COMPOSITIONS TOPIQUES ET LEURS UTILISATIONS

La présente invention concerne des compositions pour application topique, lesdites compositions étant aptes à limiter l'adhésion de micro-organismes sur la peau des animaux à sang chaud à pelage. Elle concerne en outre des utilisations de telles compositions dans le domaine vétérinaire .

La peau des animaux est constamment agressée par des micro-organismes pathogènes. La couche cornée de l'épiderme, de par son pH, sa teneur relativement faible en eau et la présence de peptides antibiotiques ayant une action bactéricide, joue le rôle de première barrière contre ces micro-organismes pathogènes.

Toutefois, des changements dans la structure de l'épiderme, tels qu'une humidité accrue ou des blessures cutanées, favorisent la colonisation et l'infection de la peau par les micro-organismes pathogènes.

Les antibiotiques permettent de lutter efficacement contre ces micro-organismes pathogènes, grâce à leurs actions bactériostatique et/ou bactéricide.

Néanmoins, compte tenu de l'utilisation large, et parfois abusive, des antibiotiques, les bactéries ont développé une résistance aux antibiotiques limitant voire annulant leurs effets antibactériens. C'est une des raisons pour lesquelles on a cherché à développer de nouveaux moyens de lutte contre les microorganismes pathogènes .

On sait que la surface de certaines bactéries comporte des lectines, qui leur permettent de reconnaître et se fixer à des radicaux sucrés spécifiques des glycoprotéines et glycolipides situés à la surface des cellules épithéliales . On a mis en évidence, in vitro,

qu'en mimant les radicaux sucrés des glycoprotëines et glycolipides des cellules épithéliales, certains saccharides limitent l'adhésion de bactéries telles que Pseudomonas aeruginosa sur des glycoprotéines telles que les fibronectines ("Inhibition of Pseudomonas aeruginosa adhésion to fibronectin by PA-IL and monosaccharides : involvement of a lectin-like process" , Julie Rebiere- Huët, Patrick Di Martino, and Christian Hulen. Can. J. Microbiol./Rev. Can. Microbiol. 50(5): 303-312 (2004)). Ces propriétés dites « anti-adhésives » de certains saccharides ont été utilisées chez l'Homme, par exemple dans des déodorants, ainsi que cela est décrit notamment dans les documents publiés sous les numéros US-4,518,517 et EP-Al-O 561 489. Toutefois, la peau qui recouvre le corps des animaux à sang chaud à pelage se différencie de celle de l'Homme par son épaisseur moins marquée, par l'abondance des poils qui constituent le pelage et par le développement des glandes sébacées, alors que les glandes sudoripares sont très peu représentées. Il n'est donc pas possible d'extrapoler les relations d'interactions entre les bactéries (et plus généralement les pathogènes) et la peau de l'homme à celles existant entre les bactéries et la peau des animaux à sang chaud à pelage. Compte tenu de ce qui précède, un problème que se propose de résoudre l'invention est la mise au point d'une composition pour application topique apte à prévenir et/ou réduire la présence de micro-organismes, en particulier pathogènes, sur la peau des animaux à sang chaud à pelage.

La solution de l'invention à ce problème posé a pour premier objet une composition pour application topique, caractérisée en ce qu'elle comporte au moins un premier

et un deuxième mono- ou oligosaccharid.es, chacun desdits premier et deuxième mono- ou oligosaccharides étant apte à limiter l'adhésion de micro-organismes sur la peau d'animaux à sang chaud à pelage. . Les micro-organismes pathogènes notamment considérés sont Staphylococcus intermedius, Pseudomonas aeruginosa et Malassezia. pachydermatis . En particulier, les animaux à sang chaud et à pelage sont les animaux de compagnie et plus particulièrement les chiens, les chats ou encore les chevaux .

Elle a pour second objet l'utilisation d'un premier et d'un deuxième mono- ou oligosaccharide, chacun desdits premier et deuxième mono- ou oligosaccharides étant apte à limiter l'adhésion de micro-organismes, pour la préparation d'une composition topique destinée à la prévention, pour l'aide au contrôle ou au traitement des affections cutanées des animaux à sang chaud à pelage .

