GERLAND, Béatrice (24 rue Guynemer, Valence, F-26600, FR)
DESIRE, Jérôme (rue du Lavoir, Tencin, F-38570, FR)
LEPOIVRE, Michel (12 Domaine du Pre Launay, Bures Sur Yvette, Bures Sur Yvette, F-91440, FR)
BALZARINI, Jan (Kapeldreef 20, Heverlee, B-3001, BE)
DECOUT, Jean-Luc (68 Chemin de Bonneterre, Belmont, Vaulnaveys le Haut, F-38410, FR)
GERLAND, Béatrice (24 rue Guynemer, Valence, F-26600, FR)
DESIRE, Jérôme (rue du Lavoir, Tencin, F-38570, FR)
LEPOIVRE, Michel (12 Domaine du Pre Launay, Bures Sur Yvette, Bures Sur Yvette, F-91440, FR)
BALZARINI, Jan (Kapeldreef 20, Heverlee, B-3001, BE)
| REVENDICATIONS
1. Composé disulfure de nucléoside répondant à la formule (I) suivante
B représente la thymine, et R est choisi parmi CH 2 -CH=CH 2 , C 4 Hc, CH 2 CH 2 OH et CH 2 CH 2 NH 2 -HCl.
2. Composition pharmaceutique comprenant, à titre de principe actif, au moins un composé choisi parmi les composés répondant à la formule (II) suivante :
B représente une base nucléotidique, naturelle ou modifiée, x est égal à O, 1 ou 2, et
Rl, R représentent un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène, et un excipient pharmaceutiquement acceptable.
3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que le composé répond à la formule (II) dans laquelle Rl est choisi parmi R3-Si(R4)(R5)(R6) où R3 représente une chaîne hydrocarbonée de deux atomes de carbone, éventuellement insaturée et/ou substituée, et R4, R5 et R6, identiques ou différents, représentent chacun, indépendamment les uns des autres, un groupement hydrocarboné.
4. Composition selon la revendication 3, caractérisée ce que R3 représente CH 2 -CH 2 et R4, R5 et R6 sont identiques et représentent CH 3 .
5. Composition selon la revendication 3 ou 4, caractérisée en ce que B est choisie parmi les bases pyrimidiques, naturelles ou modifiées. 6. Composition selon l'une quelconque des revendication 3 à 5, caractérisée en ce que l'atome S est lié au carbone en 2 " du nucléoside.
7. Composition selon l'une quelconque des revendications 3 à 6, caractérisée en ce que le composé répond à la formule (II) dans laquelle x est égal à 0.
8. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que le composé est choisi parmi les composés suivants :
2 ' ,3 ' -Didéshydro-2 ' ,3 ' -didésoxy-2 ' -(2-triméthylsilyl)éthy lthiouridine 1 2 ' ,3 ' -Didéshydro-2 ' ,3 ' -didésoxy-2 ' -(3 -méthylbutyl)thiouridine 2 2 ' ,3 ' -Didéshydro-2 ' ,3 ' -didésoxy-2 ' -(2-(triméthy lsilyl)éthylthiothymidine 3 2 ' ,3 ' -Didéshydro-2 ' ,3 ' -didésoxy-3 ' -(2-triméthylsilyl)éthylthiothymidine 4 2 ' ,3 ' -Didéshydro-2 ' ,3 ' -didésoxy-2 ' -(2-triméthy lsilyl)éthylthiocytidine 5
9. Composition selon l'une quelconque des revendications 3 à 6, caractérisée en ce que le composé répond à la formule (II) dans laquelle x est égal à 1.
10. Composition selon la revendication 9, caractérisée en ce que le composé est choisi parmi les composés suivants : Sulfoxyde de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2 * -(2-triméthylsilyl)éthyl thiothymidine 6 Sulfoxyde de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éthylthiouridine 8
11. Composition selon l'une quelconque des revendications 3 à 6, caractérisée en ce que le composé répond à la formule (II) dans laquelle x est égal à 2. 12. Composition selon la revendication 11, caractérisée en ce que le composé est la sulfone de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2- triméthylsilyl)éthyl)thiothymidine 7.
13. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que x est égal à 0 et Rl représente SR2 où R2 représente un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène.
14. Composition selon la revendication 13, caractérisé en ce que R2 est choisi parmi les groupements ortho-nitrophényle, para-nitrophényle et trichlorométhyle.
15. Composition selon la revendication 13 ou 14, caractérisée en ce que B est chosie parmi les bases pyrimidiques, naturelles ou modifiées.
16. Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 15, caractérisée en ce que l'atome S est lié au carbone en 2' du 2',3'-didéshydro-2',3'- didésoxyribose.
17. Composition selon la revendication 16, caractérisée en ce que le composé est choisi parmi :
Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxythymidin-2'-yle et de trichlorométhyle 12 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de trichlorométhyle 13 Disulfure de 2 ' ,3 ' -didéshydro-2 ' ,3 ' -didésoxythymidin-2 ' -y le et de 4-nitrophényle 14 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxythymidin-2'-yle et de 2-nitrophényle 15 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de 4-nitrophényle 16 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de 2-nitrophényle 17
18. Composition selon la revendication 2, caractérisé en ce que le composé répond à la formule (III) dans laquelle R est choisi parmi CH 2 -CH=CH 2 ,
C 4 H 9 , CH 2 CH 2 OH et CH 2 CH?NH 2 .HC1, et les groupements ortho-nitrophényle, para- nitrophényle et trichlorométhyle.
19. Composition selon la revendication 18, caractérisée en ce que B. représente une base pyrimidique, naturelle ou modifiée. 20. Composition selon la revendication 19, caractérisé en ce que le composé est choisi parmi les composés suivants :
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et d'allyle 20
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 2-hydroxyéthyle 21
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de trichlorométhyle 22 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de butyle 24
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 4-nitrophényle 25
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 2-nitrophényle 26
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et du chlorohydrate de 2-aminoéthyle 27
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et d'hexyle 31 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et d'octyle 30
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 6-hydroxyhexyle 32
Disulfure de 2',3'-didésoxycytidin-3'-yle et de méthyle 19
Disulfure de 5-bromo-2',3'-didésoxyuridin-3'-yle et de méthyle 23
21. Utilisation d'un composé choisi parmi les composés répondant à la formule (II) suivante :
B représente une base nucléotidique, naturelle ou modifiée, x est égal à 0, 1 ou 2, et
Rl, R représentent un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène,
En tant que principe actif thérapeutique.
22. Utilisation selon la revendication 21, caractérisée en ce que le composé est défini à l'une quelconque des revendications 3 à 20.
23. Utilisation d'un composé choisi parmi les composés répondant à la formule (II) suivante :
Rl, R représentent un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène, pour obtenir un médicament dans un traitement anti-cancéreux.
24. Utilisation selon la revendication 23, caractérisée en ce que le composé est tel que défini dans l'une quelconque des revendications 3 à 17.
25. Utilisation selon la revendication 23 ou 24, caractérisée en ce que ledit composé a un effet antiprolifératif et/ou un effet cytotoxique.
26. Utilisation d'un un composé choisi parmi les composés répondant à la formule (II) suivante :
B représente une base nucléotidique, naturelle ou modifiée, x est égal à 0, 1 ou 2, et
Rl, R représentent un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène, pour obtenir un médicament dans un traitement antiviral.
