本发明属于医药技术领域， 具体地讲， 涉及碳青霉烯类衍生物 (4 5&6 3-[(3 & 氨基磺酰基苯 -1-基曱基）胺曱酰基] -3-吡咯 烷基]硫基 -6-[(Α)-1-羟乙基 ]-4-甲基 -7-氧代 -1-氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2- 羧酸或其水合物的晶型及其制备方法， 以及其在制备用于治疗和 /或预 防感染性疾病的药物中的应用， 和包括其与一种或多种药用载体和 /或 稀释剂的药物组合物。 背景技术

碳青霉烯类 （ Carbapenems ) 是 20世纪 70年代发展起来的新型的 β-内酰胺类抗生素， 由于其具有超广谱、 超强效、 耐酶等特点， 在临床 用药中的地位越来越突出。

目前上市的碳青霉烯类抗生素有亚胺培南 -西司他丁、 帕尼培南- 倍他米隆、 美罗培南、 厄他培南钠、 比阿培南、 多尼培南。 但现有的 品种不够理想， 有的对肾脱氢肽酶（DPH-I ) 不稳定， 有的品种有中枢 神经毒性， 有的对铜绿假单胞菌的活性不够强， 有的对耐曱氧西林金 葡菌（MRSA )的抗菌活性很低； 碳青霉烯类抗生素临床使用的品种均 为注射剂， 且除厄他培南外在体内的半衰期都很短， 还存在排泄快， 重症用药次数多， 临床用药不便等弊端。 并且随着全球抗生素的过度 使用， 各种耐药菌的越来越多， 抗生素的耐药性越来越严重， 因此急 需研究开发具有较好的抗菌活性， 并且具有良好的化学稳定性的碳青 霉烯类抗生素。

结构式（ I )所示的碳青霉烯衍生物 ( ^{4 5} & 65 3-[(3 & 5>$ ⁵ -[( ⁴ -氨基 磺酰基苯 -1-基曱基)胺甲酰基] -3-吡咯烷基]硫基 -6-[(i?)-l-羟乙基] -4-曱 基 -7-氧代 -1-氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2-羧酸 （在本说明书中以下简称化 合物 A ) 主要通过与细菌细胞膜上的青霉素结合蛋白 （PBPs ) 结合， 抑制细菌细胞壁合成而产生杀菌作用， 对革兰氏阳性、 阴性菌均有较 好的抗菌作用。 '

式 （I )

结构式 （I ) 所示的化合物 A在 CN200810127480.2中已有详细描 述。

在药物研发中晶型研发非常拿要， 不同形态的化合物具有不同的 溶解度， 不同的晶型对化合物的稳定性、 操作性能和溶解度等有较大 影响。 因此本发明人对化合物 A的各种晶型进行了研究， 由此确认了 化合物 A的晶型。 发明内容

本发明的目的就是要解决上述存在的问题， 提供保存稳定性优良， 操作性良好，溶解度好的的化合物 A的新的晶型及其制备方法与用途。

本发明的一个目的是提供了结构式（I )所示的化合物 A或其水合 物的晶型， 即式 ( I )所示的碳青霉烯衍生物 (4 ，5 & 65 3-[(3 & 55)-5-[(4- 氨基磺酰基苯 - 1 -基）曱基]胺曱酰基] -3-吡咯烷基]硫基 -6-[( -1 -羟乙. 基]—4-甲基 -7-氧代 -1 -氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2-羧酸或其水合物的晶 型， 其特征在于， 其使用 Cu-Ka辐射， 以 2 角度表示的 X-射线粉末 射在 10.3士 0.2、 14.5土 0.2、 18.0士 0.2、 20.8±0.2、 23.3士 0.2处有特征 ，

式 （I ) 所述的化合物 A或其水合物的晶型， 其使用 Cu-Ka辐射， 以 2Θ 角度表示的 X-射线粉末衍射， 还在 16.3±0.2、 17.1±0.2、 21.3±0.2、 22.0±0.2处有特征峰。

所述的化合物 A或其水合物的晶型， 其 DSC在 56-64！存在第一 个吸热转变峰， 在 1 15-122 °C存在第二个吸热转变峰。

所述的化合物 A水合物的晶型，其含水量为 2 %-10 %,优选 5 %-10 %。

本发明的另一个目的还提供了化合物 A或其水合物的晶型的制备 方法。 化合物 A 可以用 以前的 已知方法合成， 例如可以用 CN200810127480.2中公开的方法合成。 化合物 A的晶型 （以下筒称晶 型 I ) 可以通过下述三种方法制得：

