Titre de l'invention : Eau électrolysée, procédé d’obtention et utilisations d’une telle eau pour le traitement de désordres liés à la sénescence cellulaire

[0001] L’invention a pour objet le domaine du traitement des maladies ou des désordres liés à la sénescence cellulaire, notamment le traitement du cancer ou à des maladies neurodégénératives. L’invention concerne plus particulièrement un procédé d’obtention d’une eau électrolysée utile pour le traitement des maladies ou des désordres liés à la sénescence cellulaire. L’invention concerne également l’eau obtenue par ce procédé, son utilisation pour le traitement des maladies ou des désordres liés à la sénescence cellulaire par application directe ou sous forme de compositions, et un dispositif de traitement des dites affections adapté. L’invention concerne également une méthode de sélection des cellules non sénescentes utiles dans des applications de greffe

[0002] Tel que décrit pour la première fois par Leonard Hayflick en 1961 en étudiant des fibroblastes primaires (WI-38) en culture, les fibroblastes proliféraient pendant un nombre limité de doublements de population avant de rester bloqués irréversiblement dans un plateau d’arrêt de croissance. C’est ce phénomène qu’il appellera la sénescence cellulaire. Ce plateau nommé limite de Hayflick ou plateau de sénescence réplicative est observé pour la plupart des cellules normales (ex. : fibroblastes, cellules endothéliales...).

[0003] La sénescence cellulaire est généralement comprise comme un arrêt définitif du cycle cellulaire découlant de différentes causes. Le mécanisme d'arrêt du cycle cellulaire induit par la sénescence cellulaire est complexe et implique des interactions entre le raccourcissement des télomères, les inflammations et les stress cellulaires.

[0004] En visant la sénescence cellulaire, du fait de son incidence sur des maladies telles que le cancer ou les maladies neurodégénératives liées à l’âge, les chercheurs pensent tenir une piste prometteuse de lutte contre ces maladies alors que l’arsenal thérapeutique classique, qui n’est pas sans effets secondaires, demeure quasi inefficace si l’on considère par exemple la maladie d’Alzheimer.

[0005] On citera la demande US2017198253 qui a pour objet une méthode pour tuer sélectivement des cellules sénescentes et pour traiter des maladies et des troubles associés à la sénescence en administrant un agent sénolytique. Les maladies et les troubles associés à la sénescence pouvant être traités par les procédés utilisant les agents sénolytiques décrits ici comprennent les maladies et les troubles cardiovasculaires associés ou provoqués par une artériosclérose, tels que l'athérosclérose; la fibrose pulmonaire idiopatique; la maladie pulmonaire obstructive chronique; l'arthrose; les maladies et troubles ophtalmiques associés à la sénescence; et les maladies et troubles dermatologiques associés à la sénescence. Les agents sénolytiques sont compris parmi les inhibiteurs MDM2 tels les dérivés de type cis-imidazoline ou encore des inhibiteurs des protéines Bcl-2, Bcl-xL, ou p-Akt.

[0006] On citera aussi la demande WO2018215795 qui concerne un agent destiné à être utilisé pour tuer sélectivement une ou plusieurs cellules sénescentes, ledit agent étant choisi parmi les éléments suivants : un glycoside ou aglycone cardiaque, un inhibiteur de la kinase d'adhésion focale (F AK), un inhibiteur de la HMG-CoA réductase, le JF D00244, la cyclosporine, la tyrphostine AG879, la cantharidine, le chlorure de diphénylèneiodonium, la rottlerine, la 2,3- diméthoxy-1 ,4-naphtoquinone, le LY-367,265, la roténone, l'idarubicine, le chlorure de déqualintum, la vincristine, le nitazoxanide, la nitrofurazone, le temsirolimus, l'eltrombopag, l'adapalène, l'azacyclonol, l'énoxacine et le raltégravir, et leurs sels pharmaceutiquement acceptables. U n autre aspect concerne des composés destinés à être utilisés dans le traitement ou la prévention d'une maladie ou d'un trouble associé à la sénescence, et des procédés associés.

