La présente invention concerne le domaine des anticorps monoclonaux à visée thérapeutique, en particulier les IgGl .

Les anticorps monoclonaux représentent actuellement une alternative thérapeutique de première importance dans le traitement d'affections extrêmement diverses. La capacité des anticorps à reconnaître spécifiquement un antigène par leur portion Fab et à recruter des effecteurs de l'immunité par leur portion Fc permet dans de nombreux cas de traiter ces maladies selon une balance bénéfice-risque favorable.

L'efficacité des traitements par des anticoips monoclonaux thérapeutiques est influencée par la dose administrée et la fiéquence d'administration de l'anticorps. Comme pour tout traitement, le maintien de l'efficacité du traitement associé à une diminution de la dose d'anticorps thérapeutique administrée ou de la fréquence d'administration est fortement souhaitable, tant du point de vue économique que pour le confort du patient.

La dose administrée et la fréquence d'administration dépendent de nombreux facteurs, parmi lesquels figure notamment la demi-vie de l'anticorps thérapeutique dans l'organisme du patient traité. Une augmentation de la demi-vie de l'anticorps dans l'organisme du patient permet ainsi de réduire la dose unique administrée, mais également d'augmenter l'intervalle entre deux administrations.

Les IgGl (Immunoglobulines G de sous-classe 1) sont constituées d'un assemblage de deux dimères, constitués chacun d'une chaîne lourde yl et d'une chaîne légère assemblées par un pont disulfure. Ces deux dimères sont assemblés entre eux par deux ponts disulfures entre les chaînes lourdes.

Chacune des chaînes lourdes et des chaînes légères est constituée d'une partie constante dénommée respectivement CH pour la chaîne lourde (contenant trois domaines CHl, CH2 et CH3) et CL pour la chaîne légère (contenant un seul domaine), et d'une partie variable dénommée VH pour la chaîne lourde et VL pour la chaîne légère. L'assemblage des chaînes qui composent un anticoips définit une structure tridimensionnelle constituée de trois bras de taille à peu près égale (comprenant chacun 4 domaines). Ces bras sont réunis par une charnière, et se répartissent entre deux bras Fab (antigen binding) et un bras Fc (cristallisable). Le bras Fc est constitué des domaines CH2 et CH3 des deux chaînes lourdes. Chaque bras Fab est constitué à son extrémité libre des domaines variables de chaînes légères et lourdes, chacun relié respectivement aux domaines CL et CHl, ce dernier assurant la liaison avec la charnière. De manière générale, la région variable est impliquée dans la reconnaissance d'un épitope et la portion Fc constitue le support des propriétés biologiques de l'immunoglobuline, en particulier sa capacité à être reconnue par les effecteurs cellulaires de l'immunité (tels que les cellules effectrices exprimant des récepteurs Fcy), à activer le complément et à se lier au FcRn {Neonatal Fc receptor).

Il est aujourd'hui bien connu que la demi-vie d'un anticorps dans l'organisme d'un patient est étroitement liée à son affinité pour la protéine FcRn, (Roopenian et al, 2007. FcRn: the neonatal Fc receptor cornes of âge. Nat. Rev. Immunol.7: 715-725). En effet, le FcRn protège les anticorps de la dégradation, leur assurant une longue demi-vie. Ce phénomène est connu sous le terme de recyclage des anticorps. Il assure également leur distribution dans l'organisme en les transportant d'un compartiment cellulaire à un autre. Ces deux phénomènes impliquent la pénétration des IgG dans les cellules par pinocytose ou endocytose, puis la reconnaissance du fragment Fc des IgG par la protéine FcRn présente dans les endosomes. Les IgG se lient spécifiquement à la protéine FcRn grâce au pH acide qui règne au sein des endosomes, les préservant ainsi du catabolisme lysosomial et permettant leur transport d'un pôle à l'autre de la cellule dans le cas de la transcytose cellulaire ou vers le même pôle cellulaire dans le cas de leur recyclage (Oganesyan et al, 2014. Structural insights into neonatal Fc receptor-based recycling mechanisms. J Biol. Chem, 289: 7812-7824).

Une avancée majeure dans la compréhension des interactions entre les IgG et la protéine FcRn a été réalisée par la détermination de la structure de ces protéines, en particulier la détermination des régions de l'IgG interagissant avec le FcRn. Il a ainsi été mis en évidence que les IgG interagissent avec cette protéine de manière dépendante du pH au niveau des régions constantes CH2-CH3 de la chaîne lourde (Shields et al. , 2001. High resolution mapping of the binding site on human IgGl for Fc gamma RI, Fc gamma RIT, Fc gamma RIII, and FcRn and design of IgGl variants with improved binding to the Fc gammaR. J Biol Chem, 276: 65- 6604).

Des études récentes ont permis d'identifier des acides aminés de la séquence peptidique des régions Fc, au niveau de la jonction des domaines CH2-CH3, dans la région constante de la chaîne lourde dont la mutation peut influencer, positivement ou négativement, Γ affinité de liaison d'une IgGl pour la protéine FcRn. Certaines de ces mutations permettent d'augmenter l'affinité de liaison des IgGl pour FcRn, et conduisent ainsi à une augmentation de la demi-vie de l'IgG (Kuo et al, 2011. Neonatal Fc receptor and IgG-based therapeutics. Mabs 3 : 422-430). Cependant, aucun des mutants envisagés n'a encore donné lieu à l'approbation et à la commercialisation d'un anticorps. Pour des raisons économiques et de confort, il persiste donc toujours la nécessité de trouver des solutions nouvelles pour améliorer la demi-vie des anticorps IgGl

Un premier aspect de l'invention est ainsi de proposer un procédé pour augmenter l'affinité de liaison et/ou augmenter la stabilité du complexe formé de ladite IgGl et du FcRn. Les IgGl obtenues par ce procédé ont ainsi une meilleure durée de vie, rendant plus facile et plus efficace leur utilisation thérapeutique, notamment en réduisant les doses administrées.

Un autre aspect de l'invention est de proposer l'utilisation thérapeutique d'IgGl ayant une durée de vie supérieure à la plupart des IgGl thérapeutiques classiques.

Un autre aspect de l'invention est de proposer l'utilisation thérapeutique de telles IgGl pour traiter certaines classes de patients et/ou certaines maladies spécifiques.

Un autre aspect de l'invention est de proposer des compositions pharmaceutiques contenant de telles IgGl.

L'invention concerne donc un procédé pour augmenter l'affinité de liaison d'une IgGl vis-à-vis du récepteur FcRn, et/ou augmenter la stabilité du complexe formé de ladite IgGl et du FcRn, comprenant une étape dans laquelle la partie constante d'une chaîne lourde d'une IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,I est remplacée par la partie constante d'une chaîne lourde d'allotype Glm3,l, pour obtenir une IgGl d'allotype Glm3,l,

l'affinité de liaison de l'IgGl d'allotype Glm3,l vis-à-vis du récepteur FcRn étant supérieure à l'affinité de liaison de l'IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,l vis-à-vis du récepteur FcRn, et/ou

la stabilité du complexe formé de l'IgGl d'allotype Glm3,l et du FcRn, étant supérieure à la stabilité du complexe formé de l'IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,l et du récepteur FcRn.

La présente invention repose sur l'observation inattendue faite par les Inventeurs que les IgGl différant uniquement par leurs allotypes, c'est-à-dire par la combinaison des variations de 3 acides aminés localisés dans les parties CH1 et CH3, le. dans les parties Fab et Fc de l'IgGl, ont des propriétés de liaison différentes pour la protéine FcRn.

Plus particulièrement, la présente invention repose sur l'observation que les IgGl d'allotype Glm3,l se fixent plus efficacement sur le récepteur FcRn que les IgGl d'allotype Glm3, Glml7et Glml7,l . Le recyclage et, par conséquent, la durée de demi-vie des IgGl peuvent ainsi être améliorés en remplaçant la région constante de la chaîne lourde des IgGl Glm3, Glml7 et Glml7,l par la région constante de la chaîne lourde d'allotype Glm3,l.

Au sens de la présente invention, les allotypes sont déterminés par la variation naturelle, ou polymorphisme, dans la séquence peptidique de la région constante de la chaîne lourde des IgGl humaines aux positions 214, 356 et 358 (numérotation EU). Ces positions correspondent aux positions 120 de la région CHl et 12 et 14 de la région constante CH3 selon la numérotation IGMT.

Les variations allotypiques et leur numérotation sont présentées dans le tableau 1.

Tableau 1. Allotypes des IgGl (système Glm). Dans la présente demande, la position des acides aminés est indiquée en utilisant la numérotation EU, telle que définie dans le tableau 1.

Dans l'invention, l'expression "remplacement de la région constante de la chaîne lourde d'une IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,l par celle d'une IgGl d'allotype Glm3,l " désigne toute modification, ou transformation permettant, à partir d'une IgGl Glm3, Glml7 ou G 1ml 7,1, d'aboutir à une IgGl d'allotype Glm.3,1. Il est notamment possible de muter certains acides aminés de manière ponctuelle, ou encore de remplacer certains domaines (comme par exemple, remplacer les domaines CHl et/ou CH3 sans modifier le domaine CH2). De manière non limitative, le remplacement de la région constante de la chaîne lourde d'une IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,l par celle d'une IgGl d'allotype Glm3,l peut être effectué à l'aide d'outils de biologie moléculaire classiques, tels que la PCR, la mutagénèse dirigée ou le clonage dans des vecteurs appropriés (comme par exemple le vecteur pFUSE-Chlg). Ainsi, il est possible d'obtenir in vitro des vecteurs différents permettant l'expression d'une IgGl complète ayant un allotype donné.

Dans l'invention, les termes "partie constante" et "région constante" ont un sens identique et peuvent être utilisés l'un pour l'autre.

Dans l'invention, les termes ' 'partie variable" et ' 'région variable' ' ont un sens identique et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel l'affinité de liaison de l'IgGl d'allotype Glm3,l vis-à-vis du récepteur FcRn, est supérieure d'au moins 10% par rapport à l'affinité de liaison de l'IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,l vis-à-vis du récepteur FcRn. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel l'affinité de liaison de l'IgGl d'allotype Glm3,l vis-à-vis du récepteur FcRn, est supérieure d'au moins 20%, 30%, 40% ou 50% par rapport à l'affinité de liaison de l'IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,l vis-à-vis du récepteur FcRn. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel la stabilité du complexe formé de l'IgGl d'allotype Glm3,l et du FcRn, est supérieure d'au moins 10%, de préférence 40%, par rapport à la stabilité du complexe formé de l'IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,l et du récepteur FcRn. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel la stabilité du complexe formé de l'IgGl d'allotype Glm3 ₅ l et du FcRn, est supérieure d'au moins 10%, 20%, 30%, 40% ou 50% par rapport à la stabilité du complexe formé de l'IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,l et du récepteur FcRn. De manière non limitative, l'affinité de liaison entre une IgGl et le FcRn, de même que la stabilité du complexe formé d'une IgGl et du FcRn, peuvent être déterminées à l'aide de techniques classiques permettant de mesurer l'interaction entre un ligand et son récepteur, comme par exemple la SPR (Résonance plasmonique de surface),

De manière non limitative, l'affinité de liaison des IgGl pour FcRn est mesurée à pH acide par- SPR en utilisant du FcRn humain recombinant couplé de manière covalente par ses fonctions aminés primaires à la surface d'un biocapteur dextran CM5. Les sensorgramm.es obtenus sur le canal de mesure sont évalués après soustraction de la réponse obtenue sur le canal contrôle par un logiciel (tel que Biaevaluation 4.2) avec un modèle de calcul bivalent (fit hétérogène). Cette méthode permet d'évaluer les constantes d'association et de dissociation de l'anticorps sur le FcRn.

L'utilisation de cellules Jurkat exprimant le FcRn tronqué de 33 acides aminés dans sa partie C-terminale, entraînant le maintien du FcRn en surface des cellules, permet également d'apprécier la liaison d'anticorps au FcRn par mesure en cytométrie en flux à pH acide. Cette analyse se fait par compétition en utilisant un anticorps de référence marqué par un fluorochrome et permet la comparaison de liaison de différents anticorps. De manière non limitative, la stabilité du complexe IgGl/FcRn est évaluée par SPR en utilisant du FcRn humain recombinant couplé de manière covalente par ses fonctions aminés primaires à la surface d'un biocapteur dextran CM5. La stabilité est évaluée sur les sensorgrammes durant la phase de dissociation. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel l'IgGl d'allotype Glm3.1, a une durée de demi-vie supérieure à celle de l'IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,l .

