TERMINOLOGIA

[1] Para fins de melhor entendimento da matéria revelada e reivindicada no presente pedido de patente , é apresentado o signi ficado de alguns termos e acrônimos ricamente citados no corpo do relatório descritivo , onde :

[2] - Medicina diagnóstica : conj unto de especialidades mé- dicas direcionadas à reali zação de exames complementares ao auxilio do diagnóstico voltado à identi ficação de um eventual quadro patológico . A expressão envolve as atividades de me- dicina laboratorial , medicina por imagem e as demais especi- alidades médicas que reali zam exames com fins diagnósticos .

[3] - Amostras biológicas : para efeito do presente invento são consideradas as amostras de fezes .

[4] - Parasitologia clinica : estuda os parasites , os seus hospedeiros e relações entre eles . Os agentes parasitários pertencem a grandes grupos heterogêneos que variam em tama- nho , forma e constituição citoplasmática, desde os pequenos microsporidios até os complexos organismos multicelulares .

[5] - Parasites : são organismos que vivem em associação com outros dos quais retiram os meios para a sua sobrevivência, normalmente prej udicando os organismos hospedeiro , um pro- cesso conhecido por parasitismo . [6] - EPF : acrônimo para Exame Parasitológico de Fezes, re- alizado a partir de uma amostra de fezes, com objetivo de identificar a presença de elementos que advertem a existência de parasites do trato intestinal, assim como a capacidade de determinar a sua nomenclatura cientifica binominal, como exemplo: gênero e espécie.

[7] - Amostra fecal bruta (Fe) : é a amostra de fezes colhida pelo paciente e entregue ao laboratório de análises clinicas;

[8] - Esf regaço : é uma leve camada de sedimento fecal de- positada entre lâmina e laminula de microscopia, para a re- alização do exame em equipamento de microscopia óptica de luz convencional. Para efeito do presente invento, é adotado o esfregaço de fezes humanas e animais;

[9] - SAB : acrônimo para Sistema Aquoso Bifásico constitu- ído por polimero, sal e água que nesta invenção apresentam duas ou mais fases liquidas quando em equilíbrio termodinâ- mico, muito úteis para aplicações em extração e/ou purifi- cação de compostos presentes em inúmeros processos tecnoló- gicos;

[10] - RPM: rotações por minuto; e

[11] - IPC: acrônimo para Classificação Internacional de Pa- tente .

[12] O rol de termos, tecnologias e conceitos técnicos apre- sentado nesse tópico preliminar deve ser apreciado para o correto entendimento dessa patente de invenção, conferindo a mandatária suficiência descritiva, bem como deve ser usado como referência para estudos em análises comparativas seja com hipotéticas soluções do estado da técnica não citadas na presente cártula como para produtos de mesma natureza e mesma classificação internacional de patente (IPC) , divulgados e ou comerciali zados por terceiros que não sej a (m) o ( s ) titu- lar ( es ) dessa patente de invenção .

CAMPO DE APLICAÇÃO

[13] A presente patente de invenção de titulo em epígrafe e obj eto de descrição e reivindicação nesta cártula trata de uma solução inventiva que encontra destacado beneficio na área da Saúde em Medicina Diagnóstica, mais exatamente em rotina de um laboratório de análises clinicas , público e privado , para a diagnose de estruturas de eliminação de pa- rasites gastrintestinais de humanos e animais , dentre cistos e oocistos de protozoários e ovos e larvas de helmintos .

[14] Notadamente o presente invento é especialmente útil como parte de procedimento preliminar na obtenção de es fre- gaço fecal a ser analisado em exames parasitológicos de fezes (EPF) , observação em microscópio de sua estrutura biológica, que será exaustivamente discutida nessa cártula .

[15] Por derradeiro, e como consequência da restrição do campo de aplicação ao parágrafo anterior, não são apresen- tadas e discutidas informações em detalhamento da aplicação do ( s ) método ( s ) de exame parasitológico de fezes propria- mente dito , notadamente detalhamento de leitura em micros- cópio e posterior análise técnica da leitura obtida .

DEMANDA DO INVENTO

[16] Tendo em vista o campo de aplicação previamente defi- nido , relacionado à prática de aplicação do EPF o requerente identi ficou o rol de necessidades : [17] a . Do ponto de vista comercial:

[18] - Tornar mais eficaz e confiável, diga-se, com alta sensibilidade, os resultados apresentados dos diagnósticos obtidos a partir das técnicas parasitológicas e kits comerciais usados em EPF' s , tal como a técnica consagrada pela literatura cientifica de nome comercial TF-Test®, não sendo, no entanto, exaustiva para essa técnica, sendo apli- cável em todas as técnicas conhecidas para exames dessa na- tureza;

[19] - Reduzir o custo geral dos EPF's, notadamente de seus insumos, como exemplo, materiais de consumo, de equipamentos comumente utilizados, tais como, materiais permanentes; e

[20] - Tornar os EPF' s mais acessíveis ao público de baixa renda, com redução de seu impacto financeiro junto ao Sistema Único de Saúde (SUS) .