[0007] On citera également la demande US2018256568 qui a pour objet une méthode de traitement d'une maladie ou d'un trouble dans un tissu cible chez un sujet, dans laquelle les symptômes de la maladie ou du trouble sont causés au moins en partie par des cellules sénescentes situées dans ou autour du tissu cible, dans lequel le tissu cible est dépourvu de cancer, et dans lequel les cellules sénescentes sont définies comme des cellules exprimant la protéine p16.

[0008] La méthode comprend l'administration dans ou autour du tissu cible d'une série de traitements avec une composition pharmaceutique qui comprend un agent sénolitique qui entre en contact avec les cellules sénescentes situées dans ou autour du tissu cible et élimine sélectivement ces cellules sénescentes sans affecter si possible les cellules non sénescentes adjacentes. La demande décrit toute une série de molécules chimiques permettant de traiter les cellules sénescentes.

[0009] Bien qu’efficaces, ces solutions n’en présentent pas moins un inconvénient majeur à savoir que ces produits chimiques ne sont pas dénués de toxicité ou d’effets secondaires. Certes ils permettent d’affecter les cellules sénescentes mais on ne peut pas exclure qu’ils affectent aussi les cellules saines ou tissus sains. U n manque de sélectivité lié à l’utilisation des produits chimiques qui peuvent avoir plusieurs cibles protéiques n’est pas sans poser de risque.

[0010] Dans le cas des greffes, que ce soit de peau ou de foie par exemple, l’élimination des cellules sénescentes permettrait, lors de la transplantation ou de la greffe, d’éviter au patient d’avoir, en plus de cellules saines greffées ou transplantées, des cellules sénescentes qui sur le long terme pourraient induire des maladies du fait de leur présence. Cet aspect est aussi un défi de taille à relever. Là encore une sélection des bonnes cellules ou d’un tissu sain exempt de cellules sénescentes via l’utilisation de produits chimiques, pour la greffe ou la transplantation d’un tissu, n’est pas sans poser de problèmes d’effets secondaires ou de toxicité sur les cellules saines ou tissus sains.

[001 1 ] Ainsi il y a un besoin réel de disposer de méthodes ou compositions alternatives permettant sélectivement d’éliminer ou de traiter efficacement les cellules sénescentes et les maladies associées à la présence de ces cellules tout en réduisant les effets secondaires de ces méthodes de traitement ainsi qu’en touchant sélectivement les cellules sénescentes sans, voire très peu, affecter les cellules saines d’un tissu ou d’un organe. [0012] L’un des buts de l’invention est donc de remédier aux inconvénients précités et de répondre aux besoins précités en proposant une eau électrolysée pour le traitement des désordres liés à la sénescence cellulaire.

[0013] Plus particulièrement, un des objets de l’invention est l’utilisation envisagée de l’eau électrolysée selon l’invention dans le traitement de maladies liées à la sénescence cellulaire, comme notamment des cancers ou des maladies neurodégénératives.

[0014] L’eau électrolysée selon l’invention est obtenue par la mise en œuvre d’un procédé en trois étapes qui débute par l’utilisation d’une eau courante ou de source optionnellement additionnée d’un sel de sulfate, de carbonates ou tout autre sel compatible connu de l’homme de métier à la concentration 0.5 à 2g/L suivie d’une électrolyse de ladite eau par un module d’électrolyse comprenant au moins une électrode de diamant dopé au bore fixée sur substrat de silicium dans laquelle la concentration de bore est comprise entre 200 (3x10 ¹⁹ B atomes/cm ³ ) et 2000 ppm (3,52x1 ° B atomes/cm ³ B), notamment entre 200 ppm (3x1019 B atomes/cm3) et 1500 ppm (2x1020 B atomes/cm3), le dit module soumettant l’eau à une quantité de courant lors du processus d’électrolyse inférieure à 500 mAh/L d’eau, plus préférentiellement comprise entre 40 et 250 mAh/L d’eau, encore plus préférentiellement entre 50 et 200 mAh/L, la durée de l’électrolyse étant comprise entre 1 minute et 60 minutes.

[0015] L’électrolyse peut se faire en une fois, de façon continue, ou encore de façon cyclique avec un nombre de cycles compris entre 2 et 12 cycles sur une période de 24 heures, deux cycles consécutifs étant espacés d’au moins 30 minutes.

