本发明涉及一种中药组合物及其制备方法，具 体涉及一种治疗抑郁症的中 药组合物及其制备方法， 属于医药领域。 背景技术

抑郁症是一种常见的精神疾病，其患病率预计 到 2020年将跃升到第 2位。 其发病机制众说纷纭，学者们认为可能是心理 社会因素和各种生物学改变等多 种因素交互作用的结果。其中，心理社会因素 主要有紧张的工作和快节奏生活， 不良人际关系， 突发生活事件打击等； 生化机制方面主要包括单胺假说， 受体 假说， 内分泌假说， 免疫改变等。 单胺神经递质假说认为抑郁时， 中枢的单胺 神经递质 （5-HT、 NE、 DA ) 的含量降低。 内分泌假说主要涉及 HPA (下丘 脑-垂体-肾上腺皮质）轴， 应激时， HPA轴兴奋， 主要引起 CRH、 ACTH (促 肾上腺皮质激素释放激素、 促肾上腺皮质激素） 以及 GC (糖皮质激素） 的含 量增多， 而增多的 GC又抑制免疫反应。

因此， 开发针对单胺神经递质的药物成为业内亟需解 决的技术问题。 发明内容

本发明釆用 CUMS抑郁模型大鼠筛选具有良好治疗抑郁症效� �的中药组 合物产品。

本发明第一个解决的技术问题在于提供一种治 疗抑郁症的中药组合物； 本发明第二个解决的技术问题在于提供该中药 组合物的制备方法。

本发明的解决的技术问题是通过如下技术方案 实现的：

一种治疗抑郁症的中药组合物， 该中药组合物的原料药组成为： 淫羊藿 8-35重量份、 制何首乌 20-75重量份、 黄芪 10-50重量份。

进一步的， 其原料药组成为：

淫羊藿 9-30重量份、 制何首乌 25-70重量份、 黄芪 12-45重量份。 更进一步的， 其原料药组成为：

淫羊藿 10-25重量份、 制何首乌 30-65重量份、 黄芪 15-35重量份。 更进一步的， 其原料药组成为：

淫羊藿 10-20重量份、 制何首乌 35-65重量份、 黄芪 15-27重量份。 更进一步的， 其原料药组成为：

淫羊藿 15重量份、 制何首乌 50重量份、 黄芪 22重量份；

或， 淫羊藿 25重量份、 制何首乌 50重量份、 黄芪 22重量份； 或， 淫羊藿 15重量份、 制何首乌 50重量份、 黄芪 36重量份。

本发明中药组合物可采用如下方法制备：

按比例取原料药， 以水或与水互溶的有机溶剂提取；

进一步， 所述与水相互溶的有机溶剂选自曱醇、 乙醇、 丙酮中的一种或几 种； 更进一步优选为 50-90%的乙醇； 更进一步优选为 60-80%的乙醇。

本发明中药组合物还可采用如下方法制备：

按比例取原料药， 釆用水提醇沉法制备； 其中所述醇沉浓度为 50-90%; 进一步， 所述醇沉浓度为 60-80%。

本发明中药组合物除采用上述对原料药进行合 并提取的方法制备外， 还 可以采用分别对各原料药进行单独提取的方法 制备， 具体方法如下：

按比例取淫羊藿、 黄芪、 制何首乌药材， 分别以水提取， 或以与水互溶的 有机溶剂提取， 或进行水提醇沉， 制备得到淫羊藿提取物、 黄芪提取物、 制何 首乌提取物， 将淫羊藿提取物、 黄芪提取物、 制何首乌提取物合并， 即得； 其 中所述与水相互溶的有机溶剂选自曱醇、 乙醇、 丙酮中的一种或几种； 所述醇 沉浓度为 50-90%;

进一步， 所述与水相互溶的有机溶剂为 50-90%的乙醇； 更进一步优选为 60-80%的乙醇；

进一步， 所述醇沉浓度为 60-80%;

进一步， 所述淫羊藿提取物、 黄芪提取物、 制何首乌提取物可以进一步精 致， 如釆用过打孔吸附树脂柱。

上述制备方法中所用的提取方法包括煎煮提取 、 回流提取、 浸泡提取、超 声提取或渗漉提取中的一种或几种方式。 进一步， 本发明中药组合物的制备方法包括如下步骤：

A、取淫羊藿药材， 水煎煮提取，提取液加乙醇醇沉， 制备淫羊藿提取物；

B、 取黄芪药材， 水煎煮提取， 提取液浓缩得黄芪提取物；

C、 取制何首乌药材， 水煎煮提取， 提取液加乙醇醇沉， 制备何首乌提取 物；

D、 取淫羊藿提取物、 黄芪提取物、 制何首乌提取物， 混合。

进一步， 本发明中药组合物的制备方法包括如下步骤：

A、 取淫羊藿药材， 水煎煮提取， 提取液加乙醇至含醇量为 60%-80%， 过 滤， 滤液调节 pH为弱碱性， 过滤， 滤液调节 pH至中性， 回收乙醇， 得淫羊 藿提取物；

