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苯并氮杂草衍生物、 其制备方法及其在医药上的应用 本申请要求申请日为 2017年 12月 21日的中国专利申请 CN201711396645.1的优先 权。 本申请引用上述中国专利申请的全文。 技术领域

本发明属于医药领域， 涉及一种通式 (I)所示的新的苯并氮杂草衍生物、 其制备方法 及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗 剂， 特别是作为 TLR8激动剂的用途。 背景技术

Toll样受体 (toll-like receptors; TLRs)是参与先天免疫的一类重要受体。 TLRs是单体 跨膜的非催化性受体， 通常在岗哨细胞如巨噬细胞和树突状细胞中表 达， 可以识别由微 生物产生的结构保守的分子。 一旦这些微生物突破如皮肤或肠道粘膜的物理 屏障， 就会 被 TLRs识别， 继而激活免疫细胞应答 (Mahla， R S. 等人 Front Immunol. 4: 248 (2013))。 免疫系统之所以具有广泛识别病原微生物的能 力， 某种程度上是由于 Toll样免疫受体的 广泛存在。

在哺乳动物中至少有 10种不同的 TLRs。 一些此类受体的配体和相应的信号级联放大 已经被鉴定出。 TLR8是 TLRsCTLRs 3、 7、 8和 9)亚组的成员， 局限于专门识别非己核酸的 细胞的内涵体隔室。 TLR8在人身上主要通过单核细胞， NK细胞和髓样树突细胞〇nDC)表 达。 TLR8激动剂可以导致各种不同的促炎细胞因子� �释放，如 IL-6, IL-12, TNF-a和 IFN- i

TLR8在机体的固有免疫和获得性免疫都起着重� �的作用。 TLR8激动剂作为免疫调 节剂， 可以用于各种不同与免疫相关的疾病的治疗， 如卵巢癌、 黑色素瘤、 非小细胞肺 癌、肝细胞癌、基底细胞癌 (basal cell carcinoma)、肾细胞癌、骨髓瘤、变应性鼻炎、� �喘、 慢性阻塞性肺炎 (COPD)、溃疡性结肠炎、肝纤维化， HBV、黄病毒科 (Flaviviridae)病毒、 HCV、 HPV、 RSV、 SARS、 HIV或流行性感冒的病毒感染等。

由于 TLR8和 TLR7高度同源， 因此 TLR8激动剂在大多数情况下也是 TLR7激动 剂。 因此 TLR8和 TLR7 的双重激动剂在很多专利里都有报道， 如 W02009111337， WO2011022508, W02011017611， WO2011068233 , WO2011139348 , WO2012066336, WO2013033345。 TLR8选择性的激动剂报道的比较少，主要有 VentiRX公司的 VTX-2337 (W02007024612)和 Gilead公司的 GS-9688 (W02016141092)。所以仍有必要继续研发 \¥0 2019/120258

安全的和治疗上更有效的 1X118激动剂。 发明内容

本发明的目的在于提供一种通式 (I)所示的化合物：

或其互变异构体、 内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异 构体、或其混合物形 式、 或其可药用的盐，

其中：

^选自- 1¾ ⁴ 、 烷基、 卤代烷基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基， 其中所述的烷 基、环烷基、杂环基、 芳基和杂芳基各自独立地任选被选自卤素、烷 基、烷氧基、 卤代烷 基、羟基、 羟烷基、 氰基、 氨基、 硝基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基中的一个或多个 取代基所取代；

选自氢原子、烷基、 卤代烷基、羟烷基、氰基、环烷基、杂环基、 芳基和杂芳基， 其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂 芳基各自独立地任选被选自卤素、烷基、烷 氧基、 ¾代烷基、 代烷氧基、 羟基、 羟烷基、 氰基、 氨基、 硝基、 环烷基、 杂环基、 杂 环基烷基、 芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

和 相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基 、卤代烷基、环烷基、杂环基、 芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂 环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自 焼基、 焼氧基、 素、 氨基、 氨基、 硝基、 轻基、 轻焼基、 环焼基、 杂环基、 芳基和杂芳 基中的一个或多个取代基所取代； 且

II为 0或 1。

在本发明一个优选的实施方案中， 所述的通式 (I)所示的化合物， 其为通式 (II)所示的 化合物： \¥0 2019/120258 卩（：17 謂18/122424

或其互变异构体、 内消旋体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其混合物形 式、 或其可药用的盐，

其中：

和 为烷基， 其中所述的烷基任选被选自烷氧基、 卤素、 氨基、 氰基、 硝基、 羟 基、 羟烷基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

11 ² 和 11如通式 (I)所示的化合物中所定义。

在本发明一个优选的实施方案中， 所述的通式 (I)所示的化合物， 其为通式 1)所示的 化合物:

或其互变异构体、 内消旋体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其混合物形 式、 或其可药用的盐，

其中：

和 为烷基， 其中所述的烷基任选被选自烷氧基、 卤素、 氨基、 氰基、 硝基、 羟 基、 羟烷基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

如通式 (I)所示的化合物中所定义。

在本发明一个优选的实施方案中， 所述的通式①所示的化合物， 其中所述的 选自 氢原子、 烷基和氰基； 优选为氢原子。

在本发明一个优选的实施方案中， 所述的通式 (I)所示的化合物， 其中所述的 和 各自独立地为甲基、 乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔 丁基、仲丁基或正戊基。

本发明的典型化合物包括但不限于： \¥0 2019/120258 卩（：17 謂18/122424

或其互变异构体、 内消旋体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其混合物形 式、 或其可药用的盐。 \¥0 2019/120258

在本发明的一个实施方案中， 所述通式 (I)所示的化合物为化合物 1 分

所述的手性 HPLC分析条件包括：

色谱柱为 OD Phenomenex Lux Cellulose- 1 150 X 4.6mm, 5 _(i m；

流动相为正己焼 /乙醇 /二乙胺 =70/30/0.1， 比例为体积比； 柱温为 35 ^° C ; 流速为 1.0 ml/min； 检测波长为 254 nm。

本发明的另一方面涉及一种通式 (IA)所示的化合物：

或其互变异构体、 内消旋体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体或其混合物形 式， 或其可药用盐 (其可以作为合成通式 (I)所示化合物的中间体)，

其中：

为氨基保护基， 优选为叔丁氧羰基；

选自- 1¾ ⁴ 、 烷基、 卤代烷基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基， 其中所述的烷 基、环焼基、杂环基、 芳基和杂芳基各自独立地任选被选自 素、焼基、焼氧基、 代焼 基、羟基、 羟烷基、 氰基、 氨基、 硝基、 环烷基、 杂环基、 芳基和杂芳基中的一个或多个 取代基所取代；

