CN101890152A | 2010-11-24 | |||
CN102920998A | 2013-02-13 | |||
CN101348819A | 2009-01-21 |
SUN, YUJING ET AL.: "Antioxidant Activity in Vitro of Glycoprotein from Chinese Yam.", ACTA HORTICULTURAE SINICA., vol. 37, no. 6, 2010, pages 1009 - 1014, XP055262067
JING, HONGBO;: "Study of Pharmacological activity of Rhizoma Dioscoreae and current product development situation.", CHEMISTRY & BIOENGINEERING., vol. 28, no. 4, 2011, pages 9 - 12, XP008179698
See also references of EP 2929889A4
北京法思腾知识产权代理有限公司 (CN)
权 利 要 求 1、一种山药糖蛋白在制备治疗脑细胞线粒体氧化代谢酶活性降低所导 致的脑细胞功能性退化的疾病的药物中的应用, 其特征在于所述脑细胞线 粒体氧化代谢酶为丙酮酸脱氢酶和 α酮戊二酸脱氢酶, 所述的山药糖蛋白 的制备按下列步骤进行: a、将山药干燥根茎粉碎成细粉后,加入 2-5倍量的水加热,温度 50-100 °C, 提取两次, 每次 2-3小时, 过滤后合并两次提取液, 将提取液减压浓 b、 将步骤 a所得的浓缩液中加入浓度为 95%的乙醇, 使其含醇量达到 60-75%静置, 出现白色沉淀物, 静置了 3-6小时, 将白色沉淀物与上清液 c、将步骤 b所得的上清液中继续加入浓度为 95-98%的乙醇,使其乙醇 含量达到 90-95%, 出现棕色粘胶状沉淀, 静置 3-6小时后除去上清液, 收 集沉淀物, 干燥后即可得到棕色或深棕色结晶状或粘胶状固体的山药糖蛋 白。 |
技术领域
本发明涉及一种山药糖蛋白在提高脑细胞线粒 体氧化代谢酶活性的用 途,尤其涉及山药糖蛋白在制备提高脑细胞线 粒体中丙酮酸脱氢酶、 α酮戊 二酸脱氢酶活性类药物中的用途。 背景技术
脑细胞线粒体是脑细胞维持正常生理活动的主 要细胞器之一, 同时也 是控制脑细胞凋亡的开关, 在正常情况下, 线粒体中的主要氧化代谢酶丙 酮酸脱氢酶和 α酮戊二酸脱氢酶, 将产能物质氧化代谢后产生能量 (ΑΤΡ) 供细胞维持正常的生理活动, 但如果由于脑细胞的退行性病变使线粒体氧 化代谢效率降低, 或由于脑血管梗赛导致脑组织缺血缺氧, 使脑细胞无法 产生足够的 ΑΤΡ来维持正常的生理功能, 就会产生一系列病理改变, 如老 年痴呆、 血管性痴呆、 中风等。 换言之, 在保持脑细胞基本血供、 氧供的 前提下, 即便在缺血、 缺氧的条件下, 如果能提高脑细胞线粒体主要氧化 代谢酶的活性, 提高氧化产能的效率, 也会使因退化和损伤的脑细胞功能 得到一定程度的保护和恢复。 从而使因这些病理变化而产生的疾病得到有 效地治疗和控制。
