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Patent Searching and Data


Title:
USE OF SELENIUM FOR PROTECTING FISH AGAINST MICROCYSTIN POISONING
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2010/061017
Kind Code:
A1
Abstract:
The invention relates to the use of a composition comprising selenium for treating, preventing and/or aiding recovery from toxic effects in fish exposed to microcystins (MCs). The invention also relates to the use of said composition in aiding recovery from adverse histopathological changes that occur in tissue from the list containing: liver, kidney, heart, gills and/or gastrointestinal tract. Furthermore, said composition is used to produce a functional food, a vitamin supplement or a nutritional supplement.

Inventors:
CAMEÁN FERNÁNDEZ, Ana María (Dpto. Bioquímica, BromatologíaToxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
ATENCIO GENES, Loyda Esther (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
PUERTO RODRÍGUEZ, María (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
PRIETO ORTEGA, Ana Isabel (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
JOS GALLEGO, Ángeles Mencía (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
MORENO NAVARRO, Isabel (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
PICHARDO SÁNCHEZ, Silvia (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
MOYANO SALVAGO, M. Rosario (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
BLANCO RODRÍGUEZ, Alfonso (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
Application Number:
ES2009/000545
Publication Date:
June 03, 2010
Filing Date:
November 25, 2009
Export Citation:
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Assignee:
UNIVERSIDAD DE SEVILLA (OTRI-Universidad de Sevilla, Pabellón de BrasilPaseo de las Delicias s/n, Sevilla, E-41013, ES)
CAMEÁN FERNÁNDEZ, Ana María (Dpto. Bioquímica, BromatologíaToxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
ATENCIO GENES, Loyda Esther (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
PUERTO RODRÍGUEZ, María (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
PRIETO ORTEGA, Ana Isabel (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
JOS GALLEGO, Ángeles Mencía (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
MORENO NAVARRO, Isabel (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
PICHARDO SÁNCHEZ, Silvia (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
MOYANO SALVAGO, M. Rosario (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
BLANCO RODRÍGUEZ, Alfonso (Dpto. Bioquímica, Bromatología,Toxicología y Medicina Legal,Facultad de Farmacia,c/ Profesor García Gonzále, 2 Sevilla, E-41012, ES)
International Classes:
A61K33/04; A23K1/16; A23K1/18
Foreign References:
JPH0799858A1995-04-18
JPH06113753A1994-04-26
Other References:
ATENCIO, L. ET AL.: 'Protective effect of selenium from oxidative stress in different fish species (Tench and Tilapias) under laboratory conditions.' TOXICOLOGY LETTERS vol. 180, no. 1, October 2008, page S193
GEHRINGER, M. ET AL.: 'An investigation into the effect of selenium supplementation on microcystis hepatoxicity.' TOXICON vol. 41, 2003, pages 1 - 8
AMARAL MONTEIRO, D ET AL.: 'The effects of selenium on oxidative stress biomarkers in the freshwater characid fish matrinxa, Brycon cepahlus (Günther, 1869) exposed to organophosphate insecticide Folisuper 600 BR (methyl parathion).' COMPARATIVE BIOCHEMISTRY AND PHYSIOLOGY vol. 149, July 2008, pages 40 - 49
ORUN, I. ET AL.: 'Antioxidative role of selenium on some tissues of (Cd 2+, Cr 3+) induced rainbow trout.' ECOTOXICOLOGY AND ENVIRONMENTAL SAFETY vol. 71, October 2007, pages 71 - 75
LIN Y. ET AL.: 'The effects of dietary selenium on the oxidative stress of grouper, Epinephelus malabaricus, fed high copper.' AQUACULTURE vol. 267, 2007, pages 38 - 43
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Claims:
REIVINDICACIONES

1. Uso de una composición que comprende Selenio para Ia elaboración de un medicamento útil en el tratamiento y/o prevención de efectos tóxicos en peces expuestos a microcistinas.

2. Uso de una composición que comprende Setenio para Ia elaboración de un medicamento útil en Ia recuperación de efectos tóxicos en peces expuestos a microcistinas.

3. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde los efectos tóxicos son alteraciones histopatológicas.

4. Uso según Ia reivindicación 3, donde las alteraciones histopatológicas son producidas en al menos uno de los tejidos de Ia lista que comprende hígado, riñon, corazón, branquias o tracto gastrointestinal.