选自氨原子、焼基、 代焼基、轻焼基、氨基、环焼基、杂环基、芳 基和杂芳基， 其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂 芳基各自独立地任选被选自卤素、烷基、烷 氧基、 代焼基、 ［¾ ^' 代焼氧基、 轻基、 轻焼基、 氨基、 氨基、 硝基、 环焼基、 杂环基、 杂 环基烷基、 芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

和 相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基 、卤代烷基、环烷基、杂环基、 芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂 环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自 焼基、 院氧基、 素、 氨基、 氨基、 硝基、 轻基、 轻焼基、 环焼基、 杂环基、 芳基和杂芳 \¥0 2019/120258

基中的一个或多个取代基所取代； 且

II为 0或 1。

所述的通式 (1 ； (所示的化合物各基团的定义可以如通式 (I)所示的化合物中所述。 本发明通式 (1八)的典型化合物包括但不限于:

本发明的另一方面涉及一种通式 (I)所示的化合物的制备方法， 其包括以下步骤:

将通式 (1八)所示的化合物脱保护， 得到通式 (I)所示的化合物；

其中：

为氨基保护基， 优选为叔丁氧羰基；

1、 和 ₁₁ 如通式 (I)所示的化合物中所定义。

本发明的另一方面涉及一种通式 (II)所示的化合物的制备方法， 其包括以下步骤: \¥0 2019/120258

将通式 (1 )所示的化合物脱保护， 得到通式 (II)所示的化合物;

其中：

为氨基保护基， 优选为叔丁氧羰基;

、 、 和 11如通式 (11；)所示的化合物中所定义。

本发明的另一方面涉及一种通式 (III)所示的化合物的制备方法， 其包括以下步骤:

将通式 (11 )所示的化合物脱保护， 得到通式 (III)所示的化合物;

其中：

为氨基保护基， 优选为叔丁氧羰基；

、 和 如通式 (111)所示的化合物中所定义。

本发明的另一方面涉及一种药物组合物， 所述药物组合物含有如上所述的通式①所 示的化合物或其互变异构体、 内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异 构体、或其混 合物形式、 或其可药用的盐， 以及一种或多种药学上可接受的载体、 稀释剂或赋形剂。

本发明进一步涉及一种如上所述的通式①所示 的化合物或其互变异构体、内消旋体、 外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其 混合物形式、或其可药用的盐， 或如上所述 的药物组合物在制备用于激动 1X118的药物中的用途。

本发明进一步涉及一种如上所述的通式 (I)所示的化合物或其互变异构体、 内消旋 体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其混合物形式、 或其可药用的盐， 或如 上所述的药物组合物在制备用于治疗或预防肿 瘤的药物中的用途。

本发明进一步涉及一种如上所述的通式 (I)所示的化合物或其互变异构体、 内消旋 体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其混合物形式、 或其可药用的盐， 或如 \¥0 2019/120258

上所述的药物组合物在制备用于治疗由病毒 引起的感染的药物中的用途。

本发明进一步涉及一种激动 11^8的方法， 其包括将如上所述的通式 (I)所示的化合 物或其互变异构体、 内消旋体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其混合物形 式或其可药用盐， 或如上所述的药物组合物与 1^118接触的步骤。

本发明进一步涉及一种治疗或预防肿瘤的方法 ， 其包括给予所需患者治疗有效量的 如上所述的通式 (I)所示的化合物或其互变异构体、 内消旋体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其混合物形式或其可药用盐， 或如上所述的药物组合物。

本发明进一步涉及一种治疗由病毒引起的感染 的方法， 所述方法包括给予所需患者 治疗有效量的如上所述的通式①所示的化合物 或其互变异构体、 内消旋体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其混合物形式或其可药用盐， 或如上所述的药物组合 物。

本发明进一步涉及一种如上所述的通式 (I)所示的化合物或其互变异构体、 内消旋 体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其混合物形式或其可药用盐， 或包含其 的药物， 其用作药物。

本发明进一步涉及一种如上所述的通式 (I)所示的化合物或其互变异构体、 内消旋 体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其混合物形式、 或其可药用盐， 或包含 其的药物， 其用于激动 11^8。

本发明进一步涉及一种如上所述的通式(1)所示 的化合物或其互变异构体、 内消旋 体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其混合物形式、 或其可药用盐， 或包含 其的药物， 其用于治疗或预防肿瘤。

本发明进一步涉及一种如上所述的通式(1)所示 的化合物或其互变异构体、 内消旋 体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其混合物形式、 或其可药用盐， 或包含 其的药物， 其用于治疗或预防由病毒引起的感染。

本发明所述的肿瘤选自癌症， 优选选自黑色素瘤、 肺癌、 肝癌、 基底细胞癌、 肾 癌、 骨髓瘤、 胆道癌、 脑癌、 乳腺癌、 宫颈癌、 绒毛膜癌、 结肠癌、 直肠癌、 头颈癌、 腹膜肿瘤、 输卵管癌、 子宫内膜癌、 食道癌、 胃癌、 白血病、 淋巴瘤、 肉瘤、 成神经细 胞瘤、 口腔癌、 卵巢癌、 胰腺癌、 前列腺癌、 睾丸癌、 皮肤癌和甲状腺癌。

本发明所述的病毒可以选自登革热病毒、 黄热病毒、 西尼罗病毒、 日本脑炎病毒、 蜱传脑炎病毒、 昆津病毒、 墨累山谷脑炎病毒、 圣路易脑炎病毒、 鄂木斯克出血热病 毒、 牛病毒性腹泻病毒、 济卡病毒、 SARS和流感病 毒。 \¥0 2019/120258

本发明治疗方法中所用化合物或组合物的剂 量通常将随疾病的严重性、 患者的体重 和化合物的相对功效而改变。不过，作为一般 性指导，合适的单位剂量可以是 0.1〜 100〇11¾。

本发明的药物组合物除活性化合物外， 可含有一种或多种辅料， 所述辅料选自以下 成分： 填充剂（稀释剂）、 粘合剂、 润湿剂、 崩解剂或赋形剂等。 根据给药方法的不同， 组合物可含有 0.1至 99重量％的活性化合物。

含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的 形式， 例如片剂、糖锭剂、锭剂、 水或 油混悬液、 可分散粉末或颗粒、 乳液、 硬或软胶囊， 或糖浆剂或酏剂。 可按照本领域任何 已知制备药用组合物的方法制备口服组合物， 此类组合物可含有一种或多种选自以下的 成分： 甜味剂、 矫味剂、 着色剂和防腐剂， 以提供悦目和可口的药用制剂。 片剂含有活性 成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药 用的赋形剂。 这些赋形剂可以是惰性赋形 剂、造粒剂、崩解剂、粘合剂和润滑剂。这些 片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或 在胃肠道中延迟崩解和吸收， 因而在较长时间内提供缓释作用的己知技术将 其包衣。

