Cette demande de brevet internationale revendique la priorité de la demande de brevet européenne 15 000 285.5 déposée le 30 janvier 2015 au nom de E NAMANY Rachid.

L'invention a pour objet une composition à usage topique, en particulier cosmétique, riche en métabolites produits par des cellules végétales provenant de plantes particulières. En particulier, l'invention a pour objet une composition contenant des cellules végétales dédifférenciées et élicitées puis séchées partiellement ou totalement de préférence, lyophilisées, éventuellement (mais avantageusement) broyées et ensuite dispersées dans cette composition.

Par cellules végétales dédifférenciées, on entend toute cellule végétale ne présentant aucun des caractères d'une spécialisation particulière et capable de vivre par elle-même et non en dépendance avec d'autres cellules.

Les cellules végétales dédifférenciées peuvent être obtenues à partir de matériel végétal issu de plante entière ou de partie de plante comme les feuilles, les tiges, les fleurs, les pétales, les racines, les fruits, leur peau, l'enveloppe les protégeant, les graines, les anthères, la sève, les épines, les bourgeons, l'écorce, les baies, et des mélanges de ceux-ci.

Préférentiellement, les cellules végétales dédifférenciées sont obtenues à partir d'écorce, de feuilles, de bourgeons et de la peau des fruits.

Les cellules végétales dédifférenciées utilisables selon l'invention peuvent être obtenues à partir de végétaux obtenus par culture in vivo ou issu de culture in vitro. Par culture in vivo on entend toute culture de type classique c'est à dire en sol à l'air libre ou en serre ou encore hors sol ou en milieu hydroponique. Par culture in vitro, on entend l'ensemble des techniques connues de l'homme du métier qui permet de manière artificielle l'obtention d'un végétal ou d'une partie d'un végétal. La pression de sélection imposée par les conditions physico- chimiques lors de la croissance des cellules végétales in vitro permet d'obtenir un matériel végétal standardisé, exempt de contaminations et disponible tout au long de l'année contrairement aux plantes cultivées in vivo.

Préférentiellement selon l'invention on utilise des cellules végétales dédifférenciées issues de culture in vitro.

Les cellules végétales dédifférenciées utilisables selon l'invention peuvent être obtenues par toute méthode connue de l'art antérieur. A cet égard on peut citer les méthodes décrites par E.F. George et P.D. Sherrington dans Plant Propagation by tissue culture, handbook and directory of commercial laboratories (Exegetics Ltd 1984).

Les milieux de culture utilisables selon l'invention sont ceux généralement connus de l'homme du métier. On peut citer à titre d'exemples les milieux de Gamborg, Murashige et Skoog, Heller, White etc.... On trouvera dans "Plant Culture Média : formulations and uses" de E.F. George, DJM Puttock et H.J George (Exegetics Ltd 1987, tome 1 & 2) des descriptions complètes de ces milieux.

Préférentiellement selon l'invention on prépare les cellules végétales dédifférenciées cultivées sur milieu de Murashige et Skoog. Etat de la technique

On connaît par le document FR 2795637 une composition cosmétique contenant un extrait de cellules végétales dédifférenciées pour éviter les problèmes d'odeur. Cette composition contient un extrait de cellules végétales dédifférenciées mais non élicitées, de sorte que cette composition est pauvre en métabolites secondaires ou en phytoalexines, voire est sensiblement exempte de tels composés. De plus ce document décrit l'utilisation d'extrait aqueux obtenus après broyage des cellules dans leur milieu de culture puis élimination des particules en suspension avec une perte inévitable des métabolites liés aux particules en suspension. Afin d'éliminer les protéases et notamment les oxydases ce document préconise également l'emploi de filtres capturant les molécules d'un poids moléculaire supérieur à 100.000 daltons perdant ainsi dans l'extrait final tous les métabolites supérieurs à ce poids et qui peuvent s'avérer d'un grand intérêt pour l'industrie cosmétique. De plus afin d'éliminer les problèmes dus à l'oxydation le document préconise l'ajout de stabilisants, notamment la cystèine et/ ou des dérivés soufrés ce qui entraîne nécessairement une pureté moindre de l'extrait avec des étapes subséquentes de fïltration. Les méthodes décrites dans ce document nécessitent la mise en œuvre de moyens compliqués pour l'obtention d'extraits dont, tant la pureté ( nombreux additifs ), que la qualité et la concentration ( en métabolites ) n'est pas optimale. De plus les nombreuses étapes nécessaires à l'obtention des extraits de ce procédé induisent des coûts élevés et le risque de contaminations de part les nombreuses manipulations et additifs.

On connaît les cultures de cellules dédifférenciées, d'autre part on connaît les mécanismes d'élicitation de ces cellules suivi d'étapes d'extractions et de filtrations diverses suivis de lyophilisation afin d'incorporer les extraits obtenus dans une préparation cosmétique ou pharmaceutique. De tels procédés sont par exemple décrits dans US 4,241,536 ; EP 378 921, WO 88/00968, EP 1 203 811, etc. pour des espèces de plantes diverses. Le contenu de ces documents est incorporé dans la présente description par référence pour décrire des milieux de culture, des espèces de plantes, des éliciteurs possibles, etc.

De nos jours, malgré les compétences et le savoir faire des industries dans le domaine de l'extraction végétale, et malgré les progrès de la chimie organique, plusieurs étapes d'extraction sont indispensables pour obtenir une matière première végétale.

Plusieurs inconvénients sont imputés à ces extractions : - perte de la structure tertiaire des molécules isolées,

- présence des différents solvants au niveau du produit fini,

- hétérogénéité des substrats nécessitant des extractions fines faisant appel à des solvants de plus en plus toxiques,

- qualité de l'extrait en fonction de l'état physiologique de la plante au moment de la récolte,

- production de l'extrait limitée en fonction des saisons,

Face à ces facteurs limitants et au regain d'intérêt des consommateurs pour tout ce qui est d'origine naturelle, plusieurs tentatives d'obtention de cellules ont été réalisées. Ainsi, à ce jour, deux procédés majeurs ont été exploités :

- La culture de cellules à partir d'organismes unicellulaires ou de microorganismes, technique peu originale se basant sur la reproduction des conditions de vie normale. Cependant ces organismes sont primitifs et ne développent pas de métabolisme secondaire, source des principes actifs les plus intéressants.

- L'obtention des cellules à partir de fruits (cellules fraîches) après digestion enzymatique. Les limites de ce procédé résident dans le fait que les fruits ne sont pas aseptiques et qu'ils peuvent contenir des résidus de pesticides (fongicides, herbicides, insecticides,...). D'autre part, les enzymes (cellulases, pectinases,...) utilisées en quantité importante (2%, P/P) pour la digestion des parois végétales et l'obtention des cellules sans paroi (protoplastes) se retrouvent dans le produit fini. Par ailleurs, les enzymes utilisées peuvent altérer la qualité des métabolites. Enfin, l'utilisation de cette technique permet seulement de récupérer des protoplastes (cellules sans paroi cellulaire), structures fragiles ne pouvant pas orienter leur métabolisme.

On connaît également par le document WO 03/077880 un procédé de préparation d'un broyât de cellules dédifférentiées et élicitées pour produire des phytoalexines. Dans ce document, les cellules végétales sont sélectionnées dans des familles particulières et sont élicitées selon des étapes particulières. Les inventeurs ont maintenant découvert qu'en soumettant des cellules dédifférentiées de familles de plantes végétales particulières à un cycle d'élicitation particulier, il était possible d'obtenir des cellules contenant un mélange de molécules dans des proportions relatives entre elles qui permettaient d'assurer un traitement adéquat de problèmes liés à la peau.