B、 取黄芪药材， 水煎煮提取， 提取液浓缩得黄芪提取物；

C、 取制何首乌药材， 水煎煮提取， 提取液加乙醇至含醇量为 70%-80%， 过滤， 滤液调节 pH为弱碱性， 过滤， 滤液调节 pH至中性， 回收乙醇， 得制 何首乌提取物；

D、 取淫羊藿提取物、 黄芪提取物、 制何首乌提取物， 混合， 即得。

更进一步， 步骤 A水提取液进行两次醇沉， 第一次醇沉浓度为 65%-70%， 第二次为 75%-80%； 更进一步的， 第一次醇沉浓度为 65%， 第二次为 80%。

更进一步， 步骤 C水提取液进行两次醇沉， 第一次醇沉浓度为 65%-70%， 第二次为 75%-80%； 更进一步的， 第一次醇沉浓度为 70%， 第二次为 80%。

更进一步， 步骤 A、 C所述弱碱性为 pH8.0-9.0。

更进一步， 步骤 A、 C进行醇沉及调节 pH后， 静置 12-36小时。

上述制备方法中原料药经提取后还可经纯化、 精制， 如过大孔树脂柱； 并 进一步按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的 任意常规剂型，包括颗粒、片剂、 胶嚢、 滴丸、 口 良液、 混悬液、 乳浊液、 注射剂。

为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时 加入药学可接受的辅料，例 如： 填充剂、 崩解剂、 润滑剂、 助悬剂、 粘合剂、 甜味剂、 矫味剂、 防腐剂、 基质等。 填充剂包括： 淀粉、 预胶化淀粉、 乳糖、 甘露醇、 曱壳素、 微晶纤维 素、 蔗糖等； 崩解剂包括： 淀粉、 预胶化淀粉、 微晶纤维素、 羧曱基淀粉钠、 交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、 交联羧曱基纤维素钠等； 润滑剂包 括： 硬脂酸鍈、 十二烷基硫酸钠、 滑石粉、 二氧化硅等； 助悬剂包括： 聚乙烯 吡咯烷酮、 微晶纤维素、 蔗糖、 琼脂、 羟丙基曱基纤维素等； 粘合剂包括： 淀 粉浆、 聚乙烯吡咯烷酮、 羟丙基曱基纤维素等； 甜味剂包括： 糖精钠、 阿斯帕 坦、 蔗糖、 甜蜜素、 甘草次酸等； 矫味剂包括： 甜味剂及各种香精； 防腐剂包 括： 尼泊金类、 苯曱酸、 苯曱酸钠、 山梨酸及其盐类、 苯扎溴铵、 醋酸氯乙定、 桉叶油等； 基质包括： PEG6000, PEG4000, 虫蜡等。 为使上述剂型能够实现 中药药剂学， 需在制备这些剂型时加入药学可接受的其它辅 料（范碧亭《中药 药剂学》， 上海科学出版社 1997年 12月第 1版中各剂型记载的辅料）。

本发明所述中药组合物除了以淫羊藿、制何首 乌、黄芪原药材投料的形式 外，还可以釆用以淫羊藿、制何首乌、黄芪的 提取物（有效部位）投料的形式， 因此本发明进一步公开了一种治疗抑郁症的中 药组合物：

一种治疗抑郁症的中药组合物， 该中药组合物的原料组成为：

淫羊藿提取物 8-35重量份、 制何首乌提取物、 20-75重量份、 黄芪提取物 10-50重量份。

进一步， 其原料药组成为：

淫羊藿提取物 9-30重量份、 制何首乌提取物 25-70重量份、 黄芪提取物 12-45重量份。

更进一步， 其原料药组成为：

淫羊藿提取物 10-25重量份、 制何首乌提取物 30-65重量份、 黄芪提取物 15-35重量份。

更进一步， 其原料药组成为：

淫羊藿提取物 10-20重量份、 制何首乌提取物 35-65重量份、 黄芪提取物 15-27重量份。

更进一步， 其原料药组成为：

淫羊藿提取物 15重量、 制何首乌提取物 50重量份、 黄芪提取物 22份； 或， 淫羊藿提取物 25重量份、 制何首乌提取物 50重量份、 黄芪提取物 22重量份；

或， 淫羊藿提取物 15重量份、 制何首乌提取物 50重量份、 黄芪提取物 36重量份。 本发明所述淫羊藿提取物、 制何首乌提取物、 黄芪提取物分别为淫羊藿、 制何首乌、黄芪的水提取物或与水相互溶的有 机溶剂提取物； 或， 分别为淫羊 藿、 制何首乌、 黄芪经水提醇沉处理后得到的提取物。

其中， 所述与水相互溶的有机溶剂选自曱醇、 乙醇、 丙酮中的任意一种； 进一步优选为浓度为 50%-90%的乙醇； 更进一步优选为浓度为 60%-80%的乙 醇；

