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Title:
WATER-SOLUBLE FLUORINE-CONTAINING PLATINUM COORDINATION COMPLEX FOR TUMOUR TREATMENT AND PREPARATION METHOD THEREOF
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2012/175045
Kind Code:
A1
Abstract:
Disclosed are a water-soluble fluorine-containing platinum coordination complex for tumour treatment and a preparation method therefor, said coordination complex being shown as formula (I): The present platinum coordination complex shows a long-term antineoplastic effect superior to that of oxaliplatin, while the enhanced stability and solubility of the preparation favor its clinical use.

Inventors:
WANG, Yiqiang (Room 2062, Huoju Building2 Huatian Road, Huayuan Industrial Park, Nankai District, Tianjin 4, 300384, CN)
王以强 (中国天津市南开区华苑产业区华天道2号火炬大厦2062室, Tianjin 4, 300384, CN)
Application Number:
CN2012/077396
Publication Date:
December 27, 2012
Filing Date:
June 22, 2012
Export Citation:
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Assignee:
GUDUI BIOPHARMA TECHNOLOGY INC. (Room 2062, Huoju Building2 Huatian Road, Huayuan Industrial Park, Nankai District, Tianjin 4, 300384, CN)
天津谷堆生物医药科技有限公司 (中国天津市南开区华苑产业区华天道2号火炬大厦2062室, Tianjin 4, 300384, CN)
WANG, Yiqiang (Room 2062, Huoju Building2 Huatian Road, Huayuan Industrial Park, Nankai District, Tianjin 4, 300384, CN)
International Classes:
C07H23/00; A61K31/7135; A61P35/00; C07H1/00
Foreign References:
CN102276656A
CN101891769A
Attorney, Agent or Firm:
BEI & OCEAN (Time Plaza Bld.A Ste.603, West Anshan Road Nankai District, Tianjin 3, 300193, CN)
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Claims:
权 j要求

1. 用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物, 其特征是式 (I ) 所示:

( I ) ,其中:

X和 Y是配位体, 所述 X和 Y相同或不同并且各自代表一个 NH3、 一个 ( 8链状垸基 伯胺、 一个 C3- (:8环状垸基伯胺、 一个芳香胺、 一个至少有一个 C,-C4垸基取代的芳香胺、 一个分子式为 RrNH- R2的仲胺,其中 和1¾2相同或者不同分别表示(^- C8链状烷基或 Ri-NH-Rs 共同组成 C4-C8的环状烷基仲胺、 一个具有 氮芳香族杂环化合物或至少有一个 CrC4烷基 取代的含氮芳香族杂环化合物、 一个具有 硫芳香族杂环化合物或含硫非芳香族杂环化合 物, 或 X和 Y—起用结构式 (VIII ) 所示: (vm)

其中 D为 C。或 的亚垸基; 8为(:2- 08的亚垸基;

n是 1-6;

R选

Mannose

Idose a ose

2. 根据权利要求 1所述的用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物, 其特征是所述 n是 1 - 3c

替换页(细则笫 2 6条)

3. 根据权利要求 1所述的用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物, 其特征是所述 R选自下 述单糖基, 单糖 1-位取代为 α或者 β或者两 的混合物:

Glucose Mannose Galactose

4. 根据权利要求 1所述的用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物, 其特征是所述 X和 Y— 起为反式- (1R, 2R) -环己二胺, 反式- (1S, 2S) -环己二胺, 顺式- ( 1R, 2S) -环己二 胺, 顺式- (1S, 2R) -环己二胺, 消旋反式 -1, 2-环己二胺或消旋顺式 -1, 2-环己二胺。

5. 制备权利要求 1-4 之一的用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物的中间体, 其特征是式 ( III ) 所示:

其中:

M代表氢原子或者元素周期表第 IA族^金属原子;或者两个 M共同代表一个第 IIA族 的金属原子;

n是卜 6;

R选自下述单糖基, 单糖 1-位取代为 c [或者 β或者两者的混合物:

Glucose Mannbse Galactose

Allose Altrose Gulose

替换页(细则笫 26条)

6. 权利要求 1-4之一的用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物 (I) 的制备方法, 其特征是 包括如下步骤:

将式 (Π) 化合物与调节了 pH为 7-9的式 (III) 化合物的水溶液进行反应, 或将式 (II) 化合物与式 (ΠΙ) 化合物在有无机碱的存在下的水中进行反应, 即制成用于肿瘤 治疗的含氟水溶性铂配合物 (I); 所述 (Π) 的结构式为:

式 (Π) 中:

X和 Υ是配位体, 所述 X和 Υ相同或不同并且各自代表一个 ΝΗ3、 一个 d-C8链状烷基 伯胺、 一个 C3- (8环状垸基伯胺、 一个芳香胺、 一个至少有一个 d- C4垸基取代的芳香胺、 一个分子式为 R,- NH-R2的仲胺,其中 和 同或者不同分别表示 d-C8链状烷基或 R,- NH-R2 共同组成 C4- C8的环状烧基仲胺、 一个具 含氮芳香族杂环化合物或至少有一个 d- C4垸基 取代的含氮芳香族杂环化合物、 一个具有去硫芳香族杂环化合物或含硫非芳香族杂环化合 物, 或 X和 Y—起用结构式 (VIII

其中 D为 C。或 C,的亚烷基; B

1和 相同或者不同,各自代表羟基,硝基, 高氯酸根, 或者 ^和^共同代表硫酸根, 碳酸根;

所述 (III) 的结构式为:

式 (ΠΙ) 中:

M代表氢原子或者元素周期表第 IA族的金属原子;或者两个 M共同代表一个第 ΠΑ族 替换页(细则笫 26条) 的金属原子;

n是 1-6;

R选自下述单糖基, 单糖 1-位取代为 α或者 β或者两者的混合物:

Glucose Galactose

特征是所述 特征是所述

Glucose Galactose

9. 根据权利要求 6 所述的用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物的制备方法, 其特征是所 述无机碱为氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸钠、 碳酸氢钠、 碳酸钾、 氢氧化锂、 氢氧化钡或氢 氧化铯。

10. 根据权利要求 6所述的用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物的制备方法, 其特征是所 述 X和 Y—起为反式- (1R, 2R) -环己二胺, 反式- (IS, 2S) -环己二胺, 顺式- (1R, 2S) -环己二胺, 顺式- ( 1S, 2R) -环己 ^胺, 消旋反式 -1, 2-环己二胺或消旋顺式 -1, 2-环己二胺。

替换页(细则笫 26条)

Description:
用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物及其制备 方法 技术领域

本发明涉及一种水溶性铂配合物,特别涉及一 种用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物及 制备方法。 背景技术

铂类抗癌药是肿瘤治疗领域具有代表性的一类 药物。 其属于细胞周期非特异性药物, 对 肉瘤, 恶性上皮肿瘤, 淋巴瘤以及生殖细胞肿瘤都具有治疗功效。 目前世界上广泛应用于临 床治疗的具有代表性的铂类抗癌药主要有: 顺铂, 卡铂和奥沙利铂。

铂类抗癌药物的致命缺点是具有极强的毒副作 用以及固有的和后续形成的耐药性问题。 另外由于此类药物是金属有机化合物, 所有铂类上市药物普遍存在水溶性极低的特性 , 下表 是上述三种上市临床药物的水溶性数据: 由于过低的水溶性不仅给药品制剂的稳定性和 临床应用带来了很多的不利影响, 比如很 难把它们顺利地配制成一种方便和具有合适浓 度的临床药剂。 不仅如此, 过低的药物水溶性 还直接影响到药物在身体内的积蓄和代谢, 含有金属原子的铂类化合物尤其在药物的排泄 等 方面受水溶性的影响更为显著, 积蓄在肾脏组织和血液里的铂类药物不能被身 体及时排出形 成了铂类药物普遍具有很强毒副作用的特点。 以下是各种具有新型化学结构的铂类抗肿瘤药 物由于水溶性不能得到改善以及由此导致的重 笃药物积蓄型毒副作用而被迫中止临床试验的 药品案例:

(参考文献: Status of platinum drugs in the cl inic and in cl inical trials, Dalton Transactions, 2010, 39, 8113-8127· )

综上所述, 解决铂类药物的水溶性问题是目前世界上铂类 抗癌药研发领域专注的最重要 课题之一 ( Galanski, Markus; Keppler, Bernhard K Searching for the Magic Bul let: Anticancer Platinum Drugs Which Can Be Accumulated or Activated in the Tumor Tissue. An ti -Cancer Agen ts in Medicinal Chemistry, ( 2007), 7, 55- 73)。 增加铂类药物的水溶 性, 一方面可望增加药物在生物体内的稳定性, 降低药物针对各种人体脏器和组织以及细胞 中普遍存在的亲核基团的反应性, 降低毒副作用。 另一方面, 增加药物的水溶性可以帮助药 物在肾脏的有效排泄, 从而减少药物在体内的积蓄和对肾脏等组织器 官的毒副作用。 发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足, 种能够实质性地改变铂类药物水溶性问 题的用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物。

本发明的第二个目的是提供制备用于肿瘤治疗 的含氟水溶性铂配合物的中间体 ( 本发明的第三个目的是提供用于肿瘤治疗的含 氟水溶性铂配合物的制备方法。

本发明的技术方案概述如下- 用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物, 是式 (I) 所示:

其中:

X和 Y是配位体, 所述 X和 Y相同或木同并且各自代表一个 NH 3 、 一个 d-C 8 链状垸基 伯胺、 一个 C 3 -C 8 环状烷基伯胺、 一个芳香 、一个至少有一个 -C 4 垸基取代的芳香胺、 一 个分子式为 -ΝΗ- 的仲胺,其中 和 神同或者不同分别表示 d-C 8 链状垸基或 共同组成 C 4 -C 8 的环状烷基仲胺、一个具有 氮芳香族杂环化合物或至少有一个 - 代的含氮芳香族杂环化合物、 一个具有含 芳香族杂环化合物或含硫非芳香族杂环化合物 , 或 X和 Y—起用结构式 (VIII) 所示:

其中 D为 Co或 的亚焼基; B

n是 1-6; 优选 1-4; 最好是 2或

R选自下述单糖基, 单糖 1-位取代为 α或者 β或者两者的混合物:

Allose Altrose Gulose

替换页(细则笫 26条)

R优选下述单糖基, 单 1-位取代为 α或者 β或者两者的混合物:

Glucose

IS, 2S) -环己二胺, 顺式- 2-环己二胺或消旋顺式 -1, 2

中间体, 用式(III)所示:

其中:

M代表氢原子或者元素周期表第 IA族的金属原子; 或者两个 M共同代表一个第 ΠΑ族 的金属原子;

n是 1-6; 优选 1-4; 最好是 2或 3;

R选自下述单糖基, 单糖 1-位取代为 α或者 β或者两者的混合物:

替换页 (细则笫 2 6条)

Glucose Galactose

AUose Altrose Gulose

R优选下述单糖基, 单糖 1-位取代为 α或者 β或者两者的混合物:

Glucose Mannose Galactose 用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物 (I) 的制备方法, 包括如下步骤:

将式 (Π) 化合物与调节了 pH为 7-9的式 (III) 化合物的水溶液进行反应, 或将式 (II) 化合物与式 (III) 化合物在有无机碱的存在下的水中进行反应, 即制成用于肿瘤治疗的含氟 水溶性铂配合物 (I); 所述 (Π) 的结构式为:

式 (II) 中:

X和 Υ是配位体,所述 X和 Υ相同或不 (|]并且各自代表一个 ΝΗ 3 、一个 (:,-(: 8 链状垸基伯胺、 一个 C 3 - C 8 环状垸基伯胺、 一个芳香胺、 一个至少有一个 - C 4 烷基取代的芳香胺、 一个分子式 为 -!^!- R 2 的仲胺,其中 R,和 R 2 相同或者不同分别表示 d-C 8 链状垸基或 R,-NH-R 2 共同组成(: 4 -( 8 的环状垸基仲胺、 一个具有含氮芳香族杂环化合物或至少有一个 烷基取代的含氮芳香族 替换页(细则 26 ) 杂环化合物、 一个具有含硫芳香族杂环化合物或含硫非芳香 族杂环化合物, 或 X和 Y—起用 结构式 (VIII ) 所示-

