技术领域

本发明涉及药物化学， 具体涉及 Α-失碳 -5α-雄 垸化合物在制备抗恶性肿瘤 药物中的应用。 背景技术

恶性肿瘤已逐渐取代心脑血管疾病成为全球头 号杀手。 第五届亚太癌症预防 组织大会发表的《2010年癌症报告》警告说， 今后 20年世界癌症患者人数将呈快 速上升趋势。 从 2008年至 2030年， 全球新增癌症患者人数将从每年的 1240万增 至 2640万， 其中亚太地区患者占全世界癌症患者总数的 60%。

₂₀₀₇ 年全球有 ₇₆₀ 万人死于恶性肿瘤。 在发达国家， 恶性肿瘤死亡率占其总 死亡人数的 21.6%。 在中国， 恶性肿瘤发病率上升尤其明显， 每年发病人数约 260 万， 死亡 180万， 在过去 30年中死亡率增加了 80%， 已成为中国城市和农村居民 的第一位死因。

目前使用的大多数抗肿瘤药物缺少选择性抑制 肿瘤的作用， 在抑制恶性肿瘤 生长发育的同时， 对机体的正常细胞， 特别是增殖旺盛的骨髓细胞、 消化道粘膜 上皮细胞、 生殖细胞等有明显的损伤作用， 并对机体的重要器官： 肝、 肾、 心、 肺、 神经系统等也都有一定的毒性作用。 甚至有骨髓抑制、 消化道反应、 脱发、 肝损害、 心脏毒性、 泌尿生殖系统毒性、 致癌致畸等毒副作用等。 因此， 研究开 发毒副反应小、 疗效好的抗恶性肿瘤的药物是一直关注的热点 问题。

李瑞麟等人合成了多种 Α-失碳 -5α-雄 垸化合物。 动物药效试验表明， 这些 化合物有较好的治疗前列腺增生的作用 (专利号为： ZL00116781.2)。然而在本发明 之前， 尚未揭示 Α-失碳 -5α-雄 垸化合物具有抗肿瘤活性。 发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种药物 毒性小， 治疗效果好的抗恶性 肿瘤药物新药。

本发明提供了 Α-失碳 -5α-雄 垸化合物 (式 II化合物)或其药学上可接受的盐 在制备抗恶性肿瘤药物中的应用， 所述化合物具有通式 II所示的结构，

式中，

=为单键或双键；

〜R ³ 为- OR ² ， 其中 R ² 选自 H、 取代或未取代的 - C H)垸基、 取代或未取代的 -C ₃ _ ₈ 环垸基、 取代或未取代的苯环、 取代或未取代的苯甲酰基、 取代或未取代的 -COC _n H _2n+1 、 取代或未取代的 -COC _r H _2r COOC _m H _2m+1 、 或 -COC _p H _2p COO-W， 并且

R ⁴ 选自 H、 -CN、 取代或未取代的 C ₂ _ ₆ 炔基、 取代或未取代的 C ₂ _ ₆ 烯基、 取代 或未取代的 C ₃ _ ₆ 联烯基、 取代或未取代的 -CO(C ₃ _ ₁₂ 环烯基)；

或者， 〜R ³ 为 =0、 =N-OH、 =N-NR ⁸ R ⁹ ， R ⁸ 、 R ⁹ 独立地选自为 H、 取代或未 取代的 d_ ₄ 垸基、 取代或未取代的 -COC _n H _2n+1 、 取代或未取代的 -COC _r H _2r COOC _m H _2m+1 、 或 -COC _p H _2p COO-W; 且 R ⁴ 为无；

R ⁵ 为无、 H、 或取代或未取代的 d_ ₄ 垸基；

R ¹⁰ 、 I ¹¹ 、 R ¹² 、 R ¹³ 独立地选自 H、 取代或未取代的 d_ ₄ 垸基;

→R ⁶ 为 -OR ¹ , R ¹ 选自 H、 取代或未取代的 -C H)垸基、 取代或未取代的 -C ₃ _ ₈ 环垸基、 取代或未取代的苯环、 取代或未取代的苯甲酰基、 取代或未取代的 -COC _n H _2n+1 、 取代或未取代的 -COC _r H _2r COOC _m H _2m+1 、 或 -COC _p H _2p COO-W; 且 R ⁷ 选自无、 H、 -CN、 取代或未取代的 C ₂ _ ₆ 炔基、 取代或未取代的 C ₂ _ ₆ 烯基、 取代或 未取代的 C ₃ _ ₆ 联烯基、 取代或未取代的 -CO(C ₃ _ ₁₂ 环烯基)； 或者

→R ⁶ 为 =0、 =N-OH、 =N-NR ⁸ R ⁹ ， R ⁸ 、 R ⁹ 独立地选自为 H、 取代或未取代的 d_ ₄ 垸基、 取代或未取代的 -COC _n H _2n+1 、

或 -COC _p H _2p COO_W; 且 R ⁷ 为无以及=为单键；

上述各 n、 p、 r各自独立地为 0〜18的整数， 而各 m独立地为 0〜18的整数； 各 W独立地为 Na+、 K+、 NH ₄ +、 l/2Ca ²⁺ 、 l/2Mg ²⁺ 、 1/2(Α1ΟΗ) ²⁺ 、 或 l/2Zn ²⁺ ， 所述取代是指具有一个或多个 （如 1-3 个） 以下取代基团： 羟基、 卤素、 硝 基、 氨基、 胺基、 羧基；

