Acilhidrazonas para el tratamiento de enfermedades neurológicas

La presente invención se refiere a un grupo de compuestos con un núcleo estructural de acilhidrazonas que presentan una actividad moduladora de la interacción entre las proteínas NCS-1 y Ric8a, implicadas en el proceso de regulación del número de sinapsis y la probabilidad de liberación de neurotransmisores. Debido a esto, los compuestos de la invención son útiles para el tratamiento de enfermedades neurológicas en las que está afectado el número de sinapsis, tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington o enfermedad de Parkinson.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Con el fin de transmitir los impulsos nerviosos destinados a coordinar cada función en el organismo, las neuronas se comunican mediante sinapsis. Estas, requieren de la formación de un locus liberador de neurotransmisores en la neurona pre-sináptica y un campo receptor asociado en la neurona post-sináptica. Para un correcto funcionamiento de la transmisión nerviosa, es necesario un balance adecuado entre el número de sitios liberadores y la probabilidad de liberación de neurotransmisor. En ocasiones, se producen desequilibrios en este balance afectando negativamente al funcionamiento del sistema nervioso. Cuando hay defectos en el desarrollo del sistema nervioso se produce un desequilibrio por exceso de sinapsis causando trastornos como el síndrome de Angelman, el síndrome del cromosoma X frágil el síndrome de Rett, otros trastornos del espectro autista, epilepsia otrastorno bipolar entre otros. En otras ocasiones el problema es la perdida sináptica que tiene como consecuencia el desarrollo de enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Alzheimer, Huntington, Parkinson etc... Enfermedades cada vez más prevalentes como consecuencia del envejecimiento de la población.

La restauración sináptica por medio de fármacos tiene un gran valor terapéutico. Se ha demostrado que inhibiendo la interacción entre las proteínas sensor de calcio neuronal 1 (NCS-1) y el factor de intercambio de guanina (Ric8a), se restaura el número normal de sinapsis en un modelo animal de síndrome de X frágil (Mansilla, A. et. al. PNAS 2017, 114, E999-E1008). Sin embargo, en la actualidad no se han publicado compuestos que estabilicen la interacción del complejo proteico (NCS-1 :Ric8a) y restablezcan la sinapsis perdidas, lo que contribuiría a una mejora de las funciones cognitivas y de la memoria alteradas en las enfermedades neurodegenerativas tales como el Alzheimer. Se han descrito compuestos con un núcleo estructural de acilhidrazona que son útiles para el tratamiento de enfermedades neurológicas como la epilepsia (Angelova et al., J. Drug Dev Res. 2016 Nov, 77(7):379-392) o como la enfermedad de Alzheimer (Dias Viegas FP et al. Eur J Med Chem. 2018 Mar 10, 147:48-65), aunque no se han descrito compuestos de este tipo que traten de forma eficiente enfermedades neurológicas mejorando el número de sinapsis mediante la modulación de la interacción de las proteínas NCS-1 y Ric8a.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

El complejo proteico formado por NCS-1 y Ric8 regula el número de sinapsis y la probabilidad de liberación de neurotransmisores, por lo que es considerado una buena diana terapéutica para el tratamiento de las enfermedades en las que la sinapsis está alterada. A partir de estudios de espectroscopia de fluorescencia se ha comprobado la afinidad de los compuestos por dNCS-1 (sensor neuronal de calcio de Drosophila). El sensor neuronal de calcio NCS-1 , es una proteína cuya secuencia esta conservada desde levaduras hasta humanos.

Con el fin de identificar compuestos útiles como moduladores del complejo proteico formado por NCS-1 y Ric8 (en concreto como compuestos útiles para promover la interacción NCS-1 / Ric8a) se llevó a cabo la experimentación mostrada en la figura 1. En la figura 1 , en concreto en el panel superior, se muestra el resultado de un ensayo de inmunoprecipitación (IP) en células HEK293 transfectadas con Ric8a humano (con etiqueta V5) y NCS1 en presencia de los compuestos ahí identificados o el vehículo (DMSO). El carril DMSO representa los niveles básales de la interacción NCS1/Ric8a. La IP se realizó con anticuerpos anti-NCS1 , seguido de inmunodetección de Ric8a en Western blot con el anticuerpo anti-V5. El panel inferior muestra la carga de entrada (1/10 de los lisados antes de la inmunoprecipitación). Dicho ensayo de IP mostró que los compuestos A5H2, A3H3, A3H6, A8H2, A8H8, A3H17, A3H18, y A3H19 promovieron la interacción NCS-1/Ric8a.

Ensayos adicionales se realizaron con la siguiente lista de compuestos (ver tabla 1): Tabla 1

En concreto y de forma resumida se efectuaron estudios de resonancia magnética nuclear (RMN) desde el punto de vista del ligando tales como STD-RMN (diferencia de transferencia de saturación), y tr-NOESY (espectroscopia de efecto NOE). A partir de estos ensayos se determinó que compuestos del tipo A4 (tales como A4H3, A4H6 o A4H8) se debían descartar por su baja solubilidad en los ensayos. Aun así, se realizaron estudios adicionales de fluorescencia con estos compuestos sin dar resultados positivos. Por otro lado, en estos estudios se determinó que los derivados de compuestos del tipo A1 resultaban muy insolubles y en la técnica de fluorescencia no presentaron afinidad.

Para el resto de los compuestos y en base a los resultados anteriormente comentados y de los estudios de espectroscopia de fluorescencia, se procedió a determinar las bases estructurales de la interacción NCS-1/Ric8a y a identificar el grupo farmacóforo. En este sentido, y tal y como se muestra en la figura 4, los grupos químicos A1 , A2 y N6, se refieren a aquellos heteroátomos que conforman la parte central de la acilhidrazona que se encuentra en común en todos los compuestos ensayados y que han resultado útiles como moduladores (activadores o promotores) del complejo proteico formado por NCS-1 y Ric8. Es decir, se refieren al carbonilo (A2) unido al nitrógeno de la amida (N6), que a su vez está unido a otro nitrógeno imínico (A1). Los términos de R7 y R8 se refieren a los anillos aromáticos que actúan como sustituyentes. Son aromáticos, tanto el R7 unido al grupo carbonilo como R8 unido al nitrógeno imínico. En la figura 4 aparece el compuesto A3H3 como ejemplo. A continuación se resume la información indicada en este párrafo:

A1= N = Aceptor enlace de hidrógeno

N6= NH = Dador enlace de hidrógeno

A2=0 = Aceptor enlace de hidrógeno

R7 y R8 = establecen interacciones tt-p aromáticas e hidrofóbicas.

Por lo tanto, el grupo farmacóforo incluye la presencia de dos anillos aromáticos (R7 y R8) a, preferiblemente, las distancias y los ángulos indicados en la Tabla 2 mostrada más abajo, con un espaciador que consta de dos aceptores de enlaces de hidrógeno (grupos A1 , A2) y un grupo con densidad de carga negativa (grupo N6). Espaciador (CO-NH-N=) rígido. El primer núcleo aromático (R8), para que el compuesto actúe promoviendo la interacción NCS-1/Ric8a, debe preferiblemente interactuar con la región de la proteína hNCS1 definida por los aminoácidos V68, Y52, F72, F48, W103 y T92, con los cuales se establecen interacciones tipo p-p e hidrofóbicas. Además, el grupo R8 ha de preferiblemente colocarse perpendicular a la superficie molecular de la proteína, para exponer al solvente grupos polares a través de los sustituyentes del anillo.

El segundo núcleo aromático (R7), para que el compuesto actúe promoviendo la interacción NCS-1/Ric8a, debe preferiblemente interaccionar con la parte N-terminal de la hendidura hidrofóbica de la proteína NCS1 , a un lado con W30, F85 y L89, y al otro, con 151 y F55, a través de los cuales se deben establecer interacciones hidrofóbicas y de tipo p-p. Se hace notar que las interacciones p-p se dan entre dos grupos aromáticos, cuyas nubes pi de electrones se“reconocen”. Estas interacciones son más fuertes y estabilizadoras que una interacción hidrofóbica. Como el grupo R7 y el R8 contienen, o pueden contener, un residuo aromático, este interacciona con otros grupos aromáticos mediante interacciones p-p. Ahora bien, aquellos residuos hidrofóbicos-no aromáticos de R7 y/o R8 interaccionarían a través de lo que denominamos interacciones hidrofóbicas. Es decir, las interacciones p-p en el contexto de R7 o R8 se tienen que dar con una geometría concreta entre anillos. Cuando no se da esta geometría, se puede hablar de manera general como interacciones hidrofóbicas.