所述醇沉浓度为 50%-90%%； 进一步优选为醇沉浓度 60%-80%。

进一步， 所述淫羊藿提取物釆用如下方法制备： 取淫羊藿药材， 水煎煮提 取，提取液加乙醇至含醇量为 60%-80%，过滤， 滤液调节 pH为弱碱性，过滤， 滤液调节 pH至中性， 回收乙醇， 得淫羊藿提取物； 更进一步的， 提取液进行 两次醇沉， 第一次醇沉浓度为 65%， 第二次为 80%; 更进一步的， 所述弱碱 性为 pH8.0-9.0; 更进一步的， 进行醇沉及调节 pH后， 静置 12-36小时；

所述制何首乌提取物釆用如下方法制备： 取制何首乌药材， 水煎煮提取， 提取液加乙醇至含醇量为 70%-80%， 过滤， 滤液调节 pH为弱碱性， 过滤， 滤 液调节 pH至中性， 回收乙醇， 得制何首乌提取物； 更进一步的， 提取液进行 两次醇沉， 第一次醇沉浓度为 70%， 第二次为 80%; 更进一步的， 所述弱碱 性为 pH8.0-9.0; 更进一步的， 进行醇沉及调节 pH后， 静置 12-36小时；

本发明所述制何首乌参照 2010版《中国药典》第一部收载的 "制何首乌" 制备。

本发明所述水提醇沉法系指在中药水提浓缩液 中，加入乙醇使达到规定的 含醇量（即醇沉浓度）， 某些成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀， 滤过， 取 乙醇溶液， 回收乙醇得提取物， 使水提液得以精制的方法。

实验研究表明， 本发明中药组合物 （CF 4 ) 能明显升高 CUMS模型鼠的 Open-field评分、 体重、 胸腺和脾脏系数、 海马 5-HT、 NE、 DA的含量以及海 马 CA3区神经元总数目和正常神经元的百分比（P� � <0.05 )， 能明显降低血清 5-HT、 NE、 DA、 ACTH、 CORT、 β-ΕΡ含量、 肾上腺系数以及肾上腺皮质厚 度（Ρ均 <0.05 )。 附图说明 图 1 大鼠海马 CA3区神经元， HE染色， χ400，

图 1-1、 正常组的大鼠海马 CA3区神经元， HE染色， χ400，

图 1-2、 模型组的大鼠海马 CA3区神经元， HE染色， χ400，

图 1-3、 模型 +舍曲林组的大鼠海马 CA3区神经元， HE染色， χ400， 图 1-4、 模型 +HLS组的大鼠海马 CA3区神经元， HE染色， χ400， 图 1-5、 模型 +CF4组的大鼠海马 CA3区神经元， HE染色， χ400。 效果实验例

实验例 1

1 材料

1.1 动物 清洁级全雄昆明鼠 260只， 6~8周龄， 体质量 24~29 g， 四川大 学实验动物中心提供， 合格证： 川实动管质第 10号， 实验前动物适应性饲养 3~5天。 饲养环境， 室温 20~25 °C， 湿度 55~70%， 自由摄食饮水。

1.2 药品与试剂

对照药物 盐酸舍曲林片 （Sertraline ) ( 110801 )， 大连辉瑞制药有限公 司， 临用前配制成 37.5%、 62.5%浓度的 0.5% CMC-Na混悬液。

实验药物 1 HLS: 制何首乌 1000g、 黄芪 440g、 黄精（制） 440g、 淫羊 藿 300g、 枸杞子 300g、 丹参 220g;

制备方法： 以上六味， 制何首乌、丹参、枸杞子加水煎煮三次，合并 煎液， 滤过， 滤液浓缩至糖浆状， 放冷， 加乙醇使含醇量达 70 %， 放置， 滤过， 滤 液再加乙醇使含醇量达 80 %， 放置， 滤过， 以 10 %氢氧化钠溶液调节 pH值 至 8.0， 放置， 滤过， 滤液用 10 %盐酸液调节 pH值至 7.0， 回收乙醇， 药液备 用； 淫羊藿、 黄精加水煎煮二次， 合并煎液， 滤过， 静置， 取上清液浓缩至适 量， 放冷， 加乙醇至含醇量达 65 %， 静置， 滤过， 滤液加乙醇使含醇量达 80 %， 静置， 滤过， 滤液用 10 %氢氧化钠溶液调节 pH值至 8.0， 静置， 滤过， 滤液用 10 %盐酸溶液调节 pH值至 7.0， 回收乙醇， 药液备用； 黄芪加水煎煮 三次， 合并煎液， 滤过， 滤液浓缩至约 95ml， 药液备用。 合并以上备用药液， 搅匀， 冷藏放置， 滤过， 加水至 1000ml, 加入适量无糖型甜味剂， 滤过， 滤 液用 10 %氢氧化钠溶液调节 pH值至 7.0， 即得。 实验药物 2 CF1: 制何首乌 1000g、 枸杞子 300g、 黄精 440g; 制备方法： 取制何首乌 1000g、 枸杞子 300g， 加入煮提三次， 合并滤液， 过滤， 加热浓缩至糖浆状， 放冷， 加乙醇使含醇量达 70%， 静置 12小时， 过 滤， 滤液再加乙醇使含醇量达 80%， 再静置 24 小时， 过滤， 滤液以 10%的 NaOH调节 pH至 8.0， 放置 24小时， 滤过， 滤液用 10%的盐酸调节调节 pH 至 7.0， 回收乙醇， 药液备用。 取黄精 440g， 加 10倍量水， 煮提两次， 每次 1.5小时， 过滤， 合并滤液， 静置， 取上清液浓缩至适量， 放冷后加入一醇至 含醇量达 65%， 静置 24小时， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达 80%， 静置， 24 小时， 过滤， 滤液用 10%氢氧化钠溶液调节 PH值至 8.0，静置 24小时， 过滤， 滤过， 滤液用 10%的盐酸调节调节 pH至 7.0， 回收乙醇， 药液备用。 合并以 上备用液，搅勾，冷藏放置 12小时，过滤，加水至 1000ml,过滤，滤液用 10% 氢氧化钠调节 pH值至 7.0， 加热煮沸灭菌， 即得。

