本发明属于中药制药领域， 涉及一种从植物中提取得到的酰胺类化合物 5'-甲氧基 -3',4'- 次甲二氧基桂皮酸异丁基酰胺在制备抗抑郁药 物中的应用。

背景技术

抑郁症是由多种原因引起的以心境障碍为主要 特征的精神疾病综合征。其临床表现为显 著而持久的心情低落； 注意力不集中或思考能力下降； 失眠、 食欲不振； 厌倦日常生活； 精 神暴躁或迟滞； 有自杀死亡的念头。抑郁症迄今已成为全球性 的主要精神卫生问题。 西方发 达国家抑郁症发病率为 8〜10 %， 据世界卫生组织公布， 目前全球各种抑郁症患者约 3.4亿 人， 占世界人口总数的 5%左右。在年满 20岁的成年人口中， 抑郁症患者正以每年 11.3 %的 速率增加。抑郁症已经成为威胁人类健康的第 四大疾病， 随着社会竞争的不断升级， 患病率 有不断上升的趋势， 预计到 2020年抑郁症可能将成为仅次于心脏病的人类� �二大疾患。

抑郁症主要分为以下几种类型：

一、 内源性抑郁症： 即有懒、 呆、 变、 忧、 虑"五征" （大脑生物胺相对或绝对不足）。 二、 隐匿性抑郁症： 情绪低下和忧郁症状并不明显， 常常表现为各种躯体不适症状， 如 心悸、 胸闷、 中上腹不适、 气短、 出汗、 消痩、 失眠等。

三、 青少年抑郁症： 会导致学生产生学习困难， 注意力涣散， 记忆力下降， 成绩全面下 降或突然下降， 厌学、 恐学、 逃学或拒学。

四、 继发性抑郁症： 如有的高血压患者， 服用降压药后， 导致情绪持续忧郁、 消沉。 五、 产后抑郁症： 其特别是对自己的婴儿产生强烈内疚、 自卑、 痛恨、 恐惧、 或厌恶孩 子的反常心理。 哭泣、 失眠、 吃不下东西， 忧郁， 是这类抑郁症患者的常见症状。

六、 白领抑郁症： 患有抑郁症的青年女性神经内分泌系统紊乱， 正常的生理周期也被打 乱， 症状多种多样， 除了精神压抑、 情绪低落、 无所事事、 爱生闷气、 思虑过度、 失眠、 多 梦、 头昏、 健忘等主要的精神症状外， 厌食、 恶心、 呕吐、 腹胀等消化吸收功能失调症状， 月经不调、 经期腹痛等妇科症状也不少见。

当前， 抑郁症的主要治疗手段仍为服用药物。 研究资料证实， 抑郁症的病因复杂， 可能 与社会心理因素、遗传、人体的生化变化及神 经内分泌有关； 而抗抑郁药可能有多种作用靶 标， 如受体、 单胺类递质、 细胞因子等， 不同的抗抑郁药可能通过不同的靶标起作用。 第一 代治疗抑郁症的药物是单胺氧化酶抑制剂， 由于选择性以及对酶的不可逆性抑制， 导致中毒 性肝损害， 存在一定毒副作用， 逐渐被三环类抗抑郁药所取代。 常用药物有多塞平、 阿米替 平、 氯米帕明等。 尽管此类药物对内因性抑郁效果较好， 尤其是情绪低落、 兴趣减退、 悲观 厌世可获 80%以上的疗效， 但由于对心脏的毒性大， 不良反应也较多。 选择性 5-ΗΤ再摄取 抑制剂 （SSRI ) 是 20世纪 80年代末出现的新型抗抑郁药物， 由于在保持经典抗抑郁的同 时显著减少其他受体所出现的不良反应， 目前已成为欧美国家常用的一线抗抑郁药物。 常用 药物有氟西汀、 帕罗西汀、 舍曲林、 西酞普兰、 氟伏沙明等。 由于经胃肠吸收， 肝脏代谢， 仍存在胃肠功能紊乱， 部分也有性功能障碍。 临床研究也显示， 针对单一环节的合成药物难 以取得满意的疗效， 目前还没有一个理想的抗抑郁药物， 能具有较好的疗效和较小的毒副作 用。

中国专利 （申请号： 200410025493.0 ) 公开了大叶筠中大叶筠素在制备治疗抑制中枢 神 经系统单胺类递质再摄取相关药物组合物中的 应用。 美国专利 US6858648也公开了大叶筠 素及其同系物在抗抑郁等精神类疾病方面的应 用。

5'-甲氧基 -3',4'-次甲二氧基桂皮酸异丁基酰胺为大叶筠� �中的一种活性物质，其结构为：

本发明人在对大叶筠素的抗抑郁的物质基础进 行研究时， 意外地发现 5'-甲氧基 -3',4'-次 甲二氧基桂皮酸异丁基酰胺也具有明显的抗抑 郁活性， 并且体外活性优于大叶筠素。

为此， 本发明提供一种从植物中提取的 5'-甲氧基 -3',4'-次甲二氧基桂皮酸异丁基酰胺的 毒副作用小、 疗效好的天然产物抗抑郁药物。

发明内容

本发明目的在于提供一种酰胺类化合物 5'-甲氧基 -3',4'-次甲二氧基桂皮酸异丁基酰胺 在制备抗抑郁药物中的应用。

本发明所述化合物 5'-甲氧基 -3',4'-次甲二氧基桂皮酸异丁基酰胺， 可以由植物中提取或 通过化学合成得到。 例如使用包括以下步骤的方法提取制备：

步骤一：

取药材胡椒属植物大叶筠或华南胡椒的地上部 分， 加入 8〜15倍重量的 70〜95%的乙 醇， 回流提取 1〜3次， 滤过， 合并滤液， 浓缩成浸膏；

步骤二：

上述浸膏用 30〜60%的乙醇溶解， 采用大孔吸附树脂的色谱柱进行分离， 用 30〜60% 的乙醇洗脱， 洗脱液弃去， 换用 70〜95%乙醇洗脱， 收集洗脱液， 浓缩至干， 得到提取物； 步骤三：