Tabla 2. Distancias de enlace y ángulos.

Se hace notar que es posible determinar si un compuesto interacciona con la región de la proteína NCS1 definida por los aminoácidos V68, Y52, F72, F48, W103 y T92 y/o con la región delimitada por los aminoácidos W30, F85 y L89 en un lado, y 151 y F55 en el otro lado de la proteína NCS1 , conociendo la estructura tridimensional (cristalina) de la proteína y en concreto las dos regiones arriba especificadas. En este sentido, la estructura cristalina de la proteína de Drosophila figura en PDB ID código 4BY4, molécula B (https://www.rcsb.org/structure/4bv4). Tal y como se ilustra abajo, esta estructura resulta válida para determinar si un compuesto interacciona con la región de la proteína NCS1 humana definida por los aminoácidos V68, Y52, F72, F48, W103 y T92 y/o con la región delimitada por los aminoácidos W30, F85 y L89 en un lado, y 151 y F55 en el otro lado de la proteína NCS1 , dado que aunque hay un 70.6% de coincidencia en el alineamiento de las dos secuencias (la humana y la de Drosophila), en el caso de los bolsillos de unión de la proteína hay un 100% de coincidencia. Para facilitar la comprensión de lo anteriormente comentado, se han marcado los aminos ácidos que intervienen en dichos bolsillos. Abajo en negrita para Drosophila y subrayando los aminoácidos para Humano. Los amino ácidos que participan son: Y52, V68, F72, T92, W103, W30, F85, L89, F55, F48, e 151. sp | P62166 | NCSl HUMAN

MGKSNSKLKPEWEELTRKTYFTEKEVQQWYKGFIKDCPSGQLDAAGFQKIYKQFFPFGD 60

tr | Q9VWX8 | Q9VWX8 DROME

MGKKNSKLKQDTIDRLTTDTYFTEKEIRQWHKGFLKDCPNGLLTEQGFIKIYKQFFPDGD 60 sp | P62166 | NCS1 HUMAN

PTKFATFVFNVFDENKDGRIEFSEFIQALSVTSRGTLDEKLRWAFKLYDLDNDGYITRNE 120

tr | Q9VWX8 | Q9VWX8 DROME

PSKFASLVFRVFDENNDGAIEFEEFIRALSITSRGNLDEKLHWAFRLYDVDNDGYIT REE 120 sp | P62166 | NCSl HUMAN

MLDIVDAIYQMVGNTVELPEEENTPEKRVDRIFAMMDKNADGKLTLQEFQEGSKADP SIV 180

tr | Q9VWX8 | Q9VWX8 DROME

MYNIVDAIYQMVGQQPQ-TEDENTPQKRVDKIFDQMDKNHDDRLTLEEFREGSKADPRIV 179 QALSLYDGLV190

QALSLGGD— 187

1 : sp|P62166|NCS l_HUMAN

2: tr|Q9VWX8|Q9VWX8_DROME

Identidad: 69.5 %

Similitud 81.1 % Todos estos datos que se muestran referentes a la identidad y la similitud de la secuencia entre el hNCS-1 y la Frequenina-2 de Drosophila melanogaster (dNCS-1), fueron calculados mediante alineamiento por pares utilizando la herramienta EMBOSS Needle (https://www.ebi.ac.uk/Tools/emboss/). En la figura 3 se muestran estos datos junto con la superposición de las estructuras cristalográficas de hNCS-1 (amarillo, PDB todavía no publicado) unido a 3b (verde) y dNCS-1 (azul, PDB 5AAN). En rosa se muestran los residuos en los que se encuentras las diferencias en la secuencia.

Por lo tanto, compuestos útiles para promover la interacción NCS-1/Ric8a se caracterizan porque comprenden un grupo farmacóforo que comprende la siguiente estructura química:

A1= N = Aceptor enlace de hidrógeno

N6= NH = Dador enlace de hidrógeno

A2=0 = Aceptor enlace de hidrógeno

R7 y R8 = establecen interacciones tt-p aromáticas. donde R7 y R8 son grupos que incluyen la presencia de dos anillos aromáticos (R7 y R8), y donde preferiblemente A1 está a una distancia de A2 de 2.63 ± 0.25 Á, donde preferiblemente A1 está a una distancia de N6 de 1.33 ± 0.15 Á, donde preferiblemente A2 está a una distancia de N6 de 2.32 ± 0.25 Á, donde preferiblemente A1 está a una distancia de R7 de 5.58 ± 0.55 Á, donde preferiblemente A1 está a una distancia de R8 de 3.77 ± 0.35 Á, donde preferiblemente A2 está a una distancia de R7 de 3.87 ± 0.35 Á, donde preferiblemente A2 está a una distancia de R8 de 6,04 ± 0.50 Á, donde preferiblemente N6 está a una distancia de R7 de 4.61 ± 0.45 Á, y donde preferiblemente N6 está a una distancia de R8 de 4.98 ± 0.35 Á.

Se hace notar que en el contexto de la presente invención, se utiliza el punto decimal, es decir, se utiliza el punto para separar los decimales y la coma para separar los millares.

En el contexto de la presente invención, la distancia representa las distancias entre los centros de los átomos respectivos. Se hace notar que la distancia con los grupos R7 o R8 se refiere a la distancia entre el centro del heteroátomo del grupo A1 , A2 o N6 y el centro del primer átomo de R7 o R8 unido a través de un enlace covalente con el N del grupo A1 o con el carbono del grupo A2. Formas de medir dichas distancias resultarán conocidas para el experto en la materia, ejemplos de las mismas serían mediante el programa Maestro (Schródinger).

El grupo farmacóforo queda, por tanto, claramente definido para aquellos compuestos útiles para promover la interacción NCS-1/Ric8a, no obstante, quedaría por concretar la estructura química de los grupos R7 y R8 del grupo farmacóforo. Para ello, se modelizaron los compuestos A3H3, A5H6 y A7H2 (dado que los tres presentaban actividad moduladora) en Drosophila Frq2 basándonos en la estructura cristalográfica de Rayos X de dicha proteína (ver figura 5 Drosophila Frq2 (PDB 4by4)). Con esta modelización se pudo observar que el grupo R8 requiere de la presencia de un grupo aromático, preferiblemente un grupo derivado de un nitrobenzaldehído (con sustitución del grupo nitro en orto-, meta-, o para-) y con la posibilidad de grupos dadores débiles o dadores capaces de establecer enlaces de hidrógeno. Es importante establecer que la presencia en R8 de un grupo aromático con dos o tres anillos fusionados hace que el compuesto pierda afinidad, y por lo tanto el grupo R8 se debería limitar a un único anillo aromático. Con respecto al grupo R7, se descartan las cadenas alquílicas lineales, tanto sencillas como ramificadas dado que la actividad del compuesto se ve disminuida. En cambio, cuando el grupo R7 se conforma por un heteroátomo de 2 anillos fusionados, es decir, heterocíclicos tales como el grupo indol o por un único anillo heterocíclico (tal y como un furano o un tiofeno) con posibilidad de sustituyentes voluminosos, la actividad se incrementa significativamente como se observa mediante la técnica de fluorescencia. Por lo tanto, el grupo R8 deberá ser un anillo aromático, tal y como un bencilo, preferiblemente sustituido en orto-, meta-, o para- con un grupo nitro y sustituido en orto-, meta-, o para- con grupos dadores capaces de establecer enlaces de hidrógeno tales como el F, Cl, Br, CF ₃ o un grupo hidroxilo. Además el grupo R8 debe preferiblemente ser capaz de interactuar con la región de la proteína NCS1 definida por los aminoácidos V68, Y52, F72, F48, W103 y T92.

Por otro lado, el grupo R7 deber ser un heterociclo de 2 anillos fusionados, es decir, heterocíclicos tales como el grupo indol, o bien un único anillo heterocíclico (tal y como un furano o un tiofeno), con posibilidad de sustituyentes voluminosos, o bien -[CH ₂ ] _n -R _6. Donde n presenta cualquiera de los siguientes valores: 0, 1 , o 2; y donde R6 es un heterociclo de 2 anillos fusionados, es decir, heterocíclicos tales como el grupo indol, o bien un único anillo heterocíclico (tal y como un furano o un tiofeno). Además el grupo R7 debe preferiblemente interaccionar con la región delimitada por los aminoácidos W30, F85 y L89, y al otro, con 151 y F55, a través de los cuales se deben establecer interacciones hidrofóbicas y de tipo p-p.