附加条件是， 当=为双键时 R ⁷ 为无。

在另一优选例中， 胺基包括用 CM垸基单取代或二取代的胺基。

在另一优选例中， 所述通式 II中， =、 〜、 →为单键； 1 ⁵ 为11、 取代或未取代的 c ₂ _ ₃ 垸基； 所述取代是指具有 以下一个或多个 （如 1-3个） 取代基团： 羟基、 卤素、 硝基、 氨基；

R ⁶ 为 -OR ¹ , R ³ 为 -OR ² ， R R ² 独立地选自 H、 -C^ ₃ 垸基、 卤代或未取代的 -COC _n H _2n+1 、 -COC _s H _2s COOH、 -COC _r H _2r COOC _m H _2m+1 、 -COC _p H _2p COO"W, 取代或 未取代的 -CO(C ₆ _ ₈ )环烯基， 所述取代是指具有以下取代基团： 羟基、 卤素、 硝基、 氨基、 羧基， 其中， n为 1〜10 (较佳地 1〜5 )、 s为 1〜8 (较佳地 1〜3 )， m为 1〜4 (较佳地 1〜3 )， r为 1〜8 (较佳地 2〜8)， p为 2〜4， W为 Na ⁺ 、 l/2Ca ²⁺ 、 1/2(Α1ΟΗ) ²⁺ 、 或 l/2Zn ²⁺ _;

R\ R ⁷ 独立地选自 H、 -CN、 c ₃ _ ₄ 联烯基、 取代或未取代的 c ₂ _ ₄ 炔基， 所述取 代是指具有以下取代基团： 羟基、 胺基。

在另一优选例中， 所述式 II化合物为：

2α, 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基化合物 la;

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双乙酸酯化合物 lb; 2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双丙酸酯化合物 Ic; 2α, 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基 -2β-单琥珀酸酯化合物

Id;

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双琥珀酸酯化合物 Ie;

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双丁酸酯化合物 If;

2α, 17α-双羟丙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基化合物 Ig;

2α, 17α-双氰基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基化合物 Ih;

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双三氯乙酸酯化合物 Ii;

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基 -2β-丙酸酯 -17β 琥珀酸 酯化合物 Ij ;

2α, 17α-双丙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基化合物 Ik; 或

2 α, 17α-双丙炔基 -A-失碳 -5α-雄 垸 -2β， 17β-双羟基双丙酸酯化合物 II。 在另一优选例中， 所述通式 II中，

=为单键； R ⁵ 为 H; R\ R ⁷ 为无；

→R ⁶ 、 〜R ³ 独立地选自 =N-OH、 =N-NR ⁸ R ⁹ ， R ⁸ 、 R ⁹ 独立地选自为 H、 -COC _n H _2n COOH， n为 2〜4。

在另一优选例中， 所述通式 II中，

=为单键； R ⁵ 为 H;

〜R ³ 为 -OR ² ， R ² 选自 H、 -COC _n H _2n+1 、 -COC _n H _2n COOH、 -COC _r H _2r COOC _m H _2m+1 、 或 -COC _p H _2p COO— W时， R ⁴ 为 C ₂ . ₄ 炔基； 其中， n为 1〜4， r为 1〜3， m为 1〜2， p 为 1〜3， W为 Na ⁺ 、 l/2Ca ²⁺ 、 l/2(A10H) ²⁺ 、 或 l/2Zn ² 2 ⁺ +; →R ⁶ 为 =0、 =N-OH、 或 =N-NH ₂ ; 或者

〜R ³ 为 =0、 =N-OH、 ^=N-NH ₂ ; R ⁴ 为无； >R ⁶ 为 OCOC ₂ H ₅ ; R ⁷ 为 -CN。 在另一优选例中， 所述通式 II中，

=为双键； R ⁷ 、 R ⁵ 为无； →R ⁶ 为 -CN;

〜R ³ 为 -OR ² ， 1 ² 为11、 或 -C^ ₄ 垸基； R ⁴ 为 CM炔基； 或者

〜R ³ 为 =0、 =N-OH、 ^=N-NH ₂ ; R ⁴ 为无。

在另一优选例中， 所述药物是由 A-失碳 -5α-雄 垸化合物作为活性成分与药 用辅料制备的药物组合物。

在另一优选例中， 所述药物是由下列之一的化合物作为活性成分 与药用辅料 制备的药物组合物：

2α, 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基化合物 Ia、

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双乙酸酯化合物 Ib、 2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双丙酸酯化合物 Ic、 2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基 -2β-单琥珀酸酯化合物 Id、

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双琥珀酸酯化合物 Ie或

2α, 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双丁酸酯化合物 If;

2α, 17α-双羟丙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基化合物 Ig;

2α, 17α-双氰基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基化合物 Ih;

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双三氯乙酸酯化合物 Ii;

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基 -2β-丙酸酯 -17β 琥珀酸 酯化合物 Ij ;

2α, 17α-双丙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基化合物 Ik;

2α, 17α-双丙炔基 -A-失碳 -5α-雄 垸 -2β， 17β-双羟基双丙酸酯化合物 II。 在另一优选例中， 所述药物为经口服、 注射或肠道给药的药物组合物。

在另一优选例中， 所述药物可用于治疗的恶性肿瘤， 包括 (但不限于)： 肝癌、 肺癌（包括纵隔癌）、 口腔上皮癌、 鼻咽癌、 甲状腺癌、 食道癌、 淋巴癌、 胸腔癌、 消化道癌、 胰腺癌、 肠癌、 乳腺癌、 卵巢癌、 子宫癌、 肾癌、 胆囊癌、 胆管癌、 中枢神经癌、 睾丸癌、 膀胱癌、 前列腺癌、 皮肤癌、 黑色素瘤、 肉癌、 脑癌、 血 癌（白血病） 、 宫颈癌、 胶质瘤、 胃癌、 或腹水瘤。