制备方法一：

将化合物 A用 Ν,Ν，-二曱基曱酰胺（ DMF )或二曱基亚砜 ( DMSO ) 的含水溶液溶解， 然后将不良溶剂滴入此溶液中， 通过过滤和干燥， 得到晶体。 ，

所述的不良溶剂， 是指对化合物 Α溶解度较小的溶剂， 选自含有

1-4个碳原子的低级醇、 含有 1-6个碳原子的低级酮、 乙腈、 丙腈、 二 氯甲烷、 三氯曱烷、 硝基曱烷、 乙醚、 甲基叔丁基醚、 苯甲醚、 乙酸 乙酯、 甲酸乙酯、 碳酸二甲酯或者四氢呋喃， 优选硝基曱烷或者二氯 曱烷。 所述的含有 1-4个碳原子的低级醇选自曱醇、 乙醇、 丙醇等， 优 选甲醇； 所述的含有 1-6个碳原子的低级酮选自丙酮、 丁酮等；

制备方法二：

将化合物 A配成悬浮水溶液， 调节 pH值至完全溶解后， 加入一 定体积比的有机溶剂 /水的混合溶剂， 调节 pH值至 5.4-7.0, 降至低温， 通过过滤和干燥， 得到晶体。

制备方法三：

将化合物 A配成悬浮水溶液， 调节 pH值至完全溶解后， 将此溶 液通过柱色谱吸附富集， 然后用做为洗脱剂的有机溶剂 /水的混合溶剂 洗脱， 减压蒸馏出小部分有机溶剂， 将洗脱液浓缩， 直至浓缩后得到 一定体积比的有机溶剂 /水的混合溶剂， 调节 pH值至 5.4- 7.0, 降至低 温， 通过过滤和干燥， 得到晶体。

所述调节 pH值， 是用酸、 碱或者碱性溶液调节 pH值， 如果在加 入有机溶剂之前用酸调节 pH值，则加入有机溶剂之后用碱或者碱性溶 液调节 pH值，如果在加入有机溶剂之前用碱或者碱性� ��液调节 pH值， 则加入有机溶剂之后用酸调节 pH值。

制备方法三中， 所述的做为洗脱剂的有机溶剂 /水的混合溶剂中 , 有机溶剂与水的比例为 1 : 0.2〜1 :4， 优选 1 : 0.5〜： 1 :2, 最优为 1 : 1。

制备方法二中所述一定体积比的有机溶剂 /水的混合溶剂或制备方 法三中所述浓缩后得到的一定体积比的有机溶 剂 /水的混合溶剂， 是指

1 :9〜3 :2的乙腈 /水的混合溶剂， 或者 1 :4〜4: 1的曱醇 /水的混合溶剂。

所述的酸为无机酸或者有机酸， 其中无机酸选自氢溴酸、 盐酸、 硫酸、 亚硫酸、 硝酸或者磷酸， 有机酸选自曱磺酸、 十二烷基磺酸、 2-萘磺酸、 苯磺酸、 草酸、 2,2-二氯乙酸、 甘油磷酸、 2 -羟基乙碌酸、 L-天冬氨酸、 马来酸、 乙磺酸、 1,5-萘二磺酸、 1,2-乙二磺酸、 环己基 氨基磺酸或者对甲苯磺酸。

所述的碱为有机碱或者无机碱， 所述的碱性溶液为有机碱或者无 机碱溶于水后配成的溶液； 其中无机碱选自氢氧化钾、 氢氧化钠、 氢 氧化锌、 氢氧化钙、 碳酸钾、 碳酸氢钾、 碳酸钠或者碳酸氢钠， 有机 碱选自左旋精氨酸、 甜菜碱、 胆碱、 二乙胺、 赖氨酸、 N，N '-双苄基乙 撑二胺、 1- (二乙基氨基） 乙醇、 2-氨基乙醇、 1- ( 2-羟乙基） 吡咯、 二乙醇胺、 二曱基乙醇胺、 N-曱基葡萄糖胺、 氨丁三醇、 三乙醇胺、 4- ( 2-羟乙基） 吗啉、 咪唑或者乙二胺。