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel l'IgGl d'allotype Glm3,l, a une durée de demi-vie supérieure d'au moins 10%, 20%, 30%, 40% ou 50% à celle de l'IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,l.

De manière non limitative, la durée de demi- vie des IgGl est déterminée dans un modèle murin exprimant le FcRn humain. Les différents anticorps sont injectés dans les souris. Un prélèvement sanguin est effectué 2 heures, 6 heures, 1„ 3, 7, 10, 14, 17 et 21 jours après injection de l'anticorps afin de doser les concentrations sanguines qui permettent de calculer la demi-vie.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus dans lequel la région constante d'une chaîne lourde d'une IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,l est remplacée par la région constante d'une chaîne lourde d'allotype Glm3,l ayant au moins 90% d'identité avec SEQ ID NO : 1.

Le tableau 2 présente une séquence de référence pour chacun des 4 allotypes Glm3,l, Glm3, Glml7 et Glml7,l. Les variations naturelles déterminant les allotypes sont soulignées.

Allotype Séquence de référence de la région constante de la chaîne lourde de PIgGl

SEQ ID NO : 1

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

TS GVHTFP A VLQ S S GL YSLS S V VTVPSSSLGTQT YICN VNHKP SNT

KVD RVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKP DTLMISR

Glm3,l TPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT PREEQYNST

YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR

EPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN

NY TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH

NHYTQ SLSLSPGK

SEQ ID NO : 2

AST GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TS GVHTFP A VLQ S S GL YS LS S V VT VPSS SLGTQT YICN VNHKP SNT KVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR

Glm3 TPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST

YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQ V YTLPP SREEMTKNQ VSLTCL VKGF YP SDI AVEWESN GQPEN NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO : 3

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT

KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR

Glml7 TPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST

YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR

EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN

NYKTTPPVLDSDGSFFLYS LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH

NHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO : 4

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT

KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR

Glml7,l TPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST

YRVVSVLTVLHQDWLNG EYKCKVSNKALPAPIEKTISKA GQPR

EPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLV GFYPSDIAVEWESNGQPEN

NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH

NHYTQ SLSLSPGK

Tableau 2. Séquences de référence des allotypes.

Dans l'invention, le terme "IgGl d'allotype Glm3,l " désigne une IgGl ayant respectivement une arginine, un aspartate et une leucine en positions 214, 356 et 358. La région constante de sa chaîne lourde est constituée par une séquence ayant au moins 90%, en particulier 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%, d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 1.

Dans l'invention, le terme "IgGl d'allotype Glm3 " (également noté Glm3,-1) désigne une IgGl ayant respectivement une arginine, un glutamate et une méthionine en positions 214, 356 et 358. La région constante de la chaîne lourde est constituée par une séquence ayant au moins 90%, en particulier 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%, d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 2. Dans l'invention, le terme "IgGl d'allotype "Glml7" (également noté Glml7,-1) désigne une IgGl ayant respectivement une lysine, un glutamate et une méthionine en positions 214, 356 et 358. La région constante de sa chaîne lourde est constituée par une séquence ayant au moins 90%, en particulier 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%, d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 3.

Dans l'invention, le terme "IgGl d'allotype G 1 ml 7, 1 " désigne une IgGl ayant respectivement une lysine, un aspartate et une leucine en positions 214, 356 et 358. La région constante de sa chaîne lourde est constituée par une séquence ayant au moins 90%, en particulier 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%, d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 4. De manière générale, le pourcentage d'identité entre deux séquences d'acides nucléiques ou d'acides aminés est déterminé en comparant ces deux séquences alignées de manière optimale dans laquelle la séquence d'acides nucléiques ou d'acides aminés à comparer peut comprendre des additions ou des délétions par rapport à la séquence de référence pour un alignement optimal entre ces deux séquences. Le pourcentage d'identité est calculé en déterminant le nombre de positions identiques pour lesquelles le nucléotide ou le résidu d'acide aminé est identique entre les deux séquences, en divisant ce nombre de positions identiques par le nombre total de positions dans la fenêtre de comparaison et deux séquences. L'alignement optimal des séquences pour la comparaison peut être réalisé de manière informatique à l'aide d'algorithmes connus.

La région constante des chaînes légères d'une IgGl d'allotype Glm3,l selon la présente invention peut être constituée de la séquence de la région constante de la chaîne légère d'une IgG d'origine animale, de préférence d'origine humaine, ou être constituée d'une séquence hybride d'origines différentes.

L'IgGl d'allotype Glm3,l selon la présente invention peut être une IgGl humaine, humanisée ou chimérique. Au sens de la présente invention, on entend par ' 'IgGl humaine ' ' une IgGl dans laquelle l'IgGl possède des régions variables et des parties constantes d'origine humaine.

Au sens de la présente invention, on entend par "IgGl chimérique " une IgGl dans laquelle la séquence de la chaîne légère et/ou de la chaîne lourde comprend ou consiste en une séquence hybride issue d'au moins deux animaux distincts. De manière non limitative, les IgGl cliimériques peuvent être notamment des hybrides humain/murin ou humain/singe.

Au sens de la présente invention, on entend par "IgGl humanisée " une IgGl dans laquelle l'IgGl possède des régions hypervariables (CDR) issues d'un animal distinct de l'homme et des régions charpentes et des parties constantes d'origine humaine.

Les régions variables de l'IgGl n'intervenant pas dans la reconnaissance de l'IgGl par la protéine FcRn, la présente invention peut être mise en œuvre avec des IgGl dans lesquelles la région variable des chaînes lourdes et des chaînes légères reconnaissent tout épitope connu. Il peut s'agir d'un anticorps bispécifîque ou un immunoconjugué.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel les régions variables de l'IgGl d'allotype Glm3,l reconnaissent un épitope choisi dans le groupe constitué de : TNF-oc, CD52, PCSK9, mésothéline (MSLN), phosphatidylsérine, CD125 (IL-5Ra), CD30, CanAg (glycoforme de MUC-1), CCL2 (MCP-1), glypican 3 (GPC3), CD 19, CD25 (IL-2Ra), CD31 (SLAMF7), CD115 (récepteur M-CSF), DLL4 (della-like Ugand4), MUC5AC (mucine 5AC), FOLR1 (chaîne a du récepteur au folate), CD80, CD221 (IGF-1R), APP (protéine précurseur- de l'amyloïde), anhydrase carbonique IX, sous-unité p!9 de l'IL-23, EGF-R (HER-1, erbBl), CD51/CD61 (intégrine α _ν β3), CD6, IgE, CD56, Her-3 (erbB3 ), CD 194 (CCR4), GM-CSF, angiopoïétine 2, CD20, CD248 (endosialine), LDL oxydées, CD3e, Nogo-A (réticulon 4), stxl {shiga-like toxin 1), CD221 (IGF-1R), CD240D (antigène Rhésus D), CD 126 (IL6-Roc), stx2 (shiga-like toxin 2, sous-unité À), IL-6, sous-unité pl 9 de l'IL-23, CD4, angiopoïétine 2 x VEGFCD27, intégrine α ₄ β7, CD70, EpCAM, vimentine, IL-13, CD274 (PD-L1), VEGF, chaîne p40 de l'IL-12/IL-23, CD227 (MUC-1), CD40, EGFR x HER-3, CDl la, LFA-1 (intégrine , CD266 (TWEAK), intégrine β ₇ , IgE, cMET (HGF- R), Egfl7 (Epidermal Growth Factor-like domain 7), TNF-β, IL17A, HER-2 (erbB2), CD22, CD79b, IgE, CD309 (VEGFR2), IFN-α, CD304 (neuropiline 1 ou NRP1), hémagglutinine du virus de la grippe, Toxin A de Clostridium difficile, chaîne 1 du récepteur des IFN- /β/ωΤοχϊη B, activin A receptor type IIB ActR-IIB, IL-Ιβ, CD261 (TRAIL-R1), CD38, ganglioside GD2, hémagglutinine du virus de la grippe, CXCL10 (IP-10), nectine 4, IL-9, TYRP1 (tyrosinase- related protein 1), EGCD308 (VEGFR1), MIF (Macrophage migration inhibitory factor), GM- CSF, CD261 (TRAIL-R1), CD74, protéine F du virus respiratoire syncyiiai, CDwl36 MST1R, CD135 (flt3), CD279 (PD-1), IL-17A, toxine alpha de Staphylococcus aureus, EpCAM, glycoprotéine du virus de la rage, HLA-DR, PD-L1, CD257 (BAFF), CD44, ganglioside GD3,

CD18 (intégrh^ ₂ ), IFN-y, CD30, CD4, CD66e CEACAM5, CD33, CD23, IL-5, acide lipoteichoïque, IL-4, CD4, toxine PA du bacille du charbon, glycoprotéine B du cytomégalovirus (CMV), FAP (fibroblast activation protein), CD2, CD227 (MUC-1), myostatine (GDF 8), dumping factor A de Staphylococcus aureus, CD 154, antigène HBs (hépatite B) et stx2 (shiga-like toxin 2, sous-unité B). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel les régions variables de FlgGl d'allotype Glm3,l reconnaissent un épitope choisi dans le groupe constitué de : TNF-ot, PCSK9, mésothéîine (MSLN), phosphatidylsérine, CD125 (IL-5Ra), CD30, CanAg (glycoforme de MUC-1), CCL2 ( CP-1), glypican 3 (GPC3), CD19, CD25 (IL-2Ra), CD319 (SLAMF7), CD1 15 (récepteur M-CSF), DLL4 {delta-like Ugand4 MUC5AC (mucine 5AC), FOLR1 (chaîne a du récepteur au folate), CD80, CD221 (IGF-1R), APP (protéine précurseur de l'amyloïde), anhydrase carbonique IX, sous-unité pl9 de l'IL-23, EGF-R (HER-1, erbBl), CD51/CD61 (intégrine avpa), CD 6, IgE, CD56, Her-3 (erbB3 ), CD 194 (CCR4), GM-CSF, angiopoïétine 2, CD20, CD248 (endosialine), LDL oxydées, CD3s, Nogo-A (réticulon 4), stxl (shiga-ïike toxin 1 CD221 (IGF-1R), CD240D (antigène Rhésus D), CD126 (IL6-R ), stx2 (shiga-like loxin 2, sous-unité A), IL-6, sous-unité pl9 de FIL-23, CD4, angiopoïétine 2 x VEGFCD27, intégrine αφι, CD70, EpCAM, vimentine, 1L-13, CD274 (PD-L1), VEGF, chaîne p40 de FIL-12 IL-23, CD227 (MUC-1), CD40, EGFR x HER-3, CD 11 a, LFA-1 (intégrine αι^), CD266 (TWEAK), intégrine β ₇ , IgE, cMET (HGF- R), Egfl7 (Epidermal Growth Factor-like domain 7), TNF-β, IL17A, HER-2 (erbB2), CD22, CD79b, IgE, CD309 (VEGFR2), IFN-α, CD304 (neuropiline 1 ou NRPl), hémagglutinine du virus de la grippeToxin A de Clostridium difficile, chaîne 1 du récepteur des IFN-α/β/ω, Toxin B, activin A receptor type IIB ActR-IIB, IL-Ιβ, CD261 (TRAIL-R1), CD38, ganglioside GD2, hémagglutinine du virus de la grippe, CXCL10 (IP-10), nectine 4, IL-9, TYRP1 (tyrosinase- reiated protein 1), EGCD308 (VEGFRl), MIF (Macrophage migration inhibitory factor), GM- CSF, CD261 (TRAIL-R1), CD74, protéine F du virus respiratoire syncytial, CDwl36 MST1R, CD135 (flt3), CD279 (PD-1), IL-17A, toxine alpha de Staphylococcus aureus, EpCAM, glycoprotéine du viras de la rage, HLA-DR, PD-L1, CD257 (BAFF), CD44, ganglioside GD3,

