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Patent Searching and Data


Title:
NOVEL DISACCHARIDES WITH ANTI-ARTHRITIC ACTION
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2002/008239
Kind Code:
A1
Abstract:
The invention relates to novel disaccharides of formula (I), wherein R?1¿ is selected from the group consisting of hydrogen, linear or branched (C¿1?-C¿4?) alkyl, phenylalkyl with less than ten carbon atoms and -COCH¿3?; R?2¿ is selected from the group consisting of hydrogen, - COCH¿3? and SO¿3?M; R?3¿ is selected from the group consisting of hydrogen, linear or branched (C¿1?-C¿4?) alkyl, phenylalkyl with less than ten carbon atoms, - COCH3 and y -COPh, Ph being phenyl; G is selected from amongst - COOR?4¿ and -COOM, R?4¿ is selected from the group consisting of hydrogen, (C¿1?-C¿2?)-alkyl and arylalkyl with less than sixteen carbon atom; A is selected from the group consisting of hydrogen, -SO¿3?H, -SO¿3?M and -COCH¿3?; B is selected from the group consisting of hydrogen, -SO¿3?H, -SO¿3?M and -COCH¿3?, wherein either A or B are necessarily either -SO¿3?H or -SO¿3?M, M being a an organic or metallic cation. Said compounds can be used as anti-arthritic agents, anti-inflammatory agents or to control blood coagulation.

