技术领域

本发明属于制药领域，涉及苯甲酸酯及其衍生 物在神经系统疾病和抗脑衰老疾病中的应 用。

背景技术

随着社会人口的老龄化， 神经退行性疾病， 尤其是老年性痴呆的患病率明显升高， 已成 为导致成年人死亡的第四位主要原因。特别是 我国人口老龄化的加快， 目前老年性痴呆患者， 包括阿尔茨海默症（Alzheimer's disease说)和血管性痴呆症， 人数已超过 500万， 约占世界总病 例的 1/4。 由于缺乏有效的预防和治疗措施， 使得老年性痴呆症给社会稳定与发展带来严重 的 影响。 因此， 开发预防和治疗老年性痴呆等神经退行性疾病 的有效新药是目前全世界迫切需 要解决的医学问题。 书

目前临床常用治疗老年性痴呆症药物的主要靶 点是胆碱能神经系统， 如乙酰胆碱、 乙酰 胆碱酯酶抑制剂：他克林（tacrine)、酒石酸卡� ��拉汀（rivastigmine)、石杉碱甲（huperzine A)、 多奈哌齐（donepezil)等。 但这些药物只能部分替代胆碱能神经系统功能 ， 暂时改善认知功 能， 并不能阻止和延缓神经退行性病变的进展。 而且， 长期服用疗效逐渐降低， 有副作用。 因此， 开发抗脑衰老和预防神经退行性病变的新药物 ， 已成为目前研究的焦点。

脑的神经细胞死亡和神经系统功能下降是导致 认知功能障碍的主要原因。近年的研究已 证明， 成年脑的新生神经元（神经再生）能取代和修 复由于自然老化或病变造成的神经元缺 失， 对维护脑的结构和功能起到关键的作用。 神经生长因子 （nerve growth factor, NGF) 是 最早发现的一种对神经的生长、发育、分化和 功能保持等方面有重要调控作用的生物活性多 肽， 是最重要的神经营养因子。 特别是在神经系统疾病过程中， 神经营养因子对神经细胞和 神经再生都有重要的保护作用。 神经营养因子能阻止或减少神经萎縮、 神经变性， 促进外伤 后的神经修复。 然而， 它是一个由 100多个氨基酸组成的蛋白质； 由于分子量大和极性强等 原因， 不能通过血脑屏障， 是限制神经生长因子临床应用的瓶颈， 目前除脑内手术直接投药 之外还没有找到更好的治疗方法。 因此， 寻找神经生长因子拟似物 （NGF mimi _CS )、 神经生 长因子增强剂（NGF enhancer)和神经生长因子先导物（NGF inducer)被认为是研究预防和 治疗神经退行性疾病的新靶标。

中草药是中药学的物质基础， 是天然活性有机化合物的聚宝盆。 我国有着几千年的中医 文明， 且地大物博， 有很多宝贵的道地药材， 因为中药材资源的利用较方便， 所以对其新的 成分和新的活性的研究也就十分重要。 研究表明， 中药对老年性痴呆症有显著疗效， 其中最 著名的是从蛇足石杉中提取的生物碱一石杉碱 甲 （huperzine A) ， 是中国科学院药物研究所 开发的具有自主知识产权的抗老年性痴呆的药 物。 主要具有抑制乙酰胆碱酯酶活性， 减少谷 氨酸诱发神经细胞死亡， 抗 β淀粉样多肽的神经毒作用和抗氧化作用。

龙胆， 别名： 苦胆草、 胆草。 春、 秋二季采挖， 洗净， 干燥。 性味， 苦， 寒。 归肝、 胆 经。 2005版药典中介绍， 龙胆的功能主治： 清热燥湿、 泻肝胆火。 用于湿热黄疸、 阴肿阴痒、 带下、 强中、 湿疹瘙痒、 目赤、 耳聋、 胁痛、 口苦、 惊风抽搐。 采用 PC12细胞建立的生物 学活性鉴定系统， 从坚龙胆 Gmtiana rigescens Franch. 的干燥根及根茎的提取物中分离纯化 得到十余种具有显著类似神经生长因子活性的 2，3-二羟基苯甲酸酯类新化合物， 命名为 gentisides o 在此基础上， 合成了一系列苯甲酸酯及其衍生物 （详见实施例 1 ) ， 发现苯甲酸 酯及其衍生物具有类似神经生长因子的促生长 作用。特别是， 2，3-二羟基苯甲酸十四酯（被命 名为 ABG-001 ) 的 Ι μΜ低浓度处理， 显示了显著的促神经生长作用 （详见实施例 2-1 ) 。 迄 今为止， 尚未有苯甲酸酯类化合物具有抗老年痴呆的类 似 NGF活性的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足， 提供苯甲酸酯及其衍生物的制备方法和应用。 本发明的目的是通过以下技术方案来实现的： 一种苯甲酸酯及其衍生物在制备预防及治 疗神经退行性疾病和抗脑衰老的药物中的应用 ， 所述苯甲酸酯及其衍生物具有如下的结构通 式：

其中， R是碳原子数从 1至 30的直链、 支链、 饱和及不饱和烷基、 脂肪环或它们的衍生 物； 〜R ₅ 分别独立地选自氢、 羟基、 羧基、 醛基、 酯基、 氟、 氯、 溴、 碘、 巯基、 氨基、 酰 胺基、 氰基、 硝基、 磺酸基、 三氟甲基、 丙烯基、 烷基、 烷氧基、 取代苄基、 取代苯基、 芳 基、 杂芳基、 糖基和氨基酸残基； X选自 C(0)0、 OC(0)、 C(0)NH、 NHC(0)、 C(0)、 CH ₂ 、 S禾卩 0。

进一步地， 所述 R是碳原子数从 6至 22的直链、 支链、 饱和及不饱和烷基、 脂肪环或它 们的衍生物。

进一步地， 所述苯甲酸酯及其衍生物为： 2， 3-二羟基苯甲酸乙酯、 2， 3-二羟基苯甲酸戊 酯、 2， 3-二羟基苯甲酸辛酯、 2， 3-二羟基苯甲酸癸酯、 2， 3-二羟基苯甲酸十二烷酯、 2， 3-二 羟基苯甲酸十四烷酯、 2， 3-二羟基苯甲酸十六烷酯、 2， 3-二羟基苯甲酸十八烷酯、 2， 3-二羟 基苯甲酸二十烷酯、 2， 3-二羟基苯甲酸二十二烷酯、 2， 3-二羟基苯甲酸三十烷酯、 2， 6-二羟 基苯甲酸十四烷酯、 2， 6-二羟基苯甲酸二十烷酯、 2， 4-二羟基苯甲酸十四烷酯、 3， 4-二羟基 苯甲酸十四烷酯、 3， 4， 5-三羟基苯甲酸十四烷酯、 2-羟基苯甲酸十四烷酯、 3-羟基苯甲酸十 四烷酯、 2， 3-二甲氧基苯甲酸十四烷酯、 2， 3-二甲氧基苯甲酸十八烷酯、 2-羟基 -3-甲氧基苯 甲酸十四烷酯、 2-氯苯甲酸十四烷酯、 2， 3-二羟基 -N-十四烷基苯甲酰胺、 2，3-二羟基-N-辛 基苯甲酰胺、 2， 3-二羟基 -N-十二烷基苯甲酰胺、 2， 3-二羟基 -N-十六烷基苯甲酰胺、 2， 3-二 羟基 -N-十八烷基苯甲酰胺、 2， 3-二甲氧基 -N-十四烷基苯甲酰胺、 3， 4-二羟基 -N-十四烷基苯 甲酰胺、 3, 4， 5-三羟基 -N-十四烷基苯甲酰胺、 N- (3, 4-二甲氧基苯基)十四（烷)酰胺、 N- (3, 4- 二羟苯基)十四（浣)酰胺、 1- (3， 4-二甲氧基苯基)十四烷 -1-酮、 1- (3， 4-二羟苯基)十四烷 -1- 酮、 3- (十四烷氧基羰基) -1， 2-苯基双乙酸盐、 3- (十四烷基甲酰基) -1， 2-苯基双乙酸盐、 5- (十 四烷氧基羰基)苯 -1， 2， 3-三乙酸盐、 5- (十四烷基甲酰基)苯 -1， 2， 3-三乙酸盐、 1， 2-次苯基二 十酸酯、 2， 3-二羟苯基十四（烷)酸盐、 3- (十四烷氧)苯 -1, 2-二醇。

本发明的有益效果在于： （1 ) 2，3-二羟基苯甲酸酯类化合物（ABG-001 ) 口服或腹腔给 药均未发现有毒性作用，该化合物能快速通过 血脑屏障进入脑内，调节脑神经系统功能； （2) 动物药理学实验结果证明， 本发明所述的 2，3-二羟基苯甲酸酯类化合物能促进成年脑的 神经 元再生、 抗脑的衰老、 阻止 β淀粉多肽的神经毒性、 降低乙酰胆碱酯酶活性， 具有预防和治 疗老年性痴呆症和抗脑衰老的作用。

附图说明

图 1为化合物 ABG-001促进 PC12细胞神经突起伸长的剂量依存关系图；

图 2为加入 ABG-001，经 48小时后 PC 12细胞神经突起的显微照片，其中， a为 1% DMSO, 为阴性对照； b为 NGF 40 ng/ml, 为阳性对照； c为 ABG-001 (1 μΜ) _;

图 3表示 ABG-001有拟神经生长因子的作用，其中，（a)为 海马神经生长因子的表达图， (b) 为新生神经元的数量图；

图 4 表示 ABG-001治疗能促进脑缺血后神经再生和迁移；

图 5表示 ABG-001能通过血脑屏障；

图 6表示 ABG-001通过血脑屏障能促进成年神经再生， 其中， （a)为新生神经元的数量 图， （b) 为新生神经元突起长度图， （c) 为新生神经元的分化图；

图 7 表示 ABG-001具有抗脑衰老的作用， 其中， （a)为新生神经元的数量图， （b)、 (c) 和 （d) 为 Morris水迷宫试验图， （e)、 （0、 (g) 和 （h) 为小鼠的氧化应激生化指标图； 图 8 表示 ABG-001具有抗脑衰老的作用， 其中， （a) 为 Y迷宫总进臂次数，

(b) 为 Y迷宫交替进臂率， （c) 和 （d) 为新奇物体的辨别能力图；

图 9 为 Αβ损害及 Αβ损害 ABG-001治疗后 Morris水迷宫试验图；

图 10 表示 ABG-001治疗能改善 Αβ损害 （APP/PS1小鼠） 的神经再生， 其中， （a) 为 新生神经元的数量图， （b)为新生神经的突起长度图， （c)为乙酰胆碱酯酶（AChE)活性图。 具体实施方式

2，3-二羟基苯甲酸酯类化合物能导致高比例的 PC12 细胞发生神经突起伸长现象， 表明 2，3-二羟基苯甲酸酯具有很好的类似 NGF活性， 具有开发抗老年痴呆预防治疗药物的价值。 以 2，3-二羟基苯甲酸酯化合物作为先导物， 设计并合成一系列苯甲酸酯衍生物， 广泛开展其 体外活性研究， 寻找该类物质的构效关系。 如果能找到具有潜在的更优异活性和 /或更低毒性 的化合物， 并能用于预防及治疗老年痴呆症等神经退行性 和抗脑衰老疾病， 将具有重要的现 实意义。

本发明苯甲酸酯衍生物， 该化合物的结构可用通式 I表示：

I

式中： R是碳原子数从 1至 30的直链、 或支链、 或饱和及不饱和烷基、 或脂肪环、 或它 们的衍生物， 特别是 C ₆ 〜C _{22 ;}

〜R ₅ 分别独立地选自氢、 羟基、 羧基、 醛基、 酯基、 氟、 氯、 溴、 碘、 巯基、 氨基、 酰 胺基、 氰基、 硝基、 磺酸基、 三氟甲基、 丙烯基、 烷基、 烷氧基、 取代苄基、 取代苯基、 芳 基、 杂芳基、 糖基和氨基酸残基；