其中 D为 C。或 的亚垸基; B为 C 2 - C 8 的亚垸基;

本发明的 X和 Y所表示的最佳的例子包括但不限于:

X和 Y各为 NH 3 , 异丙胺, 环丙胺, 环丁胺, 环戊胺, 环己胺; 或者 X和 Y其中之一为 NH 3 , 另一个为异丙胺, 环丙胺, 环丁胺, 环戊胺, 环己胺, 2-甲基吡啶; 1, 2-乙二胺, 1, 3-丙 二胺, 2-甲基四亚甲基二胺, 1, 2-环丁二胺, 1, 2-环戊二胺, 1, 2-环己二胺, 1, 2-环庚 二胺, 1, 2-环辛二胺, 1-氨基 -2-氨甲基环己垸, 1, 1-二氨甲基环己垸, 5, 5-二氨甲基 -1, 3-二噁垸, 2-氨甲基-吡咯垸和 2-氨甲基吡啶; 当上述配体化合物中含有手性中心时, 可以是 其中任一光学异构体或者消旋体混合物;

和 相同或者不同, 各自代表羟基, 硝基, 高氯酸根, 或者 ^和 A共同代表硫酸根, 碳酸根;

( III ) 的结构式为-

式 (III ) 中:

M代表氢原子或者元素周期表第 IA族的金属原子; 或者两个 M共同代表一个第 ΠΑ族的 金属原子; M优选氢原子、钠原子、钾原子、锂原子或铯 子; 或两个 M共同代表一个钡原子; n是 1-6; 优选 1-4; 最好是 2或 3;

R选自下述单糖基, 单糖 1-位取代为 α或者 β或者两者的混合物:

Glucose Mannose Galactose

Allose Altrose Gulose

ose Talose

R优选:

[annose

单糖 1-位取代为 α或者 β或者两者的混余物。

所述无机碱为氢氧化钠, 氢氧化钾, ^酸钠, 碳酸氢钠, 碳酸钾, 氢氧化锂, 氢氧化钡 或氢氧化铯。

优选的 X和 Υ—起为反式 - ( 1R 2R),环己二胺, 反式 - ( 1S, 2S) -环己二胺,顺式 - ( 1R, 2S) -环己二胺, 顺式- ( 1S, 2R) -环己二胺, 消旋反式 -1, 2-环己二胺或消旋顺式 -1, 2-环己 二胺。 最好是: 反式- ( 1R, 2R) -环己二胺。

本发明的优点: 由于氟原子是电负性巋大的元素, 在本发明所提供的含氟原子铂配合物 中由氟原子取代所形成的诱导效应 (即因分子中原子或基团极性 (电负性) 不同而致使成键 电子云在原子链上向某一方向移动的效应) 可以大大增加铂配合物在水溶液中的极性, 即水 溶性。 试验证明本发明的铂配合物与临床药物奥沙利 铂相比其水溶性超过一百倍。 另外, 本 发明所取得的含氟怕配合物的稳定性与临床药 物奥沙利铂相比也得到了明显改善。 第三, 动 物模型药效实验证明, 含有氟原子的本发明所提供的含糖铂配合物在 长期抑制肿瘤的效果方 面亦优于奥沙利铂, 充分体现了本发明含氟铂配合物的肿瘤靶向效 果。 综上所述, 本发明所 提供的含氟铂类配合物, 不仅能够解决现存铂类药物因为缺乏水溶性而 存在的制剂稳定性差 的问题以及临床使用不方便的缺陷, 而且能够改善和提高现有临床药物在肿瘤治疗 效果方面 存在的不足。

替换页(细则笫 26条) 附图说明

图 1为实施例 1制备的配合物抗肿瘤药效 -1。

图 2为实施例 1制备的配合物抗肿瘤药效 -2。

图 3为实施例 5制备的配合物抗肿瘤药效 -1。

图 4为实施例 5制备的配合物抗肿瘤药效 -2。

图 5为实施例 9制备的配合物抗肿瘤药效 -1。

图 6为实施例 9制备的配合物抗肿瘤药效 -2。

图 7为实施例 10制备的配合物抗肿瘤药效 -1。

图 8为实施例 10制备的配合物抗肿瘤药效 -2。

图 9为实施例 3、 实施例 18制备的配合物在动物肿瘤模型中的抗肿瘤药 。 具体实施方式

本发明的实施例是为了使本领域的技术人员更 好地理解本发明, 但不以任何方式限制本 发明。

作为本发明所提供的由式 (I ) 所表示的用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物 (1 ), 其优 选化合物的代表性举例亦可以由下述表 1 列出, 但本发明所涵盖的含氟水溶性金属铂配合物 不限于以下的举例。

当式 (I ) 中的 R分别为 D-葡萄糖、 D-半乳糖或者 D-甘露糖取代基时; n和 X、 Y见 表 1:

表 1

n X Y

1-6 NH3 NH3

1-6 异丙胺 异丙胺

1-6 环丙胺 环丙胺

1-6 环丁胺 环丁胺

1-6 环戊胺 环戊胺

1-6 环己胺 环己胺

1-6 NH3 环丁胺

1-6 NH3 环戊胺

1-6 NH3 环己胺

1-6 NH3 2-甲基吡啶

1-6 1, 2-乙二胺

1-6 1, 3-丙二胺 1-6 1, 2-环丁二胺

1-6 1, 2-环戊二胺

1-6 1, 2-环己二胺

1-6 1, 2-环庚二胺

1-6 1, 1-二氨甲基环己垸

1-6 1, 2-二氨甲基环丁垸

1-6 2-氨甲基吡啶

表 1中的配体 1, 2-环己二胺可以是反式- ( 1R, 2R) -环己二胺, 反式- ( 1S, 2S) -环己 二胺, 顺式- ( R, S) -环己二胺或顺式- ( S, R) -环己二胺, 消旋反式 -1, 2-环己二胺, 消 旋顺式 -1, 2-环己二胺之中的任意一种。

本发明所提供的式 (I )所示的用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物 用下述的方法来完 成, 见反应式:

方法 A:

(ΠΙ) (II) (I) 方法 B:

(ΠΙ) (II) (I) 在方法 A中, 当 (III ) 中 M是氢原子时, 反应通过使用适当的无机碱, 例如氢氧化钠, 氢氧化钾, 碳酸钠, 碳酸氢钠, 碳酸钾, 氢氧化锂以及氢氧化铯等来调节反应水溶液的 pH维 持在 7-9之间来完成式(I )所示配合物的制备; 当 M为金属原子时, 例如: 钠原子、 钾原子、 锂原子、 钡原子或铯原子, 反应可在水溶液中顺利进行, 必要时使用少量的上述无机碱的水 溶液维持反应溶液的 pH在 7-9之间即可完成式 (I ) 所示配合物的合成。

在方法 B中, 当 M是氢原子时, 反应通过使用等当量的氢氧化钡作为无机碱, 在水溶液中 完成与式 (Π ) 所示的金属铂硫酸盐化合物的缩合反应来制备 式 (I ) 所示配合物。 由方法 B 制备本发明配合物时, 亦可以使用事先制得钡盐, 即两个 M共同代表一个钡原子, 与式 (II ) 所示的金属铂硫酸盐配合物在水溶液中进行反 应来完成配合物的制备过程。

上述反应的溶剂最好使用去离子水, 反应温度一般在室温或者根据需要加热到 60至 90°C 进行反应。

方法 A和 B中式 (II ) 所表示的化合物可以通过相应的顺 -二氯化铂与 X和 Y的配合物, 与硝酸银或硫酸银反应而制备, 例如: 顺-二氯- ( 1, 2-二氨基环己垸) 合铂与 2当量的硝酸 银或 1 当量的硫酸银反应而制备。 该反应在水溶液中进行, 使用的水最好是去离子水。 反应 温度在室温比较合适。

如此所得到的化合物 (Π ) 与事先制备好的化合物 (III ) 用蒸馏水或者去离子水作溶剂 进行反应。 每当量的化合物 (III ) 选用 0. 5 - 4当量的化合物 (11 ), 优选条件是 1至 2当 量。 反应条件是在 pH=7-9的条件下完成, 该条件可以通过使用适当的碱来维持反应介质 而达 到。 该碱的种类最好是无机碱, 例如氢氧化钠, 氢氧化钾, 氢氧化钡等, 碳酸钠, 碳酸钾, 碳酸氢钠。 最好是使用这些碱的大约 1 当量浓度 (1N) 的水溶液。 反应可以在一个比较宽的 温度范围内来进行, 例如选择在 0-100°C的温度范围来进行上述反应。 最好是从室温到 90°C, 并同时伴随搅拌为好。 根据不同的目标产物反应需要的时间变化范围 也很宽。 根据不同反应 物的性质, 一般需要 1小时到 30天来完成。 更多的情况下需要 10小时至 15天的时间。

很多方法可以被用来精制上述反应中得到的生 成物(1 )。例如反应完成后的混合物可以先 通过过滤除去可能生成的沉淀物, 然后通过减压蒸馏浓缩, 然后加入有机溶剂, 使所要的目 标化合物(I )沉淀析出。一般选择能够与水互溶的有机溶 , 例如一种醇(例如甲醇, 乙醇, 丙醇, 丁醇, 异丙醇等), 或者与水有一定互溶的一种醚 (例如二乙醚, 甲基叔丁基醚, 四氢 呋喃, 乙二醇二乙醚, 乙二醇二甲醚等), 最后将得到的沉淀收集起来, 例如通过过滤, 就可 以得到所需要的式 (I ) 所表示的化合物。 提纯和精制上述反应中得到的生成物 (I ) 也可以 用色谱等的方法。 例如用离子交换树脂, 或者用制备液相色谱。 液相色谱分离精制一般使用 甲醇和水作为移动相来进行。

本发明化合物 (111 ), 可以由下述的反应式所给出的以葡萄糖为例的 方法 C, D或者方法 E,F中的任意一种来进行制备- 方法 C:

方法 D: 10

以葡萄糖为例, 在方法 C中, 作为与糖反应的含氟 2-位取代丙二酸酯衍生物, 可以通过使用 卤代垸基醇与氟代丙二酸酯化合物例如氟代丙 二酸二甲酯, 氟代丙二酸二乙酯, 氟代丙二酸 二苯甲酯, 氟代丙二酸环异内酯等按照文献已知的一般方 法 (例如: Journal of the American Chemical Society, 131 (8), 2786-2787; 2009 )来制备。得到的含氟丙二酸 _2_垸基醇衍生物与 D_葡萄 糖可以在路易斯酸存在下在溶剂中进行缩合反 应,从而得到 2-氟代 -2-垸基取代丙二酸酯的葡 萄糖苷化合物。 缩合反应的条件是针对葡萄糖化合物使用 0. 1-50当量的含氟丙二酸衍生物, 或者相反针对含氟丙二酸衍生物使用 0. 1-50当量的葡萄糖。使用的路易斯酸可以是 BF 3 ,SnCl 4 , FeCl 3 , A1C1 3 , 盐酸, 对甲苯磺酸, 樟脑磺酸等, 路易斯酸的量相对于葡萄糖可以是 0. 1-10 当量。 所使用的溶剂可以是四氢呋喃, 二氯甲垸, 甲苯, 乙二醇二甲醚, 乙二醇二乙醚等也 可以使用两种反应物中的任意一种当作溶剂来 进行该反应。 反应的温度可以从 o°c到 100°C, 一般可以在 60-80°C加热完成该反应。反应所需要的时间根 反应物的不同而不同, 一般 1小 时至 7天可以完成。 得到的反应产物可以通过一系列的提纯条件来 进行精制, 一般可以使用 硅胶层析分离法, 或者液相色谱柱分离法。 得到的该产物, 经过除去丙二酸的保护基就可以 最后得到所需要的式(III )所表示的化合物。脱保护的方法根据使用的 护基的不同而不同, 如果使用氟代丙二酸二苯甲基酯, 可以使用加氢还原的方法进行脱保护, 如果使用氟代丙二 酸二乙酯或者氟代丙二酸环异内酯进行反应时 , 脱保护反应可以使用无机碱在甲醇 -水, 或者 THF-水溶剂中来进行,有机溶剂与水的比例一 为 1 : 1-4 : 1。所使用的无机碱可以是氢氧化钠, 氢氧化钾,氢氧化钡,氢氧化锂等。反应温度 一般为室温至 60°C,反应时间一般为 1-24小时。 脱保护生成的化合物的提纯可以使用硅胶层析 法或者离子交换树脂过滤法, 或者使用液相色 谱法来完成, 如果用蒸馏法直接除去反应溶剂, 所得到的生成物将会是相应的金属羧酸盐。

