技术领域：

本发明属于水果保鲜领域，具体来说涉及盐酸 聚六亚甲基胍在防治柑桔酸腐 病上的应用及其保鲜剂。

背景技术：

柑桔是世界第一大水果， 有 138个国家栽培， 面积约 667万公顷， 年总产量 1 亿余吨， 约占世界水果总产量的 22%。 据统计， 2008年我国柑橘栽培面积达 3045万亩， 总产量 2331万吨， 占世界柑桔产量约 23%， 为世界柑桔第一生产大 国。 广东省是我国柑桔主产区之一， 沙糖桔为我省柑桔品种中最具特色的品种， 在国内外水果市场上极具竞争力。然而由于沙 糖桔独特的生物学特性， 与柑桔类 其它水果相比难保鲜， 采后损耗相当严重， 每年的损失都在数亿元以上， 严重制 约沙糖桔产业的发展。

柑桔属非呼吸跃变型果实，但采后呼吸代谢旺 盛导致营养与风味品质迅速下 降。 沙糖桔皮薄汁多， 采后病害发生严重， 更不耐贮藏。 沙糖桔贮藏期间发生的 主要病害有酸腐病、 青绿霉病、 黑腐病和蒂腐病。 目前， 控制沙糖桔果实病害的 最有效的途径是低温贮藏结合化学杀菌剂处理 ，所用的杀菌剂有多菌灵、 甲基托 布津、 抑霉唑、 双胍盐（百可得）等， 但对腐烂特别是酸腐病的控制方面仍不够 理相

酸腐病是目前沙糖桔贮运中最常见、最难防治 的病害之一， 其致病菌为半知 菌亚门丝孢纲内的白地霉 Geotrichum candidum) , 病菌从伤口侵入。 酸腐病只 危害果实， 一般发生于成熟或过熟果， 特别是贮藏期的果实。 酸腐病的发病率受 采前栽培措施、 成熟度、 采收方法、 果实水分状况、 贮运措施等多种因素影响， 如广东省沙糖桔主产区 2007年酸腐病发病率在 10 %以下， 而 2010年初因天气 原因发病率高达 50 %以上。 对于柑桔酸腐病的防治， 咪唑类和苯并咪唑类防腐 剂均无效。 双胍盐（百可得）对防治酸腐病效果较好， 但存在农药残留和安全性 问题， 在美国双胍盐（百可得） 因致癌作用已被禁止使用。 因此， 寻求安全高效 而又操作简单的防酸腐病技术势在必行。

PHMG (盐酸聚六亚甲基胍， Polyhexamethylene guanidine )是国际上新合成 的一种绿色环保型广谱抗菌剂， PHMG 属胍类衍生物， 是一种阳离子聚合物。 它通过作用于病原菌的细胞壁和细胞质的膜系 统， 与细胞膜磷脂中的脂肪酸结 合， 迅速击穿它们的细胞质膜， 攻破病菌细胞的核心， 使病菌体内的生命物质外 流， 从而达到最佳的杀菌效果。 PHMG是高分子聚合物， 不易被动物组织吸收， 因而大大降低了它的毒性。 据俄罗斯检疫部门的结果， PHMG 对小鼠类的半致 死量 LD50为 25000mg/kg， 为实际无毒级。 由于 PHMG具有无毒、 高效、 稳定 等特点， 而被广泛用于医院消毒、 饮用水和食品加工设备的消毒。 PHMG 对细 菌和病毒有较强的杀灭及抑制作用， 对真菌抑制作用的研究和应用较少。 目前， 未有 PHMG应用于采后果蔬真菌病害研究和应用的报� �。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供盐酸聚六亚甲基胍 在防治柑桔酸腐病上的应用。 本发明通过对柑桔采后酸腐病致病菌白地霉 Geotrichum candidum离体和活 体研究， 筛选到了一种能明显抑制白地霉 Geo n' wm co/¾¾ m生长， 有效降低 沙糖桔果实酸腐病发生抗菌物质一盐酸聚六亚 甲基胍， 结合防治青绿霉病杀菌 剂，得到的保鲜剂能有效抑制宽皮桔贮藏和流 通过程中腐烂， 特别是酸腐病的发 生。

因此本发明的第二个目的是提供一种专门针对 柑桔采后腐烂，特别是控制酸 腐病发生的柑桔保鲜剂。

本发明的柑桔保鲜剂， 按总质量分数 100%计， 由 0.05%〜0.5% 盐酸聚六亚 甲基胍， 0.05%〜0.2% 咪唑类杀菌剂、 苯并咪唑类杀菌剂、 嘧霉胺、 氟咯菌腈、 嘧菌酯中的一种或数种的混合物， 0.02%〜0.15% 聚氧乙烯醚类或季胺盐类乳 化剂， 以及余量的水组成。