'所述的柱色谱为反向柱色谱， 选自 C ₄ 柱色谱、 C ₈ 柱色谱、 C ₁₈ 柱 色谱或者树脂柱色谱。

所述的降至低温是指降至 0〜10 °c。

本发明人对化合物 A的晶型 I的制备方法做了大量研究， 研究表 明， 化合物 A的悬浮水溶液调节 pH值完全溶解后， 通过柱色谱吸附 富集， 然后用有机溶剂 /水的混合溶剂洗脱， 洗脱后， 减压蒸馏将洗脱 液浓缩， 蒸出部分洗脱液后， 剩余洗脱液中有机溶剂与水的比例是非 常关键的， 如果有机溶剂含量较少， 将得到化合物 A的晶型 II, 如果 有机溶剂的含量较大， 将得到化合物 A的晶型 I。

在实际操作中， "减压蒸馏将洗脱液浓缩， 直至浓缩后得到一定 体积比的有机溶剂 /水的混合溶剂" ， 无论混合溶液是乙腈 /水还是甲醇 /水， 混合溶液在蒸发时， 由于乙腈和甲醇的沸点均比水低， 因此首先 被蒸出的是乙腈和曱醇， 蒸出部分有机溶剂以后， 剩余的有机溶剂和 水存在共沸点， 可能会被一起蒸出。

而减压蒸出部分洗脱液后， 有机溶剂与水的比例 4艮难定量测定， 所以本发明人为了确定浓缩后的洗脱液中有机 溶剂与水在达到多少比 例时， 分别能制备得到晶型 II (在 CN201010190636.9中详细描述过化 合物 A的晶型 II )和晶型 I, 本发明人做了一系列的模拟验证试验， 模 拟浓缩后洗脱液中有机溶剂与水的比例。 当混合溶剂选择乙腈 /水时， 乙腈与水的比例为 60:40时， 调节 pH值至 5.4-7.0， 降至 4氐温， 通过过 滤和干燥， 得到晶体； 而乙腈 /水的比例高于 60:40则不析出化合物 A, 因此乙腈 /水的比例的上限为 60:40, 即为 3:2, 在此比例上进行稀释， 本发明人经过大量的实验得出， 当乙腈 /水的比例不低于 1 :9 时， 最后 得到的晶型是晶型 Γ, 如果洗脱液中乙腈与水的比例低于 1 :9， 则最后 得到的晶型是晶型 II。

当混合溶剂选择曱醇 /水时， 甲醇与水的比例为 80:20时， 调节 pH 值至 5.4-7.0 , 降至低温， 通过过滤和干燥， 得到晶体； 而甲醇 /水的比 例高于 80:20则不析出化合物 A, 因此曱醇 /水的比例的上限为 80:20， 即为 4: 1 , 在此比例上进行稀释， 本发明人经过大量的实验得出， 当甲 醇 /水的比例不低于 1 :4时， 最后得到的晶型是晶型 I, 如果洗脱液中曱 醇与水的比例低于 1 :4, 则最后得到的晶型是晶型 II。

因此， 本发明人确定了得到化合物 A晶型 I的混合溶剂的比例为： 1 :9〜3 :2的乙腈 /水的混合溶剂 , 或者 1 :4〜4: 1 '的曱醇 /水的混合溶剂。

即当采用柱层析的方法时， 减压蒸馏将洗脱液浓缩， 直至浓缩后 得到一定体积比的有机溶剂 /水的混合溶剂， 此时浓缩后混合溶剂中乙 腈 /水的体积比为 1 :9〜3:2 , 或者浓缩后混合溶剂中甲醇 /水的比例为 1 :4〜4: 1 , 都可以制备得到化合物 A 的晶型 I。 当不采用柱层析的方法 时， 所用 "一定体积比的有机溶剂 /水的混合溶剂" ， 是指 1 :9〜3 :2的乙 腈 /水的混合溶剂， 或者 1 :4〜4: 1 的曱醇 /水的混合溶剂， 此时都能制备 得到化合物 A的晶型 I。

本发明所述化合物 A晶型 I的制备方法的优点在于： 本发明所述 的方法所用有机溶剂为药学上常用的有机溶剂 ， 沸点比较低， 容易除 去， 不容易残留； 工艺放大的可操作性强； 且成本较低。