山药糖蛋白为薯蓣科薯蓣属植物山药根茎中所 含有的一种天然活性成 分, 在此前公开的研究中证明此物质可以有效治疗 睡眠呼吸暂停综合征、 具有抗缺氧、 抗疲劳等作用 (ZL201010171536. 1和 ZL2010101715337 ) ,本 发明在此基础上进一步研究表明: 山药糖蛋白能显著地提高脑细胞线粒体 中丙酮酸脱氢酶和 α酮戊二酸脱氢酶的活性,从而使因缺血、缺 和其它因 素导致的脑细胞线粒体氧化代谢降低所致的损 伤和功能障碍得到治疗和恢 复, 但到目前为止, 尚未见有相关报道。 发明内容 本发明目的在于, 提供一种山药糖蛋白在提高脑细胞线粒体氧化 代谢 酶活性的用途, 通过动物实验进行筛选和验证, 证明了山药糖蛋白具有显 著提高脑细胞线粒体中进行氧化代谢的关键酶 即丙酮酸脱氢酶和 α-酮戊二 酸脱氢酶的活性, 从而使伴有这些酶活性的降低所导致的氧化代 谢效率的 下降的老年痴呆、 血管性痴呆、 脑梗塞、 脑瘫等脑细胞退化和损伤类疾病 得到有效治疗。
本发明所述的一种山药糖蛋白在制备提高脑细 胞线粒体氧化代谢酶活 性的用途, 该山药糖蛋白在制备提高脑细胞线粒体中丙酮 酸脱氢酶和 α酮 戊二酸脱氢酶活性的药物, 其中所述的山药糖蛋白来自薯蓣科薯蓣属植物 山药或薯蓣科其它属植物的干燥根茎, 所述的山药糖蛋白的制备按下列步 骤进行:
a、将山药干燥根茎粉碎成细粉后,加入 2-5倍量的水加热,温度 50-100 °C, 提取两次, 每次 2-3小时, 过滤后合并两次提取液, 将提取液减压浓 b、 将步骤 a所得的浓缩液中加入浓度为 95%的乙醇, 使其含醇量达到 60-75%静置, 出现白色沉淀物, 静置了 3-6小时, 将白色沉淀物与上清液 c、 将步骤 b所得的上清液中继续加入浓度为 95-98%的乙醇, 使其乙醇 含量达到 90-95%, 出现棕色粘胶状沉淀, 静置 3-6小时后除去上清液, 收 集沉淀物, 干燥后即可得到棕色或深棕色结晶状或粘胶状 固体的山药糖蛋 白。
所述的药物是以山药糖蛋白为活性成分, 加上药学上可接受的载体或 辅助性成分制备而成的药物制剂。
所述的药物制剂是胶囊剂、 颗粒剂、 片剂、 散剂、 口服液或糖浆剂。 本发明所述的山药糖蛋白及其制剂,具有良好 的提高脑细胞线粒体中 丙酮酸脱氢酶和 α酮戊二酸脱氢酶的活性的作用,可用于治疗 脑细胞线粒 体氧化产能效率降低, 而产生的各种急慢性脑损伤和因脑细胞氧化代 谢降 低而产生的脑功能退化类疾病, 其来源于天然植物, 药源充足, 提取制备 方法简便易行, 可将其制成胶囊、 片剂、 颗粒剂、 口服液等多种剂型, 具 有疗效显著, 使用安全方便等优点。
根据本发明所述的内容, 按照本领域的普通技术和惯用手段 , 在不 脱离本发明上述基本思想的前提下, 还可以作出其它多种形式的修改, 替 换与变更。 以下通过实施例形式的具体实施方式, 对本发明的上述内容再 做进一步详细说明, 但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限 于以下 的实例, 凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本 发明的范围。
具体实施方式
实施例 1 : 山药糖蛋白的制备
取山药原生药 lOOOg粉碎成细粉, 加入 2倍量水加热, 温度 50°C, 提取 两次, 每次 2小时, 过滤后合并两次提取液, 将提取液浓缩至 50%, 将浓 度为 95%乙醇加入浓缩液中使其含醇量达到 60%,出现白色沉淀物后静置了 3-6小时,将沉淀物与上清液分离,在上清液中 继续加入浓度为 95%乙醇使 其含醇量达到 90%,出现棕色沉淀,静置 3-6小时后除去上清液收集沉淀物, 烘干干燥, 即可得到棕色或深棕色粘胶状固体粗山药糖蛋 白。
实施例 2 : 山药糖蛋白的制备