如方法 D所示, D-葡萄糖亦可以先转化成相应的乙酰化葡萄糖 然后再实施与含氟 2-位 取代丙二酸酯衍生物的缩合反应, D-葡萄糖的乙酰化可以按照文献报道的方法实 , 例如在 吡啶中采用乙酸酐作为乙酰化试剂在室温或者 在 60°C加热 1-24小时即可完成。方法 D中除乙 酰化以外的各个步骤的反应条件与方法 C中所描述的相同。

方法 E和 F所示的制备方法是将卤代醇先与葡萄糖或者 酰化葡萄糖在路易斯酸存在下 进行缩合, 然后进行与丙二酸酯衍生物的取代反应最后获 得化合物 (III ) 的制备路线。 所得 到的丙二酸酯的二位氟取代反应,可以使用代 表性的氟取代反应试剂 NFSI,或者 Selectfluor 来进行。 反应一般在 THF或者 DMF或者乙醚溶剂中将丙二酸酯用等当量或者过 量的碱处理后, 加入上述氟取代反应试剂来完成。 所使用的碱可以是氢化钠, 碳酸钾, 碳酸钠, 碳酸铯, 碳 酸氢钠等, 氟取代试剂的当量为丙二酸酯的 1-3倍, 反应温度一般在 0°C至 60°C, 最好在室 温条件下搅拌完成。 上述制备路线中涉及葡萄糖的乙酰化, 路易斯酸存在下的缩合反应, 丙 二酸酯的 2-位垸基化取代反应以及最后的脱保护反应, 其反应条件和实施方法与方法 C和方 法 D中所叙述的相同。

主要实验仪器: 核磁共振谱仪: BRUKER AVANCE III, 400MHz; 分析液相色谱仪: 北 京创新通恒 LC3000 型高效液相色谱仪, SPD-lOATvp 双波长紫外检测器, 7725i 手动进样器, CLASS- VP色谱工作站; 分析色谱柱: DaisoGel, C18, 4.6 250cm, 5μηι KNAUER德国; 半 制备液相色谱仪: 创新通恒 LC3000 半制备液相色谱, SPI001 ; 半制备色谱柱: DaisoGel 250x20mmID, C18, ΙΟμηΐ; 质谱仪: Agilent 6310 Ion Trap LC/MS; 令冻干燥机: FD-lc-50冻 干机 (北京博医康实验仪器有限公司)。

实施例 1 : ( 1 ) 1-0-D-葡萄糖苷 -2-溴 -乙垸 (IV-1 ) 制备:

(IV-1 )

1 ) 在室温条件下将葡萄糖 (2.7g) 加入到 2-溴乙醇 (10ml) , 冷却到 0°C, 用氮气置换烧瓶 内空气, 在氮气保护下慢慢滴加 1ml三氟化硼-乙醚配合物;

2) 将反应液在 0°C搅拌 15分钟, 然后慢慢升温到室温并搅拌 30分钟, 然后将反应液加热到 80°C, 在 80°C反应 5小时; 反应完成后, 旋蒸除去溶剂, 使用硅胶柱色谱(二氯甲垸: 甲醇, 6: 1)对反应生成物实施简单纯化,得到粗产品 2.3g (IV-1 ) 。 质谱: MS, m/z: 287.23 [M+H]+ (2) l-O- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -2-溴 -乙焼 (V-1 ) 的制备:

在室温条件下, 将上一步反应得到的产品 1-0-D-葡萄糖苷 -2-溴 -乙垸 (IV-1 ) 2.3g溶解于 吡啶与乙酸酐 (7ml : 7ml) 中, 搅拌过夜, 用 TLC监测反应终点。 反应完成后, 加入 100ml 乙酸乙酯, 用体积浓度为 5%的盐酸水溶液(2x25ml)洗涤, 将水相用乙酸乙酯 (2><25ml)萃 取, 合并有机相。 将有机相依次用饱和氯化铵水溶液 (l x lOOml), 蒸馏水 (l >< 100ml), 饱和 碳酸氢钠水溶液(l x lOOml), 饱和氯化钠水溶液(l x lOOml)洗涤, 用无水硫酸钠干燥。 用旋 转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到微黄色粗产品。 得到的粗产品经硅胶柱色谱纯化 (石油醚: 乙酸 乙酯, 3 : 1 ), 得到无色油状目的产物 2.5g (V-l )。

核磁共振谱 (400 MHz ,CDC13 ),ppm: 5.45 ( lH,三重峰, J=9.6Hz); 5.15 ( 1H,双重峰, J=4Hz); 5.02 ( 1H, 三重峰, J=9.6Hz); 4.80-4.83 ( 1H, 多重峰); 4.19-4.23 ( 1H, 多重峰); 4.04-4.15

(2H, 多重峰); 3.92-4.00 ( 1H, 多重峰); 3.75-3.85 ( 1H, 多重峰); 3.49 (2H, 三重峰, J=6Hz); 1.91-2.11 ( 12H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 455.15 [M+H] +

( 3 ) 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丙垸 -3,3-二甲酸二乙酯 (VI-1 ) 的制备:

(VI-1)

将上一步反应得到的产品 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -2-溴 -乙焼 (V-1) (2.5g) 溶解于 5ml 干燥的 N, N-二甲基甲酰胺中,向反应液中加入碳酸钾( 3g ),丙二酸二乙酯( 1.76g ), 室温搅拌过夜。 用 TLC监测反应终点, 待反应完成后, 向反应液中加入 100ml乙酸乙酯, 然 后用饱和氯化铵水溶液(1x50ml)洗涤, 将水相用乙酸乙酯萃取(2x25ml), 合并有机相。 将 有机相依次用饱和氯化铵水溶液(lxlOOml), 蒸馏水(lxlOOml),饱和氯化钠溶液( 1x100ml) 洗涤, 然后用无水硫酸钠干燥, 用旋转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到的淡黄色油状物用硅胶柱色 谱纯化 (石油醚: 乙酸乙酯, 3 : 1), 得到无色透明油状目的产物 2.6g (VI-l)o

核磁共振谱 (400 MHz , CDC13), ppm: 5.42 ( 1H, 三重峰, J=9.6Hz); 4.96-5.10 (2H, 多 重峰); 4.78-4.90 (1H, 多重峰); 4.03-4.33 (5H, 多重峰); 3.92-4.02 ( 1H, 多重峰); 3.71-3.87 (1Η, 多重峰); 3.71-3.87 (1Η, 多重峰); 3.55 ( 1H, 三重峰, J=8Hz); 3.40-3.50 ( 1H, 多重峰); 2.13-2.28 (2H, 多重峰); 1.94-2.14 (12H, 多重峰); 1.15-1.35 (6H, 多重峰)。 质 谱: MS, m/z: 535.34 [M+H] +

(4) 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丙垸 -3-氟 -3,3-二甲酸二乙酯 (VII-1) 的制备:

、、、、、

(VII-1)

将 l-O- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丙垸 -3,3-二甲酸二乙酯(VI-1) 2.6g溶解在 20mL 干燥的四氢呋喃中, 冷却到 0°C。 用氮气置换烧瓶内空气, 在氮气保护下缓慢加入 235mg氢 化钠固体 (60%)。 反应液升温至室温, 搅拌 12小时。 向反应液中加入 2g 1-氟甲基 -4-氟 -1,4- 二氮双环 [2.2.2.]辛垸双氟硼酸盐,反应液室温反应 24 小时, 旋蒸除去溶剂。 向反应液中加入 100ml乙酸乙酯,然后用饱和氯化铵水溶液(1x50 ml)洗涤,将水相用乙酸乙酯萃取(2><25ml) 合并有机相。 将有机相依次用饱和氯化铵水溶液 (lxlOOml), 蒸馏水 (lxlOOml), 饱和氯化 钠水溶液 (1x100ml)洗涤, 然后用无水硫酸钠干燥, 用旋转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到的淡黄 色油状物用硅胶柱色谱纯化 (石油醚: 乙酸乙酯, 3 : 1), 得到无色透明油状目的产物 1.8g (VII-1 )。

核磁共振谱 (400 MHz , CDC13), ppm: 5.39 ( 1H, 三重峰, J=9.6Hz); 4.95-5.10 (2H, 多 重峰); 4.75-4.90 (1H, 多重峰); 4.20-4.45 (5H, 多重峰); 4.03-4.15 ( 1H, 多重峰); 3.95-4.05 (1Η, 多重峰); 3.85-3.95 (1Η, 多重峰); 3.45-3.60 ( 1H, 多重峰); 2.48-2.65 (2H, 双 三重峰, J=20Hz, 6Hz); 1.90-2.15 (12H, 多重峰); 1.20-1.40 (6H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 553.29 [M+H] +

(5) l-O- (D-葡萄糖苷) -丙垸 -3-氟 -3,3-二甲酸 (III-1) 的制备-

(III— 1)

1) 将 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丙垸 -3-氟 -3,3-二甲酸二乙酯 (VII-1) (1.8g, ) 溶解于 5mL甲醇中。 将氢氧化钠 (lg) 溶解于 10mL水中, 室温下加入到反应液中, 然后升 温至 60 V反应 24小时。 用 TLC监测反应终点。

2) 待反应完成后, 用旋转蒸发仪除去甲醇, 使用强酸性阳离子交换树脂处理产品。 用水洗脱 得到的水溶液用冷冻干燥机干燥后得到无色粘 稠状液体 lg (III-1), 粗产品直接用于下步反 应。

质谱: MS, m/z: 329.31 [M+H] +

(6) 顺-【反式- (1R, 2R) -二胺基环己垸】 铂 (II) (1-0-D-葡萄糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲 酸酯) (1-1) 的制备-

1) 将1-0-0-葡萄糖苷-丙垸-3-氟-3,3-二甲酸粗产品 (111-1) ( lg) 溶解于 10mL水中, 用 氢氧化钡水溶液调节反应液 PH到 7, 室温搅拌 30分钟;

2) 在氮气保护下将反式- (1R, 2R) 环己二胺硫酸铂 (1.2g) 溶解于 2ml水中, 加入到 1) 的反应液中, 用氢氧化钡水溶液调节 pH到 7, 室温避光搅拌过夜;

3) 待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC分离并使用冷冻干燥 机冻干, 得到 1.2g最终产品 (1-1) , 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.86 (0.8H, 双重峰, J=3.6Hz, α—异构体); 4.42 (0.2Η, 双重峰, J=7.2Hz, β—异构体); 3.10-4.00 (10Η, 多重峰); 2.20-2.45 (2Η, 多 重峰); 1.96 (2Η, 两重峰, J=12Hz); 1.49 (2H, 两重峰, J=8Hz); 1.12-1.30 (2H, 单 峰); 0.95-1.10 (2H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 636.16 [M+H] +

实施例 2: (1) 1-O-D-葡萄糖苷 -3-溴 -丙垸 (IV-2) 的制备:

(IV-2)

在室温条件下将葡萄糖 (1.8g)加入到 3-溴丙醇 (8mL), 冷却到 0°C, 用氮气置换烧瓶内 空气, 在氮气保护下以慢慢滴入 0.7mL三氟化硼-乙醚配合物; 将反应液在 0°C搅拌 15分钟, 升至室温搅拌 30分钟, 然后加热到 80°C, 在 80°C反应 5小时。 反应完成后, 旋蒸除去溶剂, 使用硅胶柱色谱(二氯甲垸: 甲醇,体积比 6: 1)进行简单纯化后,得到粗产品 2g (IV-2)。 质 谱: MS, m/z: 301.23 [M+H] + (2) 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -3-溴 -丙垸 (V-2) 的制备:

(V-2)

