La présente invention concerne les enantio¬ mères lévogyres des dérivés de la tètrahydro-5,6,13, 13a 8H-dibenzo / a, g_7 quinolizine. Elle concerne éga¬ lement l'obtention desdits nantiomères. L'invention a encore pour objet l'application thérapeutique de ces nouveaux composés et les compositions pharmaceutiques les contenant.

La tétrahydro-5 ,6,13,13a 8H dibenzo /_~ ^" a, g_7 quinolizine, dont la dénomination commune française est "Berbine" répond à la formule I ci-après :

La "Berbine" inverse les effets hypertenseurs de l'adrénaline chez le chien ~ Raymond Hamet, Bulle¬ tin de l'Académie Nationale de Médecine 1952, 22 et 23, 08; Raymond Hamet C.R. Acad. Sci. 1953, 236, 1916_7.- La 1-berbine possède chez le chat comme chez le chien une forte activité sympathicolytique ^ ^"" Raymond Hamet, C.R., Acad. Sci. Paris,- t 259 196», p. »397-»399__7. La Berbine exerce une action hypotensive chez des patients hypertendus £ ^" Faquet, Lisles et Combaz, Gazette Médi¬ cale de France, 195», 61_ _t 1615__7. La séparation des é- πantiomères de la berbine est décrite par Wolfgang Lei-?

the, Berichte 63 _, 23»3 (1930) par recristallisations suc¬ cessives de certains de ses sels avec des acides optique¬ ment actifs, selon une méthode classique.

Le brevet EU 0028959 décrit l'obtention du mé¬ lange racémique de certains dérivés de la tétrahydro- 5, 6,13,13ja 8H dibenzo . ^"*a * 9__J quinolizine , ainsi que leur utilisation pour le traitement des troubles cardio- vasculaires, mais la séparation des enantiomères, et/ou leurs éventuelles propriétés thérapeutiques remarquables n'y est pas suggéré.

Dans la publication Hétérocycles (197») 2(5) 625-30 la préparation de certains dérivés de la Berbine est décrite à partir de chacun des enantiomères, sépa¬ rés, des isoquinoléines correspondantes. Le procédé d'obtention de chaque éπantiomère est tout-à-fait diffé¬ rent de celui selon l'invention puisqu'on réalise une synthèse stéréospécifique, à partir de chaque isomère de l'isoquinoleine convenablement substituée. Les essais décrits prouvent que les composés ainsi obtenus, qui ré¬ pondent à la formule Ib ci-dessous n'ont pas d'activi¬ té dopa inergique.

OMP

dans laquelle si R^es H, R_ et R, représentent OH ou 0CH ₃ et si R^ est H, R, et R^ représentent OH.

Enfin, le brevet G8 1.00».077 concerne des compositions contenant des dibenzoquinolizines qui possèdent une activité tranquilisante, antidépressive et antiemétique. Il est indiqué que ces dibenzoquinoli¬ zines peuvent être sous la forme du racémique ou sous forme des énant iomères d ou 1, mais l'isolement de ces dernier s n'est pas décrit et leurs propriétés respec¬ tives restent inconnues.

Ces dibenzoquinolizines répondent à la formu¬ le générale ci-après :

^R 5 dans laquelle

R, et R_ représentent notamment l'hydrogène, les groupes hydroxy, méthoxy ou éthoxy;

R.. et R- représentent l'hydrogène ou le grou¬ pe méthoxy; R

» représente l'hydrogène, les groupes hydro¬ xy, méthoxy ou éthoxy et

R _≤ et R ₇ représentent l'hydrogène ou le grou¬ pe mèthyle.

Il faut noter que par le procédé de synthèse décrit dans ce brevet GB 1.00».077, on ne peut obtenir

O P

.

les dérivés hydroxylés en position 3, c'est-à-dire les composés de formule la ci-dessus dans laquelle R. est le groupe hydroxy.