X选自 C(0)0、 OC(0)、 C(0)NH、 NHC(0)、 C(0)、 CH ₂ 、 S和 0。

本发明苯甲酸酯及其衍生物的制备方法， 通过以下步骤实现：

1 )当 X是 c(o)o或 oc(o)的酯类化合物的制备方法： 先将酸与醇或酚用溶剂完全溶解， 冷致 0 °C， 搅拌下滴加脱水剂， 再升到室温反应 1〜2天， 用薄层色谱跟踪反应。 反应结束后， 蒸出溶剂， 后处理， 再经硅胶柱层析纯化得酯类化合物。 酸是取代苯甲酸或碳原子数从 1至 30的直链、 或支链、 或饱和及不饱和烷基、 或脂肪环、 或它们的衍生物， 特别是 C ₆ 〜C ₂₂ 的脂 肪酸； 醇是碳原子数从 1至 30的直链、 或支链、 或饱和及不饱和烷基、 或脂肪环、 或它们的 衍生物， 特别是 C ₆ 〜C ₂₂ 的脂肪醇； 酚是取代苯酚； 脱水剂是浓硫酸、 二异丙基碳二亚胺或二 环己基碳二亚胺； 溶剂是质子性溶剂甲醇、 乙醇或四氢呋喃， 或非质子性溶剂二氯甲烷、 氯 仿、 苯、 甲苯、 二甲苯、 二甲亚砜或乙腈； 酸与醇的摩尔比为 1 :1〜1 :20， 酸与脱水剂的摩尔 比为 1 :0.2〜1 :3。

2) 当 X是 C(0)NH或 NHC(O)的酰胺类化合物的制备方法： 将酸， 胺， 与羟基苯并三唑 用干燥的溶剂溶解， 冷致 0 °C， 搅拌下加入縮合剂， 室温反应 2〜5天。 反应结束后， 蒸干溶 剂， 残余物用乙酸乙酯溶解， 依次用饱和碳酸氢钠溶液、 水洗涤， 无水硫酸镁干燥， 浓縮， 再经硅胶柱层析纯化得酰胺。酸是取代苯甲酸 或碳原子数从 1至 30的直链或支链， 饱和或不 饱和的脂肪酸；胺是取代苯胺、或碳原子数从 1至 30的直链或支链，饱和或不饱和的脂肪胺。 酸与胺的摩尔比为 1 :1〜1 :5， 酸与縮合剂的摩尔比为 1 :1〜1 :5。

3 )当 X是 C(O) 的酮类化合物的制备方法： 在惰性气体保护下， 将活化的金属镁加入无 水乙醚中， 滴加溴代烷烃的乙醚溶液。 待格式反应开始后继续滴入溴代烷烃的乙醚溶 液， 回 流反应 1小时。 随后在惰性气体保护下， 0 °C， 将制备好的格式试剂滴加到醛的乙醚溶液中， 升至室温反应 2小时。 待反应完毕， 将反应液冷致 0 °C， 慢慢加入 1摩尔每升盐酸溶液， 用 乙醚萃取反应液， 有机相依次用 1摩尔每升稀盐酸、 饱和碳酸氢钠溶液、 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸镁干燥， 浓縮， 再经硅胶柱层析纯化得醇类化合物。 惰性气体是氮气或氩气； 溶剂 是无水乙醚或四氢呋喃； 醛是取代苯甲醛； 溴代烷烃是碳原子数从 1至 30的直链或支链、饱 和或不饱和的溴代烷烃； 反应温度可以从 -80度到 50度； 溴代烷烃与镁的摩尔比为 1 :1〜1 :10； 溴代烷烃与取代苯甲醛的摩尔比为 1 :1〜1 :10。

将醇类化合物用溶剂完全溶解， 缓慢加入氧化剂， 反应完毕， 减压浓縮， 所得浓縮液用 乙酸乙酯稀释， 依次用 1摩尔每升稀盐酸、 饱和碳酸氢钠溶液、 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸 镁干燥， 浓縮， 再经硅胶柱层析纯化得酮类化合物。 溶剂可以是四氢呋喃、 二氯甲烷、 丙酮、 氯仿、 二甲亚砜或乙腈； 氧化剂可以是三氧化铬、 二氧化锰、 二甲亚砜、 高碘酸酯或 N-甲基 吗啉 氧化物。 醇与氧化剂的摩尔比为 1 :1〜1 :10。

4) 当 X是 0的醚类化合物的制备方法： 即在惰性气体保护下， 将酚溶于干燥的四氢呋 喃中， 搅拌下加入醇、 三苯基膦、 偶氮二甲酸二乙酯， 室温反应 1〜24小时。 反应结束后， 减 压蒸除溶剂。 乙酸乙酯稀释浓縮液， 用去离子水、 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸镁干燥， 减压 浓縮有机相， 所得浓縮液再经硅胶柱层析纯化得醚类化合物 。 酚是取代苯酚、 取代萘酚； 醇 是碳原子数从 1至 30的直链或支链、饱和或不饱和脂肪醇； 偶氮类试剂可以是偶氮二甲酸二 乙酯、 偶氮二甲酸二丙酯、 偶氮二甲酸二异丙酯、 偶氮二甲酸二叔丁酯或偶氮二甲酸二苄酯； 膦类试剂可以是三苯基膦、 三异丙基膦、 三对甲苯基膦、 三乙基膦、 三丁基膦或三环己基膦; 溶剂是质子性溶剂甲醇或乙醇， 或非质子性溶剂四氢呋喃、 二氯甲烷、 氯仿、 苯、 甲苯、 二 甲苯、 二甲亚砜或乙腈； 酚与醇的摩尔比为 1 :20， 酚与偶氮类试剂的摩尔比为 1 _: 0.2〜1 :20； 酚 与膦类试剂的摩尔比为 1 :0.2〜1 :20。

本发明的目的是苯甲酸酯及其衍生物在制备治 疗阿尔茨海默症和抗脑衰老疾病药物中的 应用。

本发明进一步还提供一种治疗抗老年性痴呆症 和抗脑衰老的药物组合物， 该药物组合物 含有生理有效量的苯甲酸酯及其衍生物 （ I ) 和药学上可接受的载体或稀释剂。 所示的苯甲 酸酯及其衍生物 （ I ) 在药物中的重量比为 0.1 %〜90 %。

这里所述的药学上可接受的载体是指药学领域 常规的药物载体， 例如稀释剂、赋形剂如 是等， 填充剂如淀粉、 蔗糖、 微晶纤维素等； 粘合剂如淀粉浆、 羟丙纤维素、 明胶、 聚乙二 醇等； 湿润剂如硬脂酸镁、 微粉硅胶、 聚乙二醇类等； 吸收促进剂聚山梨脂、 卵磷脂等， 表 面活性剂伯洛沙姆、 脂肪酸山梨坦、 聚山梨脂等等， 另外还可以在组合物中加入其它辅剂如 香味剂、 甜味剂等。

本发明所述的苯甲酸酯衍生物可以以单位剂量 形式给药，给药途径可为肠道和非肠道， 包括口服、 肌肉和皮下。 化合物给药途径也可为静脉给药。 注射包括静脉注射、 肌肉注射、 皮下注射和穴位注射。

本发明的药物组合物的各种剂型可以按照药学 领域的常规生产方法制备， 例如使活性 成分与一种或多种载体混合， 然后将其制成所需的剂型。

给药剂型可以是固体制剂、 胶囊剂或液体制剂， 包括片剂、 胶囊剂、 分散片、 口服液、 大输液、 小针、 冻干粉针。

本发明所述的苯甲酸酯及其衍生物具有显著的 类似神经生长因子的活性， 具有神经保 护和抗脑衰老的作用， 可以在预防老年痴呆症等神经退行性疾病和抗 脑衰老中获得应用。 本发明的苯甲酸酯类化合物在老年性痴呆的体 外筛选模型 PC12细胞中表现出显著的 NGF mimics活性。 以此类化合物作为先导物， 优化结构， 为预防和治疗老年痴呆症等神经退行 性疾病的新药研发进行基础性研究， 将具有重要的现实意义。

本发明所述的苯甲酸酯及其衍生物能够通过血 脑屏障， 具有高效能的神经营养作用。 本发明所述的苯甲酸酯及其衍生物具有抗脑的 衰老，以及预防和治疗老年性痴呆的作用。 以下通过对该类若干具体化合物制备实例的实 施方式和附图再对本发明的上述内容作 进一步的详细说明， 但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限 于下述的实例， 凡基于 本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的 范围。

实施例 1

化合物 1 -1 : 2，3-二羟基苯甲酸乙酯

将（ 154 mg， l mmol) 2,3-二羟基苯甲酸， 10 ml 乙醇置于 25 ml圆底烧瓶中， 冷致 0 °C， 滴加 2 〜 3滴浓硫酸， 回流搅拌 24 h。 用薄层色谱（展开剂： 正己浣 /乙酸乙酯， 5/1， V/V)跟踪反应， 反应停止后，蒸出乙醇，得粗产品 390 mg，硅胶柱层析 （展开剂：正己浣 /乙酸乙酯， 5/1， V/V), 得白色固体180 mg。1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 11.00 (s， 1H, benzene 2-OH), 7.38 (dd, 1Η，/ = 1.5, 8.0 Hz, benzene H-6), 7.12 (dd, 1H， / = 1.0, 7.5 Hz, benzene H-4), 6.80 (t， 1H， J = 8.0 Hz, benzene H-5), 5.66 (s, 1H， benzene 3-OH), 4.41 (q， 2H, J = 7.0 Hz), 1.42 (t， 3H, J = 7.0 Hz); HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₉ H _u 0 ₄ ⁺ : 183.0652, found: 183.0639.

化合物 I -2: 2，3-二羟基苯甲酸戊酯

合成方法同化合物 1 -1， 反应投料为： （154 mg， l mmol) 2，3-二羟基苯甲酸、 10 ml戊醇， 获 得白色固体 170 mg o 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 11.00 (s, 1H)， 7.38 (dd, 1H, J = 1.5， 8.0 Hz), 7.12 (dd, 1H， / = 1.0， 8.0 Hz), 6.80 (t， 1H， / = 8.0 Hz), 5.65 (s， 1H), 4.41 (t， 2H， / = 7.0 Hz), 1.78 (m, 2H), 1.33〜 1.38 (m, 4H), 0.90 (t, 3H， / = 7.0 Hz); ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 170.4, 148.9， 145.1 , 120.5, 119.7, 119.1， 112.7, 65.7, 28.2, 28.1 , 22.3, 13.9 ppm; IR (KBr) v: 3458, 2931 , 2865, 1674, 1469， 1309, 1268, 1067, 754 cm ¹ ; HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₁₂ H ₁₇ 0 ₄ ⁺ : 225.1121 , found: 225.1104.

化合物 I -3 : 2，3-二羟基苯甲酸辛酯

合成方法同化合物 1 -1， 反应投料为： （154 mg， l mmol) 2，3-二羟基苯甲酸、 10 ml辛醇， 获 得白色固体 128 mg o 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 11.01 (s, 1Η)， 7.38 (dd, 1Η, / = 1.5， 8.0 Hz), 7.10 (dd, 1H， / = 1.0， 8.0 Hz), 6.80 (t， 1H， / = 8.0 Hz), 5.64 (s， 1H), 4.35 (t， 2H， / = 7.0 Hz), 1.78 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.26〜 1.38 (m， 8H)， 0.89 (t, 3H, / = 7.0 Hz); HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₁₅ H ₂₃ 0 ₄ ⁺ : 267.1591 , found: 267.1590.