本发明的另一方面， 提供 Α-失碳 -5α-雄 垸化合物在制备抗恶性肿瘤药物中 的应用， 所述化合物具有下列通式 III， 具体包括 Ia， lb, Ic， Id, Ie, If, Ig, Ih, Ii, Ij , Ik, II 12个化合物。

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄 垸 -2β， 17β-双羟基化合物 la; 2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双乙酸酯化合物 lb;

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双丙酸酯化合物 Ic;

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基 -2β-单琥珀酸酯化合物 Id;

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄 垸 -2β， 17β-双羟基双琥珀酸酯化合物 Ie;

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双丁酸酯化合物 If;

2α, 17α-双羟丙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基化合物 Ig;

2α, 17α-双氰基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基化合物 Ih;

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双三氯乙酸酯化合物 Ii;

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基 -2β-丙酸酯 -17β 琥珀酸酯化 合物 Ij;

2α, 17α-双丙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基化合物 Ik;

2α, 17α-双丙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双丙酸酯化合物 II；

式中:

R'=R -H ⁴ = ⁷ = -C≡CH 化合物 la o II

= — C-CH ₃ ⁴ = ⁷ = -C≡CH 化合物 lb

R!= -C-CH ₂ CH ₃ ⁴ = ⁷ = -C≡CH 化合物 Ic

_R l= -C≡CH 化合物 Id = — C-CH ₂ CH ₂ C0 ₂ H ⁴ = ⁷ = -C≡CH 化合物 Ie

O

II

= C ^— CH2CH2CH3 ⁴ = ⁷ = -C≡CH 化合物 If = ^: -H ⁴ = ⁷ = -C≡CHCH ₂ OH 化合物 Ig = ^: -H ⁴ = ⁷ = -CN 化合物 Ih = ^: -COCCI, ⁴ = ⁷ = -C≡CH 化合物 Ii

R'=-COC ₂ H ₅ ， =-COC ₂ H ₄ CO ₂ H ⁴ = ⁷ = -C≡CH 化合物 Ij = = -H ⁴ = ⁷ = -C≡CCH ₃ 化合物 Ik

O

II

_R l _{= R} 2 ₌ — C-CH2CH3 ⁴ = ⁷ = -C≡CCH ₃ 化合物 11 本发明的化合物经体外对人肝癌细胞 Hep 3B 人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、 人肺腺癌细胞 A549、 小鼠黑色素瘤 B16等癌细胞的生长抑制率平均为 85%以上， 最高的达到 99.98%; 活体试验中， 对小鼠肿瘤， 如肠癌 C26、 肝癌 H22、 Lewis 肺癌、 B16黑色素瘤、 肉癌 S37、子宫颈癌 U14、脑癌 B22等的平均抑制率为 50% 以上， 最高的达到 63.19%; 对移植于裸鼠的人肝癌 QGY、 人乳腺癌 Bcap37、 人 胃癌 MKN-45、 人肝癌 HepG-2、 人卵巢癌 SKOV3、 人肠癌 COL-205、 人食道癌 TE-1、 人胰腺癌 PANC-1等肿瘤细胞生长有明显抑制作用。

本发明化合物具有极低的或无毒副作用。 小鼠灌胃试验， LD _5Q 均大于 800mg/kg ， 并通过解剖肉眼所见， 心、 肝、 肺、 脾、 肾及其他脏器与正常动物相 比未见异常。

试验结果表明： 本发明的化合物具有明显的抗恶性肿瘤作用， 并且十分安全， 同时证明了本发明的化合物具有广谱的抗恶性 肿瘤作用。 因此， 可以制备抗恶性 肿瘤药物， 所述药物是由 A-失碳 -5α-雄 垸化合物作为活性成分与药用辅料制备 的药物组合物。

本发明还提供一种治疗肿瘤方法， 包括步骤： 给需要治疗的对象 （如人） 施 用本发明所述的式 II化合物或其药学上可接受的盐， 或含本发明化合物的药物组 合物。

本发明还提供一种体外 （非治疗性） 抑制肿瘤细胞的方法， 包括步骤： 在本 发明化合物存在下， 培养肿瘤细胞， 从而抑制肿瘤细胞的生长； 或者

将肿瘤细胞与本发明化合物接触， 从而抑制肿瘤细胞生长。 发明详述

本发明人通过长期而深入的研究， 意外地发现了式 II化合物具有极其有效的 抑制肿瘤细胞生长的功能， 并且其毒副作用极小。 在此基础上， 发明人完成了本 发明。 活性成分

术语 "活性成分"或 "本发明化合物"可互换使用， 指式 II化合物、 或其药 学上可接受的盐、 或其水合物或其溶剂合物。 该活性成分可用于治疗肿瘤。 制备方法

本发明化合物可用常规方法制备。 一种优选方法包括下列步骤：

( 1 ) 制备 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基化合物 (la) 以 A-失碳 -5α-雄 垸 -2， 17-双酮为原料， 将氢氧化钾或叔丁醇钾溶于四氢呋 喃溶剂中， 低温 -100°C〜30°C条件下通乙炔至不再吸收， 反应 0.5〜24小时生成 2α， 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基化合物 (la); 所述 A-失碳 -5α-雄甾 垸 -2， 17-双酮与氢氧化钾及叔丁醇钾的摩尔比为 1:1〜 1:100;