也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂或其中 活性成分与水溶性载体或油溶媒混合 的软明胶胶囊提供口服制剂。

水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备 水悬浮液的赋形剂。 此类赋形剂是悬 浮剂， 分散剂或湿润剂。水混悬液也可以含有一种或 多种防腐剂、一种或多种着色剂、 一 种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。

油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油， 或矿物油配制而成。 油悬浮液可含有增 稠剂。 可加入上述的甜味剂和矫味剂， 以提供可口的制剂。 可通过加入抗氧化剂保存这 些组合物。

本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形 式。 油相可以是植物油、 或矿物油、 或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的 磷脂， 乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、 防 腐剂和抗氧剂。 此类制剂也可含有缓和剂、 防腐剂、 着色剂和抗氧剂。

本发明的药物组合物可以是无菌注射水溶液形 式。 可以使用的可接受的溶媒或溶剂 有水、 林格氏液和等渗氯化钠溶液。 无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的 无菌 注射水包油微乳可通过局部大量注射， 将注射液或微乳注入患者的血流中。 或者， 最好 按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给 予溶液和微乳。 为保持这种恒定浓度， 可 使用连续静脉内递药装置。 这种装置的实例是 CADD-PLUS. TM. 5400型静脉注射 栗。

药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌 注射水或油混悬液的形式。 可按已知 技术， 用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配 制该混悬液。 无菌注射制剂也可以 \¥0 2019/120258

是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制 备的无菌注射溶液或混悬液。 此外， 可方便 地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。

可按用于直肠给药的栓剂形式给予本发明化合 物。 可通过将药物与在普通温度下为 固体但在直肠中为液体， 因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺 激性赋形剂混合 来制备这些药物组合物。此类物质包括可可脂 、甘油明胶、氢化植物油、 各种分子量的聚 乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。

如本领域技术人员所熟知的， 药物的给药剂量依赖于多种因素， 包括但并非限定于 以下因素： 所用具体化合物的活性、 患者的年龄、 患者的体重、 患者的健康状况、 患者的 行为、 患者的饮食、 给药时间、 给药方式、 排泄的速率、 药物的组合等； 另外， 最佳的治 疗方式如治疗的模式、 通式化合物 (I)的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统 的治疗 方案来验证。

发明的详细说明

除非有相反陈述， 在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述 含义。

术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团， 其为包含 1至 20个碳原子的直链或支链基团， 优 选含有 1至 12个碳原子的烷基， 更优选含有 1至 6个碳原子的烷基。 非限制性实例包括 甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基、 叔丁基、 仲丁基、 正戊基、 1, 1 -二甲基 丙基、 1，2 -二甲基丙基、 2, 2 -二甲基丙基、 1 -乙基丙基、 2 -甲基丁基、 3 -甲基丁基、正己基、

1 -乙基 -2 -甲基丙基、 1,1, 2 -三甲基丙基、 1, 1 -二甲基丁基、 1,2 -二甲基丁基、 2, 2 -二甲基丁 基、 1，3 -二甲基丁基、 2 -乙基丁基、 2 -甲基戊基、 3 -甲基戊基、 4 -甲基戊基、 2, 3 -二甲基丁 基、 正庚基、 2 -甲基己基、 3 -甲基己基、 4 -甲基己基、 5 -甲基己基、 2,3 -二甲基戊基、 2,4- 二甲基戊基、 2, 2 -二甲基戊基、 3,3 -二甲基戊基、 2 -乙基戊基、 3 -乙基戊基、 正辛基、 2,3- 二甲基己基、 2, 4 -二甲基己基、 2, 5 -二甲基己基、 2,2 -二甲基己基、 3, 3 -二甲基己基、 4, 4 -二 甲基己基、 2 -乙基己基、 3 -乙基己基、 4 -乙基己基、 2 -甲基 -2 -乙基戊基、 2 -甲基 -3 -乙基戊 基、 正壬基、 2 -甲基 -2 -乙基己基、 2 -甲基 -3 -乙基己基、 2, 2 -二乙基戊基、 正癸基、 3, 3 -二 乙基己基、 2,2 -二乙基己基， 及其各种支链异构体等。 更优选的是含有 1至 6个碳原子的 低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、 正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、 仲丁基、 正戊基、 1，1 -二甲基丙基、 1，2 -二甲基丙基、 2, 2 -二甲基丙基、 1 -乙基丙基、 2 -甲 基丁基、 3 -甲基丁基、 正己基、 1 -乙基 -2 -甲基丙基、 1, 1，2 -三甲基丙基、 1，1 -二甲基丁基、 1,2 -二甲基丁基、 二甲基丁基、 1,3 -二甲基丁基、 2 -乙基丁基、 2 -甲基戊基、 3 -甲基戊 基、 4 -甲基戊基、 2,3 -二甲基丁基等。 烷基可以是取代的或非取代的， 当被取代时， 取代 基可以在任何可使用的连接点上被取代， 所述取代基独立地任选选自卤素、 焼基、 卤代 \¥0 2019/120258

焼基、 焼氧基、 代焼氧基、 焼硫基、 烧基氨基、 燦基、 块基、 疏基、 轻基、 轻焼基、 氯 基、 氨基、 硝基、 环焼基、 杂环基、 芳基、 杂芳基、 环焼氧基、 杂环焼氧基、 环焼硫基、 杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所 取代。

术语“焼氧基”指 -0-（；烷基；）和- 0-（非取代的环烷基）， 其中烷基和环烷基的定义如上所 述。 烷氧基的非限制性实例包括： 甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 丁氧基、 环丙氧基、 环丁氧 基、环戊氧基、 环己氧基。 烷氧基可以是任选取代的或非取代的， 当被取代时， 取代基可 以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代 基独立地任选选自卤素、烷基、 卤代烷基、 烧氧基、 代烧氧基、 焼硫基、 焼基氨基、 稀基、 块基、 疏基、 轻基、 轻焼基、 氨基、 氨 基、 硝基、 环烷基、 杂环基、 芳基、 杂芳基、 环烷氧基、 杂环烷氧基、 环烷硫基、 杂环烷 硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代。

术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多 环环状烃取代基， 环烷基环包含 3至 20 个碳原子， 优选包含 3至 12个碳原子， 更优选包含 3至 6个碳原子（例如 3、 4、 5或 6个 碳原子），最优选包含 5至 6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括� �丙基、环丁基、 环戊基、 环戊烯基、 环己基、 环己烯基、 环己二烯基、 环庚基、 环庚三烯基、 环辛基等； 多环环烷基包括螺环、 稠环和桥环的环烷基。