化合物 I -4: 2，3-二羟基苯甲酸癸酯

将（154 mg， 1 mmol) 2,3-二羟基苯甲酸， （316 mg， 2 mmol)正癸醇， 10 ml 四氢呋喃置于 25 ml圆底烧瓶中， 冷致 0 °C， 加入 （250 mg， 1.2 mmol) 二环己基碳二亚胺， 室温搅拌 24 h。 用 薄层色谱 （展开剂： 正己浣 /乙酸乙酯， 2/1， V/V) 跟踪反应。 反应停止后， 蒸出溶剂， 残余 物用乙酸乙酯溶解， 过滤， 滤液用 5%柠檬酸溶液、 饱和碳酸氢钠溶液、 水洗， 酯层经无水硫 酸钠干燥， 过滤， 旋蒸浓縮得初产品 440 mg， 硅胶柱层析 （展开剂： 正己浣 /乙酸乙酯， 2/1， V/V)，得白色固体132mg。1HNMR(500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 11.01 (s, 1H), 7.37 (dd, 1Η，/= 1.5， 8.0 Hz), 7.09 (dd, 1H， /= 1.5， 8.0 Hz), 6.80 (t， 1H， /= 8.0 Hz), 5.65 (s， 1H), 4.35 (t， 2H， /= 7.0 Hz), 1.78 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.27〜 1.35 (m， 12H), 0.88 (t, 3H, / = 7.0 Hz); ¹³ C NMR (125 MHz, CDCI3) δ: 170.8, 148.9， 145.0， 120.5, 120.0, 119.6， 119.1， 65.7, 31.9, 29.5, 29.3, 29.2, 28.5, 27.6, 25.9, 22.7, 14.1 ppm; IR (KBr) v: 3478, 2926, 2885, 1667, 1469, 1309, 1267, 1067, 753 cm" ¹ ; HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₁₇ H ₂₇ 0 ₄ ⁺ : 295.1904, found: 295.1910.

化合物 I -5: 2，3-二羟基苯甲酸十二烷酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为： (154 mg, 1 mmol) 2,3-二羟基苯甲酸、 （372 mg， 2 mmol) 十二烷醇， （250 mg， 1.2 mmol) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 180mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 11.01 (s, 1Η)， 7.38 (dd, 1Η，/= 1.5， 8.0 Hz), 7.10 (dd, 1Η，/= 1.0， 8.0 Hz), 6.80 (t， 1H， /= 8.0 Hz), 5.64 (s， 1H), 4.35 (t， 2H， /= 6.5 Hz), 1.78 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.26〜 1.35 (m， 16H), 0.88 (t， 3H， /= 7.0 Hz); HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₁₉ H ₃₁ 0 ₄ ⁺ : 323.2217, found: 323.2236.

化合物 I -6: 2，3-二羟基苯甲酸十四烷酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为： ( 154 mg, 1 mmol) 2,3-二羟基苯甲酸、 （428 mg, 2 mmol) 十四烷醇， （250 mg， 1.2 mmol) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 150mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 11.01 (s, 1Η)， 7.37 (dd, 1Η，/= 1.5， 8.5 Hz), 7.10 (dd, 1Η，/= 1.0， 8.0 Hz), 6.80 (t， 1H， /= 8.0 Hz), 5.63 (s， 1H), 4.35 (t， 2H， /= 6.5 Hz), 1.78 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.26〜 1.35 (m， 20H), 0.88 (t， 3H, /= 7.0 Hz); ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 170.4, 148.9， 145.0， 120.5, 119.6, 119.1， 112.6, 65.7, 31.9, 29.7〜 29.6, 29.5, 29.4, 29.2, 28.5, 25.9, 22.7, 14.1 ppm; IR (KBr) v: 3485, 2917, 2849, 1669, 1467, 1310, 1267, 1157, 1067, 759 cm" ¹ ; HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₂₁ H ₃₅ 0 ₄ ⁺ : 351.2530, found: 351.2536.

化合物 I -7: 2，3-二羟基苯甲酸十六烷酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为： (154 mg, 1 mmol) 2,3-二羟基苯甲酸、 （484 mg， 2 mmol) 十六烷醇， （250 mg， 1.2 mmol) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 178 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 11.01 (s, 1Η)， 7.37 (dd, 1Η，/= 1.5， 8.0 Hz), 7.10 (dd, 1Η，/= 1.0， 8.0 Hz), 6.80 (t， 1H， /= 8.0 Hz), 5.65 (s， 1H), 4.35 (t， 2H， /= 6.5 Hz), 1.78 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.25〜 1.35 (m， 24H), 0.88 (t， 3H， /= 7.0 Hz); HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₂₃ H ₃₉ 0 ₄ ⁺ : 379.2843, found: 379.2848.

化合物 I -8: 2，3-二羟基苯甲酸十八烷酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为： (154 mg, 1 mmol) 2,3-二羟基苯甲酸、 （540 mg， 2 mmol) 十八烷醇， （250 mg， 1.2 mmol) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 170mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 11.01 (s, 1Η)， 7.37 (dd, 1Η，/= 1.5， 8.0 Hz), 7.10 (dd, 1Η，/= 1.0， 8.0 Hz), 6.80 (t， 1H， /= 8.0 Hz), 5.63 (s， 1H), 4.35 (t， 2H， /= 6.5 Hz), 1.78 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.25〜 1.35 (m， 28H), 0.88 (t， 3H, /= 7.0 Hz); ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 170.4, 148.9， 145.1, 120.5, 119.6, 119.1， 112.7, 65.7, 31.9, 29.7〜 29.6, 29.5, 29.4, 29.2, 28.5, 25.9, 22.7, 14.1 ppm; IR (KBr) v: 3473, 2917, 2850, 1665, 1467, 1266, 1159, 1064, 799, 762 cm— ¹ ; HRMS: mJz [M+H]+ calcd for C ₂₅ H ₄₃ 0 ₄ ⁺ : 407.3156, found: 407.3192.

化合物 I -9: 2，3-二羟基苯甲酸二十烷酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为： ( 154 mg， 1 mmol) 2,3-二羟基苯甲酸、 （896 mg， 3 mmol) 二十烷醇， （206 mg， 1 mmol) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 104 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 11.00 (s， 1Η)， 7.37 (dd， 1Η，/ = 1.5， 8.0 Hz), 7.10 (dd， 1Η，/ = 0.5， 8.0 Hz), 6.80 (t， 1H， / = 8.0 Hz), 5.63 (s， 1H), 4.34 (t， 2H， / = 6.5 Hz), 1.78 (m， 2H), 1.43 (m， 2H), 1.25〜 1.35 (m， 32H), 0.88 (t， 3H, / = 7.0 Hz); ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 170.4, 148.9， 145.0， 120.5, 119.6, 119.1， 112.7, 65.7, 31.9, 29.7〜 29.6, 29.5, 29.4, 29.2, 28.5, 25.9, 22.7, 14.1 ppm; IR (KBr) v: 3403, 2919, 2850, 1675, 1467, 1313, 1254, 1159, 1067, 752 cm— ¹ ; HRMS: mJz [M+H]+ calcd for C ₂₇ H ₄₇ 0 ₄ ⁺ : 435.3469, found: 435.3489.

化合物 I -10: 2，3-二羟基苯甲酸二十二烷酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为： ( 154 mg， 1 mmol) 2,3-二羟基苯甲酸、 （653 mg， 2 mmol) 二十二烷醇，（250 mg， 1.2 mmol)二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃，获得白色固体 102 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 11.01 (s, 1H)， 7.37 (dd， 1Η，/ = 1.5， 8.0 Hz), 7.10 (dd， 1Η，/ = 1.0， 8.0 Hz), 6.80 (t， 1H， / = 8.0 Hz), 5.63 (s， 1H), 4.34 (t， 2H， / = 6.5 Hz), 1.78 (m， 2H), 1.43 (m， 2H), 1.25〜 1.35 (m， 36H), 0.88 (t， 3H, / = 7.0 Hz); ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 170.4, 148.9， 145.1 , 120.5, 119.6, 119.1， 112.7, 65.7, 31.9, 29.7〜 29.6, 29.5, 29.4, 29.2, 28.5, 25.9, 22.7, 14.1 ppm; IR (KBr) v: 3397, 2918, 2849, 1675, 1469, 1312, 1256, 1158, 1065, 750 cm" ¹ ; HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₂₉ H ₅₁ 0 ₄ ⁺ : 463.3782, found: 463.3790.

化合物 I -11 : 2，3-二羟基苯甲酸三十烷酯

合成方法同化合物 I -4， 反应投料为： （154 mg， l mmol) 2，3-二羟基苯甲酸、 （ 1.32 g， 3 mmol) 三十烷醇， （250 mg， 1.2 mmol ) 二环己基碳二亚胺， 20 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 75 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 11.00 (s, 1H)， 7.37 (dd， 1Η，/ = 1.5， 8.5 Hz), 7.10 (dd， 1Η，/ = 1.0， 8.0 Hz), 6.80 (t， 1H， / = 8.0 Hz), 5.63 (s， 1H), 4.34 (t， 2H， / = 6.5 Hz), 1.77 (m， 2H), 1.45 (m， 2H), 1.25〜 1.35 (m， 52H), 0.88 (t， 3H, / = 7.0 Hz); ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 164.5, 149.4, 145.0， 120.5, 119.6， 119.1， 112.6, 65.7, 34.9, 31.9, 29.7〜 29.5, 29.4, 29.2, 28.5, 25.9, 25.4, 24.7, 22.7, 14.1 ppm; IR (KBr) v: 3484, 2920, 2848, 1665, 1468， 1313, 1262, 1162, 1076, 801 cm— ¹ ; MS (m z): 575 [M] ⁺ .

化合物 I -12: 2，6-二羟基苯甲酸十四烷酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为： ( 154 mg， 1 mmol) 2,6-二羟基苯甲酸、 （428 mg， 2 mmol) 十四烷醇， （250 mg， 1.2 mmol ) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 66 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 9.79 (s， 2H), 7.32 (t， 1H, J = 8.5 Hz), 6.48 (d， 2H, J = 8.5 Hz), 4.35 (t， 2H， / = 6.5 Hz), 1.78 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.26〜 1.35 (m， 20H), 0.88 (t， 3H， / = 7.0 Hz); ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 169.8， 149.3, 145.4， 160.9， 136.5, 108.2, 100.1， 66.7, 53.4, 31.9, 29.6〜 29.7, 29.5, 29.4, 29.3, 29.1 , 28.5, 25.9, 22.7, 14.1 ppm; IR (KBr) v: 3472, 2919, 2849, 1669， 1630, 1576, 1465， 1327, 1293, 1156, 1067, 782 cm" ¹ ; HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₂₁ H ₃₅ 0 ₄ ⁺ : 351.2530, found: 351.2516.

化合物 I -13 : 2，6-二羟基苯甲酸二十烷酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为： ( 154 mg, 1 mmol) 2,6-二羟基苯甲酸、 （597 mg， 2 mmol) 二十烷醇， （250 mg， 1.2 mmol) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 104 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 9.79 (s， 2Η), 7.31 (t， 1H， / = 8.5 Hz), 6.48 (d， 2H， / = 8.5 Hz), 4.50 (t， 2H， / = 6.5 Hz), 1.83 (m， 2H), 1.43 (m， 2H), 1.25〜 1.35 (m， 32H), 0.88 (t， 3H, / = 7.0 Hz); MS (m/z): 434 [M] ⁺ .

化合物 I -14: 2，4-二羟基苯甲酸十四烷酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为： ( 154 mg, 1 mmol) 2,4-二羟基苯甲酸、 （428 mg, 2 mmol) 十四烷醇， （250 mg， 1.2 mmol) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 158 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 11.06 (s， 1H), 7.74 (d， / = 8.5 Hz, 1H), 7.54 (m， 1H), 6.38 (m， 1H)， 5.39 (s， 1H)， 4.30 (t， / = 6.5 Hz, 2H), 1.76 (m， 2H), 1.41 (m， 2H), 1.25〜 1.35 (m， 20H), 0.88 (t， / = 7.0 Hz, 3H) ppm; HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₂₁ H ₃₅ 0 ₄ ⁺ : 351.2530, found: 351.2557.