5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde el Setenio se administra en una cantidad diaria de entre 400 y 880 mg por Kg de peso del pez.

6. Uso según Ia reivindicación 5, donde Ia composición se presenta en una forma adaptada a Ia administración oral o intraperitoneal.

7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde Ia composición incluye excipientes farmacológicamente aceptables.

8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, donde Ia composición comprende además otra sustancia activa.

9. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para Ia fabricación de un alimento funcional.

10. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para Ia fabricación de un complemento vitamínico.

11. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para Ia fabricación de un complemento nutricional.

12. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, donde los peces son cultivados.

13. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, donde los peces pertenecen al género Orechromis sp.

Description:
Uso de Selenio para proteger a los peces de Ia intoxicación por microcistinas

En Ia presente invención se refiere al uso de una composición que comprende Selenio para el tratamiento, prevención y/o recuperación de efectos tóxicos en peces expuestos a microcistinas (MCs). También se refiere al uso de Ia citada composición en Ia recuperación de las alteraciones histopatológicas producidas en los tejidos de Ia lista que comprende hígado, riñon, corazón, branquias y/o tracto gastrointestinal. Además, dicha composición se utiliza para Ia fabricación de un alimento funcional, un complemento vitamínico, o un complemento nutricional.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR

El Selenio es un micronutriente esencial para animales y humanos. En animales se han descrito diferentes síndromes (alteraciones del crecimiento, degeneración muscular, cardiomiopatía, degeneración hepática, etc.) motivados por su deficiencia. En medicina veterinaria existe un amplio uso profiláctico y terapéutico de Ia sal selenito sódico, a menudo en combinación con Ia vitamina E, frente a diversas enfermedades relacionadas con las deficiencias de ambos nutrientes. Las dosis recomendadas de selenito sódico varían entre 0,01-0,08 mg Se 4+ /Kg peso (0,25-1 ,5 mg/Kg pienso) en las preparaciones destinadas a piensos medicados para caballo, vaca y oveja, así como en pollos y cerdos. (EMEA/MRL249/97 final, 1997). Selenito y seleniato sódicos han sido aprobados como aditivos alimentarios a una concentración máxima de 0,5 mg Se por Kg de pienso.

El mecanismo principal de acción de los efectos fisiológicos y farmacológicos del Selenio se basa en su efecto antioxidante de las membranas celulares frente a peróxido de hidrógeno, lipoperóxidos y a especies reactivas de oxígeno (ROS) en general. Los efectos están relacionados con Ia actividad enzimática de Ia enzima Glutatión Peroxidasa (GPx), que contiene selenocisteina, en concreto cuatro subunidades y cada una de ellas contiene un átomo de Selenio (Batcioglu K et al. (2002) CeII Biochem Funct 20:115- 118). También es un componente integral de otras proteínas funcionales, como por ejemplo tetra- iodotironina-5'-l-deiodinasa, que interviene en el metabolismo de hormonas tiroideas y tioredoxina reductasa, involucrada en Ia síntesis de ADN 1 defensa frente estrés oxidativo y reparación de proteínas. Su acción protectora antioxidante se ha descrito en el documento WO2006018294-A1 , junto con Ia vitamina E.

En peces se ha empleado el selenito sódico como aditivo alimentario en piensos, para mejorar Ia eficiencia de piensos vegetales (JP61146155-A). El Selenio mejora las defensas antioxidantes fisiológicas en trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss) (Miller LL et al. (2007) Aαuat Toxicol 83:263-271). Asimismo el Selenio se ha utilizado en combinación con cobre para mejorar Ia respuesta de los animales al estrés oxidativo (Lin Yu-Hung y Shiau Shi- Yen (2007) International Svmposium on Fish Nutrition and Feeding 267: 38- 43).