实验药物 3 CF2: 淫羊藿 300g

制备方法： 称取淫羊藿药材 300g， 加 10倍量水， 煮提两次， 每次 1.5小 时， 过滤， 合并滤液， 静置， 取上清液浓缩至适量， 放冷后加入一醇至含醇量 达 65%， 静置 24小时， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达 80%， 静置， 24小时， 过滤， 滤液用 10%氢氧化钠溶液调节 pH值至 8.0，静置 24小时， 过滤， 滤过， 滤液用 10%的盐酸调节调节 pH至 7.0， 回收乙醇， 过滤， 加水至 1000ml， 过 滤， 滤液用 10%氢氧化钠调节 pH值至 7.0-7.5， 加热煮沸灭菌， 即得。

实验药物 4 CF3: 淫羊藿药材 300 g、 制何首乌 1000 _g ;

制备方法： 称取淫羊藿药材 300 g， 加 10倍量水， 煮提两次， 每次 1.5小 时， 过滤， 合并滤液， 静置， 取上清液浓缩至适量， 放冷后加入一醇至含醇量 达 65%， 静置 24小时， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达 80%， 静置， 24小时， 过滤， 滤液用 10%氢氧化钠溶液调节 pH值至 8.0，静置 24小时， 过滤， 滤过， 滤液用 10%的盐酸调节调节 pH至 7.0， 回收乙醇， 备用； 称取 1000g制何首 乌， 加入煮提三次， 合并滤液， 过滤， 加热浓缩至糖浆壮， 放冷， 加乙醇使含 醇量达 70%， 静置 12小时， 过滤， 滤液再加乙醇使含醇量达 80%， 再静置 24 小时， 过滤， 滤液以 10%的 NaOH调节 PH至 8.0， 放置 24小时， 滤过， 滤液 用 10%的盐酸调节调节 pH至 7.0， 回收乙醇， 备用； 取淫羊藿提取液、 何首 乌提取液搅匀， 冷藏放置 12小时， 过滤， 加水至 1000ml, 过滤， 滤液用 10% 氢氧化钠调节 pH值至 7.0， 加热煮沸灭菌， 即得。

实验药物 5 CF4: 为实施例 1制备口服液。

实验药物 6 CF5:制何首乌 1000g、黄芪 440g、淫羊藿 300g、丹参 220g; 制备方法： 取制何首乌 1000g， 丹参 220g， 加水煮提三次， 合并滤液， 过 滤， 加热浓缩至糖浆状， 放冷， 加乙醇使含醇量达 70%， 静置 12小时， 过滤， 滤液再加乙醇使含醇量达 80%， 再静置 24小时， 过滤， 滤液以 10%的 NaOH 调节 pH至 8.0， 放置 24小时， 滤过， 滤液用 10%的盐酸调节调节 pH至 7.0， 回收乙醇， 药液备用。 称取淫羊藿药材 300g， 加 10倍量水， 煮提两次， 每次 1.5小时， 过滤， 合并滤液， 静置， 取上清液浓缩至适量， 放冷后加入一醇至 含醇量达 65%， 静置 24小时， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达 80%， 静置， 24 小时， 过滤， 滤液用 10%氢氧化钠溶液调节 pH值至 8.0，静置 24小时， 过滤， 滤过， 滤液用 10%的盐酸调节调节 PH至 7.0， 回收乙醇， 备用。 称取黄芪 440 g， 加 10倍量水提取三次， 每次 1.5小时， 合并提取液， 过滤， 浓缩备用。 将 上述提取液混合搅匀， 冷藏放置 12小时， 过滤， 加水至 3000ml， 过滤， 滤液 用 10%氢氧化钠调节 pH值至 7.0， 加热煮沸灭菌， 即得。

上述实验药物中所用 "制何首乌" 和 "黄精（制） " 分别为何首乌和黄精的炮 制品， 具体制备方法参照 2010版《中国药典》第一部收载的 "制何首乌" 和 "黄精炮制品" 的制备方法。

