりも低い用量� ��経口投与し、その後、維持量として、1日の 最高投与量まで漸増して経口投与してもよい 。また、ω3PUFAsの投与量に応じて減量するこ� ��も可能である。嘔吐などの副作用軽減の観� ��で1日投与量をできるだけ減量することや、 徐放剤化して1日1回投与にすることがより好� ��しい。上記投与量を経口投与する場合、投� ��期間は1年以上、好ましくは2年以上、より� �ましくは3.5年以上、更に好ましくは5年以上� ��あるが、NASHに関連する病態あるいは生化学 的指標などが継続している間、NASHの発症お� �び/または再発の危険度が高い状態が続いて� ��る間は投与を継続することが望ましい。ま� ��、例えば1日おきに投与する、1週間に2~3日� �与する態様や、場合により1日~3ヵ月程度、� �ましくは1週間~1ヵ月程度の休薬期間を設け� �こともできる。

 ω3PUFAsおよびPDE4阻害薬の併用による本発� ��では、ω3PUFAsおよび/またはPDE4阻害薬の用量 を一般的に使用される通常の用量より低く設 定することも可能である。例えば、個々の薬 剤を単独で治療効果を得るには不十分な用量 を用いることも可能である。これにより、薬 剤、特にPDE4阻害薬による嘔吐などの副作用� �軽減することができる利点を有する。

 ω3PUFAsおよび/またはPDE4阻害薬単独の用量が 、治療効果を得るには不十分な用量であって 、ω3PUFAsおよびPDE4阻害薬を併用した治療効果 が、併用の場合と同じ用量のω3PUFAsおよびPDE4 阻害薬を個々に用いて得られる治療効果の和 よりも大きな効果を得られるような使用態様 も望ましい。
 また、ω3PUFAsおよび/またはPDE4阻害薬単独の 用量が、治療効果を得るには不十分な用量で あって、ω3PUFAsおよびPDE4阻害薬を併用した際 の副作用が、併用の場合と同じ用量のω3PUFAs� ��よびPDE4阻害薬を個々に用いて発現する副作 用の和よりも小さいような使用態様も望まし い。

 ω3PUFAs単独の用量が、治療効果を得るには� �十分な用量とは、患者の個々の状態や体型� �より変動し、限定されるものではないが、� �えば、EPA-Eおよび/またはDHA-Eの場合、1日あ� �りの投与量が、0.1g以上2g未満、好ましくは0. 2g以上1.8g以下、さらに好ましくは0.3g以上~0.9g 以下、また好ましくは、0.3g以上~0.6g以下であ る。
 PDE4阻害薬単独の用量が、治療効果を得るに は不十分な用量とは、患者の個々の状態や体 型により変動し、限定されるものではないが 、例えば、化合物1の1日あたりの投与量が0.2m g未満であり、好ましくは0.002mg以上0.15mg以下� ��より好ましくは0.005mg以上0.1mg以下、さらに� ��ましくは0.01mg以上0.05mg以下、化合物2あるい は3の1日あたりの投与量が0.1mg未満であり、� �ましくは0.001mg以上0.08mg以下、より好ましく� ��0.002mg以上0.05mg以下、さらに好ましくは0.005m g以上0.02mg以下、シロミラストの1日あたりの� ��与量が10mg未満であり、好ましくは0.1mg以上8 mg以下、より好ましくは0.2mg以上5mg以下、さ� �に好ましくは0.5mg以上2mg以下、ロフルミラス トの1日あたりの投与量が0.2mg未満であり、好 ましくは0.002mg以上0.15mg以下、より好ましく� �0.005mg以上0.1mg以下、さらに好ましくは0.01mg� �上0.05mg以下が例示される。
 本発明の効果は、PDE4阻害薬単独で抗炎症作 用を示す用量より少ない低用量で現れること が期待される。