Por otro lado, las MCs son toxinas producidas por cianobacterias tóxicas presentes en aguas superficiales, que pueden bioacumularse en pescados de consumo público a niveles muy próximos e incluso superiores a Ia Ingesta Diaria Tolerable (IDT) provisional establecida, afectando a Ia calidad y seguridad de este tipo de alimentos y suponiendo un riesgo potencial para el consumidor. Las MCs han ocasionado episodios de muerte masiva en peces, siendo responsables de Ia enfermedad denominada "NetPen Liver Disease" (NPLD) en salmones procedentes del Atlántico criados en cautividad. En comparación con los mamíferos, los peces son menos sensibles a los efectos tóxicos, Io que podría permitir una mayor acumulación, existiendo variabilidad en función de Ia especie y destacando su mayor distribución pues afectan no sólo al hígado sino también al riñon, corazón, branquias, piel, médula y sangre, alterando además el comportamiento y el desarrollo. Las cianobacterias constituyen parte de Ia dieta de diversos ciprínidos y cíclidos, como es el caso de las especies de peces a las que se aplica esta invención, principalmente Tilapias (Orechromis, sp.). La Tilapia (Oreochromis sp.) es uno de los pescados que más rápidamente se ha introducido en acuicultura, por Ia facilidad que presenta su manejo, gran capacidad de adaptación a condiciones adversas y fácil reproducción; sus distintas variedades son filtradoras y consumidoras de cianobacterias y en Europa se está despertando un gran interés por su cultivo. Como mecanismo de acción tóxica más aceptado, las MCs a nivel subcelular son inhibidores específicos de las fosfatasas de proteínas tipo 1 (PP1) y 2A (PP2A), desencadenando un proceso de apoptosis y consecuente daño celular. Por otro lado, el estrés oxidativo juega un papel muy significativo en Ia patogenicidad de estas toxinas, detectándose un aumento en Ia producción de especies reactivas de oxígeno (ROS), así como cambios en Ia actividad de diversas enzimas antioxidantes en roedores y peces.

Actualmente no existe un tratamiento antidótico específico en casos de intoxicación por MCs procedentes de cianobacterias. Varios estudios han demostrado los efectos protectores de ciertos antioxidantes frente a su acción tóxica en roedores, cuando se administran previamente a Ia exposición de las toxinas, como es Ia suplementación con Ia vitamina E, Ia vitamina C, licopenos, ciertos polifenoles del té, flavonoides o melatonina.

Hasta Ia fecha no se conoce ningún tratamiento capaz de recuperar a los peces intoxicados con MCs. Teniendo en cuenta Ia ubicuidad de estas toxinas se hace necesario recuperar peces que presenten alteraciones histopatológicas con diferentes niveles de afección que pueden impedir el ciclo de vida normal de los peces afectados.

EXPLICACIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere al uso de una composición que comprende Selenio para el tratamiento, prevención y/o recuperación de efectos tóxicos en peces expuestos a MCs.

En tilapias (Oreochromis sp.) expuestas a dosis únicas y repetidas de MCs se inducen estrés oxidativo y alteraciones patológicas. En concreto, se han comprobado variaciones dosis-dependiente en Ia actividad de diversas enzimas antioxidantes, disminución de los niveles de Glutatión (GSH), aumento de los niveles de lipoperoxidación (LPO) y de oxidación de proteínas, en diferentes órganos (hígado, riñon, branquias, etc.), y múltiples alteraciones histopatológicas en órganos diversos como hígado, riñon, branquias o corazón. El selenio administrado en Ia presente invención se muestra efectivo manteniendo el estado de salud del pez, previniendo daños causados por las toxinas y/o mejorando los efectos tóxicos inducidos por MCs en diversos órganos de tilapias intoxicadas.

El uso de Selenio como aditivo alimentario no solo mejora los niveles de GSH hepáticos, sino que por su propia actividad antioxidante es capaz de disminuir Ia lipoperoxidación (LPO) (hígado, riñon), aumentar el contenido proteico en hígado y recuperar las lesiones histopatológicas inducidas en múltiples órganos como hígado, riñon, corazón, tracto gastrointestinal y/o branquias.

En este sentido, un primer aspecto de Ia presente invención se refiere al uso de una composición que comprende Selenio para Ia elaboración de un medicamento útil en el tratamiento, prevención y/o recuperación de efectos tóxicos en peces expuestos a MC.

La composición de Ia presente invención comprende, al menos, Selenio y el medicamento está compuesto, al menos, por Ia composición anterior. De esta forma, el Selenio, sus sales, derivados farmacéuticamente aceptables o sus profármacos, se formulan en una composición farmacéutica apropiada, en Ia cantidad terapéuticamente efectiva, junto con uno o más vehículos, adyuvantes o excipientes farmacéuticamente aceptables. El medicamento se emplea para el tratamiento de los efectos tóxicos en peces expuestos a MC.