上述提取物用硅胶柱进一步分离，分别用体积 比为 5: 1和 3: 1石油醚:乙酸乙酯洗脱 2次， 薄层法检测， 合并 3: 1体系下样品量最大的单点成分， 回收溶剂， 浓缩至无液体， 析出黄色 颗粒， 黄色颗粒经石油醚洗涤成为白色颗粒， 再经乙醇-水体系进行重结晶， 得到 5'-甲氧基 -3',4'-次甲二氧基桂皮酸异丁基酰胺的白色结� �。

优选的制备方法包括以下步骤：

步骤一：

取药材胡椒属植物大叶筠或华南胡椒的地上部 分， 粗粉碎， 置于提取罐中， 加入 8〜15 倍重量的 70〜95%的乙醇， 回流提取 2小时， 滤过， 另加 8〜15倍重量的 70〜95%的乙醇， 回流提取 2小时， 滤过， 合并两次滤液， 减压浓缩成相对密度 （RD) 1.3〜1.35 的浸膏； 上述步骤一更为优选的是， 取药材胡椒属植物大叶筠或华南胡椒的地上部 分， 粗粉碎， 置于提取罐中， 加入 10〜15倍重量的 70〜95%的乙醇， 回流提取 2小时， 滤过， 另加 10〜 15倍重量的 70〜95%的乙醇， 回流提取 2小时， 滤过， 合并两次滤液， 60〜65°C减压浓缩 成相对密度 （RD ) 1.3〜1.35 的浸膏；

步骤二：

上述浸膏用 30〜60%的乙醇溶解， 加入 D101大孔吸附树脂的色谱柱中， 用 30〜60%的 乙醇洗脱， 洗脱液弃去， 换用 70〜95%乙醇洗脱， 收集洗脱液， 浓缩至干， 得到提取物； 步骤三：

上述提取物经拌样， 加入填装有硅胶的色谱柱中， 分别用体积比为 5: 1 和 3: 1 石油醚: 乙酸乙酯洗脱 2次， 薄层法检测， 合并 3: 1体系下样品量最大的单点成分， 回收溶剂， 浓缩 至无液体， 析出黄色颗粒， 黄色颗粒经石油醚洗涤成为白色颗粒， 再经乙醇-水体系进行重 结晶， 得到 5'-甲氧基 -3',4'-次甲二氧基桂皮酸异丁基酰胺的白色结� �。

本发明还提供一种抗抑郁药物组合物， 含有有效成分 5'-甲氧基 -3',4'-次甲二氧基桂皮酸 异丁基酰胺。

本发明的化合物， 其在药物组合物中所占重量百分比可以是 0.1〜99.9%， 其余为药物 可接受的载体。本发明的药物组合物， 以单位剂量的制剂形式存在， 所述单位剂量形式是指 制剂的单位， 如片剂的每片、 胶囊的每粒、 口服液的每瓶、 颗粒剂的每袋等。

本发明的药物组合物可以是任何可药用的剂型 ， 这些剂型包括： 片剂， 如糖衣片剂、 薄 膜衣片剂、肠溶衣片剂； 胶囊剂， 如硬胶囊剂、 软胶囊剂； 口服液、 口含剂、 颗粒剂、 冲剂、 丸剂、 散剂、 膏剂、 丹剂、 混悬剂、 粉剂、 溶液剂、 注射剂、 栓剂、 软膏剂、 硬膏剂、 霜剂、 喷雾剂、 滴剂、 贴剂。 优选的是口服剂型， 如： 胶囊剂、 片剂、 口服液、 颗粒剂、 丸剂、 散 剂、 丹剂、 膏剂等。

本发明的药物组合物， 其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂， 诸如粘合剂、 填充剂、 稀释剂、 压片剂、 润滑剂、 崩解剂、 着色剂、 调味剂和湿润剂， 必要时可对片剂进行包衣。

适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、 乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括 淀 粉、 聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物， 例如羟基乙酸淀粉钠。 适宜的润滑剂包括， 例如硬脂酸 镁。 适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸 钠。

可通过混合、填充、压片等常用的方法制备固 体口服组合物。进行反复混合可使活性物 质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中 。

口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬 浮液、 溶液、 乳剂、 糖浆剂或酏剂， 或者 可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体 复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的 添加剂， 诸如悬浮剂， 例如山梨醇、 糖浆、 甲基纤维素、 明胶、 羟乙基纤维素、 羧甲基纤维 素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪、乳化剂， 例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶 ; 非水性载体 （它们可以包括食用油）， 例如杏仁油、 分熘椰子油、 诸如甘油的酯的油性酯、 丙二醇或乙醇； 防腐剂， 例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨 酸， 并且如果需要， 可含有常规的香味剂或着色剂。

对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明 的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度， 可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通 常是通过将活性物质溶解在载体中，在将其装 入适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒， 然后密封。辅料例如局部麻醉剂、 防腐剂和缓冲剂也可以 溶解在这种载体中。为了提高其稳定性， 可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻， 并在真空下 将水除去。

