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Title:
HEXAKETIDE COMPOUND AND MEDICINAL USE THEREOF
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2011/140832
Kind Code:
A1
Abstract:
The present invention discloses a compound of general formula (I), or isomer, pharmaceutically acceptable salt and solvate thereof, as well as composition, medicinal use, and preparative method thereof. Said composition further comprises pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents. Said medicinal use is anti-apoptosis, or prophylaxis or treatment of apoptosis related diseases or symptoms, especially protection of myocardial cell, or prophylaxis or treatment of myocardial cell apoptosis related diseases or symptoms.

Inventors:
LI SONG (CN)
ZHONG WU (CN)
LIU JUAN (CN)
WANG LILI (CN)
HE KUNLUN (CN)
LONG LONG (CN)
XIAO JUNHAI (CN)
ZHENG ZHIBING (CN)
LI WEI (CN)
LI XIN (CN)
HU GUOLIANG (CN)
Application Number:
CN2011/000848
Publication Date:
November 17, 2011
Filing Date:
May 16, 2011
Export Citation:
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Assignee:
INST PHARM & TOXICOLOGY AMMS (CN)
LI SONG (CN)
ZHONG WU (CN)
LIU JUAN (CN)
WANG LILI (CN)
HE KUNLUN (CN)
LONG LONG (CN)
XIAO JUNHAI (CN)
ZHENG ZHIBING (CN)
LI WEI (CN)
LI XIN (CN)
HU GUOLIANG (CN)
International Classes:
C07D295/03; A61K31/17; A61K31/5375; A61P9/04; A61P9/10; A61P25/28; A61P31/12; C07C275/20; C07C335/10
Foreign References:
CN1852709A2006-10-25
US5041679A1991-08-20
Other References:
See also references of EP 2570408A4
"Enantiomers, Racemates and Resolution", 1981, WILEY INTERSCIENCE
"Design Of Prodrugs", 1985, ELSEVIER
KREIDER; A. MESSING; H. DOAN; S.U. KIM; R.P. LISAK; D.E. PLEASURE: "Enrichment of Schwann cell cultures from neonatal rat sciatic nerve by differential adhesion", BRAIN RES, vol. 2, 1981, pages 433 - 444, XP024254946, DOI: doi:10.1016/0006-8993(81)90375-9
Attorney, Agent or Firm:
CCPIT PATENT & TRADEMARK LAW OFFICE (CN)
中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 (CN)
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Claims:
木又 利 要 ¾

1. 通式 I化合物 或其异构体、 可药用盐及溶剂化物, 其中:

A代表 =S、 -SR4或 =0;

X代表 F、 Cl、 Br或 I;

R,代表苯基、苯基 -d-Qi烷基、或五元或六元杂环或取代杂环; 当 R1代表苯基 -d-C6烷基时, 其中所述的苯基未被取代或被 1一 4个 (例如 1-2个、 1个、 2个、 3个或 4个)独立地选自下列的取 代基取代: 卤素、 硝基、 羟基、 氨基、 氰基、 d- 烷基、 C C6 烷氧基、 和 -<:6 代坑基, 并且其中所述的烷基、 烷氧基和卤代 烷基可以任选被羟基、 -CKd-C^-烷基、 氧代、氨基、 -NH d-C^- 烷基、 或 -N-Kd-C -烷基】2所取代, 或者所述的烷基、 烷氧基和卤 代烷基任选被 -0-、 -S -、 -NH -、 -COO-、 或 -CONH-所间隔;

当 R1代表五元或六元杂环或取代杂环时, 其中所述的杂环未 被取代或被 1-3个 (例如 1-2个、 1个、 2个、 或 3个)独立地选自下 列的取代基取代: 卤素、 硝基、 羟基、 氨基、 氰基、 ο <:6烷基、 d-C6烷氧基、 和 d-Ce 代烷基, 并且其中所述的烷基、 烷氧基 和卤代烷基可以任选被羟基、 -O d-C -烷基、 氧代、 氨基、

-NH-(CrC4)-烷基、 或 -N-Kd-C^-烷基】2所取代, 或者所述的烷基、 烷氧基和卤代烷基任选被 -0-、 -S -、 -NH -、 -COO-所间隔, 所述杂 环可以为氮氮杂环、 氮氧杂环、 氮碗杂环;

R2、 代表氢、 d- 烷基、 C3-C6环烷基、取代 C3-C6环烷基、 d-Cs烷氧基 d-Q;烷基、 氨基 d-Cfi烷基、 单取代或二取代氨基

C厂 C6烷基、 苯基 d- 烷基、 取代苯基 CrC6烷基、 杂环基 d-Cfi 烷基、 取代杂环基 d-C6烷基、 苯基、 取代苯基、 (^-(^杂环基或 取代(:!-^杂环基, 其中 R2和 R3可以合环;