 ω3PUFAsおよびPDE4阻害薬の投与量の比率は� ��特に限定されないが、好ましいω3PUFAsとPDE4� ��害薬の投与量の比率は、ω3PUFAs:化合物1=200~9 0000:1、好ましくは300~30000:1、さらに好ましく� ��、500~10000:1、最も好ましくは1000~6000:1、ω3PUF As:化合物2あるいは3=400~180000:1、好ましくは600 ~60000:1、さらに好ましくは、1000~20000:1、最も� ��ましくは2000~12000:1、ω3PUFAs:シロミラスト=4~1 800:1、好ましくは6~600:1、さらに好ましくは、 10~200:1、最も好ましくは20~120:1、ω3PUFAs:ロフ� �ミラスト=200~90000:1、好ましくは300~30000:1、さ らに好ましくは、500~10000:1、最も好ましくは1 000~6000:1、が例示され、PDE4阻害薬による副作� ��軽減の観点ではPDE4阻害薬の量をさらに1/2~1/ 10量とすることもできる。配合剤とする場合� ��も、この比率で配合されることが望ましい� ��

 PDE4阻害薬およびω3PUFAsの1日投与量、投与 回数あるいは投与比率は、肝繊維化の程度、 血清ASTやALTの減少、AST/ALT比の減少、アディ� �ネクチンの増加、TNFαやILの減少や好中球数� ��減少や血中酸化ストレスマーカーの減少、H OMA-IR改善などの検査値あるいは患者の嘔吐や 嘔吐感の有無を確認しながら適宜増減できる 。例えば、PDE4阻害薬を単独で投与したとき� �血清ALT値を測定し、この測定値を指標にし� �、その後、PDE4阻害薬の投与量を減少してω3P UFAsの投与を開始し、本発明の治療効果を得� �こともできる。本発明の予防/改善または治� ��薬を用いた場合の各種副作用発現は、本発� ��と同じ治療効果を得るためにPDE4阻害薬単独 投与で必要とする用量で発現する副作用、例 えば嘔吐や嘔吐感の発現頻度、を超えないこ とが望ましい。

 本発明のNASHの予防/改善または治療薬は� �有効成分を化合物(精製の際に不可避的に含� ��れる他の成分を含む場合もある)をそのまま 投与するか、或いは一般的に用いられる適当 な担体または媒体、賦形剤、結合剤、滑沢剤 、着色剤、香味剤、必要に応じて滅菌水や植 物油、更には無害性有機溶媒あるいは無害性 溶解補助剤(たとえばグリセリン、プロピレ� �グリコール)、乳化剤、懸濁化剤(例えばツイ ーン80、アラビアゴム溶液)、等張化剤、pH調� ��剤、安定化剤、無痛化剤、嬌味剤、着香剤� ��保存剤、抗酸化剤、緩衝剤、着色剤などの� ��加剤と適宜選択組み合わせて適当な医薬用� ��剤に調製することができる。添加剤として� ��たとえば乳糖、部分α化デンプン、ヒドロ� �シプロピルセルロース、マクロゴール、ト� �フェロール、硬化油、ショ糖脂肪酸エステ� �、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、� �化チタン、タルク、ジメチルポリシロキサ� �、二酸化ケイ素、カルナウバロウなどを含� �しうる。

 特に、ω3PUFAsは高度に不飽和であるため� �抗酸化剤たとえばブチレート化ヒドロキシ� �ルエン、ブレチート化ヒドロキシアニソー� �、プロピルガレート、没食子酸、医薬とし� �許容されうるキノンおよびα-トコフェロー� �から選ばれる少なくとも1種を抗酸化剤とし� ��有効量含有させることが望ましい。

 製剤の剤形は、本発明の有効成分の併用� ��態によっても異なり、特に限定されないが� ��経口製剤としては、例えば、錠剤、フィル� ��コーティング錠、カプセル剤、マイクロカ� ��セル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、経口用液� ��製剤、シロップ剤、ゼリー剤、吸入剤の形� ��、非経口製剤としては、例えば、軟膏、坐� ��、注射剤(乳濁性、懸濁性、非水性)あるい� �用時乳濁または懸濁して用いる固形注射剤� �輸液製剤、経皮吸収剤などの外用剤で、経� �および静脈内あるいは動脈内、吸入、直腸� �、膣内あるいは外用を問わず患者に投与さ� �るが、経口服用できる患者に対しては、簡� �な経口製剤が望ましく、とりわけカプセル� �とえば、軟質カプセルやマイクロカプセル� �封入して、あるいは錠剤、フィルムコーテ� �ング錠での経口投与が好ましい。また、腸� �製剤や徐放化製剤として経口投与してもよ� �、透析患者や嚥下困難な患者などにはゼリ� �剤として経口投与することも好ましい。