Por un "derivado farmacéuticamente aceptable" se entiende cualquier sal, farmacéuticamente aceptable o cualquier otro compuesto que después de su administración, es capaz de proporcionar (directa o indirectamente) Selenio. Preferiblemente Ia sal de Selenio es selenito sódico (Na 2 Seθ 3 .5H 2 O).

Un "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sustancias, o combinación de sustancias, conocidas en el sector farmacéutico, utilizadas en Ia elaboración de formas farmacéuticas de administración e incluye sólidos o líquidos, disolventes, tensioactivos, etc. El término "tratamiento" tal como se entiende en Ia presente invención supone combatir los efectos tóxicos para estabilizar el estado de toxicidad de los individuos. El medicamento se emplea también para Ia prevención de los efectos tóxicos ocasionados a los peces expuestos a MCs. El término "prevención" tal como se entiende en Ia presente invención consiste en evitar Ia aparición de efectos tóxicos en peces expuestos a MCs. En este caso, previamente a Ia intoxicación por MCs 1 los peces están protegidos por un aumento de las defensas antioxidantes producidos por Ia acción del Selenio. El medicamento también se emplea para Ia recuperación de los efectos tóxicos ocasionados en peces expuestos a MC.

El término "efectos tóxicos" tal como se entiende en Ia presente invención hace referencia a Ia consecuencia derivada de Ia exposición del pez a Ia toxina MC, es decir, Ia aparición de diversos efectos adversos como por ejemplo un daño celular que ocasiona un daño en los tejidos biológicos Io que a su vez puede provocar un cambio en las funciones fisiológicas y en el metabolismo celular.

Las MCs son toxinas de estructura heptapeptídica producidas tanto por cianobacterias filamentosas (Anabaena, Oscillatoria, Nostoc, Hapalosiphon) como coloniales (Micnocystis). Una vez que se ingieren, las MCs se transportan hasta el hígado donde Ia mayoría quedan almacenadas y el resto permanecen en Ia sangre y pueden contaminar otros tejidos. Las MCs se unen covalentemente a fosfatasas de proteínas bloqueando así numerosos procesos de control celular. La MC de Ia presente invención se selecciona de Ia lista que comprende microcistina LA, microcistina LR, microcistina YR, microcistina RR, microcistina YM, microcistina YA, microcistina LY, microcistina FR, microcistina Laba, microcistina HtyR, microcistina AR, microcistina M(O)R, microcistina WR, 3-desmetilmicrocistina LR, 7-desmetilmicrocistina LR, 3,7-didesmetilmicrocistina LR, 3-desmetilmicrocistina YR, 7-desmetilmicrocistina YR, 3- desmetilmicrocistina RR, 7-desmetilmicrocistina RR, 3,7-didesmetilmicrocistina RR, 3-desmetilmicrocistina HtyR, 7-desmetilmicrocistina HtyR, 3,7- didesmetilmicrocistina HtyR, 7-desmetilmicrocistina HphR, (Mser7)microcistina LR, (Ser7)microcistina LR, (Ser7)microcistina RR, (Ser7)microcistina HtyR, (Ser7)3-desmethytmicrocistina XR, (DMAdda) microcistina LR, (ADMAdda) microcistina LR, (ADMAdda)3-desmetilmicrocistina LR, (ADMAdda) microcistina Lhar, (ADMAdda,Mser7) microcistina LR, D-Glu(CH 3 O)estermicrocistina LR, D- Glu(CH 3 O)ester 3-desmetilmicrocistina LR, D-Glu(C 3 H 7 0 2 )ester microcistina LR o (D-SeM .ADMAdda) microcistina LR. La lista anterior no se limita a las MCs mencionadas. Preferiblemente Ia MC es microcistina LR (MC-LR).

Un segundo aspecto de Ia presente invención es el uso de una composición que comprende Selenio para Ia elaboración de un medicamento útil en Ia recuperación de efectos tóxicos en peces expuestos a MCs. El término "recuperación" hace referencia a Ia desaparición de los efectos tóxicos causados por Ia intoxicación con MCs. Esta recuperación supone Ia reversión total de los daños causados en los tejidos del pez, recuperando de esta forma las funciones normales de los órganos afectados.