取山药原生药 lOOOg粉碎成粗粉, 加入 3倍量水加热, 温度 70°C, 提 取 2次, 每次时间 3小时, 过滤后合并两次提取液, 浓缩 50%, 将浓度为 95%乙醇加入浓缩液中使其含醇量达到 70%, 出现白色沉淀, 静置 3-6小时, 将沉淀物与上清液分离, 向上清液中继续加入浓度为 95%乙醇, 使其含醇达 到 90%, 出现棕色粘胶状沉淀, 除去上清液, 收集沉淀物, 真空干燥, 即可 得到棕色或深棕色固体状较纯的山药糖蛋白。
实施例 3 : 山药糖蛋白的制备
取山药原生药 1000g粉碎为大颗粒状, 加入 5倍量水加热, 温度 100 °C, 提取 3次, 每次 2小时, 过滤后合并两次提取液, 浓缩至 50%, 将浓 度为 95%乙醇加入浓缩液中,使其含醇量达到 75%, 出现白色沉淀后,抽取上 清液, 上清液中继续加入浓度为 98%乙醇, 使其含醇量达到 95%, 出现黄棕 色粘胶状沉淀, 除去上清液, 收集沉淀物进行真空冷冻干燥, 即可得到棕 色结晶状较纯的山药糖蛋白。
实施例 4: 山药糖蛋白对小鼠脑细胞线粒体中丙酮酸脱氢 酶和 a酮戊 二酸脱氢酶活性的作用研究:
材料和方法:
材料: 小鼠 a酮戊二酸脱氢酶酶联免疫分析试剂盒, 小鼠丙酮酸脱氢 酶酶联免疫分析试剂盒: 均购自北京永辉生物科技有限公司;
动物: 昆明种小鼠,雄雌各半, 体重 (20土 2) g, 由新疆医科大学实验 动物中心提供;
动物分组: 将 27只小鼠随机分为 3组, 每组 9只, 即对照组, 山药糖 蛋白小剂量组和山药糖蛋白大剂量组;
药物:将山药糖蛋白加入纯净水溶解,配制成 0、 42g/mL的溶液备用; 方法: 山药糖蛋白大剂量小鼠组按 0, 42g/Kg体重给予山药糖蛋白溶 液灌胃, 山药糖蛋白小剂量小鼠按 0, 21g/Kg体重给予山药糖蛋白溶液灌 胃, 每天一次,连续 10天, 对照组则给予纯净水灌胃, 第 10天给药一小时 后,处死小鼠后, 取脑组织称重, 加入一定量的 PBS (pH7. 4), 用匀衆器将 标本充分匀浆, 离心 20分钟(2000— 3000转 /分), 仔细收集上清, 分装 一份待检测, 其余冷冻备用, 用相应的试剂盒按说明书操作检测。 山药糖蛋白大小两个剂量组与对照组相比, 小鼠脑组织中, 丙酮酸 氢酶与 α酮戊二酸脱氢酶的含量显著增加, 见表 1 :
表 1对照组与糖蛋白组酶含量对比 ( α酮戊二酸脱氢酶 U/mg protein)
对照组 小剂量组 大剂量组
1 25. 21 1 32. 45 1 25. 48
2 22. 17 2 24. 56 2 35. 47
3 16. 45 3 25. 13 3 26. 16
4 29. 57 4 35. 24 4 39. 25
5 22. 59 5 26. 35 5 32. 47
6 26. 75 6 24. 14 6 34. 27
7 29. 23 7 31. 24 7 21. 48
8 18. 17 8 21. 14 8 28. 37
9 19. 67 9 23. 54 9 29. 48
23. 31222 27. 08778 30. 27
4. 450023 4. 470548 5. 268932 表 2对照组与糖蛋白组酶含量对比 (丙酮酸脱氢酶 U/mg protein)
从表中可以看出: 山药糖蛋白及其制剂, 具有良好的提高脑细胞线粒 体中丙酮酸脱氢酶和 α 酮戊二酸脱氢酶的活性的作用,可用于治 疗因脑细胞 线粒体氧化产能效率降低, 而产生的各种急慢性脑损伤和因脑细胞氧化代 谢降低而产生的脑功能退化类疾病。