在室温条件下, 将上一步反应得到的 1-0-D-葡萄糖苷 -3-溴 -丙垸(IV-2)粗产品 2g溶解于 吡啶与乙酸酐 (6ml : 6ml) 中, 搅拌过夜, 用 TLC监测反应终点。 反应完成后, 加入 100ml 乙酸乙酯, 用体积浓度为 5%的盐酸水溶液(2x25ml)洗涤, 将水相用乙酸乙酯 (2><25ml)萃 取, 合并有机相。 将有机相依次用饱和氯化铵水溶液 (lxlOOml), 蒸馏水 (lxlOOml), 饱和 碳酸氢钠水溶液(lxlOOml), 饱和氯化钠水溶液(lxlOOml)洗涤, 用无水硫酸钠干燥。 用旋 转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到微黄色粗产品。 得到的粗产品经硅胶柱色谱纯化 (石油醚: 乙酸 乙酯, 3 : 1), 得到无色油状目的产物 2.1g (V-2)。

核磁共振谱 (400 MHz, CDC13), ppm: 5.47 ( 1H, 三重峰, J=9.6Hz); 5.00-5.15 (2H, 多 重峰); 4.85-4.95 (1Η, 多重峰); 4.20-4.40 (1H, 多重峰); 4.07-4.18 ( 1H, 多重峰) 4.00-4.07 (1H, 多重峰); 3.80-3.95 ( 1H, 多重峰); 3.40-3.70 (3H, 多重峰); 1.90-2.30 (14H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 469.15 [M+H] +

(3) 1-0- (2,3,4,6-四乙 VI-2) 的制备:

将上一步反应得到的产品 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -3-溴 -丙垸(V-2) (2.1g) 溶解于 15ml 干燥的 N, N-二甲基甲酰胺中, 向反应液中加入碳酸钾 (2.5g), 丙二酸二乙酯 (1.45g), 在室温搅拌过夜。 用 TLC监测反应终点, 待反应完成后, 向反应液中加入 100ml 乙酸乙酯, 用饱和氯化铵水溶液(1x50ml)洗涤, 将水相用乙酸乙酯萃取(2x25ml), 合并有 机相。 将有机相依次用饱和氯化铵水溶液 (lxlOOml), 蒸馏水 (lxlOOml), 饱和氯化钠溶液 (lxlOOml)洗涤, 然后用无水硫酸钠干燥, 用旋转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到的淡黄色油状物 用硅胶柱色谱纯化 (石油醚: 乙酸乙酯, 3: 1), 得到无色透明油状目的产物 2.2g (VI-2)o 核磁共振谱 (400 MHz, CD3C13), ppm: 5.45 ( 1H, 三重峰, J=9.6Hz); 4.95-5.15 (2H, 多 重峰); 4.75-4.93 (1Η, 多重峰); 4.13-4.35 (5H, 多重峰); 4.03-4.11 ( 1H, 多重峰) 3.93-4.02 ( 1H, 多重峰); 3.60-3.80 ( 1H, 多重峰); 3.39-3.50 ( 1H, 多重峰); 3.25-3.38 ( 1H, 三重峰, J=8Hz); 1.80-2.30 (14H, 多重峰); 1.50-1.75 (2H, 多重峰); 1.10-1.45 (6H, 多重 峰)。 质谱: MS, m/z: 549.50 [M+H] +

(4) 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸二乙酯 (VII-2) 的制备: (VII-2)

将 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丁垸 -4,4-二甲酸二乙酯(VI-2) 2.2g溶解在 20mL 干燥的四氢呋喃中, 冷却到 0°C。 用氮气置换烧瓶内空气, 在氮气保护下缓慢加入 193mg氢 化钠固体(60%)。反应液升温至室温, 搅拌 12小时。 向反应液中加入 1.7g 1-氟甲基 -4-氟 -1,4- 二氮双环 [2.2.2.]辛垸双氟硼酸盐,反应液室温反应 24 小时, 旋蒸除去溶剂。 向反应液中加入 100ml乙酸乙酯,然后用饱和氯化铵水溶液(1 x50ml)洗涤,将水相用乙酸乙酯萃取(2><25m l), 合并有机相。 将有机相依次用饱和氯化铵水溶液 (I x lOOml), 蒸馏水 (I x lOOml), 饱和氯化 钠水溶液 (I x lOOml)洗涤, 然后用无水硫酸钠干燥, 用旋转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到的淡黄 色油状物用硅胶柱色谱纯化 (石油醚: 乙酸乙酯, 3 : 1 ), 得到无色透明油状目的产物 1.6g ( VII-2 )o

核磁共振谱 (400 MHz, CDC13 ), ppm: 5.49 ( 1H, 三重峰, J=6Hz); 5.05-5.20 (2H, 多重 峰); 4.80-5.00 ( 1H, 多重峰); 4.25-4.30 ( 5H, 多重峰); 4.10-4.15 ( 1H, 多重峰); 3.98-4.05

( 1Η, 多重峰); 3.70-3.80 ( 1Η, 多重峰); 3.45-3.55 ( 1H, 多重峰); 2.25-2.45 (2H, 双三 重峰, J=20Hz, 6Hz); 1.90-2.15 ( 12H, 多重峰); 1.65-1.85 (2H, 多重峰); 1.15-1.35 (6H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 567.29 [M+H] +

( 5 ) 1-0-D-葡萄糖苷 -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸 (ΠΙ-2) 的制备-

( III- 2)

1 ) 将 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸二乙酯 (VII-2) ( 1.6g) 溶 解于 5mL甲醇中。 将氢氧化钠 (900mg) 溶解于 10mL水中, 在室温慢慢加入到反应液中, 然后升温至 60°C反应 24小时。 用 TLC监测反应终点。

2) 待反应完成后, 用旋转蒸发仪除去甲醇, 使用强酸性阳离子交换树脂处理产品。 用水洗脱 得到的水溶液用冷冻干燥机干燥后得到无色粘 稠状液体 950mg ( III-2) 。 粗产品直接用于下 一步反应。

质谱: MS, m/z: 343.19 [M+H] +

(6) 顺-【反式- ( 1R, 2R) -二胺基环己垸】 铂 (II) ( 1-0-D-葡萄糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲 酸酯) (1-2) 的制备-

1 ) 将 1-O-D-葡萄糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸粗产品 ( III- 2) (900mg) 溶解于 10mL水中, 用氢氧化钡水溶液调节反应液 pH到 8, 在室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将反式- ( 1R, 2R) 环己二胺硫酸铂 (lg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中 的反应液中, 用氢氧化钡水溶液调节 pH到 8, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC分离并使用冷冻干燥 机冻干, 得到 lg最终产品, 白色固体 (1-2)。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.88 ( 1H, 双重峰, J=3.6Hz, α—异构体); 3.20-3.95 (9Η, 多重峰); 2.80-3.10 ( 1Η, 多重峰); 2.30-2.45 (2H, 多重峰); 1.83-2.07 (2H, 多 重峰) 1.60-1.75 (2H, 多重峰); 1.51 (2H, 两重峰, J=8Hz); 1.12-1.35 (2H, 多重峰); 0.90-1.11 (2H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 650.35 [M+H] +

实施例 3 : 二氨基铂 (II -0-D-葡萄糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸酯) (1_3) 的制备-

1 )将 lOOmg的 1-0-D-葡萄糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸(III-1 )粗产品溶于 5ml的去离子水, 用氢氧化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将二氨硫酸铂 (lOOmg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中的反应液中, 用氢 氧化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 95mg最终产品 (1-3), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.88 (0.8H,双重峰, J=3.6Hz, α—异构体); 4.44 (0.2Η, 双重峰, J=7.2Hz, β—异构体); 3.20-4.00 ( 10Η, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 556.33 [M+H] + 实施例 4: 二氨基铂 (I -0-D-葡萄糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸酯) ( 1—4) 的制备-

1) 将 lOOmg的 1-0-D-葡萄糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸( ΠΙ-2)粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2)在氮气保护下将二氨硫酸铂 (90mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中的反应液中, 用氢氧 化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3)待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 85mg最终产品 (1-4), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.87 ( 1H, 双重峰, J=3.6Hz, α—异构体); 3.36-4.00

(9Η, 多重峰); 2.80-3.15 ( 1Η, 多重峰); 1.55-1.75 (2Η, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 570.36 [M+H] +

实施例 5: (1) 1-O-D-半乳糖苷 -2-溴 -乙垸 (IV-5) 制备:

(IV-5)

1) 在室温条件下将半乳糖 (2.7g, 15mmol)加入到 2-溴乙醇 (10ml) , 冷却到 0°C, 用氮气 置换烧瓶内空气, 在氮气保护下慢慢滴加 lml三氟化硼-乙醚配合物。

2) 将反应液在 0°C搅拌 15分钟, 然后慢慢升温到室温并搅拌 30分钟, 然后将反应液加热到 80°C, 在 80°C反应 5小时。 反应完成后, 旋蒸除去溶剂, 使用硅胶柱色谱(二氯甲垸: 甲醇, 6: 1)对反应生成物实施简单纯化,得到粗产品 2.4g (IV-5) 。 质谱: MS, m/z: 287.03 [M+H]+

(2) 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-半乳糖苷) -2-溴 -乙焼 (V-5) 的制备:

(V-5)

在室温条件下, 将上一步反应得到的产品 1-0-D-半乳糖苷 -2-溴 -乙垸 (IV-5) 2.4g溶解于 吡啶与乙酸酐 (7ml: 7ml) 中, 搅拌过夜, 用 TLC监测反应终点。 反应完成后, 加入 50ml 乙酸乙酯, 用体积浓度为 5%的盐酸水溶液(2x25ml)洗涤, 将水相用乙酸乙酯 (2><25ml)萃 取, 合并有机相。 将有机相依次用饱和氯化铵水溶液 (lxlOOml), 蒸馏水 (lxlOOml), 饱和 碳酸氢钠水溶液(lxlOOml), 饱和氯化钠水溶液(lxlOOml)洗涤, 用无水硫酸钠干燥。 用旋 转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到微黄色粗产品。 得到的粗产品经硅胶柱色谱纯化 (石油醚: 乙酸 乙酯, 3 : 1), 得到白色固体目的产物 2.6g (V-5)。

核磁共振谱 (400 MHz , CDC13), ppm: 5.46 ( 1H, 两重峰, J=4Hz); 5.33-5.45 ( 1H, 多重 峰); 5.19 (1Η, 两重峰, J=4Hz); 5.07-5.15 ( 1H, 多重峰); 4.33 ( 1H, 三重峰, J=6Hz) 4.06-4.13 (2H, 多重峰); 3.95-4.05 ( 1H, 多重峰); 3.77-3.88 ( 1H, 多重峰); 3.51 (2H, 三重峰, J=4Hz); 1.95-2.20 (12H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 455.16 [M+H] +

(3) 1-0- (2,3,4,6-四乙酰 酸二乙酯 (VI-5) 的制备:

(VI-5) 将上一步反应得到的产品 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-半乳糖苷) -2-溴 -乙焼 (V-5) (2.6g) 溶解于 15ml 干燥的 N, N-二甲基甲酰胺中, 向反应液中加入碳酸钾 (3g, 22mmol), 丙二酸 二乙酯(1.8g),室温搅拌过夜。用 TLC监测反应终点,待反应完成后, 向反应液中加入 100ml 乙酸乙酯, 然后用饱和氯化铵水溶液(1x50ml)洗涤, 将水相用乙酸乙酯萃取(2x25ml), 合 并有机相。 将有机相依次用饱和氯化铵水溶液 (IxlOOml), 蒸馏水 (IxlOOml), 饱和氯化钠 溶液 (IxlOOml)洗涤, 然后用无水硫酸钠干燥, 用旋转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到的淡黄色油 状物用硅胶柱色谱纯化 (石油醚: 乙酸乙酯, 3: 1), 得到白色固体目的产物 2.8g (VI-5)o 核磁共振谱 (400 MHz , CDC13), ppm: 5.40 ( 1H, 两重峰, J=4Hz); 5.23-5.33 ( 1H, 多重 峰); 5.00-5.15 (2H, 多重峰); 4.20-4.40 (5H, 多重峰); 3.90-4.10 (2H, 多重峰); 3.73-3.90

(1Η, 多重峰); 3.53-3.65 (1Η, 多重峰); 3.49 ( 1H, 三重峰, J=4Hz); 1.90-2.20 (14H, 多重峰); 1.20-1.40 (6H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 535.26 [M+H] +

(4) 1-0- (2,3,4,6-四乙 3-二甲酸二乙酯 (VII-5) 的制备:

(VII-5)