 本発明の予防/改善または治療薬は、両薬 剤を別々に製剤して得られる2種類の製剤を� �み合わせて使用する場合には、それぞれ公� �の方法により製剤化する。また、本発明の� �防/改善または治療薬は、ω3PUFAsとPDE4阻害薬� ��を有効成分とする配合剤とすることができ� ��。

 配合剤の有効成分として、第三の薬剤を含� ��することも可能である。第三の薬剤は特に� ��定されないが、本発明の効果を減弱しない� ��とが好ましく、例えば、肝庇護剤、血糖降� ��剤、高脂血症治療薬、降圧剤、抗酸化剤、� ��炎症剤などが例示される。
 ここで肝庇護剤としては、例えば、ウルソ� ��オキシコール酸やベタインが挙げられる。� ��、血糖降下剤としては、例えば、インスリ� ��やインスリン誘導体、トルブタミド、グリ� ��ラジド、グリベンクラミド、グリメピリド� ��ようなスルホニルウレア剤、ナテグリニド� ��レパグリニド、ミチグリニドのような速効� ��インスリン分泌促進剤、アカルボース、ボ� ��リボース、ミグリトールのようなαグルコ� �ダーゼ阻害剤、ピオグリタゾン、ロジグリ� �ゾン、トログリタゾンのようなチアゾリジ� �類、メトホルミン、ブホルミンのようなビ� �アナイド系血糖効果薬等が挙げられる。又� �高脂血症治療薬としては、例えば、プラバ� �タチン、シンバスタチン、アトルバスタチ� �、フルバスタチン、ピタバスタチン、ロス� �スタチン、セリバスタチンのようなHMG-CoA還� ��酵素阻害剤やシンフィブラート、クロフィ� ��ラート、クリノフィブラート、ベザフィブ� ��ート、フェノフィブラートのようなフィブ� ��ート系薬剤、あるいはオルリスタットのよ� ��な脂肪分解酵素阻害剤、エゼチミブが挙げ� ��れる。又、降圧剤としては、例えば、カプ� ��プリル、アラセプリル、イミダプリル、エ� ��ラプリル、シラザプリル、テモカプリル、� ��ラプリル、リシノプリル、ベナゼプリルの� ��うなアンジオテンシン変換酵素阻害剤、ロ� ��ルタン、バルサルタン、カンデサルタン、� ��ルミサルタン、オルメサルタン、イルベサ� ��タン、エプロサルタンのようなアンジオテ� ��シン受容体拮抗剤、アリスキレンのような� ��ニン阻害剤、アムロジピン、ニフェジピン� ��ベニジピン、ニカルジピン、ニルバジピン� ��シルニジピン、アゼルニジピン、マニジピ� ��、ニトレンジピン、パルニジピン、ニソル� ��ピン、エホニジピン、フェロジピン、アラ� ��ジピン、ジルチアゼム、ベラパミル、ベプ� ��ジルのようなカルシウム拮抗剤等が挙げら� ��る。又、抗酸化剤としては、例えば、ビタ� ��ンCやビタミンE等のビタミン類、Nアセチル� ��ステイン、プロブコールなどが挙げられる� ��又、抗炎症剤としては、例えば、ペントキ� ��フィリン等のサイトカイン産生抑制剤、ロ� ��コトリエン受容体拮抗剤、ロイコトリエン� ��合成阻害剤、アスピリンのようなNSAIDs、COX- 2選択的阻害剤、M2/M3拮抗剤、コルチコステロ イド、ファルネシル酸プレドニゾロンなどの ステロイド、Hi(ヒスタミン)受容体拮抗剤、� �ラゾスルファピリジン、メサラジンなどの� �ミノサリチル酸、等が挙げられる。又、免� �抑制剤としては、例えば、アザチオプリン� �6-メルカプトプリン、タクロリムスなどが挙 げられる。又、C型肝炎ウイルス(HCV)用の抗ウ イルス薬としては、例えば、インターフェロ ン、プロテアーゼ阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤 、ポリメラーゼ阻害剤などが挙げられる。