1.3主要仪器 MK3酶标仪（美国 Thermo ); Allegra X-22 Centrifuge (美 国 Backman ); 81m-25光学显微镜 ( Olympus公司）； ZZ-6小鼠自主活动仪（成 都泰盟科技有限公司）， TH-86-340-WA -80°C超低温冰箱（德国）， 1/万 Sartorius 电子分析天平 （德国）； 1/千电子分析天平 （德国）； 250Q 大白鼠固定器； 无 盖木制敞箱等。

2方法

2.1实验

2.1.1 分组与给药 选取 96 只小鼠按体重分层随机均分为 8 组， 即正常 ( 0.5% CMC-Na 20 ml- kg-l-d-l )、 阳性对照 ( Sertraline, 5 mg · kg-l- d-1 )、 HLS及其 CF1、 2、 3、 4、 5 (均给予对应口服液 20 ml- kg-Ι· d-1 )共 8组， 12 只 /组， 分别连续灌胃给药 7 d。

2.1.2 悬尾实验 最后一次给药后 l h， 将小鼠尾巴 l-2cm处悬挂在铁架台 上， 用胶布固定， 让小鼠保持倒悬挂姿势适应 1 min， 测定在 5 min内的不动 时间。

2.1.3 游泳实验选取 96只昆明鼠， 按 2.1.1步骤， 最后一次给药 l h后， 将小鼠置于水温 25±1 °C、 水容量 20 X 10 X 13 cm3的长方体白色塑料盒中， 游 泳 6 min， 测定后 5 min内的悬于水面不动时间。

2.2 统计学分析 实验数据以 士 S表示， SPSS 17.0软件包对数据进行单因 素方差分析， 检验方差齐性， p>0.05使用 LSD法， p<0.05釆用 Dunnett T3法， p<0.05为差异明显。 * 表示与正常组相比 p<0.05， #表示与模型组相比 P<0.05。

3 结果

各实验药物对小鼠悬尾和游泳不动时间的影响 结果见表 1。

表 1 对小鼠悬尾和游泳不动时间的影响 ( 士 S, n=12)

由表 1可见， 与正常组比， HLS和 CF 4组能显著缩短小鼠悬尾不动时间 ( P<0.05 ), 其余组均无统计学差异（P>0.05 ); HLS组能显著缩短小鼠游泳不 动时间 （P<0.05 )， CF 4组有缩短不动时间趋势（P=0.083 )， 其余各组均无影 响 （P>0.05 )。 实验例 2

1 材料 1.1 动物 SPF级全雄 Wistar大鼠 120只， 7~8周龄， 体质量 200±20 g， 成 都达硕生物科技有限公司提供， 合格证： SCXK (川） 2008-24， 实验前适应性饲 养 1周。 饲养环境， 室温 20~25°C， 湿度 55~70%， 自由摄食饮水。

1.2 药品与试剂

对照药物： 盐酸舍曲林片（Sertraline ) ( 110801 )， 大连辉瑞制药有限公司， 临用前配制成 37.5、 62.5%的 0.5% CMC-Na混悬液。

实验药物 1 : HLS, 同实验例 1 ;

实险药物 2: CF 4为实施例 1制备口月良液。

其他试剂： 自配 0.5% CMC-Na液； 5-羟色胺（ 5-HT )、去曱肾上腺素（ NE )、 多巴胺（ DA )、促肾上腺皮质激素（ ACTH )、皮质酮（ CO T )及 β内啡肽（ β-ΕΡ ) Elisa检测试剂盒（ 201204 )，均由上海丰翔生物科技有限公司提供；分� �纯 PBS、 水合氯醛、 多聚曱醛等。

1.3主要仪器 MK3酶标仪（美国 Thermo ); Allegra X-22 Centrifuge (美 国 Backman ); 81m-25光学显微镜 ( Olympus公司）； ZZ-6小鼠自主活动仪（成 都泰盟科技有限公司）， TH-86-340-WA -80°C超低温冰箱（德国）， 1/万 Sartorius 电子分析天平 （德国）； 1/千电子分析天平 （德国）； 250Q 大白鼠固定器； 无 盖木制敞箱等。

2 方法

2.1实验

2.1.1 分组与给药

雄性 Wistar大鼠 120只， 通过 Open-field实验做行为学评分， 选取得分 30-120分的大鼠进入实验， 根据小鼠的筛选实验结果， 按 Open-field实验评 分， 釆用随机区组设计， 将其分为 5组， 每组 16只以上。 ①正常组： 正常饲 养； ②模型组： 接受 21d CUMS+孤养制备抑郁模型； ③阳性药组： 抑郁模型 + 舍曲林（Sertraline ); ④ HLS组： 抑郁模型 +HLS; ⑤ CF4组： 抑郁模型 + CF 4。 造模 21d后， 分别开始连续灌胃给药 21 d， 并继续造模。 各组均分别给予对应 药物 20 ml- kg-l- d-l。

