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Title:
NEW USE OF CHEMICAL INGREDIENTS IN CYNOMORIUM AS PHYTOESTROGEN
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2012/048446
Kind Code:
A1
Abstract:
Use of chemical ingredients in Cynomorium as phytoestrogen is provided by the present invention. Particularly, use of Cynomorium, extracts of Cynomorium, or at least one ingredient chosen from chrysophanol, emodin, catechin, (-)-epicatechin-3-O-gallate, naringenin-4'-O-glucopyranoside, and phlorizin, in manufacturing medicaments for treating and/or preventing diseases related to insufficient of estrogen secretion in mammal (for example, human), or use in manufacturing medicaments used as phytoestrogens is provided by the present invention. The extracts of Cynomorium, compositions containing extracts of Cynomorium or active ingredients thereof, and methods of treating and/or preventing diseases related to insufficient of estrogen secretion are also provided by the present invention. According to the present invention, Cynomorium, extracts of Cynomorium, active ingredients thereof can be used to treat and/or prevent menopausal syndrome, osteoporosis, degenerative osteoporosis, cardiovascular and cerebrovascular diseases and breast cancer.

Inventors:
GAO XIUMEI (CN)
Application Number:
PCT/CN2010/001611
Publication Date:
April 19, 2012
Filing Date:
October 14, 2010
Export Citation:
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Assignee:
TIANJIN UNVERSITY OF TRADITIONAL CHINESE MEDECINE (CN)
GAO XIUMEI (CN)
International Classes:
A61K36/185; A61P5/30; A61P9/00; A61P19/10; A61P35/04
Foreign References:
Other References:
ZHANG C:Z. ET AL.: "In vitro estrogenic activities of Chinese medicinal plants traditionally used for the management of menopausal symptoms", JOURNAL OF ETHNOPHARMACOLOGY, vol. 98, 2005, pages 295 - 300, XP027757535
See also references of EP 2628485A4
"First Part of the Pharmacopoeia of the People's Republic of China", 2005
"Second Part of Pharmacopoeia of the People's Republic of China", 2005
Attorney, Agent or Firm:
CCPIT PATENT AND TRADEMARK LAW OFFICE (CN)
中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 (CN)
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Claims:
权 利 要 求

1、锁阳在制备用于治疗和 /或预防与哺乳动物雌激素分泌不足相 关的疾病的药物中的用途。

2、根据权利要求 1的用途,其中所述的与雌激素分泌不足相关的 疾病选自: 更年期综合征、 骨质疏松症、 退行性骨质疏松症、 心脑血 管疾病、 乳腺癌。

3、根据权利要求 1的用途,其中所述的药物包含锁阳药材以水、 醇、 或水 -醇混合物为提取溶剂的提取物。

4、 根据权利要求 1的用途, 其中所述药物包含锁阳药材的提取 物, 该提取物中包含至少一种选自以下的成分: 大黄酚、 大黄素、 儿 茶素、(-)表儿茶素 -3- -没食子酸酯、柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、根皮苷。

5、 锁阳提取物, 其中包含至少一种选自以下的成分: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖 苷、 根皮苷。

6、 根据权利要求 5的锁阳提取物, 其是以水、 醇或水-醇混合物 为溶剂提取,并依次经石油醚、氯仿、 乙酸乙酯、正丁醇萃取获得的。

7、锁阳提取物在制备用于治疗和 /或预防与哺乳动物雌激素分泌 不足相关的疾病的药物中的用途。

8、根据权利要求 7的用途,其中所述的与雌激素分泌不足相关的 疾病选自: 更年期综合征、 骨质疏松症、 退行性骨质疏松症、 心脑血 管疾病、 乳腺癌。

9、 根据权利要求 7的用途, 其中所述提取物中包含至少一种选 自以下的成分: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子 酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。

10、根据权利要求 7的用途,其中所述的提取物是锁阳药材以水、 醇、 或水-醇混合物为提取溶剂的提取物。

11、 根据权利要求 7的用途, 其中所述的锁阳提取物是经如下步 骤制备的:将锁阳用含水乙醇溶液提取;使所得醇提取物用石油醚萃 取, 浓缩醚层得石油醚部分; 将石油醚萃取的残余物用氯仿萃取, 浓 缩氯仿层得氯仿部分;将氯仿萃取的残余物用乙酸乙酯萃取, 浓缩乙 酸乙酯层得乙酸乙酯部分; 将乙酸乙酯萃取的残余物用正丁醇萃取, 浓缩正丁醇层得正丁醇部分;将上述石油醚部分、氯仿部分和乙酸乙 酯部分合并, 得到提取物。

12、 选自下列成分的一种或多种的组合在制备用于治疗和 /或预 防与哺乳动物雌激素分泌不足相关的疾病的药物中的用途: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'-6>-葡萄糖 苷、 根皮苷。

13、根据权利要求 12的用途,其中所述的与雌激素分泌不足相关 的疾病选自: 更年期综合征、 骨质疏松症、 退行性骨质疏松症、 心脑 血管疾病、 乳腺癌。

14、 锁阳在制备作为植物雌激素的药物中的用途。

15、 锁阳提取物在制备作为植物雌激素的药物中的用途。

16、选自下列成分的一种或多种的组合在制备作为植物雌激素的 药物中的用途: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3- -没食子 酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。

17、 用于治疗和 /或预防与哺乳动物雌激素分泌不足相关的疾病 的药物组合物, 其中包含治疗和 /或预防有效量的锁阳提取物以及任 选的药学可接受的赋形剂。

18、 用于治疗和 /或预防与哺乳动物雌激素分泌不足相关的疾病 的药物组合物, 其中包含治疗和 /或预防有效量的至少一种药物活性 成分以及任选的药学可接受的赋形剂,所述的药物活性成分选自: 大 黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0·没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0- 葡萄糖苷、 根皮苷。

19、 在有需要的受试者中治疗和 /或预防与雌激素分泌不足相关 的疾病的方法,其包括给所述受试者施用有效量的锁阳,锁阳提取物, 或者至少一种选自下列的活性成分选自: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3- -没食子酸酯、 柑桔素 -4'- -葡萄糖苷、 根皮苷。

20、根据权利要求 20的方法,其中所述的与雌激素分泌不足相关 的疾病选自: 更年期综合征、 骨质疏松症、 退行性骨质疏松症、 心脑 血管疾病、 乳腺癌。

Description:
锁阳化学成分作为植物雌激素的新用途

技术领域

本发明涉及传统中药材锁阳中的若干化学成分 的新用途,特别是 锁阳中的黄酮类化合物和蒽醌类化合物的作为 植物雌激素的新用途。 背景技术

锁 P日 {Herba Cynomorii)为锁阳科植物锁 P日 (Cynomorium «g«Wc« « Rupr.)的干燥肉质茎。锁阳味甘性温, 归肝、 肾、大肠经, 是一种十分奇特的天然沙生珍稀植物。 具有补肾阳, 益精血, 润肠通 便的功效, 主治阳痿遗精、 腰膝酸软、 肠燥便秘、 血枯、 尿血、 神经 衰弱等症。 锁阳的化学成分研究表明, 锁阳含有黄酮类、 三萜类、 糖 和糖苷类、 鞣质、 体类、 挥发性成分、 有机酸、 氨基酸、 无机元素 和离子等成分。 其中黄酮类成分包括 (+)-儿茶素、 (-) -儿茶素、 柑桔素 4,-0-吡喃葡糖苷、 柑桔素为苷元的配糖体。

雌激素是是女性关键的调节激素, 主要由卵巢和胎盘产生, 雌激 素按其化学结构归属为类固醇激素, 呈脂溶性, 其靶组织众多, 包括 生殖系统、 骨骼、 心血管等。 雌激素主要分为两大类: 甾体类雌激素 和非 体类雌激素。 体类雌激素是哺乳动物体的卵巢分泌的内源性 成分, 目前在人体内发现的甾体类雌激素有三种: 雌二醇, 从孕妇尿 中分离得到的雌三醇、 雌酮, 其中以雌二醇为主, 且活性最强。 甾体 类雌激素在维持生命、 调节性机能、 对机体发育、 免疫调节、 皮肤病 治疗及生育方面具有十分重要的作用。 非甾体类雌激素主要是二苯乙 烯苷类化合物。 一般认为雌激素是通过和细胞内相应的雌激素 受体 (ER)结合, 从而引发启动转录等一系列下游事件, 产生生理学效应。 非甾体类雌激素与雌激素受体的亲和力是雌二 醇的 1/100或 1/1000。 由于临床长期使用雌激素可造成乳腺癌、 子宫内膜异位生长和致癌变 等缺点,人们致力于寻求雌激素的替代物。植 物雌激素 (Phytoestrogen, PE)是一类广泛存在于植物中的非甾体类化合物 , 可与体内 ER结合, 流行病学研究以及动物实验已经证实植物雌激 素在预防肿瘤、 治疗心 血管疾病和骨质疏松、 改善绝经期症状等方面有着很好的预防和治疗 作用, 保护神经系统, 且未发现有上述不良影响。 因此, 植物雌激素 常被作为天然雌激素替代物来研究。 虽然 PE与雌激素受体结合的能 力只是雌激素的 1/500-1/1000, 但其在激素替代疗法 (HRT)中副作用 小,因而研究者对此产生了巨大的兴趣并希望 PE在 HRT中发挥潜在 的医疗价值。