化合物 I -15 : 3，4-二羟基苯甲酸十四烷酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为： ( 154 mg, 1 mmol) 2,4-二羟基苯甲酸、 （428 mg, 2 mmol) 十四烷醇， （250 mg， 1.2 mmol)二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 180 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.59 (d， J = 2.0 Hz, 1H), 7.57 (dd， J = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 6.91 (d， J = 8.5 Hz, 1H), 4.26 (t， / = 6.5 Hz, 2H), 1.73 (m， 2H), 1.42 (m， 2H), 1.25〜 1.37 (m， 20H), 0.89 (t， / = 7.0 Hz, 3H) ppm; HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₂₁ H ₃₅ 0 ₄ ⁺ : 351.2530, found: 351.2551.

化合物 I -16: 3，4，5-三羟基苯甲酸十四烷酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为： ( 170 mg, 1 mmol)3，4，5-三羟基苯甲酸、（428 mg, 2 mmol) 十四烷醇， （250 mg， 1.2 mmol)二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 176 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.24 (s, 2H), 4.24 (t， / = 6.5 Hz, 2H), 1.72 (m， 2H), 1.41 (m， 2H), 1.25〜 1.35 (m， 20H), 0.88 (t， J = 7.0 Hz, 3H) ppm; HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₂₁ H ₃₅ 0 ₅ ⁺ : 367.2479, found: 367.2473.

化合物 I -17 : 2-羟基苯甲酸十四烷酯

合成方法同化合物 I -4， 反应投料为： （ 138 mg, 1 mmol) 2-羟基苯甲酸、 （428 mg, 2 mmol) 十四烷醇， （250 mg， 1.2 mmol) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 164 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 10.88 (s, 1H), 7.37 (m, 1H), 7.10 (m, 1H), 6.91 (m, 1H), 6.80 (t, 1H, J = 8.0 Hz), 4.35 (t， 2H， / = 6.5 Hz), 1.78 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.26〜 1.35 (m， 20H), 0.88 (t， 3H, / = 7.0 Hz); HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₂₁ H ₃₅ 0 ₃ ⁺ : 335.2581 , found: 335.2564.

化合物 I -18 : 3-羟基苯甲酸十四烷酯

合成方法同化合物 I -4， 反应投料为： （ 138 mg, 1 mmol) 3-羟基苯甲酸、 （428 mg, 2 mmol) 十四烷醇， （250 mg， 1.2 mmol) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 174 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.57 (m， 1H)， 7.37 (m， 1H)， 7.25 (m， 1H)， 7.01 (m， 1H)， 5. 67 (s, 1H), 4.35 (t, 2H, / = 6.5 Hz), 1.78 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.26〜 1.35 (m， 20H), 0.88 (t, 3H, / = 7.0

Hz); MS (m/z): 334 [M] ⁺ .

化合物 I -19: 2，3-二甲氧基苯甲酸十四烷酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为：（182 mg， l mmol)2，3-二甲氧基苯甲酸、（428 mg，2 mmol) 十四烷醇， （250 mg， 1.2 mmol) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 162 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.08 (t， 1Η， / = 7.5 Hz), 6.95 (dd， 1H， / = 1.5， 8.0 Hz), 6.79 (dd， 1H _: / = 1.0， 7.0 Hz), 4.35 (t， 2H, J = 6.5 Hz), 3.92 (s， 3H), 3.88 (s， 3H), 1.78 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.26〜 1.35 (m， 20H), 0.88 (t， 3H， / = 7.0 Hz); ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 166.4， 153.5, 148.9， 126.6, 123.8, 122.2, 115.6， 65.3, 61.5， 56.0， 31.9, 29.7〜 29.6, 29.5, 29.3, 29.2, 28.7, 26.0, 22.7, 14.1 ppm; IR (KBr) v: 2926, 2855, 1726, 1587, 1474, 1266, 1148， 1062, 754 cm" ¹ ; HRMS: m/z [ +H] ⁺ calcd for C ₂₃ H ₃₉ 0 ₄ ⁺ : 379.2843, found: 379.2865.

化合物 I -20: 2，3-二甲氧基苯甲酸十八烷酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为：（182 mg， l mmol)2，3-二甲氧基苯甲酸、（540 mg，2 mmol) 十八烷醇， （250 mg， 1.2 mmol) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 170 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.06 (t， 1H， / = 8.0 Hz), 6.93 (dd， 1H， / = 1.5， 8.0 Hz), 6.77 (dd， 1H _: / = 1.5， 8.0 Hz), 4.35 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 3.92 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 1.78 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.25〜 1.35 (m， 28H), 0.88 (t， 3H， / = 7.0 Hz); MS (m z): 434 [M]+.

化合物 I -21 : 2-羟基 -3-甲氧基苯甲酸十四烷酯

合成方法同化合物 I -4， 反应投料为： （168 mg， 1 mmol) 2-羟基 -3-甲氧基苯甲酸、 428 mg， 2 mmol) 十四烷醇， （250 mg， 1.2 mmol) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得黄色液体 109 mgo 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 11.12 (s, 1H), 7.44 (dd, / = 1.5, 8.5 Hz, 1H), 7.04 (dd, 1H, J = 1.5， 8.0 Hz, 1H)， 6.83 (t， / = 8.0 Hz, 1H)， 4.34 (t， / = 6.5 Hz, 2H), 3.91 (s， 3H), 1.77 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.25〜 1.36 (m， 20H), 0.88 (t， J = 7.0 Hz, 3H) ppm; ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 170.5, 152.1 , 148.5， 121.0, 118.4， 116.4， 112.9, 65.6， 56.2, 31.9, 29.7〜 29.6, 29.5, 29.3, 29.2, 28.5, 25.9, 22.7, 14.1 ppm; IR (KBr) v: 3080, 2923, 2849, 1667, 1587, 1466， 1341 , 1242, 1167, 1062, 767 cm ¹ ; HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₂₂ H ₃₇ 0 ₄ ⁺ : 365.2686, found: 365.2654.

化合物 I -22: 2-氯苯甲酸十四烷酯

合成方法同化合物 I -4， 反应投料为： （ 156 mg， 1 mmol) 2-氯苯甲酸、 （428 mg， 2 mmol) 十 四烷醇， （250 mg， 1.2 mmol)二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 150 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.65 (m， 1H)， 7.30 (m， 2H), 7.08 (m， 1H)， 4.35 (t， 2H， / = 6.5 Hz), 1.78 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.26〜 1.35 (m， 20H), 0.88 (t， 3H， / = 7.0 Hz); MS (m z): 352 [M]+.

化合物 I -23 : 2，3-二羟基 -N-十四烷基苯甲酰胺

将 （154 mg， 1 mmol) 2,3-二羟基苯甲酸， （135 mg， 1 mmol) 1-羟基苯并三唑水合物， （253 mg， 1.1 mmol)十四烷胺， 10 ml 四氢呋喃置于 25 ml圆底烧瓶中， 冷致 0 °C， 加入 （250 mg， 1.2 mmol)二环己基碳二亚胺，室温搅拌 4 h。用薄层色谱（展开剂： 正己浣 /乙酸乙酯， 3/1， V/V) 跟踪反应。 反应停止后， 蒸出溶剂， 残余物用乙酸乙酯溶解， 过滤， 滤液用饱和碳酸氢钠溶 液、 水洗， 酯层经无水硫酸钠干燥， 过滤， 旋蒸浓縮得初产品 440 mg， 硅胶柱层析， 得白色 固体265 mg。 ¹ l·^NMR(500MHz， CDC1 ₃ ) δ: 12.81 (s, 1H), 7.04 (dd， /= 1.0， 8.0 Hz, 1H), 6.87 (dd， /= 1.0， 8.0 Hz, 1H), 6.76 (t， /= 8.0 Hz, 1H), 6.30 (s， 1H), 5.78 (s， 1H), 3.44 (m， 2H), 1.62 (m， 2H), 1.25〜 1.40 (m， 22H), 0.88 (t, / = 7.5 Hz, 3H) ppm; ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 169.9， 149.1, 146.0, 118.5， 117.9, 115.7, 114.0， 39.7, 31.9, 29.7〜 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 29.2, 26.9, 22.7, 14.1 ppm; IR (KBr) v: 3482, 3389, 3268, 2920, 2850, 1639, 1586， 1546， 1462, 1338, 1270, 1236, 1176, 1077, 723, 746 cm" ¹ ; HRMS: m/z [M+Na]+ calcd for C ₂₁ H ₃₅ N0 ₃ Na ⁺ : 372.2509, found: 372.2499. 化合物 I -24: 2，3-二羟基 -N-辛基苯甲酰胺

合成方法同化合物 I -23，反应投料为：（154 mg， 1 mmol)2，3-二羟基苯甲酸、（ 185 mg， 1 mmol) 辛胺， （135 mg， 1 mmol) 1-羟基苯并三唑水合物， （250 mg， 1.2 mmol) 二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 158 mgo 1HNMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 12.81 (s, 1Η), 7.04 (d， / = 8.0 Hz, 1H), 6.86 (d, /= 8.5 Hz, 1H), 6.76 (t, /= 8.0 Hz, 1H), 6.31 (s, 1H), 5.78 (s, 1H), 3.44 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.63 (m， 2H), 1.27〜 1.39 (m， 10H), 0.88 (t， /= 7.0 Hz, 3H); MS (m/z): 265 [M]+. 化合物 I -25: 2，3-二羟基 -N-十二烷基苯甲酰胺

合成方法同化合物 I -23，反应投料为： ( 154 mg， 1 mmol)2，3-二羟基苯甲酸、（428 mg， 2 mmol) 十二烷胺， (135 mg, 1 mmol) 1-羟基苯并三唑水合物， （250 mg， 1.2 mmol)二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 158 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 12.81 (s, 1H, Ph2-OH), 7.04 (dd， /= 1.0， 8.0 Hz, 1H), 6.87 (dd， /= 1.0， 8.5 Hz, 1H), 6.75 (t， /= 8.0 Hz, 1H), 6.32 (s， 1H)， 5.80 (s, 1H), 3.44 (q, /= 7.0 Hz, 2H), 1.62 (m, 2H), 1.25〜 1.40 (m, 10H), 0.88 (t, / = 7.0 Hz, 3H); MS (m/z): 321 [M] ⁺ .

化合物 I -26: 2，3-二羟基 -N-十六烷基苯甲酰胺

合成方法同化合物 I -23，反应投料为：（154 mg, 1 mmol)2，3-二羟基苯甲酸、（241 mg, 1 mmol) 十六烷胺， (135 mg, 1 mmol) 1-羟基苯并三唑水合物， （250 mg， 1.2 mmol)二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 308 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 12.81 (s, 1H, Ph2-OH), 7.04 (dd， /= 1.0， 8.0 Hz, 1H), 6.86 (dd， /= 1.0， 8.5 Hz, 1H), 6.75 (t， /= 8.0 Hz, 1H), 6.30 (s， 1H)， 5.77 (s, 1H), 3.44 (q, J= 6.5 Hz, 2H), 1.61 (m， 2H), 1.25〜 1.40 (m， 10H), 0.88 (t, / = 7.0 Hz, 3H); MS (m/z): 377 [M] ⁺ .

化合物 I -27: 2，3-二羟基 -N-十八烷基苯甲酰胺

合成方法同化合物 I -23，反应投料为：（154 mg, 1 mmol)2，3-二羟基苯甲酸、（269 mg， 1 mmol) 十八烷胺， (135 mg, 1 mmol) 1-羟基苯并三唑水合物， （250 mg， 1.2 mmol)二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 340mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 12.81 (s, 1H, Ph2-OH), 7.04 (dd， J=1.0, 8.0 Hz, 1H), 6.87 (dd， /= 1.0， 8.0 Hz, 1H), 6.76 (t， /= 8.0 Hz, 1H), 6.30 (s， 1H)， 5.77 (s, 1H), 3.44 (q, /= 6.5 Hz, 2H), 1.63 (m， 2H), 1.25〜 1.38 (m， 30H), 0.88 (t, / = 7.5 Hz, 3H); MS (m/z): 405 [M] ⁺ .