2.1.2 CUMS+孤养建立大鼠抑郁模型 除正常组正常饲养外 （5~6只 /笼）， 其它釆用孤养， 并且每天随机给予两 种不同的刺激， 包括： 1. 冷水游泳（4°C， 5 min。 水深 10 cm， 游泳结束后将 大鼠移入 25 ~ 30°C温水池中使其肢体回暖后取出）； 2. 热刺激（热板法 45°C， 5 min ); 3. 禁水（ 24 h ); 4. 禁食（ 24 h ) (禁食时不禁水， 禁水时不禁食）； 5. 昼夜颠倒 （24 h ); 6. 潮湿垫料（10 h ); 7. 束缚 1 h; 8. 震荡 （ 1 min )。

2.1.3 Open-Field评分 100cmxl00cmx50cm木箱， 底部分为 5x5个方格， 木 箱内全部漆成黑色。保持安静的环境，将大鼠 置于木箱中央，观察大鼠在 3 min 内的活动情况， 记录大鼠的水平得分（至少 3爪进入方格的穿越格数）和垂直 得分（双脚离开底面） 总和。

2.1.4 实验指标检测及方法 一般均于药后 1 h检测当日指标。

2.1.4.1 Open-Field实验及体重 给药后每周测定一次 Open-field实验得分及 体重。

2.1.4.2 主要脏器系数测定 第 21 d给药后 1 h， 每组各取 8只鼠 ( 8:00-10:30 ), 腹腔注射 10%水合氯醛（0.3 mL/lOOg )麻醉， 股动脉取血处 死， 立即冰台上断头， 取双侧海马， 另摘取肾上腺、 胸腺、 脾， 分别称重， 计 算脏器系数。

2.1.4.3 海马及血清 5-HT、 NE、 DA的含量测定 前述所取血液， 静置约 l h 左右， 3000 r/min离心 20 min， 取上清。 前述所取海马， 加入一定量的 PBS， 匀 浆， 同前离心， 取上清， -80°C冷冻保存， 待测。 5-HT， DA, NE的含量测定 按试剂盒说明书规范进行。

2.1.4.4 血清 ACTH、 CORT、 β-ΕΡ的含量测定 ACTH、 CORT、 β-ΕΡ的测 定按试剂盒说明书规范进行。

2.1.4.5 病理形态学观察 各组剩余 8只大鼠， 同 2.5麻醉， 仰卧固定， 经左 心室注入生理盐水约 100 ml, 剪碎肝脏， 再注入 4%的多聚曱醛灌流固定， 取 大脑、 肾上腺， 分别称重。 标本 4%多聚曱醛液中固定， 石蜡包埋， 间断切片， 每 10张切片取 1张， 每个海马和肾上腺都各取 5张， HE染色。 釆用 TSView7图 像分析系统（TUCSEN IMAGING TECHNOLOGY, Inc. )， 400倍光镜下， 海马 切片 CA3区计数 5个小方格内的神经元总数及正常神经元数目� � 计算海马的正 常神经元数目比例； 40倍光镜下， 测出肾上腺皮质的最大厚度。 2.2 统计学分析 实验数据以 士 S表示， SPSS 17.0软件包对数据进行单因 素方差分析， 检验方差齐性， p>0.05使用 LSD法， p<0.05釆用 Dunnett T3法， p<0.05为差异明显。 * 表示与正常组相比 p<0.05， #表示与模型组相比 P<0.05。

3 结果

3.1 对 open-field评分及体重变化的影响

结果见表 2。 结果表明， 与正常组比较， 模型组大鼠的运动次数减少 ( P<0.05 ) ; 与模型组比， 给药 1周后， HLS和 CF 4未明显增加运动次数 ( P>0.05 ), 2周后， 有增加趋势， HLS (P=0.064), CF4(P=0.087), 3周后， HLS 有明显增加运动次数作用 （P<0.05 )， CF 4有增加趋势（P=0.093 )。 模型组大 鼠体重较正常组显著减少 （PO.05 ); 与模型组相比， 给药 1、 2、 3周， HLS及 CF 4均见体重显著增加（P<0.05 )。 说明 HLS对抑郁大鼠行为学有明显治疗、 CF4有一定改善作用。

对 open-field评分及体重变化的影响 （ 士 S, n=l 6 )

3.2 对大鼠血清及脑内单胺神经递质的影响 结果见表 3。 结果表明， 与正常对照组比， 模型组大鼠海马单胺神经递质 含量降低（ p<0.05 )， 血液中含量升高 （p<0.05 )。 与模型组比较， HLS组海马 5-HT及 DA的含量升高 （p<0.05 )， CF4组海马 DA的含量升高 （p<0.05 )。 HLS 及 CF4组血液中 NE、 DA、 5-HT均降低（p<0.05 )。

表 3 对大鼠血清及脑内单胺神经递质的影响 ( 士 S， n=8)

3.3 对大鼠血清 ACTH、 CORT、 β-ΕΡ的影响

结果见表 4。 结果表明模型组血清 ACTH、 CORT、 β-ΕΡ的含量均比正常组 显著升高 (Ρ<0.05)。 经 HLS、 CF4治疗， 血清 ACTH、 CORT、 β-ΕΡ均有明显降 低 (Ρ<0.05)。

表 4 对大鼠血清 ACTH、 CORT、 β-ΕΡ的影响 ( 士 S，n= 8)