L'invention a pour objet Composition pour application topique, en particulier composition cosmétique, contenant des cellules végétales dédifférenciées et élicitées en culture in vitro, avantageusement sous forme de broyât des dites cellules végétales dédifférenciées et élicitées en culture in vitro, ledit broyât contenant au moins une phytoalexine comprenant alors au moins 95%, avantageusement au moins 97%, de préférence au moins 99% en poids de l'ensemble des matières sèches issues des cellules végétales broyées dédifférenciées et élicitées in vitro, lesdites cellules ou ledit broyât étant dispersé(es) dans ladite composition ou étant sous une forme apte à être dispersée dans ladite composition, caractérisée en ce que les cellules végétales dédifférenciées, éventuellement (mais avantageusement) sous forme de broyât sont choisies parmi le groupe constitué des familles suivantes : Agavaceae (en particulier les espèces: Agave, Beschorneria, CUorophytum, Furcraea, Hesperaloe, Hesperoyucca, Yucca), Aizoaceae , Amaranthaceae (en particulier l'espèce: Arthraerva) , Amaryllidaceae (en particulier l'espèce: Boophane, Brunsvigia, Cyrtanthus, Haemanthus, Rauhia ), Anacardiaceae (en particulier l'espèce: Operculicarya, Pachycormus), Apiaceae (en particulier l'espèce: Steganotaenia ), Apocynaceae (en particulier l'espèce: Adenium, Mandevilla, Pachypodium, Plumeria ), Araceae (en particulier les espèces: Zamioculcas zamiifolia); Araliaceae (en particulier les espèces: Cussonia), Asclepiadaceae (en particulier les espèces: Absolmsia, Asclepias, Aspidoglossum, Aspidonepsis, Baynesia, Brachystelma, Caralluma, Ceropegia, Cibirhiza, Cynanchum, Dischidia, Dischidiopsis, Duvalia, Duvaliandra, Echidnopsis, Edithcolea, Fanninia, Fockea, Glossostelma, Hoodia, Hoya, Huernia, Huerniopsis, Ischnolepis, Larryleachia, Lavrania, Madangia, Marsdenia, Matelea, Micholitzia, Miraglossum, Notechidnopsis, Odontostelma, Ophionella, Orbea, Orbeanthus, Pachycarpus, Pectinaria, Petopentia, Piaranthus, Pseudolithos, Quaqua, Raphionacme, Pvhytidocaulon, Riocreuxia, Sarcorrhiza, Sarcostemma, Schizoglossum, Schlechterella, Stapelia, Stapelianthus, Stapeliopsis, Stathmostelma, Stenostelma, Stomatostemma, Tavaresia, Trachycalymma, Tridentea, Tromotriche, White- sloanea, Xysmalobium), Asparagaceae (en particulier les espèces: Myrsiphyllum), Asphodelaceae ((en particulier les espèces: Aloe, Astroloba, Bulbine, Chortolirion, Gasteria, Haworthia, Poellnitzia, Trachyandra), Asteraceae (en particulier les espèces: Baeriopsis, Coulterella, Crassocephalum, Didelta, Gynura, Osteospermum, Othonna, Polyachyrus, Pteronia, Senecio), Balsarninaceae (en particulier les espèces: Impatiens), Basellaceae (en particulier les espèces: Anredera, Basella ), Begoniaceae (en particulier les espèces: Bégonia ), Bombacaceae (en particulier les espèces: Adansonia, Cavanillesia, Ceiba, Pseudobombax ), Brassicaceae (en particulier les espèces: Heliophila, Lepidium ), Bromeliaceae, Burseraceae (en particulier les espèces: Beiselia, Bursea, Comrniphora), Cactaceae (en particulier les espèces: Acanthocalycium, Acanthocereus, Ariocarpus, Armatocereus, Arrojadoa, Arthrocereus, Astrophytum, Austrocactus, Aztekium, Bergerocactus, Blossfeldia, Brachycereus, Browningia, Brasilicereus, Calymmanthium, Carnegiea, Cephalocereus, Cephalocleistocactus, Cereus, Cintia, Cipocereus, Cleistocactus, Coleocephalocereus, Copiapoa, Corryocactus, Coryphantha, Déndrocereus, Denmoza, Discocactus, Disocactus, Echinocactus, Echinocereus, Echinopsis, Epiphyllum, Epithelantha, Eriosyce, Escobaria, Escontria, Espostoa, Espostoopsis, Eulychnia, Facheiroa, Ferocactus, Frailea, Geohintonia, Gymnocalycium, Haageocereus, Harrisia, Hatiora, Hylocereus, Jasminocereus, Lasiocereus, Leocereus, Lepismium, Leptocereus, Leuchtenbergia, Lophophora, Maihuenia, Malacocarpus, Mammillaria, Mammilloydia, Matucana, Melocactus, Micranthocereus, Mila, Monvillea, Myrtillocactus, Neobuxbaumia, Neolloydia, Neoraimondia, Neowerdermannia, Obregonia, Opuntia, Oreocereus, Oroya, Ortegocactus, Pachycereus, Parodia, Pediocactus, Pelecyphora, Peniocereus, Pereskia, Pereskiopsis, Pilosocereus, Polaskia, Praecereus, Pseudoacanthocereus, Pseudorhipsalis, Pterocactus, Pygmaeocereus, Quiabentia, Rauhocereus, Rebutia, Rhipsalis, Samaipaticereus, Schlumbergera, Sclerocactus, Selenicereus, Stenocactus, Stenocereus, Stephânocereus, Stetsonia, Strombocactus, Tacinga, Thelocactus, Turbinicarpus, Uebelmannia, Weberbauerocereus, Weberocereus, Yungasocereus ), Campanulaceae (en particulier les espèces: Brighamia), Capparidaceae (en particulier les espèces: Maerua ), Caricaceae (en particulier les espèces: Carica, Jacarathia ), Chenopodiaceae, Cochlospermaceae, Cornmelinaceae (en particulier les espèces: Aneilema, Callisia, Cyanotis, Tradescantia, Tripogandra ), Convolvulaceae (en particulier les espèces: Ipomea, Sictocardia, Turbina), Crassulaceae (en particulier les espèces: Adromischus, Aeonium, Afrovivella, Aichryson, Cotylédon, Crassula, Cremnophila, Cremnosedum, Dudleya, Echeveria, Graptopetalum, Hylotelephium, Hypagophytum, Kalanchoe, Lenophyllum, Meterostachys, Monanthes, Orostachys, Pachyphytum, Perrierosedum, Phedimus, Pistorinia, Prometheum, Pseudosedum, Rhodiola, Rosulana, Sedella, Sedum, Sempervivum, Sinocrassula, Thompsonella, Tylecodon, Umbilicus, Villadia), Cucurbitaceae (en particulier les espèces: Apodanthera, Brandegea, Cephalopentandra, Ceratosanthes, Citrullus, Coccinia, Corallocarpus, Cucumella, Cucumis, Cucurbita, Cyclantheropsis, Dendrosicyos, Doyera, Eureindra, Fevillea, Gerrandanthus, Gynostemma, Halosicyos, Ibervilla, Kedostris, Marah, Momordica, Neoalsomitra, Odosicyos, Parasicyos, Syrigia, Telfairia, Trochomeria, Trochomeriopsis, Tumamoca, Xerosicyos, Zehneria, Zygosicyos ), Didiereaceae (en particulier les espèces: Alluaudia, Alluaudiopsis, Decaria, Didieara), Dioscoreaceae (en particulier les espèces: Dioscorea ), Doryanthaceae (en particulier les espèces: Doryanthes), Ericaceae (en particulier les espèces: Sphyrospermum ), Eriospermaceae" (en particulier les espèces: Eriospermum), Euphorbiaceae, Fabaceae (en particulier les espèces: Delonix, Dolichos, Eiythrina, Neorautanenia, Pachyrhizus, Tylosema), Fouquieriaceae (en particulier les espèces: Fouquieria), Geraniaceae (en particulier les espèces: Monsonia, Pelargonium), Gesneriaceae (en particuler les espèces: Aeschynanthus, Alsobia, Chirita, Codonanthe, Columnea, Nematanthus, Siriningia, Streptocarpus), Hyacinthaceae (en particuler les espèces: Albuca, Bowiea, Dipcadi, Drimia, Drimiopsis, Hyacinthus, Lachenalia, Ledebouria, Litanthus, Massonia, Ornithogalum, Rhadamanthus, Rhodocodon, Schizobasis, Whiteheadia), Icacinaceae (en particuler les espèces: Pyrenacantha ), Lamiaceae (en particuler les espèces: Aeollanthus, Dauphinea, Perrierastrum, Plectranthus, Solenostemon, Tetradenia, Thorncroftia ), Lentibulariaceae, Loasaceae (en particuler les espèces: Schismocarpus), Loranthaceae (en particuler les espèces: Tapinanthus), Melastomataceae (en particuler les espèces: Medinilla ), Meliaceae (en particuler les espèces: Entandrophragma ), Menispermaceae (en particuler les espèces: Chasmanthera, Stephania, Tinospora), Moraceae (en particuler les espèces: Dorstenia, Ficus ), Moringaceae (en particuler les espèces: Moringa ), Nolanaceae (en particuler les espèces: Nolana), Nolinaceae (en particuler les espèces: Beaucarnea, Calibanus, Dasylirion, Nolina), Orchidaceae, Oxalidaceae (en particuler les espèces: Oxalis), Passifloraceae (en particuler les espèces: Adenia), Pedaliaceae (en particuler les espèces: Pterodiscus, Sesamothamnus, Uncarina), Phyllanthaceae (en particuler les espèces: Phyllanthus), Phytolaccaceae (en particuler les espèces: Phytolacca), Piperaceae (en particuler les espèces: Peperomia), . Portulacaceae (en particuler les espèces: Amphipetalum, Anacampseros, Avonia, Calyptrotheca, Ceraria, Cistanthe, Dendroportulaca, Grahamia, Lewisia, Parakeelya, Portulaca, Portulacaria, Schreiteria, Talinella, Talinum), Rubiaceae (en particuler les espèces: Anthorrhiza, Hydnophytum, Hydrophylax, Myrmecodia, Myrmephythum, Phylohydrax, Squamellaria), Ruscaceae (en particuler les espèces: Cordyline, Dracaena, Sansevieria), Sapindaceae (en particuler les espèces: Erythrophysa), Saxifragaceae, Sterculiaceae (en particuler les espèces: Brachychiton, Sterculia), Urticaceae (en particuler les espèces: Laportea, Obertia, Pilea, Sarcopilea), Viscaceae (en particuler les espèces: Viscum), Vitaceae(en particuler les espèces: Cissus, Cyphostemma), Xanthorrhoeaceae et Zygophyllaceae, qui ont été élicitées en milieu in vitro sous une atmosphère gazeuse contenant de l'oxygène et du C02 à une température comprise entre 15°C et 50°C selon un cycle comprenant des périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux (en particulier de 1 à 5 lux) pendant 10 minutes à 12 heures, avantageusement pendant 15minutes et ôheures, de préférence entre 20minutes et 3 heures, périodes d'obscurité séparées l'une de l'autre par une période de luminosité de plus de 100 lux pendant 30 minutes à 24 heures, avantageusement 1 heure à 12 heures, de préférence de 1 à 6 heures (en particulier de plus de 1000 lux, plus spécifiquement de plus de 10000 lux, de préférence de plus de 50000 lux et même plus particulièrement préférée de plus de 100000 lux), éventuellement suivi par une étape de broyage pour former un broyât de cellules végétales dédifférenciées. Lesdites cellules végétales dédifférenciées et élicitées, éventuellement avant d'être broyées, sont soumises à une étape de séparation du milieu de culture et/ou de lavage et/ou de rinçage et/ou de séchage. L'atmosphère gazeuse pour la culture et l'élicitation des cellules comprend avantageusement moins de 20% en volume d'oxygène, par exemple de 10 à 19% en volume, plus de 0,5% en volume de C02, de préférence de 1 à 5% en volume de C02, de l'eau pour obtenir une humidité relative de plus de 25%, avantageusement de plus de 50%, par exemple proche de la saturation, de l'azote. Selon un procédé particulier, l'atmosphère est de l'air enrichi en C02 et en humidité si nécessaire. Dans le présent mémoire, on entend par luminosité, un éclairage avec des rayons de longueur d'onde comprise entre 100 nm et 700nm, en particulier dans le spectre visible, et de préférence dans la gamme de 400 nm à 520 nm (correspondant au spectre de couleur bleu et vert. Lors des étapes d'éclairage, l'éclairage ne comprend avantageusement sensiblement pas de rayons de longueur d'onde inférieure à lOOnm et/ou supérieure à 700nm. De préférence, plus de 90% des rayons, en particulier plus de 95% des rayons ont une longueur d'onde comprise entre 100 nm et 700 nm, de préférence comprise entre 400nm et 520 nm.