化合物 I -28: 2，3-二甲氧基 -N-十四烷基苯甲酰胺

合成方法同化合物 I -23， 反应投料为： （182 mg， 1 mmol) 2，3-二甲氧基苯甲酸、 （230mg，l mmol)十四烷胺， （135 mg， 1 mmol) 1-羟基苯并三唑水合物， （250 mg， 1.2mmol)二环己基碳 二亚胺， 15 ml 四氢呋喃，获得白色固体 305 mg。1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.97 (s, 1Η， ΝΗ)， 7.68 (dd， /= 1.0， 8.0 Hz, 1Η)， 7.14 (t， /= 8.0 Hz, 1H)， 7.02 (dd， / = 1.0， 8.0 Hz, 1H); MS (mz): 377 [M] ⁺ .

化合物 I -29: 3，4-二羟基 -N-十四烷基苯甲酰胺

合成方法同化合物 I -23，反应投料为：（154 mg， 1 mmol)2，3-二羟基苯甲酸、（230 mg， 1 mmol) 十四烷胺，（135 mg， 1 mmol) 1-羟基苯并三唑水合物， （250 mg， 1.2 mmol)二环己基碳二亚胺， 15 ml 四氢呋喃，获得白色固体 297 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.66 (d, / = 2.0 Hz, 1H), 7.09 (dd， /= 2.0， 8.0 Hz, 1H), 6.88 (d， /= 8.0 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 3.43 (m， 2H), 1.93(m, 2H), 1.25〜 1.39 (m， 22H), 0.88 (t, / = 7.0 Hz, 3H) ppm; ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 167.9, 148.0, 144.1, 118.8， 115.5， 115.7, 114.0， 40.3, 31.9, 29.7〜 29.6， 29.5, 29.3, 27.0, 22.7, 14.1 ppm; IR (KBr) v: 3494, 3382, 3182, 2921, 2851, 1587, 1517, 1467, 1439, 1294, 1169, 1106, 769 cm— ¹ ; HRMS: mJz [M+H]+ calcd for C ₂₁ H ₃₆ N0 ₃ ⁺ : 350.2690, found: 350.2683.

化合物 I -30: 3，4，5-三羟基 -N-十四烷基苯甲酰胺

合成方法同化合物 I -23， 反应投料为： （170 mg， 1 mmol) 3，4，5-三羟基苯甲酸、 （230 mg， 1 mmol)十四烷胺， （135 mg， 1 mmol) 1-羟基苯并三唑水合物， （250 mg， 1.2 mmol)二环己基碳 二亚胺， 15 ml 四氢呋喃，获得白色固体 314 mg。 1HNMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) S: 7.34〜 7.37 (m， 3H), 3.65 (t， /= 8.0 Hz, 2H), 2.26 (s， 3H), 2.24 (s， 3H), 1.52 (m， 2H), 1.21〜 1.31 (m， 22H), 0.88 (t， /= 7.0 Hz, 3H); MS (m/z): 365 [M] ⁺ .

化合物 I -31: N-(3，4-二甲氧基苯基)十四 (浣)酰胺

合成方法同化合物 I -23，反应投料为：（312mg，2mmol)3，4-二甲氧基� ��胺、（465 mg， 2 mmol) 十四烷酸， (135 mg， 1 mmol) 1-羟基苯并三唑水合物， （450 mg， 2.2 mmol)二环己基碳二亚胺， 30 ml 四氢呋喃， 获得白色固体 560mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.40 (d， /= 2.0 Hz， 1H)， 7.05 (s, 1H), 6.82 (dd, / = 2.0, 8.5 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 2.33 (t， /= 7.5 Hz, 2H), 1.72 (m， 2H), 1.25〜 1.40 (m， 20H), 0.88 (t， J= 7.0 Hz, 3H) ppm; MS (m/z): 363 [M]+. 化合物 I -32: N-(3，4-二羟苯基)十四 (浣)酰胺

将 (150 mg， 0.41 mmol)化合物 1-31溶于 10 ml二氯甲烷， 在零度下滴加三溴化硼 (0.3 ml, 3 mmol), 滴加完毕升至室温， 搅拌过夜。 反应结束后， 在零度下用甲醇淬灭， 减压蒸出溶剂， 残余物乙酸乙酯萃取，水洗涤，无水硫酸钠干 燥。硅胶柱层析 (展开剂：石油醚 /乙酸乙酯， 8/1， V/V)得白色固体 118 mgo 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.29 (d, / = 2.0 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H)， 6.79 (d, /= 8.5 Hz, 1H), 6.40 (dd, /= 2.5, 8.5 Hz, 1H), 5.30 (s, 2H), 2.38 (t, / = 7.5 Hz, 2H), 1.74 (m， 2H), 1.26〜 1.40 (m， 20H), 0.88 (t， /= 7.0 Hz, 3H) ppm; MS (mz): 335 [M]+.

化合物 I -33: l-(3，4-二甲氧基苯基)十四烷 -1-酮

将十四烷酸（2.28g， 0.01 mol)溶于 30 ml 氯化亚砜,在氮气下回流过夜， 过量的 S0C1 ₂ 减压蒸 馏除尽， 得十四烷基酰氯。 1，2-二甲氧基苯 2 ml溶于 20 ml二硫化碳， 搅拌下分批加入 A1C1 ₃ (1.4 g, 10 mmol) 加完之后再搅拌 15分钟， 滴加酰氯， 继续搅拌 4小时。 反应完毕， 将反应 液倒入 30 ml冰水中直到红棕色消失。 乙酸乙酯萃取， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓縮。 硅胶 柱层析 (展开剂： 石油醚 /乙酸乙酯， 10/1， V/V)得白色固体 2.6 g。 1H NMR (500 MHz，CDCl ₃ ) δ: 7.58 (dd， J = 2.0, 8.5 Hz, 1H)， 7.53 (d, J = 2.0 Hz, 1H)， 6.88 (d, J = 8.5 Hz, 1H)， 6.92 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.95 (s， 3H), 3.94 (s， 3H), 2.92 (t, / = 7.5 Hz, 2H), 1.72 (m， 2H), 1.25〜 1.40 (m， 20H), 0.88 (t， / = 6.5 Hz, 3H) ppm; HRMS: m/z [M+H]+ calcd for C ₂₂ H ₃₇ 0 ₃ ⁺ : 349.2737, found: 349.2715. 化合物 I -34: l-(3，4-二羟苯基)十四烷 -1-酮

将 (348mg， 1 mmol)化合物 1-33溶于 20 ml二氯甲烷，在零度下滴加三溴化硼 (0.6 ml, 6 mmol), 滴加完毕升至室温， 搅拌过夜。 反应结束后， 在零度下用甲醇淬灭， 减压蒸出溶剂， 残余物 乙酸乙酯萃取， 水洗涤， 无水硫酸钠干燥。硅胶柱层析 (展开剂： 石油醚 /乙酸乙酯， 8/1， V/V) 得白色固体 65mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.67 (d， / = 2.0 Hz, 1H), 7.50 (dd， / = 2.0， 8.5 Hz, 1H), 6.92 (d， / = 8.5 Hz, 1H), 6.17 (s， 1H), 5.87 (s， 1H), 2.90 (t, / = 7.5 Hz, 2H), 1.71 (m， 2H), 1.25〜 1.37 (m， 20H), 0.88 (t， J = 6.5 Hz, 3H) ppm; HRMS: m/z [ +H] ⁺ calcd for C ₂₀ H ₃₃ O ₃ ⁺ : 321.2424, found: 321.2434.

化合物 I -35 : 3- (十四烷氧基羰基) -1，2-苯基双乙酸盐

将 (140 mg， 0.4 mmol)化合物 I -6， (49 mg， 0.4 mmol) 4-二甲基氨基吡啶 DMAP溶于 4ml干燥 的吡啶中，搅拌下滴加 1ml醋酸酐，室温搅拌 5h。反应完毕，用乙酸乙酯萃取，依次用 1M HC1, 水洗涤， 无水硫酸钠干燥。 硅胶柱层析 （展开剂： 正己浣 /乙酸乙酯， 5/1， V/V ) 得白色固体 130mgo 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.90 (dd， / = 1.0， 7.5 Hz, 1H), 7.37 (dd， / = 1.0， 8.0 Hz, 1H)， 7.32 (t， / = 8.0 Hz, 1H), 4.26 (t， / = 6.5 Hz, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 1.72 (m， 2H), 1.40 (m， 2H), 1.26〜 1.33 (m， 20H), 0.88 (t, / = 7.0 Hz, 3H); ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 168.4, 168.2, 163.9, 143.5, 142.6, 128.9, 127.6, 126.0, 125.2, 65.6， 31.9, 29.6〜 29.7, 29.5, 29.4， 28.6, 25.9, 22.7, 20.6, 14.1 ; IR (KBr) v: 2919, 2850, 1775, 1710, 1463, 1375, 1306, 1294, 1197, 1106, 761 cm— ¹ ; HRMS: m/z [ +H] ⁺ calcd for C ₂₅ H ₃₉ 0 ₆ ⁺ : 435.2741 , found: 435.2752.

化合物 I -36: 3- (十四烷基甲酰基) -1，2-苯基双乙酸盐

合成方法同化合物 1-35， 反应投料为： （100 mg， 0.29 mmol)化合物 1 -23、 (37 mg， 0.3 mmol)DMAP, (0.6 ml)醋酸酐， 2 ml干燥吡啶， 获得淡黄色液体 1 10 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.34〜 7.37 (m， 3H), 3.65 (t， / = 8.0 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.52 (m， 2H), 1.21〜 1.31 (m， 22H), 0.88 (t， / = 7.0 Hz, 3H); MS (m/z): 434 [M] ⁺ .

化合物 I -37 : 5- (十四烷氧基羰基)苯 -1，2，3-三乙酸盐

合成方法同化合物 I -35， 反应投料为： （28 mg， 0.076 mmol)化合物 I -17、 (12 mg， 0.1 mmol)DMAP, (0.3 ml)醋酸酐， 1 ml干燥吡啶，获得白色固体 29 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.80 (s， 3Η), 4.31 (t， / = 6.5 Hz, 2H), 2.32 (s， 9H)， 1.75 (m， 2H), 1.21〜 1.31 (m， 22H), 0.88 (t， J = 7.0 Hz, 3H); MS (m/z): 492 [M]+.

化合物 I -38 : 5- (十四烷基甲酰基)苯 -1，2，3-三乙酸盐

合成方法同化合物 I -35， 反应投料为： 化合物 I -31(100 mg， 0.27 mmol) (37 mg， 0.3 mmol) DMAP, 醋酸酐 (0.6 ml)， 2 ml干燥吡啶， 获得白色固体 1 13 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.53 (s, 2H), 6.04 (s, 1H), 3.42 (q, / = 6.5 Hz, 2H), 2.32 (s, 9H)， 1.59 (m， 2H), 1.27〜 1.39 (m， 22H), 0.89 (t， / = 7.0 Hz, 3H); MS (m z): 491 [M] ⁺ .

化合物 I -39: 1，2-次苯基二十酸酯

合成方法同化合物 I -4，反应投料为：邻二苯酚（110 mg， 1 mmol)、二十烷酸（310 mg， 1 mmol) , 二环己基碳二亚胺（250 mg， 1.2 mmol) , 15 ml 四氢呋喃，获得白色固体 391 mg。 1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 7.13〜 7.16 (t， 1H， / = 7.5 Hz), 7.09〜 7.11 (d， 1H， / = 7.5 Hz), 7.02〜 7.04 (d， 1H, J = 1.5 Hz), 6.92〜 6.95 (t， 1H， / = 7.5 Hz), 2.63 (t， 2H， / = 6.5 Hz), 2.42 (t， 2H， / = 6.5 Hz), 1.96〜 1.99 (m， 12H), 1.17〜 1.42 (m， 60H), 0.89 (bs, 6H); MS (m z): 699 [M]+.