Par ailleurs, elle a pour objet additionnel, une composition comprenant des vecteurs micro- ou nanoparticulaires chargés, des vecteurs micro- ou nanoparticulaires non chargés, lesdits vecteurs comprenant au moins un actif tel qu'un mono- ou oligosaccharide .

La présence d'un seul mono- ou oligosaccharide apte à limiter l'adhésion de micro-organismes dans une composition permet d'inhiber de façon spécifique l'adhésion d'un nombre limité de familles de microorganismes pathogènes spécifiques. Cependant, lorsque, selon l'invention, une composition comprend au moins deux mono- ou oligosaccharides chacun desdits mono- ou oligosaccharides étant apte à limiter l'adhésion de micro-organismes, l'inhibition des micro-organismes touche un nombre bien plus important de familles et une

inhibition efficace des micro-organismes est observée de sorte que l'adhérence des micro-organismes pathogènes sur la peau des animaux à sang chaud à pelage est considérablement diminuée. L'adjonction d'un troisième mono- ou oligosaccharide est encore très avantageuse. Néanmoins, l'adjonction de nombreux autres mono- ou oligosaccharides ne montrerait que peu d'utilité.

L' invention sera mieux comprise à la lecture de la description non limitative qui va suivre. La composition selon l'invention comprend au moins un premier et un deuxième mono- ou oligosaccharide, ledit premier mono- ou oligosaccharide étant différent dudit deuxième mono- et/ou oligosaccharide.

Les monosaccharides sont des molécules constituées de trois éléments chimiques : le carbone, l'hydrogène et l'oxygène. Ils comportent de 3 à 8 atomes de carbone. Parmi les monosaccharides les plus répandus, on trouve les pentoses, tels que l'arabinose, le ribose, le ribulose, le xylose, le xylulose et le lyxose, et les hexoses, tels que l'allose, l'altrose, le fructose, le galactose, le glucose, le gulose, l'idose, le mannose, le rhamnose, le sorbose, le talose et le tagatose.

Les oligosaccharides sont des oligomères homogènes ou hétérogènes constitués des monosaccharides précités. En pratique, il s'agit de di-, tri- ou de tétramères de monosaccharides .

Selon l'invention, les premier et deuxième mono- ou oligosaccharides sont chacun aptes à prévenir et/ou limiter l'adhésion de micro-organismes sur la peau d'animaux à sang chaud à pelage, en particulier, sur les kératinocytes de la peau de ces animaux et, plus particulièrement, aux cornéocytes de la peau de ces animaux. A cet effet, ils miment les radicaux sucrés des

glycoprotëines et glycolipides, entrent en compétition avec ces glycoprotéines et glycolipides, et empêchent ainsi la fixation des bactéries et des levures. Ainsi, en ciblant les mécanismes d'attachements spécifiques des micro-organismes pathogènes aux cellules et tissus de la peau, l'invention permet de prévenir ou limiter le processus de colonisation et d' infection des microorganismes pathogènes sur les animaux à sang chaud à pelage. Parmi les premiers ou deuxièmes monosaccharides susceptibles d'entrer dans les compositions selon l'invention, on choisira avantageusement les pentoses et les hexoses . A titre d'exemple non limitatif de pentoses, on peut citer le D-arabinose. A titre d'exemples non limitatifs d' hexoses, on peut citer le D-fucose, le L- fucose, le D-galactose, le D-glucose, le D-mannose et le L-rhamnose .

Parmi les premiers ou deuxièmes oligosaccharides susceptibles d'entrer dans les compositions selon l'invention, on choisira avantageusement des oligomères homogènes ou hétérogènes constitués des monosaccharides précités .

Les mono- ou oligosaccharides précités montrent tous au moins des propriétés anti-adhésives. Avantageusement, la composition selon l'invention comprend en outre un troisième mono- ou oligosaccharide, ledit troisième mono- ou oligosaccharide étant différent desdits premier et deuxième mono- ou oligosaccharides.

