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Title:
AMINOCYCLITOL COMPOUNDS, PROCEDURE FOR THE OBTAINMENT AND USES THEREOF
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2010/106215
Kind Code:
A1
Abstract:
Aminocyclitol compounds, procedure for the obtainment and uses thereof. Aminocyclitol compounds and uses thereof as pharmaceutical compositions for the treatment of diseases associated with alterations in iNKT cells, more specifically autoimmune diseases, cancer, infections caused by pathogenic microorganisms or inflammatory diseases. Furthermore the invention relates to the procedure for the obtainment of said compounds.

Inventors:
LLEBARIA SOLDEVILLA AMADEO (ES)
BEDIA GIRBES CARMEN (ES)
HARRAK SERIFI YOUSSEF (ES)
CASTANO GARCIA ANGEL RAUL (ES)
BARRA QUAGLIA CAROLINA MERCEDES (ES)
DELGADO CIRILO ANTONIO (ES)
Application Number:
PCT/ES2010/070164
Publication Date:
September 23, 2010
Filing Date:
March 18, 2010
Export Citation:
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Assignee:
CONSEJO SUPERIOR INVESTIGACION (ES)
UNIV BARCELONA AUTONOMA (ES)
UNIV BARCELONA (ES)
LLEBARIA SOLDEVILLA AMADEO (ES)
BEDIA GIRBES CARMEN (ES)
HARRAK SERIFI YOUSSEF (ES)
CASTANO GARCIA ANGEL RAUL (ES)
BARRA QUAGLIA CAROLINA MERCEDES (ES)
DELGADO CIRILO ANTONIO (ES)
International Classes:
C07C233/36; C07H5/04
Domestic Patent References:
WO2008128062A12008-10-23
WO2007118234A22007-10-18
Foreign References:
Other References:
M EGIDO GABAS ET AL.: "New aminocyclitols as modulators of glucosylceramide metabolism", ORGANIC BIOMOLECULAR CHEMISTRY, vol. 3, 2005, pages 1195 - 1201, XP009124552
See also references of EP 2409966A4
Attorney, Agent or Firm:
PONS ARIÑO, Angel (ES)
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Claims:
REIVINDICACIONES

1. Compuesto de fórmula general (I):

(I)

donde: R es un grupo alquilo (C5-C35), sustituido o no sustituido.

R2, R3, R4 y R5 son iguales o diferentes entre sí y se seleccionan de Ia lista que comprende hidrógeno, hidroxilo, alcoxilo o alquilo (C1-C6), sustituido o no sustituido;

R6 se selecciona de Ia lista que comprende un alquilo (C5- C35), arilo, cicloalquilo, heterociclo; y

— - representa Ia existencia o no de un doble enlace;

o un isómero, sus sales y/o solvato del mismo.

2. Compuesto según Ia reivindicación 1 , donde R1 es un grupo alquilo (C7- C25).

3. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde R2, R3, R4 y/o R5 son hidroxilo.

4. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde R es hidroxilo y/o R5 es hidrógeno.

5. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde R2 es hidrógeno o alcoxilo.

6. Compuesto según Ia reivindicación 5, donde R2 es metoxilo.

7. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde R3 es hidroxilo o un hidroxialquilo (C1-C3).

8. Compuesto según Ia reivindicación 7, donde R3 es hidroximetilo.

9. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, donde R6 es un grupo alquilo (Cio-C2o)-

10. Compuesto según Ia reivindicación 1 , de fórmula:

(2S,3S,4R)-2-octanamido-1 -(V rs, 2' RS, 3' S R ,4' S R, 5' RS, 6' SR)-

2',3',4',5',6'-pentahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol;

(2S,3S,4R)-2-Hexacosanamido-1-(1 'rs,2'RS,3'SR,4'sr,5'RS,6'SR)-

2',3',4',5',6'-pentahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol; (2S,3S,4R)-2-octanamido-1 -{VR,2'S,3'R,4'S,5'S,6'S)-2',3',4',5', 6'- pentahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol;

(2S,3S,4R)-2-Hexacosanamido-1-(1 'R,2'S,3'R,4'S,5'S,6'S)-2,3,4,5,6- pentahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol;

(2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -(1 'S,2'S,3'R,4'R,5'S)-2,3,4,5,- tetrahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol;

(2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -(1 'R,2'S,3'R,4'R,5'S)-2,3,4,5,- tetrahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol;

(2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -{VS,2'S,3'R,4'R,5'S, 6'S)-2,3,4,5,- tetrahidroxi-6-metoxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol; (2S,3S,4R)-2-Hexacosanamido-1-(1 'S,4'S,5'S,6'S)-4',5',6'- trihidroxiciclohexenilaminooctadecano-3,4-diol; (2S,3S,4R)-2-Hexacosanamido-1-(1 'S,4'S,5'S,6'S)-4',5',6'- trihidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol; (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -((1 'S,2'S,3'S,4'S,5'S,6'R)-5- hidroximetil-2,3,4,6,-tetrahidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol; (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -((1 'S,2'S,3'S,4'S,5'R)-5-hidroximetil-

2,3,4,-trihidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol; o (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1-((1 'R,2'S,3'S,4'S,5'R)-5-hidroximetil- 2,3,4,-trihidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol.

11. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, donde dicho compuesto es una sal de un clorhidrato.

12. Procedimiento de obtención del compuesto de fórmula general (I) que comprende: - el acoplamiento de un aminociclitol de fórmula general (II)

(H) con una aziridina de fórmula general (V) mediante ataque nucleofílico,

o con un aldehido de fórmula general (Vl) mediante aminación reductiva:

(Vl) para dar los compuestos intermedios (VII),

R(

,0 H ,NH CX

PG P¿ PG

(VII)

- y Ia posterior eliminación de los grupos protectores PG y acilación,

donde: R1, R2, R3, R4, R5 y R6 están descritos en Ia reivindicación 1 y PG es un grupo protector.

13. Procedimiento según Ia reivindicación 12, donde el aminociclitol de fórmula general (II) se obtiene:

- por reducción del compuesto de fórmula general (III);

RtpγR2

GP'°

(III)

- o por sustitución de compuestos de fórmula general (IV)

(IV) donde: R1, R2, R3, R4 y R5 están descritos en Ia reivindicación 1 , X es haluro o sulfonato y PG es un grupo protector.

14. Uso del compuesto de fórmula general (I) para Ia elaboración de una composición farmacéutica.

15. Uso del compuesto de fórmula general (I) para Ia elaboración de una composición farmacéutica para el tratamiento y/o prevención de enfermedades a través de Ia estimulación de las células iNKT.

16. Uso según Ia reivindicación 15, donde las enfermedades tratables o prevenibles a través de Ia estimulación de las células iNKT se seleccionan de Ia lista que comprende: enfermedades autoinmunes, cáncer, infecciones microbianas o enfermedades inflamatorias.

17. Uso según Ia reivindicación 16, donde las enfermedades autoinmunes se seleccionan de Ia lista que comprende asma, EPOC, colitis crónica, diversas alergias, lupus eritematoso sistémico, diabetes mellitus de tipo 1 , esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren o artritis reumatoide.

18. Uso según Ia reivindicación 16, donde las infecciones causadas por microorganismos patógenos se seleccionan de Ia lista que comprende gripe, SIDA, hepatitis, clamidiosis, leishmaniosis, malaria, tuberculosis, tripanosomiasis, estreptococosis, o pseudomoniasis.

19. Composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula general (I) y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

20. Composición farmacéutica según Ia reivindicación 19 que además comprende otro principio activo.

Description:
COMPUESTOS AMINOCICLITOLES, PROCEDIMIENTO DE OBTENCIÓN

Y USOS

La presente invención se refiere a los compuestos de fórmula general (I) y a sus usos como composiciones farmacéuticas para el tratamiento de enfermedades asociadas con alteraciones en las células iNKT. Además, Ia invención se refiere al procedimiento de obtención de dichos compuestos. Por tanto, Ia invención se puede englobar en el campo químico y/o farmacéutico.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR

Las células T asesinas naturales NKT (del inglés natural killer T cells) son una clase de linfocitos que regula una amplia gama de respuestas inmunes. Una subclase de células NKT, las células NKT invariantes (iNKT), reconocen antígenos de tipo glicolipídico presentados por proteínas MHC CD1d y que participan en diversas respuestas inmunes mediante Ia promoción de Ia secreción de citoquinas. El papel de estas células ha sido descrito en Ia regulación de Ia autoinmunidad, Ia respuesta a los tumores, las infecciones microbianas y Ia patogenia de procesos inflamatorios como el asma.

El glicolípido sintético α-galactosilceramida (α-GalCer) fue el primer antígeno conocido presentado por CD1d que estimula el receptor de células T invariante (TCR), expresadas por las células iNKT. α-GalCer es un análogo estructural optimizado de compuestos antitumorales aislados a partir de esponjas marinas que contiene una galactosa unida al hidroxilo primario de fitoceramida en configuración alfa, y que se encuentra adiada en el nitrógeno con ácidos grasos de cadena larga. Desde su descubrimiento, α-GalCer ha sido el prototipo de antígeno para Ia estimulación de células iNKT, aunque otros glicolípidos que actúan como antígenos presentados por proteínas CD1 han sido también identificados. La excepcional potencia de α-GalCer en Ia estimulación de células NKT origina una serie de respuestas biológicas, derivadas de Ia liberación simultánea de citoquinas de tipo Th 1 y Th2, que ejercen efectos celulares opuestos y determinan una fase de anergia antes de recuperar el equilibrio homeostático, limitando Ia eficacia de α-GalCer como inmunomodulador.

Por otra parte, los determinantes estructurales de Ia interacción del glicolípido con Ia proteína presentadora CD1d son conocidos, y también Ia estructura cristalina del complejo de Ia α-GalCer unida a las proteínas CD1d y TCR. Estos estudios estructurales muestran que Ia ceramida se une a CD1d en dos bolsillos hidrófobos donde se insertan las cadenas de los lípidos, mientras que una red de enlaces de hidrógeno bloquea Ia posición de Ia galactosa, que sobresale del sitio de unión y se presenta al TCR para su reconocimiento, donde los grupos hidroxilo del glicolípido desempeñan un papel fundamental.

La extraordinaria potencia de Ia estimulación de las células NKT por α- GalCer no está exenta de problemas, hecho que ha impulsado el diseño y síntesis de compuestos similares con el fin de mejorar sus propiedades biológicas, incluso a expensas de Ia obtención de compuestos menos potentes, y dirigido principalmente a Ia modulación de Ia proporción Th1/Th2 en Ia producción de citoquinas inducidas.

Se han descrito varios enfoques para el diseño de compuestos análogos de α-GalCer, principalmente en relación con las variaciones en Ia longitud y naturaleza de los lípidos (cfr. C. McCarthy, et al., J Exp Med 2007, 204, 1131 ; M. Trappeniers, et al., ChemMedChem 2008, 3, 1061 ; K. Fuhshuku, et al., Bioorq Med Chem 2008, 16, 950; T. Tashiro, et al., Bioorq Med Chem 2008, 16, 8896) o Ia sustitución de Ia galactosa por otros mono o polisacáridos (cfr. T. Kawano et al., Science 1997, 278, 1626) y otras diversas sustituciones relacionadas (cfr. US2007238871A1 ). Algunos análogos de α-GalCer con grupos lineales no glicosídicos son capaces de activar células iNKT e inducen respuestas inmunológicas, Io que demuestra que es posible Ia modulación de los efectos del glicolípido después de Ia introducción de modificaciones estructurales en el anillo de galactosa de α- GalCer (cfr. J. D. SiIk et al., J Immunol 2008, 180, 6452; R. W. Franck, Acc Chem Res 2006, 39, 692).

A Ia vista de Io anteriormente expuesto, sería conveniente el descubrimiento de compuestos nuevos de tipo glicolípido o bien análogos de glicolípidos conocidos, tales como Ia α-GalCer, que permitan Ia modulación de Ia respuesta inmune mediada por células y que sean de utilidad para el desarrollo de medicamentos, adyuvantes, vacunas y para cualquier inmunoterapia diseñada para estimular las células NKT.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona compuestos análogos de glicolípidos capaces de estimular y activar células NKT con producción preferente de citoquinas de tipo Th2. La estructura de estos compuestos consiste en Ia presencia de una ciclohexilamina polihidroxilada unida al hidroxilo primario de un lípido de tipo ceramida por un enlace amina secundaria.

Un primer aspecto de Ia presente invención se refiere a los compuestos de fórmula general (I) o sus isómeros, sus sales y/o solvatos de los mismos (a partir de ahora compuestos de Ia invención):

(I)

donde: R 1 es un grupo alquilo (C5-C35), sustituido o no sustituido. R 2 , R 3 , R 4 y R 5 son iguales o diferentes entre sí y se seleccionan de Ia lista que comprende hidrógeno (H), hidroxilo (OH), alcoxilo (OR 3 ) o alquilo (CrC 6 ), sustituido o no sustituido;

R 6 se selecciona de Ia lista que comprende los siguientes grupos, sustituidos o no sustituidos, alquilo (C5-C35), arilo, cicloalquilo o heterociclo; y

— representa Ia existencia o no de un doble enlace.