CD 18 (intégrinepa), IFN-γ, CD30, CD4, CD66e CEACAM5, CD33, CD23, IL-5, acide lipoteichoïque, IL-4, CD4, toxine PA du bacille du charbon, glycoprotéine B du cytomégalovirus (CMV), FAP (fibroblast activation protein), CD2, CD227 (MUC-1), myostatine (GDF 8), dumping factor A de Staphylococcus aureus, CD 154, antigène HBs (hépatite B) et stx2 (shiga-like toxin 2, sous-unité B). Les IgGl thérapeutiques actuellement commercialisées ou en phase d'études cliniques sont d'allotype Glml7, Glml7,l ou Glm3. La demi-vie de ces IgGl peut donc être améliorée en remplaçant la région constante de la chaîne lourde de ces IgGl par la région constante de la chaîne lourde d'allotype Glm3,l . Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel les régions variables de FlgGl d'allotype Glm3,l sont identiques à celles d'une IgGl choisie dans le groupe constitué de : adalimumab, alemtuzumab, alirocumab, 5 amatuximab, antumab ravtansine, bavituximab, benralizumab, brentuximab védotin, cantuzumab ravtansine, carlumab, codrituzumab, coltuximab ravtansine, daclizumab, dénintuzumab mafodotin, éloiuzumab, émactuzumab, énoticumab, ensituximab, farlétuzumab, galiximab, ganitumab, ganténerumab, girentuximab, golimumab, guselkumab, imgatuzumab, infliximab, intétumumab, itolizumab, ligélizumab, lorvotuzumab mertansine, lumretuzumab,0 raogamulizumab, namilumab, nesvacumab, obinutuzumab, ocaratuzumab, ontuxizumab, orticumab, otélixizumab, ozanezumab, pritoxaximab, rituximab, robatumumab, rolédumab, sarilumab, sétoxaximab, siltuximab, sirukumab, solanezumab, téplizumab, tildrakizumab, tocilizumab, trégalizumab, ublituximab, vanucizumab, varlilumab, védolizumab, vorsétuzumab, vorsétuzumab raafodotin, adécatumumab, pritumumab, anrukinzumab,5 atézolizumab, bévacizumab, briakinumab, clivatuzumab, dacétuzumab, duligotuzumab, éfalizumab, énavatuzumab, étroiizumab, omalizumab, onartuzumab, parsatuzumab, patéclizumab, pérakizumab, pertuzumab, pniatuzumab védotin, polatuzumab védotin, quilizumab, ramucirumab, rontalizumab, sifalimumab, trastuzumab, trastuzumab emtansine, vésencumab, cixutumumab, actoxumab, aducanumab, anifrolumab, basiliximab,0 bézlotoxumab, bimagrumab, canakinumab, cétuximab, clazaldzumab, conatumumab, dalotuzumab, daratumumab, dinutuximab, diridavumab, éldélumab, enfortumab védotin, énokizumab, étaracizumab, ficlatuzumab, flanvotumab, futuxi ab, icrucumab, imalumab, lenzilumab, léxatumumab, lodelcizumab, lucatumumab, milatuzumab, milatuzumab- doxorubicin, motavizumab, namatumab, nécitumumab, olaratumab, palivizumab, patritumab, S pidilizumab, secukinumab, tigatuzumab, tosatoxumab, tucotuzumab celmoleukine, veltuzumab, zatuximab, épratuzumab, zalutumumab, rafivirumab, apolizumab, avélumab, bapineuzumab, bélimumab, bivatuzumab, cantuzumab mertansine, écromeximab, erlizumab, felvizumab, fontolizumab, iratumumab, kéliximab, iabétuzumab, labétuzumab tétraxetan, lintuzumab, lumiliximab, mapatumumab, mépolizumab, morolimumab, ocrélizumab,0 ofatumumab, pagibaximab, pascolizumab, priliximab, raxibacumab, régavirumab, sibrotuzumab, siplizumab, sontuzumab, stamulumab, talizumab, téfibazumab, téneliximab, toralizumab, tuvirumab, urtoxazumab, et zanolimumab. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel les régions variables de l'IgGl d'allotype Glm3,l sont identiques à celles d'une IgGl choisie dans le groupe constitué de : adalimumab, aient tuzumab, alirocumab, amatuximab, antumab ravtansine, bavituximab, benralizumab, brentuximab védotin, cantuzumab ravtansine, carlumab, codrituzumab, coltuximab ravtansine, daclizumab, dénintuzumab mafodotin, élotuzumab, émactuzumab, énoticumab, ensituximab, farlétuzumab, galiximab, ganitumab, ganténerumab, girentuximab, golimumab, guselkumab, imgatuzumab, infliximab, intétumumab, itolizumab, ligélizumab, lorvotuzumab mertansine, lumretuzumab, mogamulizumab, namilumab, nesvacumab, obinutuzumab, ocaratuzumab, ontuxizumab, orticumab, otélixizumab, ozanezumab, pritoxaximab, rituximab, robatumumab, rolédumab, sarilumab, sétoxaximab, siltuximab, sirukumab, solanezumab, téplizumab, tildrakizumab, tocilizumab, trégalizumab, ublituximab, vanucizumab, varlilumab, védolizumab, vorsétuzumab, vorsétuzumab mafodotin, adécatumumab, pritumumab, anrukinzumab, atézolizumab, bévacizumab, briakinumab, clivatuzumab, dacétuzumab, duligotuzumab, éfalizumab, énavatuzumab, étrolizumab, omalizumab, onartuzumab, parsatuzumab, patéclizumab, pérakizumab, pertuzumab, pinatuzumab védotin, poiatuzumab védotin, quilizumab, ramucirumab, rontalizumab, sifalimumab, trastuzumab, trastuzumab emtansine, vésencumab, cixutumumab, actoxumab, aducanumab, anifrolumab, basiliximab, bézlotoxumab, bimagrumab, canakinumab, cétuximab, clazakizumab, conatumumab, dalotuzumab, daratumumab, dinutuximab, diridavumab, éldélumab, enfortumab védotin, énokizumab, étaracizumab, fïclatuzumab, flanvotumab, futuximab, icrucumab, imalumab, lenzilumab, léxatumumab, lodelcizumab, lucatumumab, milatuzumab, milatuzumab- doxorubicin, motavizumab, narnatumab, nécitumumab, olaratumab, palivizumab, patritumab, pidilizumab, secukinumab, tigatuzumab, tosatoxumab, tucotuzumab celmoleukin, veltuzumab, zatuximab, épratuzumab, zalutumumab et rafivirumab.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel les régions variables de l'IgGl d'allotype Glm3,l sont identiques à celles d'une IgGl choisie dans le groupe constitué de : adalimumab, alemtuzumab, alirocumab, amatuximab, antumab ravtansine, bavituximab, benralizumab, brentuximab védotin, cantuzumab ravtansine, carlumab, codrituzumab, coltuximab ravtansine, daclizumab, dénintuzumab mafodotin, élotuzumab, émactuzumab, énoticumab, ensituximab, farlétuzumab, galiximab, ganitumab, ganténerumab, girentuximab, golimumab, guselkumab, imgatuzumab, infliximab, intétumumab, itolizumab, ligéiizumab, lorvotuzumab mertansine, lumretuzumab, mogamuiizumab, namilumab, nesvacumab, obinutuzumab, ocaratuzumab, ontuxizumab, orticumab, otélixizumab, ozanezumab, pritoxaximab, rituximab, robatumumab, rolédumab, sarilumab, sétoxaximab, siltuximab, sirukumab, solanezumab, téplizumab, tildrakizumab, tocilizumab, trégalizumab, ublituximab, vanucizumab, varlilumab, védolizumab, vorsétuzumab, vorsétuzumab mafodotin, adécatumumab, pritumumab, anrukinzumab, atézolizumab, bévacizumab, briakinumab, clivatuzumab, dacétuzumab, duligotuzumab, éfalizumab, énavatuzumab, étrolizumab, omalizumab, onartuzumab, parsatuzumab, patéclizumab, pérakizumab, pertuzumab, pinatuzumab védotin, polatuzumab védotin, quilizumab, ramucirumab, rontalizumab, sifalimumab, trastuzumab, trastuzumab emtansine, vésencumab, cixutumumab, actoxumab, aducanumab, anifiolumab, basiliximab, bézlotoxumab, bimagrumab, canakinumab, clazakizumab, conatumumab, dalotuzumab, daratumumab, dinutuximab, diridavumab, éldélumab, enfortumab védotin, énokizumab, étaracizumab, ficlatuzumab, flanvotumab, futuximab, icrucumab, imalumab, lenzilumab, léxatumumab, lodelcizumab, lucatumumab, milatuzumab, milatuzumab-doxorubicin, motavizumab, namatumab, nécitumumab, olaratumab, palivizumab, patritumab, pidilizumab, secukinumab, tigatuzumab, tosatoxumab, tucotuzumab celmoleukin, veltuzumab, zatuximab, épratuzumab, zalutumumab et rafivirumab.

L'IgGl d'allotype Glm3,l obtenu par le procédé peut ainsi être une variante d'allotype Glm3,l de toute IgGl thérapeutique connue.

Une liste des IgGl thérapeutiques et des épitopes qu'elles reconnaissent est donnée dans le tableau 3.

IgGl

Nom de la cible (Dénomination commune

internationale (DCI))

TNF-a adalimumab

CD52 aiemtuzumab

PCSK9 alirocumab

mésotheline (MSLN) amatuximab

mésotheline (MSLN) antumab ravtansine

phosphatidylserine bavituximab

CD 125 ( IL-SRoc) benralizumab

CD30 brentuximab védotin

CanAg (glycoforme de MUC-1) cantuzumab ravtansine

CCL2 (MCP-1) carlumab

glypican 3 (GPC3) codrituzumab

CD19 coltuximab ravtansine CD25 (IL-2Ra) daclizumab

CD19 dénintuzumab mafodotin

CD319 (SLAMF7) élotuzumab

CD115 (M-CSFR) émactuzumab

DLL4 (delta-like ligand 4) énoticumab

MUC5AC (mucine 5AC) ensituximab

FOLR1 (chaîne a du récepteur au

folate) farlétuzumab

CD80 galiximab

CD221 (IGF-1R) ganitumab

APP (protéine précurseur de l'amyloïde) ganténerumab anhydrase carbonique IX girentuximab

TNF-a golimumab

sous-unité pl9 de l'IL-23 guselkumab

EGFR (erbBl, HER-1) imgatuzumab

TNF-a infliximab

CD51_CD61 (intégrine ανβ3) intétumumab

CD6 itolizumab

IgE ligélizumab

CD56 lorvotuzumab mertansine

Her-3 (erbB3 ) lumrétuzumab

CD 194 (CCR4) mogamulizumab

G -CSF namilumab

angiopoïétine 2 nesvacumab

CD20 obinutuzumab

CD20 ocaratuzumab

CD248 (endosialine) ontuxizumab

LDL oxydées orticumab

CD3G otélixizumab

Nogo-A (réticulon 4) ozanézumab

stxl {shiga-like toxin 1) p itoxaximab

CD20 rituximab

CD221 (IGF-1R) robatumumab

CD240D (antigène Rhésus D) rolédumab

CD126 (IL6-Ra) sarilumab

stx2 (shiga-like toxin 2, sous-unité A) sétoxaximab

IL-6 siltuximab

IL-6 simkumab

APP (protéine précurseur de l'amyloïde) solanezumab

CD3B téplizumab

sous-unité pl9 de l'IL-23 tildrakizumab

CD126 (IL6-R ) tocilizumab

CD4 trégalizumab

CD20 ublituximab

angiopoïétine 2 x VEGF vanucizumab

CD27 varlilumab

intégrine α ₄ β ₇ védolizumab

CD70 vorsétuzumab CD70 vorsétuzumab mafodotin

EpCAM adécatumumab vimentine pritumumab

IL- 13 anrukinzumab

CD274 (PD-L1) atézolizumab

VEGF bévacizumab chaîne p40 de TIL-12/IL-23 briakinumab

CD227 (MUC-1) clivatuzumab

CD40 dacétuzumab

EGFR x HER-3 duligotuzumab

CDl la LFA-l(i tégrine αLβ2) éfalizumab

CD266 (TWEAK) énavatuzumab intégrine β ₇ étrolizumab

IgE omalizumab

cMET (HGF-R) onartuzumab

Egfl7 (Epidermal Growth Factor-like

domain 7) parsatuzumab

TNF-β patéclizumab

IL17A pérakizumab

HER-2 (erbB2) pertuzumab

CD22 pinatuzumab védotin

CD79b polatuzumab védotin

IgE quilizumab

CD309 (VEGFR2) ) ramucirumab

IFN- rontalizumab

IFN-a sifalimumab

HER-2 (erbB2) trastuzumab

HER-2 (erbB2) trastuzumab emtansine

CD304 (neuropiline 1 ou NRPl) vésencumab

CD221 (IGF-1R) cixutumumab hémagglutinine du virus de la grippe firivumab

HER-2 (erbB2) margétuximab chaîne p40 de l'IL-12/IL-23 ustékimimab

Toxin A de Closiridium difficile actoxumab

APP (protéine précurseur de l'amyloïde) aducanumab

chaîne 1 du récepteur des IFN-α/β/ω anifrolumab

CD25 (IL-2Ra) basiliximab

Toxin B bezlotoxumab activin A receptor type ÏÏB ActR-IIB bimagrumab

IL-lp canakinumab

EGFR (erbBl, HER-1) cétuximab

IL-6 clazakizumab

CD261 (TRAIL-R1) conatumumab

CD221 (IGF-1R) dalotuzumab

CD38 daratumumab ganglioside GD2 dinutuximab

hémagglutinine du virus de la grippe diridavumab

CXCLIO (IP-IO) eldélumab nectine 4 enfortumab védotin

IL-9 énokizumab

CD51 CD61 (intégrine ανβ3) étaracizumab

cMET (HGF-R) iiciatuzumab

TYRP1 (tyrosinase-related protein 1) flanvotumab

EGFR (erbBl, HER-1) futuximab

CD308 (VEGFR1) icrucumab

MIF (Macrophage migration inhibitory

factor) imalumab

GM-CSF lenzilumab

CD261 (TRAIL-Rl) lexatumumab

PCSK9 lodelcizumab

CD40 lucatumumab

CD74 milatuzumab

CD74 milatuzumab-doxorabicin protéine F du virus respiratoire syncytial motavizumab