术语“螺环烷基”指 5至 20元的单环之间共用一个碳原子（称螺原子）� ��多环基团， 其 可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有 完全共轭的 71电子系统。优选为 6至 14元， 更优选为 7至 10元（例如 7、 8、 9或 10元）。 根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷 基分为单螺环烷基、 双螺环烷基或多螺环烷基， 优选为单螺环烷基和双螺环烷基。 更优 选为 4元 /4元、 4元 /5元、 4元 /6元、 5元 /5元或 5元 /6元单螺环焼基。 螺环焼基的非限 制性实例包括： 术语“稠环烷基”指 5至 20元， 系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的 一对碳 原子的全碳多环基团， 其中一个或多个环可以含有一个或多个双键， 但没有一个环具有 完全共轭的 71电子系统。优选为 6至 14元， 更优选为 7至 10元（例如 7、 8、 9或 10元）。 根据组成环的数目可以分为双环、三环、 四环或多环稠环烷基， 优选为双环或三环， 更优 选为 5元 /5元或 5元 /6元双环烷基。 稠环烷基的非限制性实例包括： \¥0 2019/120258 术语“桥环烷基”指 5至 20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原� ��的全碳多环 基团， 其可以含有一个或多个双键， 但没有一个环具有完全共轭的 71 电子系统。 优选为 6至 14元， 更优选为 7至 10元（例如 7、 8、 9或 10元；）。 根据组成环的数目可以分为双 环、 三环、 四环或多环桥环烷基， 优选为双环、 三环或四环， 更优选为双环或三环。 桥环 烷基的非限制性实例包括：

所述环烷基环包括上述环烷基稠合于芳基、 杂芳基或杂环烷基环上， 其中与母体结 构连接在一起的环为环烷基， 非限制性实例包括茚满基、 四氢萘基、苯并环庚烷基等； 优 选苯基并环戊基、 四氢萘基。环烷基可以是任选取代的或非取代 的， 当被取代时， 取代基 可以在任何可使用的连接点上被取代， 所述取代基独立地任选选自卤素、 烷基、 卤代烷 基、烧氧基、 ［¾ ^' 代烧氧基、焼硫基、焼基氨基、 嫌基、块基、疏基、轻基、轻烧基、氨基、 氨基、 硝基、 环烷基、 杂环基、 芳基、 杂芳基、 环烷氧基、 杂环烷氧基、 环烷硫基、 杂环 烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代 。

术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多 环环状烃取代基， 其包含 3至 20个环原 子， 其中一个或多个环原子为选自氮、 氧或 （其中 III是整数 0至 2）的杂原子， 但不 包括 _〇_〇_、 _〇各或- -的环部分， 其余环原子为碳。 优选包含 3至 12个环原子， 其中 1〜 4个是杂原子； 最优选包含 3至 8个环原子（:例如 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9或 10元；（， 其 中 1〜 3个是杂原子； 最优选包含 5至 6个环原子， 其中 1〜 2或 1〜 3个是杂原子。 单环 杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、 咪唑烷基、 四氢呋喃基、 四氢吡喃基、 四氢噻吩 基、 二氢咪唑基、 二氢呋喃基、 二氢吡唑基、 二氢吡咯基、 哌啶基、 哌嗪基、 吗啉基、 硫 代吗啉基、 高哌嗪基等， 优选四氢吡喃基、 哌啶基、 吡咯烷基。 多环杂环基包括螺环、 稠 环和桥环的杂环基。 \¥0 2019/120258

术语“螺杂环基”指 5至 20元的单环之间共用一个原子（称螺原子；）� ��多环杂环基团， 其中一个或多个环原子为选自氮、 氧或 8（0）4其中 III是整数 0至 2）的杂原子， 其余环原 子为碳。 其可以含有一个或多个双键， 但没有一个环具有完全共轭的 71电子系统。 优选 为 6至 14元， 更优选为 7至 10元。 根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基 分为 单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选 为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为 4元 /4元、 4元 /5元、 4元 /6元、 5元 /5元或 5元 /6元单螺杂环基。 螺杂环基的非限制性实例 包括：

术语“稠杂环基”指 5至 20元， 系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的 一对原 子的多环杂环基团， 一个或多个环可以含有一个或多个双键， 但没有一个环具有完全共 轭的 71电子系统， 其中一个或多个环原子为选自氮、 III是整数 0至 2）的 杂原子， 其余环原子为碳。 优选为 6至 14元， 更优选为 7至 10元（例如 7、 8、 9或 10 元）。根据组成环的数目可以分为双环、三环 、 四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环， 更优选为 5元 /5元或 5元 /6元双环稠杂环基。 稠杂环基的非限制性实例包括：

术语“桥杂环基”指 5至 14元， 任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环 杂环基 团， 其可以含有一个或多个双键， 但没有一个环具有完全共轭的 71电子系统， 其中一个 或多个环原子为选自氮、 其余环原子为碳。 优选为 6至 14元， 更优选为 7至 10元（例如 7、 8、 9或 10元）。 根据组成环的数目可以 分为双环、 三环、 四环或多环桥杂环基， 优选为双环、 三环或四环， 更优选为双环或三 环。 桥杂环基的非限制性实例包括： \¥0 2019/120258 卩（：17 謂18/122424 所述杂环基环包括上述杂环基稠合于芳基、 杂芳基或环焼基环上， 其中与母体结构 连接在一起的环为杂环基， 其非限制性实例包括：

杂环基可以是任选取代的或非取代的， 当被取代时， 取代基可以在任何可使用的连 接点上被取代， 所述取代基独立地任选选自卤素、 烷基、 卤代烷基、 烷氧基、 卤代烷氧 基、焼硫基、 焼基氨基、 嫌基、块基、疏基、 轻基、 轻焼基、氨基、氨基、硝基、环焼基、 杂环基、 芳基、 杂芳基、 环燒氧基、 杂环焼氧基、 环焼硫基、 杂环焼硫基和氧代基中的一 个或多个取代基所取代。

术语“芳基”指具有共轭的 电子体系的 6至 14元全碳单环或稠合多环（也就是共享 毗邻碳原子对的环）基团， 优选为 6至 10元， 例如苯基和萘基。所述芳基环包括上述芳基 稠合于杂芳基、 杂环基或环烷基环上， 其中与母体结构连接在一起的环为芳基环， 其非 限制性实例包括：

芳基可以是取代的或非取代的， 当被取代时， 取代基可以在任何可使用的连接点上 被取代， 所述取代基独立地任选选自 素、 焼基、 代焼基、 焼氧基、 代焼氧基、 燒硫 基、烷基氨基、 烯基、 炔基、 巯基、 羟基、 羟烷基、 氰基、 氨基、 硝基、 环烷基、 杂环基、 芳基、 杂芳基、 环焼氧基、 杂环焼氧基、环焼硫基、 杂环焼硫基和氧代基中的一个或多个 取代基所取代。 \¥0 2019/120258