Ce troisième mono- ou oligosaccharide est avantageusement lui-même aptes à limiter l'adhésion de micro-organismes sur la peau des animaux à sang chaud à pelage.

Lorsque le troisième mono- ou oligosaccharide selon l'invention est un monosaccharide, il est avantageusement choisi parmi les pentoses et les hexoses. A titre d'exemple non limitatif de pentoses, on peut citer le D- arabinose. A titre d'exemples non limitatifs d' hexoses, on peut citer le D-fucose, le L-fucose, le D-galactose, le D-glucose, le D-mannose et le L-rhamnose.

Parmi les troisièmes oligosaccharides susceptibles d'entrer dans les compositions selon l'invention, on choisira avantageusement des oligomères homogènes ou hétérogènes constitués des monosaccharides précités.

Les premier, deuxième et/ou troisième mono- ou oligosaccharides sont avantageusement aptes à diminuer la production de TNF-α par les kératinocytes de la peau d'animaux à sang chaud à pelage. On notera que cette action sur la production de TNF-α a récemment été mise en évidence, in vitro, sur des kératinocytes canins (« in vitro assays for canine keratinocyte activation : modulation by fucose, arabinose and rhamnose », C. Ibisch, P. Bourdeau, C. Cadiot et H. Gatto. 17th ESVD- ECVD Congress, Copenhagen 2001) . La diminution de la production de TNF-α a un effet immunomodulateur et entraîne une diminution de l'inflammation cutanée. Ainsi, elle a donc un effet anti-irritant . De façon avantageuse, le premier mono- ou oligosaccharide de la composition selon l'invention est le L-rhamnose ou un oligomère homogène constitué de L- rhamnose, le deuxième mono- ou oligosaccharide de la composition selon l'invention est le D-galactose ou un oligomère homogène constitué de D-galactose et le troisième mono- ou oligosaccharide de la composition selon l'invention est le D-mannose ou un oligomère homogène constitué de D-mannose.

De surcroît, la composition selon l'invention comporte en outre avantageusement un alkylpolyglucoside. Les alkylpolyglucosides (APG) selon l'invention sont des substances constituées de un ou plusieurs résidus de glucose et d'un groupement alkyl, résultant de la condensation d'un alcool gras avec du glucose ou un de ses polymères .

Ainsi que cela est illustré dans l'exemple 2 ci- après, les alkylpolyglucosides selon l'invention sont aptes à prévenir et/ou limiter l'adhésion de certains micro-organismes, tels que, notamment, Staphylococcus intermedius, sur la peau d'animaux à sang chaud à pelage. La présence de tels alkylpolyglucosides dans les compositions selon l'invention permet donc d'élargir l'action inhibitrice de l'adhésion à une gamme plus large de micro-organismes peu ou pas sensibles aux propriétés antiadhésives des mono- ou oligosaccharides . De manière avantageuse, l' alkylpolyglucoside utilisé dans la composition selon l'invention est le lauryl diglucoside. Par ailleurs, selon l'invention, les premiers, deuxièmes et/ou troisièmes mono- ou oligosaccharides et/ou l' alkylpolyglucoside sont avantageusement contenus dans des vecteurs micro- ou nanoparticulaires . En pratique, 5 à 90% des mono- ou oligosaccharides et/ou 1' alkylpolyglucoside sont contenus dans ces vecteurs.

Parmi les vecteurs micro- ou nanoparticulaires, on peut utiliser tous les systèmes de vectorisation permettant une libération contrôlée des mono- ou oligosaccharides selon l'invention tels que les microcapsules, les microsphères, les complexes macromoléculaires, les nanosphères, les nanocapsules , les latex ou les vésicules.

A titre d'exemples non limitatif de vecteurs micro- ou nanoparticulaires, on peut citer les vésicules multilammellaires commercialisées par la société NOVAVAX™ sous la dénomination Novasomes™, les vésicules multilammellaires sphériques à structure en oignon dénommées Sphérulites™, les microcapsules à base de polyuréthane , de résine de polyurée, de résine de polyamide, de résine de polyamide-polyurée, de résine de polycarbonate, de résine de polysulfonate et de résine de polysulfonamide .