CDwl36 MSTlR narnatumab

EGFR (erbBl, HER-1) nécitumumab

CD135 (flt3) olaratumab

protéine F du virus respiratoire syncytial palivizumab

Her-3 (erbB3 ) patritumab

CD279 (PD-1) pidilizumab

1L-17A ÏL17A sécukinumab

CD261 (TRAIL-R1) tigatuzumab

toxine alpha de Staphylococcus aureus tosatoxumab

EpCAM tucotuzumab celmoleukine

CD20 veltuzumab

EGFR (erbBl, HER-1) zatuximab

CD22 épratuzumab

EGFR (erbBl, HER-1) zalutumumab

glycoprotéine du virus de la rage rafivirumab

HLA-DR apolizumab

PD-L1, avélumab

APP (protéine précurseur de I'amyloïde) bapineuzumab

CD257 (BAFF) bélimumab

CD44 bivatuzumab

CanAg (glycoforme de MUC-1) cantuzumab mertansine ganglioside GD3 écromeximab

CD 18 (intégrinefe) erlizutnab

protéine F du virus respiratoire sjoicytial felvizumab

IFN-y fontolizumab

CD30 iratumumab

CD4 kéliximab

priliximab labetuzumab

CD66e (CEACAM5) labétuzumab tétraxetan

CD33 lintuzumab

CD23 lumiliximab

CD261 (TRAIL-R1) mapatumumab IL-5 mépolizumab

CD240D (antigène Rhésus D) morolimumab

CD20 ocrélizumab

CD20 ofatumumab

acide lipoteichoïque pagibaximab

IL-4 pascolizumab

CD4 priliximab

toxine PA du bacille du charbon raxibacumab

glycoprotéine B du cytomégalovirus

(CMV) régavirumab

FAP (fibroblast activation protein) sibrotuzumab

CD2 siplizumab

CD227 (MUC-1) sontuzumab

myostatine (GDF 8) stamulumab

IgE talizumab

dumping factor A de Staphylococcus

aureus téfîbazumab

CD40 ténéiiximab

CD 154 toralizumab

antigène HBs (hépatite B) tuvirumab

stx2 (shiga-like toxin 2, sous-unité B) urtoxazumab

CD4 zanolimumab

Tableau 3. Liste des imn unoglobulines IgGl et de leurs épitopes respectifs.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne le procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel la région constante de la chaîne lourde comprend des variations de séquence permettant d'améliorer l'affinité de l'IgGl pour la protéine FcRn, notamment au niveau des régions constantes CH2-CH3 de la chaîne lourde de l'IgGl .

De telles variations correspondent à des mutations (délétion, insertion ou substitution), artificielles résultant de l'intervention de l'homme.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne le procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel la région constante de la chaîne lourde comprend desvariations de séquences permettant de modifier (d'augmenter ou de diminuer) la liaison de l'IgGl à Clq, FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, FcyRIIIA et/ou FcyRIIIB.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne le procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel la région constante de la chaîne lourde comprend des variations de séquence permettant de modifier les épitopes T potentiels afin de réduire l'immunogénicité. Dans l'invention, la séquence de la partie constante de la chaîne lourde de TlgGl d'allotype Glm3,l peut ainsi comprendre des variations par rapport à SEQ ID NO : 1, à condition que les acides aminés en position 214, 356 et 358 soient ceux correspondants à 5 l'allotype Glm3,l.

Ces variations, permettant de modifier (d'augmenter ou de diminuer) la liaison de l'IgGl à Clq, FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, FcyRIIIA et/ou FcyRIIIB, peuvent notamment être introduites pour améliorer la reconnaissance de l'IgGl par le système effecteur de l'immunité. 10 Avantageusement, lesdites variations peuvent améliorer l'affinité de l'IgGl pour la protéine FcRn.

De telles variations sont de préférence introduites à la jonction entre les régions constantes CH2-CH3 de la chaîne lourde, c'est-à-dire au niveau du site de reconnaissance de l'IgGl par la 15 protéine FcRn, ou dans le CH2 (au niveau de la petite charnière).

Des exemples de variations permettant d'améliorer l'affinité d'une IgGl pour FcRn sont par exemple décrits dans le brevet US 8,618,252. Ces variations peuvent par exemple consister en au moins une mutation à l'une des positions suivantes (nomenclature EU) : 284, 285, 286, 20 288, 290, et 304, notamment l'une des mutations suivantes : une substitution en position 284 avec un glutamate; une substitution en position 285 avec un glutamate; une substitution en position 286 avec un aspartate; une substitution en position 288 avec un glutamate; une substitution en position 290 avec un glutamate. D'autres mutations ont également été décrites par Monnet et al, Front Immunol. 2015; 6: 39 (DOI : 10.3389/fimmu.2015.00039).

25

Dans un autre aspect, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l pour son utilisation en tant que médicament, ladite IgGl d'allotype Glm3,l n'étant pas choisie parmi l'ustékinumab, le firivumab et le margétuximab.

30 Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm.3,1 pour son utilisation en tant que médicament, ladite IgGl d'allotype Glm.3,1 n'étant pas choisie parmi l'ustékinumab, le firivumab, le margétuximab et le cétuximab. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l pour son utilisation en tant que médicament, ladite IgGl d'allotype Glm3,l n'étant pas choisie parmi l'ustékinumab, le firivumab, le margétuximab et le cétuximab et n'est pas une IgGl reconnaissant l'antigène WT1 (Wilm's Tumor Oncogene Protein).

L'IgGl d'allotype Glm3,l ayant une meilleure affinité pour le récepteur FcRn, celle-ci aura une meilleure durée de demi-vie en comparaison des IgGl d'allotype Glm3, Glml7,l et/ou G lml 7. Une IgGl d'allotype Glm3,l avec une demi-vie plus importante pourra par conséquent être administrée à des doses plus faibles et/ou à intervalles plus espacés en comparaison des IgGl d'allotype Glm3, Glml7,l et/ou Glml7.

Si nécessaire, ladite IgGl d'allotype Glm.3,1 peut également être administrée concomitamment à une substance pharmaceutique capable de diminuer une éventuelle réaction immunogène du patient contre cette IgGl (notamment la production d'anticorps anti-IgGl d'allotype Glm3,l). De manière non limitative, une telle substance peut être par exemple le méthotrexate. Les IgGl d'allotype Glm3,l peuvent être utilisées pour traiter tout type de populations.

Dans le cas des patients produisant des IgGl d'allotype Glm3 et/ou Glm.17,1, l'IgGi d'allotype Glm3,î sera plus efficacement recyclée par la protéine FcRn et aura une meilleure durée de demi-vie par rapport aux IgGl endogènes. Une IgGl d'allotype Glm3,l peut ainsi être administrée à des doses inférieures et/ou à des intervalles plus espacés par rapport à une IgGl d'allotype Glm3, Glml7,l et/ou Glml7 ayant les mêmes régions variables pour atteindre la même efficacité.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, chez un patient dont tout ou partie des IgGl endogènes sont d'allotypes Glm3 et/ou Glml7,l. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotypes Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, chez un patient homozygote Glm3/Glm3 ou Glml7,l/Glml7,l ou chez un patient hétérozygote Glm3/Glml7,l. Dans le cas des patients produisant des IgGl d'allotype Glm3,l, les IgGl endogènes du patient ont une affinité supérieure pour la protéine FcRn et une meilleure demi-vie par rapport aux IgGl thérapeutiques d'allotype "non Glm3,l ". Les IgGl thérapeutiques d'allotype Glml7, Glml7,l ou Glm3 sont donc moins efficacement recyclées par la protéine FcRn. L'administration d'IgGl d'allotype Glm3,l chez ces patients permet d'améliorer leur reconnaissance par la protéine FcRn, leur recyclage et, par voie de conséquence, leur demi-vie.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, chez un patient dont tout ou partie des IgGl endogènes sont d'allotype Glm3,l.

Le patient peut être homozygote Glm3,l/Glm3,l ou hétérozygote Glm3,l, le second déterminant génotypique du patient pouvant être l'une quelconque des autres combinaisons d'allotypes connus de l'espèce humaine (Glm3, ou Gl m 17,1). L'allotype Gîm3,l est présent notamment chez les populations d'origine mongoloïde. De manière inattendue, les IgGl d'allotype Glm3,l sont plus efficacement recyclées et ont une durée de vie plus grande chez les patients d'origine mongoloïde en comparaison des IgGl thérapeutiques d'allotypes Glml7, Glml7,l ou Glm3. La présente invention concerne donc une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci- dessus pour son utilisation en tant que médicament, chez un patient homozygote Glm3,l/Glm3,l ou chez un patient hétérozygote Glm3,l / Glm3 ou Glm3,l / Glml7,l.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle la région constante de la chaîne lourde est constituée de la séquence SEQ ID NO : 1.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle la région constante de la chaîne lourde est constituée par une séquence ayant au moins 90%, en particulier 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%, d'identité avec la séquence SEQ ID NO : 1. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle la séquence peptidique de la région constante de la chaîne lourde comprend des variations permettant d'améliorer l'affinité de l'IgGl d'allotype Glm3,l pour la protéine FcRn, notamment au niveau de la jonction entre les régions constantes CH2-CH3 de la chaîne lourde de PIgGl d'allotype Glm3,l.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle les régions variables reconnaissent un épitope choisi dans le groupe constitué de : TNF-α, CD52, PCSK9, mésothéline (MSLN), phosphatidylsérine, CD 125 (IL-5R ), CD30, CanAg (glycofonne de MUC-1), CCL2 (MCP-1), glypican 3 (GPC3), CD 19, CD25 (IL-2Ra), CD319 (SLAMF7), CDU 5 (récepteur- M-CSF), DLL4 {delta-like Ugand4), MUC5AC (mucine 5AC), FOLR1 (chaîne a du récepteur au folate), CD80, CD221 (IGF-1R), APP (protéine précurseur de l'amyloïde), anhydrase carbonique IX, sous-unité pl9 de l'IL-23, EGF-R (HER-1, erbBl), CD51/CD61 (intégrine α _ν β3), CD6, IgE, CD56, Her-3 (erbB3 ), CD 194 (CCR4), GM-CSF, angiopoïétine 2, CD20, CD248 (endosialine), LDL oxydées, CD3s, Nogo-A (réticulon 4), stxl {shiga-like toxin 1), CD221 (IGF-1R), CD240D (antigène Rhésus D), CD126 (IL6-Ra), stx2 (shiga-like toxin 2, sous-unité A), IL-6, sous-unité pl9 de l'IL-23, CD4, angiopoïétine 2 x VEGFCD27, intégrine α ₄ β ₇ , CD70, EpCAM, vimentine, IL-13, CD274 (PD-L1), VEGF, chaîne p40 de l'IL-12/IL-23, CD227 (MUC-1), CD40, EGFR x HER-3, CDl la, LFA-1 (intégiine α ι), CD266 (TWEA ), intégrine β ₇ , IgE, cMET (HGF-R), Egfl7 (Epidermal Growth Factor- like domain 7), TNF-β, IL17A, HER-2 (erbB2), CD22, CD79b, IgE, CD309 (VEGFR2), IFN- , CD 304 (neui-opiline 1 ou NRP1), hémagglutinine du virus de la grippe, Toxin A de Clostridium difficile, chaîne 1 du récepteur des IFN- /β/ω, Toxin B, activin A receptor type IIB ActR-IIB, IL-Ιβ, CD261 (TRAIL-Rl), CD38, ganglioside GD2, hémagglutinine du virus de la grippe, CXCL10 (IP-10), nectine 4, IL-9, TYRP1 (tyrosinase-related protein 1), EGCD308 (VEGFR1), MIF (Macrophage migration inhibitory factor), GM-CSF, CD261 (TRAIL-Rl), CD74, protéine F du virus respiratoire syncytial, CDwl36 MST1R, CD135 (flt3), CD279 (PD-1), IL-17A, toxine alpha de Slaphylococcus aureus, EpCAM, glycoprotéine du virus de la rage, HLA-DR, PD-L1, CD257 (BAFF), CD44, ganglioside GD3, CD18

(intégrine ₂ ), IFN-γ, CD30, CD4, CD66e CEACAM5, CD33, CD23, IL-5, acide lipoteichoïque, IL-4, CD4, toxine PA du bacille du charbon, glycoprotéine B du cytomégalovirus (CMV), FAP (fibroblast activation protein), CD2, CD227 (MUC-1), myostatine (GDF 8), dumping factor A de Staphylococcus aureus, CD 154, antigène HBs (hépatite B) et stx2 {shiga-like toxin 2, sous-unité B).