El término "alquilo" se refiere en Ia presente invención en el caso de R 1 y/o R 6 , a cadenas alifáticas, lineales o ramificadas, que tienen de 6 a 35 átomos de carbono. En el caso de R 2 , R 3 , R 4 y/o R 5 , el término alquilo se refiere a cadenas alifáticas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 6 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, /-propilo, n-butilo, tere-butilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo, aunque preferiblemente tienen de 1 a 3 átomos de carbono. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como halógeno, hidroxilo, azida, ácido carboxílico o por un grupo, sustituido o no sustituido, seleccionado entre: arilo, hidroxilo, amino, amido, éster, ácido carboxílico, éter, tiol, acilamino o carboxamido. Cuando el grupo alquilo esta sustituido por un arilo se describe como "arilalquilo", como por ejemplo, y no limitativamente, en el caso de un grupo bencilo. El término "alcoxilo" se refiere en Ia presente invención a un grupo de fórmula -OR a en Ia que R a es un alquilo (Ci-Cs), como por ejemplo, y no limitativamente, metoxilo, etoxilo o propoxilo. Preferiblemente el alcoxilo es un metoxilo.

El término "arilo" se refiere en Ia presente invención a una cadena carbocíclica aromática, que tiene de 6 a 18 átomos de carbono, pudiendo ser de anillo único ó múltiple, en este último caso con anillos separados y/o condensados. Se pueden dar como ejemplos de grupo arilo, pero no limitativamente, los grupos: fenilo, naftilo, indenilo, etc. Preferiblemente el grupo arilo es un fenilo.

"Cicloalquilo" se refiere a un radical estable monocíclico o bicíclico de 3 a 10 miembros, que está saturado o parcialmente saturado, y que sólo consiste en átomos de carbono e hidrógeno, tal como ciclopentilo, ciclohexilo o adamantilo.

El término "heterociclo" se refiere, en Ia presente invención, a un radical estable monocíclico o bicíclico de 3 a 10 miembros, que está insaturado, saturado o parcialmente saturado, y que consiste en átomos de carbono y de al menos un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno o azufre. Preferiblemente el heteroátomo es nitrógeno, y más preferiblemente el ciclo es un anillo de 5 ó 6 miembros. Ejemplos de heterocicloalquilos pueden ser, no limitativamente: piperidina, piperazina, purina, pirazolina o pirrolidina.

En una realización preferida de los compuestos de Ia invención, R 1 es un grupo alquilo (C7-C25).

En otra realización preferida de los compuestos de Ia invención, R 2 , R 3 , R 4 y/o R 5 son hidroxilo. Más preferiblemente R 4 es hidroxilo y/o R 5 es hidrógeno y/o R 3 es hidroxilo o hidroxialquilo, más preferiblemente dicho hidroxialquilo (R 3 ) es un hidroximetilo y/o R 2 es hidrógeno, un grupo hidroxilo o alcoxilo, en cuyo caso dicho alcoxilo es más preferiblemente metoxilo.

En otra realización preferida de los compuestos de Ia invención, R 6 es un grupo alquilo (Cio-C 2 o)-

En una realización más preferida los compuestos de Ia invención se seleccionan de Ia lista que comprende:

(2S,3S,4R)-2-octanamido-1-(1 'rs,2'RS,3'SR,4'SR,5'RS,6'SR)-2',3',4',5',6'- pentahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol;

(2S,3S,4R)-2-Hexacosanamido-1-(1 'rs,2'RS,3'SR,4'sr,5'RS,6'SR)- 2',3',4',5',6'-pentahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-dio l;

(2S,3S,4R)-2-octanamido-1 -(1 'R,2'S,3'R,4'S,5'S,6'S)-2',3',4',5', 6'- pentahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol;

(2S,3S,4R)-2-Hexacosanamido-1-(1 'R,2'S,3'R,4'S,5'S,6'S)-2,3,4,5,6- pentahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol; (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -(1 'S,2'S,3'R,4'R,5'S)-2,3,4,5,- tetrahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol;

(2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -(1 'R,2'S,3'R,4'R,5'S)-2,3,4,5,- tetrahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol;

(2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -(1 'S,2'S,3'R,4'R,5'S, 6'S)-2,3,4,5,- tetrahidroxi-6-metoxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol;

(2S,3S,4R)-2-Hexacosanamido-1-(1 'S,4'S,5'S,6'S)-4',5',6'- trihidroxiciclohexenilaminooctadecano-3,4-diol;

(2S,3S,4R)-2-Hexacosanamido-1-(1 'S,4'S,5'S,6'S)-4',5',6'- trihidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol; (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -((1 'S,2'S,3'S,4'S,5'S,6'R)-5-hidroximetil-

2,3,4,6,-tetrahidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol; (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1-((1 'S,2'S,3'S,4'S,5'R)-5-hidroximetil- 2,3,4,-trihidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol; (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1-((1 'R,2'S,3'S,4'S,5'R)-5-hidroximetil- 2,3,4,-trihidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol; o cualquiera de sus sales, preferiblemente clorhidratos.

Otro aspecto de Ia presente invención se refiere a los compuestos de Ia fórmula general (I) para su uso en Ia elaboración de un medicamento o composición farmacéutica, preferiblemente para el tratamiento y/o prevención de enfermedades autoinmunes, cáncer, infecciones causadas por microorganismos patógenos, enfermedades inflamatorias, y, en general, de cualquier enfermedad cuyo tratamiento y/o prevención es susceptible de beneficiarse de las actividades biológicas mostradas por los productos descritos en Ia presente invención a través de Ia estimulación de células iNTK, o bien a una sal, derivado o solvato de los mismos, o bien a un profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Los compuestos de Ia fórmula general (I), también se pueden utilizar para Ia elaboración de vacunas o adyuvantes de vacunación u otros métodos de activación de Ia respuesta del sistema inmunitario conocidos por un experto en Ia materia.

Las enfermedades infecciosas causadas por microorganismos patógenos pueden ser infecciones víricas como por ejemplo gripe, SIDA o hepatitis; infecciones bacterianas como por ejemplo clamidiosis, tuberculosis, estreptococosis, o pseudomoniasis; o infecciones parasitarias como por ejemplo leishmaniosis, malaria o tripanosomiasis.

Las enfermedades autoinmunes y/o inflamatorias se pueden seleccionar de Ia lista que comprende, no limitativamente, lupus eritematoso sistémico, diabetes mellitus de tipo 1 , esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren, artritis reumatoide, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC, o bien COPD en sus siglas en inglés), colitis crónica o diversas alergias.

El término "cáncer" o "canceroso" tal y como se utiliza en Ia presente descripción, se refiere a una alteración de las células tumorales que tienen capacidad de invadir tejidos o de producir metástasis en lugares distantes del tumor primario. Son ejemplos de cáncer, no limitativamente: cáncer de mama, cánceres ginecológicos, cáncer de colon, cáncer de próstata, cáncer de piel, cáncer hepatocelular, cáncer de pulmón, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de páncreas, cáncer de vejiga, cáncer de hígado, cáncer del tracto urinario, cáncer tiroideo, cáncer renal, melanoma, cáncer de cerebro, sarcoma, linfoma o leucemia.

Los compuestos de Ia presente invención representados por Ia fórmula (I) pueden incluir isómeros, dependiendo de Ia presencia de enlaces múltiples (por ejemplo, Z, E), incluyendo isómeros ópticos o enantiómeros, dependiendo de Ia presencia de centros quirales. Los isómeros, enantiómeros o diastereoisómeros individuales y las mezclas de los mismos caen dentro del alcance de Ia presente invención, es decir, el término isómero también se refiere a cualquier mezcla de isómeros, como diastereómeros, racémicos, etc., incluso a sus isómeros ópticamente activos o las mezclas en distintas proporciones de los mismos. Los enantiómeros o diastereoisómeros individuales, así como sus mezclas, pueden separarse mediante técnicas convencionales.

Tal como aquí se utiliza, el término "derivado" incluye tanto a compuestos farmacéuticamente aceptables, es decir, derivados del compuesto de fórmula (I) que pueden ser utilizados en Ia elaboración de un medicamento, como derivados farmacéuticamente no aceptables ya que éstos pueden ser útiles en Ia preparación de derivados farmacéuticamente aceptables. La naturaleza del derivado farmacéuticamente aceptable no es crítica, siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable.

Asimismo, dentro del alcance de esta invención se encuentran los profármacos de los compuestos de fórmula (I). El término "profármaco" tal como aquí se utiliza incluye a cualquier compuesto derivado de un compuesto de fórmula (I) -por ejemplo y no limitativamente: esteres (incluyendo esteres de ácidos carboxílicos, esteres de aminoácidos, esteres de fosfato, esteres de sulfonato de sales metálicas, etc.), carbamatos, amidas, etc.- que al ser administrado a un individuo puede ser transformado directa o indirectamente en dicho compuesto de fórmula (I) en el mencionado individuo. Ventajosamente, dicho derivado es un compuesto que aumenta Ia biodisponibilidad del compuesto de fórmula (I) cuando se administra a un individuo o que potencia Ia liberación del compuesto de fórmula (I) en un compartimento biológico. La naturaleza de dicho derivado no es crítica siempre y cuando pueda ser administrado a un individuo y proporcione el compuesto de fórmula (I) en un compartimento biológico de un individuo. La preparación de dicho profármaco puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en Ia materia.

Los compuestos de Ia invención pueden estar en forma cristalina como compuestos libres o como solvatos. En este sentido, el término "solvato", tal como aquí se utiliza, incluye tanto solvatos farmacéuticamente aceptables, es decir, solvatos del compuesto de fórmula (I) que pueden ser utilizados en Ia elaboración de un medicamento, como solvatos farmacéuticamente no aceptables, los cuales pueden ser útiles en Ia preparación de solvatos o sales farmacéuticamente aceptables. La naturaleza del solvato farmacéuticamente aceptable no es crítica siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable. En una realización particular, el solvato es un hidrato. Los solvatos pueden obtenerse por métodos convencionales de solvatación conocidos por los expertos en Ia materia. Para su aplicación en terapia, los compuestos de fórmula (I), sus derivados isómeros, sales, profármacos o solvatos, se encontrarán, preferentemente, en una forma farmacéuticamente aceptable o sustancialmente pura, es decir, que tiene un nivel de pureza farmacéuticamente aceptable excluyendo los aditivos farmacéuticos normales tales como diluyentes y portadores, y no incluyendo material considerado tóxico a niveles de dosificación normales. Los niveles de pureza para el principio activo son preferiblemente superiores al 50%, más preferiblemente superiores al 70%, y todavía más preferiblemente superiores al 90%. En una realización preferida, son superiores al 95% de compuesto de fórmula (I), o de sus sales, solvatos o profármacos.

Los compuestos de Ia presente invención de formula (I) pueden ser obtenidos o producidos mediante una vía sintética química u obtenidos a partir de una materia natural de distinto origen.

Otro aspecto de Ia presente invención se refiere a un procedimiento de obtención de los compuestos de Ia invención de fórmula (I) o un isómero, sus sales y/o solvato del mismo, que comprende los siguientes pasos que se resumen en el esquema 1 :

A) preparación de aminociclitoles de fórmula general (II), por:

A1 ) reducción de ciclohexil o ciclohexenil azidas (fórmula general (III)) en los que los sustituyentes hidroxilo se han bloqueado con un grupo protector (PG), preferentemente bencilo, o

A2) por sustitución de haluros o sulfonatos de ciclohexilo o ciclohexenilo (fórmula general (IV)) con amoniaco u otras aminas en los que los sustituyentes hidroxilo se han bloqueado con un grupo protector (PG), preferentemente bencilo; B) activación de fitoesfingosina o moléculas análogas mediante Ia preparación de:

B1 ) aldehidos (Vl), en los que los sustituyentes hidroxilo se han bloqueado con un grupo protector, preferentemente bencilo, o

B2) mediante Ia formación de aziridinas (V), en las que los sustituyentes hidroxilo del diol se han bloqueado con un grupo protector, preferentemente bencilo o isopropilideno.

C) acoplamiento de los aminociclitoles obtenidos según el paso (A) con:

C1 ) los aldehidos obtenidos en el paso (B1 ) mediante aminación reductiva; ó

C2) ataque nucleofílico sobre las aziridinas derivadas de fitoesfingosina, obtenidas en el paso (B2); y

D) acilación de Ia amina presente en Ia fitoesfingosina con ácidos carboxílicos o sus derivados seguida de Ia eliminación de los grupos protectores.

(I)

Esquema 1

Donde: R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 y R 6 están descritos anteriormente; X es un haluro o sulfonato; y PG es un grupo protector.

Otro aspecto más de Ia presente invención se refiere a una composición farmacéutica útil para el tratamiento y/o prevención de enfermedades a través de Ia estimulación de las células iNKT, en adelante composición farmacéutica de Ia invención, que comprende un compuesto o mezcla de compuestos de fórmula (I), en cantidad terapéuticamente efectiva, o una sal, profármaco, solvato, derivado o estereoisómero de los mismos farmacéuticamente aceptable, junto con un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable, para Ia administración a un paciente.