[21] b . Do ponto de vista do procedimento laboratorial:

[22] - Reduzir a complexidade de execução dos procedimentos do EPF; e

[23] - Minimizar a necessidade de mão de obra especializada para a execução dos EPF's, notadamente nas etapas preliminares de preparo do esfragaço fecal.

[24] c . Do ponto de vista do preparo de esfregaço fecal :

[25] - obter em um esfregaço de natureza fecal a ser usado em exame parasitológico fecal (EPF) com representativa concentração parasitária (quando houver) e com máxima eliminação de gorduras e residues digestivos não digeridos ( impurezas ) ; e

[26] - obter um esfregaço de natureza fecal a ser usado em EPF, que minimize a lise (decomposição da estrutura celular, p . ex . ) dos parasites e permita a efetiva concentração destes quando presentes nas fezes.

[27] d . Do ponto de vista da segurança de trabalho:

[28] - Aumentar a segurança de técnicos de laborárorio pertinente a manipulação de agentes químicos, fisicos, orgânicos e não orgânicos, que sejam considerados tóxicos, durante o procedimento de preparo do esfregaço fecal de interesse para os EPF's.

[29] e . Do ponto de vista ecológico:

[30] - Mimimizar o uso de insumos quimeos classificados como tóxicos, facilitando assim o descarte no meio ambiente de todo o material gerado ao final do processamento laboratorial dos EPF's.

[31] f. Do ponto de vista da regulação de comercialização:

[32] - Garantir a execução de processamento dos EPF's em laboratórios de análises clinicas, públicos e privados, amparada no rigor de normas de Controle de Qualidade e Biossegurança recomendadas pela Agência de Vigilância Sanitária (ANVISA) do Ministério da Saúde (MS) do Brasil, e de organizações correlatas internacionais.

REQUISITOS DO INVENTO

[33] Em consonância com a demanda do invento o requerente idealizou a "mistura para obtenção de SAB específico aplicado na obtenção de esf regaço fecal , seu processo de obtenção; processo de obtenção de SAB específico e processo de aplicação do SAB em EPF's, pois, não decorrem de maneira óbvia ou evidente de outras técnicas antecipadas pelo estado da técnica, conferindo vantagens dos pontos de vista indus- trial, técnico, comercial e ecológico.

[34] Em adição o "invento" é provido de aplicabilidade in- dustrial, sendo economicamente viável e, portanto, atendendo ao rigor dos requisitos de patenteabilidade, notadamente como patente de invenção, conforme disposto nos ditames dos artigos 8 ^o , 13 e 15 da Lei 9.279.

FUNDAMENTOS DA TÉCNICA

[35] A fim de propiciar veracidade, e consolidar o contexto explicitado nos tópicos do quadro introdutório será apresen- tada uma explanação sobre o estado da técnica relacionado a tecnologia pertinente a EPF's, onde após análise critica destes, uma vez avaliados por técnicos no assunto, poderão identificar seus aspectos limitantes, consolidando assim o rol de demandas previamente citada.

[36] a . Sobre o uso de Exames Parasitológicos de Fezes (EPF's) : são rotineiramente realizados nos laboratórios de análises clinicas, públicos e privados, por meio da utilização de técnicas convencionais e kits comerciais já consagrados. Em situações especiais, apesar do alto custo financeiro destas modalidades de exame e das baixas abragências diagnósticas, são empregados métodos imunológicos (diretos e indiretos, p . ex . ) e moleculares às investigações de parasites gastrintestinais de humanos e animais .

[37] A titulo de exemplo a consagrada técnica convencional de Kato-Katz é adotada pelo Ministério da Saúde (MS) e pela Organização Mundial da Saúde (OMS) como padrão para o diagnóstico da infecção humana ocasionada pelo parasito tre- matódeo Schi stosoma mansoni , sendo uma ferramenta de rele- vância clinica e epidemiológica exclusiva para uso em pro- gramas governamentais , visto que permite determinar a carga parasitária do indivíduo mediante contagem de Ovos por Grama de Fezes ( OPG) .

[38] Em outro de exemplo de signi ficativa importância de EPF, e que será adotado nesse invento como paradigma de comparação de procedimentos e resultados obtidos , é adotado com a consagrada técnica de TF-Test®, desenvolvida e aper- feiçoada ao longo dos anos pelo titular dessa patente de invenção .