Inventors:
VILA PAHI FRANCISCO JAVIER (ES)
FLORES SALGADO FRANCESC (ES)
RUHI ROURA RAMON (ES)
ARNAU PASTOR NARCIS (ES)
Application Number:
PCT/ES2001/000265
Publication Date:
January 31, 2002
Filing Date:
July 05, 2001
Export Citation:
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Assignee:
BIOIBERICA (ES)
VILA PAHI FRANCISCO JAVIER (ES)
FLORES SALGADO FRANCESC (ES)
RUHI ROURA RAMON (ES)
ARNAU PASTOR NARCIS (ES)
International Classes:
A61P7/02; A61P29/00; C07H3/06; C07H7/033; C07H11/00; (IPC1-7): C07H3/04; A61K31/7016; A61P29/00; A61P7/02
Domestic Patent References:
WO2000061592A12000-10-19
WO2000047163A22000-08-17
WO1993009766A11993-05-27
Foreign References:
EP0211610A21987-02-25
EP0704216A11996-04-03
Other References:
JACQUINET J.C. ET AL.: "Multigram syntheses of the disaccharide repeating units of chondroitin 4- and 6-sulfates", CARBOHYDRATE RESEARCH, vol. 314, no. 3-4, 1998, pages 283 - 288, XP004166165
JACQUINET J.C.: "Syntheses of the methyl glycosides of the repeating units of chondroitin 4- and 6-sulfate", CARBOHYDRATE RESEARCH, vol. 199, no. 2, 1990, pages 153 - 181, XP002909681
TAKANASH ET AL.: "The synthesis of hyalobiuronic acid and chondrosine", J. AMER. CHEM. SOC., vol. 84, 1962, pages 3029, XP002909682
GECIOVA R. ET AL.: "Physico-chemical properties of hyaluronan and its hydrophobic derivatives: a calorimetric and viscometric study(a)", MACROMOL. CHEM. PHYS., vol. 196, 1995, pages 2891 - 2903, XP002909683
Attorney, Agent or Firm:
Sugrañes Moline, Pedro (304, Barcelona, ES)
Sugrañes-verdonces-ferregüela (304, Barcelona, ES)
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Claims:
REIVINDICACIONES
1. Nuevos disacáridos con acción antiartrósica, carac terizados porque son de fórmula (I), en la que : R1 se selecciona del grupo constituido por : hidró geno, (C1C4)alquilo lineal o ramificado, fenilalquilo de menos de diez átomos de carbono yCOCH3 ; R2 se selecciona del grupo constituido por : hidró geno,COCH3 y S03M ; R3 se selecciona del grupo constituido por : hi drógeno, (C1C4)alquilo lineal o ramificado, fenilal quilo de menos de diez átomos de carbono,COCH3 yCOPh, siendo Ph fenilo; G se escoge de entreCOOR yCOOM, seleccionán dose R4 del grupo constituido por : hidrógeno, (C1C2) alquilo y arilalquilo de menos de dieciséis átomos de carbono; A se selecciona del grupo constituido por : hidró geno, SO3H, SO3M yCOCH3 ; y B se selecciona del grupo constituido por : hidró geno, SO3H, SO3M, yCOCH3, en donde necesariamente o A o B es o bien SO3H, o bien SO3M, y siendo M un catión organic o metálico ; así como sus solvatos y sus sales farmacéuticamente aceptables.
2. Compuesto según la reivindicación 1, donde G es COOR4, oCOOM, siendo R (ClC2)alquilo, o arilalqui lo de menos de dieciséis átomos de carbono y M un ca tiónmetálico.
3. Compuesto según la reivindicación 2, donde R1 es hi drógeno, R2 es COCH3 y R3 es hidrógeno.
4. Compuesto según la reivindicación 2, donde R1 es me tilo, R2 esCOCH3 y R3 es hidrógeno.
5. Compuesto según la reivindicación 3 ó la reivindica ción 4, donde A es hidrógeno y B es SO3M, siendo M un catión metálico.
6. Compuesto según la reivindicación 3 ó la reivindica ción 4, donde A es SO3M y B es hidrógeno, siendo M un catión metálico.
7. Compuesto según la reivindicación 3 ó la reivin dicación 4, donde A y B son SO3M, siendo M un catión metálico.
8. Compuesto según las reivindicaciones anteriores, donde M es el catión sodio.
9. Compuesto según la fórmula I de la reivindicación 1, seleccionado de entre los siguientes : metil 2acetamido2desoxi3O (PDglucopiranosil uró nico)6OsulfoaDglucopiranósido, sal disódica ; metil 2acetamido2desoxi3O(ßDglucopiranosil uró nico)40sulfoaDglucopiranósido, sal disódica ; metil 2acetamido3desoxi3O(ßDglucopiranosil uró nico)4,6diOsulfoaDglucopiran6sido, sal trisódi ca ; 2acetamido2desoxi30 (PDglucopiranosil urónico) 60sulfoDglucopiranosa, sal disódica ; 2acetamido2desoxi3O(ßDglucopiranosil urónico) 40sulfoDglucopiranosa, sal disódica ; 2acetamido2desoxi3O(ßDglucopiranosil urónico) 4,6diOsulfoDglucopiranosa, sal trisódica.
10. Procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula general (I), definido en la reivindicación 1, caracterizado porque : a) se hace reaccionar un monosacárido de fórmula (II), donde R5 representa un grupo reactivo que permita esta blecer una unión ß(1#3) con el hidroxilo libre del monosacárido de fórmula (III), R6 puede ser equivalente al grupo R4 en (I) o bien ser un grupo protector de grupos carboxilos que se pueda eliminar posteriormente, P1, P2 y P3 representan grupos protectores de hidroxi los que se puedan eliminar posteriormente o bien pueden ser equivalentes a R3 en (I), con un monosacárido de fórmula (III), donde R7 puede ser equivalente a RI en (I) o bien puede ser un grupo que puede coincidir o no con R1, y poste riormente eliminarse para que R1 = H en (I), r8 puede ser un grupo equivalente a R2 en (I) o bien un grupo protector de grupos amino, P4 y P5 pueden ser grupos protectores, pudiendo conjuntamente constituir un grupo protector cíclico, o bien P4 o P5 pueden ser acetilo, en cuyo caso P4 será equivalente a B o P5 será equiva lente a A, para formar un disacárido intermedio de fór mula (IV), b) se desprotege selectivamente el disacárido interme dio de fórmula (IV) para obtener el disacárido interme dio de fórmula (V), donde PI, P2, P3, R6, R7 y R8 representan los grupos an tes descritos ; c) se procede a la introducción del grupo o grupos sulfato en el anillo de glucosamina, y en el caso de proceder a la Osulfonación en el C4 del anillo de glucosamina, el alcohol primario de la posición 6 se puede proteger, por ejemplo con un grupo acetilo (en cuyo caso se obtendrá CH2OP5, siendo P5=acetilo), y a continuación se procede a la Osulfonación del hidroxi lo libre en el C4, mientras que en el caso de llevar a cabo la Osulfonación del hidroxilo en C6 del anillo de glucosamina, se parte del disacárido intermedio de fórmula (V), pudi(ndose conseguir la obtención del de rivado disulfatado (en C4 y en C6) por ajuste de las condiciones de reacción ; d) una vez introducidos los grupos sulfato en C4 y/o en C6, si los grupos P p2, p2, p4 P5, R6, R7y R8 no son equivalentes a los correspondientes grupos en la fórmula (I), se procede a la desprotección total o se lectiva para obtener los compuestos de fórmula (I) y cuando se requiera, después de la desprotección se pro cede a la reacción posterior del grupo o grupos para obtener los compuestos de fórmula (I).
11. Utilización de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la preparación de un medica mento para el tratamiento de la artrosis.
12. Utilización de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en la preparación de un medica mento para el tratamiento de enfermedades de tipo in flamatorio.
13. Utilización de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en la preparación de un medica mento para controlar la coagulación sanguine.
14. Procedimiento para preparar un medicamento eficaz en la prevención o tratamiento de la artrosis, de las enfermedades inflamatorias y de la coagulación sanguí nea, comprendiendo dicho procedimiento la etapa de la mezcla de un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I).
Description:
NUEVOS DISAC#RIDOS CON ACCIÓN ANTIARTRÓSICA La presente invención se refiere a nuevos disacá- ridos, a sus sales y solvatos farmacéuticamente acepta- bles, y a las composiciones farmacéuticas que los con- tienen. De igual modo, la presente invención se refiere a un procedimiento para la preparación de los nuevos disacáridos, así como a su utilización terapéutica.