[0016] L’invention a également pour objet une eau électrolysée obtenue par le procédé décrit précédemment.

[0017] L’invention a également pour objet un procédé d’augmentation du caractère sénolitique de cellules biologiques sénescentes présentes dans un milieu cellulaire, caractérisé en ce qu’il consiste à introduire dans le milieu cellulaire une eau électrolysée obtenue selon le procédé précédemment décrit. Ce procédé consiste particulièrement à augmenter au moins l’activité bêta- galactosidase (SA- -Gal) associée à la sénescence par mise en contact desdites cellules avec l’eau électrolysée ainsi obtenue. Les inventeurs ont en effet découvert que l’eau électrolysée obtenue selon l’invention avait la propriété singulière d’augmenter de manière significative cette activité bêta- galactosidase (SA- -Gal) lorsque des cellules sénescentes telles que présentes notamment dans des fibroblastes étaient mises en contact de ladite eau.

[0018] Avantageusement selon ce procédé, le pourcentage d’eau contenue dans le milieu cellulaire est strictement supérieur à 0, et de préférence supérieur à 5%, de préférence encore supérieur à 25%.

[0019] Avantageusement encore selon le procédé d’augmentation du caractère sénolitique de l’invention, les cellules sénescentes sont maintenues dans le milieu cellulaire au contact de l’eau pendant une durée supérieure à 1 min.

[0020] Une telle augmentation du caractère sénolitique de cellules sénescentes présente l’intérêt majeur de permettre une sélection induite de cellules saines par rapport aux cellules sénescentes par accélération du processus naturel de sénescence dans un milieu cellulaire ou tissu biologique, et donc la disparition accélérée desdites cellules au profit des cellules saines. Ceci ouvre des possibilités exceptionnelles d’utilisation de l’eau de l’invention à des fins prophylactiques, d’aide au traitement thérapeutique, voire de traitement thérapeutique direct.

[0021] L’invention a aussi également pour objet une composition comprenant une eau électrolysée obtenue selon le procédé décrit précédemment pour utilisation en tant que médicament dans le traitement de désordres liés à la sénescence.

[0022] De préférence, les désordres visés par l’utilisation inventive comporte les maladies liées à la sénescence et notamment certains cancers ou les maladies neurodégénératives.

[0023] La composition comprenant de l’eau électrolysée selon l’invention se compose de 95 à 100 % d’eau électrolysée et de 0 à 5 % d’un excipient et/ou d’un émulsifiant.

[0024] La composition selon l’invention peut se présenter sous forme d’une crème, d’un gel, d’un pansement ou encore d’un patch. [0025] Par ailleurs, lorsque la composition selon l’invention peut être exclusivement composée d’eau électrolysée, celle-ci peut être ajoutée à un dispositif la contenant tel un réservoir ou une poche de perfusion contenant l’eau électrolysée pure ou sous forme de composition liquide.

[0026] L’eau électrolysée est obtenue grâce à un module d’électrolyse permettant la mise en œuvre du procédé précédemment décrit, ledit module pouvant être présent de façon fixe ou mobile dans un dispositif tel un réservoir, le dit réservoir pouvant servir à remplir des poches de perfusion sur une ligne de production par exemple.

[0027] Il peut également être présent dans un circuit de distribution classique d’eau, de préférence en sortie de distribution comme un robinet, si l’on considère vouloir préparer une boisson à partir d’eau électrolysée, celle-ci pouvant alors être consommée dans le but de traiter les désordres liés à la sénescence cellulaire par voie orale.

[0028] L’invention a également pour objet une méthode de sélection des cellules non sénescentes dans un extrait cellulaire ou un tissu biologique comprenant plusieurs cellules par mise en contact de celles-ci avec une eau électrolysée obtenue par la mise en œuvre du procédé selon l’invention pendant une durée de 1 à 30 minutes.

[0029] Ainsi l’obtention d’un extrait cellulaire ou d’un tissu sain exempt en totalité ou en grande partie de cellules sénescentes, obtenu par la mise en œuvre de la méthode de sélection précédemment décrite, peut trouver son intérêt dans l’utilisation pour le traitement des greffes notamment de peau ou de foie.