雌激素在机体的生长、发育、细胞分化及生殖 系统中具有广泛的 生理作用。雌激素主要通过 ER发挥各种生物效应, ER有两种亚型, ERoc和 ERP, 其在人体许多组织和细胞中的表达是不同的, 两种亚 型在同一组织细胞中的表达水平存在差异,同 种亚型在不同组织细胞 中的表达水平也存在差异, 因此任何配体与 ERo和 ERP的相互作用 所表现的效应是错综复杂的。 ERa和 ERP的组织分布有差异性, 其 中在子宫、 乳腺、 输卵管、 阴道上皮以表达 ERo为主, ERP表达微 弱, 而卵巢以表达 ERP 占优势, 大部分存在于颗粒细胞, 血管平滑 肌细胞以表达 Εί 为主。

妇女到更年期后因为卵巢不断衰竭,雌激素分 泌减少, 由雌激素 介导的各种生理过程都受到影响, 产生心悸、 胸闷、 忧虑、 抑郁、 易 激动、 失眠、记忆力减退等生理和心理症状, 这些症状统称为更年期 综合征;由于雌激素分泌减少的影响造成的骨 质疏松症称为退行性骨 质疏松症。 为了治疗和 /或预防上述病症, 一种有益的方法就是补充 雌激素。 但是, 多年来的临床实践发现, 长期服用雌激素会大大增加 乳腺癌发病的风险。 因此, 寻找具有雌激素活性和 /或没有雌激素副 作用的植物雌激素,为临床提供新的治疗选择 ,仍是本领域技术人员 期待的。 发明内容

本发明的目的是寻找具有雌激素活性和 /或没有雌激素副作用的 植物雌激素, 为临床提供新的治疗选择。 本发明人令人惊奇地发现, 从中药材锁阳中提取到的部分化学成分例如黄 酮类和蒽醌类化合物 具有确切的雌激素活性, 可作为植物雌激素用于雌激素的替代治疗。 本发明基于上述发现而得以完成。

发明概迷

本发明第一方面提供了锁阳在制备用于治疗和 /或预防与哺乳动 物 (例如, 人)雌激素分泌不足相关的疾病的药物中的用 。

本发明第二方面提供一种锁阳提取物,其中包 含至少一种选自以 下的成分: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔素 _4'-0-葡菊糖苷、 根皮苷。

本发明第三方面提供了可得自锁阳的一种或多 种选自下列的活 性成分: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 _4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。

本发明第四方面提供了锁阳提取物在制备用于 治疗和 /或预防与 哺乳动物 (例如, 人)雌激素分泌不足相关的疾病的药物中的用 。

本发明第五方面提供了选自下列成分的一种或 多种的组合在制 备用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例如,人)雌激素分泌不足相关的疾 病的药物中的用途: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3- -没 食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。

本发明第六方面提供了锁阳在制备作为植物雌 激素的药物中的 用途。

本发明第七方面提供了锁阳提取物在制备作为 植物雌激素的药 物中的用途。

本发明第八方面提供了选自下列成分的一种或 多种的组合在制 备作为植物雌激素的药物中的用途: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-) 表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。

本发明第九方面提供了一种用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例 如, 人)雌激素分泌不足相关的疾病的药物组合物 其中包含治疗和 / 或预防有效量的锁阳提取物以及任选的药学可 接受的赋形剂。

本发明第十方面提供了一种用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例 如, 人)雌激素分泌不足相关的疾病的药物组合物 其中包含治疗和 / 或预防有效量的至少一种药物活性成分以及任 选的药学可接受的赋 形剂, 所述的药物活性成分选自: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿 茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'- -葡萄糖苷、 根皮苷。

本发明第十一方面提供了在有需要的受试者中 治疗和 /或预防与 雌激素分泌不足相关的疾病的方法,其包括给 所述受试者施用预防和 /或治疗有效量的锁阳, 锁阳提取物, 或者至少一种选自下列的活性 成分选自: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3- >-没食子酸酯、 柑桔素 _4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。

发明详迷

本发明第一方面提供了锁阳在制备用于治疗和 /或预防与哺乳动 物 (例如, 人)雌激素分泌不足相关的疾病的药物中的用 。

根据本发明第一方面任一项的用途,其中所述 的与雌激素分泌不 足相关的疾病选自:更年期综合征、骨质疏松 症、退行性骨质疏松症、 心脑血管疾病、 乳腺癌。

才艮据本发明第一方面任一项的用途,其中所 述药物的剂量为所述 哺乳动物每天每 kg体重相当于锁阳药材 0.01-10g, 优选 0.02-5g, 更 优选 0.05-lg, 再更优选 0.05-0.5g。

根据本发明第一方面任一项的用途,其中所述 药物包含锁阳药材 的提取物。

才艮据本发明第一方面任一项的用途,其中所 述的药物包含锁阳药 材以水、醇 (例如乙醇)、或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 9 5 %乙醇)为提取溶剂的提取物。

根据本发明第一方面任一项的用途,其中所述 的药物包含锁阳药 材的提取物, 该提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混 合物 (例如 50-9 8 %乙醇, 例如 6 0%乙醇、 95 %乙醇)为溶剂提取, 并 依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取获得的。

根据本发明第一方面任一项的用途,其中所述 的药物包含锁阳药 材的提取物, 该提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混 合物 (例如 50_ 98 %乙醇, 例如 6 0%乙醇、 95 %乙醇)为溶剂提取, 并 依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的石油醚萃取部 分、 氯仿萃取部分、 乙酸乙酯萃取部分、 或其混合物。 在一个实施方 案中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物

(例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次 经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的石油醚萃取部分、 氯仿萃取部分、 和乙酸乙酯萃取部分的混合物。 在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油 醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的氯仿萃取部分和乙酸乙酯 萃取部分的混合物。 在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例 如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙 醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正 丁醇萃取, 得到的乙酸乙酯萃取部分。 在一个实施方案中, 所述提取 物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50_ 98 %乙 醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到的石油醚萃取部 分。在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物(例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油 醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的乙酸乙酯萃取部分和石油 醚萃取部分的混合物。

根据本发明第一方面任一项的用途,其中所述 药物包含锁阳药材 的提取物, 该提取物中包含至少一种选自以下的成分: 大黄酚、 大黄 素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。在一个实施方案中,所述提取物中包 含以下的成分:大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔素 -4'- -葡萄糖 苷、 根皮苷。

根据本发明第一方面任一项的用途,其中所述 药物包含锁阳药材 的提取物, 该提取物中包含至少一种选自以下的成分: 儿茶素、 (-) 表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个 实施方案中, 所述提取物中包含以下的成分: 儿茶素、 (-)表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个实施方案 中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例 如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经 石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的乙酸乙酯萃取部分。

根据本发明第一方面任一项的用途,其中所述 药物包含锁阳药材 的提取物,该锁阳的提取物是经如下步骤制备 的:将锁阳用含水乙醇 溶液 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)提取; 使所得醇提 取物用石油醚萃取, 浓缩醚层得石油醚部分;将石油醚萃取的残余 物 用氯仿萃取, 浓缩氯仿层得氯仿部分;将氯仿萃取的残余物 用乙酸乙 酯萃取, 浓缩乙酸乙酯层得乙酸乙酯部分;将乙酸乙酯 萃取的残余物 用正丁醇萃取, 浓缩正丁醇层得正丁醇部分; 将上述石油醚部分、 氯 仿部分和乙酸乙酯部分合并, 得到提取物。 在一个实施方案中, 所述 锁阳提取物是上述石油醚部分、氯仿部分合并 得到的。在一个实施方 案中, 所述锁阳提取物是上述氯仿部分、 乙酸乙酯部分合并得到的。 在一个实施方案中,所述锁阳提取物是上述石 油醚部分、 乙酸乙酯部 分合并得到的。在一个实施方案中,所述锁阳 提取物是上述乙酸乙酯 部分。