[39] b . Amostra fecal : todo exame parasitológico de fezes é baseado fundamentalmente na análise laboratorial de amostras fecais , nas quais são examinadas a presença de estruturas de protozoários e helmintos gastrintestinais de humanos e ani- mais .

[40] Os estágios de protozoários encontrados em fezes são trofozoitas e cistos .

[41] Os estágios de helmintos normalmente encontrados em fe- zes são ovos e larvas , ainda que possam ser vistos adultos ou segmentos (proglotes , p . ex . ) de algumas espécies de ne- matoides e cestoides gastrintestinais , respectivamente .

[42] Por exemplo , organismos adultos de Ascari s l umbri coi - des , Toxocara spp . e Enterobi us vermi culari s ou segmentos de Taenia spp . e Dipylidi um spp . são normalmente visíveis a olho nu .

[43] No entanto ovos , larvas , trofozoitas e cistos , por serem estruturas microscópicas que não ultrapassam a 180 pm de tamanho , podem ser observados e/ou contados somente com auxilio de microscópio óptico de luz convencional .

[44] b . Preparo de amostra fecal : é procedimento padrão quando do preparo da amostra fecal a ser analisada pelo EPF, com o uso efetivo em laboratório de substâncias químicas de alta saturação , com o obj etivo de eliminação de resíduos digestivos não digeridos e gorduras da amostra de es fregaço fecal que será aplicado entre lâmina e lamínula de micros- copia .

[45] A título de exemplo , mais especi ficamente , a glicerina, ou glicerol , é um dos meios de montagem de uso mais frequente dentre as substâncias químicas miscíveis em água, onde re- tomando novamente o exemplo da técnica convencional de Kato- Katz , previamente citada, em essência se busca a clari ficação do es fregaço de fezes grosso mediante aplicação de solução de glicerina a 50 % (KOMIYA & KOBAYASHI , 1966 ) , na expectativa de mitigar a presença de impurezas do es fregaço fecal obtido , visando assim reduzir a di ficuldade da leitura e identi fi- cação em microscópio da hipotética concentração de ovos de cerca de quatro espécies de helmintos presentes na amostra .

[46] Em outro exemplo, especi ficamente para a consagrada técnica TF-Test®, definida nessa cártula como paradigma de comparação de procedimentos de análise e resultado obtido em relação aos correspondentes procedimentos e resultados des- critos e obtidos com o uso do SAB especí fico da patente ora reivindicada, durante o preparo do es fregaço fecal , é feito uso de acetato de etila p . a . , substância também considerada de alta saturação e que provoca danos de natureza celular na concentração de parasites hipoteticamente encontrados na amostra destinada ao leva exame parasitológico das fezes .

[47] c . Análise critica dos EPF' s : os citados métodos imunológicos ( diretos e indiretos , p . ex . ) e moleculares estão associados de maneira negativa com alto custo , baixa abrangência e falso resultado diagnóstico .

[48] Autores literários relatam a pequena e discreta e ficá- cia diagnóstica das técnicas parasitológicas e kits comer- ciais usados no EPF' s , mostrando resultados de baixa a mo- derada sensibilidade que podem oscilar de 30% a 77 % , respec- tivamente .

[49] Ainda nesse diapasão a literatura sugere que a perda de sensibilidade diagnóstica desta modalidade de exame está re- lacionada, dentre outros fatores , ao erro de procedimento laboratorial .

[50] Por derradeiro os princípios laboratoriais das técnicas convencionais e kits comerciais para EPF' s , notadamente aqueles onde são empregados técnicas por flutuação ou sedi- mentação , deixam a desej ar em concentração parasitária com separação de residues digestivos não digeridos e gorduras , repercutindo diretamente no discreto resultado apresentado .

[51] d . Identi ficação do problema : o requerente , especia- lista no assunto , apresenta entendimento convergente com es- tudos relacionados à eficácia dos EPF' s , traduzido pelo fato de que o uso efetivo em laboratório de " substâncias quimicas de alta saturação" , como a glicerina, por exemplo , no cla- reamento da amostras de es fregaços de fezes a serem anali- sadas , são danosas às estruturas dos parasites , provocando de forma signi ficativa lise nessas estruturas e comprome- tendo , assim, a performance diagnóstica dos EPF' s .

[52] Por sua vez , técnicas que não se utili zam de compostos quimicos para a eliminação de gorduras e residues fecais apresentam baixa sensibilidade diagnóstica, sobretudo por mostrar esfregaços fecais extremamente carregados com estes artefatos, propiciando em muitas vezes o falso resultado diagnóstico .