ESTADO DE LA TÉCNICA RELATIV A LA INVENCIÓN La artrosis (osteoartritis) es la enfermedad reu- mática articular más común que afecta a la mayoría de las personas a partir de los 65 años de edad, y que se caracteriza por una paulatina degradación del tejido cartilaginoso, unida a la presencia de inflamación y dolor. El térimino artrosis describe un cuadro en el que se produce la destrucción del cartílago hialino dé las articulaciones.

Actualmente, la terapia se centra en el alivio de los síntomas, ya que hasta el momento no se ha encon- trado ningún agente que ofrezca una reducción probada de la progresión del deterioro del cartílago, si bien existen algunas evidencias clínicas para el condroitín sulfato y el ácido hialurónico.

Las sustancias de acción sintomática comprenden : las que actúan de forma rápida como los analgésicos, antiinflamatorios no esteroideos (AINE) y los corticoi- des, y las que actúan de forma algo más lenta conocidas como SYSADOA (Symptomatic slow acting drug for os- teoarthritis (Fármacos con acción sintomática lenta pa- ra el tratamiento de la artrosis)) (M. G. Lequesne, Rev.

Rhum. (Eng./Ed.), 61,69-73 (1994)), entre las que se

encuentran el ácido hialurónico, el condroitín sulfato y el sulfato de glucosamina.

Los fármacos con acción sintomática lenta presen- tan como ventajas adicionales una mayor seguridad en comparación con los AINE (E. Maheu, European Journal of Rheumatology and Inflammation, 15, 17-24 (1995)), y una acción mrs prolongada, incluso durante algunos meses después de la supresión del tratamiento.

Recientemente, ensayos clinics realizados con ácido hialurónico (V. Listrat et al., Osteoarthritis Cart., 5, 153-160 (1997)) y con condroitín sulfato (G.

Verbruggen et al., Osteoarthritis Cart., 6 (Supplement A), 37-38 (1998)) han puesto en evidencia por primera vez la posibilidad de que ambos compuestos además de actuar como SYSADOA puedan influir en el curso de la enfermedad artrósica, frenando o retrasando la enferme- dad (agentes condroprotectores).

El ácido hialurónico es un glicosaminoglicano no sulfatado de origen natural, con una estructura polimé- rica constituida por disacáridos de N-acetilglucosamina y ácido glucurónico.

El ácido hialurónico se extrae de órganos y/o te- jidos de animales mamífero. Un conocido problema radica en que, dependiendo del procedimiento de obtención, el peso molecular del producto obtenido puede variar, lo cual unido a que su procedencia puede ser distinta, ha- ce que existan varios ácidos hialurónicos que pueden o no tener los mismos efectos clinics.

Los disacáridos de la presente invención están es- tructuralmente relacionados con los dímeros presentes en la estructura polimérica del ácido hialurónico, en cuanto a que se trata de disacáridos con uniones ß-(1#3) entre el ácido glucurónico y la glucosamina,

pero en los disacáridos de la presente invención está presente siempre un grupo sulfato en el C-4 y/o en el C-6 del anillo de glucosamina.