En effet, les conditions opératoires du pro- cédé mentionné à la page Z . lignes 59 à 6» de ce bre¬ vet GB 1.00».077 se révèlent être trop dures (acidité et chaleur) pour que le groupe benzyloxy (pro¬ tecteur de la fonction hydroxy) ne soit pas dé¬ composé au cours de la réaction de cyclisation des phé- nylacétamides N-substitués en 3,»-dihydro-isoquinolé- ines, réalisée en présence d'oxychlorure de phosphore et par chauffage.

Dans la demande de brevet FR-A-2.»69.»13 au nom de la demanderesse on a décrit des dérivés de la "Berbine" qui présentent une a ctivitè pharmacologique intéressante, notamment dans le domaine cardio-vasculai- re pour lutter contre les troubles du rythme et les in¬ suffisances cardiaques et coronariennes.

Les dérivés de la "Berbine" décrits dans cet- te demande de brevet FR-A-2.»69.»13 répondent à la for¬ mule générale II :

11

O

dans laquelle:

R, est un radical -OR ou -SR, R étant l'hy¬ drogène, un groupe alkyle ou ayrle ou un groupe de for¬ mule R' - îÇ - -,, RR'' ééttaanntt uunn groupe alkyle ou aryle :

R,-, e R,, , identiques ou différents, re¬ présentent l'hydrogène ou un groupe alcoxy inférieur ou aryloxy à la condition que, lorsque

R, _Q et R,, sont l'hydrogène ou un groupe alcoxy in¬ férieur, R, est différent du groupe OR dans lequel R est un groupe alkyle. On a maintenant trouvé que les enantiomères lévogyres de dérives de la Berbine ont une importante activité hypotensive, ils inhibent compétitivement l'effet vasoconstricteur de la phéπyléphrine, c'est- à-dire qu'ils ont une activité C\ -bloquante alors que les racemiques correspondants se comportent comme des antagonistes non compétitifs de la phényléphrine et par conséquent peuvent en thérapeutique avoir des ef¬ fets secondaires indésirables. Ces activités sont toutes les deux stéreospécifiques. A la différence des dibenzo-quinolizines qui possèdent une activité tran¬ quillisante, aπtidépressive et antiemétique (voir le brevet GB 1.00».077), les composés selon l'invention conviennent dans des applications thérapeutiques pour traiter les maladies cardiovasculaires notamment l'hy- pertension artérielle,1-insuffisance coronarienne et

IPO

α

l'insuffisance cardiaque.

La présente invention concerne donc les é- nantio ères lévogyres de dérivés de/la tétrahydro-5, 6,13, 13a 8H-dibenzo ~a, g_7 quinolizine (berbine) et leurs sels phar aceutiquement acceptables. Les composés de l'invention répondent à la formule géné¬ rale III

11

dans laquelle :

- R'_ est l'hydrogène un ou groupe alkyle ou aryle ou un radical -OR ou -SR, R étant l'hydrogè _¬ ne, un groupe alkyle ou aryle ou un groupe de formu _¬ le : R"-C- R" étant un groupe alkyle ou aryle ou phé-

0 nylalkyle.

- R ^f i _Q et R',, , identiques ou différents, représentent l'hydrogène, un groupe hydroxy, alcoxy, ou aryloxy ou R',. et R',, forment ensemble un groupe -O-(CH ₂ ) _Λ -0- dans lequel vaut 1 à 3, à la condition que R" . R' _I Q et R',, ne soient pas simultanément l'hydrogène et que si R' , _Q et R ¹ ,, sont l'hydrogène ou un groupe alcoxy inférieur, R'., n'estpas un groupe alcoxy.

OMPI IPO

Dans la présente description, le terme "al¬ kyle" désigne des groupes hydrocarbonés aliphatiques contenant 1 à 12 atomes de carbone, à chaîne droite ou ramifiée. On préfère les groupes alkyle inférieur, c'est-à-dire les groupes alkyle contenant 1 à » ato¬ mes de carbone.