27. Utilisation selon la revendication 26, caractérisée en ce que le traitement antiviral est un traitement anti-VIHl ou anti-VIH2.
28. Utilisation selon la revendication 26 ou 27, caractérisé en ce que le composé est tel que défini dans l'une quelconque des revendications 18 à 20. |
THIONUCLEOSIDES ET APPLICATIONS PHARMACEUTIQUES
La présente invention concerne des thionucléosides et leurs applications pharmaceutiques.
Un objet de la présente invention consiste en une composition pharmaceutique comprenant, à titre de principe actif, au moins un composé choisi parmi : les composés répondant à la formule (II) suivante :
(H) où l'atome S est lié au carbone en 2' ou au carbone en 3' du nucléoside, et les composés répondant à la formule (III) suivante :
(III) formules dans lesquelles B représente une base nucléotidique, purique ou pyrimidique, naturelle ou modifiée, x est égal à 0, 1 ou 2, et
Rl, R représentent un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
L'invention concerne aussi l'utilisation des composés ci-dessus, ainsi que ceux plus spécifiquement décrits ci-après en tant que principe actif thérapeutique, ou médicament. Celui-ci est en particulier destiné à incorporer une composition pharmaceutique selon l'invention.
L'invention réside dans l'application d'une telle composition dans des traitements anti-viraux, notamment anti-VIHl et anti-VIH2 et dans des traitements anticancéreux.
Les composés répondant à la formule (II) sont avantageusement des composés répondant aux caractéristiques ci-après, celles-ci étant considérées seules ou en combinaison les unes avec les autres.
Rl est choisi parmi R3-Si(R4)(R5)(R6) où R3 représente une chaîne hydrocarbonée de deux atomes de carbone, éventuellement insaturée et/ou substituée, et R4, R5 et R6, identiques ou différents, représentent chacun, indépendamment les uns des autres, un groupement hydrocarboné ; de préférence, R3 y représente CH 2 -CH 2 et
R4, R5 et R6 sont identiques et représentent CH 3 ,
B est une base nucléotidique choisie parmi les bases pyrimidiques, naturelles ou modifiées ; l'homme du métier a à sa disposition dans la littérature des bases modifiées qu'il sait obtenir et utiliser, en particulier, comme analogues de bases naturelles (à titre d'exemple, il peut se reporter à l'ouvrage Frontiers in Nucleosides and Nucleic Acids Editeurs R. F. Schinazi, D. C. Liotta, IHL Press, 2004, p. 3-55); la 5- bromo-uracile en est un exemple.
Des composés préférentiels selon l'invention répondent à toutes les caractéristiques ci-dessus, en outre l'atome S est lié au carbone en 2' du nucléoside et x est égal à 0. De tels composés sont notamment choisis parmi les composés suivants : 2 ' ,3 ' -Didéshydro-2 ' ,3 ' -didésoxy-2 ' -(2-triméthylsilyl)éthylthiouridine 1 2 ' ,3 ' -Didéshydro-2 ' ,3 ' -didésoxy-2 ' -(2-(triméthylsilyl)éthylthiothymidine 3 2 \3 ' -Didéshydro-2 ' ,3 ' -didésoxy-2 ' -(2-triméthylsilyl)éthylthiocytidine 5
D'autres composés d'intérêt selon l'invention répondent à toutes les caractéristiques ci-dessus, en outre l'atome S est lié au carbone en 3' du nucléoside et x est égal à 0. Le composé 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-3'-(2- triméthylsilyl)éthylthiothymidine 4 en est un exemple préféré.
D'autres composés préférentiels de l'invention répondent à toutes les caractéristiques ci-dessus, en outre l'atome S est lié au carbone en 2' du nucléoside et x est égal à 1. De tels composés sont notamment choisis parmi les composés suivants : Sulfoxyde de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl) éthylthiothymidine 6
Sulfoxyde de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éth ylthiouridine 8.
Encore d'autres composés avantageux de l'invention répondent à toutes les caractéristiques ci-dessus, en outre l'atome S est lié au carbone en 2' du nucléoside
et x est égal à 2. Un composé préféré est la sulfone de la 2',3'-didéshydro-2',3'- didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éthyithiothymidine 7.
D ' autres composés d'intérêt selon l ' invention sont des composés de formule (II) non silylés où l'atome de S est lié au carbone en T du nucléoside, x est égal à 0 et Rl représente un groupement alkyle. Ils sont illustrés par les composés suivants : la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(3-méthylbutyl)thiouri dine 2, et la
2 ' ,3 ' -didéshydro-2 ' ,3 ' -didésoxy-2 " -méthylthiouridine 31.
La structure des composés identifiés par un chiffre ou un nombre est représentée à la fin de la description et leurs propriétés sont illustrées dans les exemples qui suivront.
D'autres composés répondant à la formule (II) sont avantageusement des composés répondant aux caractéristiques ci-après, celles-ci étant considérées seules ou en combinaison les unes avec les autres. x est égal à 0 et Rl représente SR2 où R2 représente un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène ; il est avantageusement choisi parmi les groupements ortho-nitrophényle, para-nitrophényle et trichlorométhyle. B est une base nucléotidique choisie parmi les bases pyrimidiques, naturelles ou modifiées, telles que définies ci-dessus.
Lorsque l'atome S est lié au carbone en 2' du nucléoside, les composés privilégiés sont choisis parmi :
Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxythymidin-2'-yle et de trichlorométhyle 12 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de trichlorométhyle 13 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxythymidin-2'-yle et de 4-nitrophényle 14 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxythymidin-2'-yle et de 2-nitrophényle 15 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de 4-nitrophényle 16 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de 2-nitrophényle 17 Les composés répondant à la formule (II) ci-dessus présentent un effet antiprolifératif et/ou un effet cytotoxique, et peuvent être destiné au traitement d'un cancer. Ainsi, selon l'invention, on les utilisera avantageusement pour l'obtention d'un médicament dans un traitement anticancéreux.
Les composés de l'invention répondant à la formule (III) sont avantageusement des composés répondant aux caractéristiques ci-après, celles-ci étant considérées seules ou en combinaison les unes avec les autres.
B représente une base pyrimidique, naturelle ou modifiée, telle que définie ci-dessus.
R est de préférence choisi parmi CH 2 -CH=CH 2 , les groupements alkyles, par exemple CH 3 , C4H 9 , C 8 Hi 7 , les groupements hydroxyalkyles, par exemple CH 2 CH 2 OH, C 6 HHi 2 OH, CH 2 CH 2 NH 2 -HCl, et les groupements ortho-nitrophényle, para-nitrophényle et trichlorométhyle.
Ainsi, un tel composé peut être choisi parmi les composés suivants :
Disulfure de 2',3'-didésoxycytidin-3'-yle et de méthyle 19
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et d'allyle 20 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 2-hydroxyéthyle 21
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de trichlorométhyle 22
Disulfure de 5-bromo-2',3'-didésoxyuridin-3'-yle et de méthyle 23
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de butyle 24
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 4-nitrophényle 25 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 2-nitrophényle 26
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et du chlorohydrate de 2-aminoéthyle 27
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et d'octyle 28
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et d'hexyle 29
Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 6-hydroxyhexyle 30 Les composés répondant à la formule (III) ci-dessus présentent une application dans le traitement d'une infection virale, en particulier d'une infection par le VIHl ou le VIH2. Selon l'invention, on les utilisera avantageusement pour l'obtention d'un médicament dans un traitement antiviral, comme un traitement anti-
VIHl ou anti-VIH2. L'invention concerne aussi de nouveaux composés disulfure de nucléoside répondant à la formule (I) suivante :
(D dans laquelle :
B représente la thymine et R est choisi parmi CH 2 -CH=CH 2 , C 4 Hg, CH 2 CH 2 OH et CH 2 CH 2 NH 2 -HCl.