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle les régions variables reconnaissent un épitope choisi dans le groupe constitué de : TNF-oc, PCSK9, mésothéline (MSLN), phosphatidylsérine, CD125 (IL-5R<x), CD30, CanAg (glycoforme de MUC-1), CCL2 (MCP-1), glypican 3 (GPC3), CD19, CD25 (IL-2R ), CD319 (SLAMF7), CD115 (récepteur M-CSF), DLL4 {delta-like Hgand4), MUC5AC (mucine 5AC), FOLR1 (chaîne a du récepteur au folate), CD80, CD221 (IGF-1R), APP (protéine précurseur de l'amyloïde), anhydrase carbonique IX, sous-unité pl9 de I'IL-23, EGF-R (HER-1, erbBl), CD51/CD61 (intégrine νβ ₃ ), CD 6, IgE, CD56, Her-3 (erbB3 ), CD 194 (CCR4), GM-CSF, angiopoïétine 2, CD20, CD248 (endosialine), LDL oxydées, CD38, Nogo-A (réticulon 4), stxl {shiga-like toxin 1), CD221 (IGF-1R), CD240D (antigène Rhésus D), CD126 (1L6-Ra), stx2 {shiga-like toxin 2, sovs-unité A), IL-6, sous-unité pl9 de l'IL-23, CD4, angiopoïétine 2 x VEGFCD27, intégrine (χ ₄ β ₇ , CD70, EpCAM, vimentine, IL-13, CD274 (PD-L1), VEGF, chaîne p40 de l'IL-12/IL-23, CD227 (MUC-1), CD40, EGFR x HER-3, CD1 la , LFA-1 (intégrine ι), CD266 (TWEAK), intégrine β ₇ , IgE, cMET (HGF-R), Egfl7 (Epidermal Growth Factor-like domain 7), TNF-β, IL17A, HER-2 (erbB2), CD22, CD79b, IgE, CD3Û9 (VEGFR2), IFN-α, CD304 (neuropiline 1 ou RPl), hémagglutinine du virus de la grippe, Toxin A de Clostridium difficile, chaîne 1 du récepteur des IFN- /β/ω, Toxin B, activin A receptor type IIB ActR-IIB, IL-Ιβ, CD261 (TRAIL-R1), CD38, ganglioside GD2, hémagglutinine du virus de la grippe, CXCL10 (IP-10), nectine 4, IL-9, TYRP1 (tyrosinase-related protein 1), EGCD308 (VEGFR1), MIF (Macrophage migration inhibitory factor), GM-CSF, CD261 (TRAIL-R1), CD74, protéine F du virus respiratoire syncytial, CDwl36 MSTIR, CD135 (flt3), CD279 (PD-1), IL-17A, toxine alpha de Staphylococcus aureus, EpCAM, glycoprotéine du virus de la rage, HLA-DR, PD-L1,

CD257 (BAFF), CD44, ganglioside GD3, CD18(intégrine ₂ ), IFN-y, CD30, CD4, CD66e CEACAM5, CD33, CD23, IL-5, acide lipoteichoïque, IL-4, CD4, toxine PA du bacille du charbon, glycoprotéine B du cytomégalovirus (CMV), FAP (fibroblast activation protein), CD2, CD227 (MUC-1), myostatine (GDF 8), dumping factor A de Staphylococcus aureus, CD 154, antigène HBs (hépatite B) et stx2 (shiga-like toxin 2, sous-unité B).

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament dans laquelle les régions variables sont identiques à celles d'une IgGl choisie dans le groupe constitué de : adalimumab, alemtuzumab, alirocumab, amatuximab, antumab ravtansine, bavituximab, benralizumab, brentuximab védotin, cantuzumab ravtansine, carlumab, codrituzumab, coltuximab ravtansine, daclizumab, dénintuzumab mafodotin, élotuzumab, émactuzumab, énoticumab, ensituximab, farlétuzumab, galiximab, ganitumab, ganténerumab, girentuximab, golimumab, guselkumab, imgatuzumab, infliximab, intétumumab, itolizumab, ligélizumab, lorvotuzumab mertansine, lumretuzumab, mogamulizumab, namilumab, nesvacumab, obinutuzumab, ocaratuzumab, ontuxizumab, orticumab, otélixizumab, ozanezumab, pritoxaximab, rituximab, robatumumab, rolédumab, sarilumab, sétoxaximab, siltuximab, sirakumab, solanezumab, téplizumab, tildrakizumab, tocilizumab, trégalizumab, ublituximab, vanucizumab, varlilumab, védolizumab, vorsétuzumab, vorsétuzumab mafodotin, adecatumumab, pritumumab, anrukinzumab, atézolizumab, bévacizumab, briakinumab, clivatuzumab, dacétuzumab, duligotuzumab, éfalizumab, énavatuzumab, étrolizumab, omalizumab, onaituzumab, parsatuzumab, patéclizumab, pérakizumab, pertuzumab, pinatuzumab védotin, polatuzumab védotin, quilizumab, ramucirumab, rontalizumab, sifalimumab, trastuzumab, trastuzumab emtansine, vésencumab, cixutumumab, actoxumab, aducanumab, anifrolumab, basiliximab, bézlotoxumab, bimagmmab, canakinumab, cétuximab, clazakizumab, conatumumab, dalotuzumab, daratumumab, dinutuximab, diridavumab, éldélumab, enfortumab védotin, énokizumab, étaracizumab, ficlatuzumab, flanvotumab, futuximab, icmcumab, imalumab, lenziiumab, léxatumumab, lodelcizumab, lucatumumab, milatuzumab, milatuzumab- doxorubicin, motavizumab, narnatumab, nécitumumab, olaratumab, palivizumab, patritumab, pidilizumab, sécukinumab, tigatuzumab, tosatoxumab, tucotuzumab celmoleukin, veltuzumab, zatuximab, épratuzumab, zalutumumab, rafivirumab, apolizumab, avélumab, bapineuzumab, béîimumab, bivatuzumab, cantuzumab mertansine, écromeximab, erlizumab, felvizumab, fontolizumab, iratumumab, kéliximab, labétuzumab, labétuzumab tétraxetan, lintuzumab, lumiliximab, mapatumumab, mépolizumab, morolimumab, ocréîizumab, ofatumumab, pagibaximab, pascolizumab, priliximab, raxibacumab, régavirumab, sibrotuzumab, siplizumab, sontuzumab, stamulumab, talizumab, téfibazumab, ténelixiraab, toralizumab, tuvirumab, urtoxazumab, et zanolimumab.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle les régions variables sont identiques à celles d'une IgGl choisie dans le groupe constitué de : adalimumab, alemtuzumab, alirocumab, amatuximab, antumab ravtansine, bavituximab, benralizumab, brentuximab védotin, cantuzumab ravtansine, carlumab, codrituzumab, coltuximab ravtansine, daclizumab, dénintuzumab mafodotin, élotuzumab, émactuzumab, énoticumab, ensituximab, farlétuzumab, galiximab, ganitumab, ganténerumab, girentuximab, golimumab, guselkumab, imgatuzumab, infliximab, intétumumab, itolizumab, ligélizumab, lorvotuzumab mertansine, lumretuzumab, mogamulizumab, namilumab, nesvacumab, obinutuzumab, ocaratuzumab, ontuxizumab, orticumab, otélixizumab, ozanezumab, pritoxaximab, rituximab, robatumumab, rolédumab, sarilumab, sétoxaximab, siltuximab, sirukumab, solanezumab, téplizumab, tildrakizumab, tocilizumab, trégalizumab, ublituximab, vanucizumab, varlilumab, védolizumab, vorsétuzumab, vorsétuzumab mafodotin, adecatumumab, pritumumab, anrukinzumab, atézolizumab, bévacizumab, briakinumab, clivatuzumab, dacétuzumab, duligotuzumab, éfalizumab, énavatuzumab, étrolizumab, omalizumab, onartuzumab, parsatuzumab, patéclizumab, pérakizumab, pertuzumab, pinatuzumab védotin, polatuzumab védotin, quiiizumab, ramucirumab, rontalizumab, sifalimumab, trastuzumab, trastuzumab emtansine, vésencumab, cixutumumab, actoxumab, aducanumab, anifrolumab, basiliximab, bézlotoxumab, bimagrumab, canakinumab, cétuximab, clazakizumab, conatumumab, dalotuzumab, dai'atumumab, dinutuximab, diridavumab, éldélumab, enfortumab védotin, énokizumab, étaracizumab, ficlatuzumab, flanvotumab, futuximab, icrucumab, imalumab, lenzilumab, léxatumumab, lodelcizumab, lucatumumab, milatuzumab, milatuzumab- doxorubicin, motavizumab, namatumab, nécitumumab, olaratumab, palivizumab, patritumab, pidilizumab, sécukinumab, tigatuzumab, tosatoxumab, tucotuzumab celmoleukine, veltuzumab, zatuximab, épratuzumab, zalutumumab et rafivirumab.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle les régions variables sont identiques à celles d'une IgGl choisie dans le groupe constitué de : adalimumab, alemtuzumab, alirocumab, amatuximab, antumab ravtansine, bavituximab, benralizumab, brentuximab védotin, cantuzumab ravtansine, carlumab, codrituzumab, coltuximab ravtansine, daclizumab, dénintuzumab mafodotin, élotuzumab, émactuzumab, énoticumab, ensituximab, farlétuzumab, galiximab, ganitumab, ganténerumab, girentuximab, golimumab, guselkumab, imgatuzumab, infliximab, intétumumab, itolizumab, ligélizumab, lorvotuzumab mertansine, lumretuzumab, mogamulizurnab, namilumab, nesvacumab, obinutuzumab, ocaratuzumab, ontuxizumab, orticumab, otélixizumab, ozanezumab, pritoxaximab, rituximab, robatumumab, rolédumab, sarilumab, sétoxaximab, siltuximab, sirukumab, solanezumab, téplizumab, tildrakizumab, tocilizumab, trégalizumab, ublituximab, vanucizumab, varlilumab, védolizumab, vorsétuzumab, vorsétuzumab mafodotin, adecatumumab, pritumumab, anrukinzumab, atézolizumab, bévacizumab, briakinumab, clivatuzumab, dacétuzumab, duligotuzumab, éfalizumab, énavatuzumab, étrolizumab, omalizumab, onartuzumab, parsatuzumab, patéclizumab, pérakizumab, pertuzumab, pinatuzumab védotin, polatuzumab védotin, quilizumab, ramucirumab. rontalizumab, sifalimumab, trastuzumab, trastuzumab emtansine, vésencumab, cixutumumab, actoxumab, aducanumab, anifrolumab, basiiiximab, bézlotoxumab, bimagrumab, canakinumab, clazakizumab, conatumumab, dalotuzumab, daratumumab, dinutuximab, diridavumab, éldélumab, enfortumab védotin, énokizumab, étaracizumab, ficiatuzumab, flanvotumab, futuximab, icrucumab, imalumab, lenzilumab, léxatumumab, lodelcizumab, lucatumumab, milatuzumab, milatuzumab-doxorubicin, motavizumab, namatumab, nécitumumab, olaratumab, palivizumab, patritumab, pidilizumab, séculdnumab, tigatuzumab, tosatoxumab, tucotuzumab celmoleukine, veltuzumab, zatuximab, épratuzumab, zalutumumab et rafîvirumab.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle les régions variables de ladite IgGl d'allotype Glm3,l reconnaissent spécifiquement le TNF-α, {Tumor Necrosis Facior- ).