[0030] Les dessins annexés illustrent l’invention :

[0031] [Fig.1] montre l’efficacité de l’eau électrolysée selon l’invention nommée WDW sur des lignées de cellules tumorales de type chondrosarcome en comparaison avec une eau non électrolysée ultra pure MQW.

[0032] [Fig.2] montre la supériorité de l’eau électrolysée obtenue selon le procédé de l’invention, sur la modification de l’activité SA- -Gal dont l’augmentation est témoin de la présence de cellules sénescentes. [0033] La présente invention va être décrite de façon plus détaillée et à l’aide d’un ou plusieurs exemples qui ne limite nullement l’invention.

[0034] En biologie, la sénescence est un processus complexe qui entraîne une lente dégradation des fonctions de la cellule à l'origine du vieillissement des organismes. Il s’agit d’un mécanisme biologique complexe, impliquant la dégradation de nombreux gènes, plus particulièrement au sein des cellules sénescentes. C’est généralement la partie télomérique des chromosomes qui se trouve affectée.

[0035] Un télomère est une région hautement répétitive d'ADN présente à l'extrémité d'un chromosome. À chaque fois qu'un chromosome en bâtonnet d'un eucaryote est répliqué, lors de la mitose appelée également division cellulaire, le complexe enzymatique de l'ADN polymérase s'avère incapable de copier les derniers nucléotides. Les télomères raccourcissent avec l’âge, vraisemblablement sous l’action d’inflammations et/ou de stress répétés que les organismes subissent. Ceci a pour conséquence de voir apparaître au sein d’un organisme, dont les cellules sénescentes sont présentes en grand nombre, des maladies telles que le cancer lié à l’âge ou à des maladies neurodégénératives.

[0036] L’une des caractéristiques principales des cellules sénescentes est qu’elles cessent de se diviser à l’inverse des cellules normales de l’organisme, mais le fait que ces cellules ne se divisent plus a aussi pour conséquence que le mode de fonctionnement de ces cellules diffère des cellules saines ou normales.

[0037] Elles modifient aussi activement leur environnement en sécrétant des cytokines, des facteurs de croissance ainsi que des protéases de la matrice extracellulaire. Ce phénomène joue un rôle important dans la réponse inflammatoire, dans le remodelage de la formation de la matrice extracellulaire et dans le maintien de l’état sénescent qui va se terminer au cours du temps par une dégénérescence tissulaire.

[0038] Dans certains cas, la perte de cellules compétentes en matière de prolifération peut être responsable d'une pathologie, comme cela est suspecté dans le glaucome, les cataractes, le diabète pancréatique ou encore l'arthrose. [0039] Dans d'autres cas, l'inflammation provoquée par la SASP (Phénotype Sécrétoire Associé à la Sénescence) peut jouer un rôle causal dans l’apparition de maladies; les cellules sénescentes ayant un potentiel inflammatoire important vont peu à peu dans l’environnement tissulaire où elles vont « contaminer » en quelque sorte les cellules saines à proximité qui à leur tour deviendront sénescentes comme cela est suspecté dans le cas de maladies telles que l'athérosclérose, les maladies cardiovasculaires ou encore les cancers liés à l’âge.

[0040] De même dans le cas de greffe ou de transplantation de tissu comme la peau ou le foie, voire d’un organe, la présence de cellules sénescentes ayant un pouvoir inflammatoire important peut limiter l’efficacité du greffon sur un sujet ayant besoin d’une greffe avec un tissu le plus « sain » possible (exempt d’un maximum de cellules sénescentes).

[0041] La présente invention concernant une eau électrolysée particulière, obtenue par un procédé mettant en jeu des électrodes particulières de diamant dopé au bore fixée sur du silicium, permet de solutionner, au moins partiellement, les problématiques ou inconvénients précédemment mentionnés.

[0042] Le module d’électrolyse permettant de mettre en œuvre le procédé de préparation de l’eau électrolysée selon l’invention comprend au moins une, préférablement au moins deux électrodes de diamant dopé au bore qui sont fixées sur un substrat de silicium.