Dans le présent mémoire, les périodes de non luminosité sont avantageusement des périodes où le milieu de culture n'est sensiblement pas soumis à un rayonnement de longueur d'onde comprise entre lOOnm et 700 nm, mais également de préférence inférieure à lOOnm et supérieure à 700nm. Les périodes de non luminosité sont de préférence des périodes d'obscurité totale ou sensiblement totale.

Selon une forme de réalisation avantageuse de la composition selon l'invention, les cellules végétales ont été élicitées en milieu in vitro sous une atmosphère gazeuse contenant de l'oxygène et du C02 à une température comprise entre 15°C et 50°C selon un cycle comprenant au moins quatre, en particulier au moins six, de préférence au moins dix périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux pendant 10 minutes à 12 heures, avantageusement pendant 15minutes et 6heures, de préférence entre 20minutes et 3 heures, périodes d'obscurité séparées l'une de l'autre par une période de luminosité de plus de 100 lux pendant 30 minutes à 24 heures, avantageusement 1 heure à 12 heures, de préférence de 1 à 6 heures. Lesdites cellules végétales dédifférenciées et élicitées sont soumises à une étape de séparation du milieu de culture et/ou de lavage et/ou de rinçage et/ou de séchage. Les dites cellules, avantageusement après séparation du milieu de culture et/ou lavage et/ou séchage, sont de préférence broyées avant ou après mélange à un composé acceptable en cosmétique.

Selon une particularité d'une composition selon l'invention, les cellules végétales ont été élicitées en milieu in vitro sous atmosphère contenant un degré d'humidité de plus de 50%.

Dans les compositions selon l'invention, les cellules ont été avantageusement préparées en utilisant une ou des caractéristiques suivantes :

- les cellules végétales sont dédifférentiées et élicitées dans un milieu de culture in vitro sous une atmosphère gazeuse contenant de l'oxygène et du C02 à une température comprise entre 15°C et 50°C selon un cycle comprenant des périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux pendant 10 minutes à 12 heures, avantageusement pendant 15minutes et 6heures, de préférence entre 20minutes et 3 heures, périodes d'obscurité séparées l'une de l'autre par une période de luminosité de plus de 100 lux pendant 30 minutes à 24 heures, avantageusement 1 heure à 12 heures, de préférence de 1 à 6 heures (en particulier plus de lOOOlux, plus spécifiquement plus de 50000 et même plus de 100000 lux), avant d'être broyées.

- le changement de luminosité lors du passage d'une période de luminosité inférieure à lOlux à une période de luminosité de plus de lOOOlux (avantageusement plus de 500001ux) se fait en un temps de moins de 5minutes, en particulier de moins de 2 minutes. - les cellules végétales sont au moins partiellement élicitées par des périodes de luminosité de plus de 50000 lux, en particulier de plus de 100000 lux, par exemple de plus de 150000 lux.

- les cellules végétales sont dédifférentiées et élicitées en milieu in vitro sous atmosphère contenant de l'oxygène (en particulier moins de 21% en volume, plus spécifiquement moins de 20% en volume, par exemple de 10 à 18% en volume) et au moins 1% (en particulier de 2 à 10%) de C02 en volume.

- les cellules végétales sont dédifférentiées et élicitées en milieu in vitro sous une atmosphère gazeuse contenant de l'oxygène et au moins 1% en volume de C02, et une humidité relative d'au moins 50% selon un cycle comprenant des périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux (par exemple de 2 à 51ux) à une température comprise entre 15°C et 30°C pendant 10 minutes à 12 heures, avantageusement pendant 15minutes et 6heures, de préférence entre 20rninutes et 3 heures, périodes d'obscurité séparées l'une de l'autre par une période de luminosité de plus de 1000 lux pendant 30 minutes à 24 heures, avantageusement 1 heure à 12 heures, de préférence de 1 à 6 heures (avantageusement de plus de lOOOOlux, de préférence de plus de 50000 lux) à une température de plus de 30°C. Les cellules sont avantageusement soumises à une séparation des cellules du milieu de culture, leur lavage et/ou séchage et/ou rinçage, et suivi éventuellement, mais avantageusement à un broyage, éventuellement après mélange des cellules à un composé ou excipient pour produit cosmétique (par exemple huile, glycol, etc.).

Selon des particularités avantageuses de formes de réalisation, la composition selon l'invention comprend une ou plusieurs des caractéristiques suivantes :

- les cellules se présentent sous la forme d'un broyât de cellules dédifférenciées et élicitées in vitro, lesdites cellules étant au moins partiellement séchées, de préférence lyophilisées, avant leur broyage.

- la composition contient de 0,005 à 25% en poids, avantageusement de 0,005 à 5 % en poids de cellules végétales dédifférenciées et élicitées in vitro, en particulier sous forme de broyât, ce poids étant calculé sous forme sèche.