Sont aussi décrits des composés disulfure de formule (I) ci-dessus dans laquelle B est une base nucléotidique choisie parmi l'uracile, la cytosine et la 5- bromouracile et R représente CH 3 .
Certains de ces composés sont décrits à la fin de la description sous les références 19, 20, 21, 23 24, 27.
L'invention concerne aussi un procédé de préparation d'un composé répondant à la formule (IV) suivante :
Le schéma de synthèse de ce procédé selon l'invention qui illustré dans la partie expérimentale de la description est ci-après exposé, avec Rl représentant CH 2 CH 2 Si(CHb) 3 :
Un autre objet de l'invention est un procédé de synthèse généralisé à l'obtention de composés disulfure tels que des acides aminés soufrés, selon le schéma de synthèse ci-après et illustré dans la partie expérimentale de la description.
L'invention est ci-après décrite plus en détail avec des exemples illustrant les procédés de synthèse qui peuvent mis en œuvre par l'homme du métier pour obtenir les composés ci-dessus, ainsi que les propriétés pharmaceutiques de ceux-ci.
I- Procédé d'obtention des composés de l'invention
Les composés sulfure silylés saturés servant de réactifs de départ dans les synthèses suivantes et dont la préparation n'est pas décrite peuvent être obtenus à partir de procédés connus de l'homme du métier (C. Chambert et al. J. Org . Chem. 2000, 65, 249 ; Stamm, J. Org. Chem, 1963, 3264 ; Mahadevan et al. Synth. Commun. 1994, 3099 ; C. Chambert et al. J. Org . Chem. 2002, 67, 1898-1904)
2',3'-didésoxy-2'-(3-méthylbutyl)thio uridine 2
A une solution de 2'-désoxy-2'-(3-méthyl butyl) thiouridine 33 (0,5 g ; 1,51 mmol) dans la pyridine anhydre (20 mL), maintenue à 0°C sous argon, est ajouté le chlorure de diméthoxytrityle (1,023 g ; 3 mmol) et le 4-(dimethylamino)pyridine
DMAP (18,3 mg ; 0,15 mmol). Le mélange est laissé sous agitation pendant 15 minutes, puis il est laissé revenir à température ambiante, et agité pendant 5h. Les solvants sont ensuite évaporés et coévaporés au toluène. Le résidu obtenu est repris dans un mélange de dichlorométhane-méthanol-triéthylamine 2%, pour être chromatographié sur gel de silice avec un mélange de dichlorométhane-méthanol 98/2- triéthylamine 2%.
Le produit tritylé obtenu est dissous dans la pyridine anhydre (7 mL) à 0 0 C, sous argon pendant 15 minutes. Puis on ajoute le chlorure de mésyle (0 ,15 mL ; 1,92 mmol) et le mélange est laissé sous agitation pendant 15 h. On neutralise par addition d'eau (5 mL) à 0°C et on laisse sous agitation pendant 30 minutes. On évapore et coévapore les solvants au toluène.
Le composé tritylé-mésylé est traité avec de l'acide dichloroacétique DCA 2% dans le dichlorométhane (25 mL) pendant 15 minutes. Le mélange réactionnel est neutralisé par addition de NaHCO 3 5% (300 mL) et le résidu est lavé au dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont séchées sur sulfate de sodium puis concentrées pour donner le produit mésylé détritylé (0,245 g ; 0,6 mmol ; 40%).
Ce produit est ensuite dissous dans l'acétonitrile (1,5 mL) sous argon pendant 15 minutes, puis le K 2 CO 3 (0,06 g ; 0,43 mmol) est ajouté. Le mélange réactionnel est laissé sous agitation pendant 19 h à 60°C. Ensuite, on filtre pour éliminer les sels minéraux en rinçant avec du méthanol. On évapore à sec et le produit obtenu est chromatographié sur gel de silice dans un mélange de dichlorométhane-méthanol (95 : 5). La 2 '-3' didésoxy-2'-(3-méthylbutyl) thiouridine 2 est ainsi obtenue sous la forme des cristaux blancs (0,082 g ; 0,26 mmol, 76,5%).
F : 131-133°C
RMN 1 H (200 MHz, CDCl 3 ) δ 8,76 (1 H, s, 3-H) ; 7,58 (1 H, d, J = 8,1 Hz, 6-
H) ; 6,9 (1 H, dd, J = 1,5 Hz, J = 3,2 Hz, F-H) ; 5,81 (1 H, t, J= 1,6 Hz, 3'-H) ; 5,68 (1 H, d, J = 8,1 Hz, 5-H) ; 4,95 (1 H, m, 4'-H) ; 3,91 (1 H, dd, J = 2,6 Hz, J = 12,6 Hz, 5'- H) ; 3,73 (IH, dd, J = 3,2 Hz, J = 12,52 Hz, 5'-H) ; 2,81 (2 H, m, S-CH 2 ) ; 1,73 (1 H, m, CH-(CH 3 ) 2 ) ; 1,55 (2 H, m, (CH 2 -CH)) ; 0,93 (6 H, d, J = 6,4 Hz, (CH 3 -CH)).
RMN 13 C (50 MHz, CDCl 3 ) δ 163,27 (CO) ; 150,64 (CO) ; 141,0 ; 134,9 ; 123,68 ; 102,67 ; 90,33 ; 87,37 ; 63,54 (5'-CH 2 ) ;37,23 (S-CH 2 ) ; 30,46 (CH 2 -CH) ; 27,5 ; 22,18 ((CH 3 ) 2 ). SM (F AB+, glycérol) m/z 313 [M+H] +
Sulfoxyde de la 2\3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthyIsilyl)éthy l thiothymidine 6
Ce composé est préparé à partir de la 2'-désoxy-2'-(2- (triméthylsilyl)éthyl)thiothymidine 37 dont la synthèse est ci-après décrite :
A une suspension de 2,2'-anhydrothymidine (5 g ; 22 mmol) et de carbonate de potassium anhydre (11 g ; 79 mmol) dans le DMF (1 10 mL) est ajouté le 2-
(triméthylsilyl)éthanethiol (3,5 g ; 26 mmol). La solution est laissée sous agitation et sous argon à 120 0 C pendant 3 h. Après filtration et rinçage des sels minéraux avec du dichlorométhane, les solvants sont évaporés sous pression réduite pour donner une
huile jaune. Ce résidu est chromatographié sur gel de silice dans un mélange dichlorométhane-méthanol (95 : 5). Le sulfure 37 est obtenu sous la forme d'un solide blanc (6,9 g ; 19 mmol ; 88 %).