Por último, indicar que tal y como se puede visualizar en la figura 5, la hélice h10 a de la proteína NCS-1 juega un papel fundamental en la interacción NCS-1/Ric8a, dado que es un inhibidor competitivo de dicha interacción NCS-1/Ric8a y que ésta funciona a modo de “gatekeeper”, regulando la accesibilidad de proteínas a la hendidura hidrofóbica (Romero- Pozuelo et al., 2014). Esta dinámica es la clave de la regulación. La formación del complejo incrementa el número de sinapsis. En base a este mecanismo, los estabilizadores que hemos descrito en los párrafos anteriores mantienen la hélice fuera, seleccionando un estado conformacional de NCS-1 que favorece la interacción con Ric8a.

Con el objetivo de validar los resultados comentados en los anteriores párrafos, en la figura 6 se muestra un ejemplo del efecto promotor del número de sinapsis de uno de los compuestos candidatos, en un modelo de Drosophila melanogaster de la enfermedad de Alzheimer. Con anterioridad se había descrito que la expresión del péptido 8b428G0 humano (mutación ártica) en las neuronas motoras conduce a una reducción en el número de sinapsis con respecto a las uniones neuromusculares normales en individuos de la misma edad, de esta forma, moscas que sobre-expresaban 8b428G0 humana (D42Gal4> 8b428Gq), se alimentaron con el compuesto A3H3 100 mM o con la misma cantidad de disolvente, DMSO, a lo largo de todo el ciclo de vida. Se analizaron las motoneuronas abdominales adultas de 20 días y se determinó el número de sinapsis (nc82-puntos positivos), en diferentes moscas, utilizando imágenes confocales.

Los datos confirmaron que la reducción patológica del recuento de sinapsis, se suprimió en gran medida en aquellas moscas alimentadas con el compuesto A3H3.

En la figura 7 se muestra el impacto funcional de la recuperación de sinapsis en un modelo de Drosophila melanogaster. Como ya se ha comentado, la sobreexpresión del péptido 8b428G0 humano en las motoneuronas de Drosophila melanogaster provoca perdida sináptica y esto correlacionacon una disfunción locomotora severa. Las moscas que presentaban una sobreexpresión de 8b428G0 (D42Gal4> a$A2atc) en sus motoneuronas o que sobreexpresaban el control (D42Gal4> LacZ), se alimentaron con el compuesto A3H3 a una concentración 100 mM o con DMSO utilizando la misma concentración. La actividad locomotora de las moscas fue registrada en los monitores de actividad de Drosophila (DAM2, Trikinetics), y se analizó el número total de roturas de haz por hora durante dos días consecutivos. Cabe destacar que el déficit locomotor debido a la sobreexpresión de 8b428G0, se mejoró por completo con la alimentación de A3H3. Además, el análisis estadístico de los datos no reveló una diferencia significativa en la actividad locomotora de las moscas control alimentadas con A3H3 en comparación con aquellas alimentadas con DMSO.

Por lo tanto, en un primer aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto adecuado para promover la interacción NCS-1 y Ric8a, donde dicha interacción puede ser verificada mediante ensayos de co-immunoprecipitación, y dicho compuesto comprende la estructura de fórmula (I):

Formula (I) donde A1 es Nitrógeno, donde N6 es NH y donde A2 es Oxígeno; donde preferiblemente, pero de forma no limitativa, en la formula I, A1 está a una distancia de A2 de 2.63 ± 0.25 Á, donde preferiblemente A1 está a una distancia de N6 de 1.33 ± 0.15 Á, donde preferiblemente A2 está a una distancia de N6 de 2.32 ± 0.25 Á, donde preferiblemente A1 está a una distancia de R7 de 5.58 ± 0.55 Á, donde preferiblemente A1 está a una distancia de R8 de 3.77 ± 0.35 Á, donde preferiblemente A2 está a una distancia de R7 de 3.87 ± 0.35 Á, donde preferiblemente A2 está a una distancia de R8 de 6,04 ± 0.50 Á, donde preferiblemente N6 está a una distancia de R7 de 4.61 ± 0.45 Á, y donde preferiblemente N6 está a una distancia de R8 de 4.98 ± 0.35 Á; donde R7 debe preferiblemente interaccionar con la parte N-terminal de la hendidura hidrofóbica de la proteína NCS1 (PDB ID código 4BY4, molécula B (http s : //www. resb . org/structure/ 4bv 4)) . a un lado con W30, F85 y L89, y al otro, con 151 y F55, a través de los cuales se deben establecer interacciones hidrofóbicas y de tipo p-p, y comprende la siguiente estructura química seleccionada de la lista que consiste en:

Un heteroarilo de un único anillo, preferiblemente un tiofeno o un furano;

Un heteroarilo de dos anillos fusionados, preferiblemente un grupo indol; o

un grupo -[CH2] _n -R6, donde n presenta cualquiera de los siguientes valores: 0, 1 , o 2; y donde R6 es un heterociclo de 2 anillos fusionados o bien un único anillo heterocíclico; y donde R8 preferiblemente interacciona con la región de la proteína NCS1 (PDB ID código 4BY4, molécula B (https://www.rcsb.org/structure/4by4)) definida por los aminoácidos V68, Y52, F72, F48, W103 y T92, con los cuales se establecen interacciones tipo p-p e hidrofóbicas, y comprende la estructura de formula II:

Formula (II) donde al menos uno de los radicales R ¹ a R ⁵ de estructura de fórmula (II) es un grupo nitro y otro de los radicales se selecciona de la lista que consiste en: H, F, Cl, Br, CF ₃ o un grupo hidroxilo; donde el compuesto de formula (II) se une al resto del compuesto de formula (I) a través del grupo metino o metilideno que se une a su vez al grupo A1 ; o cualquiera de sus isómeros o sales, para su uso in promover la interacción entre las proteínas NCS-1 y Ric8a, implicadas en el proceso de regulación del número de sinapsis, en aquellas enfermedades que cursen con un reducción en el número de sinapsis neuronales. Preferiblemente, donde dichas enfermedades se seleccionan de la lista que consiste en Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington y otras enfermedades neurodegenerativas, así como síndrome de Angelman, síndrome del cromosoma del X frágil, síndrome de Rett síndromes del espectro autista, epilepsia, , esquizofrenia, desorden bipolar, esclerosis lateral amiotrófica, ataxia de Friederich, parálisis supranuclear progresiva, demencia frontotemporal, demencia de cuerpos de Lewy, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob. Más preferiblemente, la enfermedad es la enfermedad de Alzheimer.

En una realización preferida, R ¹ se selecciona de entre OH, N0 ₂ ,F, Cl o Br y donde R ² a R ³ se seleccionan de la lista que consiste en H, N0 ₂ , F, Cl o Br.

En una realización preferida, R ¹ es OH.

En otra realización preferida, R ² es N0 ₂ .

En otra realización más preferida cuando R ¹ es OH, R ₂ es N0 ₂ .

En otra realización preferida, R ³ es H.

En otra realización aún más preferida cuando R ¹ es OH y R ² es N0 _2, R _3, R _{4, y} R ₅ son H.

En otra realización preferida, R ¹ es N0 ₂ .

En otra realización preferida, R ² es F, Cl o Br, preferiblemente R ₂ es cloro.

En otra realización más preferida cuando R ¹ es N0 ₂ , R ² es F, Cl o Br, preferiblemente R ² es cloro.

En otra realización aún más preferida cuando R ¹ es N0 ₂ y R ² es F, Cl o Br , preferiblemente R ² es cloro, R ³ es H.

En otra realización más preferida cuando R ¹ es N0 ₂ , R ² es H.

En otra realización aún más preferida cuando R ¹ es N0 ₂ y R ² es H, R ³ es F, Cl o Br, preferiblemente R ³ es flúor. En otra realización preferida, R ¹ es F, Cl o Br, preferiblemente R ¹ es flúor.

En otra realización preferida, R ² es H.