En la bibliografía han sido descritos algunos com- puestos que se pueden considerar también relacionados estructuralmente con los compuestos de la presente in- vención.

J. R. Couchman et al. (EP 211610) dan a conocer disacáridos esterificados, pero que difieren de los compuestos de la presente invención en la naturaleza del radical alquilo del grupo ester (-COOR'). Además dichos compuestos difieren también de los de la presen- te invención en que son útiles para estimular el creci- miento del cabello y para el tratamiento de la calvi- cie.

Los disacáridos que se repiten en la estructura del condroitín sulfato, tanto el derivado sulfatado en la posición 4 como en la posición 6 de la N- acetilgalactosamina son asequibles comercialmente, y se obtienen por degradación de los polímeros naturales o por síntesis química (J. C. Jacquinet, Carbohydrate Re- search, 199, 153-181 (1990); J. C. Jacquinet et al., Carbohydrate Research, 314,283-288 (1998), pero difie- ren de los compuestos de la presente invención por con- tener galactosamina en lugar de glucosamina. Hasta el momento no se ha encontrado descrita la actividad bio- lógica de dichos disacáridos.

Por todo lo dicho se desprende que la obtención de nuevos compuestos para el tratamiento de la artrosis y de los síntomas que conlleva, como son la inflamación y el dolor, es todavía un problema de la terapéutica.

EXPLICACIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona nuevos disacári- dos de fórmula (I), en la que : RI se selecciona del grupo constituido por : hidró- geno, (C1-C4)-alquilo lineal o ramificado, fenilalquilo de menos de diez átomos de carbono y-COCH3 ; R2 se selecciona del grupo constituido por : hidró- geno,-COCH3 y S03M ; R3 se selecciona del grupo constituido por : hi- drógeno, (C1-C4)-alquilo lineal o ramificado, fenilal- quilo de menos de diez átomos de carbono,-COCH3 y-COPh, siendo Ph fenilo; G se escoge de entre-COOR y-COOM, seleccionán- dose R4 del grupo constituido por : hidrógeno, (C1-C2) - alquilo y arilalquilo de menos de dieciséis átomos de carbono; A se selecciona del grupo constituido por : hidró- geno,-S03H,-S03M y-COCH3 ; y B se selecciona del grupo constituido por : hidró- geno,-S03H,-S03M, y-COCH3,

en donde necesariamente o A o B es o bien -SO3H, o bien -SO3M, y siendo M un catión organic o metálico.

Tambián son objeto de la presente invención los solvatos y las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I).

Los compuestos de fórmula (I) poseen un carbono anomérico en su estructura. La presente invención in- cluye las formas anoméricas a yß, así como sus mez- clas.

En una realización preferida, los compuestos de fórmula (I) son aquellos donde : G es -COOR4, o -COOm, siendo R4 (C1-C2)-alquilo, o arilalquilo de menos de dieciséis átomos de carbono, y M un catión metálico.

Más preferidos son los compuestos de fórmuls (I) donde: R1 es hidrógeno, R2 es -COCH2 y R3 es hidróge- no. Igualmente preferidos son los compuestos de fórmula (I) donde : R1 es metilo, R2 es -COCH3 y R es hidróge- no.

Aún más preferidos son los compuestos de fórmula (I) donde A es hidrógeno y B es-S03M, o donde A es -S03M y B es hidrógeno, o donde A y B son -SO3M, siendo M un catión metálico.

Son especialmente preferidos los compuestos de fórmula (I) donde : M es el catión sodio.

En particular son realizaciones especialmente pre- feridas de la presente invención aquéllas en las que los compuestos de fórmula (I) son alguno de los si- guientes : metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (P-D-glucopiranosil uró- nico)-6-0-sulfo-a-D-glucopiranósido, sal disódica ;

metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (P-D-glucopiranosil uró- nico)-4-0-sulfo-a-D-glucopiranósido, sal disódica ; metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (P-D-glucopiranosil uró- nico)-4,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranósido, sal trisódi- ca ; 2-acetamido-2-desoxi-3-O-(ß-D-glucopiranosil urónico)- 6-0-sulfo-D-glucopiranosa, sal disódica ; 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (P-D-glucopiranosil urónico)- 4-0-sulfo-D-glucopiranosa, sal disódica ; 2-acetamido-2-desoxi-3-O-(ß-D-glucopiranosil urónico)- 4,6-di-O-sulfo-D-glucopiranosa, sal trisódica Otra realización de la presente invención es un procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (I).