化合物 I -40: 2，3-二羟苯基十四 (烷)酸盐

合成方法同化合物 I -4，反应投料为： 邻三苯酚 (126 mg， 1 mmol)、十四烷酸 (456 mg， 2 mmol), 二环己基碳二亚胺（250 mg， 1.2 mmol) , 15 ml 四氢呋喃，获得白色固体 120 mg。 1H NMR (500 MHz, CDCI3) δ: 6.82 (m， 1H), 6.61 (dd， J=3.0, 7.0 Hz, 1H), 6.57 (d， / = 8.0 Hz, 1H), 5.74 (s, 1H)， 5.30 (s， 1H), 2.64 (m， 2H), 1.77 (m， 2H), 1.41 (m， 2H), 1.26〜 1.35 (m， 18H), 0.88 (t， / = 6.5 Hz, 3H) ppm; ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 173.2, 148.0， 146.9， 126.8, 121.1 , 113.4, 112.8, 109.7, 34.4, 34.1 , 31.9, 29.6〜 29.7， 29.4, 29.3, 29.2, 29.0, 24.9, 22.7, 14.1 ppm; IR (KBr) v: 3551 , 3341 , 2920, 2848, 1735, 1604, 1473, 1413, 1273, 1142 cm" ¹ ; HRMS: mJz [M+H]+ calcd for C ₂₀ H ₃₃ O ₄ ⁺ : 337.2373, found: 337.2361.

化合物 I -41 : 3- (十四烷氧)苯 -1，2-二醇

将邻三酚（200 mg， 1.58 mmol)、十四醇（339 mg， 1.58 mmol)、三苯基磷（414 mg， 1.58 mmol) 加入到无水四氢呋喃中，冰浴下滴加偶氮二甲 酸二乙酯（275 mg， 1.58 mmol) ,室温反应过夜， 反应完毕， 减压蒸除溶剂， 浓縮液柱层析 (展开剂： 石油醚 /乙酸乙酯， 20/1， VA ， 得淡红色 固体 220 mg。1H NMR (500 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 6.73 (t， / = 6.5 Hz, 1H)， 6.58 (dd， / = 1.0， 8.0 Hz, 1H)， 6.45 (dd， / = 1.0， 8.5 Hz, 1H), 5.41 (s， 1H), 5.29 (s， 1H), 4.02 (t， / = 6.5 Hz, 2H), 1.80 (m， 2H), 1.44 (m， 2H), 1.26〜 1.36 (m， 20H), 0.88 (t， / = 6.5 Hz, 3H) ppm; ¹³ C NMR (125 MHz, CDC1 ₃ ) δ: 146.4， 144.1 , 132.7, 119.7, 108.6， 104.1， 69.2, 31.9, 29.6〜 29.7， 29.4, 29.3, 26.0, 22.7, 14.1 ppm; IR (KBr) v: 3444, 3373, 2922, 2851 , 1627, 1526, 1471 , 1234, 1178, 1071 , 765, 717 cm— ¹ ; HRMS: mJz [M+H]+ calcd for C ₂ 。H ₃₅ 0 ₃ ⁺ : 323.2581 , found: 323.2560.

实施例 2、 苯甲酸酯衍生物具有神经生长因子的作用

2-1：

研究发现 NGF能阻止或减少神经元的退变， 具有促进神经生长和神经保护作用。 由于 PC 12细胞具有神经细胞的一般特征， 在 NGF的作用下 PC12细胞会停止分裂， 长出突起， 转化成神经元样细胞。因此， 能导致 PC12细胞转化成神经元样细胞的化合物具有预� �及治 疗老年性痴呆等神经退行性疾病的应用价值。

实验操作：

1 ) PC 12细胞的培养： 接 20x l0 ⁴ 个 PC 12细胞于 100 mm的培养皿中， 含 lO ml DMEM培 养基 （其中含 10%马血清、 5%胎牛血清）， 两天后更换一次培养基， 再过三天继代。 先用 PBS将细胞洗两次， 再加入 10 ml PBS于培养皿中， 在 37 °C， 5% C0 ₂ 的培养箱内培养 10 分钟， 吹洗， 转移到 15 ml的一次性离心管， 离心后血球计数板上计数。 24孔细胞培养板 每孔先加入 l ml含血清的 DMEM培养基， 细胞计数后， 每孔接 2><10 ⁴ 个细胞， C0 ₂ 培养箱 培养 24小时后加样。

2)活性测试： 以 DMSO为阴性对照， NGF 40 ng为阳性对照， 将化合物 I配置成不同浓度 的 DMSO溶液。 用 1 ml含 1% DMSO和样品的 DMEM溶液 （不含血清） 将 24孔细胞板 的每孔原培养基取代后，放入 37 V , 5% C0 ₂ 的培养箱中培养。倒置显微镜下每隔 24小时、 连续 6 天观察细胞形态变化， 记录细胞的神经突起分化率 （神经突起长于胞体直径一倍的 细胞数目与视野下总细胞数目的比值)， 每个视野下约 100个细胞， 随机选取 3处， 取平均 值， 并统计作图分析。

) 实验结果：

表 1. 系列化合物 I经 48小时后在最佳浓度 PC 12细胞的神经突起分化率 化合物 最佳浓度 （μΜ) 神经突起分

I -1 10 37

I -2 3 35

I -3 3 73

I -4 1 80

I -5 1 82

I -6(ABG-001) 1 87

I -7 1 82

I -8 3 82

I -9 10 79

I -10 10 70

I -11 30 61

I -12 3 27

I -13 3 25

I -14 1 36

I -15 3 83

I -16 0.3 80

I -17 3 32

I -18 3 28

I -19 10 30

I -20 10 33

I -21 1 32

I -22 3 27 I -23 0.03 61

I -24 0.03 58

I -25 0.1 35

I -26 0.1 50

I -27 0.1 39

-28 0.1 49

-29 1 73

-30 0.3 53

-31 3 30

-32 3 57

-33 1 84

-34 3 15

-35 0.3 71

-36 0.3 68

-37 0.3 70

-38 0.3 65

-39 3 40

-40 3 37

-41 0.3 44

阴性对照 （DMSO) 1% 10

阳性对照 (NGF) 40ng/ml 83

初步药理试验结果显示： 烷基链长度， 苯环上取代基的种类、 位置和个数， 苯环与侧链 的连接方式对 PC 12细胞神经突起活性有重要影响。其中化合物 1-4、 1-5、 I -6 (ABG-001 )、 I -7、 I -8、 I -9、 I -10、 I -15、 I -16经 48小时后在最佳浓度 PC 12细胞的神经突起 分化率与阳性对照 NGF相当或较高， 这些化合物具有进一步研究开发的意义。

图 1是加入化合物 ABG-001, 经 48小时后 PC 12细胞的神经突起分化率随剂量增加的变 化， 图中 C: 1% DMS0为阴性对照； NGF C40ng/ml)为阳性对照， 化合物 ABG-001的浓度单 位 μΜ。

图 2是加入化合物 ABG-001 , 经 48小时后 PC 12 细胞神经突起的显微照片， 图 a， 1% DMSO为阴性对照； 图 b， NGF 40 ng/ml为阳性对照； 图 c， 化合物 ABG-001的浓度为 1 μΜ。 2-2：

1，25(ΟΗ) ₂ 维生素 D3通过活化其受体能诱导神经生长因子（NGF)的 表达。 我们的研究 发现， 与同窝野生型小鼠相比， let-羟化酶敲基因小鼠出现 NGF 的表达降低和海马神经再生 障碍。 补充 l，25(OH) ₂ 维生素 D3或 NGF都能改善 let-羟化酶敲基因小鼠的神经再生。

实验主要材料： 选用 12周龄靶向敲除 let-羟化酶基因小鼠作为成年 NGF缺乏的实验动 物模型。 （本研究室与加拿大 McGill University合作开发） 实验操作： 12周龄 let-羟化酶敲基因小鼠给与 B U腹腔注射。 并在 10天后用 4%多聚甲醛 经左心室灌注固定脑组织， 进行 BrdU免疫染色， 标记新生神经元。 ABG-001溶解于

99.5%乙醇中， 然后用生理盐水稀释进行口服给药。

实验结果 （图 3 ): 与 NGF治疗组 （脑室内给药）相比， ABG-001腹腔给药能有效地改 善 let-羟化酶敲基因小鼠的神经再生功能； 由图 3 (a) 可见， 与野生型小鼠相比 (+/+)相比， let-羟化酶敲基因小鼠 （-/-)海马的神经生长因子 （NGF)表达明显降低； 由图 3 (b) 可见， 与野生型小鼠相比， 羟化酶敲基因小鼠海马新生神经元存活减少。 NGF 治疗 （脑室给药） 能改善羟化酶敲基因小鼠的新生神经元存活。 与 NGF治疗组相比， ABG-001治疗 （腹腔给 药） 能有效地改善 NGF缺乏所致的神经再生障碍。

2-3：

大脑短暂性缺血后第 3天开始在海马齿状回亚颗粒区（SGZ)出现细胞� ��殖增加，第 7-10 天达到高峰， 然后下降。近年的研究发现， 脑缺血诱导的新生神经细胞绝大多数在出生后 1-2 周内死亡。 虽然脑缺血可以激活神经干细胞， 刺激内源性的神经再生，但是前体细胞增殖的 数 量有限，而且调节新生神经细胞迁移、 分化、 存活、 神经元修复和突触形成的因子也不足， 使 脑缺血后内源性神经再生并不能达到自身修复 神经功能缺损的作用。 因此， 如何能减少新生 神经细胞的死亡，促进其向缺血坏死灶迁移， 诱导分化为具有功能性的神经元，发挥内源性 修复 作用已成为目前缺血性脑损伤研究的焦点。 神经干细胞的增殖、迁移、 分化受到许多体内外 环境因素相互作用的调控。 虽然脑缺血后神经再生机制目前仍不清楚， 神经营养因子基因敲 除鼠脑缺血后的神经再生明显减弱， 而脑室内注射神经营养因子可促进干细胞增殖 ，促进新生 神经细胞数量增加。

实验主要材料： Sprague-Dawley(SD)大鼠 （雄性和雌性各 10只）， 体重 200g〜250g， 购自江 苏省实验动物中心。

实验操作： 10%水合氯醛腹腔麻醉， 结扎右侧颈总动脉与颈外动脉， 用动脉夹夹闭颈内 动脉远心端， 将渔线插入颈内动脉远端， 实施大脑中动脉 60分钟阻塞（大脑中动脉阻塞在图 中简称 MCAO), 制备局灶性脑缺血小鼠模型 （用电热毯以保持实验动物肛门温度在 37±0.5 度）。 从脑缺血后 48小时开始进行连续 14天的 ABG-001 (0.5-1.0mg/kg) 腹腔注射。 在脑缺 血后第 3天给与 BrdU注射。 并在脑缺血后 28天用 4%多聚甲醛经左心室灌注固定脑组织， 进行 BrdU免疫染色， 标记新生神经元。

实验结果 （图 4): 脑缺血后 ABG-001给药能促进新生神经元的存活和向脑损� �区纹状 体的迁移， 并易于恢复缺血性脑损伤后的神经系统功能。

从理论上分析及初步的实验结果说明所有实施 例 1中的其它化合物也有与 ABG-001相 似的效果。

实施例 3 ABG-001急性大剂量口服、 长期口服和腹腔给药未出现毒性反应

实验主要材料： ICR小鼠 （体重 22g〜25g， 雄性和雌性各 5只， 购自浙江大学实验动物 中心。

实验操作： ABG-001较难溶于水。 （1 ) 将 ABG-001溶解于 99.5%乙醇中， 然后添加 1% 吐温 80， 用生理盐水稀释到使用浓度 （乙醇的最终浓度小于 2%)。 经口服药 5g/kg。 （2) 腹 腔途径给药，将 ABG-001溶解于二甲亚砜（DMSO),然后用生理盐水� �释到使用浓度（DMSO 最终浓度在 1%以下）；

急性中毒试验： 将 4周龄 ICR雄性小鼠 20只， 雌雄各半， 随机分为对照组， 5g/kg处理 组。 将溶于 l%Tween-80的化合物 ABG-001经口服药 5g/kg， 连续观察一周， 每天观察动物 的精神状态， 测定体重及摄食量。 化合物投入 10分钟后小鼠肢体出现卷縮， 运动量减少。 1 小时后，全部恢复正常。一周内小鼠无死亡情 况，摄食量无明显变化， 但体重变化明显减少。 心， 肝， 脾， 肾及白色脂肪组织重量及眼观无显著性差异。