Le terme "aryle" désigne les groupes aroma¬ tiques non heterocycliques du type phényle, benzyle et les homologues supérieurs, substitués ou non, ainsi que les groupes aromatiques heterocycliques ayant » à 7 atomes de carbone dans le cycle aromatique, et 1 à » hétér.o.a omes.pouvant être l'oxygène, l'azote, le soufre, du type furane, pyridine, oxazole, ainsi que leurs dérivés saturés respectivement cyclohexane et tétrahydrofurane, pypéridine, oxazolidine.

L'expression "alcoxy inférieur" désigne les groupes de formule R ¹ a-0 dans laquelle R'a_ est un groupe alkyle inférieur, tel que défini ci-dessus.

Les composés selon l'invention sont obtenus à partir des racemiques correspondants par des procé¬ dés classiques de séparation utilisant des recristal¬ lisations successives d'un sel formé entre les dérivés de la berbine sous forme de bases et un réactif acide de dédoublement dans un solvant approprié. Les racémiquesdes dérivés de la berbine selon l'invention sont obtenus par exemple par le procédé dé¬ crit dans la demande de brevet FR-A-2.»69.»13.

Sous son aspect général, ce procédé de syn¬ thèse consiste à : 1) condenser, avec du nitro éthane, le ben- zaldéhyde substitué en position 3 par un groupe R', protégé, pour former le nitrostyrène corres¬ pondant;

2) réduire le nitrostyrène obtenu pour for- mer la phénéthyla ine correspondante;

O PI IPO

3) condenser la phéπéthylamine obtenue avec l'acide phénylacétique substitué de formule :

pour former le p énacétaraide correspondant;

») procéder à une première cyclisation pour obtenir la 3,»-dihydroisoquinoléine correspondante;

5) réduire la dihydroisoquinoléine en te¬ trahydroisoquinoléine;

6) fixer, par condensation avec de l'acide formique ou du phosgène, un groupe forrayle ou chlo- rofor yle sur l'atome d'azote de l'isoquinoleine;

7) procéder à une seconde cyclisation;

8) réduire le produit résultant pour former le dérivé de la berbine désiré;

9) éventuellement, éliminer le groupement protecteur en position 3; et

10) éventuellement, estérifier ou éthéri- fier le produit résultant.

Comme cela est indiqué ci-dessus, le procé¬ dé de synthèse des composés de l'invention comporte deux variantes auniveau de l'étape 6; l'une des va¬ riantes consiste en la formylation de la tétrahydroi- isoquinoléine obtenue à l'étape 5 et l'autre consis¬ te en la chloroformylation de ladite tétrahydroiso- quinoléine qui permet l'obtention des composes de formule II dans laquelle R _Q est l'oxygène, des radi¬ caux R' ₃ . ^R 'I _Q ^{et R} 'n é ^tant: tels que définis précé¬ demment.

Pour plus de détails sur ce procédé de syn¬ thèse et les variantes de mise en oeuvre, on pourra se référer à la demande de brevet FR-A-2.»69.»13

citée dans la présente demande à titre de référence.

Le procédé selon la présente invention pour l'obtention des isomères optiques purs consiste à faire réagir la fonction aminé du racemiquequi est une base avec un acide de déboublement approprié pour former les sels des 2 enantiomères et à séparer le sel de 1'éπantiomère recherché par des recristallisations successives dans un solvant approprié.

Avantageusement, on utilise comme acide de dédoublement : l'acide (-) diparatoluoyl-L-tartrique, l'acide (+) diparatoluoyl-D-tartrique, qui selon les cas permettront l'isolement de l'un ou l'autre des enantiomères. Les solvants de recristallisation utili¬ sés selon l'invention sont par exemple le methanol, l'ethanol, l'acétate d'ethyle, le chloroforme et com¬ posés similaires qui conviennent pour la recristal¬ lisation du composé considéré. Les isomères optiques purs de formule III ci-dessus dans laquelle R'-. est un radical hydroxy peuvent être-* obtenus par hydrolyse des isomères op¬ tiques purs des composés correspondants de formule III dans laquelle R', est le groupe de formule R"-C00- . L'hydrolyse est avantageusement réalisée en milieu acide,par exemple en milieu acétochlo- rhydrique.