本发明的药物组合物，在制备成药剂时可选择 性的加入适合的药物可接受的载体，所述 药物可接受的载体选自于下列物质中的一种或 者一种以上： 糖醇， 例如甘露糖醇、 山梨醇、 木糖醇； 氨基酸或其衍生物， 例如盐酸半胱氨酸、 蛋氨酸、 甘氨酸； EDTA盐， 例如， EDTA二钠、 EDTA钙钠； 一价碱金属盐或其水溶液， 如氯化钠、 氯化钾、 焦亚硫酸钠、 亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠； 一价碱金属的碳酸盐、 醋酸盐、 磷酸盐； 钙盐， 例如碳酸钙、 碳酸氢钙； 硬脂酸盐， 例如硬脂酸钙、 硬脂酸镁； 无机酸， 如盐酸、 硫酸、 磷酸； 有机 酸， 如醋酸、 维生素 C、 巯基乙酸； 有机酸盐， 如乳酸钠、 藻酸盐； 糖类， 如葡萄糖、 果糖、 乳糖、 麦芽糖、 蔗糖、 环糊精 （例如 β-环糊精）、 淀粉、 纤维素及其衍生物 （如 羧甲基淀粉钠））；植物胶（如琼脂）或动物 胶（如明胶）；硅衍生物；聚乙烯吡咯烧酮（ PVP) 或它的无水乙醇溶液； 多元醇， 如甘油、 聚乙二醇； 表面活性剂， 如吐温 80; 高岭土； 滑石粉以及磷脂类材料。

本发明的组合物在使用时根据病人的情况确定 用法用量， 可每日服三次， 每次 1〜20 剂， 如： 1〜20袋、 或 1〜20粒、 或 1〜20片。

本发明的化合物 5'-甲氧基 -3',4'-次甲二氧基桂皮酸异丁基酰胺具有抗抑� �作用， 因此， 本发明特别提供用本发明的化合物或含有本发 明化合物的药物组合物在制备治疗和预防抑 郁型精神疾病的药物中的应用。 除非另有说明， 本文提及的乙醇的百分数均为乙醇水溶液的体 积百分浓度。

以下通过实验数据进一步说明本发明的有益效 果： 实验一、 小鼠悬尾法获得性绝望抑郁模型实验

(1)实验材料

①药品

G-1 (本发明实施例 1制备得到的化合物）， 加入 2% (w/v ) 吐温 80水溶液， 配制成含 药品 lmg/ml的溶液。

盐酸氟西汀， 生产厂家： Patheon France (法国）； 分包装厂： 礼来苏州制药有限公司； 规格： 20mg/粒； ί比号： 81958， 临时用 2% (w/v) 吐温 80水溶液配制成含药品 lmg/ml的 溶液。

②动物

C57BL/6小鼠， 实验动物生产许可证： SCXK (京) 2006— 0009。

③ 实验仪器

YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪， 山东省医学科学院设备站

(2) 方法与结果

①单次给药对小鼠悬尾实验的影响

C57BL/6小鼠， 雄性， 鼠龄 6〜8周， 体重 18〜22g， 适应性喂养 1〜2天后， 将小鼠放 入 YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪中，适应 lmin后，记录第 lmin末至第 4min 内小鼠 活动次数。 筛选出自主活动在 70〜150次的 30只小鼠随机分为 3组， 按表 1所示药物和剂 量灌胃给药 lh后， 将小鼠尾端 lcm处用胶布固定于支撑物上， 使其呈倒挂状态， 其头部离 台面约 30cm， 用板隔开相邻动物的视线。 小鼠为了克服不正常体位而挣扎活动， 但活动一 段时间后出现间断性不动， 显示失望状态。 每只动物观察 6min内累计不动的时间， 为失望 时间。 所述不动是指小鼠除呼吸外所有肢体均不动。 结果见表 1。 表 1显示， 20mg/kg大叶 筠提取物单次给药即可明显缩短小鼠悬尾不动 时间 （P < 0.05 )

表 1 G-1单次给药对小鼠悬尾实验不动时间的影响 组别 动物数 （只） 剂量 （mg/kg) 悬尾不动时间 （s ) 溶媒对照组 10 ― 170.90±24.36

氟西汀组 10 20 119.41±32.18**

G-1组 10 20 134.27 ±25.12* 注： 与溶媒组比较 *P<0.05， **P < 0.01

② 多次给药对小鼠悬尾实验的影响

C57BL/6小鼠， 雄性， 鼠龄 6〜8周， 体重 18〜22g， 适应性喂养 1〜2天后， 将小鼠放 入 YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪中，适应 lmin后，记录第 lmin末至第 4min 内小鼠 活动次数。 筛选出自主活动在 70〜150次的 30只小鼠随机分为 3组， 按表 2所示药物和剂 量每日灌胃给药 1次， 连续给药 7天。 各组动物于末次给药 60min后， 将小鼠尾端 lcm处 用胶布固定于支撑物上， 使其呈倒挂状态， 其头部离台面约 10cm， 用板隔开相邻动物的视 线。 小鼠为了克服不正常体位而挣扎活动， 但活动一段时间后出现间断性不动， 显示失望状 态。 每只动物观察 6min内累计不动的时间， 为失望时间。 不动是指小鼠除呼吸外所有肢体 均不动。 结果见表 2。 表 2显示： 20mg/kg剂量 G-1给药 7天能显著缩短小鼠悬尾不动时间 (P < 0.01 )。 表 2 G-1多次给药对小鼠悬尾实验不动时间的影响 组别 动物数 （只） 剂量 （mg/kg) 悬尾不动时间 （s ) 溶媒对照组