[0043] La surface active, ou de contact, de chaque électrode est avantageusement comprise entre et 10 et 100 cm ² , préférentiellement 60 et 80, plus préférentiellement environ 70 cm ² .

[0044] Le dopage au bore de l’électrode de diamant a aussi son importance sur les propriétés de l’eau obtenue ; la concentration de bore est comprise entre 200 ppm (3x10 ¹⁹ B atomes/cm ³ ) et 1500 ppm (2x10 ²⁰ B atomes/cm ³ ).

[0045] Cette concentration en bore ainsi que la nature des électrodes à base de diamant sur silicium lui confère des propriétés lui permettant de fonctionner sur un potentiel compris entre -1 V et -2 V sur la polarisation cathodique et sur +2V et +4V sur polarisation anodique en comparaison à une électrode de référence hydrogène.

[0046] Le module d'électrolyse est connecté à un module d'alimentation électrique et est ouvert à un flux d’eau qui va le traverser. Pour fonctionner correctement et ne pas compromettre les conditions de travail correctes, les électrodes sont alimentées en courant continu par le module d'alimentation qui est connecté au module d'électrolyse fournissant un courant continu à la ou les électrodes. Généralement le courant d’alimentation est fixé entre 1 ,5A et 7A. En cas d'inversion de polarité requise, cette opération peut être effectuée automatiquement par le module d'alimentation.

[0047] L’eau peut provenir de différentes sources mais doit traverser le module d’électrolyse car celui-ci ne peut fonctionner en absence d’eau. Le module d'électrolyse peut être traversé de manière permanente par l'eau en fonction du dispositif dans lequel il se trouve. Un système interne de mesure comprenant un capteur de débit hydraulique est présent, interagissant avec le module d’alimentation et qui permet la mise en veille, l’arrêt ou la mise en marche, du module d’électrolyse en absence ou en présence d’eau, et donc d’activer l’électrolyse.

[0048] Le module d’électrolyse d'eau selon la présente invention peut avantageusement fonctionner en mode automatique ou peut être activé ou désactivé à la demande, manuellement ou à l'aide d'un système de commande à distance.

[0049] Un autre avantage de la présente invention réside dans le fait que le module d’électrolyse d'eau n'a pas nécessairement besoin d'une activation permanente, mais peut être utilement activé de manière cyclique, c'est-à-dire à des intervalles opportuns, de préférence mais pas nécessairement à intervalles réguliers. Il a été constaté que l'électrolyse de l'eau à intervalles réguliers permet à l'eau de rester active thérapeutiquement pendant une longue période. On peut notamment réaliser des cycles d’électrolyse à raison de 2 à 12 cycles sur une période de 24 heures, deux cycles consécutifs étant espacés d’au moins 30 minutes, ce qui permet d’obtenir une eau avec un potentiel thérapeutique. [0050] Le procédé de préparation de l’eau électrolysée selon l’invention à l’aide du module précédemment décrit comporte les étapes suivantes : a. procurer une eau courante ou de source à laquelle optionnellement on additionne un sel de conductivité à une concentration de 0,5 à 2g/L b. réaliser une électrolyse de l’eau ainsi procurée par un dispositif comprenant au moins une électrode de diamant dopé au bore fixée sur substrat de silicium dans laquelle la concentration de bore est comprise entre 200 ppm (3x10 ¹⁹ B atomes/cm ³ ) et 1500 ppm (2x10 ²⁰ B atomes/cm ³ ).

[0051] Avantageusement, la quantité de courant délivrée lors du processus d’électrolyse est comprise entre 15 et 500 mAh/L d’eau, plus préférentiellement 40 à 250 mAh/L d’eau, encore plus préférentiellement 50 à 200 mAh/L ; la durée d’électrolyse étant comprise entre 1 et 60 minutes.

[0052] Le procédé de l’invention permet ainsi d’obtenir une eau propre à une utilisation dans le traitement des maladies ou des désordres liés à la sénescence cellulaire.