F : 58-6O 0 C
RMN 1 H (400 MHz, CDCl 3 ) δ 8,73 (IH, s, NH) ; 7,25 (1 H, d, J = 8,0 Hz, 6-H) ; 5,46 (1 H, d, J = 9,2 Hz, l'-H) ; 4,36 (1 H, m, 3'-H) ; 4,24 (1 H, m, 4'-H) ; 3,99 (2 H, m, 2'H +5'- H) ; 3,81 (1 H, m, 5'-H) ; 2,60 (2 H, m, S-CH 2 ) ; 1,96 (3 H. s, 5-CH3) ; 0,85 (2 H, m, CH 2 Si) ; -0,02 (9 H, s, Si(CH 3 ) 3 ). RMN 13 C (100 MHz, CDCl 3 ) δ 163,4 (C2) ; 150,5 (C4) ; 138,87 (C6) ; 1 1 1,4 (C5) ; 93,3 (Cl ') ; 86.6 (C4') ; 71,5 (C3') ; 63,1 (5 ' -CH 2 ) ; 52,8 (C2') ; 28,4 (S-CH 2 ) ; 18,1 (CH 2 -
Si) ; 12,4 (CH 3 ) ; -1,8 (Si(CH 3 ) 3 ).
SM (DCI, NH 3 -isobutane) m/z 375 [M+H] + , 392 [M+H+NH 3 ] + .
A une solution de 2'-désoxy-2'-(2-(triméthylsilyl)éthyl)thiothymidine 37 (0,05 g, 0,14 mmol), dans le méthanol (5 mL) est ajouté le sel de tétrabutylammonium de l ' oxone (100 mg,0,56 mmol) par portion de 25 mg (0,5 équivalent) toutes les 30 min (analyses par CCM). Le mélange est laissé sous agitation pendant 15 heures puis est ensuite évaporé à sec et est chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane-méthanol (95 : 5). Le sulfoxyde insaturé 6 est ainsi obtenu sous la forme d'une poudre blanche (30 mg ; 0,008 mmol, 58%).
RMN 1 H (400 MHz, CDCl 3 ) δ 8,69 (IH, s, NH) ; 7,89 (1 H, s, 6-H) ; 6,90 (1 H, m, 1 '-
H) ; 6,89 (1 H, m, 3 ' -H) ; 5,11 (1 H, m, 4'-H) ; 3,99 (2 H, m, 5'-H><2 ) ; 3,07-2,76 (2 H, m, S-CH 2 ) ; 1,88 (3 H, s,5-CH 3 ) ; 1,10-0,94 (2 H, m, CH 2 Si) ; 0,02 (9 H, s, Si(CH 3 ) 3 ).
RMN 13 C (100 MHz, CDCl 3 ) δ 163,7 (C2) ; 150,5 (C4) ; 140,1 (C2') ; 137,8 (C3') ;
135,8 (C6) ; 1 1 1,7 (C5) ; 87,6 (Cl '+ C4') ; 62,9 (5'-CH 2 ) ; 48,1 (S-CH 2 ) ; 12,4
(CH 3 ) ;6,7 (CH 2 -Si) ; -1,9 (Si(CH 3 ) 3 ).
SM (DCI, NH 3 -isobutane) : m/z 373 [M+H] + .
Sulfone de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éth yl thiothymidine 7
A une solution de 2'-désoxy-2'-(2-(triméthylsilyl)éthyl)thiothymidine 37 (0,02 g, 0,06 mmol), dans le dichlorométhane anhydre (1 mL) est ajouté l'acide méta- chloroperbenzoïque mCPBA (15 mg, 0,09 mmol). Le mélange est laissé sous agitation et sous argon pendant 15 heures puis est ensuite évaporé à sec et est chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane-méthanol (95 : 5). La sulfone insaturée 7 est ainsi obtenu sous la forme d'une poudre blanche (15 mg ; 0,004 mmol, 68%).
F : 78-80 0 C
RMN 1 H (400 MHz, CDCl 3 ) δ 7,60 (1 H, s, 6-H) ; 7,18 (1 H, m, l '-H) ; 6,18 (1 H, m,
3'-H) ; 5,08 (1 H, m, 4'-H) ; 3,97 (2 H, m, 5'-H χ 2 ) ; 3,03 (2 H, m, S-CH 2 ) ; 1,88 (3H, s,5-CH 3 ) ;0,98-0,87 (2 H, m, CH 2 Si) ; 0,02 (9 H, s, Si(CH 3 ) 3 ).
RMN 13 C (100 MHz, CDCl 3 ) δ 162,5 (C2) ; 150,9 (C4) ; 145,5 (C2') ; 138,8 (C3') ;
135,8 (C6) ; 1 10,5 (C5) ; 91,4 (Cl ') ; 85,8 (C4') ; 62,8 (5'-CH 2 ) ; 50,9 (S-CH 2 ) ; 13,1
(CH 3 ) ;8,5 (CH 2 -Si) ; -2,1 (Si(CHj) 3 ).
SM (DCI, NH 3 -isobutane) : m/z 389 [M+H] + .
Sulfoxyde de la 2%3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyI)éthy I thiouridine 8
Ce composé est préparé à partir de la 2'-désoxy-2'-(2- (triméthylsilyl)éthyl)thiouridine 37.
A une solution de 2'-désoxy-2 ' -(2-(triméthylsilyl)éthyl)thiouridine 37 (0,1 g. 0,29 mmol), dans le méthanol (5 mL) est ajouté le sel de tétrabutylammonium de l'oxone (208 mg, 0,58 mmol) par portions de 52 mg (0,5 équivalent) toutes les 30 min (analyses par CCM). Le mélange est laissé sous agitation pendant 15 heures puis est ensuite évaporé à sec et est chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane-méthanol (95 : 5). Le sulfoxyde insaturé 8 est ainsi obtenu sous la forme d'une poudre blanche (70 mg ; 0,019 mmol, 64%).
RMN 1 H (400 MHz, CDCl 3 ) δ 8,19 (1 H, d, J = 8,0 Hz, 6-H) ; 6,87 (1 H, m, 3'-H) ; 6,83 (1 H, m, l'-H) ; 5,77 (1 H, d, J = 8,0 Hz, 5-H) ; 5,12 (1 H, m, 4'-H) ; 3,97 (2 H, m,
5'-H χ 2 ) ; 3,07-2,84 (2 H, m, S-CH 2 ) ; 1,05-077 (2 H, m, CH 2 Si) ; 0,08 (9 H, s,
RMN 13 C (100 MHz, CDCl 3 ) δ 163,5 (C2) ; 150,5 (C4) ; 143,9 (C6) ; 140,4 (CT) ;
103,9 (C3') ; 103,0 (C5) ; 87,9 (Cl ') ; 87,7 (C4') ; 62,7 (5'-CH 2 ) ; 53,4 (S-CH 2 ) ; 6,6 (CH 2 -Si) ; -1,9 (Si(CH 3 ) 3 ).
SM (DCI, NH 3 -isobutane) : m/z 352 [M+H] + .
Disulfure de méthyle 19
A une solution de 2',3'-didésoxy-3'-(2-triméthylsilyl)éthylthiocytidine (0,05 g ; 0,014 mmol) et de disulfure de méthyle (320 μL ; 3,55 mmol) dans le THF anhydre (2 mL) est ajouté le tétrafluoroborate de diméthyl(thiométhyl)sulfonium (36 mg ; 0,023 mmol). Le mélange est laissé 48 h sous agitation et sous argon, puis une solution de bicarbonate de sodium (10% ; 100 μL) est ajoutée. Après évaporation à sec, le résidu obtenu est dissous dans le minimum d'eau pour être chromatographié sur une cartouche C 18 (1 g) avec un mélange eau-méthanol (9 : 1) puis après évaporation à sec est repris dans le minimum d'éluant pour être chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane (90 : 10) et donner le disulfure méthyle 19 (37 mg ; 0,128 mmol ; 92%) sous la forme d'un mousse blanche.