R4代表 C6烷基。

2. 通式 I化合物, 或其异构体、 可药用盐及溶剂化物, 其中 A代表 =S、 -SR4或 =0;

X代表 F、 Cl、 Br或 I;

代表苯基、 苯基 -C1-C6烷基 -、 其中所述的苯基未被取代或 被 1-4个 (例如 1-2个、 1个、 2个、 3个或 4个)独立地选自下列的 取代基取代: 卤素、硝基、 羟基、氨基、 氰基、 C1-C6烷基、 C1-C6 烷氧基、 和 C1-C6 ¾代烷基, 并且其中所述的坑基、烷氧基和卤代 烷基可以任选被羟基、 -0-(Cl-C4)-烷基、氧代、氨基、 -NH-(C1-C4)- 烷基、 或 -N-[(C1-C6)-烷基】 2所取代, 或者所述的烷基、 烷氧基和 卤代烷基任选被 -0-、 -S -、 -NH -、 -COO-、 或 -CONH-所取代; 噻 吩基、 噻唑基、 其中所述的噻吩基、 噻唑基未被取代或被 1-3个 (例 如 1-2个、 1个、 2个、 或 3个)独立地选自下列的取代基取代: 卤 素、 硝基、 羟基、 氨基、 氰基、 C1-C6烷基、 C1-C6梡氧基、 和 C1-C6卤代烷基, 并且其中所述的烷基、 烷氧基和卤代烷基可以任 选被羟基、 -0-(Cl-C4)-烷基、 氧代、 氨基、 -NH-(C1-C4)-烷基、 或 -N-[(C1-C6)-烷基】 2所取代, 或者所述的烷基、 烷氧基和卤代烷基 任选被 -0-、 -S -、 -NH-> -COO-所间隔;

R2、 R3代表氢、 C1-C6烷基、 C3-C6环烷基、 取代 C3-C6环烷 基、 C1-C6烷氧基 C1-C6梡基、 氨基 C1-C6垸基、 单取代或二取代 氨基 C1-C6烷基、 苯基 C1-C6烷基、取代苯基 C1-C6烷基、 杂环基 C1-C6坑基、 苯基、 取代苯基、 杂环基或取代杂环基, 其中 和 R3可以合环成饱和环烷烃、 含氮或含氧杂环;

R4代表甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 丁基或戊基。

3. 通式 I化合物, 或其异构体、 可药用盐及溶剂化物, 其中 A代表 =S、 -SR4或 =0;

X代表 C1;

Ri代表苯基或 2-噻吩基;

R2、 R3代表氢、 甲基、 异丙基、 2-甲氧基乙基、 3-异丙氧基丙 基、 2-N,N-二甲基乙基、 环己基、 环庚基、 邻甲氧基苯基、 邻氟苯 基、 邻氯苯基、 对氯苯基、 苄基或 8-喹啉基, 其中 和 可以合 环成哌啶环、 吗啉环或 N-甲基哌嗪环;

R4代表甲基或乙基。

4. 具有下述结构的权利要求 1的化合物, 或其异构体、 可药用 盐及溶剂化物:

( 1 )(1E)-1-苯基 -5-(1-吗淋基疏代曱酰氨基) -6,6,6-三氯 -1-烯 -3- 己酮。

5. 药物组合物, 其包含权利要求 1 - 4任一项所述化合物或其异 构体、 可药用盐及溶剂化物, 以及药学上可接受的载体、 赋形剂或 稀释剂。

6. 权利要求 1-4任一项所述化合物或其异构体,可药用盐及溶 剂化物, 用于制备抗细胞凋亡、 预防或治疗与细胞凋亡有关的疾 病或症状的药物的用途。

7. 权利要求 1-4任一项所述化合物或其异构体,可药用盐及溶 剂化物, 用于制备保护心肌细胞、 预防或治疗与心肌细胞凋亡有 关的疾病或症状的药物的用途。

8. 一种抗细胞凋亡、 预防或治疗与细胞凋亡有关的疾病或症 状的方法, 所述方法包括向有此需要的受试者给予治疗有效量的 权利要求 1-4 任一项所述化合物或其异构体, 可药用盐及溶剂化 物。

9. 一种保护心肌细胞、 预防或治疗与心肌细胞凋亡有关的疾 病或症状的方法, 所述方法包括向有此需要的受试者给予治疗有 效量的权利要求 1-4任一项所述化合物或其异构体,可药用盐及溶 剂化物。

