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Title:
COMPOUNDS WITH ANTIOXIDANT ACTIVITY AND USES THEREOF
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2017/168024
Kind Code:
A1
Abstract:
The invention relates to polyphenol compounds derived from amide and urea and to the use thereof as antioxidants, as well as to pharmaceutical, cosmetic and food compositions, inter alia, comprising same.

Inventors:
GONZÁLEZ MUÑIZ ROSARIO (ES)
MIGUEL CASTRO MARTA (ES)
PÉREZ DE VEGA Mª JESÚS (ES)
BALSERA PAREDES BEATRIZ (ES)
MORENO FERNÁNDEZ SILVIA (ES)
Application Number:
ES2017/070179
Publication Date:
October 05, 2017
Filing Date:
March 28, 2017
Export Citation:
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Assignee:
CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIG CIENTÍFICAS (CSIC) (ES)
International Classes:
C07C235/56; A61K31/165; A61K31/17; C07C275/34
Domestic Patent References:
WO2008097692A12008-08-14
Foreign References:
EP0790240A11997-08-20
US20110015272A12011-01-20
Other References:
KIM JINA ET AL.: "Antioxidant activity of 3,4,5- trihydroxyphenylacetamide derivatives", ARCHIVES OF PHARMACAL RESEARCH, vol. 37, no. 3, 7 January 2013 (2013-01-07), PUSAN, KR, pages 324 - 331, XP035312341, ISSN: 0253-6269
Attorney, Agent or Firm:
PONS ARIÑO, Ángel (ES)
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Claims:
REIVINDICACIONES

1 . Uso de un compuesto de fórmula general (I)

(I)

donde:

X representa CH2 o NR12;

y R12 representan independientemente hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido;

R2 a Rn representan de manera independientemente hidrógeno, -OH, -Oalquilo (C1-C4) o alquilo (C C4);

n y m son cada uno, de manera independiente 0 o 1 ;

o cualquiera de sus sales,

con la condición de que al menos un radical R2 a Rn es un grupo -OH, como antioxidante.

Uso según la reivindicación 1 , donde R2 a Rn representan de manera independientemente hidrógeno, -OH o -Oalquilo (C C4).

Uso según la reivindicación 2, donde R2 a Rn representan de manera independientemente hidrógeno, -OH o -OCH3.

Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde al menos un radical R2 a R6 es un grupo -OH y al menos un radical R7 a Rn es un grupo -OH, preferiblemente al menos un radical R2 a R6 es un grupo -OH y al menos dos radical R7 a Rn es un grupo -OH.

Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde R6 y Rn son hidrógeno.

6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde R<¡ es hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH.

7. Uso según cualquiera la reivindicación 6, donde el arilo es un grupo fenilo o bencilo opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH.

8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, donde n es 0 y/o m es 0.

9. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, donde X es CH2.

10. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, donde X es NR12 y R12 es hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH, preferiblemente R12 es hidrógeno.

1 1. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, donde el compuesto se

selecciona de entre:

A/-(2,4-Dihidroxifenil)-2-(2',5'-dihidroxifenil)acetamida,

2-(2',4'-Dihidroxifenil)-/V-(2,5-dihidroxifenil)acetamida,

2-(2',5'-Dihidroxifenil)-/V-(4-hidroxifenil)acetamida,

A/-(2,5-Dihidroxifenil)-2-(2',5'-dihidroxifenil)acetamida,

A/-(2,4-Dihidroxifenil)-2-(2',4'-dihidroxifenil)acetamida,

2-(2',5'-Dihidroxifenil)-/V-(3,4-dihidroxifenil)acetamida,

2-(3',4'-Dihidroxifenil)-/V-(4-hidroxifenil)acetamida,

2-(2',4'-Dihidroxifenil)-/V-(4-hidroxifenil)acetamida,

2-(2',5'-Dihidroxifenil)-/\/,A/-bis(4-hidroxifenil)acetamida,

A/-(2',5'-dihidroxibencil)-2-(2",5"-dihidroxifenil)-/\/-(4-Hidroxifenil)acetamida,

A/-(2,4-Dihidroxifenil)-/\/'-(2',5'-dihidroxifenil)urea,

V-(2,5-Dihidroxifenil)- V-(4'-hidroxifenil)urea,

A/-(2,5-Dihidroxifenil)- A/-(3',4'-dihidroxifenil)urea,

A/-(3,4-Dihidroxifenil)-/\/-(4'-hidroxifenil)urea,

A/,A/-bis(4-Hidroxifenil)urea,

A/,A/-bis(2,5-Dihidroxifenil)urea,

A/,A/-bis(4-Hidroxifenil)-N'-(4-hidroxifenil)urea y

A/-(2',5'-Dihidroxibencil)- A/'-(2",5"-dihidroxifenil)-A/-(4-hidroxifenil)urea.

12. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 1 , como aditivo o conservante.

13. Uso según la reivindicación 12, para la fabricación de una composición cosmética, farmacéutica, alimentaria o química.

14. Uso cosmético de un compuesto de fórmula general (I) descrito según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 contra el envejecimiento de la piel.

15. Uso de un compuesto de fórmula general (I) descrito según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 1 , como suplemento alimenticio. 16. Uso de un compuesto de fórmula general (I) descrito según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para la elaboración de un medicamento.

17. Uso de un compuesto de fórmula general (I) descrito según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 1 para la elaboración de un medicamento para la prevención o el tratamiento de enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo seleccionadas de entre enfermedades cardiovasculares, síndrome metabólico, inflamación, enfermedades neurodegenerativas y cáncer.

18. Compuesto de fórm

(II)

donde:

representa hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido;

R2 a R5 y R7 a R10 representan de manera independientemente hidrógeno, -OH, -Oalquilo (C C4) o alquilo (C C4);

m es 0 o 1 ;

o cualquiera de sus sales,

con la condición de que al menos tres radicales seleccionados de R2 a R5 y R7 a Río son un grupo -OH,

y con la condición de que los siguientes compuestos: A/-(2,5-Dihidroxifenil)-2-(2',5'-dihidroxifenil)acetarTiida,

A/-(2,5-Dihidroxifenil)-3-(2',5'-dihidroxifenil)propanamida,

A/-(3,4-Dihidroxifenil)-2-(3',4'-dihidroxifenil)acetamida,

A/-(3,4-Dihidroxifenil)-3-(3',4'-dihidroxifenil)propanamida, y

A/-(4-hidroxi-3,5-dimetilfenil)-3-(3 4'-dihidroxifenil)propanarnida,

están excluidos.

19. Compuesto de fórmula

(III)

donde:

F^y R12 representa hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido;

R2 a R5 y R7 a R10 representan de manera independientemente hidrógeno, -OH, -Oalquilo (C C4) o alquilo (C C4);

o cualquiera de sus sales,

con la condición de que al menos tres radicales seleccionados de R2 a R5 y R7 a Río son un grupo -OH,

y con la condición de que los siguientes compuestos:

A/-(2,4-Dihidroxifenil)-N'-(4'-hidroxifenil)urea,

/V,A/-bis(2,3-Dihidroxifenil)urea y

A/,A/-bis(3,4-Dihidroxifenil)urea,

están excluidos.

20. Compuesto de fórmula general (II) según la reivindicación 18 o de fórmula general (III) según la reivindicación 19, donde R2 a R5 y R7 a R10 representan de manera independientemente hidrógeno, -OH o -Oalquilo (C C4).

21. Compuesto según la reivindicación 20, donde R2 a R5 y R7 a R10 representan de manera independientemente hidrógeno, -OH o -OCH3.

22. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 21 , donde es hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH.

23. Compuesto según la reivindicación 22, donde el arilo es un grupo fenilo o bencilo opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH.

24. Compuesto según la reivindicación 18 seleccionado de entre:

A/-(2,4-Dihidroxifenil)-2-(2',5'-dihidroxifenil)acetamida,

2-(2',4'-Dihidroxifenil)-/\/-(2,5-dihidroxifenil)acetamida,

2-(2',5'-Dihidroxifenil)-/\/-(4-hidroxifenil)acetamida,

A/-(2,4-Dihidroxifenil)-2-(2',4'-dihidroxifenil)acetamida,

2-(2',5'-Dihidroxifenil)-/\/-(3,4-dihidroxifenil)acetamida,

2-(3',4'-Dihidroxifenil)-/\/-(4-hidroxifenil)acetamida,

2-(2',4'-Dihidroxifenil)-/\/-(4-hidroxifenil)acetamida,

2-(2',5'-Dihidroxifenil)-/\/,A/-bis(4-hidroxifenil)acetamida y

A/-(2',5'-dihidroxibencil)-2-(2'',5''-dihidroxifenil)-/\/-(4-Hidroxifenil)acetamida.

25. Compuesto según la reivindicación 19 seleccionado de entre:

A/-(2,4-Dihidroxifenil)-/\/-(2',5'-dihidroxifenil)urea,

A/-(2,5-Dihidroxifenil)-/\/-(4'-hidroxifenil)urea,

A/-(2,5-Dihidroxifenil)- A/-(3',4'-dihidroxifenil)urea,

A/-(3,4-Dihidroxifenil)-/\/-(4'-hidroxifenil)urea,

A/,A/-bis(2,5-Dihidroxifenil)urea,

A/,A/-bis(4-Hidroxifenil)-N'-(4-hidroxifenil)urea y

A/-(2',5'-Dihidroxibencil)- A/'-(2",5"-dihidroxifenil)-A/-(4-hidroxifenil)urea.

26. Composición que comprende un compuesto según se describe en cualquiera de las reivindicaciones 18 a 25.

27. Composición según la reivindicación 26, donde dicha composición es farmacéutica, cosmética, química o alimentaria.

28. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 26 o 27, donde la composición está en forma de liberación sostenida.

29. Composición farmacéutica que comprende un compuesto descrito según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 25 junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Description:
COMPUESTOS CON ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE Y SUS USOS

DESCRIPCIÓN La presente invención se refiere a unos compuestos polifenólicos derivados de amidas y ureas y su uso como antioxidantes, además de las composiciones farmacéuticas, cosméticas y alimentarias, entre otras, que los comprenden.

ESTADO DE LA TÉCNICA

Los antioxidantes tienen una gran variedad de aplicaciones en la industria. En alimentación y cosmética se utilizan como aditivos y conservantes, para mantener la calidad de los productos y ampliar su vida útil. Puesto que los antioxidantes son sustancias químicas que protegen a las células, al neutralizar los daños producidos por los radicales libres, también se utilizan en cosmética para retardar el envejecimiento de la piel. Se agregan a combustibles, lubricantes y polímeros para prevenir su oxidación. Se conoce también que los daños celulares causados por radicales libres y especies reactivas de oxígeno están detrás de una gran variedad de enfermedades, incluyendo diferentes problemas cardiovasculares, procesos neurodegenerativos y cáncer. Existen numerosas evidencias experimentales de que los antioxidantes ejercen efectos beneficiosos sobre estas patologías (Wahlqvist, ML, Asia Pac J Clin A/ufr2013; 22 (2): 171 -176).

Los polifenoles naturales provienen del metabolismo secundario de las plantas y químicamente tienen al menos un anillo aromático al que están unidos uno o más grupos hidroxilo. Se clasifican en flavonoideos, (flavonoles, flavonas, isoflavonas, antocianos, proantocianidinas, flavanonas, etc.) no flavonoideos (ácidos fenólicos). Otros compuestos de naturaleza polifenólica son estilbenos, taninos, ligninas y lignanos. En los últimos años los polifenoles naturales han cobrado gran interés por sus propiedades beneficiosas para la salud, sobre todo como agentes antioxidantes. (Scalbert, A. et al, Am J Clin Nutr 2005; 81 (suppl):215S-7S.)