RMN 1 H (400 MHz, MeOD) δ 8,17 (1 H, d, J = 7,6 Hz, 6-H) ; 6,15 (1 H, dd, J =6,8 Hz, J = 4 Hz, V-K) ; 5,92 (1 H, d, J = 7,6 Hz, 5-H) ; 4,03 (1 H, m, 4'-H) ; 3,95-3,82 (2
H, m, 5'-H x 2) ; 3,53 (1 H, m, 3'-H) ; 2,67 (1 H, m, T-H ) ; 2,42 (1 H, m, 2'-H) ; 2,48 (3 H, s, CH 3 -S).
RMN 13 C (100 MHz, MeOD) δ 163,4 (C4) ; 150,2 (C2) ; 143,7 (C6) ; 96,4 (C5) ; 88,0 (Cl ') ; 87,9 (C4') ; 62,5 (5'-CH2) ; 46,8 (C3') ; 40,9 (2--CH 2 ) ; 25,3 (S-CH 3 ). SM (F AB+, glycérol) m/z = 290 [M+H] + ; 312 [M+Na] + .
Disulfure de et de méthyle 23
Ce composé est préparé à partir de la2',3'-Didésoxy-3 '-(2-
(triméthylsilyl)éthyl)thiouridine 38 dont la synthèse est décrite ci-dessous.
38 A une suspension d'hydrure de sodium (60% ; 234 mg ; 7,02 mmol) dans le
DMF anhydre (8 mL) est ajouté une solution de 2-(triméthylsilyl)éthanethiol (980 μL ; 7,02 mmol) dans le DMF (8 mL). Ce mélange est laissé sous agitation et sous argon pendant 15 min, puis le dérivé 51 (3 g ; 5,85 mmol) est ajouté. Après 24 h sous argon à 9O 0 C, l'hydrure de sodium non réagi est neutralisé par 3 mL de méthanol et les solvants sont évaporés sous pression réduite. Le résidu est ensuite repris dans le dichlorométhane (100 mL) et la solution est neutralisée avec une solution de NaH 2 PO 4 (10% ; 10 mL), lavée à l'eau (100 mL) et séchée sur sulfate de sodium avant d'être évaporée à sec. Le résidu est repris dans le dichlorométhane pour être chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane-acétate d'éthyle (8 : 2) contenant 1% de triéthylamine et donner le sulfure sous la forme d'une mousse jaune.
La mousse jaune pâle obtenue est dissoute dans une solution d'acide dichloroacétique dans le dichlorométhane (2% ; 80 mL). La solution orange obtenue est laissée sous agitation et sous argon pendant 4 heures avant d'être neutralisée par une solution de bicarbonate de sodium (5% ; 30 mL). La phase aqueuse est extraite au
dichlorométhane (50 mL) et les phases organiques sont rassemblées pour être séchées sur sulfate de sodium avant d'être évaporées à sec. Le résidu est repris dans le dichlorométhane pour être chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane-acétate d'éthyle (6 : 4) et donner le sulfure 38 (1,06 g ; 3,08 mmol ; 56% (2 étapes)) sous la forme d'un solide blanc.
F : 148 0 C
RMN 1 H (400 MHz, CDCl 3 ) δ 9,47 (1 H, s, NH) ; 7,82 (IH, d, J = 8,4 Hz, 6-H) ; 6,12 (1 H, dd, J = 7,0 Hz, J = 3,6 Hz, l '-H) ; 5,73 (IH, d, J = 8,4 Hz, 5-H) ; 4,05 (1 H, m, 3'- H) ; 3,85 (2 H, m, 5'-H x 2 ) ; 3,47 (1 H, m, 4'-H) ; 2,64-2,50 (4 H, m, 2'-H x 2, S- CH 2 ) ; 0,84 (2 H, m, CH 2 -Si) ; -0,02 (9 H, s, Si(CH 3 ) 3 ).
RMN 13 C (100 MHz, CDCl 3 ) δ 163,9 (CO) ; 150,4 (CO) ; 140,9 ; 101,9 ; 86,2 ; 85,7 ; 61,0 (5'-CH 2 ) ; 40,7 ; 40,1 (2'-CH 2 ) ; 27,5 (S-CH 2 ) ; 17,4 (CH 2 -Si) ; -1,8 (Si(CH 3 ) 3 ).
SM (F AB+, glycérol) m/z = 345 [M+H] + . Microanalyse pour C 14 H 24 N 2 O 4 SSi, 0,33 H 2 O:
Calculée C 47,97 ; H 7,09 ; N 7,99 ; S 9,15. Trouvée C 47,82 ; H 7,13 ; N 7,79 ; S 9,66.
A une solution de nucléoside silylé 38 (0,150 g ; 0,44 mmol) dans le dichlorométhane anhydre (4 mL) est ajoutée le bromure de cyanogène (0,230 mg ; 2,17 mmol). Le mélange est laissé sous agitation et sous argon pendant 96 h à 40°C. Le disulfure symétrique apparaît progressivement sous la forme d'un précipité beige tandis que le second produit reste en solution. Après hydrolyse par une solution de tampon phosphate (0,5 M ; pH 7 ; 2 mL) pendant 30 min, les solvants sont évaporés à sec. Le résidu obtenu est repris dans le minimum de dichlorométhane pour être chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane-méthanol (98 : 2 puis 95 : 5). Un disulfure symétrique est obtenu sous la forme d'une poudre blanche
(27 mg ; 0,04 mmol ; 21%), et le dérivé bromosilylé 39 recherché, ci-dessous est obtenu sous la forme d'une poudre blanche (42 mg, 0,1 mmol, 25%).
Dérivé bromosylilé 39
RMN 1 H (400 MHz, CDCl 3 ) δ 8,41 (IH, s, 6-H) ; 6,09 (1 H, dd, J = 6,7 Hz, J = 3,2 Hz, l '-H) ; 4,14 (IH, s, 5--H) ; 4,93 (2 H, m, 4'-H et 5'-H) ; 3,95 (1 H, m, 3'-H) ; 2,66 (2 H, m, S-CH 2 ) ; 2,60-2,44 (2 H, m, 2'-H x2) ; 1,28 (IH, t, 5'-OH) ; 0,88 (2 H, m, CH 2 - Si) ; -0,02 (9 H, s, Si(CH 3 ) 3 ).
RMN 13 C (100 MHz, CDCl 3 ) δ 158,8 (C2) ; 149,3 (C4) ; 140,4 (C6) ; 96,1 (C5) ; 86,3 (Cl ') ; 86,2 (C4 1 ) ; 60,8 (5'-CH 2 ) ; 41,2 (2'-CH 2 ) ; 39,6 (C3') ; 27,6 (S-CH 2 ) ; 17,5 (CH 2 - Si) ; -l ,5 (Si(CH 3 ) 3 ). SM (F AB+, NBA) m/z = 423 [M+H] + .