10. 制备权利要求 1 - 4任一项所述化合物或其异构体, 可药用 盐及溶剂化物的方法, 其包括本以苯甲醛为起始原料, 与丙酮在氢 氧化钠的曱醇溶液中反应生成(IE ) -1-苯基 1-烯 -3-丙酮, 再经过 LDA催化下与三氯乙醛反应, 得到中间体 1, 经过氯化亚砜氯代, 再与硫氰酸钟反应生成中间体 2, 最后与吗啉在四氢呋喃中回流得 到目标化合物。

Description:
己烯酮类化合物及其医药用途 技术领域

本发明涉及医药化学领域, 具体地, 本发明涉及己烯酮类化合 物及其药物组合物,本发明还涉及所述化合物 及其药物组合物用于 抗细胞凋亡, 预防或治疗与细胞凋亡有关的疾病或症状的用 途, 特别是用于保护心肌细胞和预防或治疗与心肌 细胞凋亡有关的疾 病或症状中的用途。 背景技术

细胞凋亡一般是指机体细胞在发育过程中或在 某些因素作用 下, 通过细胞内基因及其产物的调控而发生的一种 程序性细胞死 亡。 细胞凋亡普遍存在于生物界, 既发生于生理状态下, 也发生于 病理状态下。 对胚胎发育及形态发生、 组织内正常细胞群的稳定、 机体的防御和免疫反应、 疾病或中毒时引起的细胞损伤、 老化、 肿 瘤的发生进展起着重要作用, 一直是生物医学研究的热点。

研究表明, 有很多重大疾病的发生都与细胞过度凋亡有关 , 例 如在艾滋病的发展过程中, CD4+ T细胞数目的减少; 移植排斥反 应中, 细胞毒性 T细胞介导的细胞死亡; 缺血及再灌注损伤, 心肌 细胞和神经细胞的凋亡; 神经系统退化性疾病 (如阿尔海默次病、 帕金森氏症等) ; 暴露于电离辐射引起的多种组织细胞凋亡等。

有证据表明, 心肌细胞凋亡与许多心脏疾病的发生、 发展和 预后有着密切的关系。 通过研究心肌细胞凋亡发现梗死的心肌死 亡不等于心肌坏死, 凋亡是心肌梗死的机制之一, 而且是梗死早 期心肌死亡及缺血 /再灌注所致的心肌死亡的主要方式,此时心 的大量凋亡, 加重了心肌的破坏。 1989年, Nepomniashchikh 观察饥饿性心肌萎缩超微结构时发现, 心肌细胞结构蛋白合成降 低, 细胞数减少, 但不伴细胞核相应成比例地减少, 由此初步提 出饥饿性心肌萎缩是由细胞凋亡所致。 1994 年, Gottlieb 和 Kawano等采用电镜结合 DNA凝胶电泳方法取得了心肌细胞凋亡 的直接证据, 前者揭示再灌注损伤诱发兔心肌细胞凋亡, 后者证 实心肌炎患者伴发心肌细胞凋亡。 Tanaka等培养的乳鼠心肌细胞 中,也证明了凋亡的存在。 由于方法学的进步和凋亡的研究深入, 已在多种心脏病中发现心肌细胞凋亡的病理作 用。 研究表明, 自 发性高血压小鼠 (SHR)心脏损害与凋亡有关; 晚期由肥厚心脏转 向心力衰竭为心肌细胞凋亡所致; 急性心梗除坏死外, 梗塞早期 和再灌注损伤也诱发凋亡; 心肌细胞凋亡同样见于移植的心脏和 右室发育不良性心肌病, 缺氧同样诱导心肌细胞凋亡。

凋亡在某种程度上具有可复性, 心肌梗死和缺血 /再灌注中的 细胞凋亡有其特点和规律,利用其特点可以预 防和减少细胞凋亡, 为临床预防缺血 /再濯注损伤提供启示; 在再灌注过程中, 产生收 缩带区域(梗死灶周围) 的细胞凋亡是由一些诱因诱导产生的, 可以利用凋亡的抑制因素如药物等来预防凋亡 , 治疗凋亡引起的 相应疾病。

但目前可供临床应用的用于抗细胞凋亡和保护 细胞的药物种 类和数量还很少, 选择性和靶向性都不高, 因此不断研究开发新的 安全有效的抗细胞凋亡和保护细胞的药物, 尤其是具有全新作用机 制的药物具有十分重要的意义。 发明内容

为了开发新的安全有效的抗细胞凋亡和保护细 胞的药物,发明 人经过长期、 大量的实验研究, 发现了一类己烯酮类化合物, 其具 有抗细胞凋亡,保护心肌细胞的作用, 能够用于预防或治疗与心肌 细胞凋亡有关的疾病或症状。 具体地,

本发明的第一方面涉及通式 I所示的化合物, 或其异构体、可 药用盐及溶剂化物。

其中

A代表 =S、 -SR4或 =0 ;