Debido a la gran variedad de aplicaciones posibles, es necesario encontrar nuevos compuestos que posean alta capacidad antioxidante y que su potencia como antioxidante sea comparable o superior a la de otros compuestos descritos anteriormente, como por ejemplo el hidroxitirosol, que es un componente del aceite de oliva, considerado uno de los antioxidantes más potentes conocidos, o el resveratrol presente en las uvas y el vino, también con alta capacidad antioxidante. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona una familia de compuestos que poseen alta capacidad antioxidante. Por lo tanto, los compuestos de la invención pueden resultar útiles para la industria de la alimentación y cosmética como aditivos y conservantes, para mantener la calidad de los productos y ampliar su vida útil, también en la industria química en composiciones como combustibles, lubricantes o polímeros para prevenir su oxidación. Además, como los antioxidantes son sustancias químicas que protegen a las células, al neutralizar los daños producidos por los radicales libres, los compuestos de la invención son también útiles en la industria cosmética para retardar el envejecimiento de la piel, y en la industria farmacéutica, ya que los daños celulares causados por radicales libres y especies reactivas de oxígeno están detrás de una gran variedad de enfermedades, incluyendo diferentes problemas cardiovasculares (hipertensión), síndrome metabólico (obesidad, diabetes), inflamación, procesos neurodegenerativos y cáncer.

Un primer aspecto de la presente invención se refiere al uso como antioxidante de un compuesto de fórmula general (I) o cualquiera de sus sales:

(I)

donde:

X representa CH 2 o NR 12 ;

y R 12 representan independientemente hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido; R 2 a Rn representan de manera independientemente hidrógeno, -OH, -Oalquilo (C C 4 ) o alquilo (C C 4 );

n y m son cada uno, de manera independiente 0 ó 1 ;

con la condición de que al menos un radical R 2 a Rn es un grupo -OH. Según la presente memoria, cualquiera de los compuestos definidos anteriormente, es decir, aquellos compuestos que responden a la fórmula general (I), pueden ser igualmente referidos en esta memoria como "compuesto o compuestos de la invención".

El término "alquilo" se refiere a una cadena de hidrocarburo saturada lineal, no ramificada, que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, como por ejemplo metilo, etilo, n- propilo o n-butilo. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como alquinilo, alquenilo, halógeno, hidroxilo, alcoxilo, carboxilo, ciano, carbonilo, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro o mercapto. Preferiblemente el grupo alquilo es metilo.

El término "arilo" se refiere en la presente invención a una cadena carbocíclica aromática, que tiene de 5 a 18 átomos de carbono, pudiendo ser de anillo único ó múltiple, en este último caso con anillos separados y/o condensados. Preferentemente el grupo arilo tiene de 5 a 7 átomos de carbono Un ejemplo, no limitante, de arilo es un grupo fenilo, bencilo, naftilo, difenilo, indenilo, fenantrilo o antracilo. Los radicales arilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes que se pueden seleccionar de entre alquilo, alcoxilo o hidroxilo. Más preferiblemente el grupo arilo es es un grupo fenilo o bencilo, opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH.

En una realización preferida, R 2 a Rn representan de manera independientemente hidrógeno, -OH o -Oalquilo (C C 4 ), más preferiblemente R 2 a Rn representan de manera independientemente hidrógeno, -OH o -OCH 3 .

En otra realización preferida, al menos un radical R 2 a R 6 es un grupo -OH y al menos un radical R 7 a Rn es un grupo -OH, preferiblemente al menos un radical R 2 a R 6 es un grupo -OH y al menos dos radical R 7 a Rn es un grupo -OH. En otra realización preferida, R 6 y Rn son hidrógeno.

En otra realización preferida, es hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH, preferiblemente el grupo arilo es un grupo fenilo o bencilo opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH.

En otra realización preferida, n es 0 y/o m es 0. En otra realización preferida, X es CH 2 y en otra realización preferida X es NR 12 , preferiblemente R 12 es hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH, más preferiblemente R 12 es hidrógeno. Más preferiblemente, el compuesto de fórmula (I) se selecciona de entre:

A/-(2,4-Dihidroxifenil)-2-(2',5'-dihidroxifenil)acetamida,

2-(2',4'-Dihidroxifenil)-/V-(2,5-dihidroxifenil)acetamida,

2-(2',5'-Dihidroxifenil)-/V-(4-hidroxifenil)acetamida,

A/-(2,5-Dihidroxifenil)-2-(2',5'-dihidroxifenil)acetamida,

A/-(2,4-Dihidroxifenil)-2-(2',4'-dihidroxifenil)acetamida ,

2-(2',5'-Dihidroxifenil)-/V-(3,4-dihidroxifenil)acetamida,

2-(3',4'-Dihidroxifenil)-/V-(4-hidroxifenil)acetamida,

2-(2',4'-Dihidroxifenil)-/V-(4-hidroxifenil)acetamida,

2-(2',5'-Dihidroxifenil)-/\/,A/-bis(4-hidroxifenil)acetamida ,

/\/-(2',5'-dihidroxibencil)-2-(2",5"-dihidroxifenil)-/\/- (4-Hidroxifenil)acetamida,

A/-(2,4-Dihidroxifenil)-/\/'-(2',5'-dihidroxifenil)urea,

A/-(2,5-Dihidroxifenil)-/\/-(4'-hidroxifenil)urea,

A/-(2,5-Dihidroxifenil)- A/-(3',4'-dihidroxifenil)urea,

A/-(3,4-Dihidroxifenil)-/\/-(4'-hidroxifenil)urea,

A/,A/-bis(4-Hidroxifenil)urea,

A/,A/-bis(2,5-Dihidroxifenil)urea,

A/,A/-bis(4-Hidroxifenil)-N'-(4-hidroxifenil)urea y

A/-(2',5'-Dihidroxibencil)- A/'-(2",5"-dihidroxifenil)-A/-(4-hidroxifenil)urea.

Teniendo en cuenta la actividad antioxidante de los compuestos de la invención, en una realización preferida, la invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I), según se ha definido anteriormente o cualquiera de sus sales, como conservantes o aditivos para la fabricación de composiciones en cualquier industria, como por ejemplo para la industria cosmética, farmacéutica, alimentaria o química. Estas composiciones pueden comprender los compuestos de fórmula (I) incorporados en sistemas de liberación sostenida.

Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula general (I) descrito anteriormente como complemento alimenticio.

Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso cosmético de un compuesto de fórmula general (I) descrito anteriormente contra el envejecimiento de la piel. Otro aspecto más de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula general (I) descrito anteriormente para la elaboración de un medicamento, más preferiblemente para la prevención o el tratamiento de enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo, seleccionadas de entre enfermedades cardiovasculares (como por ejemplo y sin limitarse a hipertensión), síndrome metabólico (como por ejemplo y sin limitarse a obesidad o diabetes), inflamación, enfermedades neurodegenerativas y cáncer.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (II) o cualquiera de sus sales

(II)

donde:

R representa hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido;

R 2 a R 5 y R 7 a R 10 representan de manera independientemente hidrógeno, -OH, -Oalquilo (C C 4 ) o alquilo (C C 4 );

m es 0 o 1 ;, preferiblemente m es 0;

con la condición de que al menos tres radicales seleccionados de R 2 a R 5 y R 7 a R 10 son un grupo -OH,

y con la condición de que los siguientes compuestos:

N-(2,5-Dihidroxifenil)-2-(2',5'-dihidroxifenil)acetamida,

N-(2,5-Dihidroxifenil)-3-(2',5'-dihidroxifenil)propanamida,

N-(3,4-Dihidroxifenil)-2-(3',4'-dihidroxifenil)acetamida,

N-(3,4-Dihidroxifenil)-3-(3',4'-dihidroxifenil)propanamida, y

N-(4-hidroxi-3,5-dimetilfenil)-3-(3',4'-dihidroxifenil)propa namida,

están excluidos.

En una realización preferida de los compuestos de fórmula general (II), R 2 a R 5 y R 7 a R 10 representan de manera independientemente hidrógeno, -OH o -Oalquilo (C C 4 ), más preferiblemente R 2 a R 5 y R 7 a R 10 representan de manera independientemente hidrógeno, -OH o -OCH 3 .

En otra realización preferida de los compuestos de fórmula general (II), es hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH, y más preferiblemente el grupo arilo es un grupo fenilo o bencilo opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH.

En otra realización preferida, los compuestos de fórmula (II) se seleccionan de entre: A/-(2,4-Dihidroxifenil)-2-(2',5'-dihidroxifenil)acetamida,

2-(2',4'-Dihidroxifenil)-/V-(2,5-dihidroxifenil)acetamida,

2-(2',5'-Dihidroxifenil)-/V-(4-hidroxifenil)acetamida,

A/-(2,4-Dihidroxifenil)-2-(2',4'-dihidroxifenil)acetamida,

2-(2',5'-Dihidroxifenil)-/V-(3,4-dihidroxifenil)acetamida,

2-(3',4'-Dihidroxifenil)-/V-(4-hidroxifenil)acetamida,

2-(2',4'-Dihidroxifenil)-/V-(4-hidroxifenil)acetamida,

2-(2',5'-Dihidroxifenil)-/\/,A/-bis(4-hidroxifenil)acetamida y

A/-(2',5'-dihidroxibencil)-2-(2",5"-dihidroxifenil)-/\/-(4-H idroxifenil)acetamida.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (III) o cualquiera de sus sales

(III)

donde:

y R 12 representa hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido;

R 2 a R 5 y R 7 a R 10 representan de manera independientemente hidrógeno, -OH,

-Oalquilo (C C 4 ) o alquilo (C C 4 );

con la condición de que al menos tres radicales seleccionados de R 2 a R 5 y R 7 a R 10 son un grupo -OH,

y con la condición de que los siguientes compuestos:

A/-(2,4-Dihidroxifenil)-N'-(4'-hidroxifenil)urea,

A/,A/-bis(2,3-Dihidroxifenil)urea y A/,A/-bis(3,4-Dihidroxifenil)urea,

están excluidos.

En una realización preferida del compuesto de fórmula general (III), R 2 a R 5 y R 7 a R 10 representan de manera independientemente hidrógeno, -OH o -Oalquilo (C C 4 ), más preferiblemente R 2 a R 5 y R 7 a R 10 representan de manera independientemente hidrógeno, -OH o -OCH 3 .

En otra realización preferida del compuesto de fórmula general (III), R^ y/o R 12 es hidrógeno o arilo, opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH. En otra realización preferida, R^ y R 12 son hidrógeno. En otra realización más, R^ es arilo opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH y R 12 es hidrógeno. Preferiblemente el grupo arilo es un grupo fenilo o bencilo opcionalmente sustituido por al menos un grupo -OH.

En otra realización preferida el compuesto de fórmula general (III) se selecciona de entre:

A/-(2,4-Dihidroxifenil)-/\/-(2',5'-dihidroxifenil)urea,

A/-(2,5-Dihidroxifenil)-/\/-(4'-hidroxifenil)urea,

A/-(2,5-Dihidroxifenil)- A/-(3',4'-dihidroxifenil)urea,

A/-(3,4-Dihidroxifenil)-/\/-(4'-hidroxifenil)urea,

A/,A/-bis(2,5-Dihidroxifenil)urea,

A/,A/-bis(4-Hidroxifenil)-N'-(4-hidroxifenil)urea y

A/-(2',5'-Dihidroxibencil)- A/'-(2",5"-dihidroxifenil)-A/-(4-hidroxifenil)urea.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a una composición que comprende al menos un compuesto de fórmula (II) o de fórmula (III) según se han descrito anteriormente. La composición de la presente invención puede ser una composición farmacéutica, cosmética, química (por ejemplo composiciones poliméricas, cauchos, lubricantes o combustibles) o alimentaria.