术语“杂芳基”指包含 1至 4个杂原子、 5至 14个环原子的杂芳族体系， 其中杂原子 选自氧、 硫和氮。 杂芳基优选为 5至 10元（例如 5、 6、 7、 8、 9或 10元）， 含 1至 3个杂 原子； 更优选为 5元或 6元， 含 1至 2个杂原子； 优选例如咪唑基、 呋喃基、 噻吩基、 噻唑基、 吡唑基、 噁哇基、 吡咯基、 1 // - 1,2,3 -三哇基、 4 // - 1 ,2,4 -三唑基、 4 // -1,2,3 -三哇 基、 1 / /-四唑基、 2 / /-四唑基、 5 / /-四唑基、 吡啶基、 嘧啶基、 噻二唑、 吡嗪基等， 优选 为咪哇基、 吡唑基或嘧啶基、 噻哇基； 更优选吡哇基或咪唑基。所述杂芳基环包括上 述杂 芳基稠合于芳基、 杂环基或环烷基环上， 其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环， 其非限制性实例包括：

杂芳基可以是任选取代的或非取代的， 当被取代时， 取代基可以在任何可使用的连 接点上被取代， 所述取代基独立地任选选自卤素、 烷基、 卤代烷基、 烷氧基、 卤代烷氧 基、焼硫基、 焼基氨基、 煉基、块基、疏基、 轻基、 轻焼基、氨基、氨基、硝基、环焼基、 杂环基、 芳基、 杂芳基、 环烷氧基、 杂环烷氧基、 环烷硫基、 杂环烷硫基和氧代基中的一 个或多个取代基所取代。

术语“氨基保护基”是为了使分子其它部位进 行反应时氨基保持不变， 用易于脱去的 基团对氨基进行保护。 非限制性实施例包含叔丁氧羰基、 乙酰基、 苄基、 烯丙基、 2, 4 -二 甲氧基苄基和对甲氧苄基等。 这些基团可任选地被选自卤素、 烷氧基或硝基中的 1-3 个 取代基所取代。 所述氨基保护基优选为叔丁氧羰基。

术语“卤代烷基”指焼基被一个或多个卤素取 代， 其中烷基如上所定义》

术语“羟基”指 -011基团。

术语“羟烷基”指被羟基取代的烷基， 其中烷基如上所定义。

术语“卤素”指氟、 氯、 溴或碘。

术语“氨基”指- 2。

术语“硝基”指- N0 ₂ 。

术语“氧代或氧代基”指 =0。 \¥0 2019/120258

“任选”或“任选地”意味着随后所描述的 事件或环境可以但不必发生， 该说明包括该 事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任 选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但 不必须存在， 该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环 基团不被烷基取代的情形。

“取代的”指基团中的一个或多个氢原子， 优选为最多 5个， 更优选为 1〜 3个氢原子 彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而 喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置， 本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况 下确定（通过实验或理论）可能或不可能的 取代。例如， 具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和（如烯 属）键的碳原子结合时可能是不 稳定的。

当任何变量（例如 1^）在化合物的组成或结构中出现一次以上时� �� 其在每一种情况下 的定义都是独立的。 因此， 例如， 如果一个基团被 0-2个 11所取代， 则所述基团可以任 选地至多被两个］^所取代， 并且每种情况下的 都有独立的选项。 此外， 取代基和/或其 变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化 合物的情况下才是被允许的。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述 化合物或其生理学上 /可药用的盐或前体 药物与其他化学组分的混合物， 以及其他组分例如生理学 /可药用的载体和赋形剂。 药物 组合物的目的是促进对生物体的给药， 利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

“可药用盐”是指本发明化合物的盐， 这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效 性， 且具有应有的生物活性。

本发明引入环化的亚磺酰亚胺基团， 不同于现有技术中氧代基取代的杂环基， 其可 以作为氢键受体和 1X1^8 形成很好的氢键而提高活性。 因此， 本发明提供了一种全新的 选择性好， 激活效果更明显的药物化合物， 是更安全和更有效的 11^8激动剂。

本发明化合物的合成方法

为了完成本发明的目的， 本发明采用如下技术方案：

方案一

本发明通式（I）所示的化合物或其互变异构� �、 内消旋体、外消旋体、对映异构体、 非 对映异构体、 或其混合物形式、 或其可药用的盐的制备方法， 包括以下步骤：

将通式（1八）所示的化合物在酸性条件下脱� �护， 得到通式（I）所示的化合物;

其中： \¥0 2019/120258

为氨基保护基， 优选为叔丁氧羰基；

1、 和 ₁₁ 如通式 (I)所示的化合物中所定义。

提供酸性的条件的试剂包括但不限于氯化氢、 氯化氢的 1,4 -二氧六环溶液、 三氟乙 酸、 甲酸、 乙酸、盐酸、硫酸、 甲磺酸、硝酸、磷酸、对苯甲磺酸、

优选为三氟乙酸。

上述反应优选在溶剂中进行， 所用溶剂包括但不限于： 乙酸、 三氟乙酸、 甲醇、 乙 醇、 甲苯、 四氢呋喃、 二氯甲烷、 石油醚、 乙酸乙酯、 正己烷、 二甲基亚砜、 1,4 -二氧六 环、 水、 ^ -二甲基甲酰胺及其混合物。

方案二

本发明通式 (II)所示的化合物或其互变异构体、 内消旋体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其混合物形式、 或其可药用的盐的制备方法， 包括以下步骤：

将通式 (11 )所示的化合物在酸性条件下脱保护， 得到通式 (II)所示的化合物； 其中：

为氨基保护基， 优选为叔丁氧羰基；

、 、 和!!如通式 (11)所示的化合物中所定义。

提供酸性的条件的试剂包括但不限于氯化氢、 氯化氢的 1,4 -二氧六环溶液、 三氟乙 酸、 甲酸、 乙酸、盐酸、硫酸、 甲磺酸、硝酸、磷酸、对苯甲磺酸、

优选为三氟乙酸。

上述反应优选在溶剂中进行， 所用溶剂包括但不限于： 乙酸、 三氟乙酸、 甲醇、 乙 醇、 甲苯、 四氢呋喃、 二氯甲烷、 石油醚、 乙酸乙酯、 正己烷、 二甲基亚砜、 1,4 -二氧六 二甲基甲酰胺及其混合物。

方案三

本发明通式 (III)所示的化合物或其互变异构体、 内消旋体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 或其馄合物形式、 或其可药用的盐的制备方法， 包括以下步骤： \¥0 2019/120258