Los adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden ser utilizados en dichas composiciones son los adyuvantes y vehículos conocidos por los técnicos en Ia materia y utilizados habitualmente en Ia elaboración de composiciones terapéuticas.

En el sentido utilizado en esta descripción, Ia expresión "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a Ia cantidad del agente o compuesto capaz de desarrollar Ia acción terapéutica determinada por sus propiedades farmacológicas, calculada para producir el efecto deseado y, en general, vendrá determinada, entre otras causas, por las características propias de los compuestos, incluyendo Ia edad, estado del paciente, Ia severidad de Ia alteración o trastorno, y de Ia ruta y frecuencia de administración.

Los compuestos descritos en Ia presente invención, sus derivados, sales, profármacos y/o solvatos así como las composiciones farmacéuticas que los contienen pueden ser utilizados junto con otros fármacos, o principios activos, adicionales para proporcionar una terapia de combinación. Dichos fármacos adicionales pueden formar parte de Ia misma composición farmacéutica o, alternativamente, pueden ser proporcionados en forma de una composición separada para su administración simultánea o no a Ia de Ia composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o un profármaco, solvato, derivado o sus sales.

En otra realización particular, dicha composición terapéutica se prepara en forma de una forma sólida o suspensión acuosa, en un diluyente farmacéuticamente aceptable. La composición terapéutica proporcionada por esta invención puede ser administrada por cualquier vía de administración apropiada, para Io cual dicha composición se formulará en Ia forma farmacéutica adecuada a Ia vía de administración elegida. En una realización particular, Ia administración de Ia composición terapéutica proporcionada por esta invención se efectúa por vía oral, tópica, rectal o parenteral (incluyendo subcutánea, intraperitoneal, intradérmica, intramuscular, intravenosa, etc.).

El uso de los compuestos de Ia invención es compatible con su uso en protocolos en que los compuestos de Ia fórmula (I), o sus mezclas se usan por sí mismos o en combinaciones con otros tratamientos o cualquier procedimiento médico.

A Io largo de Ia descripción y las reivindicaciones Ia palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en Ia materia, otros objetos, ventajas y características de Ia invención se desprenderán en parte de Ia descripción y en parte de Ia práctica de Ia invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de Ia presente invención.

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Fig. 1.- Muestra los análisis por citometria de flujo de esplenocitos de ratón incubados con diferentes compuestos durante 5,5 días. Los compuestos fueron ensayados a una concentración final de 1 μg/mL en medio completo con 1 % de metanol (MeOH), mientras que Ia DGalCer (DGC) se usó a 0.2 μg/mL. Los cultivos celulares fueron marcados con anticuerpos específicos anti-NK1-PE y anti-TCR-FITC. Los porcntajes de células NKT (células doblemente positivas) fueron calculados entre Ia población de células T seleccionadas electrónicamente.

Fig. 2.- Muestra Ia capacidad de compuestos de tipo aminociclitol para inducir citoquinas por estimulación de células NKT. Esplenocitos derivados de 3 ratones B6 fueron combinados y cultivados por tetraplicado con 1 μg/mL de aminociclitoles o 0,1 μg/ml_ de α-GalCer (aGC) y se determinaron las citoquinas IFND (Fig. 2A) e IL-4 (Fig. 2B) presentes en los sobrenadantes de los cultivos a los cuatro días mediante ELISA (2 determinaciones). Los datos representan Ia media + SD de un experimento representativo. * Indica resultados estadísticamente significativos frente a cultivos control sin compuesto a ensayar.

Fig. 3.- Muestra como el compuesto 4b induce citoquinas de tipo TM y Th2 producidas por células NKT. Cuantificación de Ia producción de IFNγ (Fig. 3A) e IL-4 (Fig. 3B) tras Ia estimulación in vitro de cultivos de células de bazo de ratón conteniendo agonistas lipidíeos de células iNKT en un ensayos dosis-respuesta. Los datos muestran Ia media + SD de un experimento representativo con 2 ratones, cultivos duplicados de cada ratón a las concentraciones indicadas de agonista y 3 determinaciones ELISA para cada sobrenadante de cultivo.

EJEMPLOS

A continuación se ilustrará Ia invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que desarrollan el proceso de selección de los compuestos de Ia invención.

Preparación de amidas derivadas de fitoesfingosina Ejemplo 1 : Λ/-((2S,3S,4R)-3,4-bis(benciloxi)-1-hidroxioctadecan-2-il)o ctanamida

A una disolución de 249 mg (0.5 mmol) de 3,4 di-O-bencilfitoesfingosina (C. Xia et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2006, 16, 2195-2199) en THF (tetrahidrofurano) (10 ml_) se añade ácido octanoico (143 mg, 1.1 mmol) y el hidrocloruro de Λ/-(3-Dimetilaminopropil)-Λ/'-etilcarbodiimida (EDC, 1.1 mmol) y Ia mezcla de reacción se agita a reflujo durante 3 h. La mezcla se enfría a temperatura ambiente y se añade disolución saturada de NH 4 CI. Se extrae con Et 2 O (éter etílico) y se seca con Na 2 SO 4 anhidro. Se filtra el sólido y se evaporan los disolventes para dar un crudo que se purifica cromatografía en sílica gel utilizando una mezcla (acetato de etilo/hexano 1 :10 a 1 :5 v:v). Se obtiene el producto (249 mg) en forma de aceite con un rendimiento del 81 %.

[α] D = - 32.3 (CDCI 3 , c, 1.0); IR (neat, cm "1 ): 3305, 2929, 1654,1540, 1070; 1 H-NMR (CDCI 3 , 500 MHz); δ 7.35 (m, 10H); 6.06 (d, J = 8.5, 1 H); 4.73 (d, J = 12, 1 H); 4.67 (d, J = 12, 1 H); 4.62 (d, J = 12, 1 H); 4.46 (d, J = 12, 1 H); 4.15 (m, 1 H); 4.00 (dd, J = 11.5, 3, 1 H); 3.70 (m, 2H); 3.62 (dd, J =, 11.5, 4.5 1 H); 3.05 (br, 1 H); 2.00 (m, 2H),1.77-1.41 (m, 6H); 1.26 (m, 30 H); 0.88 (t, J = 7, 6H). 13 C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 172.8, 138.1 , 137.7, 128.6- 127.7 (10 C), 82.1 , 79.0, 73.0, 72.8, 62.9, 50.5, 36.6, 31.8, 31.6, 30.7, 29.6- 29.0 (11 C), 25.9, 25.6, 22.6 (2C), 14.0 (2C). HRMS (Espectro de masas de alta resolución). Calculado para C 4 oH 6 5NO 4 (M+H + ): 624.4992. Encontrado: 624.5015. Ejemplo 2: Λ/-((2S,3S,4R)-3,4-bis(benciloxi)-1-hidroxioctadecan-2-il)h exacosanamida

De manera análoga a Ia descrita en el ejemplo 1 se obtiene Ia amida a partir de 302 mg de ácido hexacosanoico, 251 mg de 3,4 di-O- bencilfitoesfingosina y 215 mg de EDC para dar un sólido incoloro (83 %). Pf :102-103; [α] D = - 27.2 (CDCI 3 , c, 1.0); IR (neat, cm "1 ): 3310, 2945,

1659,1533, 1063; 1 H-NMR (CDCI 3 , 100 MHz); δ 7.34 (m, 10 H); 6.03 (d, J =

8, 1 H); 4.72 (d, J = 11.5, 1 H); 4.66 (d, J = 11.5, 1 H); 4.61 (d, J = 11.5, 1 H); 4.45 (d, J = 11.5, 1 H); 4.13 (m, 1 H); 3.99 (dd, J =11.5, 3 1 H); 3.70 (m, 2H);

3.61 (dd, J = 11.5, 4.4, 1 H); 3.05 (br, 1 H); 2.00 (m, 2H),1.76-1.40 (m, 6H);

1.27 (m, 66H); 0.87 (t, J = 7, 6H). 13 C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 172.8,

138.1 , 137.8, 128.7-127.8 (10C), 82.3, 79.0, 73.0, 72.9, 63.0, 50.5, 36.7,

31.9 (2C), 30.8, 29.7-29.3 (29C), 26.0, 25.6, 22.7 (2C),14.1 (2C). HRMS. Calculado para C 58 HiOiNO 4 (M+H + ): 876.7609. Encontrado: 876.7828.

Preparación de aldehidos

Ejemplo 3: Λ/-((2S,3S,4R)-3,4-bis(benciloxi)-1-oxooctadecan-2-il)octan amida

De acuerdo con un método descrito [M. Ocejo, et al Synlett 2005, 13, 2110-2112] se disuelven 123 mg (0.2 mmol) de Λ/-((2S,3S,4R)-3,4- bis(benciloxi)-1-hidroxioctadecan-2-il)octanamida preparada en el ejemplo 1 en acetato de etilo (AcOEt) (40 ml_) y se añaden 224 mg (0.8 mmol) de ácido o-iodoxibenzoico (IBX) a temperatura ambiente. Se calienta a reflujo durante 3 h y se lleva seguidamente Ia mezcla a temperatura ambiente, se diluye con hexano (40 ml_) y se filtra el sólido. El filtrado se evapora para dar 120 mg del aldehido de gran pureza con rendimiento cercano al 100%. Este material se utiliza de manera inmediata en las reacciones siguientes.

IR (film, cm "1 ): 3383, 2903, 1708, 1497, 1041 , 738. 1 H-NMR (CDCI 3 , 500 MHz); δ: 9.67 (s, 1 H), 7.30-7.28 (m, 10H); 6.06 (d, J = 7.5, 1 H); 4.96 (dd, 7.5, J = 2.5, 1 H); 4.61 (m, 2H); 4.54 (m, 2H); 3.94 (m,1 H); 3.62 (q, J = 5.5, 1 H); 2.04 (m, 2H); 1.71 (m, 2H); 1.53 (m, 2H); 1.28 (m, 32H); 0.90 (t, J = I, 6H); 13 C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 198.0, 172.1 , 137.3, 137.1 , 128.5-127.8 (10C), 81.3, 76.6, 72.0, 71.5, 58.6, 36.8, 31.9, 30.3, 29.6-28.9 (13C), 25.5, 24.6, 22.8, 14.1 (2C).

Ejemplo 4: Λ/-((2S,3S,4R)-3,4-bis(benciloxi)-1 -oxooctadecan-2-il) hexacosanamida.

De acuerdo con el procedimiento del ejemplo 3 se obtiene el aldehido por oxidación con IBX de Λ/-((2S,3S,4R)-3,4-bis(benciloxi)-1-hidroxioctadecan- 2-il)hexacosanamida obtenida según el ejemplo 2.

IR (film, cm "1 ): 3381 , 2900, 1711 , 1502, 1045, 740. 1 H-NMR (CDCI 3 , 500 MHz); δ: 9.68 (s, 1 H), 7.39-7.28 (m, 10H); 6.06 (d, J = 8, 1 H); 4.96 (dd, J = 7.5, 2.5, 1 H); 4.62 (d, J =11 , 1 H) 4.61 (d, J = 11 , 1 H); 4.54 (d, J =11 , 1 H) 4.53 (d, J = 11 , 1 H); 3.94 (dd, J = 5.5, 2.5, 1 H); 3.63 (q, J = 5.5, 1 H); 2.04 (m, 2H), 1.72 (m, 2H); 1.53 (m, 2H); 1.28 (m, 68H); 0.90 (t, J = 7, 6H); 13 C- NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 198.1 , 173.5, 137.5, 137.4, 128.6-127.8 (10C), 81.5, 76.9, 72.1 , 71.7, 58.7, 36.4, 31.9, 30.1 , 29.7-29.2 (31C), 25.5, 24.7, 22.7, 14.1 (2C).

Aminación reductora

Ejemplo 5:

(2S,3S,4R)-(3,4-dibenciloxi-1-(1 'rs,2'RS,3'SR,4'SR,5'RS,6'SR)-2',3',4',5',6'- pentabenciloxiciclohexilaminooctadecan-2-il)octanamida

Una disolución de 158 mg (0.25 mmol) de

(1 'rs,2'RS,3'SR,4'SR,5'RS,6'SR)-2,3,4,5,6- pentakis(benciloxi)ciclohexanamina [Serrano et al. J Org Chem 2005, 70,

7829] en metanol / CH 2 CI 2 (1 :3, v/v) (4 ml_) bajo atmósfera de argón se trata sucesivamente y por este orden con cianoborohidruro de sodio (3 equiv.) ácido acético (20 μl_) y Λ/-((2S,3S,4R)-3,4-bis(benciloxi)-1- oxooctadecan-2-il)octanamida obtenida según el procedimiento del ejemplo 3. Se agita durante 18 h a temperatura ambiente, Ia mezcla se trata con agua (3 ml_) y se extrae con acetato de etilo (3 X 20 ml_). Los extractos orgánicos se combinan, se lavan con agua y se secan con sulfato de sodio anhidro. Se filtra el sólido y se evaporan los volátiles para dar un crudo que se purifica por cromatografía en gel de sílice eluyendo con mezclas de hexano/ acetato de etilo (3:1 a 1 :1 , v/v), para dar 89 mg, 0.07 mmoles (29%) del producto en forma de aceite claro.