(2) 制备 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双乙酸酯 (lb) 化合物 la溶于吡啶中， 加入乙酸酐， 醋酸钠为触媒， 回流反应 1〜24小时， 反 应毕冷至室温， 缓慢滴加乙酸酐摩尔量 1〜20倍的甲醇破坏过量的乙酸酐， 用乙酸 乙酯萃取， 合并有机层， 水洗至 PH为 7， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩 至干， 用甲醇重结晶得 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双乙 酸酯 (lb); 所述化合物 la 与乙酸酐的摩尔比为 1:1〜 1:100， 醋酸钠用量为 la 的 0.1〜100mol%， 每次萃取用乙酸乙酯量与 la体积质量比为 1:1〜 100:1， 萃取次数为 1-50 次， 重结晶用甲醇量与 la 体积质量比为 1:1〜 50:1， 重结晶溶解温度为 0〜100°C;

(3) 制备 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双丙酸酯 (Ic) 化合物 la溶于吡啶中， 加入丙酸酐， 醋酸钠为触媒， 回流反应 1〜24小时， 反 应毕冷至室温， 缓慢滴加丙酸酐摩尔量 1〜20倍的甲醇破坏过量的丙酸酐， 用乙酸 乙酯萃取， 合并有机层， 水洗至 PH为 7， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩 至干， 用乙醇重结晶得 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双丙 酸酯 (Ic); 所述化合物 la 与丙酸酐的摩尔比为 1:1〜 1:100， 醋酸钠用量为 la 的 0.1〜100mol%， 每次萃取用乙酸乙酯量与 la体积质量比为 1:1〜 100:1， 萃取次数为 1-50 次， 重结晶用乙醇量与 la 体积质量比为 1:1〜 50:1， 重结晶溶解温度为 0〜100°C。

(4) 制备 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基 -2β-单琥珀酸 酯化合物 (Id)

化合物 la与琥珀酸酐， 在吡啶中以醋酸钠为触媒， 回流反应 1〜24小时， 加水 水解过量的酸酐， 乙酸乙酯萃取， 有机层水洗至 PH为 7, 减压浓缩析出固体， 甲 醇 -水重结晶得 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基 -2β-单琥珀酸 酯化合物 (Id); 所述化合物 la与琥珀酸酐的摩尔比为 1:0.5〜 1:100， 醋酸钠用量为 la的 0.1〜100mol%， 水解酸酐所用水量为酸酐摩尔量的 1〜20倍， 每次萃取用乙酸 乙酯量与 la体积质量比为 1:1〜 100:1， 萃取次数为 1〜50次， 重结晶甲醇和水的比 例为 100:1〜1:10 (体积比）， 甲醇-水混合溶剂的用量与 la体积质量比为 1:1〜50:1， 重结晶溶解温度为 0〜100°C;

(5)制备 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双琥珀酸酯化 合物 (Ie)

化合物 la与琥珀酸酐在吡啶中， 以对甲苯磺酸 PTS为触媒， 回流反应 1〜24 小时， 加水水解过量的酸酐， 乙酸乙酯萃取有机层水洗至 PH为 7， 减压浓缩析出 固体， 95%乙醇重结晶得 2α， 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双 琥珀酸酯化合物 (Ie); 所述化合物 la与琥珀酸酐的摩尔比为 1 :1〜 1 :100， PTS用量 为 la的 0.1〜100mol%，水解酸酐所用水量为酸酐摩尔量� � 1〜20倍， 每次萃取用乙 酸乙酯量与 la体积质量比为 1 : 1〜 100:1， 萃取次数为 1〜50次， 重结晶用 95%乙醇 量与 la体积质量比为 1 :1〜 50:1， 重结晶溶解温度为 0〜100°C ;

(6) 制备 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5a-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双丁酸酯化合 物 (If)

化合物 la与丁酸酐， 以 PTS为触媒， 100°C搅拌反应 1〜12小时， 加水水解过 量的酸酐， 析出固体， 过滤， 滤饼水洗至 PH为 7， 95%乙醇重结晶得 2a， Ha双乙炔基 -A-失碳 -5a-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双丁酸酯化合物 (If); 所述化合物 la 与丁酸酐的摩尔比为 1 :1〜 1 :100， PTS用量为 la的 0.1〜100mol%，水解酸酐所用水 量为酸酐摩尔量的 1〜20倍，每次萃取用乙酸乙酯量与 la体积质量比为 1: 1〜 100:1， 萃取次数为 1〜50次， 重结晶用 95%乙醇量与 la体积质量比为 1 :1〜 50:1， 重结晶 溶解温度为 0〜100°C。 药物组合物和给药方式

术语 "活性成分"或 "本发明化合物"可互换使用， 指式 II化合物、 或其药 学上可接受的盐、 或其水合物或其溶剂合物。 该活性成分可用于治疗肿瘤。

本发明还提供一种用于治疗肿瘤的药物组合物 ， 含有本发明化合物以及药学 上可接受的载体。

本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的 本发明化合物及药理上可以接 受的赋形剂或载体。 其中 "安全有效量"指的是： 化合物的量足以明显改善病情， 而不至于产生严重的副作用。

"药学上可以接受的载体"可以为一种或多种相� ��性固体或液体填料或凝胶 物质， 它们适合于人使用， 而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。