Una realización aún más preferida de Ia presente invención comprende el uso de una composición que contiene Selenio para Ia elaboración de un medicamento útil en Ia recuperación de las alteraciones histopatológicas producidas en los tejidos de Ia lista que comprende hígado, riñon, corazón, branquias y/o tracto gastrointestinal. Tal como se ha mencionado anteriormente las MCs pueden acumularse en el tejido hepático y también pueden llegar a otros órganos utilizando Ia sangre como medio de dispersión, de esta forma, las MCs pueden causar efectos tóxicos y/o alteraciones histopatológicas en los citados órganos. La recuperación de los tejidos afectados por las alteraciones histopatológicas es un aspecto destacable de Ia presente invención ya que puede suponer Ia curación de los peces cultivados, peces seleccionados por diversas características para Ia cría, peces de especies en peligro de extinción o cualquier otro tipo de pez que presente alteraciones histopatológicas en un grado reversible.

La recuperación que se produce en las alteraciones histopatológicas en algunos órganos consiste en: - Hígado: las MCs producen una desorganización del parénquima hepático, observándose hepatocitos con citoplasmas muy claros y el contorno celular a modo de célula en cebolla, y estructuralmente se observa que poseen citoplasma con escasos organoides y citoplasma repleto de glucógeno granular.

Mediante Ia administración de Selenio se consigue que los cordones hepáticos sean normales, hepatocitos con morfología poliédrica normal, con organoides citoplasmáticos normales y ausencia de glucógeno granular. - Riñon: se recupera Ia glomerulopatía y atrofia glomerular evidentes, producida por Ia intoxicación con MCs. Con Ia administración de selenio se observan glomérulos con los capilares fenestrados aparentemente normales.

- Corazón: Las MCs inducen miofibrolisis parcial, edema y microhemorragias, que son superados por Ia dosis más elevada de setenio (ver más adelante).

- Intestino: El tratamiento con setenio recupera Ia pérdida, prácticamente total, de microvellosidades producidas por las MCs, apareciendo los enterocitos aparentemente normales y abundantes células calciformes.

- Branquias: Las MCs inducen una hiperemia generalizada, que es revertida por Setenio.

En una realización más preferida de Ia presente invención, el Setenio se administra en una cantidad diaria de entre 1 ,5 y 6 μg de Setenio por g de dieta (equivale a una cantidad diaria de entre 5 y 20 μg de selenita sódico por g de dieta). Esta administración se lleva a cabo durante al menos una semana. Preferiblemente Ia cantidad diaria incorporada a los peces es de entre 3 y 6 μg de Setenio por g de dieta. Tal como los inventores han determinado, Ia administración de cantidades diarias superiores a 6 μg de Setenio por g de dieta, pueden ocasionar alteraciones de los valores básales de ciertos biomarcadores de estrés oxidativo (Catalasa en riñon y Ia relación GSH/GSSG en hígado) e inducir LPO y oxidación de proteínas en peces no intoxicados.

Esta composición, se puede administrar de distintas formas, entre ellas, pero sin limitarse, intraperitonealmente, oralmente, bucalmente, intramuscularmente o de forma subcutánea. Más preferiblemente se administra de forma oral o intraperitoneal. En otra realización más preferida Ia composición se presenta en una forma adaptada a Ia administración oral o intraperitoneal.

Los peces intoxicados están expuestos a más de 60 μg de MC por pez y por día durante 21 días (intoxicación subcrónica). Preferiblemente los peces están expuestos a más de 120 μg de MC por pez en exposición única.

Otra realización preferida de Ia invención, comprende el uso de Ia composición descrita, que además incluye excipientes farmacológicamente aceptables. El término "excipiente" hace referencia a una sustancia que ayuda a Ia absorción de Ia sustancia activa (en Ia presente invención, Selenio), estabiliza dicha sustancia activa o ayuda a Ia preparación del medicamento en el sentido de darle consistencia o aportar sabores que Io hagan más agradable. Así pues, los excipientes podrían tener Ia función de mantener los ingredientes unidos como por ejemplo almidones, azúcares o celulosas, función de endulzar, función de colorante, función de protección del medicamento como por ejemplo para aislarlo del aire y/o Ia humedad, función de relleno de una pastilla, cápsula o cualquier otra forma de presentación como por ejemplo el fosfato de calcio dibásico, función desintegradora para facilitar Ia disolución de los componentes y su absorción en el intestino sin excluir otro tipo de excipientes no mencionados en este párrafo.