X代表 F、 Cl、 Br或 I;

代表苯基、 苯基 - C6烷基-、 其中所述的苯基未被取代或 被 1-4个 (例如 1-2个、 1个、 2个、 3个或 4个)独立地选自下列的 取代基取代: ή素、 硝基、 羟基、 氨基、 氰基、 C C6烷基、 d-C 6 烷氧基、 和^-^面代焼基, 并且其中所述的烷基、 烷氧基和卤代 烷基可以任选被羟基、 - Hd-C^-烷基、氧代、氨基、 -NH d-C - 烷基、 或 -N-Kd-C^)-烷基】 2 所取代, 或者所述的烷基、 烷氧基和卤 代烷基任选被 -0-、 -S -、 -NH -、 -COO-、 或 -CONH-所间隔; 五元 或六元杂环或取代杂环;其中所述的杂环未被 取代或被 1-3个 (例如 1-2个、 1个、 2个、 或 3个)独立地选自下列的取 ^基取代: 卤素、 硝基、 羟基、 氨基、 氰基、 C1-C6烷基、 C1-C6坑氧基、 和 C1-C6 卤代烷基, 并且其中所述的烷基、 烷氧基和 ^代烷基可以任选被羟 基、 -0-(Cl-C4)-垸基、 氧代、 氨基、 -NH-(C1-C4)-烷基、 或

-N-[(C1-C6)-烷基】 2所取代, 或者所述的烷基、 垸氧基和卤代烷基 任选被 -0-、 -S -、 -NH -、 -COO-、 , 所述杂环可以为氮氮杂环、 氮 氧杂环、 氮硫杂环;

R 2 、 R 3 代表氢、 C1-C6烷基、 C3-C6环烷基、 取代 C3-C6环 烷基、 C1-C6烷氧基 C1-C6烷基、 氨基 C1-C6烷基、 单取代或二 取代氨基 C1-C6烷基、 苯基 C1-C6烷基、 取代苯基 C1-C6烷基、 杂环基 C1-C6烷基、 取代杂环基 C1-C6烷基、 苯基、 取代苯基、 C1-C6杂环基或取代 C1-C6杂环基, 其中 R 2 和 R 3 可以合环;

R4代表 烷基。

优选如下的通式(I )化合物, 或其异构体、 可药用盐及溶剂 化物, 其中:

A代表 =S、 -SR4或 =0 ;

X代表 F、 Cl、 Br或 I;

代表苯基、 苯基 -C1-C6烷基 -、 其中所述的苯基未被取代或 被 1-4个 (例如 1-2个、 1个、 2个、 3个或 4个;)独立地选自下列的 取代基取代: 卤素、硝基、 羟基、氨基、 氰基、 C1-C6烷基、 C1-C6 烷氧基、 和 C1-C6 代烷基, 并且其中所述的烷基、烷氧基和卤代 烷基可以任选被羟基、 -0-(Cl-C4)-烷基、氧代、氨基、 -NH-(C1-C4)- 烷基、 或 -N-[(C1-C6)-烷基】 2所取代, 或者所述的烷基、 烷氧基和 卤代烷基任选被 -0-、 -S -、 -NH -、 -COO-、 或 -CONH-所取代; 噻 吩基、 噻唑基、 其中所述的噻吩基、 噻唑基未被取代或被 1-3个 (例 如 1-2个、 1个、 2个、 或 3个)独立地选自下列的取代基取代: 卤 素、 硝基、 羟基、 氨基、 氰基、 C1-C6坑基、 C1-C6烷氧基、 和 C1-C6 代烷基, 并且其中所述的烷基、 烷氧基和 ¾代烷基可以任 选被羟基、 -0-(Cl-C4)-烷基、 氧代、 氨基、 -NH-(C1-C4)-烷基、 或 -N-[(C1-C6)-烷基] 2所取代, 或者所述的烷基、 烷氧基和卤代烷基 任选被 -0-、 -S -、 -NH -、 -COO-; R 2 、 R 3 代表氢、 C1-C6坑基、 C3-C6环烷基、 取代 C3-C6环烷 基、 C1-C6烷氧基 C1-C6烷基、 氨基 C1-C6烷基、 单取代或二取代 氨基 C1-C6烷基、 苯基 C1-C6烷基、取代苯基 C1-C6烷基、 杂环基 C1-C6烷基、 苯基、 取代苯基、 杂环基或取代杂环基, 其中 和 R 3 可以合环成饱和环烷烃、 含氮或含氧杂环;

R 4 代表甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 丁基或戊基。

特别优选如下的通式(I )化合物, 或其异构体、 药用盐及溶 剂化物, 其中:

A代表 =S、 -SR4或 =0;