氟西汀组

G-1组

注： 与溶媒组比较， **P < 0.01 实验二、 小鼠强迫游泳法获得性绝望抑郁模型实验

(1)实验材料

①药品

G-U 氟西汀， 参见实施例 1. ( 1 ) ①项。

②动物

C57BL/6小鼠， 实验动物生产许可证： SCXK (京) 2006— 0009。

③ 实验仪器

YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪， 山东省医学科学院设备站

(2) 方法与结果

①单次给药对小鼠强迫游泳实验的影响

C57BL/6小鼠， 雄性， 鼠龄 6〜8周， 体重 18〜22g， 适应性喂养 1〜2天后， 将小鼠放 入 YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪中，适应 lmin后，记录第 lmin末至第 4min 内小鼠 活动次数。 筛选出自主活动在 70〜150次的 30只小鼠随机分为 3组， 按表 3所示药物和剂 量灌胃给药 lh后，将小鼠放入盛有 25°C水的直径 10cm、高 30cm、水深 10cm的玻璃瓶中 (中 间用不透明隔板隔开， 以免相互影响)， 先适应环境 2min， 再计第 2min末至第 6min内小鼠 累计不动时间。 不动状态是指小鼠在水中停止挣扎， 或动物呈漂浮状态， 微卷躯体仅有细小 的肢体运动以保持头部浮在水面， 鼻孔露出。 结果见表 3。 表 3显示： 20mg/kg剂量 G-1单 次给药能显著缩短小鼠强迫游泳不动时间 （P < 0.01 )。

表 3 G-1单次给药对小鼠强迫游泳不动时间的影响 组另 ij 动物数 （只） 剂量 （mg/kg) 游泳不动时间 （s )

溶媒对照组 10 168.64±39.94

氟西汀组 10 20 106.61±52.28**

G-1组 10 20 124.47±21.07** 注： 与溶媒组比较， **P < 0.01

② G-1多次给药对小鼠强迫游泳实验的影响

C57BL/6小鼠， 雄性， 鼠龄 6〜8周， 体重 18〜22g， 适应性喂养 1〜2天后， 将小鼠放 入 YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪中，适应 lmin后，记录第 lmin末至第 4min 内小鼠 活动次数。 筛选出自主活动在 70〜150次的 30只小鼠随机分为 3组， 按表 4所示药物和剂 量每日灌胃给药 1次，连续给药 7天。各组动物于末次给药 60min后，将小鼠放入盛有 25°C 水的直径 10cm、 高 30cm、 水深 10cm的玻璃瓶中 (中间用不透明隔板隔开， 以免相互影响)， 先适应环境 2min， 再计第 2min末至第 6min内小鼠累计不动时间。 不动状态是指小鼠在水 中停止挣扎， 或动物呈漂浮状态， 微卷躯体仅有细小的肢体运动以保持头部浮在 水面， 鼻孔 露出， 结果见表 4。 表 4显示： 20mg/kg剂量 G-1给药 7天能显著缩短小鼠强迫游泳的不动 时间 （P < 0.01 )。 表 4 G-l多次给药对小鼠强迫游泳不动时间的影响 组另 ij 动物数 （只） 剂量 （mg/kg) 游泳不动时间 （s ) 溶媒对照组 10 169.90±13.23 氟西汀组 10 20 89.74±43.69"

G-1组 10 20 100.15±13.67" 注： 与溶媒组比较， P < 0.01 实验三、 慢性应激所致抑郁大鼠模型实验

(1)实验材料

①药品

G-U 氟西汀， 参见实施例 1. ( 1 ) ①项。

②动物

SPF级成年雄性 Wistar大鼠， 体重 180〜220g。 由北京维通利华提供。 整个实验过程中 动物自由摄食和饮水 (禁食、禁水应激除外)，室温 18〜22°C (热、冷应激除外)，相对湿度 50%〜 60%。 生产许可证： SCXK (京) 2006— 0009。

③ 实验试剂

正丁醇， 浓盐酸均为分析纯， 天津化学试剂二厂。

大鼠组织 5-HT Elisa试剂盒： 生产厂家 ADL, ί比号： RT110371

(2) 方法与结果

① 实验动物筛选

购回的大鼠适应性喂养 2天适应新环境后，进行敞箱实验 (Open-field)行为学测定，筛选 积分相近的大鼠 40只进行分组。

② 给药及分组

筛选出的 40只大鼠随机分成 4组， 分别为正常组、 模型组、 氟西汀组、 G-1组， 每组 10只。 自分组之日起各组按表 5灌胃给药， 每日 1次， 连续给药 21天。

表 5 分组及给药

~~ m 动物数 （只) 受试药 剂量 （mg/kg) ~~途径

正常组 10 2% (w/v) 吐温 80 lml/100g ig

模型组 10 2%(w/v) 吐温 80 lml/100g ig

氟西汀组 10 氟西汀 15 ig

G-1组 10 G-1 15 ig

③ 抑郁大鼠模型制备

正常组大鼠每笼词养 5只， 自由饮水摄食， 不予任何刺激； 其余各组自分组之日起， 采 用慢性应激模型。 每笼孤养 1只， 在 21天内共接受各种不同的刺激， 包括： 禁食 (24h)、 禁 水 (24h)、 冷水游泳 (4±2°C、 10min)、 热水游泳 （47±2°C、 10min)、 夹尾（lmin)、 摇晃 (每秒钟 1次， 5min)、 电击 （5mV， 每隔 30s刺激 1次， 每次持续 10s， 共 5次)、束缚行为 2小时（将 大鼠在乙醚麻醉状态下仰位绑在手术台上， 清醒后开始计时） 和昼夜颠倒等刺激， 21 日内 随机安排每日给予 1种刺激， 每种刺激出现 2〜3次， 同一种刺激不能连续出现， 使动物不 能预知给予的刺激。 各组每日灌胃 1次， 连续 21天。