El término excipiente "farmacológicamente aceptable" hace referencia a que el excipiente esté permitido y evaluado de modo que no cause daño a los organismos a los que se administra.

En una realización más preferida de Ia invención, Ia composición comprende además otra sustancia activa.

En cada caso Ia composición se adaptará al tipo de administración utilizada, por ello, Ia composición de Ia presente invención se puede presentar bajo Ia forma de soluciones o cualquier otra forma de administración clínicamente permitida y en una cantidad terapéuticamente eficaz.

Otras realizaciones preferidas son el uso para Ia fabricación de un alimento funcional, el uso para Ia fabricación de un complemento vitamínico y otra más es el uso para Ia fabricación de un complemento nutricional.

El Selenio puede formar parte de un alimento funcional, complemento vitamínico, complemento nutricional o cualquiera de sus combinaciones. Tal como se entiende en Ia presente invención, un alimento funcional cumple una función específica como puede ser Ia de mejorar Ia salud de los peces. Para ello al alimento funcional se Ie puede agregar un complemento vitamínico y/o complemento nutricional. El alimento funcional, los complementos descritos o cualquiera de sus combinaciones pueden administrarse junto con un pienso, formar parte de Ia composición del pienso o pueden administrarse de forma independiente.

En una realización preferida, de Ia presente invención, los peces son cultivados.

En Ia presente invención se entiende por "peces cultivados" aquellos peces criados en piscifactorías, charcas o cualquier contenedor de agua de cualquier tamaño que permita Ia cría de peces y/o el engorde. Los peces cultivados pueden ser, sin limitar, peces destinados a Ia alimentación o a Ia cría de peces ornamentales.

En otra realización preferida, de Ia presente invención, los peces pertenecen al género Omochromis sp.

Los peces pertenecientes a este género se conocen como Tilapias. Las

Tilapias crecen en aguas cálidas dulces o saladas y tienen pocas exigencias respiratorias, rápido crecimiento y facilidad para Ia puesta. Los peces se seleccionan, sin limitar, de Ia lista que comprende O. amphimelas, O. andersonii,,O. angolensis, O. aureus, O. chungruruensis , O. esculentus, O. hunteri, O. ismailiaensis, O. jipe, O. karomo, O. karongae, O. korogwe, O. lepidurus, O. leucostictus, O. lidole, O. macrochir, O. malagarasi, O. mortimerí, O. mossambicus, O. mweruensis, O. niloticus (NiIe tilapia), O.

Pantani, O. pangani girígan, O. pangani pantani, O. placidus, O. placidus placidus, O. placidus ruvumae, O. rukwaensis, O. saka, O. salinicola, O. schwebischi, O. shiranus, O. shiranus chilwae, O. shiranus shiranus, O. spilurus, O. spilurus niger, O. spilurus percivali, O. spilurus spilurus, O. squamipinnis, O. tanganicae, O. upembae, O. urolepis, O. urolepis homorum, O. urolepis urolepis u O. varíabilis. Más preferiblemente los peces pertenecen a Ia especie O. niloticus (NiIe tilapia).

A Io largo de Ia descripción y las reivindicaciones Ia palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en Ia materia, otros objetos, ventajas y características de Ia invención se desprenderán en parte de Ia descripción y en parte de Ia práctica de Ia invención. Las siguientes figuras y ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de Ia presente invención.

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

FIG 1. Muestra el efecto protector de diferentes dosis de Selenio (selenito sódico) sobre las lesiones hepáticas inducidas por MC en tilapias expuestas a 120 μg MC/pez (dosis única).

(A, C, E, G) Tinción Hematoxilina-eosina. Barras 100 μm. (B, D, F, H) Observaciones ultraestructu rales (microscopia electrónica). Barras 10, 5, 10, 10 μm.