模型 +HLS组 43.48士 11.11 ^# 17.83 ± 5.51 ^# 184.23士 37.73 ^# 模型 +CF 4组 49.19士13.99 ^# 18.36 ± 7.21 ^# 195.83士67.93 ^#

结果见表 5。 结果表明， 模型组比正常组大鼠的肾上腺系数明显增大 ( p<0.05 )、 胸腺系数、 脾脏系数减小 （p<0.05 )。 经过治疗， HLS对肾上腺系 数有一定的减小趋势 （Ρ=0.093 ) , 对胸腺系数和脾脏系数有明显增大作用 ( <0.05 ), CF4对肾上腺系数无明显作用 （p>0.05 )， 对胸腺系数（ P=0.053 ) 和脾脏系数（P=0.058 )有增大趋势。

表 5 对大鼠脏器系数的影响 ( ± S， n=16)

3.5 对大鼠海马、 肾上腺病理形态学变化的影响

3.5.1 HLS和 CF4对海马 CA3区神经元形态及数目的影响

正常组大鼠海马 CA3区神经元细胞排列整齐， 密集， 核仁清晰可见。 与正 常组相比， 模型组大鼠的海马 CA3区神经元细胞排列稀疏， 细胞间隙增大， 核 仁消失， 细胞质固缩， 见图 1。 模型组的神经元数目及正常神经元所占的比例 较正常组显著减少（P<0.05 )， 与模型组相比， HLS和 CF4组海马 CA3区神经元 数目及正常神经元的比例明显增加 （P<0.05 )， 见表 6。

3.5.2 HLS和 CF4对大鼠肾上腺皮质厚度以及肾上腺病理改变 的影响 正常大鼠肾上腺结构清晰， 由外向内分为肾上腺皮质和髓质部分， 其中皮 质又分为球状带， 束状带和网状带； CUMS大鼠皮质肥厚。 模型组较正常组大 鼠的肾上腺皮质厚度明显增加（P<0.05 )， HLS和 CF4组能明显减小模型鼠的肾 上腺皮质厚度（ PO.05 )， 见表 6。 表 6 对大鼠海马、 肾上腺病理形态学变化的影响 ( 士 S，n= 8)

具体实施方式

实施例 1 口月艮液

淫羊藿 300g、 黄芪 440 g、 制何首乌 lOOOg;

称取淫羊藿药材 300g， 加 10倍量水， 煮提两次， 每次 1.5小时， 过滤， 合并滤液， 静置， 取上清液浓缩至适量， 放冷后加入乙醇至含醇量达 65%， 静置 24小时， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达 80%， 静置， 24小时， 过滤， 滤 液用 10%氢氧化钠溶液调节 PH值至 8.0， 静置 24小时， 过滤， 滤液用 10%的 盐酸调节调节 pH至 7.0， 回收乙醇， 备用； 称取黄芪 440 g， 加 10倍量水提 取三次， 每次 1.5小时， 合并提取液， 过滤， 浓缩备用； 称取 lOOOg制何首乌， 加水煮提三次， 合并滤液， 过滤， 加热浓缩至糖浆状， 放冷， 加乙醇使含醇量 达 70%， 静置 12小时， 过滤， 滤液再加乙醇使含醇量达 80%， 再静置 24小 时， 过滤， 滤液以 10%的 NaOH调节 PH至 8.0， 放置 24小时， 过滤， 滤液用 10%的盐酸调节调节 pH至 7.0， 回收乙醇， 备用； 取淫羊藿提取液、 黄芪提取 液、 制何首乌提取液搅匀， 冷藏放置 12小时， 过滤， 加水至 1000ml, 过滤， 滤液用 10%氢氧化钠调节 pH值至 7.0， 加热煮沸灭菌， 即得。

实施例 2 片剂

淫羊藿 25g、 黄芪 22 g、 制何首乌 50g;

取处方量的原料药， 加 12倍量 70%乙醇回流提取 2次， 每次 1.5小时； 合并提取液， 滤过， 回收乙醇并浓缩； 浓缩液减压干燥， 粉碎成细粉， 加入常 规辅料， 混匀; 干压制粒， 压片， 即得。 实施例 3 胶袭剂

淫羊藿 15g、 黄芪 36 g、 制何首乌 50g;

取处方量的原料药， 加 10倍量 80%乙醇超声提取 3次， 第一次 40min， 第 2、 3次各 20min， 合并提取液， 滤过， 减压浓缩； 浓缩液减压干燥， 粉碎 成细粉， 加入常规辅料， 混匀; 干压制粒， 装入胶嚢， 即得。

实施例 4 颗粒剂

淫羊藿 8g、 黄芪 50g、 制何首乌 20g;

取处方量的原料药， 加水煎煮 2次， 第一次 2小时， 第二次 1.5小时， 合 并煎液， 滤过， 滤液浓缩， 浓缩液加乙醇至含醇量为 80%， 静置， 滤过， 滤 液回收乙醇至无醇味， 并浓缩干燥，粉碎成细粉，加入辅料， 混匀； 干压制粒， 即得。

实施例 5 口服液

淫羊藿 35g、 黄芪 10g、 制何首乌 75g;