④大鼠敞箱 （open-field) 实验

敞箱为 80cmx80cmx50cm的自制无盖箱， 内壁为黑色， 底为白色， 用黑线在底部划分 为 25个等格 （16 _Cm x l6 _C m)。 在造模后第 22天进行观察。 实验室为暗光， 每次放入 1只大 鼠在正中格中， 评定大鼠在 5 分钟内的活动情况， 评定指标： （1)方格间穿行次数： 三爪以 上跨入邻格的次数； （2)竖起次数： 以直立次数为垂直活动得分， 动物双足离开底面 lcm为 垂直活动得分， 无论动物站立多长时间直至动物双足放下为 1次活动。 每只动物测定一次， 时间为 5min。 每次实验后需将排泄物彻底清除。 结果见表 6。

表 6 G-1对模型大鼠敞箱法行为的影响

组别 动物数 （只） 剂量 （mg/kg) 水平运动 （次） 垂直运动 （次） 正常组 15 50.92±3.34 13.00±3.16 模型组 15 24.33±3.68 ^Δ 5.92±2.02 ^Δ 氟西汀组 15 15 43.75±4.05* 10.58±2.9l"

G-1组 15 15 36.67士 4.19* 8.83士 2.95"

注： 与正常组比较， P < 0.01 ; *与模型组比较， P < 0.05 ; 与模型组比较， P < 0.01 表 6显示： 模型组大鼠水平、垂直运动次数较正常组大鼠 均明显减少， 说明模型制作成 功。 15mg/kg剂量 G-1连续给药 21天后， 与模型组比较， 可明显增加慢性应激抑郁模型大 鼠水平及垂直运动次数。

⑤对抑郁模型大鼠脑内 5-HT含量的影响

各组大鼠进行敞箱实验后， 断头处死， 在冰台上剥离大脑取丘脑称重记录后， 用 3 ml 的 预冷酸化正丁醇将脑组织匀浆， 旋涡振荡 5 min后， 4°C 6000 r /min离心 5 min， 取上清 液用 Elisa试剂盒进行 5-HT含量测定。 结果见表 7。

表 7 G-1对各组大鼠下丘脑 5-HT含量的影响

组别 动物数 （只） 剂量 （mg/kg) 5-HT含量 （ng/mg)

正常组 10 736.31±42.53

模型组 10 485.30±31.56 ^Δ

氟西汀组 10 15 608.72±32.4Γ

G-1组 10 15 585.85士 56.85'

注： 与正常组比较， P < 0.01 ; *与模型组比较， P < 0.01

表 7显示：模型组大鼠下丘脑 5-HT含量较正常组明显降低，说明模型制作成� �。 15mg/kg 剂量 G-1连续给药 21天， 可显著升高模型大鼠下丘脑 5-HT的含量。 实验四、 抗利血平眼睑下垂抑郁模型实验

( 1 ) 试验材料

①药品

G-U 氟西汀， 参见实施例 1. ( 1 ) ①项。

利血平注射液， 上海复旦复华药业有限公司生产， 规格 lmg/ml， 批号 x070302。

②动物

昆明种小鼠， 实验动物生产许可证： 8〇 ¾京)2006— 0009。

(2) 方法与结果

30只雄性昆明小鼠随机分为 3组， 按表 8所示药物和剂量每日灌胃给药一次， 连续 7 天。 各组动物于末次给药 lh后， 按 4mg/kg腹腔注射利血平， 分别进行指标观测：（1)观测肛 温。 腹腔注射利血平前 (计为 To _h )和注射后 4小时 (计为 T _4h )， 将体温计插入肛门约 8〜5mm 测量肛温 10秒钟， 记录各组小鼠肛温变化的差异（ AT = T。 _h —T _4h )。 （2)观察眼睑下垂。 腹 腔注射利血平 lh后， 将小鼠放于支架上观察 2min， 观察各组小鼠不能睁眼的只数， 计算百 分率。 结果见表 8、 表 9。 表 8 G-l对利血平诱导小鼠体温下降的影响 组别 动物数 （只） 齐 LI量 (mg/kg) 肛温变化 (Δτν ) 溶媒对照 10 3.40±0.40

氟西汀组 10 20 1.69±0.20 '

G-1组 10 20 1.753±0.20 * 与模型组比较， Ρ < 0.05 ; 与模型组比较， Ρ < 0.01 表 9 G-1对利血平所致小鼠眼睑下垂的拮抗作用

组别 动物数 （只） 齐 LI量（mg/kg) 不能睁眼动物数 不能睁眼百分率 （％) 溶媒对照 10 9 90%

氟西汀组 10 20 2 20%

G-1组 10 20 4 40%

脑中生物胺 （去甲肾上腺素、 5-HT、 多巴胺） 耗竭可诱导啮齿类动物体温下降和眼睑 下垂现象，并可被抗抑郁药、单胺氧化酶抑制 剂和中枢兴奋剂所对抗。表 8、表 9显示: 20mg/kg 剂量 G-1连续给药 7天后具有拮抗利血平所致的显著的小鼠体温� �降和眼睑下垂作用。 实验五、 5-羟色胺再摄取抑制实验