(A, B) Peces control; (C, D) tilapias expuestas sólo a MCs (120 μgMC/pez). C: Parénquima hepático desorganizado, hepatocitos con citoplasmas muy claros y el contorno celular a modo de célula en cebolla (flecha). D: El hepatocito presenta un núcleo denso normal (N) rodeado de un citoplasma con escasos organoides y el resto del citoplasma repleto de glucógeno granular (círculo); (E, F) Peces expuestos a MC+Selenio dosis baja (1 ,5 μg Se/g dieta). E. Parénquima con escasos hepatocitos con degeneración glucogénica sin mostrar Ia morfología de célula en cebolla (flecha). F. Hepatocitos con mayor desarrollo de los organoides citoplasmáticos (círculo). (G, H) Peces expuestos a MC+Selenio dosis media (3,0 μg Se/g dieta). G. Cordones hepáticos normales y H. Detalle de hepatocito normal con organoides citoplasmáticos, retículos (R), mitocondrias (estrella), lisosomas (flecha) y ausencia de glucógeno granular.

FIG. 2. Muestra el efecto protector de diferentes dosis de Selenio (selenito sódico) sobre las lesiones renales inducidas por MCs en tilapias expuestas a 120 μg MC/pez (dosis única).

(A, C, E, G) Tinción Hematoxilina-eosina. Barras 100 μm. (B, D, F, H) Observaciones ultraestructurales (microscopia electrónica). Barras 10, 10, 10, 5 μm. (A, B) peces control; (C, D) tilapias expuestas sólo a MCs (120 μgMC/pez.). C. Glomerulopatía y atrofia glomerular evidente (círculo), representado por una pérdida en el tamaño, hialinizaciones intraglomerulares y pérdida de capilares. D. Glomérulos con engrosamiento y densificaciones de las membranas básales (flechas) y colapsamientos de las luces de los capilares fenestrados (círculo). (E 1 F) Peces expuestos a MC+Selenio dosis baja (1 ,5 μgSe/g dieta). E. Glomerulopatía con cierta desorganización interna (rombo), aumento de las células mesangiales (asterisco) y tenue dilatación de Ia cápsula de Bowman (flecha). F. Capilares fenestrados con Ia pared del endotelio (1), membrana basal (2) y podocitos (3) prácticamente normal y restos de endotelio tumefacto (círculo). (G 1 H) Peces expuestos a MC+Selenio dosis media (3,0 μg Se/g dieta). G. Glomérulos prácticamente normales (círculos), algunos con cierta tumefacción de los capilares fenestrados (flecha). H. cierto grado de tumefacción del endotelio capilar (círculo).

FIG. 3. Muestra el efecto protector de diferentes dosis de Selenio (selenito sódico) sobre las lesiones en corazón inducidas por MCs en tilapias expuestas a 120 μg MC/pez (dosis única).

(A, C, E, G) Tinción Hematoxilina-eosina. Barras 100 μm. (B, D, F, H) Observaciones ultraestructurales (microscopía electrónica). Barras 5, 10, 10, 10 μm.

(A, B) peces control; (C, D) tilapias expuestas sólo a MCs (120 μg MC/pez). C. Miofibrolisis (flecha). Edema escaso (estrella) y microhemorragias (círculo). D. Pérdida casi total de las miofibrillas, restos de miofibrillas (flecha) y de mitocondrias (estrella). Abundante sarcoplasma sin estructura (círculo). (E, F) Peces expuestos a MC+Selenio dosis baja (1 ,5 μg Se/g dieta). E. Miofibrolisis parcial (círculo), escaso edema (estrella) y microhemorragias (flecha). F. Recuperación de miofibrillas con núcleo desplazado (N). (G, H) Peces expuestos a MC+Selenio dosis media (3,0 μg Se/g dieta). G. Tenue miofibrolisis (flecha). Zonas poco edematosas y escasas microhemorragias. H. Abundantes miofibrillas (flecha) y abundantes mitocondrias (círculo).