X代表 C1;

Ri代表苯基或 2-噻吩基;

R 2 、 R 3 代表氢、 曱基、 异丙基、 2-曱氧基乙基、 3-异丙氧基丙 基、 2-N,N-二曱基乙基、 环己基、 环庚基、 邻甲氧基苯基、 邻氟苯 基、 邻氯苯基、 对氯苯基、 苄基或 8-喹啉基, 其中 R 2 和 R 3 可以合 环成哌啶环、 吗啉环或 N-甲基哌嗪环;

R 4 代表甲基或乙基。

通式(I )化合物, 或其异构体、 可药用盐及溶剂化物, 特别 优选下面的化合物:

(1E)-1-苯基 -5-(1-吗啉基硫代曱酰氨基 )-6,6,6-三氯 -1-烯 -3-己 酮。

以化合物 (1)为例, 本发明化合物以苯甲醛为起始原料, 与丙酮 在氢氧化钠的甲醇溶液中反应生成(IE ) -1-苯基 1-烯 -3-丙酮, 再 经过 LDA催化下与三氯乙醛反应, 得到中间体 1, 经过氯化亚砜 氯代, 再与硫氰酸钾反应生成中间体 2, 最后与吗啉在四氢呋喃中 回流得到化合物 (1 ) 。

本发明另一方面涉及药物组合物, 其包含通式 ( I ) 所示化 合物, 或其异构体、 可药用盐及溶剂化物, 以及药学上可接受的载 体、 赋形剂或稀释剂。

本发明还涉及第一方面所述通式( I )化合物或其异构体、 可 药用盐及溶剂化物,用于制备抗细胞凋亡,预 防或治疗与细胞凋亡 有关的疾病或症状的药物的用途。

本发明还涉及第一方面所述通式( I )化合物或其异构体、 可 药用盐及溶剂化物,用于制备保护心肌细胞和 预防或治疗与心肌细 胞凋亡有关的疾病或症状的药物的用途。

本发明还涉及一种抗细胞凋亡、 预防或治疗与细胞凋亡有关 的疾病或症状的方法, 所述方法包括向有此需要的受试者给予治 疗有效量的本发明第一方面所述通式 ( I )化合物或其异构体, 可药用盐及溶剂化物。

本发明还涉及一种保护心肌细胞、 预防或治疗与心肌细胞凋 亡有关的疾病或症状的方法, 所述方法包括向有此需要的受试者 给予治疗有效量的本发明第一方面所述通式 ( I )化合物或其异 构体, 可药用盐及溶剂化物。

本发明所述与细胞凋亡有关的疾病或症状包括 :心血管疾病, 神经退行性疾病, 多发性硬化症, 病毒性感染等。

本发明所述与心肌细胞凋亡有关的疾病或症状 包括但不限于 ( i )饥饿性心肌萎缩, (ii )心肌炎, (iii ) 心力衰竭, (iv )原 发性高血压引起的心肌损伤, (V)急性心梗早期引起的心肌损伤,

( vi )急性心梗再灌注引起的心肌损伤,(vii)心脏 植引起的心肌 细胞病变,(viii)发育不良性心肌病; 或缺氧引起的心肌细胞凋亡, 或心血管系统硬化。

根据本发明, 术语"杂环"包括但不限于: 吡啶、 吡咯、 呋喃、 噻吩、 吡唑、 咪唑、 噻唑、 唑、 异唑、 吲哚、 苯并呋喃、 苯并咪 唑、 咔唑、 漆、 嘧 、 吡噪、 会啉、 异会啉、 嘌呤、 哈 漆、 吩噪。

本领域技术人员应该认识到通式 I化合物存在手性中心。 当 需要通式 I化合物为单一的对映体时, 可以使用在所有可能的步 骤中均处于单一对映异构体形式的反应物来制 备, 或者在单一对 映异构体形式的试剂或催化剂的存在下进行反 应来制备, 或者通 过常规方法拆分立体异构体混合物来制备。 一些优选的方法包括 使用微生物进行拆分, 拆分与手性酸如扁桃酸、 樟脑磺酸、 酒石 酸、 乳酸等任何可使用的酸形成的非对映异构体的 盐, 或者拆分 与手性碱如番木鳖碱 (bracine)、 金鸡纳树生物碱及其衍生物等形 成的非对映异构体的盐。 常用的方法见 Jaques 等人编辑的 "Enantiomers, Racemates and Resolution"(Wiley Interscience, 1981)。