(1)实验材料

①药品

G-1 (本发明实施例 1制备得到）、 氟西汀， 参见 1. ( 1 ) ①项下

② 实验试剂

5-HT标准品： 金测分析技术 （天津） 有限公司

半胱氨酸： 天津市博迪化工有限公司， 批号： 20050901

邻苯二甲醛： 北京化学试剂公司， 批号： Q/H82-T 152-2005

NaI0 ₄ : 天津市大茂化学试剂厂， 批号： 20051104

正丁醇、 浓盐酸均为分析纯， 天津化学试剂二厂

③ 实验仪器

FSH-2型可调高速匀浆器： 江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司。

XW-80A微型旋涡混合仪： 上海沪西分析仪器有限公司

HERMLE2323K高速冷冻离心机： 德国

Tecan Infinite M200型多功能酶标仪： 瑞士 TECAN集团公司

④动物

SPF级成年雄性 Wistar大鼠 50只， 体重 180〜220g。 由北京维通利华提供。 生产许可 证： 80 1¾京)2006— 0009

(2) 方法与结果

大鼠断头后迅速取出脑组织， 置于生理盐水冰面上分离脑皮质，加入 9倍体积冰冷的蔗 糖溶液（0.32mol/L pH:7.2)， 0°C匀浆 l〜2min后 4°C离心 lOmin ( 1000g， 3434r/min), 取出 上清液 0°C以下保存用于再摄取试验。 每管中加入突触体、 受试物 （或溶剂）混匀， 37°C孵 育 10min， 随后加入 5-HT, 终体积用 T-K液补足为 lml， 37°C孵育 10min， 立即取出 4°C离 心 lOmin (4000g， 7476r/min), 取沉淀物用正丁醇萃取突触体中的 5-HT。 将正丁醇萃取风 干后加入正庚烷 500ul、 0.1M HC1 200μΚ 0.01M HC1 40μ1, 快速混匀 lmin， 1500r/min离心 5min。 取水相 200μ1随后依次加入半胱氨酸 20μ1、 OPT 300μΚ Ν _¾ ΙΟ ₄ 20μ1, 煮沸 20min， 冷 却后于 365/482nm荧光读数。 抑纖 ^%) + ii¾ ) ⁰

表 10 G-1 对 5- -HT再摄取的抑制

组别 浓度 （ g/ml ) 样本量 抑制率 （％)

对照组 ― 10

氟西汀组 5 10 51

G-1 2.5 10 45

G-1 5 10 63

G-1 10 10 94 表 10 显示 2.5〜l(^g/ml G-1对 5-HT再摄取有一定的抑制作用， 5 g/ml G-1对 5-HT 再摄取的抑制率优于同等剂量的氟西汀。 通过上述实验， 可以得出以下结论：

(1) 在小鼠悬尾法获得性绝望抑郁模型实验中， 20mg/kg剂量的 5'-甲氧基 -3',4'-次甲二 氧基桂皮酸异丁基酰胺无论为单次给药和多次 给药 （给药 7天） 均能明显缩短小 鼠悬尾不动时间。

(2) 小鼠强迫游泳法获得性绝望抑郁模型实验也显 示， 20mg/kg剂量的本发明化合物 单次给药和多次给药 （给药 7天） 都能明显缩短小鼠游泳累积不动时间。

(3) 对于慢性应激所致抑郁大鼠， 15mg/kg剂量的本发明化合物连续给药 21天可明显 增加慢性应激抑郁模型大鼠水平及垂直运动次 数， 并显著升高模型大鼠下丘脑 5-HT的含量。

(4) 在利血平所致眼睑下垂抑郁小鼠模型中， 20mg/kg剂量的本发明化合物连续给药 7 天后具有拮抗利血平所致的显著的小鼠体温下 降和眼睑下垂作用。

(5) 体外实验也显示， 2.5〜10μ _§ /ιη1本发明化合物对 5-HT再摄取有一定的抑制作用。

5μ _§ /ιη1本发明化合物对 5-ΗΤ再摄取的抑制率优于同等剂量的氟西汀。

综上， 可以证明： 本发明所述化合物 5'-甲氧基 -3',4'-次甲二氧基桂皮酸异丁基酰胺对于 抑郁型精神疾病有很好的治疗和预防效果。 附图说明

图 1 5'-甲氧基 -3',4'-次甲二氧基桂皮酸异丁基酰胺终产品 HPLC色谱图 具体实施方式

通过以下具体实施例对本发明作进一步说明， 但不作为对本发明的限制。 实施例 1本发明的化合物 G-1的制备

取大叶筠地上部分， 粉碎， 加入 8倍重量 95%乙醇， 回流提取 2次， 每次 2h， 滤过， 合并提取液， 60°C减压浓缩至膏状。 浸膏用 40%乙醇溶解， 经 D101大孔吸附树脂柱（生药 -树脂比 3: 1 ) 分离， 50%乙醇除去杂质后， 95%乙醇洗脱， 收集洗脱液， 浓缩至膏。 将浸膏 用 100〜200目的硅胶拌样， 按样品干重:硅胶比 1:30过柱分离， 分别以石油醚：乙酸乙酯 (5: 1 和 3: 1)为流动相先后洗脱， 经薄层层析检测， 合并相同部位， 得 G-1〜G-13， 其中 G-1部位 用乙醇-水体系进行重结晶， 得单体化合物 G-1 (即： 化合物 5'-甲氧基 -3',4'-次甲二氧基桂皮 酸异丁基酰胺）， 经 HPLC测定， 重量百分含量为 98.36% (见图 1 )。 实施例 2 片剂的制备