 配合剤の剤形は、特に限定されず、経口製� ��としては、例えば、錠剤、フィルムコーテ� ��ング錠、カプセル剤、マイクロカプセル剤� ��顆粒剤、細粒剤、散剤、経口用液体製剤、� ��ロップ剤、ゼリー剤の形で、非経口製剤と� ��ては、例えば、注射剤、輸液製剤、経皮吸� ��剤などの外用剤で患者に投与される。例え� ��、徐放化した製剤、あるいは、2剤を時間差 で放出する製剤なども含む。
 本発明の配合剤は、有効成分に加え、薬学� ��に許容され得る賦形剤を含むことができる� ��適宜、公知の抗酸化剤、コーティング剤、� ��ル化剤、嬌味剤、着香剤、保存剤、抗酸化� ��、乳化剤、pH調整剤、緩衝剤、着色剤など� �含有させてもよい。

 本発明の配合剤は、常法に従って製剤化� ��ることが可能である。ω3PUFAsの粉末は、例� �ば、(A)EPA-E、(B)食物繊維、(C)デンプン加水分 解物及び/または低糖化還元デンプン分解物� �及び(D)水溶性抗酸化剤を含有する水中油型� �化液を、高真空下で乾燥させ、粉砕処理す� �(特開平10-99046)など公知の方法により得られ� ��。得られたEPA-Eの粉体と、PDE4阻害薬の粉体� ��を用いて、常法に従い、顆粒剤、細粒剤、� ��剤、錠剤、フィルムコーティング錠、チュ� ��ブル錠、徐放錠、口腔内崩壊錠(OD錠)などを 得ることができる。チュアブル錠であれば、 例えば、EPA-Eをヒドロキシプロピルメチルセ� ��ロースなどの水溶性高分子溶液中に乳化し� ��得られた乳化液を乳糖などの添加剤に噴霧� ��て粉粒体を得(特開平8-157362)、PDE4阻害薬の� �体と混合して打錠することなど公知の方法� �より得ることができる。徐放錠であれば、� �えば(1)EPA-EおよびPDE4阻害薬のいずれかを内� �に、他方を外層に形成する、(2)各成分を含� �する円盤状のマトリックスを2層に重ねる、( 3)一成分を含有する粒状カプセルを他方の成� ��を含有するマトリックス中に埋め込む、(4)� ��剤を予め混合した後に何らかの徐放のため� ��工夫が施される、などが挙げられる。各有� ��成分は放出速度を調整されていることが望� ��しく、両剤同時に放出されてもよいし、別� ��に時間差で放出されてもよい。口腔内崩壊� ��であれば、例えば特開平8-333243など、口腔� �フィルム製剤であれば、例えば特開2005-21124� ��ど、公知の方法に準じて製造することがで� ��る。PDE4阻害薬の多くは単純にはω3PUFAsに溶� ��しないため、例えば、軟カプセル剤、液剤� ��どにする場合には実施例に記載の工夫が必� ��である。本発明の配合剤は、このようにω3P UFAsとPDE4阻害薬とを1剤に配合するための工夫 をしている製剤を含む。

 本発明の配合剤は、有効成分の薬理作用� ��発現できるように、放出、吸収されること� ��望ましい。本発明の配合剤は、有効成分の� ��出性に優れる、有効成分の吸収性に優れる� ��有効成分の分散性に優れる、配合剤の保存� ��定性に優れる、患者の服用利便性、あるい� ��コンプライアンスに優れる製剤の少なくと� ��いずれか1以上の効果を持つことが望ましい 。

 本発明の予防/改善または治療薬は、動物と りわけ哺乳動物のNAFLD、特にNASHの予防/改善� �たは治療、再発予防あるいは肝硬変や肝癌� �の進行抑制に有効である。哺乳動物とは、� �えば、ヒトやウシ、ウマ、ブタなどの家畜� �物やイヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス� �どの家庭用動物等があげられ、好ましくは� �トである。特に、TNFα、ILなどのアディポサ� ��トカインや高感度CRP、好中球数、繊維化マ� ��カー(IV型コラーゲン、ヒアルロン酸、TIMP-1� ��)や血中酸化ストレスマーカー(フェリチン� �チオレドキシン)が増加しているNASH患者にお いて相乗的なNASHの予防/改善または治療効果� ��示すことが期待される。また、PDE4阻害薬に よる嘔吐などの副作用を軽減することができ 、また、これらの副作用のためにPDE4阻害薬� �与を行えなかった患者や中断せざるを得な� �った患者において治療を継続することがで� �る。
 また、配合剤やキット剤とすることで患者� ��服薬の負担を軽減し、服薬コンプライアン� ��を高めることで更に予防/改善または治療効 果を高めることができる。