La rétinite pigmentaire désigne un ensemble de ces maladies dégénératives des photorécepteurs (Berson, 1996) conduisant à la cécité.

De nombreuses mutations affectant différentes protéines des bâtonnets, et susceptibles d'tre à l'origine de cette maladie, ont été mises en évidence. Parmi ces mutations, on peut citer celles affectant les gènes de protéines impliquées dans la cascade de la phototransduction, telles que la rhodopsine, la transducine, la phosphodiestérase, l'arrestine, ou de protéines structurales, telle que la périphérine.

La souris rd (retinal degeneration) a été étudiée pendant plus de 70 ans comme modèle de la rétinite pigmentaire (Farber et coll., 1994) car le processus de dégénérescence rétinienne est similaire à celui observé dans la rétine pigmentaire, la mort des bâtonnets de la rétine étant suivie par une perte inexpliquée des cônes de la rétine. De plus, la mutation causale a été localisée dans le gène codant pour la sous-unité P de la cGMP-phosphodiestérase (PDE) (Bowes et coll., 1990), comme dans certaines familles affectées par la maladie (Mc Laughlin et coll., 1993).

La PDE est activée durant la cascade de phototransduction par la chaîne a de la transducine, elle-mme activée par la rhodopsine stimulée par la lumière. La PDE activée hydrolyse le cGMP, réduisant ainsi la concentration de cGMP et donc le nombre des canaux cGMP-dépendants ouverts, la conséquence finale étant une diminution de la conductance aux cations tels que Na+ et Ca2+ d'où une réduction du courant de dépolarisation des photorécepteurs dans l'obscurité. Chez la souris rd, Farber et Lolley (1974) ont montré qu'une augmentation anormale de la concentration de cGMP précède la dégénérescence des photorécepteurs. La toxicité du cGMP à forte concentration a ensuite été établie sur des photorécepteurs normaux (Lolley et Farber, 1977 ; Ulshafer et coll., 1980).

Quelques approches thérapeutiques destinées à prévenir la perte de photorécepteurs sont actuellement en cours d'investigation sur les souris rd. Il a ainsi été décrit que la thérapie génique in vivo permet de retarder la mort des photorécepteurs pendant six semaines après injection sous-rétinienne d'un adénovirus recombinant à réplication défectueuse qui contient l'ADNc codant la PDE murine (Bennett et coll., 1996). La transplantation de photorécepteurs (Gouras et coll., 1994, Silverman et coll., 1989) a été décrite comme permettant de préserver les photorécepteurs des cônes (Mohand-Said et coll., 1997).

L'interprétation de cet effet en tant que mécanisme paracrine est en corrélation avec l'augmentation de la survie des photorécepteurs observée en coculture avec des photorécepteurs sains (Mohand-Said et coll., 1998) ou après application in vivo ou in vitro de facteurs trophiques tels que les facteurs de croissance fibroblastiques ou neuronaux (LaVail et coll., 1998).

Cependant, aucun traitement des maladies de la rétine dues à une dégénérescence des photorécepteurs, n'est actuellement disponible, mise à part la prescription de vitamine A pour la rétinite pigmentaire (Berson, 1996).

La présente invention a précisément pour but de fournir des compositions pharmaceutiques utilisables dans le cadre du traitement de maladies de la rétine dues à une dégénérescence des photorécepteurs chez l'homme ou l'animal.

En effet, la présente invention découle de la mise en évidence par les Inventeurs du fait que les composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMP- dépendants, tels que le chlorhydrate de diltiazem, permettent non seulement de ralentir la dégénérescence des bâtonnets et des cônes chez la souris rd, mais également de préserver la capacité des cellules rétiniennes à répondre aux stimuli lumineux.

Ainsi, la présente invention a pour objet l'utilisation de composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMP-dépendants pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des pathologies liées à la dégénérescence des photorécepteurs de la rétine, et plus particulièrement de la rétinite pigmentaire, ou de pathologies touchant semblablement les photorécepteurs, telle que la dégénérescence maculaire liée à l'âge.

Par composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMP-dépendants on entend tout composé capable de réduire la conductance ionique de ces canaux.

L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation du diltiazem (D- cis-énantiomère), du L-cis-énantiomère, de leurs métabolites et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des pathologies liées à la dégénérescence des photorécepteurs de la rétine, notamment au traitement de la rétinite pigmentaire, ou de pathologies

touchant semblablement les photorécepteurs, telle que la dégénérescence maculaire liée à l'âge.

L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée du diltiazem de formule ainsi que ses sels d'addition aux acides pharmaceutiquement acceptables, notamment le malate ou le chlorhydrate de diltiazem.

L'invention a également pour objet l'utilisation susmentionnée du L-cis énantiomère du diltiazem, ou le racémate du diltiazem, ainsi que leurs sels d'addition aux acides pharmaceutiquement acceptables, notamment le chlorhydrate de l'isomère cis (-) de formule suivante : L'invention concerne également l'utilisation susmentionnée de l'un des métabolites du diltiazem, ainsi que leurs sels d'addition aux acides pharmaceutiquement acceptables, répondant aux formules suivantes :

Avantageusement, les composés bloqueurs des canaux calciques et/ou cGMP-dépendants susmentionnés sont utilisés pour la préparation de compositions pharmaceutiques se présentant sous une forme administrable par toute voie, notamment par voie orale, intramusculaire, intraveineuse, intraoculaire, ou sous forme de collyre.