Según la presente invención, los compuestos de fórmula general (I) se obtienen a partir de un procedi- miento caracterizado porque se hace reaccionar un mono- sacárido de fórmula (II), donde R5 representa un grupo reactivo que permita esta- blecer una unión ß-(1#3) con el hidroxilo libre del monosacárido de fórmula (III), R6 puede ser equivalente al grupo R4 en (I) o bien ser un grupo protector de grupos carboxilos que se pueda eliminar posteriormente,

P1, P2 y P3 representan grups protectors de hidroxi- los que se puedan eliminar posteriormente, o bien pue- den ser equivalentes a R3 en (I), con un monosacárido de fórmula (III), donde R7 puede ser equivalente a R1 en (I) o bien puede ser un grupo que puede coincidir o no con R1, y poste- riormente eliminarse para que R1 = H en (I), R8 puede ser un grupo equivalente a R2 en (I) o bien un grupo protector de grupos amino, P4 y P5 pueden ser grupos protectors, pudiendo conjuntamente constituir un grupo proector cíclico, o bien P4 o P5 pueden ser acetilo, en cuyo caso P4 será equivlente a B o P5 será equiva- lente a A, para formar un disacárido intermedio de fór- mula (IV) : Cuando el grupo reactivo R5 en (II) es Br, enton- ces la reacción entre (II) y (III) se puede llevar a

cabo, por ejemplo, en el seno de un disolvente organic apropiado, preferiblemente diclorometano, a una tempe- ratura adecuada, preferiblemente a temperatura ambien- te, y en presencia de un catalizador como por ejemplo triflato de plata, pudiendo estar presente también un aceptor de protones.

Cuando el grupo reactivo R5 en (II) es -0-C (=NH) -CCl3, la reacción de condensación entre el a- imidato (II) y el alcohol (III) se puede llevar a cabo en presencia de triflato de trimetilsililo, en el seno de un disolvente orgánico apropiado, por ejemplo diclo- rometano, y preferiblemente a temperatura ambiente.

Preferiblemente, los grupos P1, P2 y P3 represen- tan grupos pivaloílo, benzoílo, acetilo o bencilo.

Los grupos Pu y P5 representan preferiblemente un grupo protector cíclico como bencilideno, que proviene de la reacción de los hidroxilos 4 y 6 del anillo de glucosamina con el benzaldehido.

El grupo R6 representa preferiblemente metilo.

El grupo R representa preferiblemente metilo o bencilo.

El grupo R8 representa preferiblemente acetilo, tricloroacetilo o benciloxicarbonilo (BOC).

El disacárido intermedio de fórmula (IV) se des- protege selectivamente. Por ejemplo, en el caso de que los hidroxilos 4 y 6 del anillo de glucosamina se en- cuentren protegidos en forma de acetal, el disacárido de fórmula (IV) se puede tratar por ejemplo con etano- tiol/diclorometano en presencia de ácido p- toluenosulfónico, obteniéndose el disacárido intermedio de fórmula (V),

donde P1, P2, P3, R6, R y R representan los grupos an- tes descritos.

A partir del disacárido intermedio de fórmula (V) se pueden introducir sucesivamente los grupos funciona- les deseados.

Por ejemplo, para llevar a cabo la O-sulfonación en el C-4 del anillo de glucosamina, el alcohol prima- rio de la posición 6 se puede proteger por ejemplo con un grupo acetilo (en cuyo caso se obtendrá CH20P5, siendo P5=acetilo), mediante la adición de anhídrido acético en el seno de un disolvente apropiado como por ejemplo piridina, y a una temperatura por debajo de 0°C, o con un grupo benzoílo, llevando a cabo la reac- ción con por ejemplo cianuro de benzoílo en el seno de, por ejemplo, piridina, y a continuación el hidroxilo libre en el C-4 se puede hacer reaccionar con, por ejemplo, el complejo trióxido de azufre-trimetilamina (S03-NMe3) en el seno de por ejemplo N, N- dimetilformamida y a una temperatura adecuada, preferi- blemente comprendida entre 40 y 60°C.