将 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-半乳糖苷) -丙垸 -3,3-二甲酸二乙酯(VI-5) 2.8g溶解在 20mL 干燥的四氢呋喃中, 冷却到 0°C。 用氮气置换烧瓶内空气, 在氮气保护下缓慢加入 250mg氢 化钠固体(60%)。反应液升温至室温, 搅拌 12小时。 向反应液中加入 2.2g 1-氟甲基 -4-氟 -1,4- 二氮双环 [2.2.2.]辛垸双氟硼酸盐,反应液室温反应 24 小时, 旋蒸除去溶剂。 向反应液中加入 100ml乙酸乙酯,然后用饱和氯化铵水溶液(1x50 ml)洗涤,将水相用乙酸乙酯萃取(2><25ml) 合并有机相。 将有机相依次用饱和氯化铵水溶液 (IxlOOml), 蒸馏水 (IxlOOml), 饱和氯化 钠水溶液 (IxlOOml)洗涤, 然后用无水硫酸钠干燥, 用旋转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到的淡黄 色油状物用硅胶柱色谱纯化(石油醚: 乙酸乙酯, 3 : 1), 得到白色固体目的产物 2g ( VII-5 )o 核磁共振谱 (400 MHz , CDC13), ppm: 5.42 (1H,单峰); 5.23-5.35 ( 1H,多重峰); 5.00-5.13 (2H, 多重峰); 4.18-4.40 (5H, 多重峰); 4.00-4.15 (2H, 多重峰); 3.80-3.95 ( 1H, 多 重峰); 3.45-3.55 (1Η, 多重峰); 2.45-2.63 (2H, 双三重峰, J=20Hz, 6Hz); 1.90-2.18 (12H, 多重峰); 1.25-1.35 (6H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 553.12 [M+H] +

(5) 1-0-D-半乳糖苷 -丙 -3-氟 -3,3-二甲酸 (ΠΙ-5) 的制备:

(III— 5)

1) 将 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-半乳糖苷) -丙垸 -3-氟 -3,3-二甲酸二乙酯 (VII-5) (2g) 溶解 于 5mL甲醇中。 将氢氧化钠 (1.4g) 溶解于 10mL水中, 室温下加入到反应液中, 然后升温 至 60 V反应 24小时。 用 TLC监测反应终点。

2) 待反应完成后, 用旋转蒸发仪除去甲醇, 使用强酸性阳离子交换树脂处理产品。 用水洗脱 得到的水溶液用冷冻干燥机干燥后得到无色粘 稠状液体 l.lg (ΙΠ-5) , 粗产品直接用于下步 反应。

质谱: MS, m/z: 329.22 [M+H] +

(6) 顺-【反式- ( 1R, 2R) -二胺基环己垸】 铂 (II) ( 1-0-D-半乳糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲 酸酯) (1-5) 的制备-

( 1-5)

1 ) 将 1-0-D-半乳糖苷 -丙垸 -3-氟 -3,3-二甲酸 (ΠΙ-5) 粗产品 (l. lg) 溶解于 15mL水中, 用 氢氧化钡水溶液调节反应液 pH到 7, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将反式- ( 1R, 2R) -环己二胺硫酸铂 (1.3g) 溶解于 5ml水中, 加入到 1 ) 的反应液中, 用氢氧化钡水溶液调节 pH到 7, 室温避光搅拌过夜。

3 ) 待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备高压液相色谱分离, 使用冷 冻干燥机冻干得到 1.2g最终产品 (1-5) 。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.90 ( 1H, 两重峰, J=3.6Hz); 4.10-4.35 ( 1H, 多 重峰); 3.40-4.10 ( 8H, 多重峰); 2.80-3.20 ( 1H, 多重峰); 2.20-2.50 (2H, 多重峰); 1.80-2.10

(2H, 多重峰); 1.40-1.60 (2H, 双重峰, J=8Hz); 0.90-1.30 (4H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 636.13 [M+H] +

实施例 6: ( 1 ) 1-O-D-半乳糖苷 -3-溴 -丙垸 (IV-6) 的制备:

采用实施例 2中与制备 1-0-D-葡萄糖苷 -3-溴-丙垸相同的操作方法, 用半乳糖取代反应条 件中的葡萄糖,从 1.8g半乳糖最后制得 2.05g目的粗产物 (IV-6)。质谱: MS, m/z: 301.03 [M+H] + (2) 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-半乳糖苷) -3-溴 -丙垸 (V-6) 的制备:

采用实施例 2中与制备 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -3-溴-丙垸相同的操作方法, 用 1-0-D-半乳糖苷 -3-溴 -丙垸 (IV-6) 取代反应条件中的 1-0-D-葡萄糖苷 -3-溴 -丙垸 (IV-2), 从 2.05gl-O-D-半乳糖苷 -3-溴-丙垸最后制得 2.2g白色固体目的产物(V-6)。 质谱: MS, m/z: 469.25 [M+H] +

(3 ) 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-半乳糖苷) -丁垸 -4,4-二甲酸二乙酯 (VI-6) 的制备: (VI-6)

采用实施例 2中与制备 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丁垸 -4,4-二甲酸二乙酯相同 的操作方法, 用 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-半乳糖苷) -3-溴 -丙垸 (V-6) 取代反应条件中的 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -3-溴 -丙垸 (V-2), 从 2.2gl-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-半 乳糖苷) -3-溴-丙垸最后制得 2.3g白色固体目的产物(VI-6)。质谱: MS, m/z: 549.33 [M+H] + (4) 1-0- (2,3,4,6-四乙 -二甲酸二乙酯 (VII-6) 的制备:

(VII-6)

采用实施例 2中与制备 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸二乙酯 相同的操作方法, 用 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-半乳糖苷) -丁垸 -4,4-二甲酸二乙酯 (VI-6)取 代反应条件中的 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丁垸 -4,4-二甲酸二乙酯 (VI-2), 从 2.3gl-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-半乳糖苷) -丁垸 -4,4-二甲酸二乙酯最后制得 1.7g白色固体目的 产物 (VII-6)。 质谱: MS, m/z: 567.36 [M+H] +

( 5 ) 1-0- (D-半乳糖苷) -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸 ( III- 6) 的制备:

( III- 6)

采用实施例 2中与制备 l-0- (D-葡萄糖苷) -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸相同的操作方法,用 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-半乳糖苷) -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸二乙酯取代反应条件中的 1-0- (2,3,4,6- 四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸二乙酯, 从 1.7gl-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-半乳 糖苷) -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸二乙酯最后制得 lg无色粘稠状液体目的产物 (111-6)。 质谱-

MS, m/z: 343.46 [M+H] +

(6) 顺-【反式- ( 1R, 2R) -二胺基环己垸】 铂 (II) ( 1-0-D-半乳糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲 酸酯) ( 1-6) 的制备-

1 )将 1-O-D-半乳糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸粗产品 (ΠΙ-6) ( lg)溶解于 10mL水中, 用氢 氧化钡水溶液调节反应液 pH到 8, 在室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将反式- ( 1R, 2R) -环己二胺硫酸铂 (1.2g) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中的反应液中, 用氢氧化钡水溶液调节 pH到 8, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC分离并使用冷冻干燥 机冻干, 得到 l. lg最终产品 (1-6), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.92 ( 1H, 双重峰, J=4Hz); 3.40-4.10 ( 8H, 多重 峰); 2.70-3.30 (2H, 多重峰); 2.25-2.40 (2H, 多重峰); 1.80-2.10 (2H, 多重峰); 1.60-1.70 (2H, 多重峰); 1.49 (2H, 两重峰, J=6Hz); 1.18-1.30 (2H, 宽峰); 1.00-1.16 (2H, 多 重峰)。 质谱: MS, m/z: 650.10 [M+H] +

实施例 7: 二氨基铂 (II -二甲酸酯) (1_7) 的制备-

1 ) 将 lOOmg的 1-0-D-半乳糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2)在氮气保护下将二氨硫酸铂 (90mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用氢氧化 钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 105mg最终产品 (1-7), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.90 ( 1H, 两重峰, J=3.6Hz) ;4.02-4.20 ( 1H, 多重 峰) ;3.40-4.00 ( 8H, 多重峰) ;2.95-3.30 ( 1H, 多重峰) ;质谱: MS, m/z: 556.08 [M+H] + 实施例 8: 二氨基铂 (II) ( 1-0-D-半乳糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸酯) ( 1—8) 的制备:

1) 将 lOOmg的 1-0-D-半乳糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2)在氮气保护下将二氨硫酸铂 (95mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用氢氧化 钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 75mg最终产品 (1-8), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz, D20), ppm: 4.91 ( 1H, 双重峰, J=4Hz) ;3.45-4.00 ( 8H, 多重 峰) ;2.68-3.30 (2H, 多重峰) ;1.60-1.75 (2H, 多重峰) ;质谱: MS, m/z: 570.23 [M+H] + 实施例 9:

( 1 ) 1-O-D-甘露糖苷 -2-溴 -乙垸 (IV-9) 制备:

1 ) 在室温条件下将甘露糖 (1.8g, 15mmol) 加入到 2-溴乙醇 (8ml) , 冷却到 0°C, 用氮气 置换烧瓶内空气, 在氮气保护下慢慢滴加 1ml三氟化硼-乙醚配合物。

2) 将反应液在 0°C搅拌 15分钟, 然后慢慢升温到室温并搅拌 30分钟, 然后将反应液加热到 80°C, 在 80°C反应 5小时。

3 )反应完成后, 旋蒸除去溶剂, 使用硅胶柱色谱 (二氯甲垸: 甲醇, 体积比 6: 1 )对反应生 成物实施简单纯化,得到粗产品 2.1g (IV-9)。 质谱: MS, m/z: 287.05 [M+H] +

(2) 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-甘露糖苷) -2-溴 -乙焼 (V-9) 的制备:

(V-9)

在室温条件下, 将上一步反应得到的产品 1-0-D-甘露糖苷 -2-溴 -乙垸 (IV-9) 2.1g溶解于 吡啶与乙酸酐 (7ml : 7ml) 中, 搅拌过夜, 用 TLC监测反应终点。 反应完成后, 加入 100ml 乙酸乙酯, 用体积浓度为 5%的盐酸水溶液(2x50ml)洗涤, 将水相用乙酸乙酯 (2><25ml)萃 取, 合并有机相。 将有机相依次用饱和氯化铵水溶液 (l x lOOml), 蒸馏水 (l x lOOml), 饱和 碳酸氢钠水溶液(l x lOOml), 饱和氯化钠水溶液(l x lOOml)洗涤, 用无水硫酸钠干燥。 用旋 转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到微黄色粗产品。 得到的粗产品经硅胶柱色谱纯化 (石油醚: 乙酸 乙酯, 3 : 1 ), 得到白色固体 2g (V-9)。

核磁共振谱 (400 MHz, CDC13 ), ppm: 5.18-5.40 (3H,多重峰); 4.90 ( 1H,单峰); 4.20-4.40 ( 1H, 多重峰); 4.08-4.18 (2H, 多重峰); 3.95-4.05 ( 1H, 多重峰); 3.80-3.94 ( 1H, 多 重峰); 3.53 (2H, 三重峰, J=6Hz); 1.95-2.20 ( 12H,多重峰);质谱: MS, m/z: 455.09 [M+H] + (3 ) 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-甘露糖苷) -丙垸 -3,3-二甲酸二乙酯 (VI-9) 的制备:

(VI-9)

将上一步反应得到的产品 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-甘露糖苷) -2-溴 -乙垸 (2g) 溶解于 15ml 干燥的 N, N-二甲基甲酰胺中, 向反应液中加入碳酸钾 (2.4g), 丙二酸二乙酯 (1.4g), 室温搅拌过夜。 用 TLC监测反应终点, 待反应完成后, 向反应液中加入 100ml乙酸乙酯, 然 后用饱和氯化铵水溶液(1x50ml)洗涤, 将水相用乙酸乙酯萃取(2x25ml), 合并有机相。 将 有机相依次用饱和氯化铵水溶液(lxlOOml), 蒸馏水(lxlOOml),饱和氯化钠溶液( 1x100ml) 洗涤, 然后用无水硫酸钠干燥, 用旋转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到的淡黄色油状物用硅胶柱色 谱纯化(石油醚: 乙酸乙酯, 3 : 1), 得到白色固体目的产物 2.1g (VI-9)o 核磁共振谱 (400 MHz, CDC13), ppm: 5.28 (2H,两重峰, J=4Hz); 5.20-5.25 ( 1H, 多重峰); 4.79 ( 1H, 单 峰); 4.15-4.35 (5H, 多重峰); 4.05-4.13 ( 1H, 多重峰); 3.90-4.03 ( 1H, 多重峰); 3.70-3.85