本发明第二方面提供一种锁阳提取物,其中包 含至少一种选自以 下的成分: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 _ 4 '_ 葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个实施方案中, 所述锁阳提取 物中包含大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 _4'_ 0 _葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个实施方案中, 所述锁阳提取 物中包含至少一种选自以下的成分: 儿茶素、 (-)表儿茶素 没食 子酸酯、 柑桔素 -4'- ·葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个实施方案中, 所述 锁阳提取物中包含儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。

根据本发明第二方面任一项的锁阳提取物,其 中所述大黄酚、大 黄素、儿茶素、(-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、柑桔素 -4'- -葡萄糖苷、 根皮苷的总量占所述提取物总重量的 l-90%(w/w), 优选 l~80%(w/w), 优选 2 ~ 50 %(w/w), 优选 2 ~ 40 %(w/w), 优选 2 ~ 30 %( /w), 更优选 2 ~ 20 %(w/w)。

根据本发明第二方面任一项的锁阳提取物, 其是锁阳药材以水、 醇(例如乙醇)、 或水-醇(例如乙醇)混合物(例如 50-98%乙醇, 例如 6 0%乙醇、 95 %乙醇)为提取溶剂的提取物。

根据本发明第二方面任一项的锁阳提取物, 其是以水、 醇 (例如 乙醇)、或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50-98%乙醇,例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇 萃取获得的。

根据本发明第二方面任一项的锁阳提取物, 其是以水、 醇 (例如 乙醇)、或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50_ 98 %乙醇,例如 6 0%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇 萃取, 得到的石油醚萃取部分、 氯仿萃取部分、 乙酸乙酯萃取部分、 或其混合物。在一个实施方案中, 所述提取物是以水、醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50_ 9 8%乙醇, 例如 6 0%乙醇、 9 5 % 乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的石油醚萃取部分、氯仿萃取部分、和乙 酸乙酯萃取部分的混合 物。 在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水- 醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇) 为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到 的氯仿萃取部分和乙酸乙酯萃取部分的混合物 。 在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物(例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油 醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的乙酸乙酯萃取部分。 在一 个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙 醇)混合物 (例如 5 0_ 98 %乙醇,例如 6 0%乙醇、 9S%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的石油醚萃取 部分。 在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水 -醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇) 为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到 的乙酸乙酯萃取部分和石油醚萃取部分的混合 物。根据本发明的任一 方面, 所述提取物是乙酸乙酯萃取部分, 并且其中包含儿茶素、柑桔 素 -4'-0-葡萄糖苷、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 根皮苷。 根据本发 明的任一方面,所述提取物是石油醚萃取部分 ,并且其中包含大黄酚。 根据本发明的任一方面,所述提取物是乙酸乙 酯萃取部分和石油醚萃 取部分的混合物, 并且其中包含儿茶素、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 (-) 表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 根皮苷、 大黄酚。 根据本发明的任一方 面, 所述提取物是乙酸乙酯萃取部分、石油醚萃取 部分、或者乙酸乙 酯萃取部分和石油醚萃取部分的混合物,并且 该提取物中包含至少一 种选自以下的成分: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没 食子酸酯、柑桔素 -4'-(?-葡萄糖苷、根皮苷。根据本发明的任一 面, 所述提取物是乙酸乙酯萃取部分、石油醚萃取 部分、或者乙酸乙酯萃 取部分和石油醚萃取部分的混合物,并且该提 取物中包含至少一种选 自以下的成分: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子 酸酯、 柑桔素 -4'- ·葡萄糖苷、 根皮苷, 所述大黄酴、 大黄素、 儿茶 素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4 葡萄糖苷和根皮苷的 总量占所述提取物总重量的 l-90%(w/w), 优选 l~80%(w/w), 优选 2 〜50 %(w/w), 优选 2 ~ 40 %(w/w), 优选 2〜30 %(w/w), 更优选 2 ~ 20 %(w/w) 0

根据本发明第二方面任一项的锁阳提取物,其 是经如下步骤制备 的: 将锁阳用含水乙醇溶液 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95% 乙醇)提取; 使所得醇提取物用石油醚萃取, 浓缩醚层得石油醚部分; 将石油醚萃取的残余物用氯仿萃取, 浓缩氯仿层得氯仿部分;将氯仿 萃取的残余物用乙酸乙酯萃取, 浓缩乙酸乙酯层得乙酸乙酯部分;将 乙酸乙酯萃取的残余物用正丁醇萃取, 浓缩正丁醇层得正丁醇部分; 将上述石油醚部分、 氯仿部分和乙酸乙酯部分合并, 得到提取物。 在 一个实施方案中,所述锁阳提取物是上述石油 醚部分、氯仿部分合并 得到的。 在一个实施方案中, 所述锁阳提取物是上述氯仿部分、 乙酸 乙酯部分合并得到的。在一个实施方案中,所 述锁阳提取物是上述石 油醚部分、 乙酸乙酯部分合并得到的。 在一个实施方案中, 所述锁阳 提取物是上述乙酸乙酯部分。

根据本发明第二方面任一项的锁阳提取物,其 是经如下步骤制备 的: a)将锁阳用 2~20倍量 (优选 5〜15倍量, 更优选 8~12倍量, 例如 10 倍量)的 60~98% (优选 70~98%, 更优选 80〜98%, 例如 80%、 85%、 90%、 95%或 98%)乙醇浸泡 5~24小时 (优选 5~18小时, 更优选 8~15小 时); b)回流提取 0.5~10小时 (优选 0.5~8小时, 更优选 0.5~6小时, 更优 选 0.5~4小时, 更优选 1~4小时, 例如 1小时、 2小时、 3小时、 4小时), 倾出提取液; c)任选地使步骤 b)的药渣重复进行步骤 a)和步骤 b) 1-3 次 (例如 1次、 2次、 3次); d)合并步骤 b)和步骤 c)的提取液, 过滤, 滤 液回收乙醇, 得浓缩液; e)使步骤 d)的浓缩液依次用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯和正丁醇萃取,将各萃取物分别回收 溶剂后得固形物,合并 石油醚部分、 氯仿部分、 和乙酸乙酯部分中任一种或多种的固形物, 得提取物。 在一个实施方案中, 所述锁阳提取物是上述石油醚部分、 氯仿部分合并得到的。在一个实施方案中,所 述锁阳提取物是上述氯 仿部分、 乙酸乙酯部分合并得到的。 在一个实施方案中, 所述锁阳提 取物是上述石油醚部分、 乙酸乙酯部分合并得到的。在一个实施方案 中, 所述锁阳提取物是上述乙酸乙酯部分。

本发明第三方面提供了可得自锁阳的包含一种 或多种选自下列 的活性成分: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0·没食子酸 酯、 柑桔素 -4'- -葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个实施方案中, 所述锁阳 活性成分可用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例如,人)雌激素分泌不足 相关的疾病。 在一个实施方案中, 所述大黄酚可用于治疗和 /或预防 与哺乳动物 (例如, 人)雌激素分泌不足相关的疾病。 在一个实施方案 中, 所述大黄素可用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例如,人)雌激素分 泌不足相关的疾病。 在一个实施方案中, 所述儿茶素可用于治疗和 / 或预防与哺乳动物 (例如, 人)雌激素分泌不足相关的疾病。 在一个实 施方案中, 所述 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯可用于治疗和 /或预防与 哺乳动物 (例如,人)雌激素分泌不足相关的疾病。在一 实施方案中, 所述柑桔素 -4'-6>-葡萄糖苷可用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例如, 人)雌激素分泌不足相关的疾病。 在一个实施方案中, 所述根皮苷可 用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例如, 人)雌激素分泌不足相关的疾 病

根据本发明第三方面任一项的活性成分,其中 下列成分的一种或 多种的组合是从锁阳中提取得到: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿 茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。

根据本发明第三方面任一项的活性成分,其中 从锁阳中提取大黄 酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0- 葡萄糖苷、 根皮苷的步骤如下:

将锁阳用含水乙醇溶液 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95% 乙醇)提取;

使所得醇提取物依次用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯和正丁醇萃取, 将各萃取物分别回收溶剂后得各萃取溶剂部分 的固形物;

石油醚部分经硅胶柱层析, 采取石油醚-乙酸乙酯溶剂系统梯度 洗脱, 3 ~ 4流份经过石油醚重结晶处理, 得到大黄酚;

氯仿部分经过硅胶柱层析,采取石油醚-丙酮 剂系统梯度洗脱, 19 ~ 32流份通过羟丙基葡聚糖凝胶及氯仿-曱醇溶剂 系统反复硅胶柱 层析后, 得到大黄素;