En otra realización más preferida cuando R ¹ es F, Cl o Br, preferiblemente flúor, R ² es H.

En otra realización aún más preferida cuando R ¹ es F, Cl o Br, preferiblemente R ¹ es flúor, y R ² es H, R ³ es N0 ₂ .

En otra realización preferida, R ⁷ es un heteroarilo que se selecciona de entre tiofenilo o furanilo, donde dichos grupos pueden estar opcionalmente sustituidos por halógeno.

En otra realización preferida R ¹ es OH y R ² es N0 ₂ y R ³ R ⁴ y R ⁵ son H.

En otra realización preferida R ¹ es N0 ₂ , R ³ es F, Cl o Br preferentemente el flúor, y R ^2, R ⁴ y R ⁵ son H.

En otra realización preferida R ² es N0 ₂ y opcionalmente R ⁴ es OH, el resto de los radicales de R8 son hidrógenos.

En otra realización preferida R ³ es N0 ₂ y opcionalmente R ¹ es F, Cl o Br, preferiblemente flúor, el resto de los radicales de R8 son hidrógenos.

En otra realización preferida R ₄ es N0 ₂ y opcionalmente R ² o R ³ es F, Cl o Br, preferiblemente un cloro, el resto de los radicales de R8 son hidrógenos.

En otra realización preferida R ¹ es N0 ₂ y opcionalmente R ⁴ es un halógeno, preferiblemente un flúor, el resto de los radicales de R8 son hidrógenos.

En otra realización preferida, R ¹ es N0 ₂ y opcionalmente R ² es F, Cl o Br, preferiblemente un cloro, el resto de los radicales de R8 son hidrógenos.

En otra realización preferida R ¹ es N0 ₂ y opcionalmente R ⁴ es un hidroxilo.

En otra realización preferida, el compuesto de fórmula (I) para uso según se ha descrito anteriormente, se selecciona de la siguiente lista: • (E/Z)-/\/’-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)-2-(1 H-indol-3-il)acetohidrazida (A3H3)

• (±)-(E/Z)-2-hidroxi-/\/’-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)-2- fenilacetohidrazida (A3H6)

• (E)-4-(tert-butil)-/\/'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)benzohi drazida (A3H17)

• (Z)-5-cloro-/\/'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)tiofen-2-carbo hidrazida (A3H18)

• (E/Z)-3-hidroxi-/\/'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)-2-naftohi drazida (A3H 19)

• (Z)-A/'-(4-cloro-3-nitrobenziliden)furan-2-carbohidrazida (A5H2)

• (E/Z)-/\/'-(4-cloro-3-nitrobenziliden)tiofen-2-carbohidrazid a (A5H8)

• (E)-A/'-(5-fluoro-2-nitrobenziliden)furan-2-carbohidrazida (A7H2)

• (E/Z)-/\/'-(5-fluoro-2-nitrobenziliden)tiofen-2-carbohidrazi da (A7H8)

• (E)-/\/'-(2-fluoro-5-nitrobenziliden)furan-2-carbohidrazida (A8H2)

• (E)-(/\/'-(2-fluoro-5-nitrobenziliden)-2-hidroxi-2-fenilacet ohidrazida (A8H8)

Un segundo aspecto de la invención se refiere a un compuesto que se selecciona de entre:

• (E/Z)-/\/’-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)-2-(1 H-indol-3-il)acetohidrazida (A3H3)

• (E)-4-(tert-butil)-/\/'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)benzohi drazida (A3H17)

• (Z)-5-cloro-/\/'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)tiofen-2-carbo hidrazida (A3H18)

• (E/Z)-3-hidroxi-/\/'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)-2-naftohi drazida (A3H 19)

• (E)-/\/'-(5-fluoro-2-nitrobenziliden)furan-2-carbohidrazida (A7H2)

• (E/Z)-/\/'-(5-fluoro-2-nitrobenziliden)tiofen-2-carbohidrazi da (A7H8)

• (E)-/\/'-(2-fluoro-5-nitrobenziliden)furan-2-carbohidrazida (A8H2)

• (E)-(/\/'-(2-fluoro-5-nitrobenziliden)-2-hidroxi-2-fenilacet ohidrazida (A8H8)

Un tercer aspecto de la invención se refiere a un compuesto del segundo aspecto de la invención para su uso como medicamento.

Un cuarto aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto del segundo aspecto de la invención y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.

El término“arilo” se refiere en la presente invención a un radical fenilo, naftilo, indenilo, fenantrilo o antracilo, preferiblemente fenilo y naftilo. El radical arilo puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes tales como alquilo, haloalquilo, aminoalquilo, dialquilamino, hidroxilo, alcoxilo, fenilo, mercapto, halógeno, nitro, ciano y alcoxicarbonilo. El término “heteroarilo” se refiere a un arilo, como se ha definido anteriormente, que contiene al menos un átomo distinto de carbono, tales como S, N, ó O, formando parte del anillo aromático. Ejemplos de radicales heteroarilo incluyen, tiofenilo, furanilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, piridinilo, pirazinilo, piridazinilo, pirimidininilo, triazinilo, tienofuranilo, tienopirrolilo, pirrolopirazolilo, benzotiofenilo, benzofuranilo, indolilo, isoindolilo, benzimidazolilo, benzotiazolilo, imidazopiridinilo, pirazolopiridinilo, isoquinolinilo, quinolinilo, quinolizinilo, naftiridinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo. Los grupos heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos en cualquiera de sus posiciones por uno o más sustituyentes o por dos sustituyentes formando un ciclo condensado al heteroarilo y dichos sustituyentes se seleccionan independientemente entre tales como CF ₃ , alquilo CrC ₆ , S-alquilo CrC ₆ , halógeno, CN, O-alquilo CrC ₆ , N0 ₂ , COO-alquilo CrC ₆ , NHCO-alquilo CrC ₆ , NH ₂ y NH- alquilo CrC ₆ , y más preferiblemente entre CF ₃ , alquilo CrC ₆ , halógeno, CN y N0 ₂ .

Los compuestos de la invención, en su uso terapéutico o formando parte de una composición farmacéutica, pueden estar en forma cristalina como compuestos libres o como solvatos y se pretende que ambas formas estén dentro del alcance de la presente invención. En este sentido, el término “solvato”, tal como aquí se utiliza, incluye tanto solvatos farmacéuticamente aceptables que pueden ser utilizados en la elaboración de un medicamento, como solvatos farmacéuticamente no aceptables, los cuales pueden ser útiles en la preparación de solvatos o sales farmacéuticamente aceptables. La naturaleza del solvato farmacéuticamente aceptable no es crítica siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable. En una realización particular, el solvato es un hidrato. Los solvatos pueden obtenerse por métodos convencionales de solvatación bien conocidos por los técnicos en la materia.

Los compuestos de la invención para uso terapéutico o formando parte de una composición farmacéutica se preparan en forma sólida o suspensión acuosa, en un diluyente farmacéuticamente aceptable. Estos preparados pueden ser administrados por cualquier vía de administración apropiada, para lo cual dicho preparado se formulará en la forma farmacéutica adecuada a la vía de administración elegida. En una realización particular, la administración del compuesto de fórmula (I) proporcionado por esta invención se efectúa por vía oral, tópica, rectal o parenteral (incluyendo subcutánea, intraperitoneal, intradérmica, intramuscular, intravenosa, etc.). La preparación de las distintas formas farmacéuticas de administración de medicamentos y de los excipientes necesarios para la obtención de las mismas puede encontrarse en diferentes manuales manejados por los expertos en la materia.

Los compuestos descritos en la presente invención, sus sales farmacéuticamente aceptables, solvatos así como las composiciones farmacéuticas que los contienen pueden ser utilizados junto con otros fármacos adicionales para proporcionar una terapia de combinación. Dichos fármacos adicionales pueden formar parte de la misma composición farmacéutica o, alternativamente, pueden ser proporcionados en forma de una composición separada para su administración simultánea o no a la de la composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención, o una sal, estereoisómero o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.

A menos que se indique lo contrario, los compuestos de la invención también incluyen compuestos que difieren sólo en la presencia de uno o más átomos isotópicamente enriquecidos. Por ejemplo, compuestos que tienen dicha estructura, a excepción de la sustitución de un hidrógeno por un deuterio o por tritio, o la sustitución de un carbono por un carbono enriquecido en ¹³ C o ¹⁴ C o un nitrógeno enriquecido en ¹⁵ N, están dentro del alcance de esta invención.