G-1 20g

微晶纤维素 50g

乳 糖 50g

淀 粉 51g

羧甲基淀粉钠 12g

5wt%的 PVP无水乙醇溶液 适量

硬脂 酸 镁 3g

制成 1000片

G-1及处方中其它辅料分别过 100目筛， 称取处方量 G-1与乳糖、 微晶纤维素、 淀粉及 羧甲基淀粉钠采用等量递加法混合均匀，用适 量 PVP的无水乙醇溶液制软材， 14目筛制粒， 50〜60°C干燥 1小时， 加入处方量的硬脂酸镁用 14目筛整粒。 取颗粒用特制菱形异型冲模 压片。

实施例 3胶囊剂的制备

G-1 20g

淀 粉 200g

羧甲基淀粉钠 12g

5wt%的 PVP无水乙醇溶液 适量

硬脂 酸 镁 3g

制成 1000粒

G-1及处方中其它辅料分别过 100目筛，称取处方量 G-1与淀粉及羧甲基淀粉钠采用等 量递加法混合均匀， 用适量 PVP的无水乙醇溶液制软材， 14目筛制粒， 50〜60°C干燥 1小 时， 加入处方量的硬脂酸镁用 14目筛整粒。 取颗粒装入胶囊制成 G-1胶囊剂。

实施例 4注射液的制备

G-1 20g

甘露醇 100g

注射用水 加至 2500ml

制成 1000支

取 G-1 , 加注射用水 1000ml适量使溶解， 搅匀； 另取甘露醇， 加注射用水 500ml使溶 解， 加入上述溶液中， 搅匀， 0.5g活性炭保温搅拌 20分钟， 过滤， 滤液调节 pH值为 4.5〜 5.0， 加注射用水至 2500ml， 除菌过滤， 分装， 即得。

实施例 5 胶丸的制备

取明胶 100份加入 120份水中， 使其吸水膨胀， 另将 30份甘油加热至 60°C， 将膨胀的 明胶加入， 搅拌、 熔融， 得到明胶液， 保温待用。 称取实施例 1制备的化合物 G-1 2g， 加入 4g菜籽色拉油， 搅均， 得到原料油。 将明胶液和原料油装入自动旋转轧囊机， 压制成内含 油状液体 20mg/粒的胶丸， 将胶丸定型、 干燥、 洗涤、 消毒， 包装即得。

实施例 6 滴丸的制备

取 300g聚乙二醇 -4000 (PEG-4000 ) 加热至 75°C， 熔融后加入实施例 1制备的化合物 G-1 15g， 搅拌均匀， 移至滴丸机中， 保持熔融液温度 65°C， 由上往下， 滴速适中滴入 0°C 的液体石蜡中， 制成滴丸剂。

实施例 7 颗粒剂的制备

取实施例 1制备的化合物 G-1 10g， 加入 1.5倍量的糊精， 0.5wt%蔗糖， 1.5wt%微晶纤 维素， 用适量乙醇溶解制成软材， 制粒， 60°C鼓风干燥， 制粒， 整粒， 即得颗粒剂。

实施例 8 滴丸的制备

取实施例 1制备的化合物 G-1 15g， 加入 1000g的聚乙二醇 -6000， 混合均匀， 熔融， 上 滴丸机， 滴入 o°c的液体石蜡中， 制成滴丸。

实施例 9 口腔崩解片的制备

取实施例 1制备的化合物 G-l 18g， 加入 5wt%交联聚维酮， 0.1wt%的硬脂酸镁， 50wt% 的微晶纤维素， 用适量乙醇溶液制成软材， 制粒， 60°C鼓风干燥， 制粒， 整粒， 压制成片， 即得口腔崩解片。

实施例 10 粉针剂的制备

取实施例 1制备的化合物 G-l 25g， 葡萄糖 4.5g、 硫代硫酸钠 0.9g和蒸熘水 lml， 上述 组分混合均匀后， 冷冻干燥， 分装 500支， 即得粉针剂。

实施例 11 胶囊剂的制备

取实施例 1制备的化合物 G-l 17g， 加入等量淀粉、蔗糖和硬脂酸镁， 制粒， 装入胶囊， 即得胶囊剂。

实施例 12 片剂的制备

取实施例 1制备的化合物 G-l 15g， 与淀粉、羧甲基纤维素钠、 滑石粉混合均匀， 制粒， 压片即得片剂。

实施例 13 口服液的制备

取实施例 1制备的化合物 G-l 25g， 与糖浆 4g—起溶于 100ml的纯净水中， 均质， 过 滤， 经过高温瞬时灭菌 （135°C， 4s)。 无菌灌装、 分装， 制得口服液。

实施例 14 片剂的制备

G-l 25g

微 晶 纤维素 55g

乳 糖 55g

淀 粉 50g

羧甲基淀粉钠 12g

5wt%的 PVP的无水乙醇溶液 适量

硬 脂酸 镁 3g

制成 1000片

G-1及处方中其它辅料分别过 100目筛， 称取处方量 G-1与乳糖、 微晶纤维素、 淀粉及 羧甲基淀粉钠采用等量递加法混合均匀，用适 量 PVP的无水乙醇溶液制软材， 14目筛制粒， 50〜60°C干燥 1小时， 加入处方量的硬脂酸镁用 14目筛整粒。 取颗粒用特制菱形异型冲模 压片。

实施例 15 胶囊剂的制备

G-l 20g

淀 粉 220g

羧甲基淀粉钠 18g

5wt%PVP的无水乙醇溶液 适量

硬 脂酸 镁 5g

¾ ~~ 1000粒

G-1及处方中其它辅料分别过 100目筛，称取处方量 G-1与淀粉及羧甲基淀粉钠采用等 量递加法混合均匀， 用适量 PVP的无水乙醇溶液制软材， 14目筛制粒， 50〜60°C干燥 1小 时， 加入处方量的硬脂酸镁用 14目筛整粒。 取颗粒装入胶囊制成 G-1胶囊剂。