Si se desea llevar a cabo la O-sulfonación del hi- droxilo en C-6 del disacárido intermedio de fórmula (V), se procede al tratamiento con por ejemplo el com- plejo trióxido de azufre-trimetilamina (S03-NMe3) en el seno de por ejemplo N, N-dimetilformamida, con lo que se

puede obtener mayoritariamente el derivado sulfatado en C-6, junto con una menor proporción del derivado disul- fatado. Ajustando las condiciones de reacción se puede conseguir aumentar la proporción del derivado disulfa- tado (en C-4 y en C-6 del anillo de glucosamina).

Una vez introducidos los grupos sulfato en C-4 y/o en C-y del anillo de glucosamina, si los grupos P1, P2, P, P, P, R, R y R no son equivalentes a los co- rrespondientes grupos en la fórmula (I), se procederá a la desprotección total o selectiva para obtener los compuestos de fórmula (I), y cuando se requiera, des- pués de la desprotección se procederá a la reacción posterior del grupo o grupos para obtener los compues- tos de fórmula (I).

Por ejemplo, si se desea obtener un compuesto de fórmula (I) en el que R2 sea S03M, una vez introducido el grupo sulfato en C-4, o en C-6, o en C-4 y C-6, en el caso de que R8 sea por ejemplo benciloxicarbonilo (BOC), se procederá a una hidrogenolisis, para poste- riormente hacer reaccionar a pH básico el grupo amino obtenido con por ejemplo el complejo trióxido de azu- fre-trimetilamina.

Si se desea obtener un compuesto de fórmula (I) en el que RI sea hidrógeno, se puede partir de otro com- puesto de fórmula (I) en el que R1 sea bencilo, y pos- teriormente proceder a su desbencilación mediante hi- drogenolisis, utilizando por ejemplo Pd-C en presencia de un disolvente adecuado como por ejemplo metanol acuoso.

Para ilustrar el procedimiento descrito, en los Esquemas 1 y 2 se muestran las secuencias sintéticas para obtener algunos compuestos de fórmula (I).

ESQUEMA 1

ESQUEMA 2 Asimismo, para ilustrar también el procedimiento descrito, en el Esquema 3 se muestra la secuencia sin- tética para obtener algunos compuestos de fórmula (I) en los que R1 sea hidrógeno o bencilo.

ESQUEMA 3 El monosacárido de partida de fórmula (II) se pue- de obtener partiendo del compuesto comercial D-

glucurono-3,6-lactona de fórmula (IX), mediante una se- cuencia de reacciones bien conocidas en la química de carbohidratos.

Para ilustrar dicha secuencia, en el Esquema 4 se muestra la obtención del compuesto de fórmula (IIa) (II con R5 = -O-C (=NH) -CCl3, P1, P2 y P3 = pivaloílo y R6 = metilo) cuya síntesis se describe en los Ejemplos.

ESQUEMA 4 El monosacárido de partida de fórmula (III) se puede obtener a partir del compuesto comercial clorhi- drato de D-glucosamina de fórmula (XII), mediante una serie de reacciones de protección selectiva de los hi- droxilos.

Para ilustrar dicha secuencia sintética, en el Es- quema 5 se muestra la obtención del compuesto de fórmu- la (IIIa) (III con P4 y P5 = bencilideno, R7 = metilo y R8 = acetilo) cuya síntesis se describe en los Ejemplos.

Si lo que se desea es que R7 = benmcilo, entonces se puede proceder a la bencilación del hidroxilo anomé- rico del compuesto (XIIIa) con alcohol bencílico, en presencia de cloruro de hidrógeno gaseoso, y a una tem- peratura comprendida entre, por ejemplo, 50 y 80°C.

ESQUEMA 5 Otro aspecto de la presente invención es su utili- dad en terapia humana, encontrando aplicación en la prevención o en el tratamiento de la artrosis (osteoar- tritis), y de enfermedades inflamatorias como la artri- tis inflamatoria, la artritis reumatoide, la artritis psoriática, la fiebre reumática, el reumatismo palin- drómico, el síndrome de Reiter, el lupus eritomatosus y la espondilitis anquilosante.

Los compuestos de la presente invención también se pueden utilizar para controlar la coagulación sanguí- nea.