[α] D = - 6.0 (CDCI 3 , c, 1.0); IR (neat, cm "1 ): 3336, 2915, 2847, 1642,1451 , 1048;1 H-NMR (CDCI 3 , 500 MHz); δ 7.35-7.20 (m, 35 H); 6.39 (d, J = 8.5, 1 H); 4.96-4.83 (m, 7 H); 4.78 (d, J = 11.5, 1 H); 4.74 (d, J = 11.5, 1 H); 4.65 (d, J =, 11.5, 1 H); 4.58 (d, J = 11.5, 1 H); 4.54 (d, J = 11.5, 1 H); 4.50 (d, J = 11.5, 1 H); 4.40 (d, J = 11.5, 1 H); 4.08 (m, 1 H); 3.71 (dd, J = 5, 4, 1 H); 3.57 (m, 3H); 3.45 (m, 1 H); 3.24 (m, 3H); 2.95 (dd, J = 13, 4.5, 1 H); 2.58 (t, J = 10, 1 H); 1.75 (m, 2H), 1.58 (m, 2H); 1.40 (m, 4H); 1.28 (m, 30H); 0.90 (t, J = 7, 3H); 0.88 (t, J = I, 3H). 13 C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 172.6, 138.6, 138.5, 138.3, 138.2 (2C), 138.1 (2C), 128.4-127.1 (35C), 84.1 , 83.9, 83.0, 82.4, 82.1 , 80.1 , 75.7 (2C), 75.6, 75.4, 74.5, 73.4, 71.3, 62.4, 49.9, 48.7, 36.3, 31.8, 30.0; 29.8-29.3 (12C), 25.7, 25.6, 22.6 (2C), 14.1 , 14.0. HRMS. Calculado para C 8I H 106 N 2 O 8 (M+H + ): 1235.8027. Encontrado: 1235.8049.

Ejemplo 6:

(2S,3S,4R)-(3,4-dibenciloxi-1-(1 'rs,2'RS,3'SR,4'SR,5'RS,6'SR)-2',3',4',5',6'- pentabenciloxiciclohexilaminooctadecan-2-il)hexacosanamida

Por un procedimiento análogo al descrito en el ejemplo 5 se obtiene Ia amida a partir de (1s,2R,3S,4r,5R,6S)-2,3,4,5,6- pentakis(benciloxi)ciclohexanamina (cfr. Serrano et al. J Org Chem 2005, 70, 7829) y Λ/-((2S,3S,4R)-3,4-bis(benciloxi)-1-oxooctadecan-2- il)hexacosanamida por aminación reductora com un 28 % de rendimiento. Aceite, [α] D = -6.3 (CDCI 3 , c, 1.0); IR (film, cm "1 ): 3513, 2933, 2855, 1719,1450, 1074; 1 H-NMR (CDCI 3 , 500 MHz); δ 7.39-7.22 (m, 35 H); 6.42 (d, J = 8.8, 1 H); 4.95-4.82 (m, 7H); 4.79 (d, J =11.5, 1 H); 4.73 (d, J =, 11.5, 1 H); 4.63 (d, J =, 11.5, 1 H); 4.59 (d, J =, 11.5, 1 H); 4.53 (d, J =, 11.5, 1 H); 4.49 (d, J =, 11.5, 1 H); 4.40 (d, J = 11.5, 1 H); 4.08 (m, 1 H); 3.71 (dd, J = 5, 4, 1 H); 3.57 (m, 3H); 3.46 (m, 1 H); 3.25 (m, 3H); 2.96 (dd, J = 13, 4.5, 1 H); 2.58 (t, J = 10, 1 H); 1.74 (m, 2H), 1.58 (m, 2H); 1.40 (m, 4H); 1.28 (m, 66H); 0.90 (t, J = 7, 6H); 13C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 172.8, 138.5 (2C), 138.3, 138.2 (4C), 128.4-127.1 (35C), 84.1 , 83.9, 83.0, 82.3, 82.0, 80.0, 75.8 (2C), 75.6, 75.4, 74.5, 73.4, 71.3, 62.3, 49.4, 48.7, 48.5, 36.3, 31.9, 31.7; 29.9- 29.0 (30C), 25.7, 25.6, 22.6, 22.5 14.1 , 14.0. HRMS. Calculado para C 99 H 142 N 2 O 8 (M+H + ): 1488.0844. Encontrado: 1488.0773.

Ejemplo 7:

(2S,3S,4R)-(3,4-dibenciloxi-1-(1 'R,2'S,3'R,4'S,5'S,6'S)-2',3',4',5',6'- pentabenciloxiciclohexilaminooctadecan-2-il)hexacosanamida

Según un procedimiento descrito en serie racémica (Serrano et al. J Org Chem 2005, 70, 7829) se prepara a partir de (+)-tetra-O-bencilconduritol B epóxido (cfr. González-Bulnes et al., Carbohvdr Res 2007, 342, 1947-52) el compuesto (1 R,2S,3R,4S,5S,6S)-2,3,4,5,6-pentahidroxiciclohexilamina, que se hace reaccionar de acuerdo con el procedimiento de aminación reductora descrito en el ejemplo 5 con el aldehido intermedio N- ((2S,3S,4R)-3,4-bis(benciloxi)-1-oxooctadecan-2-il)hexacosan amida para dar el compuesto requerido con un 40% de rendimiento.

Aceite, [α] D = + 1.6 (CDCI 3 , c, 1.0); IR (film, cm "1 ): 3431 , 2916, 2847, 1653,14940, 1061 ; 1 H-NMR (CDCI 3 , 500 MHz); δ 7.38-7.28 (m, 30 H); 6.16

(d, J = 8, 1 H); 4.89-4.56 ( m, 11 H); 4.44 (d, J = 12, 1 H); 4.24 (m, 1 H); 4.01 (m, 1 H); 3.98 (dd, J = 9, 4, 1 H); 3.81 (m, 3H); 3.73 (t, J = 4, 1 H); 3.56 (dd, J = 11 , 5, 1 H); 3.16 (t, J = 4, 1 H); 2.94 (dd, J = 11 , 4, 1 H); 2.61 (dd, J = 11 , 5, 1 H); 2.00 (m, 2H), 1.64 (m, 2H); 1.57 (m, 2H); 1.28 (m, 68H); 0.91 (t, J = 7, 3H); 0.90 (t, J = 7, 3H). 13 C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 172.3, 138.8, 138.7, 138.3(2C), 138.2, 137.9, 128.4-127.3 (30C), 82.4, 81.9, 81.5, 80.4, 79.1 , 79.0, 75.9, 75.6, 73.8, 73.1 , 72.3, 71.4, 67.3, 58.2, 48.5, 48.4, 36.7, 31.8, 30.2, 29.7-29.3 (31C), 25.6, 25.4, 22.6, 14.0 (2C). HRMS. Calculado para for C92H136N2O8 (M+H + ): 1398.0375. Encontrado: 1398.0386

Ejemplo 8:

(2S,3S,4R)-(3,4-dibenciloxi-1-(1 'R,2'S,3'R,4'S,5'S,6'S)-2',3',4',5',6'- pentabenciloxiciclohexilamino)octadecan-2-il)octanamida

Se prepara por aminación reductora según el ejemplo 7 a partir de (1 R,2S,3R,4S,5S,6S)-2,3,4,5,6-pentahidroxiciclohexilamina y del aldehido intermedio Λ/-((2S,3S,4R)-3,4-bis(benciloxi)-1 -oxooctadecan-2- il)hexacosanamida con un 38 %de rendimiento.

Aceite. [α] D = +2.0 (CDCI 3 , c, 1.0); IR (film, cm "1 ): 3414, 2918, 2854, 1649,1451 , 1096; 1 H-NMR (CDCI 3 , 500 MHz); δ 7.36-7.25 (m, 30H); 6.16

(d, J = 8, 1 H); 4.86-4.56 ( m, 11 H); 4.43 (d, J = 12, 1 H); 4.23 (m, 1 H); 4.01

(m, 1 H); 3.98 (dd, J = 9, 4, 1 H); 3.82 (m, 3H); 3.73 (t, J = 4, 1 H); 3.57 (dd, J

= 11 , 5, 1 H); 3.17 (t, J = 4, 1 H); 2.95 (dd, J = 11 , 4, 1 H); 2.62 (dd, J =11 , 5,

1 H); 1.98 (m, 2H), 1.66 (m, 2H); 1.54 (m, 2H); 1.28 (m, 32H); 0.91 (t, J = 7, 3H); 0.85 (t, J = 7, 3H). 13 C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 172.3, 138.8, 138.7,

138.3(2C), 138.2, 137.9, 128.4-127.4 (30C), 82.4, 81.8, 81.5, 80.4, 79.1 ,

79.0, 75.9, 75.6, 73.8, 73.1 , 72.4, 71.4, 67.3, 58.2, 48.6, 48.5, 36.7, 31.8,

30.2, 29.7-29.3 (13C), 25.6, 25.4, 22.6, 14.1 , 14.0. HRMS. Calculado para

C 74 Hi 00 N 2 O 8 (M+H + ): 1145.7558. Encontrado: 1145.7560. Reacciones de desbencilación de productos procedentes de aminación reductiva

Ejemplo 9: (2S,3S,4R)-2-octanamido-1 -{Vrs,2'RS,3'SR,4'SR,5'RS,6'SR)-2',3',4',5',6'- pentahidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol (Compuesto 1a).

Una disolución en diclorometano (2 ml_) de 53 mg (0.05 mmol) de (2S,3S,4R)-(3,4-dibenciloxi-1 -(1 'rs,2'RS,3'SR,4'SR,5'RS,6'SR)-2',3',4',5',&- pentabenciloxiciclohexilamino)octadecan-2-il)octanamida se enfría a -78 0 C mediante un baño externo y se mantiene bajo argón. Se añade una disolución de BCI 3 (1 M) en heptano (2 equiv. por cada grupo OBn). La mezcla de reracción se deja que llegue a temperatura ambiente y se agita durante 16 h. pasado este tiempo, se vuelve a enfriar a -78 0 C, y se añaden

2 ml_ de metanol gota a gota. Se retira el baño y se deja llegar a temperaura ambiente, tras Io cual se concentra a vacío. Seguidamente, se añade AcOEt (3 ml_) al residuo resultante y se introduce en un baño de ultrasonidos durante 5-7 minutos. El sólido resultante se recoge por filtración. Se lava con AcOEt (3x1 ml_) y se seca a vacío, para dar el compuesto 27 mg (0.042 mmol, 85 %) en forma de hidrocloruro.

Pf =241-243. [α] D = + 9.6 (MeOH, c, 0.8); IR (film): 3358, 2931 , 2852, 1657,

1458, 1111. 1 H-NMR (CD 3 OD, 500 MHz); δ 4.37(q, J = 5.5, 1 H); 3.68 (t, J = 5.5, 1 H); 3.63 (dd, J = 12, 5.5, 1 H); 3.55 (m, 3H); 3.39 (dd, J = 13, 6, 1 H);

3.33-3.2 (m, 4H); 3.05 (t, J = 11 , 1 H), 2.29 (t, J = 7, 2H); 1.64 (m, 2H), 1.29 (m, 34H); 0.90 (t, J = 7, 6H); 13 C-NMR (CD 3 OD, 100 MHz): δ 177.6, 77.9, 77.4 (2C), 76.0, 74.1 , 71.2, 71.1 , 64.5, 49.6, 49.4, 37.9, 33.9, 33.6; 31.7- 31.3 (10 C), 31.3, 31.2, 31.0, 27.8, 27.6, 24.6 15.3 (2C). HRMS. Calculado para C 32 H 64 N 2 O 8 (M+H+): 605.4741. Encontrado: 605.4739.

Ejemplo 10:

(2S,3S,4R)-2-Hexacosanamido-1-(1 'rs,2'RS,3'SR,4'sr,5'RS,6'SR)- 2',3',4',5',6'-pentahidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-di ol (Compuesto 1b).

2g

Se prepara por desbencilación con BCI 3 según el procedimiento del ejemplo 9 del producto (2S,3S,4R)-(3,4-dibenciloxi-1-

(1 'rs,2'RS,3'SR,4'SR,5'RS,6'SR)-2',3',4',5',6'- pentabenciloxiciclohexilaminooctadecan-2-il)hexacosanamida. Rendimiento 83%.

Pf =242-244. [α] D = +8.1 (MeOH, c, 0.8). IR (film): 3363 (br), 2922, 2845, 1649, 1455, 1069. 1 H-NMR (CD 3 OD, 400 MHz); δ 4.36 (m, 1 H); 3.65 (dd, J = 6, 4.8, 1 H); 3.56 (m, 2H); 3.48 (m, 2H); 3.36-3.13 (m, 5H); 3.01 (t, J = 10, 1 H), 2.26 (t, J = I, 2H); 1.61 (m, 2H), 1.29 (m, 70H); 0.90 (t, J = I, 6H); 13 C- NMR (DMSO, 60 0 C, 100 MHz): δ 173.9, 76.1 , 75.6 (2C), 74.5, 71.6, 69.7, 69.6, 63.3, 48.3, 48.1 ,36.2, 32.7, 31.9; 29.7-29.3 (31 C), 26.0, 25.7, 22.7 14.4 (2C). HRMS. Calculado para C 50 HiOoN 2 O 8 (M+H + ): 857.7558. Encontrado: 857.7563.