- le broyât a une granulométrie moyenne de particules solides inférieure à 100 μηι, avantageusement inférieure à 10 μπι, de préférence inférieure à 1 μηι. - les cellules végétales dédifférenciées et élicitées in vitro non broyées ou le broyât de cellules végétales dédifférenciées et élicitées in vitro se présente(nt) sous la forme d'une suspension visqueuse ou d'un gel ou d'une poudre sensiblement sèche, ladite suspension, gel ou poudre étant avantageusement sous une forme apte à être dispersée dans la composition.

la composition est une composition antioxydante, anti-radicalaire, antimflammatoire, anti-proliférative, relaxante, vasculaire et/ou anti- âge, ladite composition comprenant une quantité effective de cellules végétales telles que décrites ci-avant et/ou de broyât de cellules végétales tel que décrit plus haut.

L'invention a aussi pour objet un procédé de préparation d'une composition à usage topique selon l'invention, ce procédé étant essentiellement caractérisé en ce que l'on met des cellules végétales dédifférenciées d'une espèce choisie parmi le groupe constitué des espèces des familles suivantes : Agavaceae (en particulier les espèces: Agave, Beschorneria, Chlorophytum, Furcraea, Hesperaloe, Hesperoyucca, Yucca), Aizoaceae , Amaranthaceae (en particulier l'espèce: Arthraerva) , Amaryllidaceae (en particulier l'espèce: Boophane, Brunsvigia, Cyrtanthus, Haemanthus, Rauhia ), Anacardiaceae (en particulier l'espèce: Operculicarya, Pachycormus), Apiaceae (en particulier l'espèce: Steganotaenia ), Apocynaceae (en particulier l'espèce: Adenium, Mandevilla, Pachypodium, Plumeria ), Araceae (en particulier les espèces: Zamioculcas zamiifolia); Araliaceae (en particulier les espèces: Cussonia), Asclepiadaceae (en particulier les espèces: Absolmsia, Asclepias, Aspidoglossum, Aspidonepsis, Baynesia, Brachystehna, Caralluma, Ceropegia, Cibirhiza, Cynanchum, Dischidia, Dischidiopsis, Duvalia, Duvaliandra, Echidnopsis, Edithcolea, Fanninia, Fockea, Glossostelma, Hoodia, Hoya, Huernia, Huerniopsis, Ischnolepis, Larryleachia, Lavrania, Madangia, Marsdenia, Matelea, Micholitzia, Miraglossum, Notechidnopsis, Odontostelma, Ophionella, Orbea, Orbeanthus, Pachycarpus, Pectinaria, Petopentia, Piaranthus, Pseudolithos, Quaqua, Raphionacme, Rhytidocaulon, Riocreuxia, Sarcorrhiza, Sarcostemma, Schizoglossum, Schlechterella, Stapelia, Stapelianthus, Stapeliopsis, Stathmostelma, Stenostelma, Stomatostemma, Tavaresia, Trachycalymma, Tridentea, Tromotriche, White-sloanea, Xysmalobium), Asparagaceae (en particulier les espèces: Myrsiphyllum), Asphodelaceae ((en particulier les espèces: Aloe, Astroloba, Bulbine, Chortolirion, Gasteria, Haworthia, Pôellnitzia, Trachyandra), Asteraceae (en particulier les espèces: Baeriopsis, Coulterella, Crassocephalum, Didelta, Gynura, Osteospermum, Othonna, Polyachyrus, Pteronia, Senecio), Balsaminaceae (en particulier les espèces: Impatiens), Basellaceae (en particulier les espèces: Anredera, Basella ), Begoniaceae (en particulier les espèces: Bégonia ), Bombacaceae (en particulier les espèces: Adansonia, Cavanillesia, Ceiba, Pseudobombax ), Brassicaceae (en particulier les espèces: Heliophila, Lepidium ), Bromeliaceae, Burseraceae (en particulier les espèces: Beiselia, Bursea, Commiphora), Cactaceae (en particulier les espèces: Acanthocalycium, Acanthocereus, Ariocarpus, Armatocereus, Arrojadoa, Arthrocereus, Astrophytum, Austrocactus, Aztekium, Bergerocactus, Blossfeldia, Brachycereus, Browningia, Brasilicereus, Calymmanthium, Carnegiea, Cephalocereus, Cephalocleistocactus, Cereus, Cintia, Cipocereus, Cleistocactus, Coleocephalocereus, Copiapoa, Corryocactus, Coryphantha, Dendrocereus, Denmoza, Discocactus, Disocactus, Echinocactus, Echinocereus, Echinopsis, Epiphyllum, Epithelantha, Eriosyce, Escobaria, Escontria, Espostoa, Espostoopsis, Eulychnia, Facheiroa, Ferocactus, Frailea, Geohintonia, Gymnocalycium, Haageocereus, Harrisia, Hatiora, Hylocereus, Jasminocereus, Lasiocereus, Leocereus, Lepismium, Leptocereus, Leuchtenbergia, Lophophora, Maihuenia, Malacocarpus, Mamrnillaria, Mammilloydia, Matucana, Melocactus, Micranthocereus, Mila, Monvillea, Myrtillocactus, Neobuxbaumia, Neolloydia, Neoraimondia, Neowerdermannia, Obregonia, Opuntia, Oreocereus, Oroya, Ortegocactus, Pachycereus, Parodia, Pediocactus, Pelecyphora, Peniocereus, Pereskia, Pereskiopsis, Pilosocereus, Polaskia, Praecereus, Pseudoacanthocereus, Pseudorhipsalis, Pterocactus, Pygmaeocereus, Quiabentia, Rauhocereus, Rebutia, Rhipsalis, Samaipaticereus, Schlumbergera, Sclerocactus, Selenicereus, Stenocactus, Stenocereus, Stephanocereus, Stetsonia, Strombocactus, Tacinga, Thelocactus, Turbinicarpus, Uebelmannia, Weberbauerocereus, Weberocereus, Yungasocereus ), Campanulaceae (en particulier les espèces: Brighamia), Capparidaceae (en particulier les espèces: Maerua ), Caricaceae (en particulier les espèces: Carica, Jacarathia ), Chenopodiaceae, Cochlospermaceae, Cornmelinaceae (en particulier les espèces: Aneilema, Callisia, Cyanotis, Tradescantia, Tripogandra ), Convolvulaceae (en particulier les espèces: Ipomea, Sictocardia, Turbina), Crassulaceae (en particulier les espèces: Adromischus, Aeonium, Afrovivella, Aichryson, Cotylédon, Crassula, Cremnophila, Crernnosedum, Dudleya, Echeveria, Graptopetalum, Hylotelephium, Hypagophytum, Kalanchoe, Lenophyllum, Meterostachys, Monanthes, Orostachys, Pachyphytum, Perrierosedum, Phedimus, Pistorinia, Prometheum, Pseudosedum, Rhodiola, Rosularia, Sedella, Sedum, Sempervivum, Sinocrassula, Thompsonella, Tylecodon, Umbilicus, Villadia), Cucurbitaceae (en particulier les espèces: Apodanthera, Brandegea, Cephalopentandra, Ceratosanthes, Citrullus, Coccinia, Corallocarpus, Cucumella, Cucumis, Cucurbita, Cyclantheropsis, Dendrosicyos, Doyera, Eureindra, Fevillea, Gerrandanthus, Gynostemma, Halosicyos, Ibervilla, Kedostris, Marah, Momordica, Neoalsomitra, Odosicyos, Parasicyos, Syrigia, Telfairia, Trochomeria, Trochomeriopsis, Tumamoca, Xerosicyos, Zehneria, Zygosicyos ), Didiereaceae (en particulier les espèces: Alluaudia, Alluaudiopsis, Decaria, Didiearâ), Dioscoreaceae (en particulier les espèces: Dioscorea ), Doryanthaceae (en particulier les espèces: Doryanthes), Ericaceae (en particulier les espèces: Sphyrospermum ), Eriospermaceae (en particulier les espèces: Eriospermum), Euphorbiaceae, Fabaceae (en particulier les espèces: Delonix, Dolichos, Erythrina, Neorautanenia, Pachyrhizus, Tylosema), Fouquieriaceae (en particulier les espèces: Fouquieria), Geraniaceae (en particulier les espèces: Monsonia, Pelargonium), Gesneriaceae (en particuler les espèces: Aeschynanthus, Alsobia, Chirita, Codonanthe, Columnea, Nematanthus, Siriningia, Streptocarpus), Hyacinthaceae (en particuler les espèces: Albuca, Bowiea, Dipcadi, Drimia, Drimiopsis, Hyacinthus, Lachenalia, Ledebouria, Litanthus, Massonia, Ornithogalum, Rhadamanthus, Rhodocodon, Schizobasis, Whiteheadia), Icacinaceae (en particuler les espèces: Pyrenacantha ), Lamiaceae (en particuler les espèces: Aeollanthus, Dauphinea, Perrierastrum, Plectranthus, Solenostemon, Tetradenia, Thorncroftia ), Lentibulariaceae, . Loasaceae (en particuler les espèces: Schismocarpus), Loranthaceae (en particuler les espèces: Tapinanthus), Melastomataceae (en particuler les espèces: Medmilla ), Meliaceae (en particuler les espèces: Entandrophragma ), Menispermaceae (en particuler les espèces: Chasmanthera, Stephania, Tinospora), Moraceae (en particuler les espèces: Dorstenia, Ficus ), Moringaceae (en particuler les espèces: Moringa ), Nolanaceae (en particuler les espèces: Nolana), Nolinaceae (en particuler les espèces: Beaucarnea, Calibanus, Dasylirion, Nolina), Orchidaceae, Oxalidaceae (en particuler les espèces: Oxalis), Passifloraceae (en particuler les espèces: Adenia), Pedaliaceae (en particuler les espèces: Pterodiscus, Sesamothamnus, Uncarina), Phyllanthaceae (en particuler les espèces: Phyllanthus), Phytolaccaceae (en particuler les espèces: Phytolacca), Piperaceae (en particuler les espèces: Peperomia), Portulacaceae (en particuler les espèces: Amphipetalum, Anacampseros, Avonia, Calyptrotheca, Ceraria, Cistanthe, Dendroportulaca, Grahamia, Lewisia, Parakeelya, Portulaca, Portulacaria, Schreiteria, Talinella, Talinum), Rubiaceae (en particuler les espèces: Anthorrhiza, Hydnophytum, Hydrophylax, Myrmecodia, Myrmephythum, Phylohydrax, Squamellaria), Ruscaceae (en particuler les espèces: Cordyline, Dracaena, Sansevieria), Sapindaceae (en particuler les espèces: Erythrophysa), Saxifragaceae, Sterculiaceae (en particuler les espèces: Brachychiton, Sterculia), Urticaceae (en particuler les espèces: Laportea, Obertia, Pilea, Sarcopilea), Viscaceae (en particuler les espèces: Viscum), Vitaceae(en particuler les espèces: Cissus, Cyphostemma), Xanthorrhoeaceae et Zygophyllaceae, dans un milieu de culture in vitro de manière à permettre une croissance des cellules, tout en les élicitant, ladite croissance et élicitation étant opérées en milieu in vitro sous une atmosphère gazeuse contenant de l'oxygène et du C02 à une température comprise entre 15°C et 50°C selon un cycle comprenant des périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux (en particulier de 1 à 5 lux) pendant 10 minutes à 12 heures, avantageusement pendant 15minutes et 6heures, de préférence entre 20minutes et 3 heures, périodes d'obscurité séparées l'une de l'autre par une période de luminosité de plus de 100 lux pendant 30 minutes à 24 heures, avantageusement 1 heure à 12 heures, de préférence de 1 à 6 heures (en particulier de plus de 1000 lux, plus spécifiquement de plus de 10000 lux, de préférence de plus de 50000 lux et même plus particulièrement préférée de plus de 100000 lux), en ce que l'on cultive et élicite lesdites cellules végétales différenciées dans leur milieu de culture in vitro pendant un cycle suffisant long en temps pour la synthèse d'une quantité suffisante de métabolites dans les cellules dédifférentiées, en ce que éventuellement, mais avantageusement, on sépare au moins partiellement les cellules du milieu de culture, et en ce qu'on mélange les cellules végétales élicitées du milieu de culture avec un ou plusieurs excipients acceptables pour application topique pour préparer une composition topique-, avantageusement cosmétique, selon l'invention. Les cellules végétales élicitées sont éventuellement, mais avantageusement broyées, par exemple avant et/ou après leur mélange avec un ou plusieurs excipients (par exemple glycérine, glycol(s), huile(s)), mais de préférence au moins après leur mélange à un ou des excipients acceptables (par exemple glycérine, glycol(s), huile(s)) pour application cosmétique (topique).