对通过上述方法制得的化合物 A或其水合物的晶型 （以下简称晶 型 I ) , 进行测定：

( 1 ) 粉末 X-射线衍射

X衍射测定的条件： Cu-Ka线、 1.54A (单色器）、通过. D/MAX-RB 型 X射线衍射仪测得。

使用 Cu-Ka辐射， 以 2 角度表示的 X-射线粉末衍射在 10.3士 0.2、 14.5±0.2、 18.0士 0.2、 20.8士 0.2、 23.3士 0.2 处有较强的特征峰； 还在 16.3士 0.2、 17.1士 0.2、 21.3士 0.2、 22.0±0.2处有特征峰。

用 X衍射测定本发明的晶型时， 有时由于测定的仪器或测定的条 件, 对于测得的峰而言会稍有测定误差， 因此在确定结晶结构时， 应 该将此误差考虑在内， 因此本申请人在确定 2 角度时考虑了误差范围 (士 0.2) 。

(2) DSC吸热测定

DSC测定条件： DZ3335差示扫描量热仪， 氮气保护， 升温速率 5 °C/分钟。

DSC在 56-64 存在第一个吸热转变峰，在 115-122 °C存在第二个 吸热转变峰。

(3) 含水量测定

根据卡尔，费歇尔水分测定法 （筒称 K-F法） 测定， 本发明化合物 A的晶型 I的含水量在 2 %-10 %, 优选 5 %-10%, 所以， 本发明的化 合物 A的晶型 I可以为水合物形式。

本发明还提供化合物 A或其水合物的晶型在制备用于治疗和 /或预 防感染性疾病的药物中的应用。

本发明还提供了包括化合物 A或其水合物的晶型与一种或多种药 用载体和 /或稀释剂的药物组合物， 其为药学上可接受的任一剂型， 例 ^口主 剂。 附图说明

图 1是式（I)所示化合物 A晶型 I的 X-射线粉末衍射图谱， 纵坐 标表示衍射强度 （CPS) , 横坐标表示衍射角度 （2Θ) 。

图 2是式（I)所示化合物 A晶型 I的 DSC图谱， 纵坐标表示功率 (mW) , 横坐标表示温度 （ °C ) 。 具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步的详细说明 。 这些实施例仅仅 是说明性的， 而不应该理解为是对本发明的范围的限制。 凡基于本发 明上述内容所实现的技术方案及其变体均落入 本发明的范围内。 制备例： 无定形的化合物 A的制备 MAP(原料 3)

中间体 1

中间体 2 化合物 A

上述合成路线中 -PNZ 代表 -PNB 代表

MAP代表

( 1 ) (2 & 45)-2-[(4-氨基磺酰基苯 -1-基)亚甲胺基曱酰基] -4-巯基 -1- (对硝基苄氧羰基)吡咯烷 （中间体 1 ) 的制备例

将 5-V-(4-硝基苄氧羰基 )-2-硫杂 -5-氮杂双环 [2.2.1]庚- 3-酮（原料 1 ) ( 1600 g, 5.19 mol)和醋酸磺胺米隆（原料 2) ( 1219.2 g, 4.95 mol ) 溶于乙腈中， 升温至 40 。C, 氮气保护下， 滴加三乙胺， 搅拌析晶， 过 滤， 得到中间体 1。

( 2 ) (4 5 & 65 3-[[(3 & 55 N-(4-硝基苄氧羰基 )-5-[(4-氨基磺酰基 苯 -1-基）曱基]胺曱酰基] -3-吡咯烷基]硫基 -6-[(^)-1-羟乙基 ]-4-曱基- 7-氧 代 -1-氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2-羧酸 (4-硝基苄基）曱酯（中间体 2) 的制 备例

将中间体 1 与 [(4 5 & 66 3- [(二苯氧膦酰）氧基] -6-[(7?)-1-羟乙 基]- 4-曱基 -7-氧代 -1-氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯- 2-羧酸 (4-硝基苄基）甲酯 (原料 3 ) ( 2980 g, 5.01 mol) 溶于二甲基曱酰胺中， 降温至 -15 °C； 氮气保护下， 滴加三乙胺； 反应结束后， 加入乙酸乙酯； 依次用水、 稀盐酸、 饱和碳酸氢钠洗涤， 用无水硫酸钠干燥有机层。 将乙酸乙酯 层浓缩回流析晶， 过滤， 干燥得固体（即中间体 2 ) 3300 g, 收率 79.46 %, 纯度 94.75 %。