[0053] Tel que mentionné précédemment, le traitement des maladies ou des désordres liés à la sénescence cellulaire peut, sans que cela soit limitatif, comprendre le traitement des maladies liées à l’âge telles les maladies neurodégénératives, les affections de la peau mais encore le glaucome, les cataractes, le diabète pancréatique, l'arthrose, l'athérosclérose, les maladies cardiovasculaires ou encore les cancers liés à l’âge. L’eau obtenue selon le procédé de l’invention peut être aussi utile dans le cas de greffe ou de transplantation de tissu comme le foie voire d’un organe ou encore la greffe de peau.

[0054] L’eau ainsi obtenue peut également être utilisée dans différentes formes ou compositions ou au sein de différents dispositifs.

[0055] Les dispositifs utilisés peuvent être sélectionnés parmi un réservoir ou encore une poche de perfusion comprenant l’eau électrolysée telle que décrite précédemment. Le module d’électrolyse utilisé sera alors intégré à un circuit d’eau existant afin de préparer l’eau électrolysée; on peut très bien imaginer aussi le module d’électrolyse raccordé à ou immergé dans un réservoir. [0056] Toute eau, qu’elle soit naturelle, de source ou de réseau communal, peut être utilisée dans le procédé d’obtention de l’eau électrolysée selon l’invention. L’avantage et la flexibilité d’utilisation du module d’électrolyse selon l’invention permet d’obtenir à partir d’une source abondante qu’est l’eau, un traitement moins onéreux car ne nécessitant pas de produits chimiques classiques dans le traitement des maladies ou désordres liés à la sénescence, tout en évitant les effets secondaires desdits produits chimiques.

[0057] L’eau électrolysée, obtenue par le procédé selon l’invention, peut être aussi présente dans des compositions plus classiques que l’on rencontre à la vente dans les officines ou les parapharmacies voire les grandes surfaces, ladite composition comprenant 95 à 100 % d’eau électrolysée et 0 à 5 % d’un excipient et/ou émulsifiant.

[0058] Ladite composition sert pour utilisation en tant que médicament dans le traitement de maladies ou de désordres liés à la sénescence cellulaire, plus particulièrement les cancers liés à l’âge ou les maladies neurodégénératives.

[0059] Elle peut se présenter sous forme d’une crème, d’un gel, d’un pansement, d’un patch, lorsqu’il s’agit par exemple d’éliminer de la peau les cellules sénescentes et de maintenir la peau la plus saine possible comprenant un maximum de cellules saines ou non sénescentes.

[0060] Un autre cas pouvant être considéré plus particulièrement est celui des greffes de cellules de peau, de tissus voire d’organe comme par exemple le foie, est l’utilisation de l’eau électrolysée selon l’invention dans un milieu de culture de cellules, tissu ou organe in vitro.

[0061] Ce milieu de culture comprend le plus souvent en plus de l’eau électrolysée selon l’invention tous les nutriments indispensables au maintien de son activité comme des facteurs de croissance, des nutriments comme les acides aminés, des sels, des additifs éventuellement du sérum d’animaux et d’autres composés comme des sucres ou encore des antibiotiques afin d’éviter la contamination du milieux de culture ainsi que d’autres bien connus de l’homme de métier du domaine des milieux de cultures. [0062] Une autre forme galénique potentielle pour la composition selon l’invention peut être un gel aqueux aussi appelé hydrogel. Un hydrogel est un gel dans lequel l'agent gonflant est l'eau électrolysée selon le procédé de l’invention. La matrice d'un hydrogel est généralement un réseau de polymères qui sont insolubles dans l'eau, mais sont capables de gonfler substantiellement en présence d'une grande quantité d'eau ou de solutions aqueuses.

[0063] Deux exemples de tests biologiques validant le potentiel de l’eau électrolysée sur les cellules sénescentes en présence de cellules saines ont été réalisés.

[0064] Tels que présentés dans les figures 1 et 2, des essais ont été menés afin de valider le potentiel de l’eau électrolysée selon l’invention.