Ces isomères optiques purs des composés de formule III dans laquelle R ¹ - est le groupe hy- droxy peuvent ensuite être estérifiés pour donner d'autres stéréoisomères purs de composés selon l'in¬ vention. Une telle estérification peut être réalisée

* ïλEA

OMPI /. WIPO

par réaction dudit composé de formule III avec un chlorure d'acide de formule R"-C-C1 en présence d'une

II

0 base, telle que la triéthylamine dans un solvant approprié, tel que le chloroforme. Après isolement de l'ester formé, celui-ci est recristallisé dans un solvant approprié; le produit ainsi obtenu répond à la formule III dans laquelle R'., est un radical

R ^» _C-0-.

II

0

Toutes les étapes ci-dessus sont réali¬ sées à la température ambiante ou à toute autre tem¬ pérature appropriée pour ces types de réactions et dont la détermination est à la portée de l'homme de l'art par des essais de routine.

Les composés selon l'invention possèdent des propriétés pharmacologiques intéressantes, no¬ tamment dans le domaine cardio-vasculaire pour lut- ter à la fois contre les troubles du rythme, les insuffisances cardiaques et coronariennes et l'hy¬ pertension artérielle. Les composés de l'invention, comme on 1' indiqué ^{^} précédemment, inhibent compé- titive ent l'effet vasoconstricteur de la phénylé- phrine, qui est le composé suivant : (R)-3-hydroxy- ç_4_ -/_ ^"" (méthylaπ.ino)méthyl_7benzèneméthanol, ont une activité c( -bloquante,pour certains spécifiques des ré¬ cepteurs , et un effet hypotenseur.

O PI

La présente invention concerne donc égale¬ ment les compositions pharmaceutiques contenant, à ti¬ tre d'ingrédient acti.f, l'isomère lévogyre d'un com¬ posé de formule III en combinaison avec un exci - pient approprié. Les compositions pharmaceutiques se¬ lon l'invention peuvent se présenter notamment sous des formes convenant à l'administration par voie orale ou parentérale .

Pour une administration par voie orale, on pourra utiliser les compositions de l'invention sous la forme de comprimés, de gélules, de sirops, de gout¬ tes, les excipients utilisés étant des excipients clas¬ siques pour la formation de ces formes pharmaceutiques^ bien évidemment inertes vis-à-vis de l'ingrédient ac- tif. La dose thérapeutique dépend du trouble à trai¬ ter mais on administrera, en général de 50 à 500 mg par jour des enantiomères lévogyres selon l'inven¬ tion.

L'invention va maintenant être décrite plus en détail dans les exemples ci-après donnés à titre non limitatif. Dans ces exemples, on a utilisé comme composés de départ pour l'obtention des isomères selon l'invention, les racemiques préparés selon le procédé décrit dans le brevet FR-A- 2.»69.»13.Ainsi, on a utilisé comme produits de départ les composés ci- après obtenus par les modes opératoires décrits dans les exemples de la demande de brevet FR-A-2.»69.»13 indiqués pour chaque composé.

O PI

: t

* t ,6,13,13a 8H~di- STB 4 l HO H H l Exemple 5 1 ou hydroxy-3 i s t t STB 6 HO CH ₃ 0 CH3O 1 Exemple 1 i ι t le 6 s

»loχy-3-berb ne 1 t

A des fins de comparaison,on a égalemen préparé les isomères dextrogyres correspondants. EXEMPLE 1:

Préparation des isomères optiques purs de la dimét oxy-10,11 hydroxy-3 tétra ydro-54,6,13,13a 8 H- dibenzo / ^" a _» g_7 quinolizine ou diméthoxy-10,11 hydroxy-

3 berbine (STB 6 ) . Isomère (-) STB 6

La séparation de 1'énantiomère (-) du STB 6 a été réalisée par recristallisations successives dans le méthanol du sel formé à partir du STB 6 racémique avec l'acide (-) diparatoluoyl-L-tartrique.