将通式 (111八)所示的化合物在酸性条件下脱保护， 得到通式 (III)所示的化合物； 其中：

为氨基保护基， 优选为叔丁氧羰基；

、 和 如通式 (111)所示的化合物中所定义。

提供酸性的条件的试剂包括但不限于氯化氢、 氯化氢的 1,4 -二氧六环溶液、 三氟乙 酸、 甲酸、 乙酸、盐酸、硫酸、 甲磺酸、硝酸、磷酸、对苯甲磺酸、

优选为三氟乙酸。

上述反应优选在溶剂中进行， 所用溶剂包括但不限于： 乙酸、 三氟乙酸、 甲醇、 乙 醇、 甲苯、 四氢呋喃、 二氯甲烷、 石油醚、 乙酸乙酯、 正己烷、 二甲基亚砜、 1，4 -二氧六 二甲基甲酰胺及其混合物。 具体实施方式

化合物的结构是通过核磁共振 CNMR)或 /和质谱 (MS)来确定的。 NMR位移＜；5)以 10_ ⁶ (ppm)的单位给出。 NMR的测定是用 Bruker AVANCE-400核磁仪， 测定溶剂为氘代二甲 基亚砜 (pMSO-cfe)、 氘代氯仿 CCDCb)、 氘代甲醇 CCD ₃ 〇D)， 内标为四甲基硅烷TMS)。

MS的测定用 FINNIGAN LCQAd (ESI)质谱仪 (生产商： Thermo, 型号： FinniganLCQ advantage MAX)。

高效液相色谱法 (HPLC)分析使用 Agilent HPLC 1200DAD、 Agilent HPLC 1200VWD 和 Waters HPLC e2695-2489高压液相色谱仪。

手性 HPLC分析测定使用 Agilent 1260 DAD高效液相色谱仪。

高效液相制备使用 Waters 2767、 Waters 2767-SQ Detecor2、 Shimadzu LC-20AP和 Gilson-281制备型色谱仪。

手性制备使用 Shimadzu LC-20AP制备型色谱仪。

CombiFlash快速制备仪使用 Combiflash Rf200 (TELEDYNE ISCO)。

薄层层析娃胶板使用烟台黄海 HSGF254或青岛 GF254硅胶板， 薄层色谱法 (TLC)使 用的硅胶板采用的规格是 0.15 mm〜 0.2 mm， 薄层层析分离纯化产品采用的规格是 0.4 mm〜 0.5 mm〇

硅胶柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶 200-300目硅胶为载体。

激酶平均抑制率及 IC ₅ 〇值的测定用 NovoStar酶标仪 (:德国 BMG公司；)。

本发明的己知的起始原料可以采用或按照本领 域己知的方法来合成， 或可购买自

ABCR GmbH & Co. KG， Acros Organics， Aldrich Chemical Company,韶远化学科技 (Accela ChemBio Inc)、 达瑞化学品等公司。

实施例中无特殊说明， 反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。

氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约 1L容积的氩气或氮气气球。

氢气氛是指反应瓶连接一个约 1L容积的氢气气球。

加压氢化反应使用 Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝 QL-500型氢气发生器或 HC2-SS 型氢化仪。

氢化反应通常抽真空， 充入氢气， 反复操作 3次。

微波反应使用 CEM Discover-S 908860型微波反应器。

实施例中无特殊说明， 溶液是指水溶液。

实施例中无特殊说明， 反应的温度为室温， 为 20 ^° C〜 30 ^° C。

实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法 CTLC)， 反应所使用的展开剂， 纯化化 合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱 法的展开剂体系包括： A: 二氯甲焼 /甲醇 体系， B: 正己焼 /乙酸乙酯体系， C: 石油醚 /乙酸乙酯体系溶剂的体积比根据化合物的 极性不同而进行调节， 也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性 试剂进行调节。

实施例 1

2 -氨基 -8-(1-亚氨基 -1-氧代 -a ⁴ -二氢苯并噻喃 -7 -基＞A^V-二丙基 -3//-苯并 氮杂草-

4 -甲酰胺 1

\¥0 2019/120258

第一步

7 -溴 -1 -亚氨基- ⁴ -二氢苯并噻喃 1 -氧化物 1

将 7 -溴代二氢苯并噻喃 13（1.6 ₈ ， 7.0〇1!11〇1, 采用公知的方法“ 1^（1. 0^171·， 2014, 57⑴ , 159-170”制备而得;）加入到 3011^甲醇中， 室温下分别加入碳酸铵（2.0 _§ ， 21.〇!11111〇1；） 和二乙酰氧基碘苯（11.9 _§ ， 35.〇111111〇1）， 加毕， 室温下反应 16小时。将反应液减压浓缩， 向残留液中加入 20 11^乙酸乙酯， 有机相依次用饱和硫代硫酸钠溶液（；20 1^x3）， 水（；20 1111^洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 滤液减压浓缩， 用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系：8纯化 所得残余物， 得到标题产物 11^1.1 8， 产率： 60.6%）。

260.3 |>1+1］。

第二步

1 -亚氨基 -7-（4, 4,5,5 -四甲基 -1,3,2 -二氧杂戊硼烷 -2 -基） - ⁴ -二氢苯并噻喃 1 -氧化物

IX

将化合物 （500 1118， 1.92 2.31 11111101）、 ［1，1·-双

（二苯基膦基）二茂铁］二氯化钯（140 11¾， 0.19 5.76 11111101）加入到

10 11^的 1，4 -二氧六环中， 氮气置换三次， 反应液加热至 80 ^° （：， 搅拌反应 4小时。 反应 液自然冷却至室温，向反应液中加入 20 1111 _^ 水，用乙酸乙醋萃取（20 011^3），合并有机相， 有机相分别用水（20〇1¾， 饱和氯化钠溶液（20 mL）洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减 压浓缩， 用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系：8纯化所得残� �物， 得到标题产物 10（410 !!¾， 产率： 69.4%）。

308.1 |>1+1］。

第三步

（4-（二丙基氨基甲酰基）-8-（1 -亚氨基 -1 -氧代 - ⁴ -二氢苯并噻喃 -7 -基 -3 // -苯并 氮杂 草 -2 -基）氨基甲酸叔丁酯 ^ \¥0 2019/120258