所述的咪唑类杀菌剂优选为咪鲜胺和抑霉唑。

所述的苯并咪唑杀菌剂优选为多菌灵、 甲基托布津和特克多。

所述的盐酸聚六亚甲基胍优选质量分数为 0.1%〜0.5%， 进一步优选为

0.25%〜0.5%。

本发明的柑桔保鲜剂的制备方法如下， 先将乳化剂和盐酸聚六亚甲基胍混 合， 再加入咪唑类杀菌剂、 苯并咪唑类杀菌剂、 嘧霉胺、 氟咯菌腈、 嘧菌酯中的 一种或数种的混合物作为防腐剂和少量水，搅 拌均匀得到产物， 使用时再加入水 稀释到上述浓度而得到本发明的柑桔保鲜剂。

本发明的柑桔保鲜剂能明显抑制沙糖桔等柑桔 类果实在贮藏期间腐烂，特别 是酸腐病的发生。 如沙糖桔果实用本发明的柑桔保鲜剂处理后在 常温 （15〜25 ) 贮藏 45天后， 酸腐病发病率低于 10 %， 而对照高达 60 %， 因此本发明的柑桔保 鲜剂显著的降低宽皮桔类在贮藏过程中酸腐病 的发生，大大提高了柑桔的经济价 值。

附图说明：

图 1是不同浓度 PHMG对离体 Geotrich画 candidum孢子萌发的影响； 图 2是 PHMG对离体 Geotrichum candidum菌丝生长的抑制 （滤纸抑菌圈法）； 图 3是 Geotrichum candidum菌丝在含 PHMG培养基上生长的扫描电镜图片。 具体实施方式：

以下是对本发明的进一步说明， 而不是对本发明的限制。

下述实施例中多菌灵即 2-苯并咪唑基氨基甲酸甲酯，甲基托布津即 1，2-二 (3- 甲氧碳基 -2-硫脲基)苯， 特克多即 2- (噻唑 -4-基)苯并咪唑， 咪鲜胺即 N-丙基 -N-[2-(2，4，6-三氯苯氧基)乙基] -咪唑 -1-甲酰胺，抑霉唑即 1 -「2-(2，4-二氯苯基)-2- ( 2-烯丙氧基）」 - 1H-咪唑。

一、 离体抑菌实验

1 材料与方法

( 1 ) 菌株： 从发生酸腐病沙糖桔中分离纯化的柑桔白地霉 Geotrichum candidum.

(2) 孢子萌发试验： 采用孢子液法， 将计算好的一定量 PHMG药剂加入 已灭菌的 1/2 PBD培养基中， 配制成 9个浓度梯度： 0， 0.1， 1， 2, 5， 10， 20， 50， 100 mg/L。分别取 5ml含不同浓度 PHMB的培养基至 10 ml已灭菌的试管中， 加入 0.1ml 已配制好的标准孢子悬浮液， 于 26°C恒温条件下 250rpm/min振荡培 养， 培养 8小时后取出 1-2菌液， 显微镜下观察， 测定孢子萌发数， 统计孢子萌 发率。

( 3 )菌丝生长试验： 采用滤纸抑菌圈法， 把已配好并经过高压蒸汽灭菌的 PDA培养基冷却 45-50 °C， 加入 Geotrichum candidum孢子悬浮液至培养基中， 孢子浓度为 10 ⁶ 个 /L， 将培养基倒入已灭菌的培养皿中制成平板。 取直径 5 mm 的灭菌滤纸片放入平板中央， 在滤纸上加入 ΙΟμΙ lg/L的 PHMG溶液 （用无菌 水代替 PHMG作为对照）， 然后在 26°C恒温培养箱内培养 5天， 测量滤纸抑菌 圈的直径并进行分析。

(4)菌丝体扫描电镜观查： 将已配好含有 10mg/L PHMG并经高压蒸汽灭 菌的 PDA 培养基冷却至 45-50 °C， 倒入已灭菌的培养皿中制成平板， 接种上 Geotrichum candidum孢子悬浮液， 在 26 °C恒温培养箱内培养 5天， 用直径为 0.4 cm 的打孔器在上述菌落边缘切下菌丝体按常规方 法进行扫描电镜观查。