本发明的 A-失碳 -5α-雄甾垸化合物或药物组合物对哺乳动物的� ��块有强力的、 广谱的抑癌活性， 如对抗肝癌、 肺癌、 睾丸癌、 食道癌、 消化道癌、 胰腺癌、 结 肠癌、 乳腺癌、 子宫癌、 中枢神经癌、 前列腺癌、 肉癌、 脑癌等。 本发明化合物 或药物组合物的施用方式没有特别限制， 代表性的施用方式包括 (但并不限于)： 口 服、 瘤内、 直肠、 肠胃夕卜 (静脉内、 肌肉内或皮下)、 和局部给药。

本发明 Α-失碳 -5α-雄 垸化合物可以通过对人体用多种方法给药， 比如口服、 注射、 肠道给药， 而达到全身起作用的效果， 也可用于治疗肾、 淋巴、 胸腔、 卵 巢、 黑色素瘤等恶性肿瘤。 用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、 片剂、 丸剂、 散剂和颗粒剂。 用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的 乳液、 溶液、 悬浮 液、 糖浆或酊剂。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受 的无菌含水或无水溶液、 分散 液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的 可注射溶液或分散液的无菌粉末（如 冻干剂）。 适宜的含水和非水载体、 稀释剂、 溶剂或赋形剂包括水、 乙醇、 多元醇 及其适宜的混合物。

用于局部给药的剂型包括软膏剂、 散剂、 贴剂、 喷射剂和吸入剂。 活性成分在 无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐 剂、 缓冲剂， 或必要时可能需要的 推进剂一起混合。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学 上可接受的化合物（如其他抗肿 瘤药物） 联合给药。 代表性的抗肿瘤药物 （如化疗药物） 包括 （但并不限于）： 顺 铂、 卡铂、 喜树碱、 阿霉素、 博来霉素、 氟尿嘧啶。

施用时， 是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治 疗的哺乳动物 (如人)， 其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量 。 一般， 对于 60kg体重的人而言， 日给药剂量通常为 0.5〜5000mg， 较佳地 l〜3000mg， 更佳地 l〜1500mg。 当然， 具体剂量还应考虑给药途径、 病人健康状况等因素， 这些都是熟练医师技能范围 之内的。 本发明的主要优点包括：

本发明提供的 A-失碳 -5α-雄 垸化合物有显著的、广谱的抑制恶性肿瘤细胞 生 长的作用， 是一类药物毒性小、 治疗效果好， 有靶向性的新型抗恶性肿瘤药物， 并且此类化合物可特异地作用于肿瘤细胞， 而不影响正常细胞。 具体实施方式

下面通过实施例对本发明做进一步说明， 以便更好理解本发明， 但其不影响 本发明的保护范围。

实施例 1

制备 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄烷 -2β， 17β-双羟基化合物 (la)

30g KOH粉末悬浮于 60ml THF,冷至 5°C以下通乙炔至不吸收，然后将 10g A- 失碳雄垸 -2， 17-双酮溶于 100ml THF， 滴加至烧瓶中， 通乙炔至薄层层析见原料 消失， 在搅拌下缓慢滴加 18ml水， 搅拌 30分钟， 分去下层水层， 有机层减压浓 缩至干， 加乙酸乙酯 100mL溶解后， 水洗至 PH为 7， 5g活性炭脱色， 过滤， 滤 液减压浓缩至干， 所得粘稠固体用体积比为 1 :1的正己垸 -苯混合溶剂 150mL回流 溶解， 冷却后析出晶体， 过滤， 滤饼烘干得 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄垸 -2β， 17β-双羟基化合物 (la) 8g， mp l69-170°C , [a] _D ²⁵ -23.5° (C=1，CHC1 ₃ ) 。 实施例 2

制备 2α， 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β, 17β-双羟基双乙酸酯 (lb)

2g la溶于 20 mL吡啶中， 加入 20 mL乙酸酐和 0.1 g醋酸钠， 回流反应 10小 时， 反应毕冷至 20°C， 缓慢滴加 30 mL甲醇， 加入 20mL饱和食盐水， 用乙酸乙 酯 （15mL*3) 萃取， 合并有机层， 水洗至 PH为 7， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤 液减压浓缩至干， 所得固体用 20 mL甲醇 65°C溶解后， 冷至 20°C并放置 24小时， 析出固体， 过滤， 滤饼烘干， 得到 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β- 双羟基双乙酸酯 (lb) 1.3g， mpl90-191 °C , [a] _D ²⁵ -39° (C=1, CHC1 ₃ ) 。 实施例 3

制备 2a, 17a-双乙炔基 -A-失碳 -5a-雄甾烷 -2β， 17β-双羟基双丙酸酯 (Ic)

2g la溶于 20 mL吡啶中， 加入 20mL丙酸酐和 O.lg醋酸钠， 回流反应 10小 时， 反应毕冷至 20°C， 缓慢滴加 30 mL甲醇， 加入 20mL饱和食盐水， 用乙酸乙 酯 （15mL*3 ) 萃取， 合并有机层， 水洗至 PH为 7， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤 液减压浓缩至干， 所得固体用 15 mL乙醇 78°C溶解后， 冷至 20°C并放置 24小时， 析出针状晶体， 过滤， 滤饼烘干， 得到 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双丙酸酯 (Ic) 2g， mp 152-153 °C ， [a] _D ²⁵ -32° (C=1，CHC1 ₃ ) 。 实施例 4