[0065] La figure 1 représente les résultats obtenus lors d’essais comparatifs entre une eau selon l’invention WDW, obtenue selon la mise en œuvre du procédé selon l’invention sous un courant de 62,5 mAh/L, et une eau ultrapure MQW qui est obtenue avec des filtres de la société Millipore, en présence de concentrations variables de H202, les deux eaux étant appliquées sur des cultures de cellules de chondrosarcome de lignée cellulaire JJ012. Le milieu de culture cellulaire est par ailleurs de type EMEM obtenu par mélange de poudres (Thermo Fisher, GIBCO # 41500-034, Penicylin Steptomycin (en anglais) (PenStrep) # 15140122, and 10% Fêtai Bovine Sérum (en anglais) (FBS) # 26140079) et stérilisées et filtrées (filtre de 0,2 um) et contenant les dites cellules.

[0066] Il est flagrant de constater que la disparition des cellules sénescentes est plus importante en présence d’eau WDW, montrant ainsi qu’elle s’avère un moyen efficace de sélection des cellules non sénescentes par rapport à la présence de cellules sénescentes dans un milieu de culture de cellules comprenant aussi bien des cellules non sénescentes que sénescentes.

[0067] Dans la figure 2, on part du principe que les cellules normales peuvent perdre définitivement leur capacité à proliférer lorsqu'elles sont soumises à un stress, processus appelé sénescence cellulaire. L'activité bêta-galactosidase (SA-b- Gal) associée à la sénescence, détectable à pH 6,0, permet l'identification de cellules sénescentes dans des tissus de culture et de mammifères. L'activité a été mesurée avec le kit BioVision (catalogue n ° K821 -100). La bêta- galactosidase (b-Gal, EC: 3.2.1.23) est une enzyme qui hydrolyse les b- galactosides en monosaccharides. La b-Gal associée à la sénescence (SA-b- Gal) est une isoforme de la b-Gal qui présente l'activité optimale à pH 6,0 et qui est principalement utilisée comme biomarqueur pour les cellules sénescentes (K802). La détection est basée sur l'hydrolyse par la bêta-galactosidase d'un substrat non fluorescent pour générer un produit fortement fluorescent. La fluorescéine produite (3', 6'-dihydroxyspiro [isobenzofurane-1 (3H), 9' - [9H] xanthène] -3-one) peut ensuite être mesurée (substrat-fluorescence Galactose+fluorescéine (Ex/Em=480/530 nm). Le test a été réalisé 36 heures après l’induction de H2O2 sous forme de mesures à 530 nm.

[0068] On en déduit qu’en présence d’eaux différentes avec des taux croissants de

H2O2 :

• eau électrolysée obtenue selon la mise en œuvre du procédé selon l’invention (WDW),

• eau ultra pure obtenue avec des filtres de la société Millipore (MQW),

• eau électrolysée obtenue avec une électrode au Niobium (NBW),

• eau électrolysée avec une électrode simple (REW),

• eau courante (TAPW) et

• eau commercial de la société ASEA dite « redox signaling water » ou ASEA® REDOX.

[0069] En utilisant l'activité de SA- b -Gai comme indication / biomarqueur de la sénescence cellulaire, l’expérience décrite en figure 2 confirme que:

1) L’eau électrolysée obtenue par la mise en œuvre du procédé selon l’invention (WDW) est la plus efficace en terme d’élévation de la sénescence cellulaire que les autres eaux électrolysées ou du commerce et ce lorsque la concentration de H202 est de 0 mM correspondant au contrôle.

2) L’eau électrolysée WDW est plus performante que les autres eaux utilisées et ce pour toutes les concentrations de H202 utilisées. 3) Ceci aussi prouve que les eaux utilisées, bien qu’étant composées principalement de molécules d’eau H20, n’ont pas les mêmes propriétés du fait que pour un même type de cellules mise en culture dans les mêmes conditions, leur impact sur l’activité SA- -Gal n’est pas la même. Ainsi il s’agit donc bien pour WDW d’une eau particulière pouvant être considérée comme un produit obtenu par la mise en œuvre de son procédé d’obtention.

[0070] Les exemples d’images et de dispositifs présentés selon l’invention, ainsi que les différents modes de réalisations mentionnés, ne limitent en rien dans sa portée l’invention telle que revendiquée; ils sont donnés à titre d’éclairage afin de mieux comprendre l’invention.