De préférence les compositions pharmaceutiques de l'invention comprennent, sous forme unitaire, environ 0,1 à environ 100 mg d'un composé bloqueur des canaux calciques et/ou cGMP-dépendants, tel que défini ci-dessus, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.

L'invention sera davantage illustrée à l'aide des figures 1 à 3 suivantes.

La figure 1 illustre la survie des bâtonnets au 25° jour et au 36° jour postnatal chez les souris rd traitées par le chlorhydrate de diltiazem. Les injections de chlorhydrate de diltiazem ont débutés au 9° jour postnatal qui correspond à la période d'apparition des premiers signes de dégénérescence des bâtonnets. Les doses de chlorhydrate de diltiazem (2,5 mg/ml dans une solution physiologique) ont été augmentées graduellement à partir de 501l1 par jour jusqu'à 100 ul deux fois par jour suivant la croissance de l'animal. Puisque les électrorétinogrammes (ERG) ont été mesurés avant le sacrifice des animaux, la dernière injection a été donnée 48 heures avant la mesure physiologique. Après fixation des rétines, les bâtonnets ont été marqués par des anticorps anti-rhodopsine (rho-4D2) (Hicks and Molday, 1986) et leur nombre a été estimé par stéréologie sur les rétines mises à plat en utilisant une procédure d'échantillonnage aléatoire (Mohand-Said et coll.,

1998). Seules les rétines droites ont été prises en considération afin d'obtenir des résultats indépendants. Le traitement au chlorhydrate de diltiazem a augmenté de 86 % la survie des bâtonnets au 25° jour, et de 148 % au 36° jour chez les animaux traités par rapport aux souris rd de contrôle. Des injections répétées de solution physiologique seule n'ont pas affecté de façon significative la survie des bâtonnets (7416 + 1291, s. e. m., n = 5) par rapport aux animaux non traités (7648 + 774, s. e. m., n = 4). Ces observations montrent donc que le traitement des souris rd par le chlorhydrate de diltiazem induit une survie des bâtonnets.

La figure 2 illustre la survie des cônes au 25° jour et au 36° jour postnatal chez les souris rd traitées par le chlorhydrate de diltiazem. Le nombre de cônes a été estimé indirectement après coloration des noyaux avec le DAPI (4', 6-diamino- 2-phénylindole) sur des coupes de rétines. Pour obtenir ce nombre, le nombre de bâtonnets immunomarqués a été soustrait du nombre de noyaux de photorécepteurs marqués au DAPI. Le traitement au chlorhydrate de diltiazem a augmenté de 109 % la survie des cônes au 25° jour, et de 144 % au 36° jour chez les animaux traités par rapport aux souris rd de contrôle.

La figure 3 illustre le fait que la survie des photorécepteurs est accompagnée d'améliorations physiologiques chez les souris rd traitées par le chlorhydrate de diltiazem. Cette démonstration a été effectuée par mesure des ERG chez les souris rd traitées et les souris rd de contrôle. Chez des souris rd non traitées, les amplitudes des ondes a et b des ERG diminuent régulièrement à partir du 12° jour postnatal jusqu'à extinction au 24° jour postnatal. En revanche, tous les animaux traités présentent des signaux ERG AU 25° jour postnatal (n = 7). Au 36° jour postnatal, 4 animaux traités sur 10 présentent des signaux ERG pouvant tre mesurés dans les deux yeux. Ces observations montrent que le traitement par le chlorhydrate de diltiazem non seulement permet aux bâtonnets de survivre mais protège aussi les fonctions visuelles de la rétine.

Légende des figures : -Figure 1 : estimation du nombre de bâtonnets sur des rétines entières de souris rd de 25 jours et de 36 jours traitées par le chlorhydrate de diltiazem, par rapport aux souris rd de contrôle non traitées.

-Figure 2 : estimation du nombre de cônes et de bâtonnets sur des coupes de rétines de souris rd de 25 jours et de 36 jours traitées par le chlorhydrate de diltiazem, par rapport aux souris rd de contrôle non traitées.

-Figure 3 : effet du chlorhydrate de diltiazem sur l'ERG mesuré chez les souris rd. A) représentation des enregistrements d'ERG mesurés chez les souris rd traitées et de contrôle au 25° et au 36° jour postnatal. B) effet du chlorhydrate de diltiazem sur l'onde b de 1'ERG ; la courbe correspondant à la mesure de l'amplitude de l'onde b en fonction du temps chez les souris rd de contrôle est représentée à l'aide de cercles creux, tandis que celle correspondant à cette mme mesure chez les souris rd traitées par le chlorhydrate de diltiazem est représentée à l'aide de carrés noirs.

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