A une solution de 5-bromo-2',3'-didésoxy-3'-(2-triméthylsilyl)éthylthiourid ine, 39 (0,02 g ; 0,005 mmol) et de disulfure de méthyle (170 μL ; 1,90 mmol) dans le THF anhydre (500 μL) est ajouté le tétrafluoroborate de diméthyl(thiométhyl)sulfonium (22 mg ; 0,014 mmol). Le mélange est laissé 24 h sous agitation et sous argon, puis une solution de bicarbonate de sodium (10% ; 100 μL) est ajoutée. Après évaporation à sec, le résidu obtenu est dissous dans le minimum d'eau pour être chromatographié sur une cartouche Cl 8 (1 g) avec un mélange eau-méthanol (9 : 1) puis après évaporation à sec est repris dans le minimum d'éluant pour être chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane (95 : 5) et donner le disulfure méthylé 23 (1 1 mg, 0,003 mmol, 65 %) sous la forme d'un mousse blanche.
RMN 1 H (400 MHz, MeOD) δ 8,67 (1 H, s, 6-H) ; 6,1 1 (1 H, dd, J = 6,8 Hz, J = 3,5 Hz, l '-H) ; 4,01 (2 H, m, 4'-H et 5'-H) ; 3,84 (1 H, m, 5'-H) ; 3,62 (1 H, m, 3'-H) ; 2,64-2,52 (2 H, m, 2'-H x 2) ; 2,48 (3H, s, S-CH 3 ).
RMN 13 C (100 MHz, MeOD) δ 160,3 (C2) ; 150,1 (C4) ; 140,7 (C6) ; 95,2 (C5) ; 86,0 (C4') ; 85,3 (Cl ') ; 59,7 (5'-CH 2 ) ; 44,1 (C3') ; 39,5 (2'-CH 2 ) ; 23,2 (S-CH 3 ). SM (DCI, NH 3 -isobutane): m/z 369 [M+H] + .
2'-Désoxy-2'-(3-méthylbutyl)thio uridine 33
A une suspension de 2,2'-anhydrouridine (0,5 g ; 2,2 mmol) et de carbonate de potassium anhydre (1,1 g ; 7,9 mmol) dans le diméthylformamide DMF (11 mL) est
5 ajouté le 3-méthylbutanethiol (0,271 g ; 2,6 mmol). La solution est laissée sous agitation et sous argon à 120°C pendant 5 h. Après filtration et rinçage des sels minéraux au dichlorométhane, les solvants sont évaporés sous pression réduite pour donner une huile jaune. Ce résidu est repris dans le dichlorométhane-méthanol (98 : 2) pour être chromatographié sur gel de silice dans un mélange dichlorométhane-méthanol
10 (95 : 5). Le sulfure 33 est obtenu sous la forme d'un solide blanc (0,387 g ; 1,17 mmol ;
%).
F : 66-67°C
RMN 1 H (200 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1 1,33 (1 H, s, 3-H) ; 7,86 (1 H, d, J = 8,1 Hz, 6-H) ; 15 6,0 (1 H, d, J = 8,8 Hz, V-K) ; 5,69 (1 H, d, J= 8,1 Hz, 5-H) ; 5,56 (1 H, d, J= 5,3 Hz 3'-OH) ; 5,06 (1 H, t, J= 5,1 Hz, 5'-OH) ; 4,17 (1 H, m, 3'-H) ; 3,86 (1 H, m, 4 'H) ; 3,55 (2 H, m, 5'-H) ; 3,4 (1 H, dd, J = 5,2 Hz, J = 8,75 Hz, 2'-H) ; 2,4 (2 H, m, S-CH 2 ) ; 1,55 (1 H, m, CH-(CH 3 ) 2 ) ; 1,3 (2 H, m, (CH 2 -CH)) ; 0,7 (6 H, m, (CH 2 -CH)).
RMN 13 C (50 MHz, DMSO-d 6 ) δ 162,74 (CO) ; 150,6 (CO) ; 140,3 ; 102,3 ; 87,67 ; 20 86,5 ; 72,08 ; 61,35 (5'-CH 2 ) ; 51,7 ; 38,5 (S-CH 2 ) ; 28,4 (CH 2 -CH) ; 26,7 ; 21,9
((CH j ) 2 ).
SM (F AB+, glycérol) m/z 331 [M+H] + , 219 [M-uracile] +
IE-5 Propriétés des composés de l'invention
Les propriétés biologiques des composés de l'invention et les applications pharmaceutiques qui en résultent sont ci-après exposées.
Ces propriétés ont été mises en évidence dans des essais où ils ont manifesté un effet antiprolifératif et un effet cytotoxique pour une utilisation dans un traitement 30 anticancéreux ainsi que dans des essais où ils ont manifesté un effet antiviral.
Propriétés dans une application anticancéreuse
1. Description des essais
1.1 Effets antiprolifératifs
Les composés testés sont soumis à deux essais, un premier essai de mesure de leur influence sur la ribonucléotide réductase et un second essai de mesure de leur influence de l'incorporation de la thymidine tritiée.
1.1.1. Mesure des concentrations intracellulaires en 2'-désoxyribonucléotides (dNTP)
Le protocole suivi pour effectuer ce test (Roy, B.; Beuneu, C; Roux, P.; Bue, H.; Lemaire, G.; Lepoivre, M. Simultaneous détermination of pyrimidine or purine deoxyribonucleoside triphosphates using a polymerase assay. Anal. Biochem. 1999, 269, 403-409) consiste à cultiver des cellules humaines de lymphome T CEM-SS en présence des composés testés. Les concentrations en dNTP et en particulier de dATP sont mesurées après 24 h d'incubation. Le dATP est le nucléoside triphosphate dont la concentration diminue le plus lors de tests avec les inhibiteurs classiques de ribonucléotide réductase tel que Phydroxyurée qui a été utilisée comme témoin. La quantification est rapportée au nombre de cellules vivantes dénombrées après coloration au bleu de trypan ou rapporté au nombre de cellules initial (environ 2 millions). Elle est mesurée en % par rapport à une manipulation témoin.
1.1.2. Tests d'incorporation de Ia thymidine tritiée Ces tests sont réalisés sur la lignée cellulaire L1210 (lymphome de souris) selon un protocole publié (Lepoivre M., Flaman J.-M., Bobé P., Lemaire G., Henry Y. J Biol Chem. 1994, 269, 21891-21897). Les puits sont ensemencés (10 000 cellules par puits) et après 72 h de culture, la [η]thymidine ainsi que le composé testé sont ajoutés au milieu de culture. Après 8 heures d'incubation, l'ADN est séparé des autres constituants cellulaires et la quantité de thymidine marquée incorporée est quantifiée et comparée à un témoin (sans composé).
1.2. Effets cytotoxiques
L'effet cyto toxique d'un composé est étudié sur des cellules humaines CEM et de carcinome mammaire MCF-7 résistantes ou non à la gemeitabine qui est un nucléoside anticancéreux utilisé en chimiothérapie.
La cytotoxicité (CC 50 ) a été estimée en mesurant la réduction du bromure de 3-
(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltétrazolium (MTT) qui est converti en formazan violet insoluble. Pour cela, 100.000 cellules (lignées CEM-SS ou MCF-7 humaines) sont ensemencées par puits dans 100 μl de milieu de culture, dans des plaques de microtitration à 96 puits. Après 24h, les produits à tester sont ajoutés dans 100 μl et l'incubation est poursuivie 48 à 72h. Puis le MTT est ajouté à raison de 20 μl d'une solution à 5mg/ml dans du PBS. Trois heures plus tard, 100 ul d'une solution de
DMF/acide acétique/HCl/SDS (dodécyl sulfate de sodium) sont ajoutés. Après 3h à
37°C, l'absorbance du formazan est mesurée à 590 nm et comparée à celle du témoin non traité.