制备 2a， 17a-双乙炔基 -A-失碳 -5a-雄烷 -2β， 17β-双羟基 -2β-单琥珀酸酯 (Id) lg la, 力 P 5ml吡啶和 2g琥珀酸酐， O.lg醋酸钠， 搅拌回流 3小时， 反应毕冷 至 20°C， 加入 10 mL水搅拌 1小时， 用乙酸乙酯 （10mL*3 ) 萃取， 合并有机层， 水洗至 pH为 7， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩至干， 所得固体用 15 mL 甲醇 65°C溶解后， 加入 10mL水， 冷至 20°C并放置 24小时， 析出白色固体， 过 滤， 滤饼烘干得 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄垸 -2β， 17β-双羟基 -2β-单琥珀酸 酯 (Id) 0.5g， mp 217-219°C , [a] _D ²⁵ -24.9°(C=1, EtOH) 。 实施例 5

制备 2a， 17a-双乙炔基 -A-失碳 -5a-雄垸 -2β， 17β-双羟基双琥珀酸酯 (Ie)

5g la ， 加 20ml吡啶， 15g琥珀酸酐和 0.5g PTS，搅拌回流 10小时， 力卩 20 mL 水 50°C搅拌 2小时， 用乙酸乙酯 （20mL*3 ) 萃取， 合并有机层， 水洗至 pH为 7， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩至一半体积， 20°C放置 24小时， 过滤， 滤 饼用 15 mL乙醇 78°C溶解后， 冷至 20°C并放置 24小时， 析出白色固体， 过滤， 滤饼烘干， 2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄垸 -2β， 17β-双羟基双琥珀酸酯 (Ie) 1.5g， mp 220-221 °C , [a] _D ²⁵ 24.4°(C=1, CHC1 ₃ ) 。 实施例 6

制备 2a， 17a-双乙炔基 -A-失碳 -5a-雄甾垸 -2β, 17β-双羟基双丁酸酯 (If) lg la ， 20ml丁酸酐， 0.5g PTS 100°C搅拌反应 1小时， 加 40 mL水 20°C搅拌 12小时， 析出长针状结晶， 过滤， 滤饼水洗至 pH为 7， 用 10 mL 95%乙醇 78°C 溶解后， 冷至 20°C并放置 24小时， 析出长针状结晶， 过滤， 滤饼烘干得 2α， 17α- 双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基双丁酸酯 (If) 1.4g， m _P 145-147°C 。 实施例 7

制备 2α， 17α-双羟丙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾烷 -2β， 17β-双羟基化合物（I _g ) lOg KOH粉末悬浮于 20ml THF， 加入 10g丙炔醇， 冷至 5°C以下， 然后将 4g A-失碳雄垸 -2， 17-双酮溶于 30ml THF，滴加至烧瓶中，薄层层析跟踪至原料消失 ， 在搅拌下缓慢滴加 6ml水， 搅拌 30分钟， 分去下层水层， 有机层减压浓缩至干， 加乙酸乙酯 30mL溶解后， 水洗至 PH为 7， 2g活性炭脱色， 过滤， 滤液减压浓缩 至干， 柱层析得到 Ig 2.7g， mp 238〜239°C。 实施例 8

制备 2α， 17α-双氰基 -Α-失碳 -5α-雄甾烷 -2β， 17β-双羟基化合物 (Ih)

2gA-失碳雄垸 -2， 17-双酮溶于 15mL四氢呋喃中，冰浴下滴加 3g丙酮氰醇的 20mL四氢呋喃溶液， 滴加完毕后回流反应 5小时， 冷至 20°C， 减压浓缩至干， 柱层析得到 Ih， mp 142〜 144 °C。 实施例 9

制备 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾烷 -2β, 17β-双羟基双三氯乙酸酯 (Ii)

5g la加 12 mL冰醋酸溶解， 加 8g三氯醋酐 20°C搅拌 1小时， 加水稀释， 析 出固体， 滤出， 用乙醇溶解， 5g活性炭脱色后浓缩至有固体析出， 放置 24小时后 过滤， 得到无色透明颗粒状晶体 Ii 1.5 g， mpl48〜150°C。 实施例 10

制备 2α， 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾烷 -2β， 17β-双羟基 -2β-丙酸酯 -17卩琥 珀酸酯化合物 (Ij)

2g la溶于 20 mL吡啶中，加入 5 mL丙酸酐和 O.lg醋酸钠， 回流反应 1小时， 反应毕冷至 ₂ (TC， 缓慢滴加 10 mL 甲醇， 加入 10mL饱和食盐水， 用乙酸乙酯 ( 15mL*3 ) 萃取， 合并有机层， 水洗至 PH为 7， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液 减压浓缩至干，柱层析得到 2α， 17α-双乙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基 -2β 丙酸酯 1.0 g。

2α, 17α-双乙炔基 -A-失碳 -5α-雄甾垸 -2β， 17β-双羟基 -2β丙酸酯 1.0 g， 力口 5ml 吡啶和 2g琥珀酸酐， O.lg醋酸钠，搅拌回流 3小时，反应毕冷至 20°C，加入 10 mL 水搅拌 1小时， 用乙酸乙酯 （10mL*3 ) 萃取， 合并有机层， 水洗至 pH为 7， 无 水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩至干， 所得固体用 15 mL甲醇 65°C溶解后， 加入 10mL水，冷至 20°C并放置 24小时，析出白色固体，过滤，滤饼烘干得 Ij 0.5g， mp l88-192°C。 实施例 11

制备 2α， 17α-双丙炔基 -A-失碳 -5α-雄烷 -2β， 17β-双羟基化合物 (Ik)

5g la溶于 25mL苯及 25mL四氢呋喃混合溶液中， 加入 10mL碘甲垸， 回流 反应 5小时， 冷至室温后， 加入冰， 用乙醚 （20mL*3 ) 萃取， 乙醚层减压浓缩至 干， 柱层析得到白色固体 Ik 3.8g， mp 244-245°C。 实施例 12