Après purification du sel(-)(-) ,1e composé (-) STB 6 base est obtenu par déplacement de sa combinaison saline par l'ammoniaque dilué et extraction au chloro¬ forme. Isomère (+) STB 6

L'énantiomère (+) du STB 6 a été séparé de la mê¬ me manière que son inverse optique mais en utilisant de l'acide ( +)diparatoluoyl-D-tartrique comme réactif de dédoublement. Le mélange racémique est extrait,après alcalinisation des filtrats des recristallisations précédentes et est enrichi en isomère (+). EXEMPLE 2: Préparation des isomères optiques purs de la phénacétyloxy-3 tétrahydro-5,6,13,13a 8H-dibenzo/~a, g

quinolizine ou phénacétyloxy-3 berbine STB 69. Isomère (-) et (+? STB 69 Les isomères (+) et (-)du composé 69 ont été séparés de la même manière qu les isomères (+) et (-) du composé-STB 6 en recristallisant dans l'acétate d'ethyle.

OMP

EXEMPLE 3

Préparation des isomères optiques purs de la hydroxy-3 tétrahydro-5,<3,13,13a 8H-dibenzo £ ^" a, g J quinolizine ou hydroxy-3 berbine. Isomère (-) et (+) STB 4

Les isomères (+) et (-)du composé STB 4 sont obtenus par hydrolyse en milieu acetochlorhydrique des isomères optiques purs du composé STB 69 préparés pré¬ cédemment. EXEMPLE 4

Préiparaition des isomères optiques purs de la di- méthoxy-10 ,11 phénacétyloxy-3 tétrahydro -5,6,13.13a

8H -dibenzo / ^" a > * g quinolizine ou di éthioxy-10,11 phéna- cetyloxy-3 berbine (STB 52). On a obtenu les Isomères (+) et (-) de la dimé- thoxy- 10,11 phénacétyloxy-3 tétrahydro-5,0,13,13a 8H- dibenzo / ^" a, g_7 quinolizine ou diméthoxy-10,11 phéna- cétyloxy-3 berbine STB 52 par estérification des compo¬ sés STB 6 (+) et (-) respectivement. Selon les modes opératoires décrits ci-dessus, on a obtenu les quantités de produits optiquement purs suivantes:

-11, ^, 5 g ^M de STB 6 ^w .is ^•» omè ^β re ( ^x -) }î a- part.i.r d.e 5 _.0 _n g d.e race-• i.-

-10,2 g de STB 6 isomère (+) 3 que base r6 , Q g de STB 52 isomère (-)

-4,0g de STB 52 isomère (+)

•7,2 g de STB 69 isomère (-) } à partir de 35 g de racé-

-4,<S g de STB 69 isomère (+) î ^{mique base} -3,4 g de STB 4 isomère (-) -1,9 g de STB 4 isomère (+)

Dans le tableau ci-après,on a indiqué les valeurs

— 20 des angles de rotation spécifique / ^" c( J des diffé¬ rents composés optiquement actifs isolés,et leurs principales caractéristiques physico-chimiques :

Dérivés Pouvoirs rotatoire≤ _Q Concentration Solvant F°C spécifiques /~o( J g/100 ml

^" 0 (+) (-)