En una realización particular la composición es una composición farmacéutica que además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable. El término "vehículo" se refiere a un diluyente, adyuvante o excipiente con el que se administra el principio activo. Tales vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, tales como agua y aceites, incluyendo aquellos de origen del petróleo, animal, vegetal o sintético, tales como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. Se emplean preferiblemente como vehículos agua o disoluciones acuosas de solución salina y disoluciones acuosas de dextrosa y glicerol, particularmente para las disoluciones inyectables.

Los compuestos de la invención, de fórmula (II) o de fórmula (III), también se pueden incorporar en sistemas de liberación sostenida, preferiblemente farmacéuticos o cosméticos.

El término "liberación sostenida" se utiliza en sentido convencional refiriéndose a un sistema de vehiculización de un compuesto que proporciona la liberación gradual de dicho compuesto durante un período de tiempo y preferiblemente, aunque no necesariamente, con niveles de liberación del compuesto relativamente constantes a lo largo de un período de tiempo. Ejemplos de sistemas de vehiculización o de liberación sostenida incluyen, sin sentido limitativo, liposomas, liposomas mixtos, oleosomas, niosomas, etosomas, milipartículas, mi ero partículas, nanopartículas y nanopartículas sólidas lipídicas, soportes lipidíeos nanoestructurados, esponjas, ciclodextrinas, vesículas, micelas, micelas mixtas de tensioactivos, micelas mixtas fosfolípido-tensioactivo, miliesferas, microesferas y nanoesferas, lipoesferas, milicápsulas, microcápsulas y nanocápsulas, así como en microemulsiones y nanoemulsiones, los cuales se pueden añadir para conseguir una mayor penetración del principio activo y/o mejorar sus propiedades, en particular sus propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas del mismo. Sistemas de vehiculización o de liberación sostenida preferidos son liposomas, micelas mixtas fosfolípido tesioactivo y microemulsiones, más preferentemente microemulsiones de agua en aceite con estructura interna de micela inversa.

Los sistemas de liberación sostenida pueden prepararse mediante los métodos conocidos en el estado de la técnica, y las composiciones que los contienen pueden administrarse, por ejemplo, por administración oral, tópica o transdérmica, incluyendo los parches adhesivos, los parches no adhesivos, parches oclusivos y los parches microeléctricos. Los compuestos de la presente invención también pueden adsorberse sobre polímeros orgánicos sólidos o soportes minerales sólidos como por ejemplo y sin sentido limitativo talco, bentonita, sílice, almidón o maltodextrina entre otros. Las composiciones que contienen los compuestos de la invención también pueden incorporarse a tejidos, tejidos-no-tejidos (non-woven) y productos sanitarios que estén en contacto directo con la piel, de modo que liberen los compuestos de la invención bien por biodegradación del sistema de anclaje al tejido, tejido-no-tejido o producto sanitario o bien por la fricción de estos con el cuerpo, por la humedad corporal, por el pH de la piel o por la temperatura corporal. Asimismo, los tejidos y los tejidos-no- tejidos pueden emplearse para la confección de prendas que estén en contacto directo con el cuerpo. Ejemplos de tejidos, tejidos-no-tejidos, prendas, productos sanitarios y medios de inmovilización de los compuestos a ellos, entre los que se encuentran los sistemas de vehiculización y/o los sistemas de liberación sostenida descritos anteriormente, pueden encontrarse descritos en la literatura y son conocidos en el estado de la técnica [Schaab C.K. (1986) HAPPI May 1986; Nelson G. (2002) Int. J. Pharm. 242: 55-62; "Biofunctional Textiles and the Skin" (2006) Curr. Probl. Dermatol. v.33, Hipler U.C. y Elsner P., eds. S. Karger AG, Basel, Switzerland; Malcom R.K. et al. (2004) J. Cont. Reléase 97: 313-320]. Tejidos, tejidos-no-tejidos, prendas y productos sanitarios preferidos son vendas, gasas, camisetas, calcetines, medias, ropa interior, fajas, guantes, pañales, compresas, apositos, cubrecamas, toallitas, parches adhesivos, parches no adhesivos, parches oclusivos, parches microeléctricos y/o mascarillas faciales. Los compuestos y composiciones farmacéuticas de esta invención pueden ser empleados solos o junto con otros fármacos o principios activos para proporcionar una terapia combinada. Los otros fármacos o principios activos pueden formar parte de la misma composición farmacéutica, o ser proporcionados como una composición farmacéutica separada, para su administración al mismo tiempo o en un momento diferente. Ejemplos de composiciones farmacéuticas incluyen cualquier composición sólida (comprimidos, pildoras, cápsulas, gránulos, etc.) o líquida (disoluciones, suspensiones o emulsiones) para la administración oral, tópica o parenteral. Para uso farmacéutico, alimentario o cosmético, las sales mencionadas anteriormente serán sales fisiológica y farmacéuticamente, alimentariamente o cosméticamente aceptables. A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.

EJEMPLOS

A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que ponen de manifiesto la efectividad del producto de la invención.

Síntesis de los compuestos 1 a 10

22-31

1 -10

Esquema 1

Los derivados de amida 22-31 se prepararon mediante reacción de la anilina convenientemente sustituida con el correspondiente ácido fenilacético en DCM, utilizando como agentes de acoplamiento clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC HCI) y 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), en presencia de N,N- diisopropiletilamina (DIEA) como base (Esquema 1) y según el siguiente procedimiento:

Procedimiento General A. Preparación de amidas metoxiladas. A una disolución de la anilina o benzilamina convenientemente sustituida (1 ,52 mmol) en CH 2 CI 2 (15 ml_), se le añade el correspondiente ácido fenilacético (1 ,52 mmol), HOBt (0,22 g, 1 ,68 mmoles), DIEA (0, 198 g, 1 ,52 mmoles). La disolución se enfría en un baño de hielo, y se le añade EDC HCI (0,35 g, 1 ,83 mmoles). Se mantiene el baño de hielo durante 2 horas y después se deja que alcance temperatura ambiente. Tras 12 horas de agitación a temperatura ambiente se realizan extracciones con ácido cítrico 10% y NaC0 3 H 10%. La fase orgánica se lava con agua y disolución saturada de NaCI. Se seca sobre MgS0 4 y se evapora el disolvente a sequedad. El residuo resultante se cristaliza de MeOH.

El tratamiento posterior con BBr 3 condujo a las correspondientes amidas hidroxiladas, compuestos 1 a 10 mediante el siguiente procedimiento:

Procedimiento General B. Desprotección de grupos metoxilo. A una disolución del correspondiente producto metoxi sustituido (1 equivalente) en CH 2 CI 2 seco, previamente enfriada a 0 °C, y bajo atmósfera de argón, se adiciona lentamente una disolución 1 M de BBr 3 en CH 2 CI 2 (2 equivalentes por heteroátomo). La mezcla de reacción se mantiene con agitación a temperatura ambiente hasta total desprotección de los grupos metoxilo (HPLC-MS). A continuación se añade H 2 0 y CH 2 CI 2 y el precipitado formado se separa por filtración y se lava con H 2 0 y CH 2 CI 2 . Si no precipita, se añade AcOEt, se separan las fases y se seca sobre Na 2 S0 4 . Cuando la pureza no es lo suficientemente alta, se purifica en columna de cromatografía.

Los análisis de HPLC-MS para todos los compuestos se realizaron en un equipo Waters 2695, con una columna de fase reversa Sunfire C18 (4,6 χ 50 mm, 3,5 μηι) y conectado a un espectrómetro Waters Micromass ZQ. El flujo utilizado fue de 1 mL/min y como eluyentes se utilizaron mezclas de disolución al 0,1 % de HCOOH en CH 3 CN (A) y disolución al 0,1 % de HCOOH en H 2 0 (B).

EJEMPLO 1

N-(2,4-Dimetoxifenil)-2-(2',5'-dimetoxifenil)acetamida (22)

Procedimiento General A. Sólido cristalino gris. Rdto. 81 %. (P.f.: 103-105°C, MeOH). HPLC (Sunfire): t R = 8.93 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-de) δ: 3.60 (s, 2H, CH 2 ), 3.70 (s, 3H, OMe), 3.72 (s, 3H, OMe), 3.77 (s, 3H, OMe), 3.80 (s, 3H, OMe), 6.46 (dd, 1 H, J = 8.8, 2.6 Hz, 4'-H), 6.60 (d, 1 H, J = 2.6 Hz, 6'-H), 6.81 (dd, 1 H, J = 8.9, 3.0 Hz, 5-H), 6.87 (d, 1 H, J = 3.0 Hz, 3-H), 6.93 (d, 1 H, J = 8.9 Hz, 6-H), 7.80 (d, 1 H, J = 8.8 Hz, 3'-H), 8.84 (s, 1 H, NH) ppm. 13 C-RMN (100 MHz, DMSO-de) δ: 38.3 (CH 2 ), 55.3 (OMe), 55.4 (OMe), 55.8 (OMe), 55.9 (OMe), 98.7 (C-3), 104.0 (C-5), 1 11.7 (C-3'), 1 12.3 (C-4'), 1 16.9 (C-6'), 120.7 (C-6), 122.1 (C- 1), 125.1 (C-1 '), 150.4 (C), 151.1 (C), 153.0 (C), 156.3 (C), 168.4 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 332.4 (M+H) + , 354.5 (M+Na) + .

-(2,4-Dihidroxifenil)-2-(2',5'-dihidroxifenil)acetamida (1)

Procedimiento General B. Sólido rojizo. Rdto. 41 %. Precipitado con Et 2 0. (P.f.:178- 180°C). HPLC: t R = 6.06 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (300 MHz, DMSO-de) δ: 3.51 (s, 2H, CH 2 ), 6.15 (dd, 1 H, J = 8.6, 2.5 Hz, 4'-H), 6.29 (d, 1 H, J = 2.6 Hz, 6'-H), 6.48 (dd, 1 H, J = 8.5, 2.9 Hz, 5-H), 6.59 (d, 1 H, J = 2.9 Hz, 3-H), 6.63 (d, 1 H, J = 8.5 Hz, 6-H), 7.47 (d, 1 H, J = 8.6 Hz, 3'-H), 8.67 (s, 1 H, NH), 9.01 (s, 1 H, OH), 9.03 (s, 1 H, OH), 9.08 (s, 1 H, OH), 9.64 (s, 1 H, OH) ppm. 13 C-NMR (75 MHz, DMSO-de) δ: 38.2 (CH 2 ), 102.9 (C-3), 105.6 (C-5), 1 14.2 (C-6'), 115.8 (C-4'), 1 17.2 (C- 1), 1 18.3 (C-3'), 122.5 (C-1 '), 122.8 (C-6), 147.7 (C), 148.7 (C), 149.8 (C), 154.5 (C), 169.5 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 276.4 (M+H) + .

EJEMPLO 2

-(2',4'-Dimetoxifenil)-N-(2,5-dimetoxifenil)acetamida (23)

Procedimiento General A. Sólido cristalino gris. Rdto. 77%. (P.f.: 117-119°C, MeOH). HPLC: t R = 9.48 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (300 MHz, DMSO-de) δ: 3.58 (s, 2H, CH 2 ), 3.65 (s, 3H, OMe), 3.76 (s, 6H, OMe), 3.82 (s, 3H, OMe), 6.51 (dd, 1 H, J = 8.3, 2.4 Hz, 4'-H), 6.57 (dd, 1 H, J = 8.9, 3.0 Hz, 5-H), 6.60 (d, 1 H, J = 2.4 Hz, 6'-H), 6.92 (d, 1 H, J = 8.9 Hz, 6-H), 7.14 (d, 1 H, J = 8.3 Hz, 3'-H), 7.78 (d, 1 H, J = 3.0 Hz, 3-H), 8.81 (s, 1 H, NH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 38.2 (CH 2 ), 55.2 (OMe), 55.3 (OMe), 55.6 (OMe), 56.3 (OMe), 98.4 (C-3), 104.8 (C-5), 106.6 (C-1), 107.3 (C-6'), 1 11.6 (C-4'), 1 15.8 (C-5'), 128.4 (C-1 '), 131.3 (C-6), 142.4 (C), 153.0 (C), 157.6 (C), 159.8 (C), 169.4 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 332.4 (M+H) + , 354.5 (M+Na) + .