乙酸乙酯部分经过硅胶柱层析, 釆取氯仿-曱醇溶剂系统梯度洗 脱,得到的乙酸乙酯部分 27 ~ 42流份、和乙酸乙酯部分 43 ~ 64流份; 该乙酸乙酯部分 27 ~ 42 流份经过硅胶柱层析, 釆用氯仿-曱醇- 水溶剂系统梯度洗脱, 分别得到 27 42-4 ~ 6流份 (即上一步骤的乙 酸乙酯部分 27 - 42流份经硅胶柱层析后得到的 4 ~ 6流份,本文其它 地方出现类似表述具有类似含义)、 27 ~ 42-7 ~ 10流份、 27 ~ 42-11 ~ 14流份;

所述 27 ~ 42-4 ~ 6流份经石油醚-乙酸乙酯溶剂系统硅胶柱层析 得到儿茶素;

所述 27 ~ 42-7 ~ 10流份经过硅胶柱层析以及皮相硅胶柱层析处 理, 得到柑桔素 -4 葡萄糖苷;

所述 27 ~ 42-11 ~ 14流份经过羟丙基葡聚糖凝胶及反相硅胶柱层 析, 得到 (-)表儿茶素 -3- -没食子酸酯;

所述乙酸乙酯部分 43 ~ 64 流份通过氯仿-甲醇溶剂系统进行聚 酰胺以及硅胶柱层析并结合羟丙基葡聚糖凝胶 柱层析, 得到根皮苷。

本发明第四方面提供了锁阳提取物在制备用于 治疗和 /或预防与 哺乳动物 (例如, 人)雌激素分泌不足相关的疾病的药物中的用 。 根据本发明第四方面任一项的用途,其中所述 的与雌激素分泌不 足相关的疾病选自:更年期综合征、骨质疏松 症、退行性骨质疏松症、 心脑血管疾病、 乳腺癌。

根据本发明第四方面任一项的用途,其中所述 提取物的剂量为所 述哺乳动物每天每 kg体重相当于锁阳药材 0.01-10g, 优选 0.02-5g, 更优选 0.05-lg, 再更优选 0.05-0.5g。

根据本发明第四方面任一项的用途,其中所述 提取物中包含至少 一种选自以下的成分: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个实施方案中, 所述大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔 素 -4,-0-葡萄糖苷、 根皮苷的总量占所述提取物总重量的 l-90%(w/ ), 优选 l~80%(w/w), 优选 2 ~ 50 %(w/w) , 优选 2〜 40 %(w/w), 优选 2 ~ 30 %(w/w), 更优选 2〜20 %(w/w)。

根据本发明第四方面任一项的用途,其中所述 提取物中包含至少 一种选自以下的成分: 儿茶素、 (-)表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔 素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个实施方案中, 其中所述儿茶素、 (-)表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷的总量 占所述提取物总重量的 l-90%(w/w), 优选 l~80%(w/w), 优选 2 - 50 %(w/w), 优选 2 ~ 40 %(w/w), 优选 2 ~ 30 %(w/w), 更优选 2 ~ 20 %( /w).

根据本发明第四方面任一项的用途,其中所述 的提取物是锁阳药 材以水、醇 (例如乙醇)、或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50_ 98 %乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为提取溶剂的提取物。

根据本发明第四方面任一项的用途,其中所述 提取物是以水、醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50-98%乙醇, 例如 60% 乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取获得的。

根据本发明第四方面任一项的用途,其中所述 提取物是以水、醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50_ 98 %乙醇, 例如 60% 乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的石油醚萃取部分、 氯仿萃取部分、 乙酸乙酯萃取 部分、 或其混合物。 在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例 如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50_ 98 %乙醇, 例如 60%乙 醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正 丁醇萃取, 得到的石油醚萃取部分、 氯仿萃取部分、 和乙酸乙酯萃取 部分的混合物。 在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙 醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50_ 98 %乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇 萃取,得到的氯仿萃取部分和乙酸乙酯萃取部 分的混合物。在一个实 施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混 合物 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并 依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的乙酸乙酯萃取 部分。 在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水 -醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50_ 9 8%乙醇, 例如 60%乙醇、 95 %乙醇) 为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到 的石油醚萃取部分。 在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例 如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50_ 9 8%乙醇, 例如 6 0%乙 醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正 丁醇萃取, 得到的乙酸乙酯萃取部分和石油醚萃取部分的 混合物。

根据本发明第四方面任一项的用途,其中所述 提取物中包含至少 一种选自以下的成分: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0- 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个实施方案中, 所述提取物中包含以下的成分: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶 素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。

根据本发明第四方面任一项的用途,其中所述 提取物中包含至少 一种选自以下的成分: 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3- -没食子酸酯、 柑桔 素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个实施方案中, 所述提取物中包含 以下的成分: 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'- - 葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例 如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50_ 98 %乙醇, 例如 6 0%乙 醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正 丁醇萃取, 得到的乙酸乙酯萃取部分。

根据本发明第四方面任一项的用途,其中所述 的锁阳提取物是经 如下步骤制备的: 将锁阳用含水乙醇溶液 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)提取; 使所得醇提取物用石油醚萃取, 浓缩醚 层得石油醚部分;将石油醚萃取的残余物用氯 仿萃取,浓缩氯仿层得 氯仿部分; 将氯仿萃取的残余物用乙酸乙酯萃取, 浓缩乙酸乙酯层得 乙酸乙酯部分;将乙酸乙酯萃取的残余物用正 丁醇萃取, 浓缩正丁醇 层得正丁醇部分;将上述石油醚部分、氯仿部 分和乙酸乙酯部分合并, 得到提取物。在一个实施方案中,所述锁阳提 取物是上述石油醚部分、 氯仿部分合并得到的。在一个实施方案中,所 述锁阳提取物是上述氯 仿部分、 乙酸乙酯部分合并得到的。 在一个实施方案中, 所述锁阳提 取物是上述石油醚部分、 乙酸乙酯部分合并得到的。在一个实施方案 中, 所述锁阳提取物是上述乙酸乙酯部分。

根据本发明第四方面任一项的用途,其中所述 的锁阳提取物是经 如下步骤制备的: a)将锁阳用 2~20倍量 (优选 5~15倍量, 更优选 8〜12 倍量, 例如 10倍量)的 60~98% (优选 70~98%, 更优选 80〜98%, 例如 80%、 85%、 90%、 95%或 98%)乙醇浸泡 5〜24小时 (优选 5~18小时, 更优选 8~15小时); b)回流提取 0.5 10小时 (优选 0.5~8小时, 更优选 0.5~6小时, 更优选 0.5~4小时, 更优选 1~4小时, 例如 1小时、 2小时、 3小时、 4小时), 倾出提取液; c)任选地使步骤 b)的药渣重复进行步骤 a)和步骤 b) 1〜3次 (例如 1次、 2次、 3次); d)合并步骤 b)和步骤 c)的提 取液, 过滤, 滤液回收乙醇, 得浓缩液; e)使步骤 d)的浓缩液依次用 石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯和正丁醇萃取, 将各萃取物分别回收溶剂后 得固形物, 合并石油醚部分、 氯仿部分、 和乙酸乙酯部分中任一种或 多种的固形物, 得提取物。 在一个实施方案中, 所述锁阳提取物是上 述石油醚部分、 氯仿部分合并得到的。 在一个实施方案中, 所述锁阳 提取物是上述氯仿部分、 乙酸乙酯部分合并得到的。在一个实施方案 中, 所述锁阳提取物是上述石油醚部分、 乙酸乙酯部分合并得到的。 在一个实施方案中, 所述锁阳提取物是上述乙酸乙酯部分。

本发明第五方面提供了选自下列成分的一种或 多种的组合在制 备用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例如,人)雌激素分泌不足相关的疾 病的药物中的用途: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没 食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个实施方案中, 提 供了大黄酚在制备用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例如,人)雌激素分 泌不足相关的疾病的药物中的用途。在一个实 施方案中,提供了大黄 素在制备用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例如,人)雌激素分泌不足相 关的疾病的药物中的用途。在一个实施方案中 ,提供了儿茶素在制备 用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例如,人)雌激素分泌不足相关的疾病 的药物中的用途。 在一个实施方案中, 提供了 (-)表儿茶素 没食 子酸酯在制备用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例如,人)雌激素分泌不 足相关的疾病的药物中的用途。 在一个实施方案中, 提供了柑桔素 -4 葡萄糖苷在制备用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例如, 人)雌激 素分泌不足相关的疾病的药物中的用途。在一 个实施方案中,提供了 根皮苷在制备用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例如,人)雌激素分泌不 足相关的疾病的药物中的用途。在一个实施方 案中,提供了选自下列 成分的一种或多种的组合在制备用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例 如, 人)雌激素分泌不足相关的疾病的药物中的用 : 儿茶素、 (-)表 儿茶素 -3- -没食子酸酯、 柑桔素 -4'- -葡萄糖苷、 根皮苷。