Dans le procédé selon l'invention, l'atmosphère gazeuse pour la culture et l'élicitation des cellules comprend avantageusement moins de 20% en volume d'oxygène, par exemple de 10 à 19% en volume, plus de 0,5% en volume de C02, de préférence de 1 à 5% en volume de C02, de l'eau pour obtenir une humidité relative de plus de 25%, avantageusement de plus de 50%, par exemple proche de la saturation, de l'azote. Selon un procédé particulier, l'atmosphère est de l'air enrichi en C02 et en humidité si nécessaire. Selon une forme de réalisation avantageuse du procédé selon l'invention, les cellules végétales ont été élicitées en milieu in vitro sous une atmosphère gazeuse contenant de l'oxygène et du C02 à une température comprise entre 15°C et 50°C selon un cycle comprenant au moins quatre, en particulier au moins six, de préférence au moins dix périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux pendant 10 minutes à 12 heures, avantageusement pendant 15minutes et 6heures, de préférence entre 20minutes et 3 heures, périodes d'obscurité séparées l'une de l'autre par une période de luminosité de plus de 100 lux pendant 30 minutes à 24 heures, avantageusement 1 heure à 12 heures, de préférence de 1 à 6 heures, avant éventuellement d'être broyées.

Selon une particularité d'un procédé selon l'invention, les cellules végétales ont été élicitées en milieu in vitro sous atmosphère contenant un degré d'humidité de plus de 50%. Dans des formes de réalisation avantageuses du procédé selon l'invention, les cellules ont été avantageusement préparées en utilisant une ou des caractéristiques suivantes :

- les cellules végétales sont dédifférentiées et élicitées dans un milieu de culture in vitro sous une atmosphère gazeuse contenant de l'oxygène et du C02 à une température comprise entre 15°C et 50°C selon un cycle comprenant des périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux pendant 10 minutes à 12 heures, avantageusement pendant 15rninutes et 6heures, de préférence entre 20minutes et 3 heures, périodes d'obscurité séparées l'une de l'autre par une période de luminosité de plus de 100 lux pendant 30 minutes à 24 heures, avantageusement Iheure à 12 heures, de préférence de 1 à 6 heures (en particulier plus de lOOOlux, plus spécifiquement plus de 50000 et même plus de 100000 lux), avant éventuellement d'être broyées.

- le changement de luminosité lors du passage d'une période de luminosité inférieure à lOlux à une période de luminosité de plus de lOOOlux

(avantageusement plus de 500001ux) se fait en un temps de moins de 5minutes, en particulier de moins de 2 minutes.

- les cellules végétales sont au moins partiellement élicitées par des périodes de luminosité de plus de 50000 lux, en particulier de plus de 100000 lux, par exemple de plus de 150000 lux.

- les cellules végétales sont dédifférentiées et élicitées en milieu in vitro sous atmosphère contenant de l'oxygène (en particulier moins de 21% en volume, plus spécifiquement moins de 20% en volume, par exemple de 10 à 18% en volume) et au moins 1% (en particulier de 2 à 10%) de C02 en volume.

- les cellules végétales sont dédifférentiées et élicitées en milieu in vitro sous une atmosphère gazeuse contenant de l'oxygène et au moins 1% en volume de C02, et une humidité relative d'au moins 50% selon un cycle comprenant des périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux (par exemple de 2 à 51ux) à une température comprise entre 15°C et 30°Cpendant 10 minutes à 12 heures, avantageusement pendant 15minutes et 6heures, de préférence entre 20minutes et 3 heures, périodes d'obscurité séparées l'une de l'autre par une période de luminosité de plus de 1000 lux pendant 30 minutes à 24 heures, avantageusement Iheure à 12 heures, de préférence de 1 à 6 heures (avantageusement de plus de lOOOOlux, de préférence de plus de 50000 lux) à une température de plus de 30°C, lesdites cellules étant ensuite éventuellemnt , mais avantageusement, soumises à une séparation des cellules du milieu de culture, et/ou à une étape de lavage et/ou une étape de séchage et/ou une étape de rinçage et/ou une étape de mélange à un ou des excipients. Les cellules sont avantageusement soumises à une étape de broyage, avantageusement après une étape de lavage et/ou séchage des cellules et/ou une étape de mélange des cellules à un ou des excipients pour application cosmétique.