制备 2α， 17α-双丙炔基 -Α-失碳 -5α-雄甾烷 -2卩， 17卩-双羟基双丙酸酯化合物 (II) 2g Ik溶于 20 mL吡啶中， 加入 20mL丙酸酐和 O.lg醋酸钠， 回流反应 10小 时， 反应毕冷至 20°C， 缓慢滴加 30 mL甲醇， 加入 20mL饱和食盐水， 用乙酸乙 酯 （15mL*3) 萃取， 合并有机层， 水洗至 PH为 7， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤 液减压浓缩至干， 所得固体用 15 mL乙醇 78°C溶解后， 冷至 20 °C并放置 24小时， 析出针状晶体， 过滤， 滤饼烘干， 得到 I1 2.1g ， mp288-290°C。 上述实施例 1-12制备的化合物 Ia， lb, Ic， Id, Ie， If, Ig， Ih， Ii， Ij , Ik, II 用于下列实验。

实施例 13

体外抗恶性肿瘤作用研究

材料和方法：

肿瘤细胞于 1640(细胞培养液)或 DMEM (细胞培养液)或 F12k (细胞培养液)， 10%小牛血清 （或胎牛血清）， 37°C , 5%CO ₂ 条件下培养 48小时；

细胞至对数生长期， 胰酶消化细胞、 离心收集细胞， 细胞培液悬浮细胞， 接 种到 96孔细胞培养板， 每孔细胞在 1000-10000个， 同上条件培养过夜； 设置 DMSO(二甲基亚砜)试剂对照组、 阿霉素 （市售 10mg/瓶） 阳性对照组， 实验组； 实验组的加入物质为 DMSO溶解的不同浓度药物， 加入到培养细胞中的 药物终浓度分别为 0.25、 0.063、 0.016毫克每毫升（mg/mL) 的三个梯度， 每种药 设 3个复孔，每孔总体积 200微升，药物加入体积不大于 10微升，静置培养 48-72h _; 每孔加入 10微升 MTT (噻唑蓝， 3- (4， 5-二甲基噻唑 -2) -2， 5-二苯基四氮 溴盐） （5mg/mL)， 反应 4h后再加入 Formazan溶解液， 静置至蓝紫色沉淀完全溶 解； 570 nm及 630nm (用于校正） 光波下测定吸光度， 计算抑制率；

抑制率大于等于 50 (>50) 的提取物判定为具有抑制细胞生长作用。

实验结果如表 1、 2、 3所示

表 2 w制肿瘤细胞生长结果

给药组抑制率 给药组抑制率 肿瘤细胞系 化合物 化合物

浓度 0.2mg/ml 浓度 0.2mg/ml la 99 Id 93

B16

lb 99 Ie 77

小鼠黑色素瘤

Ic 99 If 64

U251 la 56 Ic 96 人胶质瘤

lb 96 Ie 52

SKOV-3 la 83.46 Ie 65.51

(卵巢癌） lb 80.65

实施例 14

活体抗恶性肿瘤作用研究

材料和方法：

实验小鼠体重为 18— 22克， 分为 6组， 每次实验使用同一性别的动物， 本次 实验中结肠癌 C26、 Lewis肺癌及 B16黑色素瘤模型为雌性， 肝癌 H22模型为雄 性。

实体瘤瘤源的制备： 无菌条件下取生长旺盛的实体瘤瘤源， 以 1 克瘤组织加 5-6mL 生理盐水匀浆法制备成细胞悬液， 按照 0.2ml/每鼠接种于相应宿主右腋皮 下。

腹水瘤瘤源的制备： 无菌条件下抽取生长旺盛的腹水瘤瘤源， 以生理盐水制 备成约 2x l0 ⁷ /mL细胞悬液， 按照 0.2mL/每鼠接种于于相应宿主腋皮下。接种后的 动物次日按实验设计方案给药， 实验结束后处死各组动物， 剖取肿瘤称重， 按下 列公式计算肿瘤抑制率：

肿瘤抑制率％= [(对照组平均瘤重 -给药组平均瘤重） /对照组平均瘤重] χ ΐοο% 实验结果如表 4所示。 小鼠肿瘤生长抑制率≥40%， P<0.05为有效

表 4 抑制小鼠肿瘤结果

与阴性对照组相比： *?值<0.05， **?值<0.01 实施例 15

活体抗艾氏腹水肿瘤和实体瘤作用

材料和方法：

瑞士种成年 （3〜4月龄） 小白鼠， 体重 18〜22g， 随机分组， 动物肿瘤接种后 随机分组， 每组动物数 12只， 雌雄各半。

将培养后的艾氏腹水瘤 ECA、 小鼠肉瘤 S180、 肉瘤 S37、 宫颈癌 U14、 脑癌 B22瘤株制备成 lxl0 ⁷ 〜2x l0 ⁷ /mL细胞悬液，每鼠 2mL接种于小鼠右腋皮下。接种 后第四天开始， 隔日一次大腿肌注 lmg/0.05mL/日 Ib、 Ic 、 If溶液， 共注射 5次。 对照组也隔日一次注射 0.05mL/日的等量相应溶剂 PBS (磷酸缓冲溶液） 5次。