( 3 )无定形的（4 5&65)-3-[[(3 & 氨基磺酰基苯 -1-基）甲基] 胺曱酰基] -3-吡咯烷基]硫基 -6-[(i?)- 1-羟乙基 ]-4-曱基 -7-氧代 -1-氮杂双 环 [3.2.0]庚 -2-婦 -2-羧酸 （无定形的化合物 A ) 的制备例

将中间体 2 ( 500 g， 0.60 mol )溶于四氢呋喃中， 将碳酸氢钠（ 100 g, 1.19 mol ) , 10%的无水钯炭 100.0 g加入水中， 两溶液置于氢化釜 中混合后， 通入氢气， 加压至 4.0 MPa, 升温至 30 °C搅拌至反应完全。 反应液过滤后用乙酸乙酯洗涤。 水层用醋酸调 pH值为 6, 然后用十八 烷基键和硅胶进行柱层析分离过制备液相进行 纯化分离， 冻干得固体 (即无定形的化合物 A ) 145.8 g, 收率 46.32 %, 纯度 96.66 %。

分子式： C ₂₂ H ₂₈ N ₄ 0 ₇ S ₂

分子量： 524.6

^-NMRCDzO, 600MHz):

δ 1.05(d, 3H), 1.15(d, 3H), 1.97(m, IH), 2.83(m, IH), 3.20(m, IH),

3.30(m, IH), 3.33(m, IH), 3.63(dd, IH), 3.92(m, IH), 4.08(m, 1H)， 4.10(m, IH), 4.33(d,lH), 4.40(dd, IH) , 4.45(d, IH) , 7.40(d, 2H), 7.78(d, 2H)。 实施例 1 化合物 A的晶型 I的制备一

取 600 mg的化合物 A,用 2 mL水和 3 mL的二甲基亚砜（ DMSO ) 溶解， 搅拌下， 逐滴加入 50 mL硝基曱烷， 室温搅拌 0.5-1小时， 过滤， 真空干燥得白色晶体 300 mg。

XRD'衍射： XRD衍射测定结果示于图 1 中；

含水量 （ K- F法） ： 2.44 %。 实施例 2 化合物 A的晶型 I的制备二

参照实施例 1操作， 将二甲基亚砜（DMSO ) 换成 Ν,Ν'-二曱基曱 酰胺 （DMF ) , 硝基曱烷换成甲醇， 得白色晶体 320 mg。

XRD衍射： XRD衍射图中， 衍射角度（2Θ )在以下位置有特征峰： 10.24、 14.52、 16.30、 17.08、 17.84、 20.70、 21.28、 21.94、 23.14; 含水量 （ K-F法） ： 2.81 %。 实施例 3 化合物 A的晶型 I的制备三

参照实施例 1操作， 将二甲基亚砜 ( DMSO ) 换成 N，N，-二曱基曱 酰胺 （DMF ) , 将硝基曱烷换成二氯曱烷， 得白色晶体 380 mg。

XRD衍射： XRD衍射图中， 衍射角度（2Θ )在以下位置有特征峰： 10.28、 14.56、 16.34、 17.12、 17.88、 20.80、 21.30、 22.02、 23.24; 含水量 （K-F法） ： 5.54 %。 实施例 4 化合物 A的晶型 I的制备四

取 7.0 g化合物 A加入 400 mL去离子水， 搅拌制成悬浊液， 然后 用 3.36 g碳酸氢钠固体调节 pH值至完全溶解后， 将此溶液用 C ₁₈ 柱色 语富集， 然后用 1 : 1的乙腈 /水的混合溶液洗脱， 减压蒸馏将洗脱液浓 缩至原来体积的 2/3 , 用 2N盐酸调节 pH值为 6， 于 0-5 °C静置， 得到 晶体， 过滤， 冷水洗， 真空干燥得化合物 A晶型 1 5.26 g， 收率 75.1 %。

XRD衍射： XRD衍射图中， 结晶在以下衍射角度（2Θ )处有特征 峰： '

10.40、 14.70、 16.50、 17:24、 18.02、 20.94、 21.42、 22.18、 23.40。 实施例 5 化合物 A的晶型 I的制备五

取 3.96 g化合物 A加入 250 mL去离子水， 搅拌制成悬浊液， 然后 用 2.7 g碳酸氢钠固体调节 pH值至完全溶解后， 将此溶液用 C ₁₈ 柱色 语富集， 然后用 1 : 1的甲醇 /水的混合溶液洗脱， 减压蒸熘将洗脱液浓 缩至原来体积的 2/3， 用 2N盐酸调节 pH值为 6, 加入 50 mg晶型 I的 晶种， 于 0-5 °C静置， 得到晶体， 过滤， 冷水洗， 真空干燥得化合物