2-( ',4'-Dihidroxifenil)-N-(2,5-dihidroxifenil)acetamida (2)

Procedimiento General B. Sólido rojizo. Rdto. 44%. Precipitado con Et 2 0. (P.f.:77- 79°C). HPLC: t R = 2.50 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (300 MHz, DMSO-de) δ: 1.91 (s, 2H, CH 2 ), 6.19 (dd, 1 H, J = 8.2, 2.3 Hz, 4'-H), 6.27 (dd, 1 H, J = 8.5, 2.9 Hz, 5-H), 6.33 (d, 1 H, J = 2.3 Hz, 6'-H), 6.58 (d, 1 H, J = 8.5 Hz, 6- H), 6.93 (d, 1 H, J = 8.2 Hz, 3'-H), 7.49, (d, 1 H, J = 2.9 Hz, 3-H), 8.70 (s a , 1 H, OH), 8.78 (s, 1 H, NH) 9.03 (s a , 1 H, OH), 9.19 (s a , 1 H, OH), 9.61 (s a , 1 H, OH) ppm. 13 C-NMR (75 MHz, DMSO-de) δ: 38.3 (CH 2 ), 102.9 (C-3), 106.4 (C-6'), 107.3 (C-5), 109.8 (C-1), 1 12.4 (C-4'), 1 15.4 (C-3'), 127.1 (C-1 '), 131.4 (C-6), 138.8 (C), 149.8 (C), 156.0 (C), 157.5 (C), 170.0 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 276.4 (M+H) + .

EJEMPLO 3

-(2',5'-Dimetoxifenil)-N-(4-metoxifenil)acetamida (24)

Procedimiento General A. Sólido cristalino blanco. Rdto. 50%. (P.f.:145-146°C, MeOH). HPLC: t R = 4.29 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 5 min). 1 H-RMN (300 MHz, CDCI 3 ) δ: 3.70 (s, 2H, CH 2 ), 3.79 (s, 3H, OMe), 3.80 (s, 3H, OMe), 3.91 (s, 3H, OMe), 6.85 (m, 3H, 3,4, 4'-H), 6.91 (m, 2H, 3-H, 5-H), 7.37 (d, 2H, J = 8.6 Hz, 2- H.6-H), 7.76 (s a , 1 H, NH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, CDCI 3 ) δ: 40.2 (CH 2 ), 55.5 (OMe), 55.8 (OMe), 56.2 (OMe), 1 12.1 (C-2'), 1 13.6 (C-4'), 1 14.1 (C-3, C-5), 1 17.1 (C-6'), 121.6 (C-2, C-6), 124.2 (C-1 '), 131.4 (C-1), 151.2 (C), 154.0 (C), 156.3 (C), 169.6 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 302.28 (M+H) + .

-(2',5'-Dihidroxifenil)-N-(4-hidroxifenil)acetamida (3)

Procedimiento General B. Sólido blanco liofilizado. Purificado en columna, AcOEt-Hex (1 :2 a 3: 1). Rdto. 79%. (P.f.:185-187°C d ). HPLC: t R = 2.17 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 5 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 3.46 (s, 2H, CH 2 ), 6.45 (dd, 1 H, J = 8.3, 2.9 Hz, 4'-H), 6.58 (d, 1 H, J = 2.8 Hz, 6'-H), 6.59 (d, 1 H, J = 8.6 Hz, 3'-H), 6.68 (d, 2H, J = 8.8 Hz, 3-H.5-H), 7.37 (d, 1 H, J = 8.6 Hz, 2-H.6-H), 8.63 (s a , 1 H, OH), 8.84 (s a , 1 H, OH), 9.16 (s a , 1 H.NH), 9.80 (s, 1 H.OH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 38.0 (CH 2 ), 1 13.9 (C-4'), 1 15.0 (C-3,C-5), 1 15.6 (C-3'), 1 17.1 (C-6'), 120.9 (C-2, C-6), 123.2 (C-1 '), 130.9 (C-1), 147.7 (C), 149.7 (C), 153.24 (C), 169.0 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 260.33 (M+H) + .

EJEMPLO 4

N-(2,5-Dimetoxifenil)-2-(2',5'-dimetoxifenil)acetamida (25)

Procedimiento General A. Sólido cristalino blanco. Rdto. 65%. (P.f.:109-11 1°C, MeOH). HPLC: t R = 4.82 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 5 min). 1 H-RMN (300 MHz, CDCI 3 ) δ: 3.74 (s, 2H, CH 2 ), 3.79 (s, 6H, OMe), 3.80 (s, 3H, OMe), 3.92 (s, 3H, OMe), 6.55 (dd, 1 H, J = 8.3, 3.1 Hz, 4-H), 6.77 (d, 1 H, J = 8.9 Hz, 3'-H), 6.88 (M, 3H, 3,4',6'-H), 8.15 (d, 1 H, J = 3.1 Hz, 6-H), 8.55 (s a , 1 H, NH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, CDCI 3 ) δ: 40.8 (CH 2 ), 55.9 (OMe), 56.9 (OMe), 56.5 (OMe), 105.8 (C-6), 108.4 (C-3 ), 1 11.0 (C-4), 1 11.5 (C-3'), 1 13.6 (C-4'), 1 17.0 (C-6'), 124.4 (C-1 '), 128.9 (C-1), 142.1 (C), 151.1 (C), 153.9 (C), 154.0 (C), 169.3 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 332.35 (M+H) + . N-(2,5-Dihidroxifenil)-2-(2',5'-dihidroxifenil)acetamida (4) OH OH

OH OH

Procedimiento General B. Sólido liofilizado rosáceo. Purificado en columna, AcOEt- Hex (1 : 1 a 4: 1). Rdto. 79%. (P.f.:204-207°C d ). HPLC: t R = 2.24 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 5 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 3.53 (s, 2H, CH 2 ), 6.28 (dd, 1 H, J = 8.6, 2.9 Hz, 4-H), 6.49 (dd, 1 H, J = 8.6, 2.9 Hz, 4'-H), 6.60 (m, 2H, 3'-H,6'-H), 8.65 (d, 1 H, J = 8.6 Hz, 3-H), 7.48 (d, 1 H, J = 2.9 Hz, 6-H), 8.71 (s, 1 H, OH), 8.73 (s, 1 H, OH), 8.95 (s, 1 H, NH), 0.03 (s, 1 H, OH), 9.07 (s a , 1 H, OH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 39.8 (CH 2 ), 107.6 (C-6), 1 10.0 (C-3), 1 14.4 (C-4), 1 15.5 (C-4'), 1 15.7 (C-3'), 1 17.2 (C-6'), 122.5 (C-1 '), 127.0 (C-1), 138.3 (C), 147.6 (C), 149.8 (C), 149.8 (C), 169.5 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 276.27 (M+H) + .

EJEMPLO 5

N- 2,4-Dimetoxifenil)-2-(2',4'-dimetoxifenil)acetamida (26)

Procedimiento General A. Sólido cristalino pardo. Crudo purificado en columna de cromatografía, EtOAc-Hex (1 :3 a 2: 1). Rdto. 74%. (P.f.: 125-126°C, MeOH). HPLC: t R = 4.70 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 5 min). 1 H-RMN (300 MHz, CDCI 3 ) δ: 3.62 (s, 2H, CH 2 ), 3.76 (s, 6H, OMe), 3.80 (s, 3H, OMe), 3.87 (s, 3H, OMe), 6.35-6.56 (m, 4H, 3-,5-,3-',5'-H), 7.24 (d, 1 H, J = 7.9 Hz, 6'-H), 8.1 1 (s a , 1 H, NH), 8.22 (d, 1 H, J = 8.3 Hz, 6-H) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, CDCI 3 ) δ: 39.6 (CH 2 ), 55.5 (OMe), 55.5 (OMe), 55.6 (OMe), 55.8 (OMe), 98.7 (C-3), 98.8 (C-3'), 103.8 (C-5'), 104.7 (C-5), 1 16.2 (C-6), 120.4 (C6'), 121.8 (C-1 '), 131.7 (C-1), 149.2 (C), 156.1 (C), 158.0 (C), 160.5 (C), 169.5 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 331.93 (M+H) + .

N-(2,4-Dihidroxifenil)-2-(2',4'-dihidroxifenil)acetamida (5) Procedimiento General B. Sólido blanco liofilizado. Purificado en columna, AcOEt-Hex (1 : 1 a 4: 1). Rdto. 94%. (P.f.:75-78 °C d , MeOH). HPLC: t R = 2.24 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 5 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 3.43 (s, 2H, CH 2 ), 6.13 (dd, 1 H, J = 8.7, 2.6, 4'-H), 6.16 (dd, 1 H, J = 8.1 , 2.4, 4-H), 6.25 (d, 1 H, J = 2.6 Hz, 6'-H), 6.29 (d, 1 H, J = 2.4 Hz, 6-H), 6.90 (d, 1 H, J = 8.2 Hz, 3'-H), 7.48 (d, 1 H, J = 8.7 Hz, 3- H), 8.84 (s a , 1 H, NH), 9.12 (s a , 2H, OH), 9.51 (s a , 2H, OH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 37.8 (CH 2 ), 102.6 (C-3'), 102.9 (C-3), 105. 7 (C-5), 106.4 (C-5'), 1 12.7 (C-6), 1 18.5 (C6'), 122.2 (C-1 '), 131.3 (C-1), 148.4 (C), 154.4 (C), 156.1 (C), 157.4 (C), 170.0 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 276.34 (M+H) + .

EJEMPLO 6

2-(2',5'-Dimetoxifenil)-N-(3,4-dimetoxifenil)acetamida (27)

Procedimiento General A. Sólido cristalino blanco. Rdto. 73.5%. (P.f.: 140-142°C, MeOH). HPLC (Sunfire): t R = 4.09 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 5 min). 1 H- RMN (300 MHz, CDCI 3 ) δ: 3.71 (s, 2H, CH 2 ), 3.76 (s, 3H, OMe), 3.82 (s, 3H, OMe), 3.84 (s, 3H, OMe), 3.87 (s, 3H, OMe), 6.70-7.34 (m, 6H, Ar-H), 7.71 (s a , 1 H, NH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, CDCI3) δ: 40.3 (CH 2 ), 55.8 (OMe), 56.0 (OMe), 56.2 (OMe), 105.0 (C-2), 1 11.4 (C-5), 1 11.6 (C-3'), 1 12.1 (C-4'), 1 13.6 (C-6), 1 17.2 (C6'), 124.5 (C-1'), 132.0 (C-1), 145.8 (C), 149.1 (C), 151.2 (C), 154.1 (C), 169.2 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 332.28 (M+H) + .