- les cellules sont d'abord cultivées pour obtenir des cellules dédifférentiées, les cellules dédifférentiées ainsi obtenues sont mise en milieu de culture in vitro pour leur développement sous élicitation.

Dans le procédé selon l'invention, on effectue avantageusement une ou plusieurs des étapes suivantes :

- on soumet lesdites cellules élicitées in vitro à un séchage, avantageusement à une lyophilisation, suivi d'un broyage, avant de mélanger le broyât de cellules avec un ou plusieurs excipients acceptables pour application topique.

- des cellules végétales dédifférenciées sont mises en culture in vitro, élicitées dans le milieu de culture in vitro, séchées, puis broyées, éventuellement après une ou plusieurs étapes de lavage et/ou rinçage et/ou séchage, et dispersées dans une composition de traitement du corps humain.

- les cellules végétales ont été élicitées en milieu in vitro sous une atmosphère gazeuse contenant de l'oxygène et du C02 à une température comprise entre 15°C et 50°C selon un cycle comprenant au moins quatre, en particulier au moins six, de préférence au moins dix périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux pendant 10 minutes à 12 heures, avantageusement pendant 15minutes et ôheures, de préférence entre 20minutes et 3 heures, périodes d'obscurité séparées l'une de l'autre par une période de luminosité de plus de 100 lux pendant 30 minutes à 24 heures, avantageusement 1 heure à 12 heures, de préférence de 1 à 6 heures, avant éventuellement d'être broyées.

- les cellules végétales ont été élicitées en milieu in vitro sous atmosphère contenant un degré d'humidité relative de plus de 50%. - les cellules végétales sont dédifférentiées et élicitées dans un milieu de culture in vitro sous une atmosphère gazeuse contenant de l'oxygène et du C02 à une température comprise entre 15°C et 50°C selon un cycle comprenant des périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux pendant 10 minutes à 12 heures, avantageusement pendant 15minutes et ôheures, de préférence entre 20rninutes et 3 heures, périodes d'obscurité séparées l'une de l'autre par une période de luminosité de plus de 100 lux pendant 30 minutes à 24 heures, avantageusement 1 heure à 12 heures, de préférence de 1 à 6 heures, en particulier plus de lOOOlux, avant éventuellement d'être broyées.

- les cellules végétales sont au moins partiellement élicitées par des périodes de luminosité de plus de 50000 lux, en particulier de plus de 100000 lux.

- les cellules végétales sont dédifférentiées et élicitées en milieu in vitro sous atmosphère contenant de l'oxygène et au moins 1% de C02 en volume.

- les cellules végétales sont dédifférentiées et élicitées en milieu in vitro sous une atmosphère gazeuse contenant de l'oxygène et au moins 1% en volume de C02, et une humidité relative d'au moins 50% selon un cycle comprenant des périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux à une température comprise entre 15°C et 30°C pendant 10 minutes à 12 heures, avantageusement pendant 15 minutes et 6 heures, de préférence entre 20rninutes et 3 heures, périodes d'obscurité séparées l'une de l'autre par une période de luminosité de plus de 1000 lux pendant 30 minutes à 24 heures, avantageusement 1 heure à 12 heures, de préférence de 1 à 6 heures (avantageusement de plus de lOOOOlux, de préférence de plus de 50000 lux) à une température de plus de 30°C, avant d'être broyées.

- le broyage des cellules est opéré pour obtenir un broyât de cellules avec une granulométrie moyenne de particules solides inférieure à 100 μηι, avantageusement inférieure à 10 μπι, de préférence inférieure à 1 μπι.

L'intérêt de ce procédé est qu'il permet d'obtenir des cellules végétales riches en molécules particulières (de la famile des stilbènes, flavanoïdes, néobétanine, alkaloïdes, vitamines, quercetine-3 méthyl éther, acides gras, dérivés de rutine ou rutinoside, acide galique, isorhamnetine, etc.) dans des proportions adéquates en grands volumes tout en répondant aux besoins de l'industrie, notamment : - Le respect de la structure tertiaire des molécules,

- L'absence de solvant et de résidus,

- L'homogénéité des substrats,

- La production continue indépendamment du cycle des saisons,

- La conservation des caractéristiques biologiques et physiologiques sans ajout de conservateur,

- L'absence totale de polluants,

- La production standardisée et reproductible quant à la qualité et la concentration des métabolites,

- L'utilisation de ces suspensions végétales après lyophilisation directe avec utilisation de température inférieure à -30°C. Cette technique permet l'obtention d'une poudre très fine pouvant être dispersée dans des compositions cosmétiques (crèmes, pommades, lotions...). Ces cellules sont susceptibles de libérer directement les principes actifs qu'elles contiennent, sans passage par une extraction à l'aide de solvants organiques (élimination des risques de résidus).

- L'utilisation des extraits cellulaires uniquement après sonification et centrifugation.

- l'utilisation des cellules végétales dédifférenciées et élicitées fraîches, non broyées, mélangées à un excipient cosmétique (par exemple glycérine, glycol(s), huile(s)). Les cellules fraîches sont avanatgeusement isolées du milieu de culture, lavées et éventuellement rincées, avant d'être éventuellement séchées, avant d'être mélangées à un ou des excipients pour application cosmétique.

Cette technologie apporte une alternative utile et innovante aux extractions conventionnelles par solvants. La possibilité d'orienter de manière naturelle (élicitation) la synthèse des métabolites sans porter atteinte à l'intégrité génétique des cellules, représente une garantie de qualité et d'authenticité. De manière tout à fait surprenante les inventeurs ont découvert que l'on pouvait directement incorporer ou disperser les cellules après élicitation, séchage et broyage dans une composition cosmétique et/ ou pharmaceutique. La composition selon l'invention contient alors de la matière des membranes de cellules. Ce procédé présente notamment l'avantage de désactiver les enzymes oxydants sans ajouts d'additifs ou de produits chimiques. Un autre aspect de l'invention permet de concentrer et de diriger la production de phytoalexines sans pertes quantitatives ou qualitatives dues aux extractions et aux filtrages. Un aspect particulier de l'invention est qu'il évite les étapes d'extraction et de filtrage et permet l'obtention d'un broyât de cellules dénué d'additifs, de solvants et de résidus, ledit broyât pouvant être directement dispersé dans une composition cosmétique.

Par composition à usage topique on entend des crèmes, des onguents, des lotions, suspensions, des bâtons, des shampooings, des gels, serums, laits, lotions, crèmes, des solutions (par exemple applicable par spray). La composition à usage topique est par exemple une composition cosmétique, dermatologique, une composition d'hygiène de la peau, un parfum, etc. Préférentiellement selon l'invention, la composition est une composition cosmétique.

Des exemples et compositions suivants illustrent l'invention sans la limiter aucunement. Dans les compositions les . proportions indiquées sont des pourcentages en poids.

Dans ces exemples, on a utilisé un procédé préféré tel que défini en résumé ci- après.

Procédé d'obtention d'un broyât.

Etape 1 : Préparation de cellules dédifférenciées et cultivés dans un milieu de culture in vitro Cette étape de préparation de cellules dédifférenciées a été réalisée de manière classique. Pour cette étape on a utilisé des cellules végétales provenant de plantes appartenant aux familles suivantes :