本领域技术人员应该意识到, 本发明化合物也可以以其可药 用盐或溶剂化物的形式使用。 通式 I化合物的生理学上可接受的 盐包括由药学上可接受的无机酸或有机酸或者 无机碱或有机碱形 成的常规的盐以及季铵的酸加成盐。 合适的酸盐的更具体的例子 包括盐酸、 氢溴酸、 硫酸、 磷酸、 硝酸、 高氯酸、 富马酸、 乙酸、 丙酸、 琥珀酸、 羟基乙酸、 甲酸、 乳酸、 马来酸、 酒石酸、 拧檬 酸、 朴酸、 丙二酸、 羟基马来酸、 苯乙酸、 谷氨酸、 苯甲酸、 水 杨酸、 富马酸、 甲苯磺酸、 曱磺酸、 萘 -2-磺酸、 苯磺酸、 羟基萘 曱酸、 氢碘酸、 苹果酸、 steroic、 鞣酸等的盐。 其它的酸, 如草 酸, 虽然其本身并非药学上可接受的, 但可以用于制备用作中间. 体的盐, 以获得本发明化合物及其可药用盐。 合适的碱盐的更具 体的例子包括钠、 锂、 钾、 镁、 铝、 钙、 锌、 N,N,-二苄基乙二胺、 氯代普鲁卡因、 胆碱、 二乙醇胺、 乙二胺、 N-曱基葡糖胺和普鲁 卡因盐。 此后涉及到本发明的化合物时, 包括通式 I化合物及其 可药用盐和溶剂化物。

本发明还包括本发明化合物的前药,该前药一 经给药, 即通 过代谢过程进行化学转化, 之后变成具有活性的药物。 通常, 这 类前药是本发明化合物的功能性衍生物, 其在体内容易转化成所 需的式 (I)的化合物。 例如, 在" Design Of Prodrugs" , H Bund Saard, Elsevier编辑, 1985中描述了选择和制备适宜前药衍生物 的常规方法。

本发明也包括本发明化合物的活性代谢物。

本发明的另一个方面涉及药物组合物, 其含有本发明化合物 的消旋体或旋光异构体和至少一种药学上可接 受的载体, 其可用 于体内治疗并具有生物相容性。 所述药物组合物可以根据不同给 药途径而制备成各种形式。 本发明所提及的化合物也可以被制备 成各种药学可接受的盐。

本发明的药物组合物包括有效剂量的本发明通 式 I化合物或 其可药用盐或水合物和一种或多种适宜的可药 用载体。 这里的药 用载体包括但不限于: 离子交换剂, 氧化铝, 硬脂酸铝, 卵磷脂, 血清蛋白如人血白蛋白, 緩冲物质如磷酸盐, 甘油, 山梨酸, 山 梨酸钾, 饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物, 水, 盐或电解质, 如硫酸鱼精蛋白, 磷酸氢二钠, 磷酸氢钾, 氯化钠, 辞盐, 胶态 二氧化硅, 三硅酸镁, 聚乙烯吡咯烷酮, 纤维素物质, 聚乙二醇, 羧甲基纤维素钠, 聚丙烯酸酯, 蜂蜡, 羊毛脂。

本发明化合物的药物组合物可以以下面的任意 方式施用: 口 服, 喷雾吸入, 直肠用药, 鼻腔用药, 颊部用药, 局部用药, 非 肠道用药, 如皮下、 静脉、 肌内、 腹膜内、 鞘内、 心室内、 胸骨 内和颅内注射或输入,或借助一种外植储器用 药。其中优选口服、 腹膜内或静脉内给药方式。

当口服用药时,本发明化合物可制成任意口服 可接受的制剂 形式,包括但不限于片剂、 胶嚢、 水溶液或水悬浮液。 其中, 片剂 使用的载体一般包括乳糖和玉米淀粉, 另外也可加入润滑剂如硬 脂酸镁。 胶嚢制剂使用的稀释剂一般包括乳糖和干燥玉 米淀粉。 水悬浮液制剂则通常是将活性成分与适宜的乳 化剂和悬浮剂混合 使用。 如果需要, 以上口服制剂形式中还可加入一些甜味剂、 芳 香剂或着色剂。

当局部用药时,特别是治疗局部外敷容易达到 的患面或器官, 如眼睛、 皮肤或下肠道神经性疾病时, 可根据不同的患面或器官 将本发明化合物制成不同的局部用药制剂形式 , 具体说明如下: 当眼部局部施用时, 本发明化合物可配制成一种微粉化悬浮 液或溶液的制剂形式,所使用载体为等渗的一 定 pH的无菌盐水, 其中可加入也可不加防腐剂如氯化苄基烷醇盐 。 对于眼用, 也可 将化合物制成膏剂形式如凡士林膏。