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

FIG. 1. Muestra los resultados de ensayos de inmunoprecipitación en células HEK293 transfectadas con V5-Ric8a y NCS-1 humanos y en presencia o no de los compuestos. El carril DMSO representa un control positivo de la interacción.

FIG. 2. Muestra la representación de la emisión de fluorescencia del complejo dNCS-1- ligando en presencia de Calcio, en concentraciones crecientes de ligando. El ajuste de las curvas se ha realizado considerando una estequiometría 1 :1. Para la correcta comparación de las curvas las intensidades se han normalizado y representado como (l ₀ - I)/I ₀ · X- El valor de r ² es de 0.998.

FIG. 3. En esta figura se muestra la Superposición de las estructuras cristalográficas de hNCS-1 (amarillo, PDB) unido a 3b (verde) y dNCS-1 (azul, PDB 5AAN). En rosa se muestran los residuos en los que se encuentras las diferencias en la secuencia.

FIG. 4. En estas tres figuras se muestra el grupo farmacoforo tomando como ejemplo el compuesto A3H3. En concreto, los grupos A1 , A2 y N6 (N), se refieren a los heteroátomos que forman la parte central de la acilhidrazona que se encuentra en común en todos los compuestos ensayados. Es decir el carbonilo (A1) unido al N de amida (N6), que a su vez este, está unido a otro N imínico (A2). Los términos de R7 (R) y R8 (R’) se refieren a los anillos aromáticos que actúan como sustituyentes. Son aromáticos, tanto el R unido al carbonilo como al N imínico.

FIG. 5. Estructura cristalográfica de rayos X de Drosophila Frq2 (PDB 4by4) al cual se le ha superpuesto los compuestos A3H3, A5H6 y A7H2 orientadas al bolsillo 1 y al bolsillo 2.

FIG. 6. La figura 6 muestra un ejemplo del efecto promotor del número de sinapsis de uno de los compuestos candidatos, en un modelo de Drosophila melanogaster de la enfermedad de Alzheimer.

FIG. 7. La figura 7 muestra el impacto funcional de la recuperación de sinapsis en un modelo de Alzheimer en Drosophila melanogaster.

FIG. 8. Evaluación de eficacia del compuesto A3H3 en un modelo de enfermedad de Huntington. Ratones salvajes WT y ratones transgénicos (HD) que expresan el exón 1 de la huntingtina humana (cepa R6/1), fueron tratados con el compuesto A3H3vía oral a una dosis 25 mg por kg. El tratamiento comenzó a los 3 meses de edad y tuvo una duración de 6 semanas. Como medida de coordinación motora se analizó la longitud de la zancada (A) y el tiempo de permanencia en Rotarod (B). Los ratones no presentaban diferencias en ninguno de estos dos parámetros al inicio del tratamiento si bien a las 6 semanas ( A y B) los ratones HD tratados con el vehículo DMSO muestran diferencias significativas con el resto de grupos, no así los ratones HD que son tratados con el compuesto A3H3.

EJEMPLOS A continuación, se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que pone de manifiesto la efectividad del producto de la invención.

Ejemplo 1. Síntesis de los compuestos de la invención.

Preparación y obtención de (E)-/V’-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)furan-2-carbahidrazid a (A3H2).

A3H2

3-hidroxi-4-nitrobenzaldehído (319 mg, 1.91 mmol), hidrazida de ácido 2-furoico (200 mg, 1.59 mmol), MeOH (60 ml_). El producto se filtra y lava con MeOH a t.a. para obtener el compuesto como un sólido amarillo (0.30 g, 70%) (E > 99). P.f.: 256 - 257 °C. ¹ H-RMN (300 MHz, DMSO-Ó ₆ ) d 12.07 (s, 1 H), 1 1.18 (s, 1 H), 8.40 (s, 1 H), 7.98 (m, 2H), 7.49 (d, J = 1.7 Hz, 1 H), 7.40 - 7.26 (m, 2H), 6.72 (d, 1 H, J = 1.7 Hz). ¹³ C-RMN (75 MHz, DMSO-ó ₆ ): d 164.5, 152.3, 146.7, 145.2, 140.5, 140.0, 137.2, 125.9, 1 18.3, 1 18.5, 1 16.8, 112.6. Anal. Caled, para C^HgNsOs: C, 52.37%; H, 3.30%; N, 15.27%. Hallado: C, 52.43%; H, 3.30%; N, 15.1 1 %. HPLC-MS: t _R : 7.02 min (Columna ACE-Excel 3 C18-PFP, gradiente 15-85% H ₂ 0:CH ₃ CN 0.1 % de fórmico), [M+H] ⁺ = 276 m/z.

Preparación y obtención de (E/Z)-/V’-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)-2-(1 H-indol-3- il)acetohidrazida (A3H3).

3-hidroxi-4-nitrobenzaldehído (330 mg, 1.97 mmol), hidrazida indol-3-acéticohidrazida (300 mg, 1.58 mmol), MeOH (60 ml_). Se filtra y lava el producto con MeOH para obtenerlo como un sólido naranja (0.30 g, 70%) (E:Z = 40:60). P.f.: 216 - 217 °C. ¹ H-RMN (300 MHz, DMSO- d ₆ ) d 1 1.79 (s, 1 H, E), 1 1.54 (s, 1 H, Z), 11.19 (s, 1 H), 7.88 (s, 1 H), 7.70-7.65 (m, 1 H), 7.39- 7.36 (m, 1 H), 7.27-7.25 (m, 1 H), 7.15(s, 1 H), 7.02-6.98 (m, 1 H), 6.92-6.88 (m, 1 H), 6.78 (s, 1 H), 6.72-6.68 (m, 1 H), 5.89 (s, 1 H), 3.68 (s, 2H). ¹³ C-RMN (75 MHz, DMSO-ó ₆ ): d 172.1 , 150.8, 148.1 , 142.8, 137.4, 136.4, 130.5, 125.9, 123.9, 122.6, 121.0, 120.2, 1 19.2, 1 16.7, 1 11.9, 1 10.6, 42.5. Anal. Caled, para C ₁₇ H ₁₄ N ₄ O ₄ : C, 60.35 %; H, 4.17 %; N, 16.56 %. Hallado: C, 60.13 %; H, 4.20 %; N, 16.56 %. HPLC-MS: t _R : 8.45 min (Columna ACE-Excel 3 C18-PFP, gradiente 15-85% H ₂ 0:CH ₃ CN 0.1 % de fórmico), [M+H] ⁺ = 339 m/z. Preparación y obtención de £)-/V’- 3-hidroxi-4-nitrobenziliden)-3-metoxipropanhidrazida (A3H4).

3-hidroxi-4-nitrobenzaldehide (339 mg, 2.0 mmol), hidrazida de ácido 3-metoxipropiónico (180 mI_, 1.69 mmol), MeOH (60 ml_). Se ha purificado mediante cromatografía en columna automática por sistema Biotage usando DCM / MeOH (0- 6 %) como eluyentes obteniendo un sólido amarillo (437 mg, 97 %) (E > 99). P.f.: 163 - 164°C. ¹ H-RMN (300 MHz, DMSO-ó ₆ ): d 11.61 (s, 1 H), 1 1.13 (s, 2H), 8.13 (s, 1 H), 7.95-7.92 (m, 3H), 3.66-3.58 (m, 2H), 3.24 (s, 3H), 2.47 (t, 2H, J = 6.8 Hz). ¹³ C-RMN (75 MHz, DMSO-ó ₆ ): d 172.1 , 151.8, 143.1 , 140.2, 139.8, 136.6, 125.3, 1 17.4, 67.4, 57.4, 34.4. Anal. Caled, para C ₁₁ H ₁₃ N ₃ O ₅ : C, 49.44 %; H,

4.90 %; N, 15.72 %. Hallado: C, 49.51 %; H, 4.82 %; N, 15.61 %. HPLC-MS: t _R : 6.47 min (Columna ACE-Excel 3 C18-PFP, gradiente 15-85% H ₂ 0:CH ₃ CN 0.1 % de fórmico), [M+H] ⁺ = 268 m/z. Preparación y obtención de (E)-4-(ferf-butil)-/V '-(3-hidroxi-4- nitrobenziliden)benzohidrazida (A3H17).