Ejemplo 11 : (2S,3S,4R)-2-octanamido-1 -(1 'R,2'S,3'R,4'S,5'S,6'S)-2',3',4',5', 6'- pentahidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol (Compuesto 3b)

Se prepara por desbencilación con BCI3 según el procedimiento del ejemplo 9 del producto (2S,3S,4R)-(3,4-dibenciloxi-1-

(1 'R,2'S,3'R,4'S,5'S,6'S)-2',3',4',5',6'- pentabenciloxiciclohexilamino)octadecan-2-il)octanamida. Rendimiento 84%

Pf =214-216. [α] D = -6.8 (MeOH, c, 0.75); IR (film): 3417, 2931 , 2850, 1650, 1443, 1034. 1 H-NMR (CD 3 OD, 400 MHz); δ 4.36 (q, J = 5.2, 1 H); 4.15 (m, 2H), 3.90 (m, 2H); 3.86 (m, 1 H); 3.65 (t, J = 5, 1 H); 3.57 (m, 2H), 3.40 (dd, J = 12.5, 6, 1 H); 3.20 (dd, J = 12.5, 6, 1 H), 2.23 (t, J = I, 2H); 1.60 (m, 2H), 1.29 (m, 34H); 0.88 (t, J = I, 6H). 13 C-NMR (CD 3 OD, 100 MHz): δ 176.7, 77.0, 74.7, 73.6, 72.9. 72.8, 69.9, 66.3, 59.9, 48.4, 47.8, 36.9, 33.5, 33.0, 32.8, 30.7 (8C), 30.4, 30.3, 30.1 , 26.9, 26.7, 23.7 (2C), 14.4 (2C). HRMS. Calculado paraC 32 H 64 N 2 O 8 (M+H + ): 605.4741. Encontrado: 605.4738.

Ejemplo 12: (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -(1 'R,2'S,3'R,4'S,5'S,6'S)-2',3',4',5', 6'- pentahidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol (Compuesto 3a).

Se prepara por desbencilación con BCI3 según el procedimiento del ejemplo 9 del producto (2S,3S,4R)-(3,4-dibenciloxi-1-

(1 'R,2'S,3'R,4'S,5'S,6'S)-2',3',4',5',6'- pentabenciloxiciclohexilaminooctadecan-2-il)hexacosanamida. Rendimiento 89%

Pf =235-237; [α] D = -9.3 (MeOH, c, 0.75). IR (film): 3368, 2923, 2847, 1645, 1461 , 1042. 1 H-NMR (CD 3 OD, 45 0 C, 400 MHz); δ 4.37(q, J = 5, 1 H); 4.16 (m, 2H), 3.98 (m, 2H); 3.88 (m, 1 H); 3.67 (t, J = 5, 1 H); 3.57 (m, 2H), 3.40 (dd, J = 10, 5.2,1 H); 3.21 (dd, J = 10, 5.2, 1 H), 2.23 (t, J = 7, 2H); 1.60 (m, 2H), 1.29 (m, 70H); 0.88 (t, J = I, 6H). 13 C-NMR (CD 3 OD, 45 0 C, 100 MHz): δ 176.7, 77.0, 74.7, 73.6, 72.9. 72.8, 69.9, 66.3, 59.9, 48.4, 47.8, 36.9, 33.5, 33.0, 30.7-30.4 (31C), 26.9, 26.8, 23.7, 14.4 (2C). HRMS. Calculado paraC 5 oHioiN 2 θ8 (M+H + ): 857.7558. Encontrado: 857.7580.

Preparación de tetrahidroxiciclohexilaminas

Ejemplo 13: (1 R,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexanol

Una disolución de O-tetrabencilconduritol B [González-Bulnes et al

Carbohydr Res 2007, 342, 1947-52] (1 g, 1.97 mmol) en THF (50 ml_) se agita a 0 0 C mientras se añade BH 3 THF (1 M in THF, 6 ml_, 6 mmol) gota a gota durante unos 5 min. La mezcla de reacción se lleva a temperatura ambiente y se continúa Ia agitación durante 16 h. Se añade NaOH (1 M aq., 8 ml_), y peróxido de hidrógeno (30% w/v aq., 4 ml_) y se agita vigorosamente durante 1 h a temperatura ambiente. Se extrae con éter y las fases orgánicas combinadas se lavan con agua y disolución saturada de NaCI, se secan (Na 2 SO 4 ) y se concentran a vacío para dar un sólido que se purifica por cromatografía flash (Hexano: AcOEt, 7:3), para dar un sólido blanco (723 mg, 70%).

[α] D = +8 (CHCI 3 , C, 1 ); 1 H-NMR (CDCI 3 , 500 MHz); δ 7.34 (m, 20H); 5.03- 4.95 (m, 3H); 4.87 (t, J = 10, 2H); 4.89 (m, 3H); 3.61 (t, J = 9, 1 H); 3.53 (m,

3H); 3.36 (t, J = 9, 1 H); 2.37 (dt, J = 13, 4, 1 H); 2.33 (br, 1 H); 1.48 (q, J =

13, 1 H). 13 C-NMR (CDCI 3 , 75 MHz): δ 138.6, 138.4 (2C), 138.2, 128.6-127.6

(20C), 85.8 (2C), 83.3, 77.4, 75.8 (2C), 75.4, 72.3, 68.3, 33.9. HRMS.

Calculado para C 34 H 36 O 5 (M+H + ): 525.2641. Encontrado: 525.2644.

Ejemplo 14:

(1 S,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexanol

Una disolución de (1 R,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexanol (540 mg, 1.02 mmol) preparado de acuerdo con el ejemplo 9 y trietilamina

(0.44 ml_, 3 mmol) en THF (15 ml_) se trata con MsCI (cloruro de metansulfonilo) (232 mg, 2.04 mmol). Se agita a temperatura ambiente durante 3 h, se diluye con H 2 O (20 ml_), y se extrae con AcOEt (3x15 ml_). los extractos se secan con Na 2 SO 4 , se filtra y se evapora para dar el mesilato intermedio, que se disuelve en DMF(dimetilformamida)/H 2 O (98 /

2) (10 ml_) y se agita a 140 0 C en tubo cerrado durante 96 h. Se elimina el disolvente a presión reducida y el residuo resultante se trata con Et 2 O (10 ml_), se lava con H 2 O (3X10 ml_), se seca y se evapora para dar una aceite que se purifica mediante cromatografía flash (hexano/AcOEt 7:3) para dar el alcohol (60 mg, 30%). Pf = 65-67; [α] D = -4 (CHCI 3 , C, 1 ); IR (neat, crrϊ 1 ): 3361 , 2943, 1427, 1118, 986. 1 H-NMR (CDCI 3 , 400 MHz); δ 7.33 (m, 20H); 4.95-4.65 (m, 8H); 4.12 (m, 1 H); 3.95 (m, 1 H); 3.84 (t, J = 9.2, 1 H); 3.49 (m, 2H); 2.84 (dt, J = 14, 4, 1 H); 1.40 (ddd, J = 14, 12, 2.4, 1 H), 13 C-NMR (CDCI 3 , 75 MHz): δ 138.8, 138.7, 138.6, 137.9, 128.5-127.4 (20 C), 85.7, 82.8, 81.5, 77.0, 76.0, 75.7, 72.9, 72.8, 65.9, 32.4. HRMS. Calculado para C 34 H 36 O 5 (M+H + ): 525.2641. Encontrado: 525.2644.

Ejemplo 15: (1 S,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexanamina

Una disolución de (1 R,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexanol (mg, 0.28 mmol) preparado de acuerdo con el ejemplo 9 y trietilamina (0.12 ml_, 0.84 mmol) en diclorometano (10 ml_) se trata con MsCI (43 μl_, 0.56 mmol) a O 0 C. La mezcla se agita y se lleva a temperatura ambiente durante dos horas. Se añade diclorometano (10 ml_) y se lava tres veces con NaOH 1 N (10 ml_). La fase orgánica se lava con agua y se seca Na 2 SO 4 anhidro, se filtra y bse concentra a vacío para dar un aceite que se disuelve en DMF (5 mL). Se añade NaN 3 (182 mg, 2.8 mmol) y se calienta Ia mezcla a 90 0 C durante 12 horas. La mezcla se enfría a temperatura ambiente, se añade éter dietílico (20 mL), y se extrae con disolución acuosa saturada de NaCI (3x20 mL). La fase orgánica se seca sobre Na 2 SO 4 , se filtra y se concentra a vacío para dar Ia azida intermedia que se purifica por cromatografía flash en silica gel (hexano/AcOEt 9:1 ). (109 mg, 71 %), sólido blanco: Pf = 87-89, [α] D = -8.5 (CHCI 3 , C, 1 ).

La azida se reduce a Ia amina mediante LiAIH 4 (13 mg, 0.36 mmol) que se añade en una porción a una disolución de Ia misma en THF (10 mL) a 0 0 C y se agita a esta temperatura 1 h y durante 1 h a temperatura ambiente. Tras enfriar a 0 0 C Ia mezcla de reacción se añaden gota a gota 0.3 mL de disolución acuosa saturada de Na 2 SO 4 . Las sales se filtran sobre Celite® que se lava con Et 2 O y los filtrados se evaporan a vacío para dar Ia amina pura en forma de sólido blanco (96 mg, 93%).

Pf = 74 . 76. [α] D = +2 (CHCI 3 , C, 1 ); IR (film , cm "1 ): 3351 , 2957, 2362, 1433, 1112. 1 H-NMR (CDCI 3 , 400 MHz); δ 7.30 (m, 20H); 4.87 (m, 4H); 4.69 (m, 4H); 3.96 (m, 2H); 3.46 (m, 3H); 2.80 (dt, J = 14, 3.2, 1 H); 1.43 (m, 1 H). 13 C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz); δ: 139.0, 138.9, 138.7, 138.5, 128.4-127.4 (20C), 86.2, 83.1 , 81 ,4, 77.1 , 75.9, 75.6, 72.8, 72.4, 46.8, 33.5. HRMS. Calculado para C 34 H 37 NO 4 (M+H+): 524.2801. Encontrado: 524.2821.

Ejemplo 16: (1 R,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexanamina

Se prepara a partir de (1 S,2S,3R,4R,5S)-2, 3,4,5- tetrakis(benciloxi)ciclohexanol de acuerdo com el procedimiento descrito en el ejemplo 11 para dar un sólido blanco (45 mg, 55%).

Pf = 102-103. [α] D = -11.5 (CDCI 3 , C, 1.0). IR (neat, cm "1 ): 3355, 2923, 2366, 1454, 1069. 1 H-NMR (CDCI 3 , 400 MHz); δ 7.31 (m, 20H); 4.98 (m, 3H); 4.84 (m, 2H); 4.67 (m, 3H), 3.54 (m, 3H); 3.18 (t, J = 9.2, 1 H); 2.71 (m, 1 H); 2.20 (dt, J = 13.2, 4, 1 H); 1.57 (br, 2H, NH2), 1.31 (m, 1 H). 13C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 138.6, 138.4 (2C), 138.3, 128.5-127.5 (20C), 86.8, 86.0, 84.4, 78.4, 75.7 (2C), 75.5, 72.3, 49.8, 35.1. HRMS. Calculado para C 34 H 37 NO 4 (M+H + ): 524.2801. Encontrado: 524.2819.

Reacciones de sustitución de aziridinas derivadas de fitoesfingosina

Ejemplo 17:

Preparación de Λ/-((1 S)-1 -((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4- il)-2-((1 S,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexilamino)et il)-2- nitrobencenosulfonamida A una disolución de 70 mg (0.13 mmol) de (1 S,2S,3R,4R,5S)-2, 3,4,5- tetrakis(benciloxi)ciclohexanamina en MeCN seco (5 ml_) se añaden 68 mg (0.13 mmol) de (S)-2-((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-1- (2-nitrofenilsulfonil)aziridina (cfr. Y. Harrak et al. Eur J Org Chem 2008, 4647-4654). La mezcla se agita a reflujo durante 3h, se enfría a temperatura ambiente y se concentra a vacío. Se purifica el residuo por cromatografía en columna (hexano/AcOEt 4:1 ) para dar un aceite incoloro (118 mg, 87%),

[α] D = +5.1 (CDCI 3 , C, 1.0). IR (film, crτϊ 1 ): 3316, 2924, 2853, 1541 , 1306, 1070, 697. 1 H-NMR (CDCI 3 , 500 MHz); 5 8.12 (d, J = 7.5, 1 H); 7.65 (t, J = 7, 1 H); 7.56 (m, 2H); 7.31 (m, 20H); 4.84 (m, 4H); 4.60 (m, 4H); 4.13 (m, 2H); 3.85 (m, 3H); 3.53 (dd, J = 9.5, 4, 1 H); 3.49 (t, J = 9, 1 H); 3.01 (d, J = 2.5, 1 H); 2.87 (dd, J = 12, 4, 1 H); 2.72 (dd, J = 12, 3.5, 1 H); 2.17 (dt, J = 14, 3.5, 1 H); 1.51 (m, 3H); 1.40 (s, 3H); 1.27 (m, 27 H); 0.91 (t, J = 7, 3H). 13 C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 147.7, 139.1 , 139.0, 138.9, 138.5, 135.3, 133.3, 132.7, 129.7, 128.3-127.3 (20C), 125.3, 107.9, 85.7, 82.6, 81.6, 78.2, 77.5, 77.4, 75.8, 75.4, 72.7, 72.5, 54.1 , 53.4, 49.1 , 31.9, 29.8-29.3 (11C), 27.4, 26.7, 25.2, 22.7, 14.1. HRMS. Calculado para C 6 iH 8 iN 3 Oi 0 S (M+H + ): 1048.5721. Encontrado: 1048.5742.