当皮肤局部施用时, 本发明化合物可制成适当的软膏、 洗剂 或霜剂制剂形式, 其中将活性成分悬浮或溶解于一种或多种载体 中。 软膏制剂可使用的载体包括但不限于: 矿物油, 液体凡士林, 白凡士林, 丙二醇, 聚氧化乙烯, 聚氧化丙烯, 乳化蜡和水; 洗 剂或霜剂可使用的栽体包括但不限于: 矿物油, 脱水山梨糖醇单 硬脂酸酯, 吐温 60, 十六烷酯蜡, 十六碳烯芳醇, 2-辛基十二烷 醇, 苄醇和水。

本发明化合物还可以无菌注射制剂形式用药, 包括无菌注射 水或油悬浮液或无菌注射溶液。 其中, 可使用的载体和溶剂包括 水、 林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。 另外, 灭菌的非挥发油也可 用作溶剂或悬浮介质, 如单甘油酯或二甘油酯。

另外需要指出, 本发明化合物的使用剂量和使用方法取决于 诸多因素, 包括患者的年龄、 体重、 性别、 自然健康状况、 营养 状况、 化合物的活性强度、 服用时间、 代谢速率、 病症的严重程 度以及诊治医师的主观判断。 发明的有益效果

本发明提供了一种己烯酮类化合物, 并证明其具有抗细胞凋 亡和保护细胞的作用, 为治疗细胞凋亡引起的疾病或症状, 特别 是治疗心肌细胞凋亡引起的疾病或症状提供了 新的方法和途径。 具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详 细描述, 但是 本领域技术人员将会理解, 下列实施例仅用于说明本发明, 而不 应视为限定本发明的范围。 实施例中未注明具体条件者, 按照常 规条件或制造商建议的条件进行。 所用试剂或仪器未注明生产厂 商者, 均为可以通过市购获得的常规产品。

化合物的熔点由 RY-1熔点仪测定, 温度计未较正。 质谱由 Micromass ZabSpec 高分辨率质镨仪(分辨率 1000 ) 测定。 'Η NMR由 JNM-ECA-400超导 NMR仪测定, 工作频率 H NMR 400MHz, 13 C NMR 100MHz o 实 施 例 1 (1E)-1-苯基 -5-(l-吗啉基硫代甲酰氨基 )-6,6,6-三氯 -1一烯 _3-己酮

将丙酮 3ml加入 10%NaOH水溶液 4.80g中, 30。C搅拌 5分钟, 滴入苯曱醛 lml, 室温搅拌 3小时。 反应液分层, 取有机层用展开 剂石油醚: 乙酸乙酯 =20: 1洗脱, 得黄色晶体(IE ) -1-苯基小烯 -3-丁酮 1.00g。 氮气保护下将二异丙胺 0.64g溶于 lOmlTHF中, 降 温至 -40°C, 滴入正丁基锂 0.40g, 搅拌 30分钟再降温至 -78。C , 将 ( IE ) -1-苯基 -1-烯 -3-丁酮 0.84 溶于 15mlTHF中 , 滴入 LDA溶 液中, -78。C反应 40分钟, 将三氯乙醛 1.19g溶于 15mlTHF中, 滴 入上述反应液, -78。C反应 12小时。 升温至 -40 °C滴入 20ml饱和 NH 4 C1水溶液, 搅拌 30分钟, 升至室温加入 20ml乙酸乙酯萃取, 将有机层用展开剂石油醚:乙酸乙酯 =6: 1洗脱,得淡黄色晶体(1E ) -1-苯基 -5-羟基 -6, 6, 6-三氯 -1-烯 -3-己酮 1.49g。将其溶于 20mlTHF 中加入氯化亚砜 1.1ml回流 6小时, 将反应溶剂蒸干, 残余物溶于 20ml丙酮中再加入 0.74gKSCN, 40。C搅拌 1.5小时, 停止反应后 用展开剂石油醚: 乙酸乙酯 =30: 1洗脱, 得淡黄色固体(IE ) -1- 苯基 -5-异硫氰酸基 -6,6, 6-三氯 -1-烯 -3-己酮 1.2g。取 0.33g与 0.06ml 吗啉在 THF中回流 1小时, 析出白色固体, 用 THF重结晶得纯品 O.lOgo 1 H-NMR(400MHz,DMSO-i 6 )63.28-3.43(m,4H);63.46-3.58 (m,4H);63.68-3.74(m,2H);63.81-3.87(m,2H);66.27-6.29(m,lH);67 .02 -7.06(d,lH);67.43-7.46(t,3H);

87.60-7.64(d,lH);S7.21-7.74(m,2H);S8.03-8.05(d,lH)。 MS(TOF) 421.7 (M+)。 实 施 例 2 化合物保护心肌细胞活性实验

心肌细胞原代培养

心肌细胞的分离和培养参照差速贴壁分离的方 法 ( Krdder, A. Messing, H. Doan, S.U. Kim, R.P. Lisak and D.E. Pleasure,