(1Η, 多重峰); 3.40-3.58 (2H, 多重峰); 2.17-2.35 (2H, 多重峰); 1.95-2.15 (12H, 多 重峰); 1.20-1.35 (6H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 535.18 [M+H] +

(4) 1-0- (2,3,4,6-四乙 3-二甲酸二乙酯 (VII-9) 的制备:

(VII-9)

将 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-甘露糖苷) -丙垸 -3,3-二甲酸二乙酯(VI-9) 2.1g溶解在 20mL 干燥的四氢呋喃中, 冷却到 0°C。 用氮气置换烧瓶内空气, 在氮气保护下缓慢加入 188mg氢 化钠固体 (60%)。反应液升温至室温,搅拌 12小时。加入 1.7g 1-氟甲基 -4-氟 -1,4-二氮双环 [2.2.2.] 辛垸双氟硼酸盐,反应液室温反应 24小时, 旋蒸除去溶剂。 向反应液中加入 100ml乙酸乙酯, 然后用饱和氯化铵水溶液 (1x50ml) 洗涤, 将水相用乙酸乙酯萃取 (2x25ml), 合并有机相。 将有机相依次用饱和氯化铵水溶液 (lxlOOml), 蒸馏水 (lxlOOml), 饱和氯化钠水溶液

(lxlOOml)洗涤, 然后用无水硫酸钠干燥, 用旋转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到的淡黄色油状物 用硅胶柱色谱纯化 (石油醚: 乙酸乙酯, 3: 1), 得到白色固体目的产物 1.5g ( VII-9 )o 核磁共振谱 (400 MHz, CDC13), ppm: 5.28 ( 1H, 三重峰, J=8Hz); 5.12-5.25 (2H, 多重 峰); 4.75 (1H, 单峰); 4.20-4.40 (5H, 多重峰); 4.00-4.15 (3H, 多重峰); 3.50-3.65 ( 1H, 多重峰); 2.50-2.75 (2H, 双三重峰, J=20Hz, 6Hz); 1.93-2.20 ( 12H, 多重峰); 1.20-1.35

(6H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 553.25 [M+H] +

(5) 1-0-D-甘露糖苷 - - 9) 的制备-

(III— 9) 1) 将 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-甘露糖苷) -丙垸 -3-氟 -3,3-二甲酸二乙酯 (VII-9) (1.5g, ) 溶解于 5mL甲醇中。 将氢氧化钠 (850mg) 溶解于 10mL水中, 室温下加入到反应液中, 然 后升温至 60°C反应 24小时。 用 TLC监测反应终点。

2) 待反应完成后, 用旋转蒸发仪除去甲醇, 使用强酸性阳离子交换树脂处理产品。 将用水洗 脱得到的水溶液用冷冻干燥机干燥后得到无色 粘稠状液体 890mg (III-9) , 粗产品直接用于 下步反应。 质谱: MS, m/z: 329.39 [M+H] +

(6) 顺-【反式- (1R, 2R) -二氨基环己垸】 铂 (II) (1-0-D-甘露糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲 酸酯) (1-9) 的制备-

1) 将 1-0-D-甘露糖苷 -丙垸 -3-氟 -3,3-二甲酸 (III- 9) 粗产品 (890mg) 溶解于 10mL水中, 用氢氧化钡水溶液调节反应液 pH到 7, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将反式- (1R, 2R) -环己二胺硫酸铂 (950mg) 溶解于 5ml水中, 加入到 1) 的反应液中, 用氢氧化钡水溶液调节 pH到 7, 室温避光搅拌过夜。

3) 待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备高效液相色谱分离并使用冷 冻干燥机冻干, 得到 900mg最终产品 (1-9) , 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.90 ( 1H,单峰); 3.30-4.00 (9H, 多重峰); 2.90-3.20 (1Η, 多重峰); 2.20-2.50 (2H, 多重峰); 1.90-2.10 (2H, 多重峰); 1.52 (2H, 两重峰, J=8Hz); 0.90-1.40 (4H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 636.19 [M+H] +

实施例 10:

(1) 1-0-D-甘露糖苷 -3-溴 -丙垸 (IV-10) 的制备:

(IV-10)

在室温条件下将甘露糖 (1.8g) 加入到 3-溴丙醇 (10mL), 冷却到 0°C, 用氮气置换烧瓶 内空气, 在氮气保护下以慢慢滴入 lmL三氟化硼-乙醚配合物。 将反应液在 0°C搅拌 15分钟, 升至室温搅拌 30分钟, 然后加热到 80°C, 在 80°C反应 5小时。 反应完成后, 旋蒸除去溶剂, 使用硅胶柱色谱 (二氯甲垸: 甲醇, 体积比 6: 1) 进行简单纯化后,得到粗产品 2g (IV-lO)o 质谱: MS, m/z: 301.11 [M+H] +

(2) 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-甘露糖苷) -3-溴 -丙垸 (V-10) 的制备:

在室温条件下, 将上一步反应得到的 1-0-D-甘露糖苷 -3-溴 -丙垸 (IV-10) 粗产品 2g溶解 于吡啶与乙酸酐(6ml: 6ml)中, 搅拌过夜, 用 TLC监测反应终点。反应完成后, 加入 100ml 乙酸乙酯, 用体积浓度为 5%的盐酸水溶液(2x50ml)洗涤, 将水相用乙酸乙酯 (2><25ml)萃 取, 合并有机相。 将有机相依次用饱和氯化铵水溶液 (lxlOOml), 蒸馏水 (lxlOOml), 饱和 碳酸氢钠水溶液(lxlOOml), 饱和氯化钠水溶液(lxlOOml)洗涤, 用无水硫酸钠干燥。 用旋 转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到微黄色粗产品。 的到得粗产品经硅胶柱色谱纯化 (石油醚: 乙酸 乙酯, 3 : 1), 得到白色固体目的产物 2.3g (V-10)o

核磁共振谱 (400 MHz, CDC13), ppm: 5.30-5.55 (3H, 多重峰); 4.93 ( 1H, 单峰) 4.20-4.38 (1H, 多重峰); 4.05-4.18 ( 1H, 多重峰); 4.00-4.04 ( 1H, 多重峰); 3.81-3.95

(1Η, 多重峰); 3.45-3.70 (3H, 多重峰); 1.90-2.30 (14H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 469.16 [M+H] +

(3) 1-0- (2,3,4,6-四乙 二乙酯 (VI-10) 的制备:

(VI-10)

将 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-甘露糖苷) -3-溴 -丙垸(V-10) (2.3g)溶解于 15ml 干燥的 N, N-二甲基甲酰胺中, 向反应液中加入碳酸钾(2.7g), 丙二酸二乙酯(1.5g), 在室温搅拌过夜。 用 TLC监测反应终点, 待反应完成后, 向反应液中加入 100ml乙酸乙酯, 用饱和氯化铵水溶 液(1x50ml)洗涤, 将水相用乙酸乙酯萃取(2x25ml), 合并有机相。 将有机相依次用饱和氯 化铵水溶液(lxlOOml), 蒸馏水(lxlOOml), 饱和氯化钠溶液(lxlOOml)洗涤, 然后用无水 硫酸钠干燥, 用旋转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到的淡黄色油状物用硅胶柱色谱纯化 (石油醚: 乙酸乙酯, 3 : 1), 得到白色固体目的产物 2.4g (VI-10)。

核磁共振谱 (400 MHz, CDC13), ppm: 5.15-5.40 (3H,多重峰); 4.78 (1H,单峰); 4.25-4.36 (1H, 多重峰); 4.15-4.19 (4H, 多重峰); 4.05-4.13 ( 1H, 多重峰); 3.90-4.03 ( 1H, 多 重峰); 3.65-3.80 (1H, 多重峰); 3.43-3.58 ( 1H, 多重峰); 3.36(1H,三重峰, J=6Hz); 1.88-2.20 (14H, 多重峰); 1.60-1.75 (2H, 多重峰); 1.10-1.35 (6H, 多重峰)。质谱: MS, m/z: 549.23 [M+H] +

(4) 1-0- (2,3,4,6-四乙 酯 (VII-10) 的制备:

采用实施例 2中与制备 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸二乙酯 相同的操作方法, 用 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-甘露糖苷) -丁垸 -4,4-二甲酸二乙酯 (VI-10) 取代反应条件中的 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丁垸 -4,4-二甲酸二乙酯 (VI-2), 从 2.3gl-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-甘露糖苷) -丁垸 -4,4-二甲酸二乙酯最后制得 1.8g白色固体目的 产物 (VII-10)。

质谱: MS, m/z: 567.39 [M+H] + (5) 1-O-D-甘露糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸 (111—10) 的制备:

采用实施例 2中与制备 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸相同的 操作方法, 用 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-甘露糖苷) -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸二乙酯 (VII-10)取 代反应条件中的 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸二乙酯 (VII-2), 从 1.8gl-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-甘露糖苷) -丁垸 -4-氟 -4,4-二甲酸二乙酯最后制得 l.lg无色 粘稠状液体目的产物 (111-10)。 质谱: MS, m/z: 343.19 [M+H] +

(6) 顺-【反式- (1R, 2R) -二氨基环己垸】 铂 (II) (1-0-D-甘露糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲 酸酯) (1-10) 的制

1) 将 1-O-D-甘露糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸粗产品 (l.lg) 溶解于 15mL水中, 用氢氧化钡 水溶液调节反应液 pH到 8, 在室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将反式- (1R, 2R) -环己二胺硫酸铂 (1.3g) 溶解于 5ml水中, 加入到 1) 中的反应液中, 用氢氧化钡水溶液调节 pH到 8, 室温避光搅拌过夜。

3)待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC分离并使用冷冻干燥 机冻干, 得到 lg最终产品 (ι-ιο), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.86 ( 1H,单峰); 3.30-3.96 (9H, 多重峰); 2.80-3.20 (1Η, 多重峰); 2.20-2.40 (2H, 多重峰); 1.95 (2H, 两重峰, J=12Hz); 1.58-1.75 (2H, 多重峰); 1.49 (2H,两重峰, J=6Hz); 0.90-1.30 (2H,多重峰);质谱: MS, m/z: 650.39 [M+H] + 实施例 11: 二氨基铂 ( 3-二甲酸酯) (1-11) 的制备-

(1-11)

1) 将 lOOmg的 1-O-D-甘露糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将二氨硫酸铂 (lOOmg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1) 中反应液中, 用氢氧 化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。 3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 85mg最终产品 (1-11 ), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.85 ( 1H,单峰); 3.40-4.10 (9H, 多重峰); 2.95-3.20

( 1H, 多重峰); 质谱: MS, m/z: 556.28 [M+H] +

实施例 12: 二氨基铂 (II) ( 1-0-D-甘露糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸酯) ( 1-12) 的制备-

( 1-12)

1) 将 lOOmg的 1-0-D-甘露糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2)在氮气保护下将二氨硫酸铂 (85mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用氢氧化 钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 75mg最终产品 (1-12), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.90 ( 1H,单峰); 3.30-3.96 (9H, 多重峰); 2.80-3.20

( 1H, 多重峰); 1.60-1.73 (2H, 多重峰)。 质谱: MS, m/z: 570.18 [M+H] +

实施例 13 : 二异丙 -0-D-葡萄糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸酯) 的制备-

1 ) 将 lOOmg的 1-0-D-葡萄糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将二异丙胺硫酸铂 (150mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用 氢氧化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 95mg最终产品 (1-13 ), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.86 (0.8H, 双重峰, J=3.6Hz); 4.82 (4H, 宽峰); 4.42 (0.2H, 双重峰, J=7.2Hz); 3.10-4.00 ( 10H, 多重峰); 2.42 (2H, 七重峰); 1.15-1.30

( 12H, 多重峰); 质谱: MS, m/z: 640.23 [M+H] +

实施例 14 氨基, 异丙胺基铂 (II) ( 1-0-D-葡萄糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸酯) 的制备:

1 ) 将 lOOmg的 1-O-D-葡萄糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2)在氮气保护下将氨基, 异丙胺硫酸铂 (130mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用氢氧化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 90mg最终产品 (1-14), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz, D20), ppm: 4.87 (0.8H, 双重峰, J=3.6Hz); 4.42 (0.2H, 双重 峰, J=7.2Hz); 3.15-4.05 ( 10H, 多重峰); 2.40-2.45 ( 1H, 七重峰); 1.15-1.30 (6H, 多重 峰); 质谱: MS, m/z: 598.23 [M+H] +

实施例 15: 二甲 -0-D-葡萄糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸酯) 的制备-

1 ) 将 lOOmg的 1-O-D-葡萄糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将二甲胺硫酸铂 (150mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用氢 氧化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 90mg最终产品 (1-15 ), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz, D20), ppm:

4.87 (0.8H, 双重峰, J=3.6Hz); 4.42 (0.2H, 双重峰, J=7.2Hz); 3.10-4.00 ( 10H, 多重峰); 2.47 (6H, 单峰); 质谱: MS, m/z: 584.25 [M+H] +

实施例 16: 二辛 的制备:

1 ) 将 lOOmg的 1-O-D-葡萄糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。 2) 在氮气保护下将二辛胺硫酸铂 (lOOmg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用氢 氧化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 130mg最终产品 (1-16), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm:

4.87 (0.8H, 双重峰, J=3.6Hz); 4.42 (0.2H, 双重峰, J=7.2Hz); 3.10-4.00 ( 10H, 多重峰); 2.40-2.47 (4H, 多重峰); 1.50-1.55 (4H, 多重峰); 1.10-1.40 (20H, 多重峰); 0.85-0.88

(6H, 多重峰); 质谱: MS, m/z: 780.42 [M+H] +

实施例 17: 二环 -0-D-葡萄糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸酯) 的制备-

1 ) 将 lOOmg的 1-O-D-葡萄糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将二环丙胺硫酸铂 (lOOmg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用 氢氧化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 80mg最终产品 (1-17), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm:

4.87 (0.8H, 双重峰, J=3.6Hz); 4.83 (4H, 宽峰); 4.42 (0.2H, 双重峰, J=7.2Hz); 3.10-4.00 ( 10H, 多重峰); 2.68-2.79 (2H, 多重峰); 0.75-0.95 ( 8H, 多重峰); 质谱: MS, m/z: 636.35 [M+H] +

实施例 18: 二异丙 -0-D-葡萄糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸酯) ( 1—18) 的制备:

1 ) 将 lOOmg的 1-0-D-葡萄糖苷 -丙垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将二异丙胺硫酸铂 (143mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用 氢氧化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 llOmg最终产品 (1-18), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm:

4.89 ( 1Η, 双重峰, J=3.6Hz); 4.82 (4H, 宽峰); 3.20-3.95 (9H, 多重峰); 2.80-3.10 ( 1H, 多重峰); 1.60-1.75 (2H, 多重峰); 2.40 (2H, 七重峰); 1.15-1.30 ( 12H, 多重峰); 质 谱: MS, m/z: 654.25 [M+H] +

实施例 19: 二异丙 -0-D-半乳糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸酯) 的制备-

1 ) 将 lOOmg的 1-0-D-半乳糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将二异丙胺硫酸铂 (150mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用 氢氧化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 96mg最终产品 (1-19), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.90 ( 1H, 两重峰, J=3.6Hz); 4.81 (4H, 宽峰); 4.10-4.35 ( 1H, 多重峰); 3.40-4.10 ( 8H, 多重峰); 2.80-3.20 ( 1H, 多重峰); 2.40 (2H, 七 重峰); 1.15-1.30 ( 12H, 多重峰); 质谱: MS, m/z: 640.25 [M+H] +

实施例 20: 二异丙 基铂 (II) ( 1-0-D-半乳糖苷 -丁垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸酯) 的制备-

1 ) 将 lOOmg的 1-0-D-半乳糖苷 -丙垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将二异丙胺硫酸铂 (140mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用 氢氧化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 115mg最终产品 (1-20), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.90 ( 1H, 双重峰, J=4Hz); 4.81 (4H, 宽峰); 3.40-4.10 ( 8H, 多重峰); 2.70-3.30 (2H, 多重峰); 1.60-1.70 (2H, 多重峰); 2.42 (2H, 七重峰); 1.15-1.30 ( 12H, 多重峰); 质谱: MS, m/z: 654.23 [M+H] +

实施例 21 : 二异丙胺基铂 (II) ( 1-0-D-甘露糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸酯) 的制备-

1 ) 将 lOOmg的 1-O-D-甘露糖苷 -丙垸 -3-氟 -3, 3-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将二异丙胺硫酸铂 (150mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用 氢氧化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 91mg最终产品 (1-21 ), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz, D20), ppm: 4.90 ( 1H, 单峰); 4.82 (4H, 宽峰); 3.30-4.00 (9H, 多重峰); 2.90-3.20 ( 1H, 多重峰); 2.40 (2H, 七重峰); 1.15-1.30 ( 12H, 多重 峰); 质谱: MS, m/z: 640.25 [M+H] +

实施例 22: 二异丙 酯) 的制备-

1 ) 将 lOOmg的 1-0-D-甘露糖苷 -丙垸 -4-氟 -4, 4-二甲酸粗产品溶于 5 ml的去离子水, 用氢氧 化钡水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将二异丙胺硫酸铂 (140mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用 氢氧化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 115mg最终产品 (1-22), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz, D20), ppm: 4.87 ( 1H, 单峰); 4.83 (4H, 宽峰); 3.30-3.96 (9H, 多重峰); 2.80-3.20 ( 1H, 多重峰); 1.58-1.75 (2H, 多重峰); 2.41 (2H, 七重峰); 1.15-1.30 ( 12H, 多重峰); 质谱: MS, m/z: 654.23 [M+H] +

实施例 23 : ( 1 ) 1-0- (2 -四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -乙垸 -2,2-二甲酸二乙酯的制备:

在室温条件下将葡萄糖(2.7g)加入到 1-羟基 -乙垸 -2,2-二甲酸二乙酯(依据文献 Kogyo Kagaku Zasshi, 1954, vol.57, p.l40制备而得)(5ml), 冷却到 0°C, 用氮气置换烧瓶内空气, 在氮气保 护下慢慢滴加 1ml三氟化硼-乙醚配合物。

将反应液在 0°C搅拌 15分钟,然后慢慢升温到室温并搅拌 30分钟,然后将反应液加热到 60°C, 在 60°C反应 5小时。 反应完成后, 旋蒸除去溶剂, 使用硅胶柱色谱(二氯甲垸: 甲醇, 6 : 1) 对反应生成物实施简单纯化,得到粗产品 3.3g (VI-23)。

质谱: MS, m/z: 521.25 [M+H] +

(2) 1-0- (2,3,4,6-四乙 酯的制备

将 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -乙垸 -2,2-二甲酸二乙酯 3.0g溶解在 20mL干燥的四 氢呋喃中, 冷却到 0oC。 用氮气置换烧瓶内空气, 在氮气保护下缓慢加入 235mg氢化钠固体

(60%)。 反应液升温至室温, 搅拌 12小时。 向反应液中加入 2g 1-氟甲基 -4-氟 -1,4-二氮双环 [2.2.2.]辛垸双氟硼酸盐,反应液室温反应 24小时, 旋蒸除去溶剂。 向反应液中加入 100ml乙酸 乙酯, 然后用饱和氯化铵水溶液 (lX50ml)洗涤, 将水相用乙酸乙酯萃取 (2X25ml), 合并 有机相。 将有机相依次用饱和氯化铵水溶液 (lXlOOml), 蒸馏水 (lXlOOml), 饱和氯化钠 水溶液 (IX 100ml) 洗涤, 然后用无水硫酸钠干燥, 用旋转蒸发仪将溶剂蒸干, 得到的淡黄 色油状物用硅胶柱色谱纯化 (石油醚: 乙酸乙酯, 3 : 1), 得到无色透明油状目的产物 2.3g

(VII-23)o 质谱: MS, m/z: 539.20 [M+H] +

(3) 1-0- (D-葡萄糖

将 1-0- (2,3,4,6-四乙酰基 -D-葡萄糖苷) -乙垸 -2-氟 -2,2-二甲酸二乙酯 (1.5g, )溶解于 5mL甲 醇中。 将氢氧化钠 (lg) 溶解于 10mL水中, 室温下加入到反应液中, 然后升温至 60°C反应 24小时。 用 TLC监测反应终点。

待反应完成后, 用旋转蒸发仪除去甲醇, 使用强酸性阳离子交换树脂处理产品。 将过滤得到 的水溶液用冷冻干燥机干燥后得到无色粘稠状 液体 1.3g (111-23), 粗产品直接用于下步反应。 质谱: MS, m/z: 315.11 [M+H] +

(4) 顺-【反式- (1R, 2R) -二氨基环己垸】 铂 (II) (1-0-D-葡萄糖苷 -乙垸 -2-氟 -2, 2-二甲 酸酯) 的制备-

将 1-O-D-葡萄糖苷 -乙垸 -2-氟 -2,2-二甲酸粗产品 (lg) 溶解于 10mL水中, 用氢氧化钠水溶液 调节反应液 pH到 7, 室温搅拌 30分钟。

在氮气保护下将反式- ( 1R, 2R) -环己二胺二硝酸铂 (1.3g) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 的 反应液中, 用氢氧化钠水溶液调节 pH到 7, 室温避光搅拌过夜。

待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 使用冷冻干燥机冻干, 用半制备高压液 相色谱分离得到 l.Og最终产品 (1-23 ), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.87 (0.8H, 双重峰, J=3.6Hz); 4.43 (0.2H, 双重 峰, J=7.2Hz); 3.10-4.30 ( 8H, 多重峰); 2.20-2.45 (2H, 多重峰); 1.96 (2H, 两重峰, J=12Hz); 1.49 (2H, 两重峰, J=8Hz); 1.12-1.30 (2H, 单峰); 0.95-1.10 (2H, 多重峰); 质谱: MS, m/z: 622.16 [M+H] +

实施例 24: 二氨基铂 (II -0-D-葡萄糖苷 -乙垸 -2-氟 -2, 2-二甲酸酯) 的制备-

1 ) 将 lOOmg的 1-0- (D-葡萄糖苷) -乙垸 -2-氟 -2,2-二甲酸溶于 5ml的去离子水, 用氢氧化钠 水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将二氨基二硝酸铂 (140mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用 氢氧化钠水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 90mg最终产品 (1-24), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm:

4.88 (0.8H, 双重峰, J=3.6Hz); 4.45 (0.2H, 双重峰, J=7.2Hz); 3.20-4.30 ( 8H, 多重峰) 质谱: MS, m/z: 542.17 [M+H] + 。

实施例 25: 二氨基铂 (II) ( 1-0-D-葡萄糖苷 -乙垸 -2-氟 -2, 2-二甲酸酯) 的制备-

1 ) 将 lOOmg的 1-0- (D-葡萄糖苷) -乙垸 -2-氟 -2,2-二甲酸溶于 5ml的去离子水, 用氢氧化钡 水溶液调节反应液 pH到 9, 室温搅拌 30分钟。

2) 在氮气保护下将二异丙胺硫酸铂 (160mg) 溶解于 2ml水中, 加入到 1 ) 中反应液中, 用 氢氧化钡水溶液调节 pH到 9, 室温避光搅拌过夜。

3 )待反应完成后, 使用离心机除去沉淀, 收集上清液, 用半制备 HPLC精制分离并使用冷冻 干燥机冻干, 得到 103mg最终产品 (1-25 ), 白色固体。

核磁共振谱 (400 MHz , D20), ppm: 4.88 ( 0.8H, 双重峰, J=3.6Hz); 4.83 (4H, 宽峰); 4.44 ( 0.2H, 双重峰, J=7.2Hz); 3.20-4.30 ( 8H, 多重峰); 2.41 (2H, 七重峰); 1.15-1.30 ( 12H, 多重峰); 质谱: MS, m/z: 626.17 [M+H] +