Ejemplo 18:

Λ/-((1 S)- 1 -((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-2- ((1 R,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexilamino)et il)-2- nitrobencenosulfonamida

De acuerdo con el procedimiento del ejemplo 17 se hacen reaccionar (1 R,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexanamina y (S)-2- ((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-1 -(2- nitrofenilsulfonil)aziridina (cfr. Y. Harrak et al., Eur J Org. Chem 2008, 4647- 4654) para dar un aceite incoloro (71 mg, 87%).

[α] D = +30 (CDCI 3 , C, 1.0); IR (film): 3340, 2924, 2853, 1593, 1365, 1072. 1 H-NMR (CDCI 3 , 400 MHz); δ 8.03 (d, J = 7.6, 1 H); 7.61 (t, J = 7.6, 1 H); 7.52 (t, J = 7.6, 1 H); 7.44 (d, J = 8, 1 H), 7.28 (m, 21 H); 4.96-4.54 (m, 8H); 4.08 (m, 2H); 3.66 (m, 1 H), 3.44 (m, 3H); 3.16 (t, J = 9.2, 1 H); 2.80 (d, J = 10, 1 H); 2.55 (d, J = 10, 1 H); 2.42 (t, J = 10, 1 H); 2.23 (m, 1 H); 1.51 (m, 3H); 1.33 (s, 3H); 130 (s, 3H), 1.27 (m, 24H); 0.87 (t, J = 7, 3H); 13 C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 147.7, 138.6, 138.4 (2C), 138.3, 135.3, 133.3, 132.6, 130.0, 128.4-127.4 (20 C), 125.1 , 107.8, 85.8, 84.8, 82.9, 78.3, 77.5, 76.6, 75.7 (2C), 74.8, 72.3, 55.4, 54.3, 45.7, 32.0, 31.8, 29.6-29.2 (10 C), 27.8, 26.3, 25.5, 22.6, 14.1. HRMS. Calculado para C 6 iH 81 N 3 Oi 0 S (M+H+): 1048.5721. Encontrado: 1048.5739.

Desprotección de 2-nitrobencenosulfonamidas

Ejemplo 19: ((SS))--11--((((44SS,,55/R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-Λ/ 2 - ((1 S,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexil)etano-1 ,2-diamina

A una disolución de Λ/-((1 S)-1-((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan- 4-il)-2-((1 S,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexilamino)et il)-2- nitrobencenosulfonamida (105 mg, 0.1 mmol) en CH 3 CN seco (2 ml_), se añaden tiofenol (44 mg, 0.4 mmol) y Cs 2 CO 3 (98 mg, 0.3 mmol). Se agita a temperatura ambiente duranter 24 horas y se añade disolución acuosa saturada de NaHCO 3 (20 ml_), extrayéndose Ia fase acuosa con CH 2 CI 2 . Los extractos orgánicos combinados se secan sobre MgSO 4 , se filtran y se concentran a presión reducida para dar un aceite que se purifica por cromatografía en columna (CH 2 CI 2 /MeOH 99:1 ) para dar un liquido claro (73 mg, 85 %). [α] D = +10.0 (CDCI 3 , C, 1.0); IR (film): 3350, 2920, 2832, 1449, 1367, 1081. 1 H-NMR (CDCI 3 , 500 MHz); δ 7.31 (m, 20H); 4.87 (m, 4H); 4.67 (m, 4H); 4.12 (m, 1 H); 3.91 (m, 1 H); 3.75 (dd, J = 9.5, 5.5, 1 H); 3.55 (dd, J = 9.5, 4, 1 H); 3.48 (m, 2H); 3.11 (m, 1 H); 2.88 (m, 1 H); 2.69 (dd, J = 12, 3, 1 H), 2.56 (dd, J = 12, 6.5, 1 H); 2.23 (dt, J = 13.5, 4.5, 1 H); 1.54 (m, 3H); 1.42 (s, 3H); 1.30 (s, 3H); 1.27 (m, 24H); 0.90 (t, J = 7, 3H). 13 C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 138.9 (2C), 138.7, 138.4, 128.3-127.4 (20C), 107.7, 86.2, 83.1 , 82.1 , 80.0, 77.9, 76.7, 75.9, 75.7, 72.7, 72.2, 53.6, 51.8, 50.2, 31.9, 30.2-29.3 (11C), 28.3, 26.2, 25.9, 22.6, 14.1. HRMS. Calculado PaPaC 55 H 78 N 2 O 6 (M+H +) : 863.5938. Encontrado: 863.5942.

Ejemplo 20:

((SS))--11--((((44SS,,55/R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-Λ/ 2 -

((1 R,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexil)etano-1 ,2-diamina

De acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo 19 se hace reaccionar (S)-1 -((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-Λ/ 2 -

((1 R,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexil)etano-1 ,2-diamina con tiofenol y carbonato de cesio para dar el producto en forma de aceite con un 82% de rendimiento.

[α] D = -7 (CDCI 3 , C, 1.0); R (film): 3402, 2924, 2853, 1454, 1367, 1069. 1 H- NMR (CDCI 3 , 400 MHz); δ 7.33 (m, 20H); 5.02-4.68 (m, 8H); 4.13 (m, 1 H); 3.77 (dd, J = 8.4, 5.6, 1 H); 3.56 (m, 3H); 3.38 (t, J = 8.8, 1 H); 2.84 (dd, J = 11.2, 3.2, 1 H); 2.77 (dt, J = 8.4, 2.8, 1 H), 2.52 (m, 1 H); 2.35 (dt, J = 12.8, 4, 1 H); 1.50 (m, 3H); 1.39 (s, 3H); 1.31 (s, 3H); 1.28 (m, 24H); 0.90 (t, J = 7.2, 3H). 13 C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 138.7, 138.5, 138.4, 138.3, 128.4-127.5 (20C), 107.8, 85.8, 84.7, 84.2, 80.6, 78.5, 77.8, 75.8, 75.7, 75.4, 72.4, 55.6, 50.8, 50.1 , 32.4, 31.9, 30.2-29.3 (10C), 28.3, 26.0, 25.9, 22.6, 14.1. HRMS. Calculado para C 55 H 78 N 2 O 6 (M+H +) : 863.5938. Encontrado: 863.5943. Reacciones de acilación de aminas

Ejemplo 21 : (2S,3S,4R)-(3,4-isopropilidendioxi-1 -(1 'S,2'S,3'R,4'S,5'S)-2',3',4',5'- tetrabenciloxiciclohexilaminooctadecan-2-il)hexacosanamida

A una disolución de (S)-1-((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4- il)-Λ/ 2 -((1 S,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexil)etano-1 ,2- diamina (70 mg, 0.08 mmol) y ácido cerótico (32 mg, 0.08 mmol) en THF seco (10 ml_) se añade EDC (23 mg, 0.12 mmol). La reacción se calienta a refuljo durante 12 h, se enfría a temperatura ambiente y se añade agua (10 ml_). Se extrae con AcOEt, se lava con agua, NaCI sat y se seca Ia fase orgánica con MgSO 4 . Se filtra y se concentra a vacío para dar un aceite que se purifica por cromatografía en columna en sílica gel (hexano/ AcOEt 7/3) para dar un sólido blanco (67mg, 68%).

Pf = 72-74. [α] D = +16.2 (CDCI 3 , C, 1.0); IR (film, cm "1 ): 3325, 2918, 2850, 1650, 1470, 1095. 1 H-NMR (CDCI 3 , 500 MHz); δ 7.32 (m, 20H); 5.98 (d, J = 9.5, 1 H); 4.93 (d, J = 11 , 1 H); 4.87 (m, 2H); 4.83 (d, J = 11 , 1 H); 4.65 (m, 3H); 4.58 (d, J = 11 , 1 H); 4.19 (m, 1 H); 4.13 (m, 1 H); 4.00 (t, J = 6.5, 1 H); 3.93 (t, J = 9.5, 1 H); 3.87 (m, 1 H); 3.09 (d, J = 3, 1 H); 2.80 (dd, J = 12, 3.5, 1 H); 2.20 (dt, J = 15.5, 4, 1 H); 2.10 (m, 2H); 1.56 (m, 3H), 1.40 (s, 3H); 1.27 (m, 73H); 0.89 (t, J = I, 6H). 13 C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 172.3, 138.8 (2C), 138.4, 138.3, 128.4-127.5 20C), 107.7, 85.8, 82.8, 82.0, 77.9, 77.8, 77.7, 75.9, 75.8, 72.9, 72.4, 53.2, 48.5, 47.7, 37.0, 31.9, 29.7-29.3 (33C), 27.7, 26.6, 25.8, 25.3, 22.7, 14.1 (2C). HRMS. Calculado para C 8 IHi 28 N 2 O 7 (M+H + ): 1241.9800. Encontrado: 1241.9766.

Ejemplo 22: (2S,3S,4R)-(3,4-isopropilidendioxi-1-(1'R,2'S,3'R,4'S,5'S)-2 ',3',4',5'- tetrabenciloxiciclohexilaminooctadecan-2-il)hexacosanamida

Por reacción de (S)-1-((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-Λ/ 2 - ((1 R,2S,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)ciclohexil)etano-1 ,2-diamina con ácido cerótico y EDC, de acuerdo com el procedimeinto del ejemplo 21 , se obtiene un sólido blanco com un rendimiento del 63%.

Pf = 85-87 0 C. [α] D = -8 (CHCI 3 , C, 1.0); IR (neat, cm-1 ): 3331 , 2925, 2849, 1664, 1444, 1111. 1 H-NMR (CDCI 3 , 500 MHz); δ 7.34 (m, 20H); 5.97 (br, 1 H); 5.04-4.68 (m, 8H); 4.02 (m, 2H); 3.95 (m, 1 H); 3.52 (m, 3H); 3.31 (m, 1 H); 3.02 (d, J = 12.5, 1 H); 2.64 (d, J = 13, 1 H); 2.46 (m, 1 H); 2.29 (m, 1 H); 1.96 (m, 2H), 1.62 (br, 1 H), 1.55 (m, 3H), 1.40 (s, 3H); 1.32 (s, 3H), 1.26 (m, 70H); 0.89 (t, J = 7, 6H). 13 C-NMR (CDCI 3 , 100 MHz): δ 172.5, 138.6, 138.4 (2C), 138.3, 128.5-127.6 (20C), 107.7, 85.8, 84.7, 84.6, 78.5, 77.7, 77.0, 75.9, 75.8, 75.7, 72.6, 57.1 , 48.3, 46.9, 36.7, 33.4, 31.9, 29.7-29.3 (31 C), 29.0, 27.9, 26.5, 25.7, 25.3, 22.7, 14.1 (2C). HRMS. Calculado paraCβi Hi 28 N 2 O 7 (M+H +) : 1241.9800. Encontrado: 1241.9773.

Reacciones de desbencilación de productos procedentes de aperturas de aziridinas

Ejemplo 23:

(2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -(1 'S,2'S,3'R,4'R,5'S)-2,3,4,5,- tetrahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol (Compuesto 4b).

De acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo 9 se tratan 30 mg (0,024 mmol) de (2S,3S,4R)-(3,4-isopropilidendioxi-1-(1 'S,2'S,3'R,4'S,5'S)- 2',3',4',5'-tetrabenciloxiciclohexilaminooctadecan-2-il)hexa cosanamida con BCI 3 (1 M en heptano, 0.24 ml_, 0.24 mmol). Para dar 15 mg (0,015 mmol, 73%) del hidrocloruro de (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1- (1 'S,2'S,3'R,4'R,5'S)-2,3,4,5,-tetrahidroxiciclohexilaminoocta decano-3,4-diol en forma de sólido blanco.

Pf = 213-215. [α] D = -25 (MeOH, C, 0.2) ; IR (neat, cm "1 ): 3351 (br), 2942, 2833, 1642, 1433, 1021 ; 1 H-NMR (MeOH, 500 MHz, 50 0 C); δ 4.33 (c, J = 5, 1 H); 3.90 (dd, J = 7, 4, 1 H); 3.84 (m, 1 H); 3.65 (m, 4H); 3.53 (m, 2H); 3.13 (dd, J = 13, 6.5, 1 H); 2.27 (m, 2H); 1.78 (m, 1 H); 1.64 (m, 3H); 1.32 (m, 70H); 0.92 (t, J = I, 6H). 13 C-NMR (DMSO, 100 MHz): δ 174.0, 75.9, 75.5, 72.8, 71.8, 70.5, 68.2, 56.6, 48.2, 46.5, 36.1 , 33.1 , 31.9, 29.7-29.3 (31C), 28.8, 25.9, 25.8, 22.7, 14.5 (2C). HRMS. Calculado para C 50 Hi 27 N 2 O 7 (M+H + ): 841.7609. Encontrado: 841.7628.