-(2',5'-Dihidroxifenil)-N-(3,4-dihidroxifenil)acetamida (6)

Procedimiento General B. Columna, gradiente de 50 a 65% de AcOEt en hexano. Sólido rosáceo liofilizado. Rdto. 56%. (P.f.: 180°C d ). HPLC: t R = 4.02 min (gradiente de 2 a 95% de A en B en 5 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 3.34 (s, 2H, CH 2 ), 6.45 (dd, 1 H, J = 8.5, 2.9, 5'-H), 6.57 (d, 1 H, J = 2.9, 6'-H), 6.59 (d, 1 H, J = 8.5 Hz, 5-H), 6.62 (d, 1 H, J = 8.5 Hz, 4'-H), 6.79 (dd, 1 H, J = 8.5, 2.4 Hz, 6-H), 7.14 (d, 1 H, J = 2.4 Hz, 2-H), 8.57 (s, 1 H, OH), 8.62 (s, 1 H, OH), 8.85 (s, 1 H, NH), 8.92 (s, 1 H, OH), 9.69 (s, 1 H, OH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 38.2 (CH 2 ), 107.9 (C-2), 1 10.4 (C- 6), 1 13.9 (C-4'), 115.2 (C-5), 1 15.6 (C-3'), 1 17.1 (C6'), 123.2 (C-1 '), 131.3 (C-1), 141.2 (C), 144.9 (C), 147.7 (C), 149.7 (C), 169.0 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 276.27 (M+H) + .

EJEMPLO 7

2-(3',4'-Dimetoxifenil)-N-(4-metoxifenil)acetamida (28)

Procedimiento General A. Sólido cristalino blanco. Rdto. 81 %. (P.f.:143-146°C, MeOH). HPLC (Sunfire): t R = 3.90 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 5 min). 1 H- RMN (400 MHz, CDCI 3 ) δ: 3.66 (s, 2H, CH 2 ), 3.77 (s, 3H, OMe), 3.89 (s, 3H, OMe), 3.90 (s, 3H, OMe), 6.28 (d, 2H, J = 8.9 Hz, 3-H, 5-H), 6.83-6.90 (m, 3H, 2'-H, 5'-H, 6'- H), 7.04 (s a , 1 H, NH), 7.31 (d, 2H, J = 8.9 Hz, 2-H, 6-H) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, CDCI3) δ: 44.3 (CH 2 ), 55.5 (OMe), 56.0 (OMe), 1 11.8 (C-2'), 1 12.7 (C-5'), 1 14.2 (C-3, C-5), 121.8 (C-2, C-6, C6'), 127.2 (C-1 '), 130.9 (C-1), 148.6 (C), 149.5(C), 156.6 (C), 169.4 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 302.21 (M+H) + .

2-(3',4'-Dihidroxifenil)-N-(4-hidroxifenil)acetamida (7)

Procedimiento General B. Columna, gradiente de 50 a 75% de AcOEt en hexano. Sólido blanco. Rdto. 75%. (P.f.: 192-194°C). HPLC: t R = 2.09 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 5 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 3.36 (s, 2H, CH 2 ), 6.54 (dd, 1 H, J = 8.0, 2.1 , 6'-H), 6.64 (d, 1 H, J = 8.0, 3'-H), 6.66 (d, 2H, J = 8.9 Hz, 3-H, 5-H), 6.72 (d, 1 H, J = 2.1 Hz, 2'-H), 7.35 (d, 2H, J = 8.9 Hz, 2-H, 6-H), 8.70 (s, 1 H, OH), 8.81 (s a , 1 H, OH), 9.14 (s, 1 H, NH), 9.76 (s a , 1 H, OH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 43.0 (CH 2 ), 1 15.3 (C-3, C-5), 1 15.6 (C-2'), 1 16.6 (C-5'), 120.0 (C-6'), 121.1 (C-2, C- 6), 127.3 (C-1 '), 131.3 (C-1), 144.2 (C), 145.3 (C), 153.5 (C), 169.2 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 260.33 (M+H) + . EJEMPLO 8

2-(2',4'-Dimetoxifenil)-N-(4-metoxifenil)acetamida (29) Procedimiento General A. Sólido cristalino blanco. Rdto. 76%. (P.f.:126-128°C, MeOH). HPLC (Sunfire): t R = 4.35 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 5 min). 1 H- RMN (400 MHz, CDCI 3 ) δ: 3.62 (s, 2H, CH 2 ), 3.76 (s, 3H, OMe), 3.82 (s, 3H, OMe), 3.88 (s, 3H, OMe), 6.51 (m, 2H, 4'-H, 5'-H), 6.80 (d, 2H, J= 8.9 Hz, 3-H, 5-H), 7.19 (d, 1 H, J = 8.0 Hz, 3'-H), 7.32 (d, 2H, J = 8.9 Hz, 2-H, 6-H), 7.43 (s a , 1 H, NH) ppm. 13 C- NMR: (75 MHz, CDCI3) δ: 39.2 (CH 2 ), 55.5 (OMe), 55.6 (OMe), 55.7 (OMe), 99.1 (C- 3'), 105.2 (C-5'), 1 14.1 (C-3, C-5), 1 15.9 (C-1 '), 121.6 (C-2, C-6), 131.4 (C-1), 131.8 (C-6'), 156.3 (C), 158.2 (C), 160.7 (C), 169.7 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 302.35 (M+H) + . -(2',4'-Dihidroxifenil)-N-(4-hidroxifenil)acetamida (8)

Procedimiento General B. Columna, gradiente de 25 a 65% de AcOEt en hexano. Sólido blanco. Rdto. 80%. Precipitado con Et 2 0. (P.f.: 186-189°C). HPLC: t R = 2.43 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 5 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 3.45 (s, 2H, CH 2 ), 6.17 (dd, 1 H, J = 8.2, 2.4, 5'-H), 6.27 (d, 1 H, J = 2.4, 3'-H), 6.67 (d, 2H, J = 8.8 Hz, 3-H, 5-H), 6.88 (d, 1 H, J = 8.2 Hz, 6'-H), 7.36 (d, 2H, J = 8.8 Hz, 2-H, 6-H), 9.07 (s, 1 H, NH), 9.14 (s, 1 H, OH), 9.39 (s a , 1 H, OH), 9.69 (s a , 1 H, OH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 37.4 (CH 2 ), 102.5 (C-3), 106.1 (C-5'), 1 13.1 (C-1 '), 115.0 (C-3, C-5), 120.9 (C-2, C-6), 131.0 (C-1), 131.1 (C-6'), 153.2 (C), 156.1 (C), 157.1 (C), 169.6 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 260.33 (M+H) + . EJEMPLO 9

2-(2',5'-Dimetoxifenil)-N,N-bis(4-metoxifenil)acetamida (30)

Procedimiento General A. Simpe transparente. Rdto. 28%. HPLC (Sunfire): t R = 7.62 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (300 MHz, CDCI 3 ) δ: 3.42 (s, 2H, CH 2 ), 3.67 (s, 3H, OMe), 3.68 (s, 3H, OMe), 3.73 (s, 6H, OMe), 6.72-7.30 (m, 1 1 H, Ar-H) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, CDCI3) δ: 37.0 (CH 2 ), 55.6 (OMe), 55.7 (OMe), 55.9 (OMe), 56.0 (OMe), 1 1.3 (C-2'), 1 12.7 (C-4'), 1 14.2 (C-3, C-5), 1 14.8 (C3",C5"), 1 16.8 (C-6'), 125.7 (C1 '), 127.4 (C-2, C-6), 129.8 (C2",C6"), 136.4 (C-1 ', C1 "), 151.7 (C), 153.6 (C), 157.5 (C), 158.9 (C), 171.7 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 408.39 (M+H) + . 2- (2',5'-Dihidroxifenil)-N,N-bis(4-hidroxifenil)acetamida (9)

Procedimiento General B. Columna, gradiente de 35 a 65% de AcOEt en hexano. Sólido blanco liofilizado. Rdto. 72%. Precipitado con Et 2 0. (P.f.:124-126°C). HPLC: t R = 4.57 min (gradiente de 2 a 95% de A en B en 5min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 3.26 (s, 2H, CH 2 ), 6.34 (dd, 1 H, J = 8.5, 2.9, 4'-H), 6.27 (d, 1 H, J = 2.9, 6'-H), 6.43 (d, 1 H, J = 8.5 Hz, 3'-H), 6.62 (d, 2H, J = 8.1 Hz, 3-H, 5-H), 6.68 (d, 2H, J = 8.2 Hz, 3"-H, 5"-H), 6.98 (d, 2H, J = 8.2 Hz, 2"-H, 6"-H), 7.10 (d, 2H, J = 8.1 Hz, 2-H, 6-H), 8.51 (s, 1 H, OH), 8.57 (s, 1 H, OH), 9.33 (s a , 1 H, OH), 9.57 (s a , 1 H, OH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 35.7 (CH 2 ), 1 13.6 (C-3", C-5"), 1 15.2 (C-4'), 115.3 (C-3, C-5), 115.9 (C-3', C-6'), 1 17.2 (C-2", C-6"), 123.4 (C-2, C-6), 127.8 (C-1 '), 129.4 (C-1 "), 134.9 (C- 1), 147.6 (C), 149.5 (C), 155.4 (C), 156.6 (C), 170.9 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 352.29 (M+H) + .

EJEMPLO 10

N-(2S5'-Dimethoxibencil)-2-(2'S5''-dimetoxifenil)-N-(4-metox ifenil)acetamida (31 )

Procedimiento General A. Columna, gradiente de 15 a 25% de AcOEt en hexano. Cristalización de MeOH. Sólido cristalino blanco. Rdto. 74%. (P.f.:127-129°C, MeOH). HPLC (Sunfire): t R = 8.02 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (300 MHz, CDCI 3 ) δ: 3.35 (s, 2H, CH 2 ), 3.58 (s, 3H, OMe), 3.65 (s, 3H, OMe), 3.67 (s, 3H, OMe), 3.68 (s, 3H, OMe), 3.73 (s, 3H, OMe), 6.73-6.86 (m, 6H, Ar-H), 6.91 (d, 2H, J = 9.0 Hz, 3-H, 5-H), 7.13 (d, 2H, J = 8.9 Hz, 2-H, 6-H) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, CDCI3) δ: 36.0 (CH 2 ), 47.7 (N-CH 2 ), 55.5 (OMe), 55.8 (OMe), 55.85 (OMe), 55.9 (OMe), 56.0 (OMe), 1 11.2 (C-2"), 1 11.6 (C-2'), 1 12.5 (C-4"), 1 12.8 (C-4'), 1 14.2 (C-3, C-5), 1 15.9 (C-6"), 116.8 (C-6'), 126.0 (C-1 '), 127.2 (C-1 "), 129.5 (C-2, C-6), 135.8 (C- 1), 151.6 (C), 151.8 (C), 153.5 (C), 153.7 (C), 158.8 (C), 171.7 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 452.33 (M+H) + .