En particulier, les Sphérulites™ peuvent encapsuler des molécules hydrophiles ou hydrophobes avec des rendements d' encapsulation de l'ordre de 90%. Les molécules qu'elles encapsulent sont libérées de façon progressive. La libération des composés encapsulés peut être régulée de façon cinétique ou thermodynamique.

Les vecteurs micro- ou nanoparticulaires selon l'invention ont un diamètre compris entre 0,01μm et 150μm. Dans le cas où ces vecteurs sont des vecteurs nanoparticulaires, leur diamètre est préfërentiellement compris entre 0,lμm et 0,5μm et, dans le cas où ces vecteurs sont des vecteurs microparticulaires, leur diamètre est préférentiellement compris entre Iμm et 50μm. Par ailleurs, les vecteurs micro- ou nanoparticulaires selon l'invention sont chargés ou non chargés .

Lorsque ces vecteurs sont chargés, ils sont avantageusement cationiques. Dans ce cas, grâce à leur charge positive, ces vecteurs se fixent non seulement sur la peau des animaux mais aussi sur les poils de leur pelage. Ils assurent une libération régulière et contrôlée des mono- ou oligosaccharides et/ou de

l'alkylpolyglucoside à la surface de la peau et sur les poils. Ainsi, même après une action mécanique, par exemple de nettoyage de l'animal, les bénéfices de la composition selon l'invention sont conservés. Cet effet de relargage progressif permet un maintient dans le temps de l'action des mono- ou oligosaccharides et/ou de l'alkylpolyglucoside sur l'adhérence des bactéries.

Lorsque les vecteurs micro- ou nanoparticulaires selon l'invention ne sont pas chargés, ils sont dits non ioniques. Dans ce cas, en plus de l'effet de relargage prolongé précité, leur présence favorise la diffusion des mono- ou oligosaccharides et/ou de l'alkylpolyglucoside au travers de la peau. Aussi, lorsque les mono- ou oligosaccharides et/ou l'alkylpolyglucoside présents dans les vecteurs ont un effet inhibiteur sur l'activation des kératinocytes et sur la sécrétion de TNF-α, les effets de diminution de l'inflammation cutanée sont améliorés. En outre, comme les micro-organismes pathogènes adhèrent plus facilement sur des peaux enflammées que sur des peaux saines, la diffusion des mono- ou oligosaccharides et/ou l'alkylpolyglucoside, favorisée par la présence des vecteurs micro- ou nanoparticulaires non ioniques, à travers la peau, permet la réduction de l'inflammation de la peau et, de facto, limite de façon indirecte l'adhésion des bactéries, souvent elle-même cause de l ' inflammation.

Dans un mode de réalisation avantageux, la composition selon l'invention comporte à la fois des vecteurs micro- ou nanoparticulaires cationiques et des vecteurs micro- ou nanoparticulaires non ioniques. Dans ce cas, l'intérêt réside dans la contribution respective de chaque type de vecteur à la diminution de l ' adhérence des bactéries. Tout d'abord, les mono- ou

oligosaccharides libres (non vectorisés) et/ou l'alkylpolyglucoside libre ont une action directe et immédiate sur l'adhérence des bactéries. Ensuite, les vecteurs micro- ou nanoparticulaires cationiques de la composition permettent une action directe et prolongée des mono- ou oligosaccharides et/ou de l'alkylpolyglucoside sur l'adhérence des bactéries alors que les vecteurs micro- ou nanoparticulaires non ioniques exercent par ailleurs un effet anti-irritant qui diminue l'inflammation de la peau et réduit l'adhésion des bactéries .

Ainsi, la composition selon l'invention présente à la fois un effet immunomodulateur amélioré par une meilleure diffusion des mono- ou oligosaccharides et/ou alkylpolyglucosides encapsulés dans des vecteurs micro- ou nanoparticulaires non-ioniques à travers la peau, mais également une action anti-adhésive prolongée par la présence de mono- ou oligosaccharides et/ou alkylpolyglucosides encapsulés dans des vecteurs micro- ou nanoparticulaires cationiques.