Ejemplo 24:

(2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -(1 'R,2'S,3'R,4'R,5'S)-2,3,4,5,- tetrahidroxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol (Compuesto 2b).

De acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo 9 se tratan 30 mg (0.024 mmol) de (2S,3S,4R)-(3,4-isopropilidendioxi-1-(1 'S,2'S,3'R,4'S,5'S)- 2',3',4',5'-tetrabenciloxiciclohexilaminooctadecan-2-il)hexa cosanamidacon BCI 3 (1 M en heptano, 0.24 ml_, 0.24 mmol). Se obtienen 10 mg (0,011 mmol, 46%) del hidrocloruro de (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1- (1 'R,2'S,3'R,4'R,5'S)-2,3,4,5,-tetrahidroxiciclohexilaminoocta decano-3,4- diol en forma sólido blanco.

Pf = 227-229. [α] D = +12 (MeOH, C, 0.2); IR (neat, cm "1 ): 3343 (br), 29512, 2812, 1668, 1427, 1007; 1 H-NMR (DMSO, 500 MHz, 60 0 C); 4.22 (m, 1 H); 3.81 (m, 1 H); 3.48-2.98 (m, 8H); 2.13 (m, 3H); 1.46 (m, 5H); 1.26 (m, 68H); 0.87 (m, 6H). HRMS. Calculado para C 50 Hi 27 N 2 O 7 (M+H +) : 841.7609. Encontrado: 841.7628.

Preparación de compuestos de fórmula (I) a partir de otros aminociclitoles

Ejemplo 25:

(2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -{VS,2'S,3'R,4'R,5'S, 6'S)-2,3,4,5,- tetrahidroxi-6-metoxiciclohexilaminooctadecano-3,4-diol

Este compuesto fue preparado en cuatro etapas: 1 ) siguiendo el método descrito en el ejemplo 17 por reacción de (1S,2S,3R,4R,5S,6S)-2, 3,4,5- tetrakis(benciloxi)-6-metoxiciclohexanamina con (S)-2-((4S,5R)-2,2-dimetil- 5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-1-(2-nitrofenilsulfonil)aziridina [Y. Harrak et al. Eur J Org. Chem 2008, 4647-4654] para dar Ia correspondiente amina (79% rendimiento) 2) desprotección del grupo nitrobencenosulfonilo de acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo 19 para dar el compuesto (S)-1 -((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-Λ/ 2 - ((1 'S,2'S,3'R,4'R,5'S,6'S)-2,3,4,5-tetrakis(benciloxi)-6-metoxi ciclohexil) etano-1 ,2-diamina (78% rendimiento) 3) Acilación con ácido cerótico de Ia amina primaria siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 21 para dar Ia amida con un rendimiento del 76%; y 4) desprotección de los sustituyentes hidroxilados mediante reacción con BCI 3 siguiendo el procedimiento detallado en el ejemplo 9 para dar con un 91% de rendimiento el hidrocloruro de (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1- (1 'S,2'S,3'R,4'R,5'S,6'S)-2,3,4,5,-tetrahidroxi-6-metoxicicloh exilamino) octadecano-3,4-diol en forma de aceite denso.

[α] D = - 9 (MeOH, 0.5); IR (film, cm "1 ): 3364 (br), 2948, 2828, 1671 , 1436, 1063. 1 H-NMR (CD3OD, 500 MHz, 5O 0 C); δ 4.34 (m, 1 H); 4.26 (m, 1 H), 4.20 (m, 1 H); 4.04 (m, 1 H); 3.91 (m, 1 H); 3.86 (m, 1 H); 3.70 (m, 2H); 3.47 (s, 3H); 3.25 (m, 1 H); 2.25 (m, 2H); 1.60 (m, 4H); 1.28 (m, 68H); 0.90 (m, 6H). 13C-NMR (CD3OD, 100 MHz, 55 0 C): δ 177.5, 77.8, 76.8, 74.6, 73.8, 73.6, 71.0, 59.5, 58.0, 50.1 , 49.6, 48.8, 37.9, 34.5, 33.8 (2C), 31.6-31.2 (29C), 27.8, 27.6, 24.5 (2C), 14.2(2C). HRMS. Calculado para C 5 IHi 03 N 2 O 8 (M+H + ): 871.7714. Encontrado: 871.7755. Ejemplo 26: (2S,3S,4R)-2-Hexacosanamido-1-(1 'S,4'S,5'S,6'S)-4',5',6'- trihidroxiciclohexenilaminooctadecano-3,4-diol

Este compuesto fue preparado en cuatro etapas: 1 ) siguiendo el método descrito en el ejemplo 17 por reacción de (1S,4S,5S,6S)-4,5- isopropilidendioxi-3-hidroxiciclohexenilamina con (S)-2-((4S,5R)-2,2-dimetil-

5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-1-(2-nitrofenilsulfonil)aziridina [Y. Harrak et al. Eur J Org. Chem 2008, 4647-4654] para dar Ia correspondiente amina (97 % de rendimiento) 2) desprotección del grupo 2-nitrobencenosulfonilo de acuerdo com el procedimiento descrito en el ejemplo 19 para dar el compuesto (S)-1 -((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-Λ/ 2 - ((1 'S,4'S,5'S,6'S)-4',5'-isopropilidendioxi-3'-hidroxiciclohexe nil)etano-1 ,2- diamina (78% rendimiento) 3) Acilación con ácido cerótico de Ia amina primaria siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 21 para dar (2S,3S,4R)-(3,4-isopropilidendioxi)-1-(1 'S,4'S,5'S,6'S)-4',5'- isopropilidendioxi-3'-hidroxiciclohexenilaminooctadecan-2- il)hexacosanamida con un rendimiento del 75%; y 4) desprotección de los sustituyentes hidroxilados mediante reacción con metanol y ácido clorhídrico siguiendo el siguiente procedimiento.

A una disolución de Ia amida obtenida en el paso 3 (18 mg, 0.02 mmol) en 10 ml_ de CH3OH se añade una gota de HCI (36% en agua) y se agita durante 24 h. Se evaporan los disolventes para dar un aceite que solidifica lentamente (30 mg, 92 %).

[α] D = +4 (MeOH, C, 0.5); IR (film, cm "1 ): 3427 (br), 2973, 1659, 994. 1 H- NMR (DMSO, 500 MHz, 7O 0 C, mezcla de rotámeros y confórmeros); δ, 5.80

(d, J = 10.5, 1 H), 5.70 (d, J = 10.5, 1 H); 4.85 (m, 1 H); 4.23 (m, 2H), 3.95 (m,

2H); 3.82 (m, 2H), 3.40 (m 2H); 2.37 (m, 2H); 1.55 (m, 4H), 1.24 (m, 68H);

0.85 (m, 6H). 13C-NMR (DMSO, 100 MHz, 6O 0 C, mezcla de rotámeros y confórmeros): δ 172.0, 134.6, 119.4, 74.9, 70.5, 69.9, 65.8, 64.2, 55.3, 47.4, 43.3, 35.3, 33.7, 30.9, 28.6 (30 C), 24.7, 24.0, 21.7 (2C), 13.3 (2C). HRMS.

Calculado para C 50 H 99 N 2 O 6 (M+H + ): 823.7503. Encontrado: 823.7546.

Ejemplo 27

(2S,3S,4R)-2-Hexacosanamido-1-(1 'S,4'S,5'S,6'S)-4',5',6'- trihidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol. Se prepara por hidrogenación catalítica con Pd/C al 5% (5mg) que se añaden a a una disolución de 5 mg de (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1- (1 'S,4'S,5'S,6'S)-4',5',6'-trihidroxiciclohexenilamino)octadec ano-3,4-diol en 5 ml_ de metanol. La mezcla se agita bajo 1 atm de hidrógeno durante 24 horas a temperatura ambiente. Se filtra el catalizador y se concentra para dar el compuesto con rendimiento cuantitativo.

[α] D = -5 (MeOH, C, 0.5); IR (film, cm "1 ): 3429 (br), 2859, 1670, 978. 1 H- NMR (DMSO, 500 MHz, 6O 0 C, mezcla de rotámeros y confórmeros); δ 8.90 (br, 3H), 8.17 (br, 1 H), 4.20-3.08 (m, 8H), 2.32 (m, 2H); 214 (m, 1 H), 1.80- 1.22 (m, 75H); 0.84 (m, 6H). 13C-NMR (DMSO, 100 MHz, 60 0 C, mezcla de rotámeros y confórmeros): δ 173.0, 75.8, 72.5, 71.6, 68.3, 66.8, 57.2, 50.5, 44.5, 36.2, 34.7, 32.9, 32.0, 30.9, 29.7 (30C), 26.6, 25.0, 22.7 (2C), 14.3 (2C). HRMS. Calculado para C 5 OHiOoN 2 O 6 (M+H + ): 825.7660. Encontrado: 823.7624.

Ejemplo 28:

(2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1-((1 'S,2'S,3'S,4'S,5'S,6'R)-5'-hidroximetil- 2',3',4',6',-tetrahidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol ;

Este compuesto fue preparado en cuatro etapas:

1 ) formación de Ia amina siguiendo el método descrito en el ejemplo 17 por reacción de (1 S,2S,3S,4S,5S,6R)-5-hidroximetil-2,3,4,5- tetrakis(benciloxi)ciclohexilamina con (S)-2-((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil- 1 ,3-dioxolan-4-il)-1-(2-nitrofenilsulfonil)aziridina [Y. Harrak et al. Eur J Org. Chem 2008, 4647-4654] para dar Ia correspondiente amina (83% rendimiento)

2) desprotección del grupo nitrobencenosulfonilo de acuerdo com el procedimiento descrito en el ejemplo 19 para dar el compuesto (S)-1- ((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-Λ/ 2 -

((1 'S,2'S,3'S,4'S,5'S,6'R)- 5'-hidroximetil-2',3',4',6'-tetrakis(benciloxi))etano- 1 ,2-diamina (79% rendimiento); 3) Acilación con ácido cerótico de Ia amina primaria en dicha diamina siguiendo un procedimiento análogo al descrito en el ejemplo 21 para dar (2S,3S,4R)-(3,4-isopropilidendioxi-1- (1 'S,2'S,3'S,4'S,5'S,6'R)-5'-hidroximetil-2,3,4,6- tetrabenciloxiciclohexilaminooctadecan-2-il)hexacosanamida correspondiente con un rendimiento del 79%; y 4) desprotección de los sustituyentes hidroxilados de dicha amida mediante hidrogenación catalítica siguiendo el siguiente procedimiento. Una disolución de (0.02 mmol) in 10 ml_ of CH3OH conteniendo dos gotas de HCI conc. se agita bajo H 2 (2 atm) en presencia de 10 mg de Pd-C, 5 % durante 48 h. La mezcla de reacción se filtra y se concentra a presión reducida para dar el hidrocloruro de (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1- ((1 'S,2'S,3'S,4'S,5'S,6'R)-5-hidroximetil-2,'3',4',6'- tetrahidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol en forma de sólido ligeramente marrón con un rendimiento del 85%.

Pf = 277-279, [α] D = +3 (MeOH, C, 0.5) ; IR (film): 34000-3200 (br), 2861 , 1672, 985. 1 H-NMR (CD3OD, 500 MHz); δ 4.36 (m, 1 H); 4.26 (m, 1 H), 4.14 (m, 3H); 4.00 (m, 2H); 3.92-3.57 m (m, 3H); 3.44 (dd, J = 12.5, 6.5, 1 H); 3.26 (dd, J = 12.5, 6, 1 H); 2.45 (m, 1 H); 2.40 (br, 1 H); 2.26 (m, 2H); 1.63 (m, 4H); 1.23 (m, 68H); 0.90 (m, 6H).13C-NMR (DMSO, 100 MHz, 6O 0 C): δ 173.3, 75.6, 71.7, 71.4, 67.1 , 66.3 (2C), 59.5, 57.1 , 46.5, 45.6, 41.8, 35.7, 31.4(2C), 29.7-28.8 (29C), 25.5, 25.3, 22.1 (2C), 13.5, 13.4. HRMS. Calculado para C 5 IHi 02 N 2 O 8 (M+H + ): 871.7714. Encontrado: 871.7713.