N- '-dihidroxibencil)-2-(2'S5 ,, -dihidroxifenil)-N-(4-Hidroxifeni

Procedimiento General B. Columna, gradiente de 35 a 65% de AcOEt en hexano. Sólido blanco. Rdto. 81 %. Precipitado con Et 2 0. (P.f.: 114-116°C). HPLC: t R = 4.64 min (gradiente de 2 a 95% de A en B en 5 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 3.25 (s, 2H, CH 2 ), 4.66 (s, 2H, N-CH 2 ), 6.41-6.46 (m, 3H, 4'-H, 4"-H, 6"-H), 6.49 (d, 1 H, J = 2.9, 6'-H), 6.52 (d, 1 H, J = 8.2 Hz, 3'-H), 6.54 (d, 1 H, J = 8.5 Hz, 3"-H), 6.74 (d, 2H, J = 8.7 Hz, 3-H, 5-H), 7.01 (d, 2H, J = 8.7 Hz, (d, 2H, J = 8.1 Hz, 2-H, 6-H), 8.56 (s, 1 H, OH), 8.60 (s, 1 H, OH), 8.68 (s, 1 H, OH), 8.73 (s a , 1 H, OH), 9.63 (s a , 1 H, OH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 35.0 (CH 2 ), 48.2 (N-CH 2 ), 1 13.8 (C-4"), 1 14.6 (C-6"), 1 15.4 (C- 3"), 1 15.8 (C-3, C-5), 1 15.9 (C-4'), 1 17.4 (C-3', C-6'), 123.1 (C-1 '), 123.7 (C-1 "), 129.1 (C-2, C-6), 133.7 (C-1), 147.4 (C), 147.7 (C), 149.5 (C), 149.6 (C), 156.7 (C), 171.7 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 382.29 (M+H) + . Síntesis de los compuestos 11 a 18:

32-39

BBr 3 /CH 2 CI 2 ta, Ar

11-18

Esquema 2 La síntesis de los derivados urea metoxilados 32-39 se llevó a cabo mediante reacción de las correspondientes metoxianilinas con los isocianatos metoxi-sustituidos apropiados en tetrahidrofurano (THF) a temperatura ambiente (t.a.) (Esquema 2) y según el siguiente procedimiento:

Procedimiento General C. Preparación de ureas metoxiladas. A una disolución de la anilina o benzilamina convenientemente sustituida (1 ,2 mmoles) en THF seco (20 ml_) se añade el correspondiente fenilisocianato (1 ,0 mmoles). Tras 15 horas de agitación a temperatura ambiente se evapora el THF y el residuo se trata con CH 2 CI 2 . La fase orgánica se lava con agua y disolución saturada de NaCI, se seca sobre MgS0 4 y el disolvente se evapora a sequedad. El residuo resultante se purifica mediante cromatografía en columna o cristalización.

El tratamiento posterior de los metoxiderivados anteriores con BBr 3 condujo a las ureas hidroxiladas 11 -18 según el procedimiento B (Procedimiento General B) descrito para la síntesis de los compuestos 1 a 10.

EJEMPLO 1 1

N-(2,4-Dimetoxifenil)-N'-(2 , ,5 , -dimetoxifenil)urea (32)

Procedimiento general C. Sólido blanco. Crudo purificado por cromatografía en columna, EtOAc-Hex (1:3 a 2:1). Rdto.55%. (P.f.:150-152°C, MeOH). HPLC: t R = 8.96 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 3.67 (s, 3H, OMe), 3.73 (s, 3H, OMe), 3.80 (s, 3H, OMe), 3.84 (s, 3H, OMe), 6.45-6.47 (m, 2H, 4'-H,5-H), 6.60 (d, 1H, J = 2.7 Hz, 3-H), 6.89 (d, 1H, J = 8.8 Hz, 3'-H), 7.83 (d, 1H, J= 3.0 Hz, 6'-H), 7.85 (d, 1H, J= 8.8 Hz, 6-H), 8.70 (s, 1H, NH), 8.73 (s, 1H, NH) ppm. 13 C-NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 55.2 (OMe), 55.3 (OMe), 55.7 (OMe), 56.3 (OMe), 98.7 (C-3), 104.0 (C-6'), 105.1 (C-5), 105.5 (C-4'), 111.4 (C-3'), 120.9 (C-1), 121.7 (C-6), 130.0. (C-1'), 142.1 (C), 149.9 (CO), 152.8 (C), 153.3 (C), 155.2 (C) ppm. EM (ES + ): 333.3 (M+H) + .

N- -Dihidroxifenil)-N'-(2',5'-dihidroxifenil)urea (11)

Procedimiento General B. Sólido blanquecino. Rdto 95%. (P.f. > 155°C d ). HPLC: t R = 5.97 min (gradiente de 2 a 40% de A en B en 15 min). 1 H-RMN (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 6.16 (dd, 1H, J= 8.6 , 3.0 Hz, 4'-H), 6.18 (dd, 1H, J= 8.5, 2.9 Hz, 5-H), 6.31 (d, 1H, J= 2.7 Hz, 3-H), 6.58 (d, 1H, J= 8.5 Hz, 3'-H), 7.43 (d, 1H, J= 8.7 Hz, 6-H), 7.46 (d, 1H, J= 2.9 Hz, 6'-H), 8.45 (s, 1H, NH), 8.47 (s, 1H, NH), 8.59 (s a , 1H, OH), 8.93 (s a , 1H, OH), 9.00 (s, 1H, OH), 9.58 (s, 1H, OH) ppm. 13 C-RMN (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 102.7 (C-3), 105.6 (C-6'), 106.7 (C-4'), 107.6 (C-5), 115.0 (C-3'), 119.0 (C-1), 122.3 (C6), 128.6 (C-1'), 138.4 (C), 148.5 (C), 149.9 (CO), 153.4 (C), 153.6 (C) ppm. EM (ES + ): m/z 277.3 (M+H) + .

EJEMPLO 12

-(2,5-Dimetoxifenil)-N'-(4'-metoxifenil)urea (33)

Procedimiento general C. Agujas blancas. Rdto. 85%. (P.f.: 162-164°C, CI 2 CH 2 ). HPLC: t R = 8.62 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (300 MHz, DMSO- d 6 ) δ: 3.68 (s, 3H, OMe), 3.71 (s, 3H, OMe), 3.81 (s, 3H, OMe), 6.46 (dd, 1 H, J = 8.8 y 3,0 Hz, 4-H), 6.86-6.91 (m, 3H, 3'-H, 5'-H, 3-H), 7.37 (d, 2H, J = 8.6 Hz, 2'-H, 6'-H), 7.37 (d, 1 H, J = 2.9 Hz, 6-H), 8.16 (s, 1 H, NH), 9.16 (s, 1 H, NH) ppm. 13 C-NMR (75 MHz, DMSO-de) δ: 55.2 (OMe), 55.3 (OMe), 56.3 (OMe), 105.1 (C-6), 105.2 (C-4), 1 11.4 (C-3), 1 14.1 (C-3', C-5'), 1 19.8 (C-2', C-6'), 129.8 (C-1), 132.8. (C-1 '), 141.8 (C), 152.5 (CO), 153.4 (C), 154.5 (C) ppm. EM (ES + ): 303.3 (M+H) + .

-(2,5-Dihidroxifenil)-N'-(4'-hidroxifenil)urea (12)

Procedimiento General B. Sólido blanco. Rdto. 56%. (P.f.: 180-182°C, MeOH). HPLC: t R = 2.49 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-de) δ: 6.15 (dd, 1 H, J = 8.4, 2.8 Hz, 4-H), 6.59 (d, 1 H, J = 8.5 Hz, 3-H), 6.67 (d, 2H, J = 8.8 Hz, 3'-H, 5'-H), 7.20 (d, 2H, J = 8.8 Hz, 2'-H, 6'-H), 7.58 (d, 1 H, J = 2.8 Hz, 6-H), 7.94 (d, 1 H, NH), 8.60 (s, 1 H, NH), 8.97 (s, H, OH), 9.03 (s, 1 H, OH), 9.1 (s, 1 H, OH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, DMSO-cfe) δ: 106.2 (C-6), 107.3 (C-4), 1 14.8 (C-3),

1 15.3 (C-3', C-5'), 120.1 (C-2', C-6'), 128.7 (C-1), 131.5 (C-1 '), 137.9 (C), 150.0 (C),

152.4 (CO), 152.7 (C), ppm. EM (ES + ): m/z 261.28 (M+H) + .

EJEMPLO 13

N-(2,5-Dimetoxifenil)-N'-(3',4'-dimetoxifenil)urea

Procedimiento general C. Agujas blancas. Rdto. 69%. (P.f.: 159-161°C, CI 2 CH 2 /MeOH). HPLC: t R = 8.82 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H- RMN (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 3.68 (s, 3H, OMe), 3.73 (s, 3H, OMe), 3.80 (s, 3H, OMe), 3.84 (s, 3H, OMe), 6.44-6.49 (m, 2H, 4-H, 6'-H), 6.60 (d, 1 H, J = 2.5 Hz, 2'-H), 6.89 (d, 1 H, J = 8.9 Hz, 3-H), 7.84-7.88 (m, 2H, 6-H, 5'-H), 8.69 (s, 1 H, NH), 8.72 (s, 1 H, NH) ppm. 13 C-NMR (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 55.2 (OMe), 55.3 (OMe), 55.7 (OMe), 56.3 (OMe), 98.8 (0-2'), 104.1 (C-6), 105.2 (C-4), 105.5 (C-5'), 1 11.5 (C-3), 120.9 (C-6), 121.7 (C-1), 130.0. (C-1 '), 142.1 (C), 149.9 (C), 152.8 (C), 153.3 (CO), 155.2 (C) ppm. EM (ES + ): 333.4 (M+H) + .

N-(2,5-Dihidroxifenil)- N'-(3',4'-dihidroxifenil)urea (13)

Procedimiento General B. Prismas blancos. Rdto. 68%. (P.f.:141-143°C, MeOH/CI 2 CH 2 ). HPLC: t R = 1.73 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H- RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 6.1-6.2 (m, 2H, 4,6'-H), 6.31 (d, 1 H, J = 2.6, 2'-H), 6.58 (d, 1 H, J = 8.5 Hz, 3-H), 7.43 (d, 1 H, J = 8.7 Hz, 5'-H), 7.46 (d, 1 H, J = 2.9 Hz, 6-H), 8.44 (s, 1 H, NH), 8.47 (s, 1 H, OH), 8.59 (s, 1 H, OH), 8.94 (s, 1 H, OH), 9.01 (s, 1 H, OH), 9.59 (s, 1 H, NH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 102.8 (C-6), 105.6 (C-2'), 106.8 (C-4), 107. 7 (C-5'), 1 15.1 (C-3), 1 19.0 (C-6'), 122.4 (C-1), 128.6 (C-1 '), 138.4 (C), 148.6 (C), 149.9 (C), 153,4 (C), 153.6 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 277.29 (M+H) + .

EJEMPLO 14

-(3,4-Dimetoxifenil)-N'-(4'-metoxifenil)urea (35)

Procedimiento general C. Escamas blancas. Rdto. 42%. (P.f.:185-187°C, EtOH). HPLC: t R = 8.35 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (300 MHz, DMSO-de) δ: 3.71 (s, 3H, OMe), 3.73 (s, 3H, OMe), 3.85 (s, 3H, OMe), 6.47 (dd, 1 H, J = 8.7, 2.4 Hz, 6-H), 6.61 (d, 1 H, J = 2.4 Hz, 2-H), 6.86 (d, 1 H, J = 8.7 Hz, 3'-H, 5'-H), 7.34 (d, 1 H, J = 8.6 Hz, 2'-H, 6'-H), 7.88 (s, 1 H, NH), 7.93 (d, 1 H, J = 8.8 Hz, 5-H), 8.95 (s, 1 H, NH) ppm. 13 C-NMR (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 55.2 (OMe), 55.3 (OMe), 55.8 (OMe), 98.8 (C-2), 104.1 (C-5), 1 14.0 (C-3', C-5'), 119.5 (C-2', C-6'), 119.6 (C-6), 122.1 (C-1), 133.1 (C-1), 149.1 (C), 152.8 (C), 154.3 (CO), 154.8 (C) ppm. EM (ES + ): 303.99 (M+H) + . -(3,4-Dihidroxifenil)-N'-(4'-hidroxifenil)urea (14)

Procedimiento General B. Sólido blanco. Rdto. 60%. (P.f.: 184-187°C, MeOH/CI 2 CH 2 ). HPLC: t R = 2.12 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-de) δ: 6.14 (dd, 1 H, J = 8.7, 2.6 Hz, 6-H), 6.32 (d, 1 H, J = 2.6 Hz, 2-H), 6.66 (d, 1 H, J = 8.8 Hz, 3'-H, 5'-H), 7.18 (d, 1 H, J = 8.8 Hz, 2'-H, 6'-H), 7.59 (d, 1 H, J = 8.7 Hz, 5-H), 7.68 (d, 1 H, OH), 8.72 (s, 1 H, OH), 8.87 (s, 1 H, NH), 8.99 (s, 1 H, NH), 9.69 (s, 1 H, OH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 102.5 (C-2), 105.5 (C-5), 115.2 (C- 3', 5'), 119.61 (C-6), 120.0 (C-2', C-6'), 120.6 (C-1), 131.7 (C1 '), 147.2 (C), 152.2 (C), 152.7 (CO), 153.2 (C) ppm. EM (ES + ): m/z 261.31 (M+H) + .