取淫羊藿药材， 加 8倍量 70%乙醇回流提取 2次， 每次 1.5小时； 合并提 取液， 滤过， 滤液用 10%氢氧化钠溶液调节 PH值至 9.0，静置 24小时， 过滤， 滤液用 10%的盐酸调节调节 pH至 7.0， 回收乙醇， 备用； 取黄芪药合并提取 液， 过滤， 浓缩备用； 取制何首乌药材， 加水回流三次， 合并滤液， 过滤， 加 热浓缩至糖浆状， 放冷， 加乙醇使含醇量达 60%， 静置 12小时， 过滤， 滤液 再加乙醇使含醇量达 90%， 再静置 24小时， 过滤， 滤液以 10%的 NaOH调节 pH至 8.0， 放置 24小时， 过滤， 滤液用 10%的盐酸调节调节 pH至 7.0， 回收 乙醇， 备用； 取淫羊藿提取液、 黄芪提取液、 制何首乌提取液搅勾， 冷藏放置 12小时， 过滤， 滤液用 10%氢氧化钠调节 pH值至 7.0， 加热煮沸灭菌， 即得。

实施例 6 滴丸

淫羊藿 9g、 黄芪 45g、 制何首乌 25g;

取处方量淫羊藿、 黄芪、 制何首乌药材， 分别以 60%乙醇超声提取， 提取 液浓缩得淫羊藿提取物、 黄芪提取物和制何首乌提取物， 将三者混合均匀， 加 入常规辅料按照本领域制剂的常规技术制成滴 丸剂。

实施例 7 片剂

淫羊藿 30g、 黄芪 12g、 制何首乌 70g; 取处方量淫羊藿、 黄芪、 制何首乌药材， 分别以 12倍量水回流提取， 提 取液浓缩得淫羊藿提取物、 黄芪提取物和制何首乌提取物， 将三者混合均匀， 加入常规辅料， 干压制粒， 压片， 即得。

实施例 8

淫羊藿提取物 15g、 黄芪提取物 22 g、 制何首乌提取物 50g;

所述淫羊藿提取物、 黄芪提取物、 制何首乌提取物分别为淫羊藿、 黄芪、 制何首乌经 60%乙醇回流提取制备得到的提取物。 将上述提取物减压干燥后 粉碎为细粉， 混匀， 加入常规辅料制成颗粒剂。

实施例 9

淫羊藿提取物 15g、 黄芪提取物 36g、 制何首乌提取物 50g;

所述淫羊藿提取物、 黄芪提取物、 制何首乌提取物分别为淫羊藿、 黄芪、 制何首乌经水煎煮制备得到的提取物。 将上述提取物减压干燥后粉碎为细粉， 混匀， 加入常规辅料制成片剂。

实施例 10

淫羊藿提取物 12g、 黄芪提取物 30g、 制何首乌提取物 60g;

所述淫羊藿提取物、 黄芪提取物、 制何首乌提取物分别为淫羊藿、 黄芪、 制何首乌经水提醇沉工艺制备得到的提取物， 其醇沉浓度为 70%乙醇溶液渗 漉提取得到的提取物； 将上述提取物减压干燥后粉碎成细粉， 加入常规辅料， 混匀； 干压制粒， 压片， 即得。

实施例 11

淫羊藿提取物 35g、 黄芪提取物 10g、 制何首乌提取物 70g;

所述淫羊藿提取物釆用如下方法制备： 取淫羊藿药材， 加 10倍量水， 煮 提两次， 每次 1.5小时， 过滤， 合并滤液， 静置， 取上清液浓缩至适量， 放冷 后加入乙醇至含醇量达 65%，静置 24小时，过滤，滤液加乙醇使含醇量达 80%， 静置， 24小时， 过滤， 滤液用 10%氢氧化钠溶液调节 pH值至 8.0， 静置 24 小时， 过滤， 滤液用 10%的盐酸调节调节 pH至 7.0， 回收乙醇， 即得淫羊藿 提取物；

所述黄芪提取物釆用如下方法制备： 取黄芪药材，加 10倍量水提取三次， 每次 1.5小时， 合并提取液， 过滤， 浓缩， 即得黄芪提取物； 所述制何首乌提取物釆用如下方法制备：取制 何首乌药材，加水煮提三次， 合并滤液， 过滤， 加热浓缩至糖浆状， 放冷， 加乙醇使含醇量达 70%， 静置 12小时， 过滤， 滤液再加乙醇使含醇量达 80%， 再静置 24小时， 过滤， 滤液 以 10%的 NaOH调节 pH至 8.0， 放置 24小时， 过滤， 滤液用 10%的盐酸调节 调节 pH至 7.0， 回收乙醇， 即得制何首乌提取物。

将上述制备得到的三种提取物进行混合，减压 干燥后粉碎成细粉，加入常 规辅料， 混匀; 干压制粒， 压片， 即得。 本发明涉及一种压电驻极体薄膜及其 制备方法， 特别涉及一种通过模板加工制造的压电驻极体 薄膜及其制备方法。