On notera que la composition selon l'invention peut comporter en outre des agents antiseptiques, des agents chélateurs, des agents kêratolytiques, kératorégulateurs , antiséborrhéiques et des agents nettoyants ou émollients. A titre d'exemples non limitatifs d'agents antiseptiques pouvant entrer dans la composition selon l'invention, on peut citer la chlorhexidine, l ' hexachlorophêne, le parachlorométaxylenol, la piroctone olamine et le triclosan, pris seuls ou en mélange. A titre d'exemples non limitatifs d'agents chélateurs pouvant entrer dans la composition selon l'invention, on peut citer le diéthylène triamine pentaacétique et l'éthylènediaminetêtracétate, pris seuls ou en mélange. A

titre d'exemples non limitatifs d'agents kératolytiques, kératorégulateurs ou antiséborrhéigues pouvant entrer dans la composition selon l'invention, on peut citer l'acide lactique, l'acide salicylique, l'argent nitrate, le soufre et l'urée, le lactate d'ammonium, le gluconate de zinc, pris seuls ou en mélange. Enfin, à titre d'exemples non limitatifs d'agents nettoyants ou émollients pouvant entrer dans la composition selon l'invention, on peut citer l'acide linoléique, le cocoglucoside, le decyl glucoside, le disodium cocoamphodiacétate, le disodium laureth, le docusate de sodium, le sodium stéarate et le sulfosuccinate, pris seuls ou en mélange.

En pratique, les compositions topiques selon l'invention sont plus particulièrement destinées au traitement de la peau et des muqueuses et peuvent se présenter sous forme d'onguents, de crèmes, de laits, de pommades, de tampons imbibés, de syndets, de solutions, de gels, de sprays, de mousses, de suspensions, de lotions, de shampooings, ou de bases lavantes.

Ces compositions sont utilisées comme produits cosmétiques ou pharmaceutiques, à usage vétérinaire. Plus particulièrement, elles sont utilisées pour l'hygiène des animaux à sang chaud à pelage, pour l'aide au contrôle, pour la prévention ou pour le traitement des dermatites irritatives, de la dermatite atopique, du syndrome keratosêborrhéique, des otites externes, de la pyodermite ou de la dermatite à Malassez±a des animaux à sang chaud à pelage. L'invention concerne donc l'utilisation de mono- ou oligosaccharides pour la préparation d'une composition topique pour l ' aide au contrôle ou pour la préparation d'un médicament pour le traitement des dermites

irritatives, de la dermatite atopique, du syndrome keratoséborrhéique, des otites externes, de la pyodermite ou de la dermatite à Malassezia des animaux à sang chaud à pelage ainsi que des méthodes pour le traitement de ces affections cutanées des animaux à sang chaud à pelage mettant en œuvre l'utilisation d'une composition contenant des mono- ou oligosaccharides .

Bien entendu, le choix des mono- ou oligosaccharides et/ou de l'alkylpolyglucoside présents dans la composition, du nombre de mono- ou oligosaccharides et/ou de l'alkylpolyglucoside présents, d'une encapsulation éventuelle dans des vecteurs, est déterminé par l'utilisation finale de la composition selon l'invention.

Dans un exemple particulièrement adapté à l'aide au contrôle de la dermatite atopique du chien, la composition selon l'invention est une lotion comportant au moins deux monosaccharides spécifiques, le L-fucose et le L-rhamnose, ces monosaccharides étant contenus dans des vecteurs de type Sphérulites™. Dans un autre exemple, cette fois particulièrement adapté aux otites externes du chien, la composition selon l'invention est une solution comportant trois monosaccharides, le L-rhamnose, le D- mannose et le D-galactose. Dans un dernier exemple, particulièrement adapté à la prévention de la pyodermite du chien, la composition est un shampooing comportant trois monosaccharides, tels que décrits précédemment, associés à un alkylpolyglucoside.