3-hidroxi-4-nitrobenzaldehído (267 mg, 1.6 mmol), hidrazida del ácido 4-te/f-butilbenzoico (255.5 mg, 1.33 mmol), EtOH (60 ml_). Se lava y filtra con EtOH para obtener un sólido amarillo (430 mg, 95 %) (E > 99). P.f.: 220-221°C. ¹ H-RMN (300 MHz, DMSO-ó ₆ ): d 12.01 (s, 2H), 1 1.19 (s, 2H), 8.42 (s, 2H), 7.97 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.87 (d, J = 8.2 Hz, 5H), 7.61 - 7.49 (m, 7H), 7.31 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.34 (s, 1 H), 3.18 (s, 6H), 1.32 (s, 9H). ¹³ C-RMN (75 MHz, DMSO-Ó ₆ ): d 155.4 (C-1), 152.8 (C-1), 145.5 (C-1), 141.4 (C-1), 137.6 (C-1), 130.8 (C- 1), 128.1 (C-1), 126.4 (C-1), 125.7 (C-1), 1 18.5 (C-1), 1 16.8 (C-1), 49.1 (C-1), 39.9 (C-1), 35.2 (C-1), 31.4 (C-1).Anal. Caled, para C ₁₈ H ₁₉ N ₃ 0 ₄ : C, 63.33 %; H, 5.61 %; N, 12.31 %; Hallado: C, 63.10 %; H, 6.08 %; N, 12.25 %. HPLC-MS: t _R : 9.72 min (Columna ACE-Excel 3 C18-PFP, gradiente 15-85% H ₂ 0:CH ₃ CN 0.1 % de fórmico), [M+H] ⁺ = 342 m/z.

Preparación y obtención de (Z)-5-cloro-/V'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)tiofen-2- carbohidrazida (A3H18).

3-hidroxi-4-nitrobenzaldehido (279 mg, 1.71 mmol), hidrazida del ácido 5-clorotiopfen-2- carboxilico (249.7 mg, 1.41 mmol), EtOH (60 ml_). Se lava y filtra con EtOH para obtener un sólido amarillo (404 mg, 90 %) (Z > 99) m.p: 255-256°C. ¹ H-RMN (300 MHz, DMSO-ó ₆ ): d 12.17 (s, 1 H, H-2), 1 1.28 (s, 1 H, H-8), 8.12 - 7.94 (m, 2H, H-10, 14), 7.94 - 7.79 (m, 1 H, H- 1 1), 7.51 (m, 1 H, H-4), 7.33-7.31 (m, 2H, H-13, 6). ¹³ C-RMN (75 MHz, DMSO-ó ₆ ): d 161.2 (C-1), 152.8 (C-7), 143.3 (C-15), 140.3 (C-9), 138.2 (C-12), 137.9 (C-1 1), 135.2 (C-10), 130.3 (C- 5), 127.2 (C-4), 126.6 (C-6), 1 18.6 (C-13), 1 17.4 (C-14). Anal. Caled, para C ₁₂ H ₈ CIN ₃ 0 ₄ S: C, 44.25 %; H, 2.48 %; N, 12.90 %; S, 9.84 %. Hallado: C, 44.16 %; H, 2.58 %; N, 12.85 %; S, 9.87%. HPLC-MS: t _R : 9.48 min (Columna ACE-Excel 3 C18-PFP, gradiente 15-85% H ₂ 0:CH ₃ CN 0.1 % de fórmico), [M+H] ⁺ = 326 m/z.

Preparación y obtención de (E/Z)-3-hidroxi-/V'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)-2- naftohidrazida (A3H19).

3-hidroxi-4-nitrobenzaldehído (198 mg, 1.18 mmol), hidrazida de ácido 3-hidroxi-2-naftoico (206 mg, 0.98 mmol), EtOH (60 mL). El producto se filtra y lava con EtOH para obtener un sólido amarillo (287 mg, 83 %) (E:Z = 88: 12). P.d.: 264-265°C. ¹ H-RMN (300 MHz, DMSO- d ₆ y. d 12.13 (s, 1 H, H-2, E), 12.05 (s, 1 H, H-2, Z), 1 1.21 (s, 2H, H-10, 21), 8.44 (m, 2H, H-4, 7), 7.96 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-14, 17), 7.78 (d, J = 8.3 Hz, 1 H, H-6), 7.60 - 7.43 (m, 2H, H-15, 16), 7.43 - 7.30 (m, 3H, H-1 1 , 12, 19). ¹³ C-RMN (75 MHz, DMSO-ó ₆ ): d 164.2 (C-1), 154.2 (C-20), 152.8 (C-9), 146.4 (C-4), 140.9 (C-8), 137.8 (C-5), 136.3 (C-22), 131.1 (C-18), 129.1 (C-13), 128.7 (C-7), 127.3 (C-12), 126.4 (C-6), 126.3 (C-17), 124.3 (C-14), 121.2 (C-16), 1 18.6 (C-15), 1 17.0 (C-1 1), 1 11.0 (C-19). Anal. Caled, para C ₁₈ H ₁₃ N ₃ 0 ₅ : : C, 61.54 %; H, 3.73 %; N, 1 1.96 %. Hallado: C, 61.51 %; H, 3.76 %; N, 1 1.97 %. HPLC-MS: t _R : 9.38 min (Columna ACE-Excel 3 C18-PFP, gradiente 15-85% H ₂ 0:CH ₃ CN 0.1 % de fórmico), [M+H] ⁺ = 353 m/z.

Preparación y obtención de £)-/V'-(5-fluoro-2-nitrobenziliden)furan-2-carbohidrazida (A7H2).

A7H2

5-fluoro-2-nitrobenzaldehido (250 mg, 1.5 mmol), hidrazida del ácido 2-furoico (150 mg, 1.2 mmol), MeOH (50 ml_). Se purifica por cromatografía en columna automática de sílica sistema Biotage, DCM / MeOH (0 - 3%) obteniendo un sólido amarillo (0.330 g, 99 %) (E > 99). P.f.: 194 - 195 ⁰ C. ¹ H-RMN (300 MHz, DMSO- cf ₆ ): d 12.33 (s, 1 H, H-2), 8.91 (s, 1 H, H- 4), 8.23 (dd, J = 9.2 Hz, 1 H, H-14), 8.00 (d, J = 1.8 Hz, 1 H, H-7), 7.81 (dd, J = 9.6, 2.9 Hz, 1 H, H-12), 7.56 (dd, J = 9.0, 2.9 Hz, 1 H, H-13), 7.40 (d, J = 3.4 Hz, 1 H, H-10), 6.75 (dd, J = 3.4, 1.8 Hz, 1 H, H-8). ¹³ C-RMN (75 MHz, DMSO- cf ₆ ): d 165.66 (C-1), 162.30 (C-9) 146.31 (C-7), 144.49 (C-4), 132.26 (C-6), 132.19 (C-1 1), 128.30 (C-14), 128.25 (C-5), 1 17.58 (C- 13), 1 17.50 (C-10), 1 13.96 (C-12), 1 12.16 (C-8). Anal. Caled, para C ₁₂ H ₈ FN ₃ 0 ₄ : C, 51.99 %; H, 2.91 %; N, 15.16 %. Hallado: C, 51.94 %; H, 2.91 %; N, 15.00 %.%. HPLC-MS: t _R : 7.00 min (Columna ACE-Excel 3 C18-PFP, gradiente 15-85% H ₂ 0:CH ₃ CN 0.1 % de fórmico), [M+H] ⁺ = 278 m/z.

Preparación y obtención de (E/Z)-/V'-(5-fluoro-2-nitrobenziliden)tiofen-2-carbohidrazid a (A7H8).