STB 6, Base + 298° -297° 1-CHC1. 224°

-CHC1, 226° STB 6, HC1 + 202° - 202° -j-EtOH absolu dép -^ 200°

-EtOH absolu dép . 200° STB 52 base + 230° -232° 0,2 +CHC 135°

-CHCl^ 136° STB 52, HC1 + 160° -159° + EtOH absolu 206°

-EtOH absolu 205° STB 69, base + 25<?° -249° + CHC1. 115°

- CHCI 114° STB 69, HC1 + 19è° -199° + EtOH absolu 200° -EtOH absolu 198° STB 4, base + 290° -292° -rCHCl. 120-22°

- CHC 120-22° STB 4, HCL +236° -239° + EtOH 95° dép *C 200° -EtOH 95° dép _^ 200° dep≈ décomposition

Essais pharmacologiques

DEffets hypotenseurs;

L'étude a été réalisée chez le rat normotendu anesthéslé au pentothal (40 mg.kg ^" i.p.). La pression artérielle a été mesurée à l'aide d'un cathéter placé dans l'artère carotide et relié à une cellule de pres¬ sion (Statha p 23 DB) et à un enregistreur selon la méthode décrite par Waeldele et Stoclet (3. Pharmacol. Paris 1973,66 , 357-366). Les dérivés sont administrés en doses croissantes toutes les 15 minutes par in ection i.v.

On a représenté sur la figure 1 les effefts sur la pression artérielle de doses croissantes des dérivés (+) et (-) STB 6 et (+) et (-) STB 4,15 minutes après administration i.v. au rat normotendu anesthésié.

Chaque point est la moyenne des valeurs obtenues chez n animaux + erreur type.

Sur cette figure l^on a porté en abscisses les quantités de composé à tester administré, et, en ordon- nées, la pression artérielle moyenne £__, P mm Hg.

La figure la est relative au composé STB 6 La figure Ib est relative au composé STB 4 Sur chacune des figures la, Ib, les courbes •• ^• 4 sont relatives aux isomères (+), les courbes matérialisées par les * * sont relatives aux iso¬ mères (-) et les courbes * • * * sont relatives aux placebos _*

Les résultats portés sur la figure 1 montrent que les isomères (-) du STB 6 et STB 4 produisent une ^' chute significative de pression artérielle. Le (-) STB 4 et surtout le (-) STB 6 sont actifs à des doses faibles

(respectivement 1 mg.kg -1 et 0,5 mg.kg-1).

Dans les mêmes conditions expérimentales,les - dérivés (+) STB 6 et (+)STB 4 n'induisent pas de diminu-

O PI

ion significative de la pression artérielle par rapport aux témoins.

2)Recherche d'effets c( -bloqueurs: étude de l'antagonisme entre les dérivés de la berbine et la phényléphrine sur l'aorte isolée de rat.

L'évaluation quantitative de l'antagonisme en¬ tre les dérivés étudiés et la phényléphrine a été faite par l'analyse des relations effets-concentrations en présence et en absence d'antagoniste et le calcul du PA 2 à l'aide dé la relation de Schild (Arunlasksha na 0 et Schild H. ., Br. 3. Pharmacol., 1959, 14 , 48-58). L'analyse des relations effets-concentrations en répo'nse à la phényléphrine montre que l'antagonisme entre le (-) STB 6 ^* et la phényléphrine est de nature compétitive comme le montrent les résultats portés sur la figure II. Sur la figure lia on a indiqué en ordonnées l'ef¬ fet E ( % de la contraction maximale) en l'absence et en présence de STB 6 (-), et en abscisses le Log de la concentration en phényléphrine j les différentes courbes sont relatives aux concentrations suivantes: courbe ≠ Λ (-) STB 6 5.10 ^"8 M courbe o (-) STB 6 10 ^"7 M courbe D Q(-) STB 6 2.5 10 ^"7 M courbe A Λ(-) STB 6 5.10 ^"7 M courbe â __(-) STB 6 10 ^"6 M courbe _% K-) STB 6 10 ^"5 M courbe * * sans STB 6.