La présente invention va maintenant être illustrée au moyen des exemples 1 et 2 de réalisation suivants : Exemple 1

Une étude comparant l'inhibition, par des monosaccharides, de l'adhérence de trois souches différentes de Pseudomonas, Pl, P2, P3 , a été menée sur

des cornéocytes canins . Les trois monosaccharid.es étudiés sont respectivement le D-galactose, le D-mannose et le L- rhamnose .

Les trois souches de Pseudomonas ont été prélevées sur des chiens atteints d'otite infectieuse. Des cornéocytes ont été prélevés sur six chiens sains différents à l'aide de disques adhésifs de marque D- squame™, commercialisés par la société CuDerm™.

On a réalisé des suspensions bactériennes contenant chacune une des trois souches Pl, P2 ou P3, et du PBS (tampon phosphate salé) avec ou sans monosaccharides à deux concentrations (0,05% et 0,1%). Ces suspensions ont chacune été placées sur une couche de cornéocytes . Ces couches ont fait l'objet d'une incubation dans une chambre humide. Après incubation, les cornéocytes ont été lavés et colorés . Les Pseudomonas adhérents ont ensuite été quantifiés par analyse d'image assistée par ordinateur .

Le pourcentage d'adhérence des souches en présence de monosaccharides est ensuite calculé par rapport au pourcentage d'adhérence des souches sans monosaccharides (contrôle positif) .

Les pourcentages d'adhérence sont comparés pour les trois souches Pl à P3 par rapport au contrôle positif (100%) .

Le pourcentage d'inhibition moyen pour les trois souches de Pseudomonas est de 25,6% pour le D-galactose, de 19,4% pour le D-mannose et de 30,8% pour le L- rhamnose . II apparaît que chacun des trois monosaccharides limite l'adhérence de Pseudomonas sur les cornéocytes. Lorsque les trois monosaccharides sont utilisés en

combinaison, on observe, de manière surprenante, un pourcentage d'inhibition moyen de 53,4%.

Il y a donc une conjugaison d'action lorsque, selon l'invention, une pluralité de mono- ou oligosaccharides, ayant chacun des propriétés anti-adhésives sont présents dans la composition. C'est à tout le moins le cas, lorsque la composition selon l'invention comprend trois mono- ou oligosaccharides présentant ces propriétés.

Exemple 2 Une étude comparant l'inhibition par des alkylpolyglucosides (Plantaren™ 1200) de l'adhérence de trois souches différentes de Staphylococcus intermedius, Sl, S2, S3, a été menée sur des cornéocytes canins.

Les trois souches de Staphylococcus intermedius ont été prélevées sur des chiens atteints de pyodermite

(canine pyoderma) . Des cornéocytes ont été prélevés sur des chiens sains différents, n'ayant pas subi de traitement topique ou systémique dans les trois semaines précédant le prélèvement, à l'aide de disques adhésifs de marque D-squame™, commercialisés par la société CuDerm™.

On a réalisé des suspensions bactériennes contenant chacune une des trois souches Sl, S2 ou S3 , et du PBS

(tampon phosphate salé) avec ou sans saccharides à une concentration de 1%. Ces suspensions ont chacune été placées sur une couche de cornéocytes . Ces couches ont fait l'objet d'une incubation dans une chambre humide.

Après incubation, les cornéocytes ont été lavés et colorés. Les Staphylococcus Intermedius adhérents ont ensuite été quantifiés par analyse d' image assistée par ordinateur .

Le pourcentage d'adhérence des souches en présence de saccharides est ensuite calculé par rapport au

pourcentage d'adhérence des souches sans saccharides (contrôle positif) .

Les pourcentages d'adhérence sont comparés pour les trois souches Sl à S3 par rapport au contrôle positif (100%) .

Le pourcentage d'inhibition moyen pour les trois souches de Staphylococcus ±ntermedius est de 47.71% pour les alkylpolyglucosides .

Il apparaît ainsi que les alkylpolyglucosides limitent l'adhérence de Staphylococcus intermedlus sur les cornéocytes .