根据本发明第五方面任一项的用途,其中所述 的与雌激素分泌不 足相关的疾病选自:更年期综合征、骨质疏松 症、退行性骨质疏松症、 心脑血管疾病、 乳腺癌。

根据本发明第五方面任一项的用途,其为下列 成分在制备用于治 疗和 /或预防与哺乳动物 (例如,人)雌激素分泌不足相关的疾病的药物 中的用途: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 _4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。

才艮据本发明第五方面任一项的用途,其中下 列成分的一种或多种 的组合是从锁阳中提取得到: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。 根据本发明笫五方面任一项的用途, 其中从锁阳中提取大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖 苷、 根皮苷的步驟如下:

将锁阳用含水乙醇溶液 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95% 乙醇)提取;

使所得醇提取物依次用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯和正丁醇萃取, 将各萃取物分别回收溶剂后得各萃取溶剂部分 的固形物;

石油醚部分经硅胶柱层析, 釆取石油醚-乙酸乙酯溶剂系统梯度 洗脱, 3 ~ 4流份经过石油醚重结晶处理, 得到大黄酚;

氯仿部分经过硅胶柱层析,采取石油醚-丙酮 剂系统梯度洗脱, 19 ~ 32流份通过羟丙基葡聚糖凝胶及氯仿-甲醇溶剂 系统反复硅胶柱 层析后, 得到大黄素;

乙酸乙酯部分经过硅胶柱层析, 采取氯仿-甲醇溶剂系统梯度洗 脱,得到的乙酸乙酯部分 27 ~ 42流份、和乙酸乙酯部分 43 ~ 64流份; 该乙酸乙酯部分 27 ~ 42 流份经过硅胶柱层析, 采用氯仿-曱醇- 水溶剂系统梯度洗脱, 分别得到 27 ~ 42-4 ~ 6流份 (即上一步骤的乙 酸乙酯部分 27 ~ 42流份经硅胶柱层析后得到的 4 ~ 6流份,本文其它 地方出现类似表述具有类似含义)、 27 ~ 42-7 ~ 10流份、 27 - 42-11 - 14流份;

所述 27 ~ 42-4 - 6流份经石油醚-乙酸乙酯溶剂系统硅胶柱层析 得到儿茶素;

所述 27 ~ 42-7 - 10流份经过硅胶柱层析以及反相硅胶柱层析处 理, 得到柑桔素 -4'-(?-葡萄糖苷;

所述 27 ~ 42-11 - 14流份经过羟丙基葡聚糖凝胶及反相硅胶柱层 析, 得到 (-)表儿茶素 -3-(?-没食子酸酯;

所述乙酸乙酯部分 43 ~ 64 流份通过氯仿-曱醇溶剂系统进行聚 酰胺以及硅胶柱层析并结合羟丙基葡聚糖凝胶 柱层析, 得到根皮苷。

本发明第六方面提供了锁阳在制备作为植物雌 激素的药物中的 用途。

才艮据本发明第六方面任一项的用途,其中所 述的药物可用于治疗 和 /或预防更年期综合征、 骨质疏松症、 退行性骨质疏松症、 心脑血 管疾病、 乳腺癌。

根据本发明第六方面任一项的用途,其中所述 药物的剂量为所述 哺乳动物每天每 kg体重相当于锁阳药材 0.01-10g, 优选 0.02-5g, 更 优选 0.05-lg, 再更优选 0.05-0.5g。

根据本发明第六方面任一项的用途,其中所述 药物包含锁阳药材 的提取物。

根据本发明第六方面任一项的用途,其中所述 的药物包含锁阳药 材以水、醇 (例如乙醇)、或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为提取溶剂的提取物。

根据本发明第六方面任一项的用途,其中所述 的药物包含锁阳药 材的提取物, 该提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混 合物 (例如 50-9 8 %乙醇, 例如 6 0%乙醇、 95 %乙醇)为溶剂提取, 并 依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取获得的。

根据本发明第六方面任一项的用途,其中所述 的药物包含锁阳药 材的提取物, 该提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混 合物 (例如 50_ 9 8%乙醇, 例如 6 0%乙醇、 95 %乙醇)为溶剂提取, 并 依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的石油醚萃取部 分、 氯仿萃取部分、 乙酸乙酯萃取部分、 或其混合物。 在一个实施方 案中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次 经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的石油醚萃取部分、 氯仿萃取部分、 和乙酸乙酯萃取部分的混合物。 在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物(例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油 醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的氯仿萃取部分和乙酸乙酯 萃取部分的混合物。 在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例 如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50_ 98 %乙醇, 例如 60%乙 醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正 丁醇萃取, 得到的乙酸乙酯萃取部分。 在一个实施方案中, 所述提取 物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50- 98 %乙 醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到的石油醚萃取部 分。在一个实施方案中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经石油 醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的乙酸乙酯萃取部分和石油 醚萃取部分的混合物。

根据本发明第六方面任一项的用途,其中所述 药物包含锁阳药材 的提取物, 该提取物中包含至少一种选自以下的成分: 大黄酚、 大黄 素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。在一个实施方案中,所述提取物中包 含以下的成分:大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-(?-葡萄糖 苷、 根皮苷。

根据本发明第六方面任一项的用途,其中所述 药物包含锁阳药材 的提取物, 该提取物中包含至少一种选自以下的成分: 儿茶素、 (-) 表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'- >-葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个 实施方案中, 所述提取物中包含以下的成分: 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'- -葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个实施方案 中, 所述提取物是以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混合物 (例 如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依次经 石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取, 得到的乙酸乙酯萃取部分。

根据本发明第六方面任一项的用途,其中所述 药物包含锁阳药材 的提取物,该锁阳的提取物是经如下步骤制备 的: 将锁阳用含水乙醇 溶液 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)提取; 使所得醇提 取物用石油醚萃取, 浓缩醚层得石油醚部分; 将石油醚萃取的残余物 用氯仿萃取, 浓缩氯仿层得氯仿部分;将氯仿萃取的残余物 用乙酸乙 酯萃取, 浓缩乙酸乙酯层得乙酸乙酯部分; 将乙酸乙酯萃取的残余物 用正丁醇萃取, 浓缩正丁醇层得正丁醇部分; 将上述石油醚部分、 氯 仿部分和乙酸乙酯部分合并, 得到提取物。 在一个实施方案中, 所述 锁阳提取物是上述石油醚部分、氯仿部分合并 得到的。在一个实施方 案中, 所述锁阳提取物是上述氯仿部分、 乙酸乙酯部分合并得到的。 在一个实施方案中,所述锁阳提取物是上述石 油醚部分、 乙酸乙酯部 分合并得到的。在一个实施方案中,所述锁阳 提取物是上述乙酸乙酯 部分。

在本发明第六方面任一项所述用途的一个实施 方案中,所述提取 物具有本发明第一方面、第二方面或第三方面 任一项中所述提取物的 特征。

本发明第七方面提供了锁阳提取物在制备作为 植物雌激素的药 物中的用途。

根据本发明笫七方面任一项的用途,其中所述 的药物可用于治疗 和 /或预防更年期综合征、 骨质疏松症、 退行性骨质疏松症、 心脑血 管疾病、 乳腺癌。

根据本发明第七方面任一项的用途,其中所述 药物的剂量为所述 哺乳动物每天每 kg体重相当于锁阳药材 0.01-10g, 优选 0.02-5g, 更 优选 0.05-lg, 再更优选 0.05-0.5g。

根据本发明第七方面任一项的用途,其中所述 提取物具有本发明 第二方面任一项所述提取物的特征。

本发明第八方面提供了选自下列成分的一种或 多种的组合在制 备作为植物雌激素的药物中的用途: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-) 表儿茶素 -3-0·没食子酸酯、 柑桔素 -4'- -葡萄糖苷、 根皮苷。

根据本发明第八方面任一项的用途,其中所述 的药物可用于治疗 和 /或预防更年期综合征、 骨质疏松症、 退行性骨质疏松症、 心脑血 管疾病、 乳腺癌。

根据本发明第八方面任一项的用途,其为下列 成分在制备作为植 物雌激素的药物中的用途:大黄酚、大黄素、 儿茶素、(-)表儿茶素 -3- - 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。

根据本发明第八方面任一项的用途, 其中所述大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3- -没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮 苷各自独立地具有本发明第三方面任一项所述 的特征。

本发明第九方面提供了一种用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例 如, 人)雌激素分泌不足相关的疾病的药物组合物 其中包含治疗和 / 或预防有效量的锁阳提取物以及任选的药学可 接受的赋形剂。