实验结果：

( 1 )表 2显示， 与生理盐水对照组相比， ABG-001处理组动物没有出现体重增加 /减少 （包 括各脏器重量） ， 也没有出现呼吸 （50〜60次 /分钟）、 心率 （305〜400次 /分钟）、 平 均动脉压 （210mmHg) 的异常， 以及昏睡、 狂躁、 运动行为异常等现象。

表 2: ICR小鼠血液生化指标 （每组早 =10， =10; ABG-001=5g/kg灌胃)

|

GLO

TP ALB ^

B ALT AST TBIL DBIL CHE

组别 (g/L (g/L A/G

(g/L (U/L) (U/L) (umol/L) (umol/L) (U/L) ) )

)

56.86 40.20 16.66 2.42 31.00

早对 1.62 0.82 9350.80 士 士 士 士 士

昭 ±0.34 ± 0.09 ± 156.32

0.43 0.37 0.32 0.06 2.28

57.54 39.00 18.54 2.12 33.40

早 111.40 1.62 0.96 10075.40 士 士 士 士 士

5g/kg ± 15.80 ± 0.16 ± 0.08 ±411.98

1.24 1.30 0.98 0.14 1.44

57.40 36.50 20.90 1.75 37.75

寸 88.75 1.48 0.87 6081.50 士 士 士 士 士

昭 ± 12.16 ±0.33 ± 0.11 ± 184.27

2.11 0.86 1.33 0.09 2.49

54.68 18.68 1.94 32.00

75.40 1.64 0.91 5974.60 士 士 士 士

5g/kg ±2.34 ± 0.27 ± 0.04 ± 153.90

0.88 0.24 0.07 1.10 表 2中， TP (总蛋白）， ALB (白蛋白）， GLOB (球蛋白）， ALT (丙氨酸氨基转移酶）， AST (谷草转氨酶）， TBIL (总胆红素）， DBIL (直接胆红素）， CHE (乙酰胆碱酯酶） (2) 与生理盐水对照组相比， ABG-001 5g/kg组没有显示血液生化学指标的异常 （表 3 ) ， 提示肝、 肾、 造血器官等功能没有被损害。

表 3: ICR小鼠体重和各脏器系数 （每组 10只， =5， 早 =5; ABG-001=5g/kg) 组别 体重（g) 心脏（％) 肝脏（％) 肾脏（％) 脾脏（％) 脂肪（％)

24.64 0.685 2.102 0.684 3.185

¾对照组

±0.38 ±0.086 ±0.148 ±0.078 ±0.260

23.67 0.607 7.904 2.200 0.698 2.129

5g/kg组 ±0.86 ±0.044 ±0.289 ±0.110 ±0.036 ±0.105

20.30 0.658 6.669 1.681 0.607 2.848 早对照组

±0.56 ±0.031 ±0.205 ±0.046 ±0.038 ±0.384 早 19.12 0.726 6.373 1.756 0.701 2.095

5g/kg组 ±1.41 ±0.037 ±0.234 ±0.047 ±0.039 ±0.405 脏器系数=脏器重 /体重 （％)

慢性毒性试验: ABG-001进行连续 60天的腹腔注射（ 10 mg/kg/天），或经口给药（ 10 mg/kg/ 天）（生理盐水给药作为对照组）后， 检测体重。 用 10%水合氯醛腹腔麻醉， 记录呼吸、 心率 和平均动脉压。 然后从左心室取血进行血液学和血液生化学指 标等的检测。 并取出各内脏器 官进行组织学的观测。

实验结果：

(1)表 4显示， 与生理盐水对照组相比， ABG-001处理组动物没有出现体重增加 /减少 （包 括各脏器重量） 。 也没有出现呼吸 （50〜60次 /分钟）、 心率 （305〜400次 /分钟）、 平 均动脉压 （210mmHg) 的异常， 以及昏睡、 狂躁、 运动行为异常等现象。

表 4: 小鼠体重和各脏器系数 （每组 Ϋ=10， ί=10; ABG-001=10mg/kg灌胃） 组别 体重（g) 肺（％) 心脏（％) 肝脏（％) 肾脏（％) 脾脏（％)

36.50 0.71 0.502 5.093 1.302 0.419 对照组

±2.84 ±0.21 ±0.10 ±0.32 ±0.20 ±0.12 溶剂 33.20 0.82 0.605 5.128 1.235 0.405

(灌胃） ±2.72 ±0.24 ±0.19 ±0.43 ±0.17 ±0.09 溶剂 36.22 0.78 0.524 4.912 1.193 0.368

(腹腔) ±2.47 ±0.12 ±0.16 ±0.55 ±0.18 ±0.14 ABG-001

35.83 0.87 0.482 5.243 1.203 0.390 (灌胃）

±2.11 ±0.28 ±0.22 ±0.67 ±0.32 ±0.07 lOmg/kg

ABG-001

32.30 0.80 0.523 5.031 1.133 0.371 (腹腔）

±3.42 ±0.19 ±0.15 ±0.37 ±0.15 ±0.09 5mg/kg 脏器系数=脏器重 /体重

(2) 与生理盐水对照组相比， 慢性 ABG-001给药组没有显示血液生化学指标 （表 5 ) 的异 常， 提示肝、 肾、 造血器官等功能没有被损害。

表 5: 小鼠主要血液生化学指标 （每组 Ϋ =10， =10; ABG-001= ^: 10mg/kg灌胃）

GLO

TP ALB ALT TBIL DBIL

B AST CHE

组别 (g/ (g/L A/G (U/L (umol (umol/L

(g/L (U/L) (U/L)

L) ) ) /L) )

)

57.2 38.5 17.7 32.2 85.4 7863.2

2.14 1.71

8 2 9 5 2 0.71 4 对照组 ±0.0 ±0.2

±0.6 ±0.5 ±0.9 ±1.4 ±15. ±0.10 ±120.6

8 4

9 8 2 3 2 7

56.2 39.9 19.1 32.8 111. 8017.4

2.01 1.58

溶剂 3 4 4 5 41 0.92 0

±0.0 ±0.1

(翻） ±1.0 ±0.9 ±1.2 ±1.4 ±17. ±0.08 ±168.5

7 9

4 7 1 4 10 4

57.1 36.5 18.4 33.6 75.7 7684.3

1.91 1.63

溶剂 0 7 3 1 8 0.85 8

±0.1 ±0.2

(腹腔) ±1.1 ±0.6 ±0.8 ±1.9 ±14. ±0.09 ±176.5

3 6

1 7 1 9 72 9

ABG-00 55.7 38.2 20.0 33.0 85.6 8344.7

2.04 1.70

1 (灌胃） 8 5 2 4 3 0.91 5

±0.0 ±0.1

10mg/k ±0.6 ±1.0 ±1.0 ±1.0 ±11. ±0.05 ±191.8

8 9

g 0 2 4 3 41 3

56.8 37.4 18.3 32.1 89.4 7976.4

ABG-00 1.88 1.51

9 3 5 9 7 0.89 3

1 (腹腔） ±0.0 ±0.3

±1.1 ±0.7 ±0.8 ±1.5 ±15. ±0.09 ±143.0

5mg/kg 9 5

7 2 7 4 98 6 表 5 中， TP (总蛋白）， ALB (白蛋白）， GLOB (球蛋白）， ALT (丙氨酸氨基转移 酶）， AST (谷草转氨酶）， TBIL (总胆红素）， DBIL (直接胆红素）， CHE (乙酰胆碱酯酶）。 从理论上分析及初步的实验结果说明所有实施 例 1中的其它化合物也有与 ABG-001相 似的效果。 实施例 4 ABG-001能通过血脑屏障（图 5)

实验主要材料： Sprague-Dawley(SD)大鼠 （雄性和雌性各 10只）， 体重 200g〜250g， 购 自江苏省实验动物中心。

实验操作： 10%水合氯醛腹腔麻醉， 记录微电极按照 0.3mm后、 1.0mm夕卜、 2.5 mm深度 的坐标插入海马 CA1区锥体细胞层， 记录海马 CA1神经细胞的自发性放电频率。 基础值稳 定记录 20分钟后， ABG-001进行腹腔给药， 连续记录 1-2小时。 分析 ABG-001是否能透过 血脑屏障调节海马神经细胞的兴奋性。

实验结果 （图 5 ): 腹腔注射 ABG-001 ( 0.5-lmg/kg) 后 20-30分钟， 海马 CA1神经细 胞出现自发性放电频率明显增加， 并持续 2小时以上， 提示 ABG-001能通过血脑屏障， 调 节神经细胞的兴奋性。

从理论上分析及初步的实验结果说明所有实施 例 1中的其它化合物也有与 ABG-001相 似的效果。 实施例 5、 ABG-001通过血脑屏障能促进脑神经元的再生（� � 6)

在 1988年， Erikssion等用 BrdU(5-溴脱氧尿核苷)标记有丝分裂期细胞， 发现成体哺乳动 物海马的神经干细胞能分化为神经细胞一神经 发生。 成年海马齿状回的新生神经元与成熟 的颗粒细胞相似能与 CA3区神经元建立突触联系和发生突触可塑性。 成年的神经发生可以取 代由于自然老化或病变造成的神经元死亡， 最大限度地维护脑功能和结构的完整性。 研究证 明， 老年脑的新生细胞元减少 （神经新生衰退） 与老年性认知功能减退有关。 本实验重点观 察 ABG-001对神经发生 （主要包括神经干细胞增殖、 存活、 分化） 的作用。

实验主要材料： 2月龄昆明小鼠 （雄性和雌性各 40只）， 体重 25g〜30g， 购自江苏省实 验动物中心。

实验操作： ①用 BrdU ( 5-溴脱氧尿嘧啶核苷） 标记有丝分裂期的细胞， 在 B U注射后 连续 14天进行 ABG-001给药 （0.5mg/kg/d)。 然后分别在 BrdU首次给药后 48小时、 Ί天和 28天用免疫组化的方法检测海马 DG区的 BrdU阳性 （BrdU ⁺ ) 细胞， 以确定 ABG-001对细 胞增殖（24小时龄 -BrdU ⁺ 细胞）、 存活（7天龄 -BrdU ⁺ 细胞）和成熟 （28天龄 -BrdU ⁺ 细胞） 的 影响。②用神经元特异性核蛋白（NeuN)和神经� ��质细胞（GFAP)的免疫染色，观察 ABG-001 对新生神经分化的影响。 ③用 Doublecortin(DCX)免疫染色， 观察 ABG-001对新生神经元突 起生长的影响。 ABG-001给药： ABG-001溶解于 99.5%乙醇或二甲亚砜中， 然后用茶油稀释 进行腹腔注射， 或用生理盐水稀释进行口服给药。

实验结果（图 6): ABG-001口服或腹腔给药能促进海马齿状回神经� �细胞的增殖（a)， 促进新生神经元的突起生长 （b) ， 促进干细胞向神经元分化 （c) ， 提示 ABG-001具有神 经营养作用。

从理论上分析及初步的实验结果说明所有实施 例 1中的其它化合物也有与 ABG-001相 似的效果。 实施例 6、 ABG-001具有抗脑衰老的作用 （图 7 )

6-1：

哺乳动物从乳糖中获得半乳糖， 乳糖在体内水解生成葡萄糖和半乳糖， 而半乳糖则在肝 脏中迅速被酶解成葡萄糖。过多的半乳糖在醛 糖还原酶催化下还原成半乳糖醇。半乳糖醇为 代谢终产物， 不能被进一步分解代谢而堆积， 增加细胞的渗透压， 导致细胞肿胀、 功能障碍 和代谢紊乱， 最终导致机体衰老。 大量的研究报道， D-gal半乳糖诱导衰老动物模型。 D-gal 使大鼠胚胎脑神经元出现生长发育缓慢、 突起脱落、 死亡率增高等退行性变。 D-gal导致大 鼠肺成纤维细胞的体外分裂代数减少， 二倍体成纤维细胞分裂周期中 G2-M 期细胞减少、 G-G1期细胞增加， 细胞增殖速度减慢。 D-gal抑制细胞生长发育和减少分裂次数， 加速细胞 衰老。