Agavaceae (en particulier les espèces: Agave, Beschorneria, Chlorophytum, Furcraea, Hesperaloe, Hesperoyucca, Yucca), Aizoaceae , Amaranthaceae (en particulier l'espèce: Arthraerva) , Amàryllidaceae (en particulier l'espèce: Boophane, Brunsvigia, Cyrtanthus, Haemanthus, Rauhia ), Anacardiaceae (en particulier l'espèce: Operculicarya, Pachycormus), Apiaceae (en particulier l'espèce: Steganotaenia ), Apocynaceae (en particulier l'espèce: Adenium, Mandevilla, Pachypodium, Plumeria ), Araceae (en particulier les espèces: Zamioculcas zamiifolia); Araliaceae (en particulier les espèces: Cussonia), Asclepiadaceae (en particulier les espèces: Absolmsia, Asclepias, Aspidoglossum, Aspidonepsis, Baynesia, Brachystelma, Caralluma, Ceropegia, Cibirhiza, Cynanchum, Dischidia, Dischidiopsis, Duvalia, Duvaliandra, Echidnopsis, Edithcolea, Fanninia, Fockea, Glossostelma, Hoodia, Hoya, Huernia, Huerniopsis, Ischnolepis, Larryleachia, Lavrania, Madangia, Marsdenia, Matelea, Micholitzia, Miraglossum, Notechidnopsis, Odontostelma, Ophionella, Orbea, Orbeanthus, Pachycarpus, Pectinaria, Petopentia, Piaranthus, Pseudolithos, Quaqua, Raphionacme, Rhytidocaulon, Riocreuxia, - Sarcorrhiza, Sarcostemma, Schizoglossum, Schlechterella, Stapelia, Stapelianthus, Stapeliopsis, Stathmostelma, Stenostelma, Stomatostemma, Tavaresia, Trachycalymma, Tridentea, Tromotriche, White-sloanea, Xysmalobium), Asparagaceae (en particulier les espèces: Myrsiphyllum), Asphodelaceae ((en particulier les espèces: Aloe, Astroloba, Bulbine, Chortolirion, Gasteria, Haworthia, Poellnitzia, Trachyandra), Asteraceae (en particulier les espèces: Baeriopsis, Coulterella, Crassocephalum, Didelta, Gynura, Osteospermum, Othonna, Polyachyrus, Pteronia, Senecio), Balsaminaceae (en particulier les espèces: Impatiens), Basellaceae (en particulier les espèces: Anredera, Basella ), Begoniaceae (en particulier les espèces: Bégonia ), Bombacaceae (en particulier les espèces: Adansonia, Cavanillesia, Ceiba, Pseudobombax ), Brassicaceae (en particulier les espèces: Heliophila, Lepidium ), Bromeliaceae, Burseraceae (en particulier les espèces: Beiselia, Bursea, Commiphora), Cactaceae (en particulier les espèces: Acanthocalycium, Acanthocereus, Ariocarpus, Armatocereus, Arrojadoa, Arthrocereus, Astrophytum, Austrocactus, Aztekium, Bergerocactus, Blossfeldia, Brachycereus, Browningia, Brasilicereus, Calymmanthium, Carnegiea, Cephalocereus, Cephalocleistocactus, Cereus, Cintia, Cipocereus, Cleistocactus, Coleocephalocereus, Copiapoa, Corryocactus, Coryphantha, Dendrocereus, Denmoza, Discocactus, Disocactus, Echinocactus, Echinocereus, Echinopsis, Epiphyllum, Epithelantha, Eriosyce, Escobaria, Escontria, Espostoa, Espostoopsis, Eulychnia, Facheiroa, Ferocactus, Frailea, Geohintonia, Gymnocalycium, Haageocereus, Harrisia, Hatiora, Hylocereus, Jasminocereus, Lasiocereus, Leocereus, Lepismium, Leptocereus, Leuchtenbergia, Lophophora, Maihuenia, Malacocarpus, Mammillaria, Mammilloydia, Matucana, Melocactus, Micranthocereus, Mila, Monvillea, Myrtillocactus, Neobuxbaumia, Neolloydia, Neoraimondia, Neowerdermannia, Obregonia, Opuntia, Oreocereus, Oroya, Ortegocactus, Pachycereus, Parodia, Pediocactus, Pelecyphora, Peniocereus, Pereskia, Pereskiopsis, Pilosocereus, Polaskia, Praecereus, Pseudoacanthocereus, Pseudorhipsalis, Pterocactus, Pygmaeocereus, Quiabentia, Rauhocereus, Rebutia, Rhipsalis, Samaipaticereus, Schlumbergera, Sclerocactus, Selenicereus, Stenocactus, Stenocereus, Stephanocereus, Stetsonia, Strombocactus, Tacinga, Thelocactus, Turbinicarpus, Uebelmannia, Weberbauerocereus, Weberocereus, Yungasocereus ), Campanulaceae (en particulier les espèces: Brighamia), Capparidaceae (en particulier les espèces: Maerua ), Caricaceae (en particulier les espèces: Carica, Jacarathia ), Chenopodiaceae, Cochlospermaceae, Commelinaceae (en particulier les espèces: Aneilema, Callisia, Cyanotis, Tradescantia, Tripogandra ), Convolvulaceae (en particulier les espèces: Ipomea, Sictocardia, Turbina), Crassulaceae (en particulier les espèces: Adromischus, Aeonium, Afrovivella, Aichryson, Cotylédon, Crassula, Cremnophila, Cremnosedum, Dudleya, Echeveria, Graptopetalum, Hylotelephium ^" , Hypagophytum, Kalanchoe, Lenophyllum, Meterostachys, Monanthes, Orostachys, Pachyphytum, Perrierosedum, Phedimus, Pistorinia, Prometheum, Pseudosedum, Rhodiola, Rosularia, Sedella, Sedum, Sempervivum, Sinocrassula, Thompsonella, Tylecodon, Umbilicus, Villadia), Cucurbitaceae (en particulier les espèces: Apodanthera, Brandegea, Cephalopentandra, Ceratosanthes, Citrullus, Coccinia, Corallocarpus, Cucumella, Cucumis, Cucurbita, Cyclantheropsis, Dendrosicyos, Doyera, Eureindra, Fevillea, Gerrandanthus, Gynostemma, Halosicyos, Ibervilla, Kedostris, Marah, Momordica, Neoalsomitra, Odosicyos, Parasicyos, Syrigia, Telfairia, Trochomeria, Trochomeriopsis, Tumamoca, Xerosicyos, Zehneria, Zygosicyos ), Didiereaceae (en particulier les espèces: Alluaudia, Alluaudiopsis, Decaria, Didieara), Dioscoreaceae (en particulier les espèces: Dioscorea ), Doryanthaceae (en particulier les espèces: Doryanthes), Ericaceae (en particulier les espèces: Sphyrospermum ), Eriospermaceae (en particulier les espèces: Eriospermum), Euphorbiaceae, Fabaceae (en particulier les espèces: Delonix, Dolichos, Erythrina, Neorautanenia, Pachyrhizus, Tylosema), Fouquieriaceae (en particulier les espèces: Fouquieria), Geraniaceae (en particulier les espèces: Monsonia, Pelargonium), Gesneriaceae (en particuler les espèces: Aeschynanthus, Alsobia, Chirita, Codonanthe, Columnea, Nematanthus, Sinningia, Streptocarpus), Hyacinthaceae (en particuler les espèces: Albuca, Bowiea, Dipcadi, Drimia, Drimiopsis, Hyacinthus, Lachenalia, Ledebouria, Litanthus, Massonia, Ornithogalum, Rhadamanthus, Rhodocodon, Schizobasis, Whiteheadia), Icacinaceae (en particuler les espèces: Pyrenacantha ), Lamiaceae (en particuler les espèces: Aeollanthus, Dauphinea, Perrierastrum, Plectranthus, Solenostemon, Tetradenia, Thorncroftia ), Lentibulariaceae, Loasaceae (en particuler les espèces: Schismocarpus), Loranthaceae (en particuler les espèces: Tapinanthus), Melastomataceae (en particuler les espèces: Medinilla ), Meliaceae (en particuler les espèces: Entandrophragma ), Menispermaceae (en particuler les espèces: Chasmanthera, Stephania, Tinospora), Moraceae (en particuler les espèces: Dorstenia, Ficus ), Moringaceae (en particuler les espèces: Moringa ), Nolanaceae (en particuler les espèces: Nolana), Nolinaceae (en particuler les espèces: Beaucarnea, Calibanus, Dasylirion, Nolina), Orchidaceae, Oxalidaceae (en particuler les espèces: Oxalis), Passifloraceae (en particuler les espèces: Adenia), Pedaliaceae (en particuler les espèces: Pterodiscus, Sesamothamnus, Uncarina), Phyllanthaceae (en particuler les espèces: Phyllanthus), Phytolaccaceae (en particuler les espèces: Phytolacca), Piperaceae (en particuler les espèces: Peperomia), Portulacaceae (en particuler les espèces: Amphipetalum, Anacampseros, Avonia, Calyptrotheca, Ceraria, Cistanthe, Dendroportulaca, Grahamia, Lewisia, Parakeelya, Portulaca, Portulacaria, Schreiteria, Talinella, Talinum), Rubiaceae (en particuler les espèces: Anthorrhiza, Hyanophytum, Hydrophylax, Myrmecodia, Myrmephythum, Phylohydrax, Squamellaria), Ruscaceae (en particuler les espèces: Cordyline, Dracaena, Sansevieria), Sapindaceae (en particuler les espèces: Erythrophysa), Saxifragaceae, Sterculiaceae (en particuler les espèces: Brachychiton, Sterculia), Urticaceae (en particuler les espèces: Laportea, Obertia, Pilea, Sarcopilea), Viscaceae (en particuler les espèces: Viscum), Vitaceae(en particuler les espèces: Cissus, Cyphostemma), Xahthorrhoeaceae et Zygophyllaceae.