[53] e. Pesquisas em banco de dados de patentes: notadamente o sitio do INPI (Instituto Nacional de Propriedade Indus- trial) aponta que pertinente a tecnologia EPF's, a indústria nacional pouco se movimentou no decorrer do tempo, sendo verificados parcos documentos de pedidos de patente, e todos relacionados aos receptáculos para coleta das fezes, que são aqui mencionados:

[54] - MU8700248-5, publicado em 30/09/2008 de titulo "DIS- POSIÇÃO CONSTRUTIVA APLICADA EM COLETOR DE AMOSTRA PARA FINS DE EXAME PARASITOLÓGICO DE FEZES";

[55] - MU8402055-5, publicado em 04/04/2006, de titulo "APERFEIÇOAMENTO CONSTRUTIVO INTRODUZIDO EM RECIPIENTE DES- TINADO A COLETA, CONSERVAÇÃO, TRANSPORTE, DILUIÇÃO E FILTRA- GEM DE AMOSTRA DE FEZES PARA FINS DE EXAME PARASITOLÓGICO"; e

[56] - MU 8401911-5, publicado em 10/05/2005, de titulo "DIS- POSIÇÃO APLICADA EM RECIPIENTE PARA COLETA, DILUIÇÃO E FIL- TRAÇÃO DE AMOSTRAS DE FEZES PARA EXAME PARASITOLÓGICO E OU- TROS EXAMES ESPECÍFICOS".

[57] f. Rol de aspectos negativos da técnica convencional : nesse diapasão é inevitável o entendimento de que nada se fez até a data de pedido dessa patente de invenção que venha a resolver o problema identificado como sendo o de compro- metimento das amostras de esfregaço fecal quando de seu pre- paro para aplicação de EPF's, previamente comentado, poten- cializando o rol de aspectos negativos, aqui listados:

[58] f.1 Do ponto de vista técnico: [59] - Especificamente pertinente a eficácia dos EPF's, le- vando aos já comentados resultados de baixa a moderada sen- sibilidade que podem oscilar de 30% a 77%, respectivamente;

[60] - Especificamente pertinente a produtividade dos EPF's, pede procedimentos complexos, que implica no uso de grande número de equipamentos/instrumentos , tais como centrifugas e agitador vortex;

[61] - Especificamente pertinente a mão de obra para a apli- cação dos EPF's, pois, sua complexidade converge na neces- sidade de operadores com qualificação prévia, onde sem a presença desse profissional qualificado não é exequível sua aplicação ;

[62] f.2 Do ponto de vista da segurança sanitária: devido a exposição dos operadores de laboratório às substâncias quí- micas de alta saturação, notadamente o acetato de etila p.a. usado quando a aplicação do consagrado teste EPF, TF-Test®.

[63] f.3 Do ponto de vista ecológico: devido da toxidade das substâncias químicas de alta saturação usadas na aplicação dos EPF' s os laboratórios de análises clinicas encontram barreiras de impedimento ao despejo desses como materiais residuais após sua aplicação, restrições essas ditadas por órgãos como MAPA, por exemplo.

[64] f.4 Do ponto de vista econômico: decorrente dos aspectos negativos previamente elencados, converge em alto custo as técnicas convencionais e kits comerciais utilizados efeti- vamente nos EPF's, notadamente pelo fato de que o insumo "substância quimica de alta saturação", como a acetato de etila p.a, usado no TF-Test®, por exemplo. [65] Nesse diapasão, o uso de equipamentos como centrifuga também impactam de forma negativa na composição do custo de exames dessa natureza.

[66] f.5 Do ponto de vista da acessibilidade do exame: de- corrente dos aspectos negativos previamente elencados con- verge em técnicas e kits comerciais de alto custo beneficio, impactando na indicação desta modalidade de exame EPF' s por parte de médicos e/ou especialistas das áreas de saúde, tanto privadas como públicas.

PROPOSTA DO INVENTO

[67] a. Objetivos do invento: é um objetivo do presente in- vento eliminar a fonte de problema de não eficácia dos EPF' s convencionais, qual seja, decorrente do uso excessivo de solventes químicos de alta saturação para a eliminação de residues fecais e gorduras, visto que é notório que tais componentes quimicos em muitas vezes ocasionam a lise de organismos parasitários, sobretudo quando pertencentes ao agrupamento dos protozoários.

[68] Também faz parte do rol de objetivos decorrentes da demanda técnica, de eficácia e confiabilidade dos resultados ofertados pelos EPF's especifico s, já isentos do uso exces- sivo de solventes quimicos de alta saturação, ofertar aos laboratórios de análises clinicas, um inédito protocolo téc- nico operacional, mais rápido (ganho em produtividade) , ató- xico (desejado por setores de segurança do trabalho e à luz do rigor de normas de descarte de dejetos resultantes da aplicação dos EPF's no meio ambiente) . [69] Já em relação aos custos de aquisição e aplicação dos EPF's específicos, a solução ora reivindicada se destaca reduzi-los, convergindo assim no atendimento do rol de de- mandas previamente elencadas no tópico introdutório dessa cártula, onde no entanto, é relevante tecer as seguintes considerações :

[70] (i) o novo protocolo para os EPF's específicos, refe- rente a burocracia na aquisição de materiais de consumo uti- lizados em EPF's, é importante e relevante mencionar a fa- cilidade conferida na sua aquisição e com baixo custo no comércio .