实施例 16 注射液的制备

G-l 28g

甘露醇 120g

注射用水 加至 2500ml

制成 1000支 取 G-l， 加注射用水 1000ml适量使溶解， 搅匀； 另取甘露醇， 加注射用水 500ml使溶 解， 加入上述溶液中， 搅匀， 0.5g活性炭保温搅拌 20分钟， 过滤， 滤液调节 pH值为 4.5〜 5.0， 加注射用水至 2500ml， 除菌过滤， 分装， 即得。

实施例 17 胶丸的制备

取明胶 100份加入 130份水中， 使其吸水膨胀， 另将 35份甘油加热至 60°C， 将膨胀的 明胶加入， 搅拌、 熔融， 得到明胶液， 保温待用。 称取实施例 1制备的化合物 G-1 2g， 加入 4g 大豆色拉油， 搅均， 得到原料油。 将明胶液和原料油装入自动旋转轧囊机， 压制成内含 油状液体 20mg/粒的胶丸， 将胶丸定型、 干燥、 洗涤、 消毒， 包装即得。

实施例 18 滴丸的制备

取 330g聚乙二醇 -4000 (PEG-4000 ) 加热至 75°C， 熔融后加入实施例 1制备的化合物 G-l 25g， 搅拌均匀， 移至滴丸机中， 保持熔融液温度 65°C， 由上往下， 滴速适中滴入 0°C 液体石蜡中， 制成滴丸剂。

实施例 19 胶丸的制备

取明胶 100份加入 130份水中， 使其吸水膨胀， 另将 35份甘油加热至 60°C， 将膨胀的 明胶加入， 搅拌、 熔融， 得到明胶液， 保温待用。 称取实施例 1制备的化合物 G-1 2g， 加入 4g玉米油， 搅均， 得到原料油。 将明胶液和原料油装入自动旋转轧囊机， 压制成内含油状 液体 20mg/粒的胶丸， 将胶丸定型、 干燥、 洗涤、 消毒， 包装即得。

实施例 20 胶丸的制备

取明胶 100份加入 130份水中， 使其吸水膨胀， 另将 35份甘油加热至 60°C， 将膨胀的 明胶加入， 搅拌、 熔融， 得到明胶液， 保温待用。 称取实施例 1制备的化合物 G-1 2g， 加入 4g橄榄油， 搅均， 得到原料油。 将明胶液和原料油装入自动旋转轧囊机， 压制成内含油状 液体 20mg/粒的胶丸， 将胶丸定型、 干燥、 洗涤、 消毒， 包装即得。

实施例 21 胶丸的制备

取明胶 100份加入 130份水中， 使其吸水膨胀， 另将 35份甘油加热至 60°C， 将膨胀的 明胶加入， 搅拌、 熔融， 得到明胶液， 保温待用。 称取实施例 1制备的化合物 G-1 2g， 加入 4g花生油， 搅均， 得到原料油。 将明胶液和原料油装入自动旋转轧囊机， 压制成内含油状 液体 20mg/粒的胶丸， 将胶丸定型、 干燥、 洗涤、 消毒， 包装即得。

实施例 22 胶丸的制备

取明胶 100份加入 130份水中， 使其吸水膨胀， 另将 35份甘油加热至 60°C， 将膨胀的 明胶加入， 搅拌、 熔融、， 得到明胶液， 保温待用。 称取实施例 1制备的化合物 G-1 2g， 加 入 4g芝麻油， 搅均， 得到原料油。 将明胶液和原料油装入自动旋转轧囊机， 压制成内含油 状液体 20mg/粒的胶丸， 将胶丸定型、 干燥、 洗涤、 消毒， 包装即得。

实施例 23 胶丸的制备

取明胶 100份加入 120份水中， 使其吸水膨胀， 另将 30份甘油加热至 60°C， 将膨胀的 明胶加入， 搅拌、 熔融， 得到明胶液， 保温待用。 称取实施例 1制备的化合物 G-1 2g， 加入 6g菜籽色拉油， 搅均， 得到原料油。 将明胶液和原料油装入自动旋转轧囊机， 压制成内含 油状液体 20mg/粒的胶丸， 将胶丸定型、 干燥、 洗涤、 消毒， 包装即得。

实施例 24 胶丸的制备

取明胶 100份加入 120份水中， 使其吸水膨胀， 另将 30份鱼油加热至 60°C， 将膨胀的 明胶加入， 搅拌、 熔融， 得到明胶液， 保温待用。 称取实施例 1制备的化合物 G-1 2g， 加入 6g菜籽色拉油， 搅均， 得到原料油。 将明胶液和原料油装入自动旋转轧囊机， 压制成内含 油状液体 20mg/粒的胶丸， 将胶丸定型、 干燥、 洗涤、 消毒， 包装即得。

实施例 25 胶丸的制备

取明胶 100份加入 120份水中， 使其吸水膨胀， 另将 35份鱼油加热至 60°C， 将膨胀的 明胶加入， 搅拌、 熔融， 得到明胶液， 保温待用。 称取实施例 1制备的化合物 G-1 2g， 加入 6g菜籽色拉油， 搅均， 得到原料油。 将明胶液和原料油装入自动旋转轧囊机， 压制成内含 油状液体 20mg/粒的胶丸， 将胶丸定型、 干燥、 洗涤、 消毒， 包装即得。

上述实施例内的组分量可以根据生产需要同时 扩大或缩小比例。