5-fluoro-2-nitrobenzaldehido (220 mg, 1.3 mmol), hidrazida del ácido 2-tiofencarboxílico (160 mg, 1.1 mmol), MeOH (50 mL). Se filtra y lava el sólido obtenido por cristalización como sólido naranja (0.270 g, 82 %) (E:Z = 26:74). P.f.: 218 - 219 ⁰ C. ¹ H-RMN (300 MHz, DMSO- d ₆ y. d 12.33 (s, 1 H, H-2, E), 12.32 (s, 1 H, H-2, Z), 8.89 (s, 1 H, H-7), 8.25 (dd, = 9.1 , 5.0 Hz, 1 H, H-14), 8.00 (s, 2H, H-8, 10), 7.86 (s, 1 H, H-4), 7.57 (d, J = 9.1 Hz, 1 H, H-12), 7.27 (d, J = 5.0 Hz, 1 H, H-13). ¹³ C-RMN (75 MHz, DMSO- cf ₆ ): d 165.66 (C-1), 162.31 (C-9), 147.16 (C- 7), 144.55 (C-4), 133.05 (C-1 1), 132.65 (C-6), 128.23 (C-14), 127.98 (C-5), 1 17.59 (C-13), 1 17.54 (C-10), 1 14.84 (C-12), 1 14.21 (C-8). Anal. Caled, para C ₁₂ H ₈ FN ₃ 0 ₃ S: C, 49.15 %; H, 2.75 %; N, 14.33 %; S, 10.93 %. Hallado: C, 49.29 %; H, 2.82 %; N, 14.21 %; S, 10.92 %. HPLC-MS: t _R : 8.25 min (Columna ACE-Excel 3 C18-PFP, gradiente 15-85% H ₂ O:CH ₃ CN 0.1 % de fórmico), [M+H] ⁺ = 294 m/z.

Preparación y obtención de £)-/V'-(2-fluoro-5-nitrobenziliden)furan-2-carbohidrazida (A8H2).

2-fluoro-5-nitrobenzaldehido (240 mg, 1.44 mmol), hidrazida de ácido 2-furoico (150 mg, 1.2 mmol), MeOH (50 ml_). Se purifica por cromatografía en columna automática de sílica sistema Biotage usando DCM / MeOH (9- 10%) obteniendo un sólido naranja (0.26 g, 75 %) (E > 99). P.f.: 187 - 188 ⁰ C. ¹ H-RMN (300 MHz, DMSO- cf ₆ ): d 12.23 (s, 1 H, H-2), 8.68 (m, 2H, H-9, 10), 8.35 (m, 1 H, H-14), 8.00 (m, 1 H, H-4), 7.63 (m, 1 H, H-12), 7.38 (s, 1 H, H- 7), 6.75 (m, 1 H, H-13). ¹³ C-RMN (75 MHz, DMSO- cf ₆ ): d 165.47 (C-1), 162.31 (C-6), 153.61 (C-9), 146.40 (C-4), 143.84 (C-10), 138.59 (C-8), 126.79 (C-7), 126.64 (C-14), 123.40 (C-5), 123.24 (C-13), 1 18.00 (C-10), 117.65 (C-12), 1 12.20 (C-8). Anal. Caled, para C ₁₂ H ₈ FN ₃ 0 ₄ : C, 51.99 %; H, 2.91 %; N, 15.16 %. Hallado: C, 51.90 %; H, 2.91 %; N, 15.05 %. HPLC-MS: t _R : 6.97 min (Columna ACE-Excel 3 C18-PFP, gradiente 15-85% H ₂ 0:CH ₃ CN 0.1 % de fórmico), [M+H] ⁺ = 278 m/z.

Preparación y obtención de (E)-(/V'-(2-fluoro-5-nitrobenziliden)-2-hidroxi-2- fenilacetohidrazida (A8H8).

2-fluoro-5-nitrobenzaldehido (220 mg, 1.3 mmol), hidrazida del ácido mandélico (150 mg, 1.1 mmol), MeOH (50 mL). Se purifica por cromatografía en columna automática de sílica sistema Biotage usando DCM / MeOH (0 - 4%) obteniendo un sólido blanco (0. 16 g, 50 %) (E > 99). P.f.: 237 - 238 ⁰ C. ¹ H-RMN (300 MHz, DMSO- cf ₆ ): d 12.20 (s, 1 H, H-2), 8.82 (s, 1 H, H-10), 8.69 (s, 1 H, H-8), 8.35 (m, 1 H, H-14), 8.06 (s, 1 H, H-7), 7.96 (s, 1 H, H-4), 7.64 (m, 1 H, H-12), 7.27 (m, 1 H, H-13). ¹³ C-RMN (75 MHz, DMSO- d ₆ ): d 165.57 (C-1), 163.35 (C-6), 161.49 (C-9), 144.43 (C-4), 144.27 (2C, C-7, 14), 132.64 (C-1 1), 126.76 (2C, C-8, 10), 126.6 (C-5), 1 18.06 (C-13), 1 17.78 (C-12). Anal. Caled, para C^HsFNsOsS: C, 49.15 %; H, 2.75 %; N, 14.33 %; S, 10.93 %. Hallado: C, 49.36 %; H, 2.79 %; N, 14.24 %; S, 10.95 %. HPLC-MS: t _R : 7.85 min (Columna ACE-Excel 3 C18-PFP, gradiente 15-85% H ₂ 0:CH ₃ CN 0.1 % de fórmico), [M+H] ⁺ = 318 m/z.

Preparación y obtención de )-/V'-(4-cloro-3-nitrobenziliden)furan-2- carbohidrazida (A5H2):

4-cloro-3-nitrobenzaldehido (0.53 g, 2.9 mmol), hidrazidadel ácido 2-furoico (0.32 g, 2.5 mmol), MeOH (50 ml_). Se lava y filtra el sólido obteniendo un compuesto blanco (0.33 g, 57%) (Z > 99 %). P.f: 191-192 ⁰ C. 1 H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): d 12.17 (s, 1 H), 8.50 (s, 1 H), 8.38 (m, 1 H), 8.13 - 7.96 (m, 2H), 7.87 (m, 1 H), 7.37 (s, 1 H), 6.74 (m, 1 H).13C- RMN (75 MHz, DMSO-d6): d 153.0, 147.9, 146.2, 145.0, 134.9, 132.2 (2C), 131.5, 125.7, 123.5 (2C), 1 15.5, 112.2. Anal. Caled, para C12H8CIN304: C, 49.08 %; H, 2.75 %; N, 12.07 %. Hallado: C, 49.16 %; H, 2.89 %; N, 12.17 %. HPLC-MS: tR: 7.74 min, [M+H]+ = 294 m/z.

Eiemplo 2. de modulación de la interacción NCS1/Ric8a in vitro.

Con el fin de evaluar la capacidad de los compuestos de la invención A3H3, A5H2 y A3H4 para modular la interacción entre NCS-1 y Ric8a humanos, se transfectaron células HEK293 con una versión de Ric8a marcada con el epítopo V5 (Ric8a-V5) y NCS-1 , incubándose las células y el posterior lisado celular con el producto a ensayar. Posteriormente mediante la técnica de inmunoprecipitación se valoró la cantidad de Ric8a-V5 unido a NCS-1. Los datos (Fig. 1), indican que la presencia de los compuestos permite la interacción con Ric8-a y demuestran que la presencia del producto A3H3 incrementa la unión de NCS-1 con Ric8a en más del doble.

Ejemplo 3. Medida de la afinidad de los compuestos por la proteína NCS-1.

Mediante la técnica de espectroscopia de fluorescencia se midió la afinidad de los compuestos por dNCS-1. Se analiza la intensidad de emisión del complejo donde la señal se monitoriza a concentraciones crecientes de ligando (1 :0 a 1 :30 equivalentes) manteniendo constante la concentración de proteína 7.8 mI_, 30.8 mM, 1 eq.). Con ello, se obtiene su constante de afinidad a través de la constante de disociación aparente. En la Fig. 2 se muestra como ejemplo la gráfica de A3H3, A3H2 y A3H6. Los experimentos se realizan a 5 °C con dNCS-1 en buffer 50 mM Tris, pH 7.9, 125 mM NaCI, 0.5 mM CaCI ₂ con 5 % DMSO en un volumen total de 300 pL. El experimento se realiza a la longitud de onda de excitación de 295 n , y a la longitud de onda de emisión de 345 n (máximo de emisión) en función del compuesto en un Jobin Yvon Floromax4 Spectrofluorimeter equipado con un Peltier Thermostat, los valores obtenidos son el resultado del promedio normalizado de las tres repeticiones para cada medida. Los compuestos estudiados no presentan emisión en el rango de fluorescencia medido. Las constantes de afinidad encontradas para los compuestos testados son las siguientes:

Clausulas

1. Compuesto adecuado para promover la interacción NCS-1 y Ric8a, donde dicho compuesto comprende la estructura de fórmula (I):