将化合物 1＜：(41〇11¾， 1.32111111〇1)， (8 -溴 -4-(二丙基氨基甲酰基 )-3 // -苯并〇］氮杂草 -2- 基)氨基甲酸叔丁酯 1 ₍ 1 (410 11¾， 0.89 采用专利申请“％〇2016096778八1”中 33页 公开的化合物 0 的合成方法制备而得 )， ［1, 1'-双 (二苯基膦基)二茂铁］二氯化钯 (33 11^， 0.04〇1111〇1)和碳酸钾 (370 11¾， 2.65 11111101)加入到 10 1111 _^ 的 1,4 -二氧六环和 2 1111 _^ 的水的混 合溶剂中， 加毕， 氮气置换三次， 反应液加热至 80 ^° (：， 搅拌反应 1小时。 反应液自然冷 却至室温， 向反应液中加入 2〇11^ 7 ， 用乙酸乙酯萃取 (201111^3；)， 合并有机相， 有机相 分别用水 (20 1111^，饱和氯化钠溶液 (；20 1111^洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压� ��缩， 用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系 6纯化所得残余物，得到标题产物 ^ (330 !!¾，产率: 66.2%)

将反应液减压浓缩， 向残留液中加入 10 11^乙酸乙酯， 有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液 (10 1111^3)， 水 (10 1111^洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩， 用高效液相制备 (〇118〇11-281 , 洗脱体系： 乙腊或水)纯化所得残余物， 制得标题产物 1 (150 11¾， 产率： 55.7%)〇 7.51 (111, 1¾, 7.46-7.35

(111, 211), 7.31 ， \0), 6.85 111), 3.63-3.26〇, 811)， 3.08 20), 2.99 2¾, 2.63-2.36〇, 211), 2.03 (8, 111)， 1.74-1.51〇, 411), 0.93 (1, 611)。 实施例 1-1, 1-2

〇?)-2 -氨基 -8-(1 -亚氨基 -1 -氧代 -IV -二氢苯并噻喃 -7 -基 ， 二丙基 -3 // -苯并［ 氮杂 草 -4 -甲酰胺 1-1

( )-2 -氨基 -8-(1-亚氨基 -1 -氧代 -IX ⁴ -二氢苯并噻喃 -7 -基；) - 二丙基 -3 // -苯并 氮杂 草 -4 -甲酰胺 1-2 \¥0 2019/120258

将化合物 1 (150 11¾， 0.32〇11]1〇1)进行手性制备 (分离条件： 手性制备柱 1½11〇111〇1½\ 0611^086-2 , 21.2 X 250111111， 5 ₍₁₁₁₁ ； 流动相： 乙醇 (含 0.1%二乙胺)： 正己焼 =30:70， 流 速： 20 111^111111), 收集其相应组分， 减压浓缩， 得到标题产物 (10 11^、 15 11^)。

单一构型化合物 (较短保留时间 )：

^18 111/7卿)： 464.8 +1]〇

实施例 2

2 -氨基 -8-（1 -亚氨基 -1 -氧代 -2,3 -二氢 -1 // -IX ⁴ -苯并［6］噻吩 -6 -基）- # -二丙基 -3 // -苯并

［ 氮杂草 -4 -甲酰胺 2 \¥0 2019/120258

第一步

6 -溴 -1 -亚氨基 -2,3 -二氢- 1//- ⁴ -苯并 噻吩 1 -氧化物 2

将 6 -溴代 -2, 3 -二氢苯并［ 噻吩 2.32 采用专利申请

“10120140068637八”中 38 页公开的化合物 6-〇 的合成方法制备而得）加入到 20 11^ 甲醇 中， 室温下分别加入碳酸铵（1.2 §， 12.49

毕， 室温下反应 16小时。 将反应液减压浓缩， 向残留液中加入 2011^乙酸乙酯， 有机相 依次用饱和硫代硫酸钠溶液（20 1111^3；）， 水（；20 1111^洗涤， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 滤液减 压浓缩， 用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系 8纯化所得残余物， 得到标题产物 215（75 ， 产 率： 13.1%）〇

,3 -二氢 -1 //- IX ⁴ -苯并 噻吩 -6 -基 -3 / /-苯 并［&］氮杂草 -2 -基）氨基甲酸叔丁酯 2（1

将化合物 21}（50〇¾， 0.20 11111101）， （4-（二丙基氨基甲酰基）-8-（4,4,5,5 -四甲基 -1,3,2 -二 氧杂戊硼焼 -2 -基）-3 // -苯并［¾］氮杂草 -2 -基）氨基甲酸叔丁酯 2<:（65 11¾， 0.13 111111〇1， 采用专 \¥0 2019/120258

利申请“\¥〇2016096778八1”中 37页公开的化合物 II的合成方法制备而得 )， ［1，1'_双 (二苯 基膦基)二茂铁］二氯化销 (10 !!¾， 0.014 111111〇1)和碳酸钾 (55 11¾， 0.40 11111101)加入到 5 111］ _^ 的 1，4 -二氧六环和 1 11^的水的混合溶剂中， 加毕， 氮气置换三次， 反应液加热至 80 ^° (:， 搅 拌反应 1 小时。 反应液自然冷却至室温， 向反应液中加入 5 1111 _^ 水， 用乙酸乙醋萃取 (5 011^3)， 合并有机相， 有机相分别用水 (10 11^)， 饱和氯化钠溶液 (10 1111^洗涤， 无水硫酸 钠千燥， 过滤， 滤液减压浓缩， 用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系 6纯化所得残余物， 得到 标题产物 2<1 (45 11^， 产率： 64.3%)。

^18 111/7 (£81): 551.5［1^1+1］。

第三步

2 -氨基 -8-(1 -亚氨基 -1 -氧代 -2, 3 -二氢 -1 // -IX ⁴ -苯并［ 噻吩 -6 -基； )- #-二丙基 -3 // -苯并 氮杂草 -4 -甲酰胺 2

将化合物 2<1 (45 111 _§ ， 0.082 11111101)加入到 5〇11三氟乙酸中， 反应液室温搅拌 1小时， 将反应液减压浓缩， 向残留液中加入 5 11^乙酸乙酯， 有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液 (：5 011 _^ x3)， 水 (5 1111^洗涤， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压浓缩， 用高效液相制备 (0¾〇11- 281， 洗脱体系： 乙腈或水；)纯化所得残余物， 制得标题产物 2 (1.7 11¾， 产率： 4.6%)„ 7.53 (111,

311), 6.92 ( ， 111)， 3.63 ¾ 211), 3.35-3.50 (〇1, 611)， 1.57-1.79 (III, 4¾, 1.25-1.41 (111, 211), 0.91

(I, 6 _¾„ 测试例：

生物学评价

测试例 1、 本发明化合物对人源 11^8激动活性的测定

本发明化合物对 HEK - 6^6ä 1111^8 稳转株细胞表达的 1111^8激活作用采用如下 实验方法测定：

一、 实验材料及仪器

\¥0 2019/120258

生物科技股份有限公司， ：8320）。

二、 实验步骤

501111 去内毒素水溶 解， 再放入 37 ^° （:培养箱， 10分钟后无菌过滤。 化合物先配制成 2〇 ₁₁₁ 14的原液； 再用纯 DMSO稀释至最高浓度为 6 \ 10 ⁶ 11 ， 然后 3倍梯度稀释， 共 10个点； 用培养基先把化 合物稀释 20倍， 然后每孔加入 20 _| _11稀释后的化合物。