FIG. 4. Muestra el efecto protector de diferentes dosis de Selenio (selenito sódico) sobre las lesiones en tracto gastrointestinal inducidas por MCs en tilapias expuestas a 120 μg MC/pez (dosis única). (A, C, E, G) Tinción Hematoxilina-eosina. Barras 50, 50, 100, 100 μm. (B 1 D, F, H) Observaciones ultraestructurales (microscopía electrónica). Barras 20, 10, 20, 20 μm (A, B) peces control; (C, D) tilapias expuestas sólo a MCs (120 μg MC/pez). C. Acortamiento de las vellosidades intestinales con necrosis en Ia zona apical (círculo). D. Detalle del epitelio intestinal con núcleos muy densos (N) y pérdida prácticamente total de las microvellosidades (círculo). (E, F) Peces expuestos a MC+Selenio dosis baja (1 ,5 μg Se/g dieta). E. Vellosidades cortas de escasos tamaños, vacuolizaciones citoplasmáticas en enterocitos (círculo). F. Detalle del epitelio con recuperación parcial de las microvellosidades (círculo). (G 1 H) Peces expuestos a MC+Selenio dosis media (3,0 μg Se/g dieta). G. Vellosidades cortas, células intestinales (enterocitos) con vacuolización y células caliciformes (flecha). H. Recuperación parcial de las microvellosidades (círculo).

EJEMPLOS

A continuación se ilustrará Ia invención mediante unos ensayos realizados por los inventores que describen el uso de Selenio (selenito sódico) para tratamiento, prevención y/o recuperación de efectos tóxicos en peces expuestos a MCs.

EJEMPLO 1

La invención se llevó a cabo empleando un total de 64 peces macho de Orechromis niloticus (NiIe tilapia), de peso medio 50±7 g, y longitud de 12±2 cm, obtenidos en una piscifactoría, y transferidos en acuarios (96 L) con sistema de filtración de agua y aireación adecuados, y ciclos de 12/12 h luz/oscuridad. Los peces fueron alimentados con comida comercial (Dibaq, Segovia, España), en una cantidad de 0,3 g/día. Los peces se aclimataron durante 15 días antes del experimento. Se llevó a cabo Ia extracción de las MCs a partir de un liofilizado de células de cianobacterias procedentes de una floración natural que contenía 2885 μg/g de MC-LR, según el método de Moreno et al (2004, Biol Res 37:405- 417). Se utilizaron 8 grupos experimentales con 8 animales en cada uno. Cada grupo fue introducido en un acuario independiente: Acuario 1: peces control, alimentados sólo con pienso normal durante 7 días. Acuario 2: peces alimentados con pienso durante 7 días, intoxicados con MCs en Ia dieta (dosis única de 120 μg/pez). Acuarios 3, 5 y 7: Peces alimentados con pienso + Selenita sódico (equivalentes a 1.5, 3.0 ó 6.0 μg Selenio/g dieta, respectivamente) durante 7 días. Acuarios 4, 6 y 8: Peces con pienso + Se (1.5, 3.0 ó 6.0 μg Selenio/g dieta, respectivamente) durante 7 días. Los peces son infectados con una dosis única de 120 μg MC/pez.

Al final del experimento los peces fueron sacrificados, anestesiándolos con hielo, se procedió a Ia extracción de los órganos, que se fijaron en formol tamponado 10% 24 h a 4 o C, y procesados para su estudio al microcopio óptico (etanol, xilol, parafina, y tinción hematoxilina y eosina) y al microscopio electrónico, de acuerdo con Atencio ef al (2008, Toxicol Pathol 36:449-458). Los resultados más significativos fueron los siguientes:

1) En Ia FIG 1 se observa Ia degeneración glucogénica del hígado producida por las MCs, mostrando los hepatocitos un contomo de células en cebolla. La dosis más baja de Selenio (1,5 μg Selenio/g dieta) no recuperó dicha degeneración, aunque fue menos severa, mientras que las dosis intermedias y elevadas recuperan Ia arquitectura del parénquima hepático, con hepatocitos poliédricos.

2) En Ia FIG 2 se observan los cambios degenerativos inducidos por MCs en riñon: atrofia glomerular, glomerulopatía, engrasamiento de las membranas básales y capilares fenestrados colapsados. Una recuperación total de dichas lesiones se consigue con Ia suplementación de 6.0 μg Selenio/g dieta.

3) Las lesiones cardiacas caracterizadas por una marcada miofibrolisis, edema generalizado y microhemorragias fueron totalmente superadas con Ia dosis de 6.0 μg Selenio/g dieta. 4) En tracto gastrointestinal, el proceso de enteritis necrótico producido por MCs fue recuperado, así como las lesiones en branquias.