Ejemplo 29:

(2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1-((1 'S,2'S,3'S,4'S,5'R)-5-hidroximetil-

2',3',4',-trihidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol;

Este compuesto fue preparado en cuatro etapas: 1 ) siguiendo el método descrito en el ejemplo 17 por reacción de (1 S,2S,3S,4S,5R)-5-hidroximetil-2,3,4-tris(benciloxi)ciclohexi lamina con (S)- 2-((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-1 -(2- nitrofenilsulfonil)aziridina [Y. Harrak et al. Eur J Org. Chem 2008, 4647- 4654] para dar Ia correspondiente amina (88% rendimiento);

2) desprotección del grupo nitrobencenosulfonilo de acuerdo com el procedimiento descrito en el ejemplo 19 para dar el compuesto (S)-1- ((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-Λ/ 2 -((1'S,2'S,3'S,4'S,5'R)- 5'-hidroximetil-2',3',4'-tris(benciloxi))etano-1 ,2-diamina (69% rendimiento); 3) Acilación con ácido cerótico de Ia amina primaria siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 21 para dar (2S,3S,4R)-(3,4- isopropilidendioxi-1-(1 'S,2'S,3'S,4'S,5'R,)-5'-hidroximetil-2',3',4'- tribenciloxiciclohexilaminooctadecan-2-il)hexacosanamida con un rendimiento del 74%; y 4) desprotección de los sustituyentes hidroxilados mediante reacción con metanol y ácido clorhídrico siguiendo el siguiente procedimiento: una disolución de (0.02 mmol) in 10 ml_ of CH3OH conteniendo dos gotas de HCI conc. se agita bajo H 2 (2 atm) en presencia de 10 mg de Pd-C, 5 % durante 48 h. La mezcla de reacción se filtra y concentra a vacío para dar el hidrocloruro de (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1 -((1 'S,2'S,3'S,4'S,5'R)-5- hidroximetil-2',3',4'-trihidroxiciclohexilamino)octadecano-3 ,4-diol en forma de sólido ligeramente marrón con un rendimiento del 88%.

IR (film, cm "1 ): 3300-3400 (br), 2966, 2851 , 1659, 1440, 1024. 1 H-NMR (DMSO, 400 MHz); δ 4.8 (br, 1 H); 4.22 (br, 1 H); 3.85-3.15 (m, 10H); 2.44

(m, 2H); 2.15(m, 1 H); 2.0 (m, 1 H); 1.7 (m, 1 H); 1.5 (m, 2H); 1.23 (m, 70H);

0.84 (m, 6H). 13C-NMR (DMSO, 100 MHz, 6O 0 C): δ 174.9, 76.3, 73.4, 71.8,

68.9, 68.8, 61.4, 58.2, 48.4, 38.7, 36.5, 33.3, 31.8(2C), 29.7-29.0 (30 C),

25.8, 25.1 , 22.7 (2C), 14.2 (2C). HRMS. Calculado para C 5I H 102 N 2 O 7 (M+H +) : 871.7765. Found: 871.7742. Ejemplo 30:

(2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1-((1 'R,2'S,3'S,4'S,5'R)-5-hidroximetil-

2',3',4'-trihidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol.

Este compuesto fue preparado en cuatro etapas:

1 ) siguiendo el método descrito en el ejemplo 17 por reacción de (1 R,2S,3S,4S,5R)-5-hidroximetil-2,3,4-tris(benciloxi)ciclohexi lamina con (S)-2-((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-1-(2- nitrofenilsulfonil)aziridina (cfr. Y. Harrak et al., Eur J Org. Chem 2008, 4647- 4654) para dar Ia correspondiente amina (88% rendimiento);

2) desprotección del grupo nitrobencenosulfonilo de acuerdo com el procedimiento descrito en el ejemplo 19 para dar el compuesto (S)-1- ((4S,5R)-2,2-dimetil-5-tetradecil-1 ,3-dioxolan-4-il)-Λ/ 2 -((1'R,2'S,3'S,4'S,5'R)- 5'-hidroximetil-2',3',4'-tris(benciloxi))etano-1 ,2-diamina (69% rendimiento); 3) Acilación con ácido cerótico de Ia amina primaria siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 21 para dar (2S,3S,4R)-(3,4- isopropilidendioxi-1-(1 'R,2'S,3'S,4'S,5'R,)-5'-hidroximetil-2,3,4- tribenciloxiciclohexilaminooctadecan-2-il)hexacosanamida con un rendimiento del 74%; y 4) desprotección de los sustituyentes hidroxilados mediante reacción con metanol y ácido clorhídrico siguiendo el siguiente procedimiento: una disolución de 22.5 mg (0.018 mmol) de Ia amida en 10 ml_ of CH 3 OH conteniendo dos gotas de HCI conc. se agita bajo H 2 (2 atm) en presencia de 10 mg de Pd-C, 5 % durante 48 h. La mezcla de reacción se filtra y concentra a vacío para dar 14 mg (0.015 mmol) del hidrocloruro de (2S,3S,4R)-2-hexacosanamido-1-((1 'R,2'S,3'S,4'S,5'R)-5-hidroximetil- 2',3',4'-trihidroxiciclohexilamino)octadecano-3,4-diol en forma de sólido ligeramente marrón con un rendimiento del 81 %.

IR (neat, cm "1 ): 3381 (br), 2963, 2841 , 1655, 1439, 1024. 1 H-NMR (DMSO, 400 MHz); δ 4.83 (br, 1 H); 4.23 (br, 1 H); 3.85-3.17 (m, 10H); 2.42 (m, 2H); 2.13 (m, 1 H); 2.00 (m, 1 H); 1.71 (m, 1 H); 1.51 (m, 2H); 1.23 (m, 70H); 0.84 (m, 6H). 13 C-NMR (DMSO, 100 MHz, 60 0 C): δ 173.9, 76.1 , 73.4, 71.7, 68.9, 68.7, 61.6 58.0, 48.3, 38.6, 36.1 , 33.1 , 31.9(2C), 29.7-29.3 (30C), 25.9, 25.1 , 22.6 (2C), 14.4 (2C). HRMS. Calculado para C51H102N2O7 (M+H +) : 871.7765. Encontrado: 871.7742

Ensayos biológicos de los compuestos de fórmula (I)

Ejemplo 31 Determinación de Ia expansión de células iNKT de ratón inducida por los compuestos de tipo aminociclitol in vitro.

La determinación de Ia capacidad de inducir Ia activación de las células iNKT por los compuestos de Ia invención se realizó de acuerdo con los métodos conocidos por un experto en Ia materia.

En primer lugar, se determinó Ia capacidad de inducir Ia proliferación específica de iNKT de ratón mediante experimentos de cultivos in vitro. Para ello se aislaron células de bazo provenientes de ratones B57BI/6 de hembras entre 10 a 20 semanas y se eliminaron los hematíes mediante lisis hipotónica. Las células de bazo se distribuyen en placas de 96 pocilios en U, entre 100.000 y 500.000 células por pocilio y se incuban en presencia de cada uno de los compuestos 1a, 1 b, 2b, 3a, 3b y 4b a una concentración final de 1 μg/mL en medio de cultivo RPMI-1640, 10% suero fetal, 100 mM glutamina, 1 % metanol. Al día 2 de cultivo se añadió interleucina 2 humana recombinante, a una concentración final de 25 unidades/mL, condiciones que no indujeron Ia proliferación inespecífica de las células NK. El cultivo se analizó a día 5 ó 6 mediante citometría de flujo, utilizando anticuerpos específicos del TCR y NK1.1 En presencia del control αGalCer:

Ia población de células NKT se expandió más de 5 veces sobre las condiciones básales, en concordancia con los resultados establecidos en Ia literatura científica. En las mismas condiciones, el compuesto 4b induce una fuerte proliferación de las iNKT, similar a Ia αGalCer, representando un aumento del 1 ,2 al 6,2% de las células T (fig 1 ). Asimismo, los compuestos 3a y 3b, inducen una débil expansión de las iNKT (aproximadamente 2 veces), pero los resultados son demasiado pequeños para atribuir una capacidad inmuestimuladora de forma inequívoca. El uso de dimetilsulfóxido (DMSO) en vez de metanol como disolvente o el uso de concentraciones superiores de los compuestos, sólo permiten confirmar Ia tendencia estimuladora sobre las iNKT, pero los experimentos muestran una variabilidad demasiado elevada como para extraer conclusiones definitivas, debido a Ia baja solubilidad de los compuestos.

Cuantificación de Ia capacidad estimuladora de las células iNKT del compuesto 4b

Los ligandos glicolipídicos de CD1d inducen una desviación de Ia producción de citocinas por parte de las células iNKT hacia TM o Th2, dependiendo de su capacidad de ser presentados por CD1d y de sus características estructurales reconocidas por el TCR. Para cuantificar más precisamente Ia capacidad inmunoestimuladora del compuesto 4b y determinar si induce una desviación de Ia respuesta iNKT, se titula su capacidad de inducir Ia producción de IFNγ e IL-4 en los cultivos celulares usando diferentes concentraciones, y comparándola con los dos ligandos prototípicos, αGalCer y OCH (disueltos en MeOH), que han sido descritos como inductores de de una respuesta Th 1 y Th2 respectivamente.

El compuesto 4b induce Ia producción de IFNγ a una concentración de 333ng/ml_, alcanzando el plateau de máxima respuesta a 1 μg/ml_, siendo éste de menor magnitud y a una mayor concentración de compuesto que en el caso de Ia respuesta producida por α-GalCer (fig. 3a). α-GalCer se representa como aGC en las figuras 2 y 3. El compuesto 4b induce una mayor producción relativa de IL-4 frente a IFNγ, comparada con Ia inducida por aGalCer (relación de IFNγ/IL-4 de 2 en el caso del compuesto 4b frente a una relación de 10 en el caso de α-GalCer). Esta capacidad de inducción de IL-4 se mantiene con alta eficiencia a una concentración de 100 ng/mL, siendo aún significativa a 33 ng/mL (fig 3b). Comparando con el prototipo de respuesta Th2, OCH, el compuesto 4b induce una menor respuesta, pero conserva un perfil similar, de forma que ambos compuestos mantienen una capacidad muy superior de inducción de IL-4 frente a IFNγ a dosis menores, en contraste con el alto perfil Th 1 de Ia α-GalCer. Por tanto, el compuesto 4b induce preferiblemente una respuesta de tipo Th2 tras su reconocimiento por las iNKT.

Cultivos celulares

Esplenocitos de ratones C57BL/6 se obtienen mediante aislamiento del bazo de ratones hembras de 8 a 12 semanas de edad, según protocolos aprobados por el Comité de Etica en Experimentación Animal y Humana de

Ia Universidad Autónoma de Barcelona. Los bazos son disgregados con el émbolo de una jeringa en placas de 60 mL en cabina de flujo laminar, elimando los hematíes con tampón de lisis (Sigma-Aldrich). 5x10 5 células se depositan en pocilios de placas de 96 con fondo en U y se incuban con

100 ng/mL de α-GalCer, OCH, o 1 μg/mL de los compuestos 1a, 1 b, 2b, 3a, 3b, y 4b en medio RPM 1-1640 suplementado con 10% de suero bovino fetal (FCS) (Labclinics), 2-mercaptoetanol 50 μM, L-glutamina 2mM y 1 % de metanol (concentración no tóxica para las células) y se cultivan a 37 0 C en atmósfera de 5% de CO2 humidificada. Se añaden 25 U/mL de interleucina 2 humana recombinante a día 2 de cultivo.

Para las determinaciones de IL-4 e IFNγ, se toman los sobrenadantes de cultivo a día 4 o día 7 y se almacenan a -7O 0 C o se usan inmediatamente en ensayos de ELISA (eBioscience) para Ia cuantificación de citocinas, siguiendo las instrucciones del fabricante. Las curvas estándar se generan con las citocinas recombinantes incluidas en el kit. La significación estadística de los resultados se analiza usando un test de t-Student, considerándose significativas diferencias con un p<0,01. Los compuestos 1a, 1b, 2b, 3a, 3b, y 4b se resuspenden en 100% de metanol o 100% dimetilsulfóxido a una concentración de 1 mg/mL, y se prepara una dilución de uso 1/10 en PBS, con una concentración final de 100 μg/mL. Los compuestos se calientan a 56 0 C durante 10-30 min y se sonican, antes de ser diluidos en medio de cultivo completo, con una concentración final de 1 % del vehículo en el ensayo celular.

Análisis por citometría de flujo

Los cultivos de esplenocitos cultivados en las condiciones indicadas se analizan mediante citometría de flujo en un FACS Calibur (Beckton Dickinson Bioscience) para cuantificar los niveles de proliferación de las iNKT tras Ia incubación con los compuestos 1a, 1b, 2b, 3a, 3b, y 4b. Los cultivos de bazo estimulados son lavados y preincubados con 50μl de medio de tinción (PBS con 2% de FCS) con anti-CD16 (clone 2.4G2) durante 20 min en hielo. Posteriormente se lavan y se resuspenden las células en medio de tinción con anticuerpo anti-TCR de ratón conjugado a isotiocianato de fluoresceina (FITC) (clone H57-597, BD-Pharmingen) y anti-NK1.1 conjugado con avidina (clone PK-136, BD-Pharmingen) durante 30 min en hielo. Se lavan las células y se resuspenden en medio de tinción con estreptavidina-phicoeritrina (Southern Biotechonology) durante 30 min en hielo. Se lavan dos veces las células y se resuspenden me medio de tinción. Las muestras se analizan en el citómetro de flujo (FACSCalibur) y los datos se procesan usando el programa CelIQuest (BD Bioscience).