于最后一次注射后二天处死动物， 剥取瘤体组织称重， 观察药物抑癌效应。 实验结果如表 5所示。

活体抗艾氏腹水肿瘤和实体瘤作用结果

与照组相比： *?值<0.05， **?值<0.01

给药动物外观观测， 毛色、 食欲、 活动、 行为、 摄食 、 饮水、 粪便等与正 常动物相比， 未见有明显变化。 实施例 16

对人癌细胞裸鼠异种移植抗恶性肿瘤作用研究

材料和方法：

实验裸鼠体重为 18-20g/6周龄， 分为 6组， 试验组及阳性对照组每组 6只， 阴性 对照组为 12只。 每次实验使用同一性别的动物。

取液氮冻存的人体肿瘤癌细胞株， 复苏后， 置 37°C、 5% CO2条件下培养。 经传代培养后， 取对数生长期的人体肿瘤细胞株， 用生理盐水制备成 l x l0 ⁷ -2x l0 ⁷ 细胞 /ml浓度的细胞悬液， 接种于裸鼠右腋皮下。 待接种肿瘤生长至 100-300 mm ³ 后， 随机分组， 按表 6实验设计方案给药。

动态观察和测试肿瘤大小及荷瘤鼠体重， 每 3天用卡尺测量各裸鼠肿瘤的短 径 （a) 及长径 （b)， 按 (a ² xb)/2 公式计算肿瘤体积。 根据测量计算的肿瘤体积计 算出相对肿瘤体积 （RTV)， RTV=Vt/V _Q 。 其中 V _Q 为随机分组 （即 d _Q ) 时的肿瘤 体积， Vt为每一次测量 （即 dn) 时的肿瘤体积。 三周左右处死各组动物， 剖取肿 瘤称重， 按下列公式计算肿瘤抑制率及相对肿瘤增殖率 ：

肿瘤抑制率％= [(对照组平均瘤重一给药组平均瘤重） I对照组平均瘤重] l 00%

相对肿瘤增殖率％= (给药组 RTV/对照组 RTV) χ 100%

实验结果如表 6所示。 裸鼠移植瘤 T/C %≤60%， 并经统计学处理 P<0. 05为有效。

41.08

HepG2 ig

Ii ig> :14 Bid 6/6 38.37

人肝癌

Ik 39.21

SMMC-7721 Ic 45.27

ig> :14 Bid 6/6

人肝癌 Ie 47.13

A549 Id 46.65

ig> :14 Bid 6/6

人月巿癌 If 37.61

SKOV3 la 39.82

4Bid 6/6

(卵巢癌） ig〉 <1

Id 31.57 实施例 17

抗恶性肿瘤作用

本实施例测试了本发明化合物对肿瘤患者的治 疗效果和对存活期的影响。 所 有测试对象均为自愿者， 这些对象患有鼻咽癌、 甲状腺癌、 睾丸癌、 肾癌、 淋巴 癌、 胸腔癌、 膀胱癌、 肾癌、 胆囊癌、 或胆管癌。

测试对象口服本发明化合物 （如化合物 Ia、 lb, Ic, Id, Ie, If, Ig, Ih， Ii, 测试结果相似） ，给药方式和频率根据自愿者年龄、 体重及癌症的严重程度等因素 确定， 每天摄入 1、 2、 3、 4、 5或 6次， 剂量通常按患者的体重、 病情从 O.lmg/kg 到约 50mg/kg， 从 lmg/kg到约 60mg/kg等有所不一。

对于肿瘤疼痛患者， 自觉服用后疼痛减轻。 此外， 经医院检查， 肿瘤缩小至 逐步趋向消失， 且患者的存活期明显延长 （优于同类肿瘤的平均存活期）， 并且没 有产生明显的毒副作用。 此外， 多种癌胚抗原指标也逐步正常。

案例 1 : 3例淋巴癌患者服用该类化合物后， 各类癌胚抗原指标正常， 肿瘤先 缩小后消失存活期≥5年；

案例 2: 3例肾癌患者服用该类化合物后， 各类癌胚抗原指标正常， 肿瘤先缩 小后消失存活期≥5年；

案例 3: 3例睾丸癌患者服用该类化合物后， 各类癌胚抗原指标正常， 肿瘤先 缩小后消失；

案例 4: 1例胸腺癌多发性骨转移患者， 诊断存活期 2-3个月， 服用该类化合 物后， 肿瘤缩小， 存活期≥11个月；

案例 5 : 2例小细胞肺癌及非小细胞肺癌脑转移患者，� �断存活期 3个月左右， 服用该类化合物后， 肿瘤缩小， 存活期≥1年 6个月 （至今还活着）。 综上所述， 本发明的化合物 Ia， lb, Ic, Id, Ie, If, Ig, Ih， Ii, Ij， Ik, II对 哺乳动物的肿块有强力的、 广谱的抑癌活性， 包括 (但不限于)对抗肝癌、 肺癌 （包 括纵隔癌）、 口腔上皮癌、 鼻咽癌、 甲状腺癌、 食道癌、 淋巴癌、 胸腔癌、 消化道 癌、 胰腺癌、 肠癌、 乳腺癌、 卵巢癌、 子宫癌、 肾癌、 胆囊癌 胆管癌、 中枢神经 癌、 睾丸癌、 膀胱癌、 前列腺癌、 皮肤癌、 肉癌、 脑癌、 血癌 (白血病)、 黑色素瘤、 胶质瘤、 胃癌、 腹水瘤、 宫颈癌等。 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作 为参考， 就如同每一篇文献被 单独引用作为参考那样。 此外应理解， 在阅读了本发明的上述讲授内容之后， 本 领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改 ， 这些等价形式同样落于本申请所 附权利要求书所限定的范围。