2. Résultats des essais
2.1. Effets antiprolifératifs
2.1.1 Mesure des concentrations intracellulaires en 2'-désoxyribonucléotides (dNTP)
Le nucléoside 1 a été testé dans les conditions suivantes.
Les effets du composé 1 à 50 μM sur les concentrations en T- désoxynucléosides 5'-triphosphates (dNTP) nécessaires à la synthèse de l'ADN sont calculés à partir des concentrations en dNTP mesurées après 24h et déterminées en pmol de dNTP/million de cellules. Les pourcentages sont exprimés en % du contrôle avec une moyenne de 4 témoins en tenant compte des numérations et sont comparés à celui d'un agent anticancéreux, l'hydroxyurée (HU), testé à une concentration de 63 μM.
Comme l'indique le tableau 1 ci-dessous, le composé 1 s'est avéré antiprolifératif sur cellules de lymphome T CEM/SS en faisant décroître fortement les concentrations en nucléosides triphosphates nécessaires à la synthèse de l'ADN.
Tableau 1
2.1.2. Décroissance de l'incorporation de thymidine tritiée dans des cellules L1210 en % du contrôle
Les effets du composé 1 à respectivement 50 μM et 200 μM sur les concentrations en thymidine tritiée incorporée sont exprimés en % du contrôle Les résultats sont présentés dans le tableau 2.
Tableau 2
Une inhibition (diminution de 38 et 86% pour les concentrations respectivement de 50μM et 200 μM) de l'incorporation de thymidine tritiée dans l'ADN est observée en présence du dérivé 1 ce qui signifie qu'il inhibe cette synthèse et donc agit sur la prolifération cellulaire.
2.2 Effets cytotoxiques
2.2.1 Composés de formule (II) où Rl représente CH 2 CH 2 Si(CH 3 ) 3
Les composés 1 et 3 à 8 répondant à la formule (II) ci-dessus ; le composé 2 correspondant au composé non silylé, il répond à la formule (II) ci-dessus où Rl représente CH 2 CH 2 CH(CH 3 ) 2 et a également été testé pour observer une influence éventuelle du silicium. Ces composés ont été évalués pour leur cytotoxicité sur cellules humaines CEM et cellules de carcinome mammaire MCF-7 résistantes (MCF-7*) ou
non (MCF-7) à la gemcitabine qui est un nucléoside anticancéreux utilisé en chimiothérapie.
Les résultats sont présentés dans le tableau 3 ci-dessous :
Tableau 3
2.2.2 Composés disulfure de formule (II) où x est nul et Rl représente SR2 Les composés disulfure insaturés 11, 12 et 13 répondant à la formule ci-dessus ont manifesté une cytoxicité sur des lignées cellulaires humaines CEM et des lignées cellulaires de carcinome mammaire MCF-7, comme le montrent les résultats dans le tableau 4 ci-dessous :
Tableau 4
Les composés disulfure insaturés 14, 15, 16 et 17 répondant à la formule (II) ci- dessus ont manifesté un effet cytotoxique sur lymphocytes humains T4 CEM et cellules
humaines Molt4/C8 et cellules de souris leucémiques (Ll 210) et de cancer mammaire de souris (FM3A), comme le montrent les résultats dans le tableau 5 ci-dessous :
human T4-lymphocyte CEM and Molt4/C8 cells, murine leukemia (Ll 210) and murine mammary carcinoma cells (FM3 A)
Tableau 5
2.2.3 Composés disulfure saturés de formule (I)
Les composés disulfure 18, 19, 20, 21, 22 et 23 répondant à la formule (I) ci- dessus ont manifesté un effet cytotoxique sur les cellules CEM, comme le montrent les résultats dans le tableau 6 ci-dessous :
Tableau 6
Les composés disulfure 18, 20, 21 et 22 précités, ainsi que les composés disulfure 24, 25, 26 et 27 ont manifesté un effet cytotoxique sur les cellules L1210/0, FM3A/0, Molt4/C8, CEM et HeLa, comme le montrent les résultats dans le tableau 7 ci-dessous :
Tableau 7
On observe que les effets cytotoxiques sont dépendants de la nature de la chaîne latérale des disulfures et des lignées cellulaires.
Propriétés antivirales
1. Description des essais
Le test d'évaluation est décrit dans Roy, B. ; Chambert, S.; Lepoivre M.; Aubertin, A.-M.; Balzarini, J.; Décout, J. -L., Deoxyribonucleoside T- or 3'-mixed disulfides: prodrugs to target ribonucleotide reductase and/or to inhibit HIV reverse transcription. J. Med. Chem. 2003, 46, 2565-2568.
La toxicité et les activités antivirales ont été mesurées à différentes concentrations, leur évolution en fonction de la concentration a permis d'évaluer : - la concentration à laquelle 50% des cellules sont mortes en l'absence de virus (CC 50) pour chacun des composés testés, à partir de l'évolution de l'absorbance à 540 nm du formazan en fonction de la concentration en composé testé la concentration en composé qui conduit à une diminution de 50% de l ' activité de la transcriptase inverse virale (EC50). Cette concentration est déterminée à partir de la courbe représentant l'évolution du pourcentage d'activité « transcriptase inverse restante » (définie comme étant le rapport de l'activité de la transcriptase inverse en présence du composé à tester sur celle des cellules non traitées) en fonction de la concentration en composé testé.
Les composés dérivés des familles suivantes ont montré des effets anti-HIV (HIV 1 et 2) avec une toxicité modulée par le substituant R.
2. Résultats des essais
2.1. Effets antiviraux
Les composés identifiés dans les tableaux ci-après ont été testés et ont manifesté des effets anti-HIV- 1 et anti-HIV-2. Dans les tableaux ci-après :
EC 50 : concentration requise pour protéger de 50% les cellules CEM contre la cytopathogénicité du HIV
CC 50 : concentration cytotoxique ou concentration requise pour réduire de 50% la viabilité des cellules CEM
Première et deuxième séries
Troisième série
Effet dans des cellules CEM n'exprimant pas l'activité thymidine kinase (CEM/TK " , cellules ne présentant pas d ' activité thymidine kinase).
Les résultats mentionnés dans ces tableaux montrent un effet anti -VIH-I et anti-VIH-2 de la majorité des nucléosides testés. La forte diminution des effets antiviraux dans les cellules CEM/TK " confirme que les nucléosides doivent être phosphorylés in vivo pour être actifs. La toxicité des composés actifs dépend fortement de la nature de la chaîne latérale portée par la fonction disulfure.
2.2. Effet inhibiteur de la transformation de cellules C3H/3T3 d'embryons de souris induite par Ie Moloney Sarcoma Virus (Modèle d'infection par le VIH)
EC 5 o : concentration efficace à 50% MIC : concentration inhibitrice minimale
Ces données confirment l'effet anti-rétroviral marqué des composés évalués.