取 1^1^:81116ä 1111^8细胞， 先去掉上清， 放入培养箱 1-2 分钟，轻轻吹打细胞，台盼蓝染色计数。用 检测培养基重悬细胞调整浓度为 2.2 X 10 ⁵ 个细胞 /〇11， 加 1804细胞至上述已加入 20 _| _11 药物的

培养 6-1611。

酶标仪读数， 波长为 62011111。 可获得相应的 0〇值， 计算得到药 物的 £（： ₅ 〇值。

本发明化合物对人源 1X118激活作用可通过以上的试验进行测定， 测得的 表 1〇

结论： 本发明化合物对人源 11^8具有较好的激活作用。 测试例 2、 本发明化合物对人源 ^7激动活性的测定

本发明化合物对

验方法测定：

一、 实验材料及仪器

1. 〇 ］^1（〇 （：0， 10564-029）,

2. 胎牛血清（018（：0, 10099）, \¥0 2019/120258

3. 台盼蓝溶液 (Sigma, T8154-100ML)，

4. Flexstation 3多功能酶标仪 (Molecular Devices),

5. HEK-Blueä hTLR7细胞系 (InvivoGen, hkb-hTLR7),

6. HEK-Blue检测试剂 (InvivoGen, hb-det3),

7. 磷酸盐缓冲液 (PBS ) pH7.4 (上海源培生物科技股份有限公司， B320)。

二、 实验步骤

配置 HEK-Blue检测培养基， 取 HEK-Blue检测干粉一袋， 加入 50ml去内毒素水溶 解， 再放入 37 ^° C培养箱， 10分钟后无菌过滤。 化合物先配制成 20mM的原液； 再用纯 DMSO稀释至最高浓度为 6 X 10 ⁶ nM， 经 3倍梯度稀释， 共 10个点。

用培养基先把上述配制好的化合物稀释 20倍， 然后每孔加入 20 _|i l稀释后的化合物。

取 HEK-Blueä hTLR7细胞， 先去掉上清， 再加入 2-5ml预热的 PBS， 放入培养箱 1-2分钟， 轻轻吹打细胞， 台盼蓝染色计数。用 HEK-Blue检测培养基重悬细胞调整浓度 为 2.2 X 10 ⁵ 个细胞 /ml, 加 180^1细胞至上述已加入 20^1药物的 96孔细胞培养板中， 37°C， 培养 6-16h。

酶标仪读数， 波长为 620nm。 可获得相应的 OD值， 经 Graphpad Prism计算得到药 物的 EC _5Q 值。

本发明化合物对人源 TLR7激活作用可通过以上的试验进行测定， 测得的 EC ₅ 〇值见 表 2。

结论：本发明化合物对人源 11^7激活作用较弱，说明本发明化合物对 11^8具有选 择性。

测试例 3、 本发明化合物对人肝微粒体 0 3八4咪达唑仑代谢位点的酶活性的抑制 作用

本发明化合物对人肝微粒体 0^3八4咪达唑仑代谢位点的酶活性采用如下实� �方法 \¥0 2019/120258

测定：

一、 实验材料及仪器

1.磷酸缓冲液 $68）,

^429） 和阳性对照抑制剂（酮康唑， 8«¾1八 10003）。

二、 实验步骤

的

分别取 2.51^/1111的微粒体溶液、 溶液和化合物工 每个浓度设置不同的反应体系）各 200， 混合均匀。 阳性对照组用相同浓度的酮康唑代替化合物。 同时将 5mM的 NADPH溶液一 起在 37 ^° （：预孵育 5分钟。 5分钟之后取 20 _| _il NADPH加入到个孔中， 启动反应， 孵育 30 分钟。所有孵育样品设双样本。 30分钟后向所有样本中加入 250 _|1 1含内标的乙腈，混匀， 8001^111摇 10分钟， 然后 3700 ^离心 10分钟。 取 80 _|1 1的上清液， 转移至 分析。

数值经 计算得到药物对 0^3八4咪达唑仑代谢位点的 1〇5〇值见表 3。

表 3

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结论： 本发明化合物对人肝微粒体 0^3八4的咪达唑仑代谢位点没有抑制作用， 表 现出更好的安全性， 提示不会发生基于 0^3人4代谢咪达唑仑代谢位点的代谢性药物相 互作用。 测试例 4、 本发明化合物对人肝微粒体 CYP2D6酶活性的抑制作用

本发明化合物对人肝微粒体 0^2å>6酶活性采用如下实验方法测定：

一、 实验材料及仪器

1.磷酸缓冲液 $68）,

溶液和化合物工 应体系）各 200， 混合均匀。阳性对照组用相同浓度的奎尼丁代 替化合物。 同时将 5mM的 NADPH溶液一 起在 37°（：预孵育 5分钟， 5分钟之后取 20 _| _il NADPH加入到个孔中， 启动反应， 孵育 30 分钟。所有孵育样品设双样本。 30分钟后向所有样本中加入 250 _|1 1含内标的乙腈，混勾， 分析。

数值经 计算得到药物对 0^206代谢位点的 1〇 ₅ 〇值见表 4。

表 4本发明化合物对 0^206代谢位点的 1<： ₅ 〇值 \¥0 2019/120258

结论： 本发明化合物对人肝微粒体 0^206的酶活性抑制作用弱， 表现出更好的安 全性， 提示不会发生基于 0X 206发生代谢性药物相互作用。 测试例 5、 本发明化合物对人肝微粒体 0¥?3入4睾酮代谢位点的酶活性的抑制作用 本发明化合物对人肝微粒体 0^3入4睾酮代谢位点的酶活性采用如下实验方� �测定: 一、 实验材料及仪器

分别取 溶液和化合物工作液 （150、 50、 15、 5、 1.5、 0.15、 0.015、 0（^， 每个浓度设置不同的反应体系）各 20^1， 混合 均匀。阳性对照组用相同浓度的酮康唑代替化 合物。 同时将 5mM的NADPH溶液一起在 加入到个孔中， 启动反应， 孵育 30分 钟。 所有孵育样品设双样本。 30分钟后向所有样本中加入 250^1含内标的乙腈， 混匀， \¥0 2019/120258

数值经

表

结论： 本发明化 表现 出更好的安全性， 提示不会发生基于 0¥?3八4的睾酮代谢位点的代谢性药物相互作用 。