Les résultats sont la moyenne de 6 expériences (+ SID). La figure Ilb est la représentation de Schild

(x étant le rapport de concentration de phényléphrine qui donne un effet 50% en présence et en l'absence du STB 6 (-)• En ordonnées,on a porté Log ( x - l)et en abscisses Log' / ^" (-) STB 6 J ,

OMPI IPO

Les paramètres de la relation de Schild ont également été mesurés en présence de STB 52 (-) dans les mêmes conditions expérimentales que pour STB 6(-). Ces paramètres sont donnés ci-après. 5 Paramètres de la relation de Schild observée en présence de (-) STB 52 et (-) STB 6

PA2 n r

(-). STB 52 7,0 1,00 0,99

(-) STB 6 7,4 0,93 0,99

X0 n ≈ pente de la droite de Schild r = coefficient de corrélation de la droite. , Les résultats ci-dessus montrent que (-) STB 52 est un antagoniste compétitif de la phényléphrine au mê¬ me titre que le (-) STB 6.

Les dérivés (-) de STB 6 et STB 52 présentent ^• * ^• une forte affinité pour le récepteur adrénergique.Par contre le dérivé (+) STB 6 présente un antagonisme de nature non compétitive vis-à-vis de la phényléphrine (figure III). La figure III représente l'antagonisme entre le (+ )STB 6 et la phényléphrine sur l'aorte -" ^• " isolée de ratj sur cette figure,on a porté en ordonnées l'effet E ( % de la contraction maximale) en l'absence et en présence de STB 6(+) et en abscisses le Log de la concentration en phényléphrine.

Les différentes courbes sont représentatives 25 des concentrations ci-après:

30

Les résultats représentés sur cette figure sont les moyennes + sm de quatre expériences.

OMPI

On indiquera de plus que les composés racemi¬ ques STB se comportent comme de puissants antagonistes non compétitifs de la phényléphrine, A cet effet,on pourra se référer à la page 40 de la description de la demande de brevet FR-A-2 469 413.

3)£tude de l'inhibition de la stimulation sympathique in vivo

Cette étude a été faite sur le dérivé le plus hypotenseur, le STB â. Nous avons mesuré la réactivité vasculalre du territoire mésentérique perfusé In situ chez le rat (suivant 3ackson et Campbell, Eur» 3. Pharmacol., 1980, 66 , 217-224). Après anesthésie du rat au pentothal (40 mg. kg ^" i.p.)le territoire mésen¬ térique a été perfusé à débit constant à partir d'un cathéter dérivant la circulation sanguine de l'aorte abdominale. On a mesuré l'effet vasoconstricteur de la stimulation électrique périartérielle des nerfs sympa¬ thiques (7 Hz) et de l'injection de noradrénaline (200 ng) dans le cathéter. Les effets des dérivés de la berbine administrés par voie i.v. ont été étudiés sur les deux types de réponses pressives. Les résultats obtenus sont portés sur les figures IVa et IVb sur lesquelles sont portées en ordonnées la pression arté¬ rielle moyenne Δ P mHg et en abscisses le temps en minutes, 1- injection du produit à tester ou du placebo (constitué par le même volume de sérum physiologique) étant effectuée au tempsO.

La figure IVa est relative à la vasoconstric¬ tion provoquée par la stimulation électrique et la figu- re IVb à celle provoquée par la Noradrénaline.

Les courbes i • correspondent au STB 6(+) Les courbes <* ^{•• > g} correspondent au STB 6(-).

Les courbes U correspondent au placebo.