[71] (ii) Ainda nesse diapasão, merece menção ainda o fato de que as manipulações dos polímeros e sais demandadas na aplicação dos EPF's específicos, mostra-se bastante simpli- ficadas em laboratório.

[72] (iii) Por derradeiro, seu custo pode ser reduzido de- corrente de sua característica de fácil reprodutibilidade, eliminando a necessidade de mão de obra altamente treinada.

[73] b. Caracteristica distintiva: para tornar exequível rol o objetivos do invento, tendo como paradigma de desenvolvi- mento do invento os EPf ' s convencionais, procedeu-se à subs- tituição das substâncias químicas complexas de alta satura- ção e danosas aos parasites, por outras substâncias (polímero e sal, p . ex . ) mais simplificadas quando da execução da etapa de processamento laboratorial do EPF propriamente dito, ga- rantindo a desejada concentração e preservação dos parasi- tes, sem, no entanto abrir mão do requisito mandatário de exames dessa natureza, qual seja, o esfregaço fecal obtido em lâmina e laminula de microscopia, porém, com baixa acúmulo de residues fecais, especialmente quando comparado aos esfregaços de lâminas de kits comerciais e técnicas parasi- tológicas convencionais .

[74] Nesse diapasão, foi idealizada uma mistura para obten- ção de SAB especifico aplicado (na) à obtenção de esfregaço fecal e seu processo de obtenção, distintivo por ser um sistema aquoso bifásico especificado para obtenção de esfre- gaços fecais, com concentração de estruturas de parasites gastrintestinais de humanos e animais.

[75] Assim sendo, visando reduzir o reconhecido erro de di- agnóstico em EPF's convencionais, o presente invento propõe uma forma inédita de concentrar estruturas de parasites gas- trintestinais do homem e de animais por simples procedimento quimico/biológico com o uso de um SAB especifico , elimi- nando assim o uso de substâncias de alta saturação e tóxicas, mediante ainda a agitação manual em uma etapa do processo e, portanto, sem utilização de procedimentos mecânicos, elimi- nando o uso de equipamentos do tipo centrifuga e vortex, e de maneira inerte aos diversos agrupamentos de enteropara- sitos, seres humanos e meio ambiente.

[76] Finalmente o inédito SAB especifico é indicado exclu- sivamente à concentração de estruturas de parasites gastrin- testinais de humanos e animais, é composto basicamente por água, sendo o sal e o polímero nele utilizados de baixo ou nenhum impacto ecólogico e de fácil aquisição no comércio.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[77] A complementar a presente descrição de modo a obter uma melhor compreensão das características do presente invento e de acordo com uma preferencial forma de realização prática do mesmo, acompanha a descrição, em anexo, um jogo de fotos, assim descritas:

[78] A figura 1 é uma representação fotográfica do aspecto geral do "SAB" especifico com sua condição visual após a retirada do banho termostatizado, onde a maior concentração de polímero da mistura permanece na porção superior (Sal) e de sal na porção inferior (Sa2) .

[79] A figura 2 é uma representação fotográfica do aspecto do "SAB" especifico evidenciando: a fase superior (Sal) , formada por maior concentração de polimero; fase intermedi- ária (Sa3) , evidenciada principalmente pela retenção de ex- cesso de impurezas e gorduras; e, fase inferior (Sa2) , for- mada com maior concentração de sal da solução e sedimento de interesse diagnóstico com reduzida presença de impurezas (Fet") .

[80] A figura .3 é uma representação fotográfica do campo de imagem, auferida da parte exterior inferior do tubo por equipamento estereomicroscópio de alta precisão com plano de foco de imagem de até 2,5 cm (25mm) , da porção fecal a ser avaliada no "SAB" especifico contendo circulados em branco quatro ovos de A. lumbricoides .

[81] A figura .4 é uma representação fotográfica do campo de imagem obtida externamente ao tubo por mesmo equipamento, porém, desta vez da fase intermediária (Sa3) formada quando da aplicação da porção fecal a ser avaliada ao "SAB" espe- cifico .

[82] A figura .5 é uma representação fotográfica do resultado obtido entre laminula e lâmina de microscopia de um ovo de A. lumbricoides , com a aplicação da técnica de EPF, consa- grada pela literatura cientifica e comercial, TF-Test®, onde é preparado o esfregaço fecal com a técnica convencional, fazendo uso de substâncias químicas complexas de alta satu- ração .