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle les régions variables sont identiques à celles de l'adalimumab. Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une variante de l'adalimumab d'allotype Glm3,l pour son utilisation e tant que médicament, notamment chez im patient dont les IgGl endogènes sont d'allotype Glm3, l . Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une variante de l'adalimumab d'allotype Glm3,l pour son utilisation en tant que médicament, notamment chez un patient dont les IgGl endogènes sont d'allotype Glm3 et/ou Glml7,l. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle les régions variables sont identiques à celles du rituximab.

Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une variante du rituximab d'allotype Glm3,l pour son utilisation en tant que médicament, notamment chez un patient dont les IgGl endogènes sont d'allotype Glm3,l.

Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une variante du rituximab d'allotype Glm3,l pour son utilisation en tant que médicament, notamment chez un patient dont les IgGl endogènes sont d'allotype Glm3 et/ou Glml7,l.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle les régions variables sont identiques à celles du trastuzumab.

Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une variante du trastuzumab d'allotype Glm3,l pour son utilisation en tant que médicament, notamment chez un patient dont les IgGl endogènes sont d'allotype Glm3, . Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une variante du trastuzumab d'allotype Glm3,l pour son utilisation en tant que médicament, notamment chez un patient dont les IgGl endogènes sont d'allotype Glm3 et/ou Glml7,l.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle les régions variables sont identiques à celles du cétuximab. Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une variante du cétuximab d'allotype Glm3,l pour son utilisation en tant que médicament, notamment chez un patient dont les IgGl endogènes sont d'allotype Glm3,l . Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une variante du cétuximab d'allotype Glm3,l pour son utilisation en tant que médicament, notamment chez un patient dont les IgGl endogènes sont d'allotype Glm3 et/ou Glml7,l .

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle les régions variables de ladite IgGl d'allotype Glm3,l ne sont pas dirigées contre CD52.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus pour son utilisation en tant que médicament, dans laquelle ladite IgGl d'allotype Glm3,l n'est pas une variante de î'alemtuzumab d'allotype Glm3,l .

Dans un aspect particulier, l'invention concerne également une combinaison d'au moins deux IgGl , dont l'une au moins est une IgGl d'allotype Glm3,l, pour son utilisation comme médicament.

Dans un autre aspect, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l, telle que définie ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement d'une maladie appartenant au groupe constitué des affections cancéreuses, des maladies auto-immunes, des désordres immunitaires, affections dysimmunitaires, des maladies infectieuses, des maladies inflammatoires, des maladies dégénératives, des maladies métaboliques, des maladies vascuiaires, et des anomalies de la coagulation.

En particulier, les régions variables de PIgGl d'allotype Gl m3,l peuvent être choisies pour reconnaître un épitope dont la reconnaissance permet le traitement des affections cancéreuses, ou cancers. Lesdites affections cancéreuses appartiennent notamment au groupe constitué du cancer de la vessie, du cancer du sein, du cancer de la tête et du cou, du cancer de la prostate, du cancer colo-rectal, du cancer gastrique, du mélanome, notamment le mélanome métastatique, du cancer du sein, du cancer de l'ovaire, du cancer du col de l'utérus, du cancer de l'endomètre, du cancer du rein, du cancer du poumon à petites cellules, du cancer du poumon à grosses cellules, du cancer pancréatique, du myélome multiple, du lymphome hodgkinien et non hodgkinien, du lymphome systémique anaplastique à larges cellules, des leucémies, notamment la leucémie aiguë lymphoblastique, la leucémie lymphoïde chronique et la leucémie aiguë myéloblastique, glioblastome et du neuroblastome.

En particulier, les régions variables de l'IgGl d'allotype Glm3,l peuvent être choisies pour reconnaître un épitope dont la reconnaissance permet le traitement d'une maladie auto- immune, d'un désordre immunitaire, d'une affection dysimmunitaire, d'une maladie inflammatoire, d'une maladie dégénérative, d'une maladie métabolique, d'une maladie vasculaire, oii d'une anomalie de la coagulation appartenant au groupe constitué de la dégénérescence maculaire, l'hypercholestérolémie, la prévention des thromboses en angioplastie, la rhinite allergique auto-immune, le rejet de greffe, la maladie du greffon contre l'hôte, l'asthme, la sclérose en plaques, l'anémie hémolytique,le purpura thrombotique thrombopénique, les deimatites allergiques, les réactions anaphylactiques, l'œdème de Quincke, la polyarthrite rhumatoïde, l'arthrite juvénile idiopathique, la spondylarthrite ankylosante, le rhumatisme psoriasique, les vascularites, le lupus érythémateux systémique, le syndrome de Gougerot-Sjogren, la rectocolite hémorragique, l'artériosclérose, l'arthrose, l'ostéoporose, les infections respiratoires aiguës et chroniques, la maladie de Crohn, le psoriasis, la réversion de i'anticoaguiation induite par le dabigatran, la maladie de Castleman, le syndrome de Muckie- Wells, les cryopyrinopathies, l'hémophilie.

Les régions variables de l'IgGl d'allotype Glm3,l peuvent être choisies pour reconnaître un épitope dont la reconnaissance pennet le traitement d'une infection virale, parasitaire ou bactérienne, comme par exemple une infection par virus respiratoire syncytial.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement d'un désordre inflammatoire faisant intervenir le TNF-α, notamment la polyarthiite rhumatoïde, l'arthrite juvénile idiopathique, la spondylarthrite ankylosante, la maladie de Crohn, la rectocolite hémorragique, le psoriasis, le rhumatisme psoriasique, Phydradénite suppurée.

Dans un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une IgGl telle que décrite ci-dessus, dans laquelle les régions variables de l'IgGl reconnaissent spécifiquement le TNF-α, pour son utilisation dans le traitement d'un désordre inflammatoire faisant intervenir le TNF-α, notamment la polyarthrite rhumatoïde, l'aithrite juvénile idiopathique ou la spondylarthrite ankylosante.

Avantageusement, ladite IgGl est une variante de l'adalimumab d'allotype Glm3,l.

De manière plus avantageuse, la présente invention concerne une IgGl dans laquelle les régions variables de l'IgGl reconnaissent le TNF- , de préférence une variante de l'adalimumab d'allotype Glm3,l, pour son utilisation dans le traitement d'un désordre inflammatoire faisant intervenir le TNF- , notamment la polyarthrite rhumatoïde, l'arthrite juvénile idiopathique ou la spondylarthrite ankylosante chez un patient dont les IgGl endogènes sont d'allotype Glm3,l.

De manière plus avantageuse, la présente invention concerne une IgGl dans laquelle les régions variables de l'IgGl reconnaissent le TNF- , de préférence une variante de l'adalimumab d'allotype Glm3,l , pour son utilisation dans le traitement d'un désordre inflammatoire faisant intervenir le TNF-α, notamment la polyarthrite rhumatoïde, l'arthrite juvénile idiopathique ou la spondylarthrite ankylosante chez impatient dont les IgGl endogènes sont d'allotype Glm3 et ou Glml7,l . Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm.3,1 telle que définie ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement d'une pathologie traitée par le rituximab.

Dans un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une IgGl telle que décrite ci-dessus, dans laquelle les régions variables de l'IgGl reconnaissent spécifiquement le CD20.

Avantageusement, ladite IgGl est une variante du rituximab d'allotype Glm3,l. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement d'une pathologie traitée par le trastuzumab. Dans un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une IgGl telle que décrite ci-dessus, dans laquelle les régions variables de PIgGl reconnaissent spécifiquement la molécule HER-2. Avantageusement, ladite IgGl est une variante du trastuzumab d'allotype Glm3,l .

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement d'une pathologie traitée par le cétuximab.

Dans un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une IgGl telle que décrite ci-dessus, dans laquelle les régions variables de l'IgGl reconnaissent spécifiquement le récepteur à l'EGF ou EGFR. Avantageusement, ladite IgGl est une variante du cétuximab d'allotype Glm3,l .

Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une IgGl d'allotype Glm3,l telle que décrite ci-dessus, à l'exception d'une IgGl dans laquelle les régions variables de ladite IgGl reconnaissent CD52, pour son utilisation dans le traitement du cancer, notamment de la leucémie iymphoïde chronique à cellules B (LLC-B) ou de la leucémie pro-lymphocytaire, ou de la sclérose en plaques. Dans ce mode de réalisation, la présente invention ne concerne donc pas une variante de l'alemtuzumab (ou CAMPATH-IH) d'allotype Glm3,l pour son utilisation dans le traitement de la sclérose en plaque ou du cancer, notamment de la leucémie lymphoïde chronique à cellules B (LLC-B) ou de la leucémie pro-lymphocytaire.

Etant donné qu'il est possible de réduire la dose d'IgGl administrée au patient atteint par la pathologie traitée par ladite IgGl , cette diminution de la dose peut se traduire par une diminution de la dose unique administrée et/ou par une diminution de la fréquence entre deux administrations consécutives.

La présente invention concerne également l'utilisation d'une région constante d'une chaîne lourde d'IgGl d'allotype Glm3,l, pour réduire la dose unique et/ou la fréquence d'administration d'une IgGl . La présente invention concerne également un procédé pour réduire la dose unique et/ou la fréquence d'administration d'une IgGl administrée pour le traitement d'une pathologie, comprenant les étapes suivantes :

1) sélectionner une IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,l utilisée dans le traitement de la pathologie,

2) remplacer la région constante de ladite IgGl d'allotype Glm3, Glml7 ou Glml7,l pat- la région constante d'une chaîne lourde d'IgGl d'allotype Glm3,l,

3) administrer l'IgGl d'allotype Glm3,l, obtenue à l'étape (2), à un patient en ayant besoin, en particulier à un patient d'allotype Glm3,l.

Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant en tant que substance active une IgGl d'allotype Glm3,l telle que définie ci-dessus et un véhicule pharrnaceutiquement acceptable. Par "véhicule pharrnaceutiquement acceptable ", on entend au sens de la présente invention un matériel non toxique et compatible avec l'organisme d'un patient.

La composition pharmaceutique de l'invention peut être administrée par voie intraveineuse, notamment par injection ou par perfusion graduelle, par voie intra-musculaire, par voie sous-cutanée, par voie locale au moyen d'infiltrations, per os, ou par voie respiratoire ou pulmonaire au moyen d'aérosols.

Les préparations pour une administration parentérale peuvent inclure des solutions aqueuses ou non-aqueuses stériles, des suspensions ou des émulsions. Des exemples de solvants non-aqueux sont le propylène glycol, le polyéthylène glycol, des huiles végétales, ou des esters organiques injectables tels que l'éthyl oléate. Des véhicules aqueux comprennent l'eau, des solutions alcool/eau, des émulsions ou des suspensions.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, dans laquelle dans laquelle les régions variables de l'IgGl d'allotype Glm3,l sont identiques à celles de i'adaiimumab, du rituximab, du trastuzumab ou du cétuximab. Les figures et les exemples suivants illustreront mieux l'invention, sans pour autant en limiter sa portée.

LEGENDES DES FIGURES

FIGURE 1. Résultats de l'analyse par résonance plasmonique de surface(SPR) de la fixation des variants allotypiques de l'adalimumab à FcRn (□ : Glm3,l ; Δ : Glml7 ; * : Glm3 ; · : Glml7,l). Afin de comparer les cinétiques de fixation, les réponses (axe des ordonnées, exprimées en unité arbitraire, RU) ont été mesurées à trois intervalles de temps (axe des abscisses, en secondes) après injection de l'anticoips dans le système : 180 secondes (noté Binding sur la figure), 200 secondes (noté Stability 1 sur la figure) et 580 secondes (noté Stability 2 sur la figure).

FIGURE 2. Résultats de l'analyse par résonance plasmonique de surface (SPR), en prenant comme référence le variant Glml7,l de l'adalimumab. Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport à la référence (considérée comme 100 %). Barre de gauche (fond blanc) : 180 secondes {Binding sur la figure 1) ; barre centrale (points noirs sur fond blanc) : 200 secondes {Stability 1 sur la figure 1) ; barre de droite (points blancs sur fond noir) : 580 secondes {Stability 2 sur la figure 1).

FIGURE 3. Résultats de P analyse de la fixation des variants allotypiques de l'adalimumab par cytométrie en flux. Les intensités de fluorescence sont mesurées pour chaque variant de l'adalimumab à des concentrations de 0, 1, 10, 25, 50 et 100 g/mL. Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de la fixation au FcRn membranaire du rituximab marqué à P AF488. Le rituximab AF488 seul est considéré comme 100 % de fixation. Le variant IgA de l'adalimumab constitue le témoin négatif.

FIGURE 4. Carte génétique du vecteur pFUSE-CHIg-hGl . FIGURE 5. Carte génétique du vecteur pFUSE2-CLIg-hk.

FIGURE 6. Schéma représentant la production d'une IgGl .