EJEMPLO 15

N,N'-bis(4-Metoxifenil)urea (36)

Procedimiento general C. Agujas blancas. Rdto. 80%. (P.f.: 237-239°C, EtOH; p.f. Lit = 236-238°C). HPLC: t R = 7.88 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H- RMN (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 3.71 (s, 6H, OMe), 6.86 (d, 4H, J = 8.8, 3-H, 5-H), 7.35 (d, 4H, J = 8.8 Hz, 2-H, 6-H), 8.36 (s, 1 H, NH) ppm. 13 C-NMR (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 55.1 (OMe), 1 13.9 (C-3, C-5), 1 19.9 (C-2, C-6), 132.9 (C-1), 153.0 (CO), 154.3 (C-4) ppm. EM (ES + ): 273.10 (M+H) + . (Iqbal, A. F. M. et al., Helv. Chim. Acta (1976) 59(2), 655-656).

'-bis(4-Hidroxifenil)urea (15)

Procedimiento General B. Prismas blancos. Rdto. 84%. (P.f.:245°C d , MeOH; p.f. Lit = 240°C d ). HPLC: t R = 2.59 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 6.66 (d, 4H, J = 8.8, 3-H, 5-H), 7.18 (d, 4H, J = 8.8 Hz, 2-H, 6- H), 8.16 (s, 2H, NH), 8.99 (s, 2H, OH), ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 115.2 (C-3, C-5), 120.3 (C-2, C-6), 131.5 (C-1), 152.3 (C-4), 153.1 (CO), ppm. EM (ES + ): m/z 245.30 (M+H) + . (Franz, R. A. et al., J. Org. Chem. (1961) 26, 3309-3312). EJEMPLO 16

'-bis(2,5-Dimetoxifenil)urea (37)

Procedimiento general C. Agujas blancas. Rdto. 84%. (P.f.:207-209°C, MeOH; p.f. Lit = 209°C). HPLC: t R = 9.04 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (300 MHz, DMSO-de) δ: 3.69 (s, 6H, OMe), 3.80 (s, 6H, OMe), 6.49 (dd, 2H, J = 8.8, 3.0 Hz, 4-H), 6.90 (d, 2H, J = 8.9 Hz, 3-H), 7.84 (d, 2H, J = 2.9 Hz, 6-H), 8.96 (d, 2H, NH) ppm. 13 C-NMR (75 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 55.3 (OMe), 56.3 (OMe), 105.5 (C-6), 106.0 (C-4), 1 11.54 (C-3), 129.7 (C-1), 142.4 (C-2), 152.6 (CO), 153.3 (C-5) ppm. EM (ES + ): 333.0 (M+H) + . (Zhou, S. et al., J. Chem. Res. (2013) 37(5), 315-319). N,N'-bis(2,5- 16)

Procedimiento General B. Purificado por cromatografía en columna, EtOAc-Hex (1 :3 a 4: 1). Sólido liofilizado. Rdto. 20%. (P.f.: 109°C d ). HPLC: t R = 1.76 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 6.19 (dd, 2H, J = 8.5, 2.9 Hz, 4-H), 6.59 (d, 2H, J = 8.5 Hz, 3-H), 7.47 (d, 2H, J = 2.9 Hz, 6-H), 8.6 (s, 1 H, NH), 8.74 (s, 2H, OH), 8.99 (s, 2H, OH) ppm. 13 C-NMR: (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 107.2 (C-6), 108.0 (C-4), 1 15.1 (C-3), 128.4 (C1), 138.7 (C-2), 149.9 (C-5), 153.0 (CO) ppm. EM (ES + ): m/z 277.39 (M+H) + . EJEMPLO 17

N,N-bis(4-Metoxifenil)-N'-(4'-metoxifenil)urea (38)

Procedimiento General C. Sólido blanco. Rdto. 63%. (P.f.: 153-156°C, MeOH ). HPLC (Sunfire): t R = 7.24 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (400 MHz, CDCI 3 ) δ: 3.77 (s, 3H, OMe), 3.81 (s, 6H, OMe), 6.31 (sa, 1 H, NH), 6.81 (d, 2H, J = 9.0 Hz, 3'-H, 5'-H), 6.91 (d, 4H, J = 8.8 Hz, 3-H, 5-H), 7.25 (d, 2H, J= 9.0 Hz, 2'-H, 6'- H), 7.27 (d, 4H, J = 8.8 Hz, 2-H, 6-H) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, CDCI3) δ: 55.6 (OMe), 1 14.2 (C-3',C-5'), 1 14.9 (C-3,C-5), 121.3 (C-2',C-6'), 128.8 (C-2.C-6), 131.9 (C), 135.5 (C), 154.4 (C), 155.8 (CO), 158.1 (C) ppm. EM (ES + ): m/z 379.05 (M+H) + .

N,N-bis(4-Hidroxifenil)-N'-(4'-hidroxifenil)urea (17)

Procedimiento General B. Columna, gradiente de 35 a 75% de AcOEt en hexano. Sólido rosaceo liofilizado. Rdto. 68%. (P.f. :186-187°C). HPLC: t R = 7.15 min (gradiente de 2 a 95% de A en B en 5min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 6.60 (d, 2H, J = 8.9, 3'-H, 5'-H), 6.72 (d, 4H, J = 8.8, 3-H, 5-H), 7.05 (d, 4H, J = 8.7 Hz, 2-H, 6-H), 7.12 (d, 2H, J = 8.9 Hz, 2'-H, 6'-H), 7.41 (s, 1 H, NH), 9.02 (s, 1 H, OH), 9.43 (s, 2H, OH) ppm. 13 C-NMR: (75 MHz, CDCI 3 ) δ: 1 14.7 (C-3', C-5'), 1 15.7 (C-3, C-5), 122.3 (C-2', C-6'), 128.7 (C-2, C-6), 131.2 (C), 134.9 (C), 152.8 (C), 154.6 (CO), 155.4 (C) ppm. EM (ES + ): m/z 337.32 (M+H) + .

EJEMPLO 18

-(2 , ,5 , -Dimethoxibencil)-N'-(2",5"-dimetoxifenil)-N-(4-metoxi fenil)urea (39)

Procedimiento general C, usando 1.5 mmol de amina. Purificación por cromatografía en columna, EtOAc-Hex (1 :3 a 3:1). Prismas blancos. Rdto. 17%. (P.f.:91-94°C, CI 2 CH 2 /ciclohexano). HPLC: t R = 7,33 min (gradiente de 30 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 3.53 (s, 3H, OMe), 3.61 (s, 3H, OMe), 3.66 (s, 3H, OMe), 3.67 (s, 3H, OMe), 3.77 (s, 3H, OMe), 4.81 (s, 2H, N-CH 2 ), 6.46 (dd, 1 H, J = 8.8, 3.0 Hz, 4"-H), 6.77 (dd, 1 H, J = 8.9, 2.9 Hz, 4'-H), 6.78 (d, 1 H, 3'-H), 6.84-6.86 (m, 2H, 3"-H, 6'-H), 7.00 (d, 2H, J = 8.8 Hz, 3-H, 5-H), 7.1 1 (s, 1 H, NH), 7.26 (d, 2H, J = 8.8 Hz, 2-H, 6-H), 7.77 (d, 1 H, J = 3.0 Hz, 6"-H) ppm. 13 C-NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 47.25 (CH 2 ), 55.2 (OMe), 55.3 (OMe), 55.4 (OMe), 55.7 (OMe), 56.5 (OMe), 104.6 (C- 6"), 105.6 (C-4"), 1 11.6 (C-4'), 1 11.7 (C-3'), 1 12.0 (C-3"), 1 14.9 (C-6'), 1 15.0 (C-3,5), 127.0 (C), 129,3 (C-2, C-6), 129.5. (C), 133.5 (C), 141.6 (C), 150.9 (C), 153.0 (CO), 153.4 (C), 153.7 (C), 158.5 (C) ppm. EM (ES + ): 453.1 (M+H) + .

-(2',5'-Dihidroxibencil)- N'-(2",5"-dihidroxifenil)-N-(4-hidroxifenil)urea (18)

Procedimiento General B. Purificación por cromatografía en columna, EtOAc-Hex (1 :3 a 4:1). Sólido blanco. Rdto. 10%. (P.f.:1 14-115°C d , MeOH). HPLC: t R = 5.40 min (gradiente de 15 a 95% de A en B en 10 min). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 4.67 (s, 2H, N-CH 2 ), 6.14 (dd, 1 H, J = 8.5, 2.8, 4"-H), 6.43-6.48 (m, 2H, 4'-H, 3'-H), 6.56 (d, 1 H, J = 8.6 Hz, 3"-H), 6.59 (d, 1 H, J = 2.8 Hz, 6'-H), 6.80 (d, 1 H, J = 8.7 Hz, 3-H, 5-H), 7.05 (s, 1 H, NH), 7.10 (d, 1 H, J = 8.7 Hz, 2-H, 6-H), 7.57 (d, 1 H, J = 2.8 Hz, 6"-H), 8.62 (s a , 1 H, OH), 8.65 (s a , 1 H, OH), 8.78 (s a , 1 H, OH), 8.88 (s a , 1 H, OH), 9.72 (s a , 1 H, OH) ppm. 13 C-NMR: (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 47.9 (N-CH 2 ), 105.6 (C-6"), 107.6 (C-6'), 1 14.4 (C-4"), 1 14.5 (C-4'), 1 15.3 (C-3"), 115. 9 (C-3'), 116.5 (C-3, C-5), 124.7 (C), 128.2 (C), 129.5 (C-2, C-6), 132.0 (C), 137.5 (C), 147.2 (C), 149.7 (C), 150.0 (C), 154.4 (CO), 156.9 (C) ppm. EM (ES + ): m/z 383.25 (M+H) + . Comparativa con otros compuestos derivados de amidas:

41 : n=0

Esquema 3

Cómo comparativa y siguiendo los procedimientos para los compuestos 1 a 10 descritos previamente, se prepararon también los derivados amida 19 y 21 , descritos en US2006/0233741A1. Durante la reacción de desprotección se obtuvieron también los derivados mono-terc-butílicos 20 y 22, respectivamente, no descritos.

EJEMPLO 19

3-(3',5'-Di-íerc-butilfenil-4'-hidroxi)-N-(4-metoxibenzil)p ropanamida (40)

Procedimiento General A. Sólido blanco. Rdto. 59%. P.f. :126-128°C (EtAcO). HPLC: t R = 7.61 min (10 min gradiente: 30 a 95% de A en B). 1 H-NMR (400 MHz, CDCI 3 ) δ: 1.41 (s, 18H, CHa-tBu), 2.49 (dd, 2H, CH 2 , J = 8.7 and 7.0 Hz), 2.90 (dd, 2H, CH 2 , J = 8.7 y 7.0 Hz), 3.78 (s, 3H, OCH 3 ), 4.35 (d, 2H, CH 2 N, J = 5.5 Hz), 5.10 (s, 1 H, OH), 5.60 (s a , 1 H, NH), 6.84 (d, 2H, 3,5-H, J = 8.7 Hz), 7.00 (s, 2H, 1 '-H, 6'-H), 7.10 (d, 2H, 2-H, 6-H, J = 8.8 Hz). 13 C-NMR (100 MHz, CDCI 3 ) δ: 30.45 (6C, CH 3 -tBu), 31.94 (CH 2 ), 34.45 (2C, C-tBu), 39.23 (CH 2 ), 43.25 (CH 2 ), 55.42 (OCH 3 ), 1 14.21 (2C, C-3, C-5), 124.98 (2C, C-2', C-6'), 129.22 (2C, C-2, C-6), 130.39 (C), 131 .43 (C), 136.1 1 (2C, C-tBu), 152.31 (C-OH), 159.10 (C-OH), 172.28 (CO). EM (ESI+): m/z 398.0 (M+H) + , 420.28 (M+Na) + .