La presente invención se refiere también a un pro- cedimiento para preparar un medicamento eficaz en la prevención o tratamiento de la artrosis, de las enfer- medades inflamatorias y de la coagulación sanguine, comprendiendo dicho procedimiento la etapa de la mezcla de un vehículo farmacéuticamente aceptable y una canti- dad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I)- Para utilizar terapéuticamente los compuestos de la presente invención, éstos son formulados en composi- ciones farmacéuticas adecuadas, recurriendo a técnicas y excipientes convencionales, como los descritos en Re- mington's Pharmaceutical Science Handboock, Mack Pub.

Co., N. Y., USA.

Las nuevas composiciones farmacéuticas de la in- vención pueden administrarse al paciente en dosis ade- cuadas. La administración de las composiciones puede efectuarse por diferentes vías, por ejemplo, oral, in- travenosa, intraperitoneal, intraarticular, subcutánea, intramuscular, tópica, intradermal o intranasal. Las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención, dependiendo dicha cantidad de muchos fac- tores, como por ejemplo, el estado físico del paciente, edad, sexo, compuesto particular, via de administración y de otros factores bien conocidos en la técnica. Ade- más, se entendra que dicha dosificación de compuesto activo puede administrarse en unidades de dosis única o múltiple para proporcionar los efectos terapéuticos de- seados. Si se desea, pueden emplearse otros agentes te- rapéuticos junto con los proporcionados por la presente invención.

Los compuestos de la invención se administran pre- feriblemente al paciente por medio de un vehículo far- macéuticamente aceptable. Dichos vehículos son bien co- nocidos en la técnica y generalmente estarán en forma sólida o liquida. Entre las preparaciones farmacéuticas en forma sólida que pueden prepararse de acuerdo con la presente invención se incluyen polvos, minigránulos (pellets), comprimidos, granulos dispersables, cápsu- las, sellos, supositorios y otras formas galénicas só- lidas. Entre las preparaciones en forma liquida se in- cluyen soluciones, suspensiones, emulsiones y microes- feras. Se contemplan tambi(n las preparaciones de for- mas sólidas que se desean convertir, inmediatamente an- tes de ser utilizadas, en preparaciones en forma líqui- da para la administración por via oral, parenteral o intraarticular. Dichas formas liquidas incluyen solu- ciones, suspen. siones y emulsiones.

Una ventaja de la presente invención respecto a los glicosaminoglicanos como el ácido hialurónico radi- ca en que, debido a que es un producto sintético, no existen limitaciones de producción.

DESCRIPCI#N DETALLADA DE LAS REALIZACIONES PREFERIDAS Los siguientes ejemplos no son limitativos e ilus- tran la preparación de los compuestos de la presente invención.

Ejemplo 1 : Metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (P-D- glucopiranosil urónico)-6-O-sulfo-α-D-glucopiranósido, sal disódica (Ib)

1A Metil 1,2,3,4-tetra-O-pivaloil-ß-D-glucopiranosil- uronato (Xa) A una solución 0,01 M de hidróxido de sodio en metanol (400 ml) se añade D-glucurono-3,6-lactona (60 g, 0,288 mmol), y la mezcla se agita durante 1 h a temperatura ambiente. Al cabo de este tiempo la disolución amarilla se concentra y el residuo se disuelve en una mezcla de piridina (500 ml) y cloroformo (100 ml) y se enfría a 0°C. Se adiciona a continuación lentamente cloruro de pivaloílo (284 ml, 2,30 mmol) con agitación, y la agi- tación se mantiene durante 6 días a temperatura ambien- te. La mezcla se extrae con CH2Cl2 (3x200 ml) y los ex- tractos orgánicos se secan con MgS04 y se concentra al vacío. El crudo se purifica por cromatografía en colum- na (hexano/AcOEt 12 : 1), obteniéndose 102,5 g del pro- ducto del título (65% de rdto.) R. M. N. 1H (500 MHz, CDC13) 8ppm : 5,736 (d, 1H, J12 = 8Hz, H-1), 5,403 (t, 1H, J34 = J45 = 9, 5Hz, H-3), 5,249 (m, 2H, H-2, H-4), 4,16 (d, 1H, J45 = 10Hz, H-5), 3,70 (s, 3H, COOMe), 1,16,1,11,1,10 (3s, 36H, 4-OPiv).