OMPI

Les résultats sont la moyenne + sra de 5 expé¬ riences. On observe sur la figure IV que le dérivé (-) STB 6 administré à la dose de 0,5 mg.kg ^"" i.v., diminue la vasoconstriction du territoire méseπtérlque provoqué par stimulation électrique des nerfs sympathiques,sans modifier la réponse pressive à l'injection de noradréna¬ line. Administré dans les mêmes conditions et à la même dose, le dérivé (+) STB 6 n'a pas d'effet significatif. Ces résultats montrent que le (-) STB 6 inhibe in vivo soit la libération des médiateurs endogènes libérés par stimulation nerveuse soit la réponse pressive à ces médiateurs sans affecter la vasoconstriction induite par la noradrénaline exogène. Le (+) STB 6 ne présente pas cet effet dans les conditions expérimentales. Les essais ci-dessus montrent que les dérivés

(-) de la berbine possèdent des effets hypotenseurs et inhibent compétitivement l'effet vasoconstricteur de la phényléphrine (effet o( -bloquant). Ces effets sont tous deux stéréospécifIques. En ce qui concerne le plus hypo- tenseur des dérivés étudiés, le STB 6, l'Isomère (-) déprime la réponse pressive à la stimulation sympathi¬ que tandis que l'isomère (+) est dépourvu de cette proprié té aux mêmes doses. L'isomère (+) se comporte comme un antagoniste non compétitif de la phényléphrine sur l'aor- te isolée de rat.

4)Etude de la sélectivité de la fixation des enantiomères de la berbine et de ses dérivés aux récep- teurs cf. et o( ₂ adrénergiques.

Les expériences ont ete réalisées sur un homogè- nat de cortex cérébral de rat, selon la méthode décrite par P. Greengross et R. Bremmerclaus Eur. 3. Pharmac^-ol. (1979) 55 323-326.

OMH

Les ligands u tilisés s ont respect ivement le H-prazos ln pour les s ites o( , ( K _Q 0 , 138 + 0 , 02 n mmole. l ^" lia ison maximale 200 + 21 f m oles . mg protéi¬ nes ^" ) et la H y oh lmbine pour les s ites c( -

-1 (K _n = 10,2 n mole.l , liaison maximale 172,5 + 40,9 f moles.mg protéines -1). Les ré-sultats représente"nt la moyenne de 3 expériences. Les valeurs du Ki sont calcu¬ lées d'après Cheng et Prussoff (Biochem. Pharmacol. 1973 22_ 3099-3108).

Prazosln : 0.15 + 0.03 382 -t- 66

Yohimbine : 322 + «_- 26 13,7 + 3,6 berbine (-) : 212 + •m 26 140 + 44

(-)STB 6 i 419 + 132 1015 + 335

(-) STB 4 : 462 + 10 307 + 118 berbine (+) . •4730 +** 538 569 + 137

(+) STB 6 2931 + 363 901 + 299

(+) STB 4 ,1220 + 175 321 + 72

. On constate que la berbine, isomère dextrogyre ou lévogyre /une affinité comparable pour les récep¬ teurs c{ _j , et d' ₂ , alors que l'isomère lévogyre du diméthoxy-10,llhydroxy-3 tétrahydro-5,6,13,13a, 8H- dibenzo / ^" a-» g_7 quinolizine a une affinité marquée pour le récepteur c , par rapport à l-o( ₂ - Toxlclté:

La DL ₅₀ a été déterminée chez la souris. Les dérivés étudiés ont.été administrés en solution aqueuse additionnée de 7% de diméthylformaraide,par gavage oesophagien de 0,4 ml par 20g de poids corporel, à des

OMPI

^{2 *} 2

souris mâles pesant de 20 à 25g. Dans ces conditions la DL _gQ du (-) STB 6 est comprise entre 200 et 300 mg.kg ^" celle du (-) STB 52 est supérieure à 800 mg.kg ^" (30X de mortalité à cette dose,limite de solubilité). Les.dérivés (+) correspondants ne provoquent aucune mortalité à la dose de 800 mg.kg ^" (limite de solubilité).

Les composés selon l'invention présentent donc des propriétés phar acologiques qui permettent leur application dans le domaine cardio-vasculaire. Les doses à utiliser tidépendent évidemment de l'état du patient et de l'affection cardio-vasculaire à traiter. Toutefois, on indiquera que des doses de 0,2 ,à 0,3 g par jour sont appropriées.