III- Procédé d'obtention d'un composé de formule (IV) selon le procédé de l'invention
Le procédé décrit précédemment est ci-dessous illustré pour la synthèse de la 2' ,3 ' -Didéshydro-2 ' ,3 ' -didésoxy-2 ' -méthylthiouridine 31
Ce composé est préparé à partir du disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'- didésoxyuridin-2'-yle et de 4-nitrophényle 40 dont la synthèse à partir d'un halogénure de sulfényle stable est décrite ci-dessous.
Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de 4-nitrophényle 40
A une . solution de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2- triméthylsilyl)éthyl)thiouridine (200 mg ; 0,58 mmol) dans le dichlorométhane anhydre (6 mL), maintenue sous argon, est ajouté le chlorure de 4-nitrobenzène sulfényle (333 mg ; 1,75 mmol). Le mélange est laissé sous agitation pendant 15 heures puis le solvant est évaporé. Le résidu obtenu est repris dans le minimum de dichlorométhane pour être chromatographié sur gel de silice dans un mélange dichlorométhane-méthanol (98 : 2) puis (95 : 5) pour donner le composé 40 (152 mg ; 0,38 mmol ; 66 %) sous la forme d'une poudre jaune.
RMN 1 H (400 MHz, CDCl 3 ) δ 9,40 (1 H, s, NH) ; 8,16 (2 H, m, Ar) ; 7,65 (1 H, d, J = 8,0 Hz, 6-H ) ; 7,60 (2 H, m, Ar) ; 7,04 (1 H, m, 1 '-H) ; 6,48 (1 H, m, 3'-H) ; 5,70 (1 H, d, J = 8,4 Hz, 5-H ) ; 4,99 (1 H, Is, 4'-H) ; 3,94 (1 H, m, 5'-H) ; 3,83 (1 H, m, 5'-H).
RMN 13 C (100 MHz, CDCl 3 ) δ 162,9 (C2) ; 150,3 (C4) ; 146,8 (C-NO 2 ) ; 143,9 (C-SS) ; 140,8 (C6) ; 135,1 (C2') ; 131,8 (C3'); 126,6 (2 C, Ar) ; 126,3 (2 C, Ar) ; 102,8 (C5) ; 89,7 (CT) ; 87,0 (C4') ; 63,0 (5'-CH 2 ).
SM (DCI, NH 3 -isobutane) : m/z 396 [M+H] + ; 413 [M+NH 3 ] + .
A une solution de disulfure de 2 " ,3'-didéshydro-2',3 ' -didésoxyuridin-2'-yle et de 4-nitrophényle 40 (30 mg, 0,08 mmol) dans du méthanol anhydre est ajouté du DTT (6,3 mg, 0,09 mmol). La solution est maintenue sous agitation pendant 30 minutes puis de l'iodure de méthyle (50μL, 0,8 mmol) est ajouté en présence de NaHCO 3 (8 mg, 0,10 mmol). Après 15 heures, le mélange réactionnel est évaporé puis le résidu est chromatographié sur gel de silice dans un mélange dichlorométhane-méthanol (95 : 5). Le composé insaturé méthylé 31 est obtenu sous la forme d'un solide blanc (6 mg, 0,023 mmol, 31%).
RMN 1 H (400 MHz, CDCl 3 ) δ 7,60 (1 H, d, J = 8 Hz, 6-H) ; 6,93 (1 H, m, l '-H) ; 5,76
(1 H, s, 3'-H) ; 5,73 (1 H, d, J = 7,6 Hz, 5-H); 4,99 (1 H, m, 4'-H) ; 3,94 - 3,76 (2 H, m,
J = 3,2 Hz, J = 11,6 Hz, 5'-H x 2) ; 2,41 (Me).
RMN 13 C (100 MHz, CDCl 3 ) δ 162,8 (C2) ; 150,5 (C4) ; 141,8 (C6) ; 136,4 (C3') ;
122,3 (C2-) ; 102,8 (C5) ; 90,2 (Cl ') ; 87,2 (C4') ; 63,6 (5'-CH 2 ) ; 15,1 (Me). SM (DCI, NH 3 -isobutane) : m/z 257 [M+H] + .
IV- Autre procédé de l'invention
NO,
Sulfure silylé en série cystéine 35
Une solution de dérivé cystéine protégé 34 (1 g, 4,25 mmol) et de triméthylvinylsilane (740 mL, 5,1 mmol) est agitée en présence d'une quantité catalytique (10%) d'AIBN à 70°C dans un tube scellé pendant 24h. Le mélange réactionnel est ensuite évaporé sec pour donner le composé 35 (1,1 g, 81%) sous la forme d'une huile jaune claire.
RMN 1 H CDCl 3 δ 5,40 (IH, d, NH), 4,52 (IH, m, Ha), 3,72 (3H, s, CH 3 ), 2,95 (2H, d, CH 2 S), 2,52 (2H, m, CH 2 S), 1,41 (9H, s, (CH 3 ) 3 ), 0,81 (2H, m, CH 2 Si), 0,12 (9H, s, (CH 3 J 3 Si).
RMN 13 C CDCl 3 δ 171,5 (C=O), 155,0 (C=O), 79,8 (C Boc), 53,2, 52,3 (2 CH 2 S), 34,2 (CH), 28,2 (3 CH 3 Boc), 17,2 (CH 2 Si), -1,9 (3 CH 3 Si).
HRMS pour C 14 H 29 NO 4 NaSSi [M+Na] + : théorique: 358,1484 ; trouvée : 358,1483
Disulfure de cystéine et de 4-nitrophényle 36
A une solution de cystéine sulfure silylée 35 (100 mg, 0,31 mmol) dans le dichlorométhane anhydre (5 mL) est ajouté le chlorure de 4-nitrobenzènesulfényle (177 mg, 0,93 mmol) puis le milieu réactionnel est agité à température ambiante sous atmosphère inerte pendant 48 heures. Le mélange est ensuite dilué avec du dichlorométhane, lavé avec de l'eau, puis évaporé à sec. Le résidu est purifié par chromato graphie sur gel de silice dans un mélange cyclohexane-dichlorométhane (50- 50 puis 70-30 puis 0-100) pour donner le composé 36 (79 mg, 69%) sous la forme d'une huile jaune claire.
RMN 1 H CDCl 3 δ 8,22 (2H, d, Harom), 7,66 (2H, d, Harom), 5,31 (IH, m, NH), 4,62 (IH, m, Ha), 3,78 (3H, s, CO 2 CH 3 ), 3,32 (IH, dd, CH 2 ), 3,19 (IH, dd, CH 2 ), 1,46 (9H, s, (CHs) 3 ).
RMN 13 C CDCl 3 δ 107,7 (C=O), 154,8 (C=O), 146,4, 145,9 (2C arom), 126,2, 124,1 (2x2C arom), 80,5 (C(CH 3 ) 3 ), 52,7 (CO 2 CH 3 ), 41,2 (CH 2 S), 28,2 (3 CH 3 ).
Les composés identifiés dans la description et les revendications par leur référence sont ci-après décrits.
COMPOSES DE FORMULE (II) Composés sulfure insaturés
Les composés silylés 1, 3-8 sont silylés, les composés 2 et 31 ne sont pas silylés
Composés disulfure insaturés
12 13
14 15 16 17
COMPOSES DE FORMULE (III)
18 19 20
21 22 23
27 28 29 30
Autres composés de l'invention
36
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