根据本发明第九方面任一项的药物组合物,其 中所述的锁阳提取 物中包含至少一种选自以下的成分: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-) 表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。

根据本发明第九方面任一项的药物组合物,其 中所述的锁阳提取 物中包含以下的成分: 大黄酴、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0- 没食子酸酯、 柑桔素 -4'- -葡萄糖苷、 根皮苷。

根据本发明第九方面任一项的药物组合物,其 中所述大黄酚、大 黄素、儿茶素、(-)表儿茶素 -3- -没食子酸酯、柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷的总量占所述提取物总重量的 l-90%(w/w), 优选 l~80%(w/w), 优选 2 ~ 50 %(w/w), 优选 2 ~ 40 %(w/w), 优选 2 〜 30 %(w/ ), 更优选 2 ~ 20 %(w/w

根据本发明第九方面任一项的药物组合物,其 中所述的药物组合 物给予所述哺乳动物的剂量为所述哺乳动物每 天每 k g 体重相当于锁 阳药材 0.01-10g, 优选 0.02-5g, 更优选 0.05-lg, 再更优选 0.05-0.5g。

根据本发明第九方面任一项的药物组合物,其 中所述的锁阳提取 物是经如下步骤制备的: 以水、 醇 (例如乙醇)、 或水-醇 (例如乙醇)混 合物 (例如 50-98%乙醇, 例如 60%乙醇、 95%乙醇)为溶剂提取, 并依 次经石油醚、氯仿、 乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到的石油醚萃取部 分、 氯仿萃取部分、 乙酸乙酯萃取部分、 或其混合物。

根据本发明第九方面任一项的药物组合物,其 中所述锁阳提取物 具有本发明第二方面任一项所述提取物的特征 。

本发明第十方面提供了一种用于治疗和 /或预防与哺乳动物 (例 如, 人)雌激素分泌不足相关的疾病的药物组合物 其中包含治疗和 / 或预防有效量的至少一种药物活性成分以及任 选的药学可接受的赋 形剂, 所述的药物活性成分选自: 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿 茶素 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-(?-葡萄糖苷、 根皮苷。

根据本发明第十方面任一项的药物组合物, 其中包含治疗和 /或 预防有效量的大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸 酯、 柑桔素 -4'- -葡萄糖苷、 根皮苷, 以及任选的药学可接受的赋形 剂。

根据本发明第十方面任一项的药物组合物, 其中包含治疗和 /或 预防有效量的儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0- 葡萄糖苷、 根皮苷, 以及任选的药学可接受的赋形剂。

根据本发明第十方面任一项的药物组合物,其 中所述大黄酚、大 黄素、儿茶素、(-)表儿茶素 -3- -没食子酸酯、柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷各自独立地具有本发明第三方面任一项 所述的特征。

本发明第十一方面提供了在有需要的受试者中 治疗和 /或预防与 雌激素分泌不足相关的疾病的方法,其包括给 所述受试者施用预防和 /或治疗有效量的锁阳。 在一个实施方案中, 所述锁阳是以药物的形 式给所述受试者施用的。在一个实施方案中, 所述药物具有本发明第 一方面任一项所述的特征。

本发明第十一方面还提供了在有需要的受试者 中治疗和 /或预防 与雌激素分泌不足相关的疾病的方法,其包括 给所述受试者施用预防 和 /或治疗有效量的本发明第二方面任一项所述 阳提取物。

本发明第十一方面还提供了在有需要的受试者 中治疗和 /或预防 与雌激素分泌不足相关的疾病的方法,其包括 所述受试者施用预防 和 /或治疗有效量的至少一种选自下列的活性成 选自: 大黄酚、 大 黄素、儿茶素、(-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷。 在一个实施方案中, 所述大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿 茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷各自独立地具 有本发明第三方面任一项所述的特征。

根据本发明第十一方面任一项的方法,其中所 述的与雌激素分泌 不足相关的疾病选自: 更年期综合征、 骨质疏松症、 退行性骨质疏松 症、 心脑血管疾病、 乳腺癌。

本发明任一方面或该任一方面的任一项所具有 的特征同样适用 于其它任一方面或该其它任一方面的任一项, 只要它们不会相互矛 盾, 当然在相互之间适用时, 必要的话可对相应特征作适当修饰。 在 本发明中, 例如, 提及"本发明第一方面任一项"时, 该"任一项 "是指 本发明第一方面的任一子方面;在其它方面以 类似方式提及时, 亦具 有相同含义。

下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描 述。

本发明所引述的所有文献, 它们的全部内容通过引用并入本文, 并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一 致时,以本发明的表述 为准。此外,本发明使用的各种术语和短语具 有本领域技术人员公知 的一般含义, 即便如此,本发明仍然希望在此对这些术语和 短语作更 详尽的说明和解释,提及的术语和短语如有与 公知含义不一致的, 以 本发明所表述的含义为准。

本文中使用的术语 "锁阳,,,符合 2005年版《中华人民共和国药典 一部》 "锁阳"项下的规定。

本文中使用的术语"约",其通常是指本领域允 的误差范围,例 如士 10%, 例: δ口 ±5%, 例如 ±2%。

如本文所述的,术语"有效量 "是指可在受试者中实现治疗、预防、 减轻和 /或緩解本发明所述疾病或病症的剂量。

如本文所述的, 术语"药物组合物", 其可以与 "组合物" 互换使 用, 并且可以指可用于在受试者中实现治疗、 预防、 减轻和 /或緩解 本发明所述疾病、 病症、 症状的物质。

如本文所述的,术语"受试者,,或 "患者",可以指接受本发明组合 物和提取物以治疗、 预防、 减轻和 /或緩解本发明所述疾病、 病症、 症状的动物, 特别是哺乳动物, 例如人、 狗、 猴、 牛、 马等。

如本文所述的,术语"疾病或症状"是指所述受 者的一种身体状 态, 该身体状态与本发明所述疾病或症状有关。

如本文所述的, "%", 如未特别指明, 对于总物料是固体时一般 是指重量 /重量的百分比, 对于总物料是液体时一般是指重量 /体积的 百分比。 当然, 对于总物料是液体并且溶盾是液体时, 表征该液态溶 质的百分比一般是指体积 /体积的百分比。对于描述乙醇时使用的%, 例如 95%乙醇, 其具有本领域公知的含义, 例如可参见 2005年版《中 华人民共和国药典二部》凡例中的定义。

本文中使用的短语"与雌激素分泌不足相关的 病"具有本领域 技术人员公知的含义,并且通常是指雌性哺乳 动物例如人特别是更年 期的女性因雌激素分泌不足而产生的一些疾病 或症状,这些疾病或症 状包括但不限于更年期综合征、 骨质疏松症、 退行性骨质疏松症、 心 脑血管疾病、 乳腺癌。

如本文所述的, 术语"提取物", 如未另外指明, 是指锁阳的 "提 取物"。

如本文所述的, 术语"儿茶素", 可以是指 (-)儿茶素、 (+)儿茶素、 或者外消旋的儿茶素。

如本文所述的,术语"石油醚部分"是指一种由 油醚处理(萃取) 获得的植物有效部位,亦可称为"石油醚部位" 其它类似术语例如 "乙 酸乙酯部分"亦具有类似含义, 即例如是通过液液萃取获得的植物有 效部位。

尽管本发明对所涉及的活性成分作了详细描述 ,本发明人仍然愿 意在此强调, 这些活性成分 (其包括, 但不限于, 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮 苷)具有本领域技术人员已知的化学结构、 物理化学性质。

根据本发明, 由于大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0- 没食子酸酯、柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、根皮苷 6种成分均具有相关的植 物雌激素作用, 因此这 6种成分或其部分在提取物、 药物、 组合物等 中的量 (例如, 各成分占总提取物、 药物、 组合物等重量的比率, 各 成分之间的比率, 等等)无需作特别限定, 药物的用药剂量可通过折 算成锁阳药材来计算。

分离得到的一系列化合物做雌激素受体激活实 验, 以雌二醇为 阳性对照组, 大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸 酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷均显示与雌激素受体激活有关。

可釆用制剂领域中的常规技术, 将锁阳的单一活性成分或其组 合或者含有锁阳中具有雌激素活性成分的锁阳 提取物与一种或多种 药学可接受的赋形剂混合, 并形成所需的剂型,来制备本发明的药物 组合物。

本发明药物组合物中使用的"药学可接受的赋 剂"可以是药物 制剂领域中任何常规的赋形剂。 特定赋形剂的选择将取决于用于治疗 特定患者的给药方式或疾病类型和状态。 用于特定给药模式的合适药 物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员 的知识范围内。 例如, 可以作为药学可接受的赋形剂包括药学领域常 规的稀释剂、载体、填 充剂、 粘合剂、 湿润剂、 崩解剂、 吸收促进剂、 表面活性剂、 吸附载 体和润滑剂等。 必要时, 还可以在药物组合物中加入香味剂、 防腐剂 和甜味剂等。