Enrichment of Schwann cell cultures from neonatal rat sciatic nerve by differential adhesion, Brain Res 2 (1981), pp. 433-444. ) , 取 24h内新生的 Wistar乳鼠, 经碘酒酒精消毒胸腹部皮肤, 用剪 刀在剑突下正中线稍偏左开胸, 斜开胸取出心脏置于冰预冷 PBS 中; 用 0.01M 的 PBS轻轻吹打心脏去除血液细胞和其他组织, 将 心脏剪成 0.5mm 3 大小的碎块, 用 0.01M PBS反复冲洗 2-3次; 将 碎块置于雉形瓶中,加入 4ml 0.125%胰酶, 1ml 0.1%胶原酶 II (终 浓度分别为 0.1%和 0.02% ) 37。C水浴震荡 lOmin , 弃上清; 再次 加入 4ml 0.125%胰酶, 1ml 0.1%胶原酶 II, 37°C水浴震荡消化 lOmin , 吸取上清移至离心管, 将上清加入含 10% FBS的 DMEM 终止消化; 重复水浴震荡消化步骤 3-4次, 直至组织块完全消化为 止; 将收集的细胞悬液以 1000rpm离心 lOmin后, 去上清, 再加 培养基重悬; 将重悬的细胞接种到细胞培养瓶中, 置于 37°C C02 孵箱中孵育 1.5h后将培养液吸出, 在显微镜下计数后, 用含 10% FBS的 DMEM 培养液调整细胞密度, 按 l xlO 4 接种到 96孔板, 置于 37。C 5%C02孵箱中 24h后半量换液, 补加含 0.1% Brdu的 培养基; 之后每 48h后换液 1次, 培养 4天后即可获得原代心肌细 胞。 细胞抑制率 (MTT ) 测定

将分离的原代培养心肌细胞按照每孔 10 4 个细胞接种到 96孔 板,每孔体积 100ul (边缘孔用无菌 PBS填充)。在 5%CO¾, 37 °C 孵箱培养 4d后, 分别加入不同浓度的实施例 1 的通式 I化合物 ( 0·3μΜ、 1μΜ、 3μΜ、 10μΜ、 30μΜ、 ΙΟΟμΜ ) , 每个浓度设 置 3个复孔, 同时设置调零孔(培养液、 MTT、 DMSO ) , 对照 孔(培养液、 DMSO )。继续孵育处理 48 h后,每孔加入 20ulMTT 溶液(5mg/ml, 用 PBS ( pH=7.4 ) 配即 0.5%MTT ) , 继续培 养 4h。 终止培养, 小心吸去孔内培养液。 每孔加入 150ulDMSO, 置摇床上低速振荡 10min, 使结晶物充分溶解。 在酶联免疫检测 仪于波长 550nm处测定各孔吸光度( OD )值, 每孔重复 5次并 记录结果。 结果见表 1。

MTT法检测不同浓度化合物对心肌细胞存活率的 影响

结果表明: 实施例 1化合物在 300μΜ浓度内对正常心肌细胞 的存活率没有影响。 保护心肌细胞活性测定 -保护由 TG诱导的心肌细胞凋亡活性 心肌细胞按照上述方法原代培养 4天开始加毒胡萝卜内酯

( thapsigargin, TG )诱导细胞凋亡, 在诱导细胞凋亡前 30min加 本发明化合物进行预处理。 细胞随机分成 5组: (1 )溶剂对照组 ( DMSO ) ; ( 2 ) TG干预组( 0.4uM ) ; ( 3 ) TG ( 0.4uM ) + 化合物干预组( 0.3uM ) ; ( 4 ) TG ( 0.4uM ) +化合物干预组( luM ); ( 5 ) TG ( 0.4uM ) +化合物干预组( 3uM ) 。 TG用 DMSO配制, 母液为 4mM, 本发明化合物用 DMSO配制, 母液为 150mM。 按 照上述 MTT法测定细胞存活率, 从而测定本发明化合物对 TG诱 导心肌细胞凋亡的保护作用, 结果见表 2。

表 2 MTT法检测不同浓度化合物对 TG诱导的心肌细胞存活率 的影响

注: 细胞存活率 =1-细胞抑制率

实验结果: 与单加入 TG组相比, 在同时加入 TG和实施例化 合物时, 心肌细胞存活率有明显提高, 表明表 2中所述实施例化合 物能够明显改善 TG引起的细胞凋亡作用, 对心肌细胞具有保护作 用。 尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描 述, 本领域技 术人员将会理解。 根据已经公开的所有教导, 可以对那些细节进 行各种修改和替换, 这些改变均在本发明的保护范围之内。 本发 明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物 给出。