实验例 1

为了比较本发明铂配合物与上市药物顺铂, 卡铂以及奥沙利铂在水溶性方面的不同, 在下 述试验中, 分别针对本发明代表性的铂配合物以及三种上 市药物进行了室温下 lg水中各种药 物的饱和溶液溶质质量测定, 表 2列举了本发明用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂 合物在水中 的溶解度以及与铂类抗肿瘤临床药物顺铂, 卡铂以及奥沙利铂的差别:

表 2:

上述实验结果显示,本发明中所提供的含氟原 子铂配合物的水溶性与临床药物顺铂相比每 毫升水中的溶解度可提高 500至 900倍, 与临床药物奥沙利铂相比药物在水中的溶解度 提高 了 70至 150倍。

在本发明所提供的含氟原子铂配合物中, 在含有亲水性糖分子结构的同时由于氟原子取 代所形成的诱导效应 (即因分子中原子或基团极性 (电负性) 不同而致使成键电子云在原子 链上向某一方向移动的效应), 可以大大增加铂配合物在水溶液中的极性, 即水溶性。

实验例 2

为了比较本发明铂配合物与上市药物奥沙利铂 在稳定性方面的不同, 在下述试验中, 分别 针对本发明代表性的铂配合物以及临床药物奥 沙利铂进行了室温下 pH为 7. 0的磷酸盐缓冲溶 液(PBS) 中各种药物的半衰期 (即在水溶液中的稳定性)测定, 表 -3列举了本发明用于肿瘤 治疗的含氟水溶性铂配合物在 PBS中的半衰期与铂类抗肿瘤临床药物奥沙利铂 的差别: 表 3: 化合物 奥 实施例 实施例 3 实施例 9 实施例 实施例 实施例 24 实施例 25 沙 1 制备 制备的 制备的 17 制备 23制备 制备的铂 制备的铂 利 的铂配 铂配合 铂配合 的铂配 的铂配 配合物 配合物 铂 合物 物 物 合物 合物

半衰期(小时) 24 44 52 48 62 89 73 96

上述实验结果显示,本发明中所提供的含氟水 溶性铂配合物的稳定性与临床药物奥沙利铂 相比室温下药物在 pH为 7. 0的磷酸盐缓冲溶液 (PBS) 中的半衰期可提高 2至 4倍。

实验例 3

在下述试验中, 使用 8-9周龄的雌性 CDF1种鼠, 动物体重平均为 20-25克, 实验动物购 自北京维通利华实验动物技术有限公司。 用 L1210肿瘤细胞(约 10 5 个细胞每只老鼠)在腹膜 内进行接种。 针对制作的肿瘤动物模型, 使用本发明抗肿瘤金属铂配合物实施治疗, 并与临 床使用的铂类抗肿瘤药物进行比较, 验证本发明抗肿瘤含氟水溶性铂配合物对肿瘤 动物的治 疗效果以及本发明用于肿瘤治疗的含氟水溶性 铂配合物对实验动物的毒副作用。 对于本发明 的含氟水溶性铂配合物和卡铂, 使用质量百分比为 5%甘露糖醇水溶液, 对于顺铂则使用质量 百分比为 5%甘露糖醇生理盐水溶液制备相应的注射液。 肿瘤细胞移植后第 1, 4天经由腹腔 内注射药物, 每组实验动物数目为 6。

动物寿命延长 (ILS) 的计算方法如下:

ILS % = [ ( St/Su) - 1] X 100%

其中, St =接受治疗的动物存活日的加权中间数; Su = 未接受治疗的动物存活日的加权中 间数, 实验结果列于表 4中- 表 4:

注 * 第 1天到第 7天的体重变化

实验例 4: 本发明含氟水溶性铂配合物有效成分对癌细胞 的增殖抑制作用

本发明的用于肿瘤治疗的含氟水溶性铂配合物 对肿瘤细胞的抑制和杀伤作用是通过本发 明药物产生的垸化结合物作用于肿瘤细胞的 DNA, 形成链内和链间交联, 从而抑制肿瘤细胞

DNA的合成及复制而实现的。 以下实验针对本发明的用于肿瘤治疗的含氟水 溶性铂配合物对不同种类的人肿瘤细胞的 增殖抑制效果进行了实验验证。

(1)试验方法:

细胞培养液:

使用含有 10%牛胎仔血清(fetal bovine serum), ImM丙酮酸钠, 2mML_谷氨酰胺, 50U/ml 盘尼西林, 50μ /πι1链霉素 (str印 tomycin) 的细胞培养液。

主要实验仪器: MCO-15A型二氧化碳培养箱 (日本 SANYO公司) 、 倒置相差显微 镜 (Olympus,日本)、全自动酶标仪(美国 BioTEK ELX808)、低温冰箱(日本 MDF-V5410)、 超净工作台 (苏州医疗器械厂) 、 微量移液器 (法国 GILSON) 、 自动纯水蒸馏器 (上 海 1810B) 。

实验试剂:

MTS : CellTiter96 Aqueous MTS Reagent Powder, Pr omega公司

PMS : Phenazine methosulfate (PMS) , Sigma- Aldrich公司

DPBS : Sigma-Aldrich公司

肿瘤细胞:

以下活性测试实验中所使用的人肿瘤细胞: dul45 - 人前列腺癌; MCF-7 - 人乳腺癌; SKOV3 -人卵巢癌; HT-29 -人结肠癌; A549 -人非小细胞肺癌 (腺癌) ; H460 -人非小 细胞肺癌 (大细胞癌) , 以及动物肿瘤细胞: L1210 -小鼠白血病细胞均购自上海安妍商贸有 限公司。

细胞毒性测试:

细胞毒性实验采用 MTS 测试方法。 收集对数期肿瘤细胞, 调整细胞悬液浓度, 每孔加入 100μ1, 铺板使待测细胞调密度至 1000-10000个 /孔, (边缘孔用无菌 PBS填充)。 在 5%C02, 37°C孵育, 至细胞单层铺满孔底 (96孔平底板), 加入不同浓度梯度的药物, 每孔 100μ1, 设 5个复孔。 在 5% C02, 37°C条件下孵育 96小时,倒置显微镜下观察。向 2ml MTS (2mg/ml, DPBS 配制)溶液中加入 100 μ 1 PMS (lmg/ml, DPBS配制),混匀, 制成 MTS工作液。 上述细胞培养板 离心后弃去培养液, 小心用 PBS冲 2-3遍后, 在检测吸光度前, 向 96孔板中每孔加入 100 μ 1 培养基, 再加入 20 μ 1MTS工作液, 在 37°C, 5%C02条件下孵育 2h后, 在 490nm处检测 0D值 (光密度值)。

对照组:在上述同样条件下不添加被测活性成 分,最后取得肿瘤细胞在 490nm处检测 0D值。 药物对肿瘤细胞的抑制活性 IC50:

细胞抑制率计算: 按下列公式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率 :

1 ) 细胞存活率 (% ) = (治疗组 0D值 / 对照组 0D值) X 100

2)求出各药物浓度下的细胞存活率, 用此对药物浓度作图。 以此判断不同药物浓度对肿瘤细 胞增殖抑制的药效。

上述每个药物浓度的实验重复 5组, 取平均 0D值计算细胞存活率。

(2)实验结果- 图中各种符号代表的肿瘤细胞名称如下: dul45 - 人前列腺癌; MCF-7 - 人乳腺癌; SK0V3 - 人卵巢癌; HT-29 - 人结肠癌; A549 - 人非小细胞肺癌 (腺癌); H460 -人非小细胞 肺癌 (大细胞癌)

实施例 1制备的铂配合物的抗肿瘤药效见图 1和图 2;实施例 5制备的铂配合物的抗肿瘤 药效见图 3和图 4; 实施例 9制备的铂配合物的抗肿瘤药效见图 5和图 6; 实施例 10制备的 铂配合物的抗肿瘤药效见图 7和图 8。为了更清晰地显示配合物的药效趋势, 所有图中的曲均 省略了平均标准误差标记。

实验例 5: 本发明含氟水溶性铂配合物有效成分在动物肿 瘤模型中的抗肿瘤药效

( 1 ) 试验方法: 使用 5-6周 Nu/nu雄性裸小鼠, 实验动物购自北京维通利华实验动物技 术有限公司。 动物饲养于 SPF级环境下 IVC系统中。

所有实验动物自由摄食、饮水, 室温 20〜25°C, 湿度 40%〜70%, 昼夜明暗交替 12 h/12 h。 收集人结直肠肿瘤 DLD-1细胞, 每只裸鼠腋部皮下注入细胞悬液, 建立荷瘤小鼠模型。待 肿瘤长到 150〜300 mm3时, 根据肿瘤体积和体重将小鼠均衡分成 4组, 生理盐水组、 实施例 3配合物组, 实施例 18配合物组, 奥沙利铂组, 每组 10只。 间隔一周腹腔注射给药 1次, 给 药体积 10 mL/kg, 连续四周给药后停止给药观察肿瘤在停止给药 后的增长情况, 停止给药后 动物正常饲养, 采用隔日测量瘤径的方法, 动态观察动物肿瘤的回长趋势和受试药的抗肿 瘤 作用。 实验观察至分组后第 61天。

肿瘤体积 (tumor volume, TV) 的计算公式为: V = l/2 X a X b2 。 其中 a和 b分别表示肿 瘤长和宽,根据测量结果计算出肿瘤体积。相 对肿瘤体积增长百分比(%)= ( (Vt- V0) / V0) X100 o vo为分笼给药时 (即 do) 测量所得肿瘤体积, vt为每一次测量时的肿瘤体积 。

( 2 )投药剂量: 根据预先针对同类裸鼠进行的最大耐药剂量实 验结果, 取各种药物最大 耐药剂量的 70%作为药效实验的投药量。其中奥沙利铂临床 药物的投药量为 7. 5毫克每千克体 重, 实施例 3配合物为 35毫克每千克体重, 实施例 18配合物为 42毫克每千克体重。 药物在 使用前溶解于灭菌蒸馏水中, 使用超声波将药物充分溶解后注射给药。

( 3 )实验结果: 实验结果显示, 本发明所提供的含氟水溶性铂配合物与临床对 比药物奥 沙利铂相比具有更优越的肿瘤抑制效果。 尤其表现在能够在停止给药后长时间抑制肿瘤 的回 长, 充分显示了本发明铂配合物在肿瘤细胞及肿瘤 组织内的选择性积蓄和肿瘤靶向性的提高

(见图 9 )。为了更清晰地显示配合物的药效趋势,所 图中的曲均省略了平均标准误差标记。

利用本发明的金属铂配合物, 可以制备预防和治疗肿瘤的药物。 这些药物的制备通常使 用一种或者几种有效剂量的本发明所提供的金 属铂配合物, 配合药学可接受的载体或稀释剂 而完成。 这些药学上可接受的药用辅料例如淀粉, 葡萄糖、 糊精、 果糖和麦芽糖, 乳糖, 明 胶, 蔗糖, 羟基纤维素, 羟丙基甲基纤维素, 二氧化硅, 硬脂酸羟基乙酸淀粉钠, 水, 乙醇, 氯化钠等可根据不同的剂型需要加以选择。 另外, 根据药物制备上的需要, 这些药用辅料还 可以包括少量的酸碱调节剂, 稳定剂等。

实验证明: 本发明提供的配合物具有良好的抗肿瘤活性。 这种抗肿瘤活性可以与目前被 广泛应用的顺铂, 卡铂或奥沙利铂相媲美, 其活性甚至高于这些现存的铂类抗癌药物。 另外, 本发明所提供的配合物针对顺铂的抗癌作用能 够形成强烈抗药性的鼠 Le U kemi a -L1210肿瘤细 胞具有更有效的杀伤作用。 这是因为本发明所提供的配合物在水溶性方面 与现有铂类抗肿瘤 药品相比, 都具有几十倍以上的提高, 这种高水溶性特点在理论上能够增加和提高药 物在肾 脏的排泄, 减轻铂类药物一般存在的高肾毒副作用, 同时这种高水溶性特性使这些化合物容 易制剂化和在临床上的应用更方便。

本发明的抗肿瘤药物, 其给药途径没有特别的限制, 其剂量不仅取决于病人的年龄, 体 重以及病情, 还取决于肿瘤的种类, 性质和严重程度。 但一般来说, 对于成年病人, 最好每 天使用的量为 10毫克至 1克之间。 一般为每一至三周一次或几次用药。