本发明的药物组合物可以制成片剂、 粉剂、 颗粒剂、 胶嚢、 口服 液、 膏剂、 霜剂、 注射乳剂 (注射用无菌粉针)等多种形式。 上述各种 剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制 备。

经研究表明,本发明所得到的化合物具有不同 程度的拟雌激素作 用。 因此, 可以预期本发明的所得到的化合物 (例如大黄酚、 大黄素、 儿茶素、 (-)表儿茶素 -3- -没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮 苷)或含有它的药物组合物可以用于治疗更年 综合征、 乳腺癌和 /或 心脑血管疾病。 或者, 本发明所得到的可用于制备药物, 该药物用于 治疗更年期综合征、 乳腺癌和 /或心脑血管疾病。

本发明利用细胞转染及萤光素酶报告基因化学 发光检测的方法, 探讨锁阳中十个单体化合物对 ERa和 ERP转录活性的影响, 从而说 明锁阳中哪些成分具有雌激素活性, 同时说明其作用靶点及作用途 径。 结果令人惊奇的发现, 四个黄酮类化合物 (儿茶素、 根皮苷、 柑 桔素- 4'-0-葡萄糖苷和 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯)具有强的雌激素 活性, 儿茶素(10· 5 Μ)和根皮苷 (10· 6 -10· 5 Μ)均可激动 ERot和 ΕΙ 转录 活性, 对受体亚型无明显选择性; 柑桔素 - 4'-0-葡萄糖苷 (10· 9 -10- 5 Μ) 可剂量依赖性地激动 ERot和 ΕΚβ转录活性, 对于 ΕΙ 的选择性强于 ERot;而 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯 (10· 8 -1(Γ 5 Μ)可激动 ERa和 ER , 转录活性以 1(Γ 7 Μ为最强, 并且对于 ERa的选择性强于 ERP。 黄酮 类化合物的雌激素活性约是雌二醇的 1/1000-1/10。 锁阳中两个蒽醌 类化合物, 大黄酚与大黄素在高浓度 10· 6 Μ能激活受体转录活性, 无 受体选择性, 其活性约是雌二醇的 1/1000-1/100。 具体实施方式

下面通过具体的实施例和实验例进一步说明本 发明, 但是, 应 当理解为, 这些实施例和实验例仅仅是用于更详细具体地 说明之 用, 而不应理解为用于以任何形式限制本发明。

本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法 进行一般性和 / 或具体的描述。 虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操 作方 法是本领域公知的, 但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。 本领 域技术人员清楚, 在下文中, 如果未特别说明, 本发明所用材料和 操作方法是本领域公知的。

实施例 1: 锁阳中四个黄酮类化合物和 2个蒽醌类化合物的制备

1、 提取物的制备

将 40.0 千克锁阳药材 (购自内蒙古阿拉善盟)粉碎成小块, 加入 400升 95%乙醇浸泡过夜。 回流提取 2小时, 倾出提取液, 药渣再加 入 400升 60%乙醇回流提取 2小时。 提取液合并后过滤, 旋蒸滤液 回收乙醇。 将浓缩所得残余物依次用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯和正丁 醇萃取, 分别回收溶剂后得固形物。 结果: 石油醚部分固形物 55 g, 氯仿部分固形物 229 g, 乙酸乙酯部分固形物 147 g, 正丁醇部分固形 物 867 g。 石油醚部分含大黄酚质量百分含量 0.082% ( WAV ), 氯仿 部分含大黄素 0.031% ( WAV ), 乙酸乙酯部分含儿茶素质量百分含 量 10.84% ( W/W ), 乙酸乙酯部分含柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷质量百分 含量 0.304% ( WAV ), 乙酸乙酯部分含 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯 质量百分含量 0.88% ( W/W ), 乙酸乙酯部分含根皮苷质量百分含量 0.28% ( W/W )。

2、 活性成分单体的制备

锁阳石油醚部分 55 g, 通过硅胶柱层析, 采取石油醚-乙酸乙酯 溶剂系统梯度洗脱, 3 ~ 4 流份经过石油醚重结晶处理, 得到橙红色 簇状结晶, 30m g , 经鉴定为大黄酚。

锁阳氯仿部分 229 g, 通过硅胶柱层析, 采取石油醚 -丙酮溶剂系 统梯度洗脱, 19 ~ 32流份通过羟丙基葡聚糖凝胶及氯仿 -曱醇溶剂系 统反复硅胶柱层析后,得到橙红色簇状结晶 35m g ,经鉴定为大黄素。 锁阳乙酸乙酯部分 147 g, 通过硅胶柱层析, 釆取氯仿-曱醇溶剂 系统梯度洗脱, 分别得到乙酸乙酯部分 27 ~ 42流份和乙酸乙酯部分 43 ~ 64流份。

乙酸乙酯部分 27 ~ 42 流份通过硅胶柱层析, 采用氯仿-曱醇-水 溶剂系统梯度洗脱。 得到的 27 ~ 42-4 ~ 6流份经石油醚 -乙酸乙酯溶 剂系统硅胶柱层析后, 得到白色簇状结晶 13g, 经鉴定为儿茶素 (外 消旋体)。 得到的 27 ~ 42-7 - 10流份经过硅胶柱层析以及反相硅胶柱 层析处理, 得到白色粉末 300m g , 经鉴定为柑桔素 -4 葡萄糖苷。 得到的 27 ~ 42-11 ~ 14 流份经过羟丙基葡聚糖凝胶及反相硅胶柱层 析, 得到灰白色粉末 lg, 经鉴定为 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯。

乙酸乙酯部分 43 ~ 64 流份通过氯仿 -曱醇溶剂系统进行聚酰胺 以及硅胶柱层析并结合羟丙基葡聚糖凝胶柱层 析,得到棕色针状结晶 200mg, 经鉴定为根皮苷。 实施例 2: 锁阳中 6个化合物结构确证

对实施例 1获得的 6个化合物 (即, 大黄酚、 大黄素、 儿茶素 (外 消旋体)、 (-)表儿茶素 -3-0-没食子酸酯、 柑桔素 -4'- -葡萄糖苷、 根 皮苷)进行了结构确认 (委托天津大学分析测试中心检测, 500MHz核 磁)。 分析结果显示这些化合物的结构与文献报道的 结构一致, 具体 如下。

大黄酚, 橙红色簇状结晶。 NMR (CDC1 3 , 500 MHz), δ: 7.09 (1H, br s, H-2), 7.64 (1H, br s, H-4), 7.81 (1H, br d, / = 7.5 Hz, H-5), 7.67 (1H, br d, = 8.0 Hz, H-6), 7.28 (1H, br d, = 8.5 Hz, H-7), 2.47 (3H, s, -CH 3 ), 12.00 (1H, s, -OH), 12.12 (1H, s, -OH) ; 13 C NMR (CDC1 3 ), δ: 162.6 (C-1), 124.8 (C-2), 149.6 (C-3), 121.6 (C-4), 124.6 (C-5), 137.1 (C-6), 120.1 (C-7), 162.9 (C-8), 192.7 (C-9), 182.1 (C-10), 133.8 (C-ll), 113.9 (C-12), 116.0 (C-13), 133.5 (C-14), 22.5 (-£ )。

大黄素,橙红色簇状结晶。 NMR (DMSO-i 6 , 500 MHz), δ: 7.06 (1H, d, = 2 Hz, H-2), 7.39 (1H, d, = 2 Hz, H-4), 7.03 (1H, d, = 3.0 Hz, H-5), 6.50 (1H, d, = 3.0 Hz, H-7), 2.36 (3H, s, C6-CH 3 )。 儿茶素 (夕卜消旋体),白色簇状结晶。 NMR (CD 3 OD, 500 MHz), δ: 4.56 (1H, d, = 7.5 Hz, H-2), 3.97 (1H, m, H-3), 2.85 (1H, dd, = 16.0, 5.5 Hz, H-4a), 2.50 (IH, dd, = 16.0, 8.0 Hz, H-4b), 5.93 (1H, d, /= 1.0 Hz, H-6), 5.86 (1H, br s, H-8), 6.84 (1H, br s, H-2'), 6.76 (1H, d / = 8.0 Hz, H-5'), 6.72 (1H, d, / = 8.5 Hz, H-6'). 13 C NMR (CD 3 OD, 500 MHz), δ: 81.7 (C-2), 67.6 (C-3), 27.3 (C-4), 99.8 (C-4a), 156.4 (C-5), 95.1 (C-6), 156.6 (C-7), 94.3 (C-8), 155.7 (C-8a), 131.0 (C-l'), 114.1 (C-2'), 145.1 (C-3'), 145.1 (C-4'), 114.9 (C-5'), 118.9 (C-6').样品 1.0 g/100 ml及 0.1 g/100 ml的甲醇溶液比旋光度均为零。