A晶型 1 2.40 g, 收率 60.6 %。

XRD衍射： XRD衍射图中， 结晶在以下衍射角度（2Θ )处有特征 峰：

10.30、 14.60、 16.40、 17.16、 17.92、 20.86、 21.34、 22.08、 23.26。 实施例 6 化合物 A的晶型 I的制备六

取 500 mg化合物 A加入 5 mL去离子水，搅拌制成悬浊液，用 0.25 g碳酸氢钠固体调节 pH值至完全溶解后， 加入 550微升的乙腈 （体积 比， 乙腈 /水 =1 :9 ) , 用 2N的盐酸溶液调节 pH值为 6 , 过滤， 冷水洗， 真空干燥得化合物 A晶型 I 310 mg, 收率 62.0 %。

XRD衍射： XRD衍射图中， 结晶在以下衍射角度（2Θ )处有特征 峰：

10.26、 14.56、 16.36、 17.12、 17.86、 20.84、 21.30、 22.04、 23.28。 实施例 7 化合物 A的晶型 I的制备七

取 2.0 g化合物 A加入 20 mL去离子水， 搅拌制成悬浊液， 用 1.25 g碳酸氢钠固体调节 pH值至完全溶解后， 加入 5 mL的曱醇（体积比， 甲醇 /水 =1 :4 ) ， 用 2N的盐酸溶液调节 pH值为 6, 过滤， 冷水洗， 真 空千燥得化合物 A晶型 I 1.33 g， 收率 66.5 %。 实施例 8 化合物 A的晶型 I的制备八

具体实施方法同实施例 6， 体积比， 乙腈 /水 =15:85。 实施例 9 化合物 A的晶型 I的制备九

具体实施方法同实施例 6， 体积比， 乙腈 /水 =20:80。 实施例 10 化合物 A的晶型 I的制备十

具体实施方法同实施例 6， 体积比， 乙腈 /水 =30:70。 实施例 1 1 化合物 A的晶型 I的制备十一

具体实施方法同实施例 6， 体积比， 乙腈 /水 =40:60。 实施例 12 化合物 A的晶型 I的制备十二

具体实施方法同实施例 6, 体积比， 乙腈 /水 =50:50。 实施例 13 化合物 A的晶型 I的制备十三

具体实施方法同实施例 6, 体积比， 乙腈 /水 =60:40。 实施例 14 化合物 A的晶型 I的制备十四

具体实施方法同实施例 7, 体积比， 曱醇 /水 =30:70。 实施例 15 化合物 A的晶型 I的制备十五

具体实施方法同实施例 7， 体积比， 曱醇 /水 =40:60。 实施例 16 化合物 A的晶型 I的制备十六

具体实施方法同实施例 7 , 体积比， 曱醇 /水 =50:50。 实施例 17 化合物 A的晶型 I的制备十七

具体实施方法同实施例 7 , 体积比， 曱醇 /水 =60:40。 实施例 18 化合物 A的晶型 I的制备十八

具体实施方法同实施例 7 , 体积比， 曱醇 /水 =70:30。 实施例 19 化合物 A的晶型 I的制备十九

具体实施方法同实施例 7， 体积比， 曱醇 /水 =80:20。 实施例 20 化合物 A晶型 I的稳定性考察

考察条件为高温 60 °C , 放置 5天、 10天后取样， 与 0天样品进行 比较， 测定有关物质、 含量。 在考察期间， 样品用塑料袋外套铝箔密 封包装。

供试品：

无定形的化合物 A (以下简称无定形） ： 自制， 制备方法见前文 所述制备例中无定性的化合物 A 的制备， 纯度 96.66 % , 其批号为 1 10901 ;

化合物 A的晶型 1(以下筒称晶型 I): 由本说明书实施例 1制得， 批号为 20100315-4。

含量测定， 按照中国药典 2010版附录 V D高效液相色谱法， 采用 0天样品作为对照品用外标法进行测定。

操作条件

仪器： 高效液相色谱议 ( Agilent 1200 series )