2试验结果

如图 1所示， PHMG显著抑制了 Geotrichum candidum离体孢子萌发， 并且 表现出浓度效应， 当 PHMG的浓度为 5 mg/L时， Geotrichum candidum孢子萌发 率仅为 2.13%， 而 10mg/L PHMG则几乎完全抑制了沙糖桔 Geotrichum candidum 孢子萌发。滤纸抑菌圈法试验表明，含 ΙΟμΙ lg/L PHMG的滤纸片对 Geotrichum candidum菌丝生长显著的抑制作用，在 26 °C培养培养 5天后，抑菌圈直径为 2.19 cm (图 2)。 从图 3可看出， 在不含 PHMG的 PDA培养基， Geotrichum candidum 菌丝生长正常， 菌丝呈棒状、 均匀、 表面光滑， 而在含 PHMG培养基上生长的 菌丝， 菌丝体严重扭曲， 表面凹陷， 进一步证实了 PHMG对菌丝伸长的抑制作 用。

综上所述， 盐酸聚六亚甲基胍 （PHMG) 能应用于防治柑桔酸腐病上。 二、 柑桔保鲜剂

实施例 1 :

将 PHMG 5g和聚季铵盐 -7 2g混合， 然后再加入多菌灵 10g和少量水， 搅 拌均匀， 最后加水至总重量为 10 kg， 搅拌均匀， 得到本实施例的柑桔保鲜 剂， 用该柑桔保鲜剂浸泡沙糖桔整果。 实施例 2:

将 PHMG 25g和二癸基二甲基氯铵 2g混合， 再加入甲基托布津 10g和少量 水， 搅拌均匀， 最后加水至总重量为 10 kg， 搅拌均匀， 得到本实施例的柑 桔保鲜剂， 用该柑桔保鲜剂浸泡沙糖桔整果。 实施例 3:

将 PHMG 50g和蓖麻油聚氧乙烯醚类农乳 BY120 15g混合， 再加入特克多 20g和少量水， 搅拌均匀， 最后加水至总重量为 10 kg, 搅拌均匀， 得到本实 施例的柑桔保鲜剂， 用该柑桔保鲜剂浸泡沙糖桔整果。 实施例 4:

将 PHMG 10g和十二烷基三甲基氯化铵 4g混合， 再加入咪鲜胺 10g和少 量水， 搅拌均匀， 最后加水至总重量为 10 kg, 搅拌均匀， 得到本实施例的 柑桔保鲜剂， 用该柑桔保鲜剂浸泡沙糖桔整果。 实施例 5:

将 PHMG 10g和壬基酚聚氧乙烯醚农乳 100号 5g混合，再加入抑霉唑 10g 和少量水， 搅拌均匀， 最后加水至总重量为 10 kg, 搅拌均匀， 得到本实施 例的柑桔保鲜剂， 用该柑桔保鲜剂浸泡沙糖桔整果。 实施例 6:

将 PHMG 5g和蓖麻油聚氧乙烯醚类农乳剂 BY120 5g， 再加入特克多 5g、 抑霉唑 5g和少量水， 搅拌均匀， 最后加水至总重量为 10 kg， 搅拌均匀， 得 到本实施例的柑桔保鲜剂， 用该柑桔保鲜剂浸泡沙糖桔整果。 实施例 7:

将 PHMG 40g和蓖麻油聚氧乙烯醚类乳化剂 EL-80 12g， 再加入咪鲜胺 5g 和少量水， 搅拌均匀， 最后加水至总重量为 10 kg, 搅拌均匀， 得到本实施 例的柑桔保鲜剂， 用该柑桔保鲜剂浸泡沙糖桔整果。 本发明柑桔保鲜剂的实施效果试验

按上述实施例 1〜7配制保鲜剂。 挑选适期采收、 无病虫害和机械伤的沙糖 桔果实， 在上述保鲜剂中分别浸泡 30秒后稍晾干， 以不做浸泡处理的沙糖桔果 实作对照。 各实验组和对照组的沙糖桔都用 0.03mm厚的聚乙烯薄膜袋包装， 置 于塑料筐中， 每筐 15kg， 常温 (25°C) 贮藏 45天， 统计各组的腐烂情况， 结果见 表 1。

表 1. 本发明的保鲜剂对常温贮藏的沙糖桔的保鲜效 果 组名 酸腐病发生率 （％) 腐烂率 （％)

实施例 1 7.6 20

实施例 2 0.7 3.7

实施例 3 0 4.4

实施例 4 4.5 9.1

实施例 5 3.3 8.4

实施例 6 8.3 10.6

实施例 7 0.5 6.5

对照组 60.1 85.8