3-(3S5'-Di-terc-butilfenil-4'-hidroxi)-N-(4-hidroxibenzil)pr opanamida (19)

Procedimiento General B. Partiendo de 39 (0.2g, 0.5 mmol) y usando 2 equiv de BBr 3 , este producto se obtiene junto con un 13% de 19. Sólido blanco, 0.90 g (47%). P.f. : 162-163°C (EtAcO/hexano). HPLC: t R = 6.25 min (10 min gradiente: 30 a 95% de A en B). 1 H-RM N (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 1 .35 (s, 18H , CH 3 -tBu), 2.35 (t, 2H, CH 2 , J = 7.7 Hz), 2.71 (t, 2H, CH 2 , J = 7.7 Hz), 4.13 (d, 2H , CH 2 N, J = 5.7 Hz), 6.67 (d, 2H, 3,5-H, J = 8.5 Hz), 6.70 (s, 1 H, OH), 6.91 (s, 2H , 2'-H, 6'-H), 6.98 (d, 2H , 2-H, 6-H, J = 8.5 Hz), 8.18 (t, 1 H, NH, J = 5.8 Hz), 9.26 (s, 1 H, OH). 13 C-RM N (100 MHz, CDCI 3 ) δ: 30.45 (CH 3 -tBu), 31.24 (CH 2 ), 34.47 (C-tBu), 37.54 (CH 2 ), 41.64 (CH 2 ), 1 14.98 (2C, 3,5-C), 124.22 (2C, C-2', C-6'), 128.56 (2C, C-2, C-6), 129.62 (C), 132.21 (C), 139.05 (2C, C- tBu), 151.90 (C-OH), 156.18 (C-OH), 171.40 (CO). EM (ESI+): m/z 384.0 (M+H) + .

EJEM PLO 20

3-(3'-íerc-Butilfenil-4'-hidroxi)-N-(4-hidroxibencil)propan amida (20)

Procedimiento General B. Partiendo de 39 (0.2g, 0.5 mmol) y usando 8 equiv de BBr 3 , este producto se obtiene junto con un 39% de 18. Sólido blanco, 0.16 g (55%). P.f. 150-151 °C (CI 2 CH 2 /MeOH). HPLC: t R = 4.18 min (10 min gradiente: 30 a 95% de A en B). 1 H-RM N (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 1 .32 (s, 18H, CH 3 -tBu), 2.34 (t, 2H, CH 2 , J = 7.6 Hz), 2.70 (t, 2H, CH 2 , J = 7.5 Hz), 4.1 1 (d, 2H, CH 2 N, J = 5.5 Hz), 6.64-6.68 (m, 3H , 3- H, 5-H, 5'-H), 6.81 (m, 1 H, 6'-H), 6.95-6.97 (m, 3H, 2-H, 6-H, 2'-H), 8.16 (t, 1 H , N H, J = 5.2 Hz), 9.08 (s, 1 H , OH), 9.26 (s, 1 H, OH). 13 C-RMN (100 M Hz, CDCI 3 ) δ: 29.42 (CH 3 - tBu), 30.80 (CH 2 ), 34.21 (C-tBu), 37.62 (CH 2 ), 41.57 (CH 2 ), 1 14.97 (2C, C-3, C-5), 1 15.91 (C-5'), 126.26 (2C, C-2', C-6'), 128.52 (2C, C-2, C-6), 129.66 (C), 130.97 (C), 134.82 (C-tBu), 153.92 (C-OH), 156.16 (C-OH), 171 .36 (CO). EM (ESI+): m/z 328.0 (M+H) + . EJEMPLO 21

3-(3',5'-Di-íerc-butilfenil-4'-hidroxi)-N-(4-metoxifenil)pr opanamida (41 )

Procedimiento General A. Sólido blanco. Rdto. 68%. P.f. 172-174°C (EtAcO); p.f. Lit. = 170-175°C. HPLC: t R = 7.96 min (10 min gradiente: 30 a 95% de A en B). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-de) δ: 1.42 (s, 18H, CH 3 -tBu) 2.61 (t, 2H, CH 2 , J = 7.7 Hz), 2.97 (t, 2H, CH 2 , J = 7.7 Hz), 3.78 (s, 3H, OCH 3 ), 5.10 (s, 1 H, OH), 6.83 (d, 2H, 3-H, 5-H, J = 8.9 Hz), 6.94 (s a , 1 H, NH) 7.04 (s, 2H, 2'-H, 6'-H), 7.33 (d, 2H, 2-H, 6-H, J = 9.0 Hz), 9.26 (s, 1 H, OH). EM (ESI+): m/z 384.32 (M+H) + . (US 2006/0233741 A1).

3-(3S5'-Di-íerc-butilfenil-4'-hidroxi)-N-(4-hidroxifenil )propanamida (21 )

Procedimiento General B. Partiendo de 40 (0.2g, 0.5 mmol) y usando 6 equiv de BBr 3 , este producto se obtiene junto con un 50% de 21. Sólido blanco, 0.05 g (26%). P.f. 240-242°C (EtAcO/hexano). HPLC: t R = 6.47 min (10 min gradiente: 30 a 95% de A en B). 1 H-RMN (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 1.34 (s, 18H, H-tBu) 2.49 (t, 2H, CH 2 , J = 7.2 Hz), 2.77 (t, 2H, CH 2 , J = 7.6 Hz), 6.67 (d, 2H, 3-H, 5-H J = 8.9 Hz), 6.71 (s, 1 H, OH), 6.94 (s, 1 H, 2'-H, 6'-H), 7.35 (d, 2H, 2-H, 6-H, J = 8.9 Hz), 9.15 (s, 1 H, NH), 9.64 (s, 1 H, OH). 13 C-RMN (100 MHz, CDCI 3 ) δ: 30.45 (CH 3 -tBu), 31.20 (CH 2 ), 34.49 (C-tBu), 38.46 (CH 2 ), 1 14.99 (2C, C-3, C-5), 120.83 (2C, C-2', C-6'), 124.24 (2C, C-2, C-6), 131.01 (C), 132.15 (C), 139.14 (2C, C-tBu), 151.96 (C-OH), 153.1 1 (C-OH), 170.03 (CO). EM (ESI+): m/z 370.33 (M+H) + . (WO 2006/060800 A1)

EJEMPLO 22

3-(3'-íerc-Butilfenil-4'-hidroxi)-N-(4-hidroxifenil)propana mida (22)

Procedimiento General B. Partiendo de 40 (0.2g, 0.5 mmol) y usando 6 equiv de BBr 3 , se obtiene junto con un 26% de 20. Sólido blanco, 0.08 g (50%). P.f. 96-8°C (CI 2 CH 2 /Hexane). HPLC (Sunfire): t R = 4.32 min (10 min gradiente: 30 a 95% de A en B). 1 H-RM N (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 1 .34 (s, 18H, H-tBu), 2.48. (t, 2H, CH 2 , J = 7.6 Hz), 2.76 (t, 2H, CH 2 , J = 7.7 Hz), 6.64-6.68 (m, 3H, 3-H, 5-H, 5'-H), 6.84 (dd, 1 H, 6'-H, J = 8.1 , 2.0 Hz), 6.99 (d, 1 H, 2'-H, J = 2.0 Hz, ), 7.33 (m , 3H, H-2, H-6, H-6'), 8. 16 (t, 1 H, N H, J = 5.2 MHz), 9.09 (s, 1 H, OH), 9.14 (s, 1 H, OH), 9.61 (s, 1 H, OH). 13 C-RM N (100 MHz, CDCI 3 ) δ: 29.40 (CH 3 -tBu), 30.72 (CH 2 ), 34.21 (C-tBu), 38.53 (CH 2 ), 1 14.99 (2C, C-3, C-5), 1 15.97 (2C, C-2', C-6') 120.84 (2C, C-2, C-6), 126.20 (C), 126.26 (C), 130.91 (C), 131.00 (C), 134.87 (C-tBu), 153.1 1 (C-OH), 153.94 (C- OH), 169.94 (CO). EM (ESI+): m/z 314.38 (M+H) + .

Actividad Antioxidante Para determinar la actividad antioxidante, se utilizó el ensayo ORAC (Oxigen Radical Absorbance Capacity) y se utilizó fluoresceína como sustrato oxidable. Este ensayo se llevó a cabo según el método descrito por Ou et al. J. Agrie. Food Chem. 49 (2001) 4619-4626, modificado por Dávalos et al. J. Agrie. Food Chem. 52 (2004) 48-54. Este ensayo mide la capacidad que tienen los antioxidantes presentes en una muestra para neutralizar los radicales peroxilo, que se originan a partir de la descomposición térmica del 2,2 ' -azo-bis-(2-metilpropionamidina) dihidrocloruro (AAPH) (Sigma-Aldrich) y que causa la oxidación de la fluoresceína que actúa como sustrato (Esquema 4). Como antioxidante de referencia se utilizó el ácido 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcromano- 2-carboxílico (Trolox) (Sigma-Aldrich), análogo soluble de la vitamina E.

El AAPH, el trolox y las muestras se diluyeron en tampón fosfato (75 mM, pH 7,4). El trolox se diluyó para obtener diferentes concentraciones (0,2 - 2 nmol) con las que se construyó una curva de calibrado de referencia. Las soluciones de AAPH y trolox se prepararon diariamente. Se preparó también una solución stock de fluoresceína (1 , 17 mM) en el mismo tampón, que se almacenó en oscuridad a 4 °C durante 4 semanas. La reacción se llevó a cabo en un volumen final de 200 μΙ (20 μΙ de la muestra correspondiente, 120 μΙ de fluoresceína y 60 μΙ de AAPH).

La fluorescencia se midió usando un fluorímetro (SpectraMax M2; Molecular Devices, California, USA), siendo la longitud de onda de excitación de 485 nm y la de emisión 520 nm. Se utilizaron placas multipocillo de poliestireno negras (Nunc, Dinamarca), y la medida de fluorescencia se realizó a 40 °C cada minuto, durante 95 minutos. Las medidas de fluorescencia se normalizaron con respecto al blanco (no antioxidante). A partir de las curvas normalizadas se calculó el área bajo la curva (AUC) de descenso de fluorescencia utilizando la siguiente fórmula:

Donde fo es la lectura de la fluorescencia inicial a 0 minutos y fi es la lectura de fluorescencia después de i minutos.

Todas las muestras se prepararon por triplicado y se llevaron a cabo al menos tres ensayos independientes para cada muestra. Los valores de ORAC se expresaron como μηιοΙ de equivalentes de ίΓθΙοχ/μηιοΙ de compuesto puro, usando para ello la curva del patrón calculada para cada ensayo (Tabla 1). ROXILO

FLUORESCENTE Esquema 4. Esquema simplificado del proceso de oxidación de la fluoresceína por los radicales peroxilo producidos por la descomposición térmica del 2,2 ' -azo-bis-(2- metilpropionamidina) dihidrocloruro (AAPH). Tomado de Ou et al., 2001.

Tabla 1. Actividad antioxidante de los compuestos 1 a 22

Compuesto moles de trolox / μιτιοΙ de

compuesto puro