色谱柱： Agilent C _{1 8} ， 填料为 5 μιη的十八烷基硅烷化硅胶， 内径

4.6 mm , 柱长 150 mm

柱温： 30 °C 流动相： 0.02 M騎酸氢二铵 （磷酸调 pH=5.2 ) ： 乙腈 =100: 7 流速： 1.0 mL/min

进样量： 10

有关物质测定， 按照中国药典 2010版附录 V D高效液相色谱法， 采用面积归一化法进行测定。

操作条件

仪器： 高效液相色谱议 （ Agilent 1200 series )

色谱柱： Agilent C ₁₈ , 填料为 5μηι 的十八烷基硅烷化硅胶， 内径 4.6mm, 柱长 150mm

柱温： 30 °C

流动相： A: 0.02 M磷酸氢二铵 （磷酸调 pH=5.2 ) ： 乙腈 =95: 5

B: 0.02 M磷酸氢二铵（磷酸调 pH=5.2 ) ： 乙腈 =30: 70 梯度条件： 见表 1。

表 1 有关物质测定的色谱梯度条件

流速： 1.0 ml/min

进样量： ΙΟ μΙ

所得试验结果： 见表 2 _t

表 2 稳定性考察结果

备注： 由于化合物 A易水解， 水解后 β内酰胺环打开， 是主要的 有关物质， 简称开环物， 并将开环物的含量作为稳定性考察的一个因 素； 表 2中， 开环％是指开环物的含量； 总％是指总的有关物质的含量; 增加 、％指高温 60Ό放置 5天、 10天后开环物与 0天相比增加的量； 增加. %指高温 60°C放置 5天、 10天后总有关物质与 0天相比增加的量 , 开环物：

由表 2可以看出， 化合物 A的晶型 I和无定形在经过高温 60°C放 置 5天、 10天后含量下降， 有关物质中的开环物和总物质含量均变大。 但是在高温 60 °C放置 5天、 10天后， 晶型 I开环物增加的量较无定形 开环物增加的量小，晶型 I总有关物质含量增加的量较无定形总有关物 质含量增加的量小； 晶型 I含量减少的量较无定形含量减少的量小； 因 此化合物 A的晶型 I与无定形相比， 其有关物质含量增加的少， 晶型 I 含量降低的少， 各方面的性质均比无定形的好， 性质更加稳定。 实施例 21 化合物 A晶型 I的注射剂制备例

1、 处方：

化合物 A晶型 I 250 g (按 C ₂₂ H ₂₈ N ₄ 0 ₇ S ₂ 计）

无水碳酸钠 50 g

共制备 1000支

2、 工艺步骤：

( 1 ) 将制备所用的抗生素玻璃瓶、 胶塞等进行洗涤、 干燥及灭菌 处理；

(2)开启空调及除湿设备， 控制 100级层流室内相对湿度在 50% 以内；

( 3 )按处方称取化合物 A晶型 I及无水碳酸钠， 混合均匀， 得无 菌混合粉末；

(4) 进行半成品检测；

(5) 分装；

(6) 加塞；

. (7) 轧盖；

(8) 成品全检；

(9) 包装入库。 实施例 22 化合物 A晶型 I的抗菌活性考察

供试菌种： 以下临床分离菌株由公众机构提供。 革兰阳性菌： 曱氧西林敏感金黄色葡萄球菌 （MSSA ) 、 青霉 感肺炎链球菌；

革兰阴性菌： ESBLs 阴性大肠埃希菌、 ESBLs 阳性大肠埃希 流感嗜血杆菌、 卡他莫拉菌。

供试品： 化合物 A晶型 I。

实验方法： 采用标准琼脂二倍稀释法。

实验结果和结论：

化合物 A晶型 I对临床分离菌株的抗菌活性

MIC _ft¾ (mg/L) MIC ₉₀ (mg/L)

MSSA 0.062 0.062 青霉素敏感肺炎链球菌 0.008 0.031

ESBLs 阴性大肠埃希菌 0.016 0.016

ESBLs 阳性大肠埃希菌 0.016 0.25

流感嗜血杆菌 0.062 0.125

卡他莫拉菌 0.004 0.008

上述实验结果表明， 化合物 A晶型 I对革兰氏阳性菌和革兰氏阴 性菌均具有强效抗菌作用， 且抗菌谱广， 具有很好的临床应用潜力。

以上对本发明进行了详细的描述和说明， 但本发明并不限于此。 所有对本发明的技术方案所作的修饰、 修改、 改进和变化都落入在此 所附的权利要求书所定义的本发明的精神实质 和范围内。