[83] A figura .6 é uma representação fotográfica do resultado obtido com preparo entre lâmina e laminula do esfregaço fecal lançando mão de alíquota do sedimento fecal com uso do "SAB" especifico, para aplicação da concentração de ovos da mesma espécie parasitária (A. lumbrícoídes) .

DESCRIÇÃO DETALHADA

[84] A seguinte descrição detalhada deve ser lida e inter- pretada com referência as reportagens fotográficas documen- tais da etapa de preparo de esfregaço fecal entre laminula e lâmina de microscopia com o uso do novo SAB especifico para separação da concentração de estruturas de parasites gastrintestinais em relação aos resíduos fecais utilizado em EPF's, não sendo intencionado a limitar o escopo do invento, este sim limitado apenas ao explicitado no quadro reivindi- catório .

[85] a . Mistura para obtenção de SAB especifico aplicado na obtenção de esfregaço fecal: trata-se de uma mistura composta por uma porção liquida com variação de 1,0g a 2, 0g concen- trada de solução (So2) de polímero PEG 4000, uma porção liquida com oscilação de 2,5g a 3,0g de solução concentrada (So3) de sal fosfato de potássio dibásico - K2HPO4 e uma porção liquida com variabilidade de 0,5g a 2,0g de água destilada ( So4 ) ;

[86] b . Processo de preparo do SAB especifico :

[87] São previstas as seguintes etapas e subseções sequenciais :

[88] Etapa .1 Preparo das soluções químicas

[89] Subseção 1.1 Preparo da solução tampão (Sol) : prepara- se uma solução tampão de potencial hidrogeniônico (pH) com variação de 6,5 a 7,5, de fosfato de potássio monobásico (KH2PO4) e 0,1 a 0,2M de hidróxido de sódio (NaOH) ;

[90] Subseção 1.2 Preparo da solução de polímero (So2) : pre- para-se solução de Polietilenoglicol 4000 (PEG 4000) com variabilidade de 33% - 55% (m/m) , onde é utilizado como solvente a solução tampão (Sol) descrita em subseção (b.1.1) ; e

[91] Subseção 1.3 Preparo de sal (So3) : prepara-se uma so- lução de fosfato de potássio dibásico (K2HPO4) , com alter- nância de 20% - 40% (m/m) , onde é utilizado como solvente a mesma solução tampão (Sol) descrita em subseção (b.1.1) , sendo que nesta preparação é considerado o grau de pureza do soluto informado pela indústria fornecedora do mesmo.

[92] Etapa .2 Pesagem das soluções ( So2 ) e (So3) : em um tubo de ensaio de vidro com fundo redondo com dimensional de lem de diâmetro por lOcm de comprimento, e com capacidade volu- métrica de 10mL, pesar as proporções:

[93] (i) da solução de PEG 4000 (So2) , na faixa de peso compreendida entre 1,0g a 2,0g;

[94] (ii) da solução de fosfato de potássio dibásico (K2HPO4) (So3) , na faixa de peso compreendida entre e 2,0g a 3 , 5 g ; e

[95] (iii) da água destilada (So4) na faixa de peso entre l,5g a 2g, proveniente de equipamento Osmose Reversa.

[96] Etapa .3 Preparo do SAB específico: uma porção líquida da solução de polímero PEG 4000 (So2) é adicionada no tubo de ensaio, seguidos pelas adições de outras duas porções, sendo uma porção de solução de sal fosfato de potássio di- básico (K ₂ HPO ₄ ) (So3) e outra porção de água destilada (So4) , de modo a gerar no tubo de ensaio uma solução monofásica, onde uma vez obtida, este tubo de ensaio é tampado e em seguida agitado manual e vigorosamente por tempo que pode variar entre 10 a 30 segundos.

[97] c. Processo de obtenção do SAB específico: para asse- gurar a formação das duas fases, o tubo de ensaio fechado é mantido em banho termostatizado, em de equipamento de Banho Maria, com temperatura variando entre 24°C e 27°C, e com uma intercorrência de tempo na faixa compreendida entre 30 a 50 minutos, obtendo-se assim o SAB específico, tal como ilus- trado na reportagem fotográfica da figura 1, composto por uma fase superior (Sal) , uma fase intermediária (Sa3) e uma fase inferior (Sa2) .