Formula (I) donde A1 es Nitrógeno, N6 es NH y A2 es Oxígeno;

donde A1 está a una distancia de A2 de 2.63 ± 0.25 Á, donde A1 está a una distancia de N6 de 1.33 ± 0.15 Á, donde A2 está a una distancia de N6 de 2.32 ± 0.25 Á, donde A1 está a una distancia de R7 de 5.58 ± 0.55 Á, donde A1 está a una distancia de R8 de 3.77 ± 0.35 Á, donde A2 está a una distancia de R7 de 3.87 ± 0.35 Á, donde A2 está a una distancia de R8 de 6,04 ± 0.50 Á, donde N6 está a una distancia de R7 de 4.61 ± 0.45 Á, y donde N6 está a una distancia de R8 de 4.98 ± 0.35 Á; donde la distancia representa las distancias entre los centros de los átomos respectivos; donde R7 debe interaccionar con la parte N-terminal de la hendidura hidrofóbica de la proteína NCS1 (PDB ID código 4BY4), a un lado con W30, F85 y L89, y al otro, con 151 y F55, a través de los cuales se deben establecer interacciones hidrofóbicas y de tipo p-p, y comprende la siguiente estructura química seleccionada de la lista que consiste en:

Un heteroarilo de un único anillo, preferiblemente un tiofeno o un furano;

Un heteroarilo de dos anillos fusionados, preferiblemente un grupo indol; o

un grupo -[CH2] _n -R6, donde n presenta cualquiera de los siguientes valores: 0, 1 , o 2; y donde R6 es un heterociclo de 2 anillos fusionados o bien un único anillo heterocíclico; y donde R8 interacciona con la región de la proteína NCS1 (PDB ID código 4BY4) definida por los aminoácidos V68, Y52, F72, F48, W103 y T92, con los cuales se establecen interacciones tipo p-p e hidrofóbicas, y comprende la estructura de formula II:

Formula (II) donde al menos uno de los radicales R ¹ a R ⁵ de estructura de fórmula (II) es un grupo nitro y uno o más de los radicales R ¹ a R ⁵ se selecciona de la lista que consiste en: H, F, Cl, Br, CF ₃ O un grupo hidroxilo; y donde el compuesto de formula (II) se une al resto del compuesto de formula (I) a través del grupo metino o metilideno que se une a su vez al grupo A1 ; o cualquiera de sus isómeros o sales, para su uso en promover la interacción entre las proteínas NCS-1 y Ric8a, implicadas en el proceso de regulación del número de sinapsis, en aquellas enfermedades que cursen con un reducción en el número de sinapsis neuronales.

2. Compuesto para su uso según la clausula 1 , donde uno de los radicales R ¹ a R ⁵ de estructura de fórmula (II) es un grupo nitro, otro de los radicales R ¹ a R ⁵ se selecciona de la lista que consiste en F, Cl, Br, CF ₃ o un grupo hidroxilo, y el resto de los radicales son hidrógenos.

3. Compuesto para su uso según la clausula 1 o 2, donde R7 se selecciona de la lista que consiste en: a. Un tiofeno o un furano; o

b. un grupo indol.

4. Compuesto para su uso según cualquiera de las clausulas 1 a 3, donde dichas enfermedades que cursan con una reducción en el número de sinapsis neuronales se seleccionan de la lista que consiste en enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington y otras enfermedades neurodegenerativas, así como síndrome de Angelman, síndrome del cromosoma del X frágil, síndrome de Rett síndromes del espectro autista, epilepsia, síndrome de Rett, esquizofrenia, desorden bipolar, esclerosis lateral amiotrófica, ataxia de Friederich, parálisis supranuclear progresiva, demencia frontotemporal, demencia de cuerpos de Lewy, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob.

5. Compuesto para su uso según cualquiera de las clausulas 1 a 4, donde la enfermedad que cursa con la reducción en el número de sinapsis neuronales es la enfermedad de Alzheimer.

6. Compuesto para su uso según cualquiera de las clausulas 1 a 5, donde R ¹ es OH.

7. Compuesto para su uso según la clausula 6, donde R ² es N0 ₂ .

8. Compuesto para su uso según la clausula 7, donde R ³ R ⁴ y R ⁵ son H.

9. Compuesto para su uso según cualquiera de las clausulas 1 a 5, donde es N0 ₂ .

10. Compuesto para su uso según la clausula 9, donde R ₃ es F, Cl, o Br. 11. Compuesto para su uso según la clausula 10, donde R ₃ es Fluor.

12. Compuesto para su uso según cualquiera de las clausulas 9 a 11 , donde R ² R ⁴ y R ⁵ son H.

13. Compuesto para uso según cualquiera de las clausulas 1 a 5, donde R ² es N0 ₂ y opcionalmente R ⁴ es OH.

14. Compuesto para uso según cualquiera de las clausulas 1 a 5, donde R ³ es N0 ₂ y opcionalmente R ¹ es un F, Cl, o Br, preferiblemente flúor.

15. Compuesto para uso según cualquiera de las clausulas 1 a 5, donde R ⁴ es N0 ₂ y opcionalmente R ² o R ³ es un F, Cl, o Br, preferiblemente cloro.

16. Compuesto para uso según cualquiera de las clausulas 1 a 5, donde R ¹ es N0 ₂ y opcionalmente R ⁴ es F, Cl, o Br, preferiblemente flúor.

17. Compuesto para uso según cualquiera de las clausulas 1 a 5, donde R ¹ es N0 ₂ y opcionalmente R ⁴ es un hidroxilo.

18. Compuesto para uso según cualquiera de las clausulas 1 a 17, donde R7 es un heteroarilo que se selecciona de entre tiofenilo o furanilo, donde dichos grupos pueden estar opcionalmente sustituidos por halógeno.

19. Compuesto de fórmula (I) para uso según la clausula 1 que se selecciona de la siguiente lista:

a. (£/Z)-/\/’-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)-2-(1 H-indol-3-il)acetohidrazida (A3H3) b. (±)-(£/Z)-2-hidroxi-/\/’-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)-2 -fenilacetohidrazida (A3H6) c. (£)-4-(tert-butil)-/\/'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)benzoh idrazida (A3H17)

d. (Z)-5-cloro-/\/'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)tiofen-2-carbo hidrazida (A3H18)

e. (£/Z)-3-hidroxi-/\/'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)-2-naftoh idrazida (A3H 19)

f. (Z)-/\/'-(4-cloro-3-nitrobenziliden)furan-2-carbohidrazida (A5H2)

g. (£/Z)-/\/'-(4-cloro-3-nitrobenziliden)tiofen-2-carbohidrazi da (A5H8)

h. (£)-/\/'-(5-fluoro-2-nitrobenziliden)furan-2-carbohidrazida (A7H2) i. (E/Z)-/\/'-(5-fluoro-2-nitrobenziliden)tiofen-2-carbohidrazi da (A7H8)

j. (£)-A/'-(2-fluoro-5-nitrobenziliden)furan-2-carbohidrazida (A8H2)

k. (E)-(/\/'-(2-fluoro-5-nitrobenziliden)-2-hidroxi-2-fenilacet ohidrazida (A8H8)

20. Compuesto de fórmula (I) que se selecciona de la siguiente lista: a. (£/Z)-/\/’-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)-2-(1 H-indol-3-il)acetohidrazida (A3H3) b. (£)-4-(tert-butil)-/\/'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)benzoh idrazida (A3H17)

c. (Z)-5-cloro-/\/'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)tiofen-2-carbo hidrazida (A3H18)

d. (£/Z)-3-hidroxi-/\/'-(3-hidroxi-4-nitrobenziliden)-2-naftoh idrazida (A3H19)

e. (£)-/\/'-(5-fluoro-2-nitrobenziliden)furan-2-carbohidrazida (A7H2)

f. (£/Z)-/\/'-(5-fluoro-2-nitrobenziliden)tiofen-2-carbohidraz ida (A7H8)

g. (£)-/\/'-(2-fluoro-5-nitrobenziliden)furan-2-carbohidrazida (A8H2)

h. (£)-(/\/'-(2-fluoro-5-nitrobenziliden)-2-hidroxi-2-fenilace tohidrazida (A8H8)

21. Compuesto según la reivindicación 20 para su uso como medicamento.

22. Composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto según la clausula 20 y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.