EXEMPLES Exemple 1 - Adalimumab

Afin d'éviter toute participation du domaine variable de l'anticorps thérapeutique ou l'influence d'autres paramètres (comme par exemple le tampon ou le système utilisé pour la production des anticorps), les 4 formes allotypiques Glm3, Glm3,l, Glml7 et Glml7,l d'une même IgGl, l'adalimumab (un anticorps thérapeutique humain anti-TNF-α), ont été construites et testées. La région constante de la chaîne lourde est donc différente chez les 4 formes allotypiques de l'adalimumab, tandis que la région variable de la chaîne lourde et de la chaîne légère, ainsi que la région constante de la chaîne légère, sont identiques chez les 4 formes allotypiques de l'adalimumab. Ces IgGl ne diffèrent donc que par la région constante de la chaîne lourde.

Ces IgGl ont d'abord été étudiées par SPR dans les mêmes conditions (Figures 1 et 2). Les valeurs obtenues avec le variant Glml7,l (comme l'adalimumab commercial) sont considérées comme 100 %.

Ces résultats indiquent que l'IgGl d'ailotype Glm3 possède une fixation et une stabilité réduites de près de 15 % par rapport à l'allotype Glml7,l.

De manière inattendue, ces résultats indiquent également que l'adalimumab d'ailotype Glm3,l se révèle le plus efficace en terme d'affinité de liaison (+ 10 %) et de stabilité du complexe adalimumab / FcRn (jusqu'à + 40 %).

Les résultats obtenus sur les cellules Jurkat_hFcRn renforcent ces résultats et indiquent que les variants d'adalimumab d'ailotype Glm3,l, Glml7,l et Glml7 ont une capacité d'inhibition de la fixation du rituximab-AF488 à FcRn à pFL=6 supérieure à celle de l'adalimumab d'ailotype Glm3 (Figure 3).

L'adalimumab d'ailotype Glm3,l est d'ailleurs le plus efficace parmi les différents allotypes.

Ces résultats montrent pour la première fois que des variations d'un résidu dans le domaine CHl en association avec d'autres résidus dans le domaine CH3, est capable de moduler l'affinité d'une IgGl pour la protéine FcRn, alors que ces variations, prises individuellement, n'ont pas d'effet, et qu'elles ne sont pas localisées dans la zone d'interaction avec FcRn. Ces résultats montrent ainsi qu'une IgGl thérapeutique d'allotype Glm3,l aura une demi-vie supérieure à une IgGl identique mais d'allotype différent, quel que soit l'allotype des IgGl endogènes du patient.

En prenant en compte la compétition entre les IgGl endogènes d'un patient et les IgGl thérapeutiques pour le FcRn, ces résultats indiquent que la demi-vie d'une IgGl d'allotype Glm3, Glml7,l ou Glml7 sera limitée chez un patient produisant des IgGl d'allotype Glm3,l.

A l'inverse, des IgGl thérapeutiques d'allotype Glm3,l utilisées chez ces mêmes patients auront une demi-vie améliorée par rapport aux IgGl thérapeutiques d'allotype Glml7,l, Glml7 ou Glm3 actuellement utilisées en thérapie.

Cette demi-vie améliorée peut permettre de réduire la dose unique administrée et/ou la fréquence d'administration aux patients.

Exemple 2 - Trastuznmab

Les 4 formes allotypiques Glm3, Glm3,l, Glml7 et Glml7,l d'une même IgGl, le trastuzumab (anticorps thérapeutique humanisé anti-HER-2), sont construites et testées. La région constante de la chaîne lourde est donc différente chez les 4 formes allotypiques du trastuzumab, tandis que la région variable de la chaîne lourde et de la chaîne légère, ainsi que la région constante de la chaîne légère, sont identiques chez les 4 formes allotypiques du trastuzumab. Ces IgGl ne diffèrent donc que par la région constante de la chaîne lourde.

L'IgGl d'allotype Glm3,l est le plus efficace en terme d'affinité de liaison et de stabilité du complexe trastuzumab / FcRn. Exemple 3 - Rituximab

Les 4 formes allotypiques Glm3, Glm3,l, Giml7 et Glml7,l d'une même IgGl, le rituximab (anticorps thérapeutique chimérique anti-CD20), sont construites et testées. La région constante de la chaîne lourde est donc différente chez les 4 formes allotypiques du rituximab, tandis que la région variable de la chaîne lourde et de la chaîne légère, ainsi que la région constante de la chaîne légère, sont identiques chez les 4 formes allotypiques du rituximab. Ces IgGl ne diffèrent donc que par la région constante de la chaîne lourde.

L'IgGl d'allotype Glm3,l est le plus efficace en terme d'affinité de liaison et de stabilité du complexe rituximab / FcRn. Exemple 4 - Cétuximab

Les 4 formes allotypiques Glm3, Glm3,l, Glml7 et Glml7,l d'une même IgGl, le cétuximab (anticorps thérapeutique chimérique anti-EGFR), sont construites et testées. La région constante de la chaîne lourde est donc différente chez les 4 formes allotypiques du cétuximab, tandis que la région variable de la chaîne lourde et de la chaîne légère, ainsi que la région constante de la chaîne légère, sont identiques chez les 4 formes allotypiques du cétuximab. Ces IgGl ne diffèrent donc que par la région constante de la chaîne lourde. L'IgGl d'allotype Glm3,l est le plus efficace en terme d'affinité de liaison et de stabilité du complexe cétuximab / FcRn.

Matériels et méthodes Anticorps :

Les anticorps utilisés sont Padalirnumab, le rituximab, le trastuzumab et le cétuximab. Les variants allotypiques de l'adalimumab ont été produits à partir de plasmides pFUSE- CHIg exprimant la région constante de la chaîne lourde des différents allotypes humains. Chaque variant allotypique de l'adalimumab a été synthétisé à partir des plasmides pFUSE-CHIg-hGl (SEQ 1D NO : 5) et pFUSE2-CLIg-hk (SEQ ID NO : 6) de la société InvivoGen. La séquence codant les parties variables de l'adalimumab a été insérée dans la cassette de clonage (VH et VL) des deux plasmides (Figures 4, 5 et 6). La séquence codant la chaîne lourde du pFUSE-CHIg a été déclinée dans chaque allotype. Des cellules CHO (Chinese Hamster Ovary) ont été co-transfectées avec les deux plasmides et les anticorps produits dans le surnageant ont été purifiés par chroniatographie d'affinité sur protéine G.

Vecteur Séquence

pFUSE-CHIg-hGl GGATCTGCGATCGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGC SEQ ID NO : 5 ACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGG

CAATTGAACGGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACT

GGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG

La séquence de la GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAAC région constante de GTTCTTTTTC GC AACGGGTTTGCC GC C AGA AC AC AGCTGA A

GCTTCGAGGGGCTCGCATCTCTCCTTCACGCGCCCGCCGCCC

TACCTGAGGCCGCCATCCACGCCGGTTGAGTCGCGTTCTGCC la chaîne lourde est GCCTCCCGCCTGTGGTGCCTCCTGAACTGCGTCCGCCGTCTA indiquée en gras. GGÏAAGTTTAAAGCTCAGGTCGAGACCGGGCCTTTGTCCGG

CGCTCCCTTGGAGCCTACCTAGACTCAGCCGGCTCTCCACGC

TTTGCCTGACCCTGCTTGCTCAACTCTACGTCTTTGTTTCGTT

TTCTGTTCTGCGCCGTTACAGATCCAAGCTGTGACCGGCGCC

TACCTGAGATCACCGGTGAATTCGATATCTCGAGTGCTAGC

ACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCC

AAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCT

GGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTG

GAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCC

GGCTGTC CT AC A GT CCT C AGG ACTCT ACTCCCT C AGC AG

CGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGA

CCT AC ATCTGC A AC GTG AATC AC A AG CCCAGC AAC ACC A

AGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAA

CTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGG

GGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGG

AC ACC CTC ATG ATCT C C C GG ACCCCTG AG GTC AC AT GC G

TGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAG

TTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCC

AAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTA

CCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTG

GCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAA

AGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGC

CAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGC

CCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGC

CTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATC

GCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAA

CTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTC

CTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAG

GTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCA

TGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTC

CCTGTCTCCGGGTAAATGAGTCCTAGCTGGCCAGACATGA

TAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATG

CAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATT

GCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAAC

AACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAG

GTGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATG

TGGTATGGAATTAATTCTAAAATACAGCATAGCAAAACTTT

AACCTCCAAATCAAGCCTCTACTTGAATCCTTTTCTGAGGGA

TGAATAAGGCATAGGCATCAGGGGCTGTTGCCAATGTGCAT

TAGCTGTTTGCAGCCTCACCTTCTTTCATGGAGTTTAAGATA

TAGTGTATTTTCCCAAGGTTTGAACTAGCTCTTCATTTCTTTA

TGTTTTAAATGCACTGACCTCCCACATTCCCTTTTTAGTAAA

ATATTCAGAAATAATTTAAATACATCATTGCAATGAAAATA AATGTTTTTTATT AGGC AGA ATC C AGATGCTC A AGGC C CTTC

ATAATATCCCCCAGTTTAGTAGTTGGACTTAGGGAACAAAG

GAACCTTTAATAGAAATTGGACAGCAAGAAAGCGAGCTTCT

AGCTTATCCTCAGTCCTGCTCCTCTGCCACAAAGTGCACGCA

GTTGCCGGCCGGGTCGCGCAGGGCGAACTCCCGCCCCCACG

GCTGCTCGCCGATCTCGGTCATGGCCGGCCCGGAGGCGTCC

CGGAAGTTCGTGGACACGACCTCCGACCACTCGGCGTACAG

CÏCGTCCAGGCCGCGCACCCACACCCAGGCCAGGGTGTTGT

CCGGCACCACCTGGTCCTGGACCGCGCTGATGAACAGGGTC

ACGTCGTCCCGGACCACACCGGCGAAGTCGTCCTCCACGAA

GTCCCGGGAGAACCCGAGCCGGTCGGTCCAGAACTCGACCG

CTCC GGCG ACGTCGCGC GCGGTGAGC AC C GGAACGGC ACTG

GTCAACTTGGCCATGATGGCTCCTCctgtcaggagaggaaagagaagaag gttagtacaattgCTATAGTGAGTTGTATTATACTATGCAGATATAC

TATGCCAATGATTAATTGTCAAACTAGGGCTGCAgggttcatagtg ccacttttcctgcactgccccatctcctgcccaccctttcccaggcatagacagtcagtg acttacCA

AACTCACAGGAGGGAGAAGGCAGAAGCTTGAGACAGACCC

GCGGGACCGCCGAACTGCGAGGGGACGTGGCTAGGGCGGC

TTCTTTTATGGTGC G CC GGCCCTCGG AGGC AGGGC GCTCGG

GGAGGCCTAGCGGCCAATCTGCGGTGGCAGGAGGCGGGGC

CGAAGGCCGTGCCTGACCAATCCGGAGCACATAGGAGTCTC

AGCCCCCCGCCCCAAAGCAAGGGGAAGTCACGCGCCTGTAG

CGCCAGCGTGTTGTGAAATGGGGGCTTGGGGGGGTTGGGGC

CCTGACTAGTCAAAACAAACTCCCATTGACGTCAATGGGGT

GGAGACTTGGAAATCCCCGTGAGTCAAACCGCTATCCACGC

CCATTGATGTACTGCCAAAACCGCATCATCATGGTAATAGC

GATGACTAATACGTAGATGTACTGCCAAGTAGGAAAGTCCC

ATAAGGTCATGTACTGGGCATAATGCCAGGCGGGCCATTTA

CCGTCATTGACGTCAATAGGGGGCGTACTTGGCATATGATA

CACTTGATGTACTGCCAAGTGGGCAGTTTACCGTAAATACTC

CACCCATTGACGTCAATGGAAAGTCCCTATTGGCGTTACTAT

GGGAACATACGTCATTATTGACGTCAATGGGCGGGGGTCGT

TGGGCGGTCAGCCAGGCGGGCCATTTACCGTAAGTTATGTA

ACGCCTGCAGGTTAATTAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAG

CAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTT

TÏTCCATAGGCTCCGCCCCCCÏGACGAGCATCACAAAAATC

GACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATA

AAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTC

TCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTT

TCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTG

TAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGG

CTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTT

ATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACG

ACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGC AGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTG

GTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTA

TCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTT

GGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGG

TGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAA

AAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTG

ACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTC

ATGGCTAGTTAATTAACATTTAAATCAGCGGCCGCAATAAA

ATATCTTTATTTTCATTACATCTGTGTGTTGGTTTTTTGTGTG

AATCGTAACTAACATACGCTCTCCATCAAAACAAAACGAAA

CAAAACAAACTAGCAAAATAGGCTGTCCCCAGTGCAAGTGC

AGGTGCCAGAACATTTCTCTATCGAA

pFUSE2-CIIg-hk GGATCTGCGATCGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGC SEQ ID NO : 6 ACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGG

CAATTGAACGGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACT

GGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG

La séquence de la GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAAC région constante de GTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGCTGAA

GCTTCGAGGGGCTCGCATCTCTCCTTCACGCGCCCGCCGCCC

la chaîne légère

TACCTGAGGCCGCCATCCACGCCGGTTGAGTCGCGTTCTGCC

kappa est indiquée GCCTCCCGCCTGTGGTGCCTCCTGAACTGCGTCCGCCGTCTA en gras. GGTAAGTTTAAAGCTCAGGTCGAGACCGGGCCTTTGTCCGG

CGCTCCCTTGGAGCCTACCTAGACTCAGCCGGCTCTCCACGC

TTTGCCTGACCCTGCTTGCTCAACTCTACGTCTTTGTTTCGTT

TTCTGTTCTGCGCCGTTACAGATCCAAGCTGTGACCGGCGCC

TACCTGAGATCACCGGTCACCATGGAAATCAAACGTACGGT

GGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGA

GCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCT

GAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAA

GGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGA

GTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGC

CTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGA

GAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGG

CCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAG

AGTGTTAGAGGGAGCTAGCTCGACATGATAAGATACATTG

ATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAA

ATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTG

AAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCT

GCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATG

TTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAA

GTAAAACCTCTACAAATGTGGTATGGAATTAATTCTAAAAT

ACAGCATAGCAAAACTTTAACCTCCAAATCAAGCCTCTACT

TGAATCCTTTTCTGAGGGATGAATAAGGCATAGGCATCAGG GGCTGTTGCCAATGTGCATTAGCTGTTTGCAGCCTCACCTTC

TTTCATGGAGTTTAAGATATAGTGTATTTTCCCAAGGTTTGA

ACTAGCTCTTCATTTCTTTATGTTTTAAATGCACTGACCTCCC

ACATTCCCTTTTTAGTAAAATATTCAGAAATAATTTAAATAC

ATCATTGCAATGAAAATAAATGTTTTTTATTAGGCAGAATCC

AGATGCTCAAGGCCCTTCATAATATCCCCCAGTTTAGTAGTT

GGACTTAGGGAACAAAGGAACCTTTAATAGAAATTGGACAG

CAAGAAAGCGAGCTTCTAGCTTTAGTTCCTGGTGTACTTGAG

GGGGATGAGTTCCTCAATGGTGGTTTTGACCAGCTTGCCATT

CATCTCAATGAGCACAAAGCAGTCAGGAGCATAGTCAGAGA

TGAGCTCTCTGCACATGCCACAGGGGCTGACCACCCTGATG

GATCTGTCCACCTCATCAGAGTAGGGGTGCCTGACAGCCAC

AATGGTGTCAAAGTCCTTCTGCCCGTTGCTCACAGCAGACCC

AATGGCAATGGCTTCAGCACAGACAGTGACCCTGCCAATGT

AGGCCTC A ATGTGG AC AGC AGAG ATG ATCTC C CC AGTCTTG

GTCCTGATGGCCGCCCCGACATGGTGCTTGTTGTCCTCATAG

AGCATGGTGATCTTCTCAGTGGCGACCTCCACCAGCTCCAG

ATCCTGCTGAGAGATGTTGAAGGÏCTTCATGATGGCTCCTCct gtcaggagaggaaagagaagaaggttagtacaattgCTATAGTGAGTTGTATTAT

ACTATGCTTATGATTAATTGTCAAACTAGGGCTGCAgggttcata gtgccacttttcctgcactgccccatctcctgcccaccctttcccaggcatagacagtca gtgacttac

CAAACTCACAGGAGGGAGAAGGCAGAAGCTTGAGACAGAC

CCGCGGGACCGCCGAACTGCGAGGGGACGTGGCTAGGGCG

GCTTCTTTTATGGTGCGCCGGCCCTCGGAGGCAGGGCGCTC

GGGGAGGCCTAGCGGCCAATCTGCGGTGGCAGGAGGCGGG

GCCGAAGGCCGTGCCTGACCAATCCGGAGCACATAGGAGTC

TCAGCCCCCCGCCCCAAAGCAAGGGGAAGTCACGCGCCTGT

AGCGCCAGCGTGTTGTGAAATGGGGGCTTGGGGGGGTTGGG

GCCCTGACTAGTCAAAACAAACTCCCATTGACGTCAATGGG

GTGGAGACTTGGAAATCCCCGTGAGTCAAACCGCTATCCAC

GCCCATTGATGTACTGCCAAAACCGCATCATCATGGTAATA

GCGATGACTAATACGTAGATGTACTGCCAAGTAGGAAAGTC

CCATAAGGTCATGTACTGGGCATAATGCCAGGCGGGCCATT

TACCGTCATTGACGTCAATAGGGGGCGTACTTGGCATATGA

TACACTTGATGTACTGCCAAGTGGGCAGTTTACCGTAAATA

CTCCACCCATTGACGTCAATGGAAAGTCCCTATTGGCGTTAC

TATGGGAACATACGTCATTATTGACGTCAATGGGCGGGGGT

CGTTGGGCGGTCAGCCAGGCGGGCCATTTACCGTAAGTTAT

GTAACGCCTGCAGGTTAATTAAGAACATGTGAGCAAAAGGC

CAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGG

CGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAA

ATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTA

TAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCG

CTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGC CTTTCTCCCTTC GGGA AGCGTGGC GCTTTCTC AT AGCTC AC G

CTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCT

GGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCG

CCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGAC

ACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATT

AGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAA

GTGGTGGC CT A ACTAC GGCT AC ACT AGAAGA AC AGTATTTG

GTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGA

GTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAG

CGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAA

AAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGG

TCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTT

GGTCATGGCTAGTTAATTAACATTTAAATCAGCGGCCGCAA

TAAAATATCTTTATTTTCATTACATCTGTGTGTTGGTTTTTTG

TGTGAATCGTAACTAACATACGCTCTCCATCAAAACAAAAC

GAAACAAAACAAACTAGCAAAATAGGCTGTCCCCAGTGCA

AGTGCAGGTGCCAGAACATTTCTCTATCGAA

Tableau 4. Séquences des vecteurs utilisés pour la construction des variants allotypiques.

Les variants allotypiques du rituximab, du t astuzumab et du cétuximab sont produits par la même méthode.

Lignées cellulaires :

Les lignées cellulaires exprimant ou non un récepteur FcRn tronqué sont obtenues par transfection de cellules Jurkat avec un pîasmide contenant la séquence tronquée de FcRn humain, dépourvue des 33 acides aminés C-terminaux de la protéine.

Les cellules sont maintenues dans un milieu de culture RPMI additionné de 10 % de sérum de veau fœtal inactivé par la chaleur, L-glutamine (2mM), et de G418 (Img/mL).

Mesure de l'affinité par cytométrie de flux :

Le rituximab est conjugué au marqueur fluorescent AF488 (rituximab-AF488) en utilisant le kit commercialisé par la société Invitrogen (Cergy-Pontoise, France) selon les instructions du fabricant. Le rituximab- AF488 est utilisé à la concentration de 1 μg/mL en compétition avec soit du rituximab non marqué, soit les différents variants de l'adalimumab à une concentration de 1 à 100 fois celle du rituximab-AF488.

Les lignées cellulaires Jurkat et Jurkat_AFcRn sont mélangées dans un ratio 1 : 1 en nombre de cellules. Les cellules (lxlO ⁵ ) sont mises en suspension dans du tampon HBSS ajusté à pH=6 avec MES et incubées avec rituximab-AF488 et les différents anticorps à différentes concentrations.

Après 30 minutes à 4 °C, l'intensité de la fluorescence est mesurée par cytométrie en flux (Coulter) ; les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de la fixation du rituximab- AF488 aux cellules JurkatAhFcRn.

Le résultat avec le rituximab-AF488 seul est considéré comme correspondant à 100 % de fixation.

Des cellules Jurkat non transfectées sont utilisées pour évaluer la fixation non-spécifique des anticorps.

FcRn humain recombinant (hFcRn)

La séquence codante de FcRn humain (cDNA clone MGC: 1506 IMAGE: 3163446) délété de ses domaines transmembranaire et intra-cytoplasmique est insérée dans un plasmide pCMV6 Kan/ eo afin d'obtenir pCMVôhFcRn.

Un tag histidine est ensuite inséré dans le plasmide résultant en pCMV6hFcRn-His.

Le plasmide pCMV-SPORT6 codant la microglobuline β2 humaine (NM_004048.2) a été obtenu de la société Origene.

Les deux plasmides (pCMV6hFcRn-His et pCMV-SPORT6 microglobuline β2 humaine) sont transfectés dans des cellules HEK293 afin de produire hFcRn recombinant soluble.

Le système de transfection Large-scale Iransient transfection FreeStyleTM MAX Expression Systems (Invitrogen ) est utilisé selon les instructions du fournisseur pour produire le hFcRn-His soluble.

Les surnageants des cultures cellulaires contenant la protéine de fusion hFcRn-His sont collectés, filtrés et conservés à - 20 °C.

Le récepteur hFcRn recombinant est purifié avec une résine Nickel-IMAC (HisPur Ni- NTA chromatography cartridge, Thermoscientific) et un instrument de purification AKTA.

Résonance las onique de surface (SPR)

Les analyses SPR en temps réel sont réalisées sur un appareil Biacore 3000 (GE Healthcare) à 25°C, à un débit de 50μ1/ηιΐη dans un tampon lOmM PBS à pH=6 et 0,005% de tensioactif P20 (GE Healthcare). Le FcRn humain est immobilisé par fixation covalente sur un biocapteur sur puce CM5 (GE Plealthcare) à une densité relativement faible (500 RU) par la méthode d'activation EDC/NHS, selon les instructions du fournisseur. Les immunoglobulines sont injectées pendant 180 secondes à 50nM sur le biocapteur où le FcRn a été immobilisé et une cellule à flux témoin, cette dernière ayant subi le même traitement chimique mais étant dépourvue de FcRn.

Après une étape de dissociation de 400 secondes dans le même tampon que précédemment, les surfaces du senseur sont régénérées avec deux puises de tampon PBS à pH=7,4.

Toutes les courbes sont évaluées selon la méthode de double-référence (Morton, T.A., and D.G. Myszka. 1998. Kinetic analysis of macromolecular interactions using surface plasmon résonance biosensors. Meth. Enzymoi. 295: 268-294) en utilisant un modèle de deux sites de fixation non-interagissant (two non-interacting binding sites model (BiaEvaluation 4.2)) selon des méthodes précédemment décrites (Vaughn, D.E.,and P.J. Bjorkman. 1997, Biochemistry 36: 9374-9380; Martin, W.L., and P.J. Bjorkman. 1999, Biochemistry 38: 12639-12647; West, A.P., and P.J. Bjorkman. 2000, Biochemistry 39: 9698-9708; Datta-Mannan, A., D.R. Witcher, Y. Tang, J. Watkins, W. Jiang, VJ. and Wroblewski 2007, DrugMetab. Dispos. 35: 86-94).

Seul le KD du site de haute affinité a été retenu pour la courbe de corrélation. Pour comparer les cinétiques de fixation des différents allotypes (50nM) sur le FcRn immobilisé, les réponses sont mesurées en RU à trois points sur les courbes : 180, 200 et 580 secondes, désignés fixation (binding), stabilité 1 (stability 1) et stabilité 2 (stability 2) respectivement.

Les données sont lues directement sur la courbe afin d'éliminer toute adaptation des données. Le ratio du pourcentage est calculé en prenant l'allotype Glml7,l comme référence (100 %). Toutes les courbes sont évaluées par double référencement. La stabilité de la surface enduite est contrôlée par injection de rituximab (50nM) comme contrôle positif, au début et à la fin de la série d'expérience.

Les expériences ont été réalisées trois fois et répliquées avec du FcRn fraîchement immobilisé à chaque fois.

Analyses statistiques:

Les données représentent la moyenne et la déviation standard d'au moins trois expériences.

Le test de Mann-Whitney a été utilisé pour déterminer les différences significatives. L'analyse statistique a été réalisée avec le logiciel GraphPad Prism 5.

La signifîcafivité a été définie à <0.05 et le niveau de significativité est indiqué dans les figures comme *p<0.05, ** /?<0.01 and *** _p<0.001.