[98] d . Processamento Laboratorial de preparo da amostra fe- cal

[99] Obedece as etapas sequenciais:

[100] Etapa .1 Colheitas de amostras fecais brutas no campo: são realizadas coletas de amostras fecais brutas em tripli- cata (em dias alternados) , (Fe1) , (Fe2) e (Fe3) , e deposi- tadas em três tubos de ensaio respectivamente, com capacidade volumétrica de 15mL, contendo cada tubo um valor aproximado de 4,5mL a 5,5mL de solução preservadora neutra de formalina (So5) , com pH compreendido na faixa de 6,5 a 7,5 sendo cada tubo devidamente tampado.

[101] Etapa .2 Homogeneização das amostras fecais: em labo- ratório, cada um dos três tubos de ensaio tampados e contendo amostras fecais brutas (Fel) , (Fe2) e (Fe3) colhidas é ho- mogeneizado vigorosamente com a variação de forças entre 3.000 e 3.500 RPM' s com o uso de agitador tipo Vortex, num intervalo de tempo de 30 segundos a 60 segundos.

[102] Etapa .3 Separação/reserva de porções de material fecal bruto : cada tubo de ensaio contendo amostras fecais brutas (Fel) , (Fe2) e (Fe3) homogeneizadas é destampado para que sejam retiradas e reservados volume com alternância de 500pL a 1.500pL de material fecal de interesse (Fel' ) , (Fe2' ) e (Fe3' ) ;

[103] Etapa .4 Tratamento e unificação do material fecal de interesse : a totalidade das amostras de volume de material fecal de interesse (Fel' ) , (Fe2' ) e (Fe3' ) é filtrada em malha metálica com orifícios de 400pm a 500pm e acondicio- nados em um tubo coletor limpo e seco com capacidade volu- métrica (15mL) , de modo a compor uma única porção de volume total de material fecal tratado de interesse (Fet) de apro- ximadamente 1.500pL a 2.000pL, sendo que em seguida esse tubo de ensaio é tampado.

[104] e. Processamento laboratorial do SAB especifico + ma- terial fecal tratado de interesse (Fet) :

[105] São definidas as estapas sequenciais:

[106] Etapa .1 Acesso ao SAB especifico: é retirado do banho termostatizado o tubo de ensaio fechado contendo o SAB es- pecifico, liberando-a para acesso e colocação do material fecal tratado de interesse (Fet) ;

[107] Etapa .2 Acesso ao material fecal tratado de interesse (Fet) : é retirada a tampa do tubo de ensaio onde está reser- vado o material fecal tratado de interesse (Fet) , liberando- a para acesso e retirada de determinado volume de uma porção material fecal tratado de interesse (Fet' ) ;

[108] Etapa .3 Obtenção de mistura de porção material fecal tratado de interesse (Fet' ) no SAB especifico : é transferido para o interior do tubo de ensaio contendo o SAB formado uma porção material fecal tratado de interesse (Fet' ) previa- mente preparado, com volume variando de 650pL a 850pL, ob- tendo assim uma mistura de interesse (Mi) , sendo que em seguida o tubo de ensaio é novamente tampado;

[109] Etapa .4 Obtenção de mistura homogenia de interesse: toda a mistura de interesse (Mi) definida no interior do tubo de ensaio tampado é submetida à agitação manual vigo- rosamente por um tempo aproximado de 10 a 30 segundos, até que seja possível observar novamente uma solução de interesse (Mi' ) ;

[110] Etapa .5 Obtenções de fases e sedimento de material fecal de interesse: a mistura de interesse (Mi' ) no interior do tubo de ensaio tampado é submetida a um banho termosta- tizado e mantida em repouso nessa condição por um tempo variável de 10 a 30 minutos, obtendo assim fases liquidas superior (Sal) , formada principalmente pela solução de po- límero, inferior (Sa2) , formada fundamentalmente pela solu- ção de sal, intermediária, onde ocorre a retenção do excesso de impurezas (gorduras e resíduos fecais) da porção de ma- terial fecal tratado de interesse (Fet' ) . Em complemento na região inferior do tubo de ensaio é acomodado o volume de sedimento fecal de interesse obtido (Fet' ' ) , vide figura 2, respectivamente, sendo mantida essa condição no interior do tubo de ensaio em banho termostatizado .

[111] Mais especificamente na figura .3 é evidenciada em de- talhamento a composição microscópica do sedimento fecal de interesse obtido (Fet'' ) , onde são observados quatro ovos do parasito nematoide A. lumbricoides , delimitados por circulos brancos .

[112] Por sua vez, na figura .4 é evidenciada em detalhamento a composição microscópica da fase intermediária (Sa3) , for- mada por volume de retenção de excesso de impurezas (gorduras e resíduos fecais) da porção de material fecal tratado de interesse ( Fet' ) .