(-)表儿茶素 -3-0·没食子酸酯, 灰白色粉末。 NMR (CD 3 OD,

500 MHz), δ: 5.03 (lH, s, H-2), 5.53 (lH, s, H-3), 2.99 (IH, dd, = 17.5, 4.5 Hz, H-4a), 2.85 (IH, dd, = 17.0, 1.5 Hz, H-4b), 5.96 (IH, s, H-6), 5.96 (IH, s, H-8), 6.93 (IH, d, = 2.0 Hz, H-2'), 6.70 (IH, d, = 7.5 Hz, H-5'), 6.81 (IH, dd, = 8.0, 2.0 Hz, H-6'), 6.95 (2H, s, H-2"和 H-6 )。 13 C NMR (CD 3 OD, 500 MHz), δ: 78.5 (C-2), 69.9 (C-3), 26.8 (C-4), 99.4 (C-4a), 157.7 (C-5和 C-7), 96.5 (C-6), 95.8 (C-8), 157.2 (C-8a), 131.4 (C-l'), 115.0 (C-2'), 145.8 (C-3'和 C-4'), 116.0 (C-5'), 119.3 (C-6'), 121.3 (C-l"), 110.1 (C-2〃和 C-6"), 146.2 (C-3 "和 C-5"), 139.7 (C-4"), 167.6 (C-CO).

柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷, 白色粉末。 1 H-NMR (DMSO-i/ 6 , 500

MHz), δ: 5.52 (IH, dd, = 13, 3.0 Hz, H-2), 2.72-3.20 (2H, m, H-3), 5.88 (1H, d, = 1.5 Hz, H-6), 5.87 (1H, d, = 2.0 Hz, H-8), 7.42 (2H, d, /= 8.5 Hz, H-2'和 H-6'), 7.05 (2H, d, = 9.0 Hz, H-3'和 H-5'), 4.88 (1H, d, = 7.5 Hz,糖 H-l), 3.17-4.55 (6H, m,糖质子), 12.13 (1H, s, C 5 -OH)。

根皮苷,棕色针状结晶。 ^ NMR (CD 3 OD, 500 MHz), δ: 7.06 (2H d, = 8.5 Hz, H-2, 6), 6.68 (2H, d, /= 8.5 Hz, H-3, 5), 6.18 (IH, d, = 2.0 Hz, H-3'), 5.95 (IH, d, = 2.0 Hz, H-5,), 5.04 (IH, d, = 7.0 Hz, H-l"), 3.43-3.48 (3H, 重叠的, H-2,', 3", 5 "), 3.43 (IH, m, H-4"), 3.91 (IH, d, = 2.0, 12.5 Hz, H-6a"), 3.72 (1H, d, = 5.5, 12.5 Hz, H-6b',), 3.40 (2H, t, = 7.5 Hz, H-a), 2.88 (2H, t, = 7.5 Hz, H-P). 13 C NMR (CD 3 OD, 500 MHz), δ: 133.8 (C-l), 130.4 (C-2, 6), 116.1 (C-3, 5), 156.3 (C-4), 46.9 (C-a), 30.8 (C-β), 106.8 (C-l'), 162.3 (C-2'), 95.4 (C-3'), 165.9 (C-4'), 98.3 (C-5'), 167.5 (C-6'), 102.2 (C-l"), 74.7 (C-2"), 78.4 (C-3 ), 71.1 (C-4"), 78.4 (C-5"), 62.4 (C-6")。 实施例 3、 化合物对雌激素受体的激活作用

采用细胞转染的方法观察儿茶素、(-)表儿茶 没食子酸酯、 柑桔素 _4'- 葡萄糖苷、 根皮苷、 大黄素、 大黄酚对雌激素受体的选 择性激活。 实际上,雌激素正是通过调节雌激素反应基因 转录来显示 其生物活性。

将带有报告基因的 ER a 或 ERpDNA片段分别转染于无 ER表达 的 Hela细胞, 在细胞培养液中加入被测物后, 通过对报告基因转录 激活的检测观察被测物是否可通过 £1^或 ERp发挥雌激素样作用。

儿茶素、 (-)表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-0-葡萄糖苷、 根皮苷、 大黄素、 大黄盼 (分别得自实施例 1)样品液的配制:

分别精密称取儿茶素、 (-)表儿茶素 没食子酸酯、 柑桔素 -4'-(?-葡萄糖苷、根皮苷、 大黄素、 大黄盼相应质量后加入 DMSO溶 解, 对应得样品液高剂量组 (ΙΟμΜ或 1μΜ), 稀释一定倍数分别得到 低剂量组 (ΙμΜ至 0.001μΜ)。

乙酸乙酯部分和石油醚部分溶液的配制:

分别精密称取锁阳乙酸乙酯部分 (取自实施例所得 147g 的物料) 和石油醚部分 (取自实施例所得 55g的物料)相应质量加入 DMSO溶 解, 对应得样品液高剂量组(50ug/ml ), 稀释一定倍数分别得到低剂 量组 ( 5 ug/ml, 0.5 ug/ml和 0.05 ug/ml )。

在 37。C, 5%C0 2 的条件下, 在细胞培养箱中使用含有 10%小牛 血清的无酚红高糖 DMEM培养液培养 Hela细胞, 至细胞密度 90% 左右时将细胞按 60%密度铺于 96孔板中,每孔中加入含 10%血清的 无酚红 DMEM培养液 150ul, 培养过夜。 按 96孔板每孔 lOOul无血 清 DMEM培养基, 0.4 g质粒 (ptk-ERE-hic 2 g, tk-Renila lpg, ERa 或 ERp 1μ δ )进行转染。 转染 6个小时后, 每孔加入 150ul无血清无 酚红 DMEM培养液。 选取每组三个孔, 加入 10― 8M雌二醇 E 2 , 以及不同浓度的受试物 15ul/孔 (样品 4~5 个浓度梯度组), 37°C , 5%C0 2 条件下继续培养 24小时。 24小时后每孔加入 80μ1细胞裂解 液, 并冻融细胞一次以使其充分裂解。对每孔的细 胞裂解液分别测定 其对萤火虫萤光素酶及 Reiiila萤光素酶的活性。 每孔均用萤火虫萤 光素酶 / Renila萤光素酶值作为结果, 分别以各组中未加雌激素处理 的孔作为对照,计算加雌激素或被测物组相对 于对照组的比值,每组 三个孔取平均值。 结果见表 1、 表 2和表 3。

表 1、 锁阳石油醚部分和乙酸乙酯部分对 Hela 细胞中 ERa或 ERP转录活性的影响

从表中结果可见,本发明的提取物具有期望的 生物学活性。本领 域技术人员理解,虽然表中仅提供了乙酸乙酯 部分和石油醚部分的活 性, 但是可以预见在用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯和正丁醇萃取之前的 提取物以及用四种溶剂萃取后所得各有效部位 的任一种或几种组合 均预期具有期望的生物学活性。 表 2、 黄酮类化合物对 Hela细胞中 ERoc或 ERP转录活性的影响

表中, *P<0.05, **P<0.01 , 与对照比较 表 3、 蒽醌类化合物对 Hela细胞中 ERa或 ΕΚβ转录活性的影响

表中, *P<0.05, **P<0.01 , 与对照比较

雌激素主要通过雌激素受体 (ER)发挥其效应。研究已证实 ER广 泛存在于心血管系统、 成骨细胞、 破骨细胞、 乳腺及生殖系统等, 雌 激素对此有着广泛的治疗作用,而植物雌激素 是一种天然的选择性雌 激素受体调节剂,其机构与功能与雌激素相似 ,能与雌激素受体结合, 具有雌激素样的生物活性。研究结果显示,本 发明化合物可浓度依赖 性地激活雌激素受体, 我们研究证实锁阳中多成分能够与 ER结合, 提高其转录活性,证实其具有雌激素样作用。 也就预示着锁阳中儿茶 素、 表儿茶素没食子酸酯、 柑桔素葡萄糖苷、 根皮苷、 大黄素、 大黄 酚可以用于妇女更年期综合征、 骨质疏松症、 退行性骨质疏松症、 心 脑血管疾病。

本发明不仅仅局限于以上实施例,本领域技术 人员也可以根据本 发明的精神和范围获得本发明的其它变型实施 方案中 ,而不会脱离本 发明的精神和范围。