Cette étape 1 est réalisée en chambre blanche, sous une atmosphère d'air, avec un éclairage constant de plus de lOOOOOlux, à une température de 30°C, et sous une humidité relative de 50%. Cette étape est opérée par repiquage successif d'une partie de la plante, en particulier d'une partie de la racine. L'éclairage était du type émettant à plus de 95% des rayons (en particulier à plus de 99%) dans la gamme lOOnm à 700nm, de préférence 400 à 520 nm.

Etape 2 : repiquage des cellules dédifférenciées de l'étape 1 dans un milieu de culture in vitro pour le développement et l'élicitation des cellules.

Le développement avec élicitation des cellules de l'étape 1 a été opéré dans un milei in vitro sous une atmosphère gazeuse contenant de l'oxygène et du C02 selon un cycle comprenant 100 périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux ( de 1 à 5 lux) pendant 1 heure sous une atmosphère constitué d'air humide (humidité relative de 75%) enrichi de C02 (pour que la teneur en C02 soit de 5%) et présentant une température de 30°C, ces périodes de développement/élicitation sous faible (voire sans) luminosité (avantageusement obscurité sensiblement totale) étant séparées l'une de l'autre par une période de luminosité ou d'éclairage de plus de 100000 lux ( L'éclairage était du type émettant à plus de 95% des rayons (en particulier à plus de 99%) dans la gamme lOOnm à 700nm, de préférence 400 à 520 nm.) pendant 1 heure sous une atmosphère constituée d'air humide (humidité relative de 75%) enrichi de C02 (pour que la teneur en C02 de l'atmosphère soit de 5%) et présentant une température de 45°C. Le passage d'un état d'obscurité à un état éclairé est réalisé par le déplacement d'une paroi opaque. Cette culture est opérée en chambre blanche ou stérile ou asceptique.

On a remarqué que ce procédé de culture et élicitation des cellules permettait d'obtenir une teneur plus importante en phytoalexines, flavanoïdes (ratine, acide gallique, dérivés d'isorhamnetine, etc.) par rapport à celle obtenue par culture in vitro sous sous une atmosphère gazeuse contenant de l'oxygène et du C02 selon un cycle d'éclairage permanent, mais même selon un cycle comprenant des périodes de faible luminosité avec une luminosité de moins de 10 lux ( de 1 à 5 lux) pendant 12 à 24 heures sous une atmosphère constitué d'air humide (humidité relative de 75%) enrichi de C02 (pour que la teneur en C02 soit de 5%) et présentant une température de 30°C, ces périodes de faible (voire sans) luminosité étant séparées l'une de l'autre par une période de luminosité de plus de 100000 lux pendant 12 heures sous une atmosphère constituée d'air humide (humidité relative de 75%) enrichi de C02 (pour que la teneur en C02 de l'atmosphère soit de 5%) et présentant une température de 45°C.

On a également remarqué que l'enrichissement de l'atmosphère en C02 avait un effet possitif sur la formation de phytoalexines, flavanoïdes, etc.

Etape 3 : Extraction des cellules dédifférenciées et élicitées en milieu de culture in vitro, par exemple par filtration du milieu de culture suivi d'une ou de plusieurs étapes de lavage (avec ou sans rinçage), en particulier opérées pour ne pas détruire la structure des membranes des cellules.

Les cellules dédifférenciées et élicitées en milieu de culture, lavées peuvent directement être mélangées à un ou des excipients cosmétiques (voir étape 6).

Par exemple, les cellules fraîches sont mélangées à du glycérol et/ou un ou des glycols et/ou une ou des huiles (avantageusement du type végétale), la proportion en poids du mélange en cellules végétales étant avantageusement de 1 à 20%, ce mélange constituant alors un produit apte à être utilisé dans la préparation d'une composition cosmétique.

Etape 4 éventuelle, mais avantageuse : Séchage ou lyophilisation des cellules dédifférenciées et élicitées en milieu de culture in vitro, cette opération de séchage étant avantageusement opérée pour ne pas détruire la structure des membranes des cellules.

Cette étape est avantageusement opérée à une température inférieure à 60° C, par exemple entre -60° C et 50°C.

Etape 5 éventuelle, mais avantageuse : broyage. Le broyage est opéré pour que la taille des particules soit inférieure à 50μπι. Il est intéressant d'effectuer l'opération de broyage des cellules dédifférentiées et élicitées en présence d'un ou de plusieurs agents ou excipients de la composition cosmétique de manière à assurer la libération des phytoalexines et autres composés provenant des cellules dans au moins certains agents de la composition cosmétique.

Etape 6 : mélange et / ou incorporation à un ou des excipients et/ ou à d'autres principes actifs ( notamment d'autres cellules/ broyais végétaux ) pour la préparation de la composition à usage topique. Par exemple mélange des cellules végétales fraîches dans du glycérol et/ou un ou des glycols et/ou dans une ou des huiles pour obtenir une composition prête à être utilisée pour la préparation d'une composition cosmétique topique par ajout d'un ou d'excipients supplémentaires. Exemple d' Activité pharmacologique antioxydante

L'activité anti-radicalaire des cellules ou des broyats de cellules végétales produits par le procédé décrit ci-avant a été étudiée in vitro, en utilisant un modèle d' épidémies reconstitués SKTNETHIC®, permettant de révéler cette activité par dosage du malondialdéhyde (MDA), après son induction par des rayons ultraviolets B.

En conclusion, les cellules ou le broyât obtenu(es) par le procédé selon l'invention présente(nt) un effet anti-radicalaire aussi bien dans des conditions physiologiques que dans les conditions d'induction par les rayonnements ultraviolets B. Il ressort de cet essai que le broyât présente un effet anti-radicalaire significatif.

Exemple de Dispersion de cellules élicitées (avantageusement broyées) dans une base cosmétique

Les cellules végétales préparées comme décrit ci-avant sont utilisées pour la préparation d'une composition cosmétique. Les cellules sont dispersées après lyophilisation sans avoir été broyées dans la base suivante :

eau déminéralisée 85, 61 %

- huile minérale 9, 00 %

alcool cétylique 3, 00 %

ceteareth - 20 0, 75 %

cellules végétales (broyées ou non) 0, 20 %

- parfum 0, 15 %

carbomer 0, 10 %

- methylchloroisothiazoline

et methylisothiazoline [kathon CG] 0, 065 %

- hydrox de de sodium ^' ( 45 % ) 0, 06 %

- hydroxyanisole de butyle 0, 06 %

TOTAL 100, 00 %

La composition obtenue montre une dispersion homogène des cellules ou du broyât de cellules dans la crème et une granulométrie très fine. L'étude de propreté a montré l'absence de germes et champignons ainsi qu'une remarquable stabilité de la composition. Le résultat obtenu ayant été testé dans une étude transcutanée a permis de voir le passage des principes actifs notamment les polyphénols et autres flavanoïdes à travers le tissu cutané.

Les cellules végétales (broyées ou non) peuvent être utilisées dans des crèmes, lotions, shampoingss, gels, solutions, laits

La proportion des cellules ou du broyât de cellules, sous forme d'une suspension visqueuse ou d'un gel ou d'une poudre sensiblement sèche est fonction de la nature de la composition à usage topique et de l'application souhaitée. Elle est avantageusement comprise entre 0,01 et 5 %, mais peut atteindre jusqu'à 25 %.

Evidemment, l'invention n'est pas limitée aux exemples de réalisation donnés ci-dessus et il est possible de réaliser la composition à usage topique sous d'autres formes, telles que huile, onguent, laques, fards (fond de teint, poudre, rouge à lèvres, crayon, mascara, ombre à paupières) qui entrent aussi dans le cadre de l'invention. Des compositions cosmétiques selon l'invention (avec une teneur de 1% de broyât de cellules végétales - sous forme sèche) ont été testées sur des volontaires. On a remarqué que de telles compositions avait un effet anti-âge, un effet protecteur de la peau, un effet anti oxydant, antiradicalaire, anti fongique, anti acné, de régénation de la peau, etc.