实验主要材料： 2月龄昆明小鼠 （雄性和雌性各 30只）， 体重 25g〜30g， 购自江苏省实 验动物中心。

实验操作： D-gal半乳糖 （100mg/kg/天） 进行 60天的腹腔注射。 6 周后，小鼠行动迟缓， 毛色灰暗，形体瘦弱，呈现明显的衰老体征， 证明衰老模型成功建立。 D-gal半乳糖注射 20天后， 开始进行 ABG-001口服（0.1、 5.0、 10.0 mg/kg/天）或腹腔注射（0.1、 0.5、 5 mg/kg/天）。 D-gal 注射 30天时， 给与 BrdU ( 5-溴脱氧尿嘧啶核苷， 50.0 mg/kg) 注射连续 4次， 间隔 6小时。 然后分别在 BrdU给药后 28天，用 4%多聚甲醛经左心室灌注固定脑组织， 进行 BrdU免疫染 色， 标记新生神经元。 检测海马 DG区的 BrdU阳性 （BrdU ⁺ ) 细胞， 以确定 ABG-001对新 生细胞存活和成熟 （28 天龄 -BrdU ⁺ 细胞） 的影响。 用 Doublecortin(DCX)免疫染色， 观察 ABG-001对新生神经元突起生长的影响。 于末次给药后第 2天处死小鼠， 取出海马和大脑皮 层测定谷胱甘肽过氧化物酶 (glutathione peroxidase, GSH2Px)、 超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase, SOD)、单胺氧化酶 (monoamine oxidase, MAO) 禾口总抗氧化能力（total anti-oxidation competence, T-ACO) 等衰老的生化指标。

实验结果 （图 7): ( 1 ) D-gal半乳糖长期注射能明显减少新生神经元的� ��量， 损害新生 神经元的突起生长 （a) ； (2) D-gal半乳糖-衰老小鼠的运动功能没有明显异常 （b) ， 但是 空间学习和记忆功能明显降低； （3 ) ABG-001治疗能改善 D-gal引起的新生神经元的存活和 突起生长障碍 （a) ； (4) ABG-001治疗能改善脑衰老小鼠的记忆功能 （c) 和 （d) ； ( 5 ) 小鼠的氧化应激生化指标 （每组早 =10， 3 =10； ABG-001=10mg/kg 灌胃） 显示总抗氧化能 力改善不明显 （e) 、 ( f) 、 ( g) 和 （h) 。 实验主要材料： SAM R1 ( 6周龄雄性， 各 18只） 和 SAM P8 ( 9周龄雄性， 各 18只） 购于天津医科大学第一附属医院。 SAM P8小鼠是一种快速老化动物模型。 实验操作： SAM P8 9月龄小鼠被随机分成 3组， 对照组 （ 1%吐温 80的生理盐水）、 低 剂量 （lmg/kg) 组和高剂量 （3mg/kg) 组， 每组 6只。 另夕卜， SAM R1 六周龄小鼠作为正常 老化小鼠的青年对照组。各组均每天腹腔注射 1%吐温 80的生理盐水或 ABG-001 ,连续两周。 学习记忆及空间记忆功能的检测。 （1 ) Y-maze实验： 自发性的交替行为可以用 Y-maze实验 来评估。 Y-maze即黑色 Y形三等分辐射式迷路箱， 由 3个支臂和一个连接区组成， 三臂互相 间夹角 120°， 每臂长 38.5厘米， 上宽 8厘米，下宽 3.5厘米， 高 12厘米， 三个臂可任选一臂 为起始臂。每只小鼠从固定一臂的末端释放， 让小鼠自由活动 8分钟， 记录每次进臂的次序。 三次连续进入不同的三个臂臂被定为交替进臂 （如： ABC，ACB，BAC，BCA，CAB，CBA)。 交 替进臂率的计算为： 1一 （错误次数 /总次数一 2) χ 100%。 另外， 总的进臂次数也可以确定。 (2) 新奇物体辨别实验： 新奇物体辨别实验是根据啮齿类动物辨别熟悉 和新奇物体的能力。 使用到的装置为白色无盖的盒子（长 X宽 X高： 40x20x 18厘米）。 首先， 盒子里不放任何物体， 每次从相同位置点释放小鼠， 让其自由活动 5分钟以适应环境， 称为适应期， 共两天。 第三 天为熟悉期和测试期。 熟悉期： 先放入两个相同物体后， 将小鼠放入， 自由活动 5分钟， 以 小鼠鼻子距物体小于 2厘米或趴在被识别的物体上算为探究行为， 分别记录下对两个相同物 体的探究时间。 测试期： 间隔 1小时后， 换上两个不同物体 （其中一个是和熟悉期相同的物 体（0， 另一个是新奇物体 (n))， 让其自由活动 5分钟， 并记录下小鼠对熟悉物体的探究时间 f和对新奇物体的探究时间 n。 熟悉期和测试期按随机数字组合两种物体及位 置摆放。 认知指 数的计算公式为对新奇物体探究的时间 n/总的探究时间 n+f。

实验结果 （图 8 ): ( 1 ) 与 SAM R1小鼠相比， SAM P8小鼠的总进臂次数和交替进臂率 没有明显改变（a); (2)接受高剂量或低剂量 ABG-001处理的 SAM P8小鼠与未进行治疗的 SAM R1小鼠和 SAM P8小鼠相比学习记忆功能明显增强 （b); ( 3 ) 与 SAM R1小鼠相比， SAM P8小鼠对新奇物体的辨别能力明显降低（c); (4) ABG-001处理能浓度依赖性恢复 SAM P8小鼠对新奇物体的辨别能力 （d)。

从理论上分析及初步的实验结果说明所有实施 例 1中的其它化合物也有与 ABG-001相 似的效果。 实施例 7、 ABG-001具有预防和治疗老年性痴呆症的作用 （图 9)

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实验主要材料： Sprague-Dawley(SD)大鼠 （雄性和雌性各 20只）， 体重 200g〜250g， 购 自江苏省实验动物中心。①采用立体定位技术 ，将渗透压泵 (osmotic minipump: Alzet 2002; Alze, CA)连接植入导管（cannula),并固定于单侧的侧脑 室 (前囟点后 0.3mm，右侧 lmm，深 2.5mm)。 将 Αβ _{( 1} _42)连续 2周 （ 100pM/day) 灌注入侧脑室内。 通过观察 Αβ的沉积、 空间记忆功能和 胆碱能系统功能， 以验证 AD模型是否成功。

实验操作： Αβ _{( 1} _42)灌注后的第 2天开始进行连续 14天的 ABG-001 ( 0.5-1.0mg/kg)腹腔 注射。 在 Αβ α-4 _{2 )} 灌注后的第 7天进行水迷宫测试， 检查空间记忆功能。 记录大鼠的运动轨 迹， 计算登台潜伏期。 在 Αβ _α _ ₄₂₎ 灌注后 15天， 用 4%多聚甲醛经左心室灌注固定脑组织。 石蜡包埋后， 做海马连续切片。 1%甲苯胺蓝染色后， 测量海马 CA1 区存活锥体细胞的密度 (锥体细胞层每毫米长度中颗粒细胞数）。

实验结果图 9: Αβ _α _ ₄₂₎ 灌注引起大约 60%的海马 CA1 区神经元死亡丢失， 导致逃避潜 伏期延长， 提示空间认知功能降低。 ABG-001治疗能明显减少 Αβ _α _ ₄₂₎ 痴呆大鼠海马神经细 胞死亡， 改善 Αβ大鼠的空间学习记忆功能。

ABG-001治疗能改善阿尔茨海默病 (AD)脑内源性神经再生障碍

成年哺乳动物海马齿状回的神经干细胞能分化 为神经细胞称为神经发生。 成年的神经发 生被认为能取代和修复由于自然老化或病变造 成的神经元缺失， 最大限度地维护脑的结构和 功能。阿尔茨海默病 (Alzheimer's disease, AD)是一种以进行性认知功能障碍为特征的神经 系统 退行性疾病。 新生神经元是否能替代病变的神经元， 改善 AD的认知功能障碍已成为 AD研究 的一个新靶点。研究发现， AD脑海马的前体细胞向神经元的分化比例明显� ��少， 同时新生神 经元的存活率显著降低， 并且新生神经元的突起生长异常。 这些研究都已证实， AD脑的神经 再生过程受到严重的损害，提示神经再生障碍 可能是 AD认知功能进行性减退的重要病理机制 之一。

实验主要材料： APP/PS1转基因 AD小鼠（10月龄雌雄鼠）（购于南京大学动物� �式中心）。 实验操作： 用 BrdU (5-溴脱氧尿嘧啶核苷） 标记有丝分裂期的细胞， 在 B U注射后连续 14天进行 ABG-001给药 （0.5mg/kg/天） 。 然后分别在 BrdU首次给药后 28天用免疫组化的方法 检测海马 DG区的 BrdU阳性（BrdU ⁺ )细胞。 通过神经元特异性核蛋白 （NeuN)和神经胶质细 胞 （GFAP) 的免疫染色， 观察 ABG-001对新生神经分化的影响。 Doublecortin (DCX)在中枢 神经系统的发育过程中在神经前体细胞的迁移 过程特定表达， DCX作为神经元前体细胞的标 志物可以用来研究神经元前体细胞的增殖和迁 移。 通过 DCX染色能观察新生神经细胞突起的 生长。 于末次给药后第 2天处死小鼠，取出海马测定乙酰胆碱酯酶 （AChE) 活性。

实验结果（图 10): 与野生型小鼠相比， APP/PS1小鼠齿状回的 28天龄 -BrdU+细胞显示 50%的减少（a);新生神经元突起的数量和长度均 明显减少（b)。 ABG-001治疗能改善 APP/PS1 小鼠 28天龄 -B U+细胞显著减少 （a)、 保护神经突起的生长 （b)， 提示 ABG-001具有改善 AD 脑神经元再生和认知功能障碍的作用。 APP/PS 小鼠海马组织的乙酰胆碱酯酶 （AChE) 活性有轻度的增加， 而 ABG-001治疗能明显减低 AD小鼠海马乙酰胆碱酯酶 （AChE) 活性 (c)。

从理论上分析及初步的实验结果说明所有实施 例 1中的其它化合物也有与 ABG-001相 似的效果。 实施例 8、 ABG-001片剂的制备方法

处方：

ABG-001 100g

淀粉 40g 微晶纤维素 80g

硬脂酸镁 3.0g

羟丙基甲基纤维素 （E-30) (40%溶液） 适量

制成 1000片

制法： 配制 4%经丙基甲基纤维素 （E-30) 溶液， 备用。 称取 10g淀粉置 105 °C干燥 5 小时 备用。 称取 20 g淀粉和处方量的所发明 ABG-001、 微晶纤维素， 混匀， 粉碎过 80目筛。 用 4%经丙基甲基纤维素 （E-30) 溶液将物料制软材， 用 20目筛制粒， 于 50 °C 〜 60 °C干燥至 颗粒中的水份 3 %左右。 过 20目筛整粒， 加入处方量的干淀粉（105 °C干燥 5小时）、 硬脂酸 镁， 终混， 测中间体含量， 定片重； 压片。

实施例 9、 ABG-001注射液的制备方法

处方：

ABG-001 10g

丙二醇 500mL

注射用水 500mL

制成 lOOOmL

制法： 称取处方量的 ABG-001和丙二醇， 加注射用水 500 mL， 搅拌溶解； 向上述溶液中加 入 0.1 %活性炭，搅拌，放置 15分钟， 5 微米钛棒脱炭，再经筒式滤器 0 . 45 微米和 0 . 22 微 米的微孔滤膜精滤； 灌封于 10 ml 安瓿瓶中， 100 °C流动蒸汽灭菌 45 分钟， 即得所发明 ABG-001的注射液。