[113] Etapa .6 Retirada e descarte das fases do SAB especi- fico: o tubo de ensaio onde é obtida e mantida a condição de fases liquidas superior (Sal) , intermediária (Sa3) e infe- rior (Sa2) do SAB especifico , e o volume de sedimento fecal de interesse obtido (Fet' ' ) na região inferior do tubo de ensaio é retirado do banho termostatizado sem movimento brusco, para que não ocorra nova homogeneização das fases do SAB especifico , sendo em seguida destampado para que com o auxilio de uma micropipeta plástica descartável tipo Pas- teur, seja retirado de seu interior a totalidade dos volumes das fases liquidas superior (Sal) , intermediária (Sa3) e inferior (Sa2) , nessa sequência, sendo essas descartadas em recipiente apropriado para residues liquidos biológicos, se- gundo normas de Controle de Qualidade e Biossegurança esta- belecida pela ANVISA do MS do Brasil (Regulamento Técnico para Laboratórios Clinicos, RDC Número 302 de 13/10/2005) , e por derradeiro restando na região inferior do tubo de ensaio o sedimento fecal de interesse (Fet' ' ) , vide figura .2.

[114] Etapa .7 Colheita de aliquota de sedimento fecal de interesse (Fet' ' ) : com o auxilio de uma micropipeta automá- tica, é retirada alíquotas com variação de 50pL a 100pL do sedimento fecal de interesse obtido (Fet' ' ) disposto na re- gião inferior do tubo de ensaio, vide figura 2, transf erindo- o prontamente entre laminula e lâmina de vidro de microscopia óptica (não ilustrado) .

[115] Etapa .8 Preparo de esfregaço para lâmina de microsco- pia : à alíquota com variação de 50pL a lOOpL do sedimento fecal de interesse obtido (Fet' ' ) acomodada sobre a lâmina, é adicionado de 40pL a 55pL de água destilada (So4) , prove- niente de equipamento Osmose Reversa, por exemplo, onde um esfregaço é realizado nestes materiais para posterior sobre- posição de laminula de vidro.

[116] Etapa .9 Transferência para leitura em microscopia óp- tica de luz convencional: a lâmina preparada com esfregaço é transferida para leitura em microscopia, por exemplo, mi- croscopia óptica de luz convencional, com ampliação de 10 vezes (aumentos de lentes objetiva x ocular, p.ex.) e con- firmação de 40 vezes.

[117] f . Efeito técnico obtido

[118] Para que se tenha consolidado o entendimento de que o presente invento na forma do SAB especifico para aplicação em esfregaço fecal do presente invento é tecnicamente espe- cifico em relação ao preparo de esfregaço fecal convencional, ou seja, que faz uso de substâncias de alta saturação, quando aplicados em EPF's, é apresentada a comparação da entre a qualidade de imagem e distinção de um ovo de parasito da espécie "A. Lumbrícoídes" quando submetidos a EPF's prepa- rados de forma convencional e diferenciada, onde:

[119] - Na figura .5 é verificado em esfregaço fecal preparado por uma técnica de EPF's, consagrada na literatura cientifica e comercialmente conhecida como TF-Test®. [120] - Na figura . 6 é veri ficado em es fregaço fecal preparado em lâmina por alíquota do sedimento fecal submetida ao SAB especi fico .

[121] Como se veri fica, a apreciação em microscópio da con- centração de parasito da espécie "A. Lumbrí coídes" no caso da figura 3b, com a aplicação do invento , se apresenta na forma de uma imagem mais nitida, com minima presença de impurezas , onde a estrutura desse parasito se apresenta in- tegra, tornando o resultado da análise clinica mais preciso e por consequência mais confiável .

[122] A escolha da forma de reali zação preferida do invento obj eto de reivindicação nesta cártula, descrita neste tópico de detalhamento é fornecida apenas a titulo de exemplo . Al- terações , modi ficações e variações podem ser reali zadas para outras quaisquer formas de real i zação da obtenção de SAB especi fico na obtenção de es fregaço fecal , seu processo de obtenção e seu processo de aplicação em (EPF) , alterações essas que podem ser ideali zadas por aqueles com habilidade na arte sem, no entanto divergir do conceito inventivo , ob- j etivos e reivindicações revelados no pleito da presente patente .

[123] Veri fica-se pelo que foi descrito e ilustrado que a "MISTURA PARA OBTENÇÃO DE S ISTEMA AQUOSO BI FÁS ICO ESPECÍ FICO APLICADO NA OBTENÇÃO DE ESFREGAÇO FECAL, SEU PROCESSO DE OBTENÇÃO E SEU PROCESSO DE APLICAÇÃO EM EXAME PARAS ITOLÓGICO DE FEZES" ora reivindicado se enquadra às normas que regem a patente de invenção à luz da Lei de Propriedade Industrial , merecendo pelo que foi exposto e como consequência, o res- pectivo privilégio .