1B Metil 2,3,4-tri-O-pivaloil-D-glucopiranosiluronato (XIa) Una solución de metil 1,2,3, 4-tetra-O-pivaloil-ß-D- glucopiranosiluronato (40 g, 73,44 mmol) y acetato de hidrazinio (13,53 g, 146,9 mmol) se disuelve en DMF se- ca (120 ml) y se mantiene en agitación durante 2 h a temperatura ambiente. La mezcla se diluye con acetato de etilo (100 ml) y se lava con agua (3x100 ml), los extractos orgánicos se secan con MgSO4 y se concentran al vacío. El residuo resultante se purifica por croma- tografía en columna (hexano/AcOEt 3 : 1) para dar 25,5 g

(75% de rdto.) del compuesto del título y un 20% de producto de partida.

R. M. N. 1H (500 MHz, CDC13) 8ppm : ß-5, 40 (t, 1H, J34 = = 9,5hz, H-3), 5,23 (t, 1H, J45 = J34 = 10Hz, H-4), 4,93 (dd, 1H, J12-= 8Hz, J23 9, 5Hz, H-2), 4,75 (d, 1H, J12 = 8Hz), 4,1 (d, 1H, J34 = 10Hz H-5), a-5, 48 (d, 1H, J12 = 3, 5Hz, H-1), 5,19 (t, 1H, J45 = J43 = 10Hz, H-4), 4,85 (dd, 1H, J12 = 3,5Hz, J23 = 10Hz, H-2), 4,56 (d, 1H, J54 = 1-0Hz, H-5), 3,67 (s, 6H, 2COOMe), 1,0 y 1,3 (3s, 40H, 6-OPiv).

1C Metil (2,3,4-tri-O-pivaloil-D-glucopiranosil triclo- roacetimidato) uronato (IIa) A una solución de metil 2,3,4-tri-O-pivaloil-D- glucopiranosiluronato (22 g, 47,76 mmol) en CH2Cl2 seco (40 ml) y tricloroacetonitrilo (72 ml, 716,45 mmol) se le añade 1, 8-diazabiciclo (5.4.0) undec-7-eno (0,5 ml) y la mezcla se agita durante 30 minutos a temperatura am- biente, después de lo cual se concentra al vacío. El residuo se purifica por cromatografia en columna de gel de silice (hexano/AcOEt 5 : 1 con 1% de NEt3) para dar 22,5 g del compuesto del título (87% de rdto.).

R. M. N. 1H (500 MHz, CDClg) 8ppm : 8,69 (s, 1H, NH), 6,58 (d, 1H, J12 = 3,5Hz, H-1), 5,63 (t, 1H, J32 = J34 = lOHz, H-3), 5,24 (t, 1H, J43 = J45 = 10Hz, H-4), 5,12 (dd, 1H, J21 = 3, 5Hz, J23 = 10Hz H-2), 4,42 (d, 1H, J45 -lOHz, H-5), 3,62 (s, 3H, COOMe), 1,12,1,11,1,07 (3s, 27H, 3-OPiv).

1D N-Acetilglucosamina (XIIIa)

D-glucosamina clorhidrato (100 g, 0,46 mol) se añade a una solución 0,6M de MeONa/MeOH y se deja en agitación durante 5 minutos. A continuación se añade anhídrido ac(tico (48 ml) y al cabo de 30 minutos aparece un pre- cipitado de color blanco, que se filtra y se lava con etanol frío. Las aguas madres se recristalizan de eta- nol absoluto. Se obtienen 79,3 g del compuesto del tí- tulo (cuantitativo).

R. M. N. 1H (300 MHz, D20) 8ppm : 5,06 (d, 1H, J12 = 3, 44Hz, H-1), 3,76-3,53 (m, 5H, H-2, H-3, H-4, H-6, H- 6), 3,27 (m, 1H, H-5), 1,90 (s, 3H, CH3CONH-).

1E Metil 2-acetamido-2-desoxi-a-D-glucopiranósido (XI- Va) A una solución de N-acetilglucosamina (50 g, 0,22 mmol) en MeOH (50 ml) se le añade una cantidad catalítica de resina Amberlite IR-120 H+, y la mezcla se calienta du- rante 2 días. La mezcla se filtra, se concentra y se purifica por cromatografía en columna de gel de silice (CH2Cl2/MeOH 5 : 1). Se obtienen 10 g del anómero a metil 2-acetamido-2-desoxi-a-D-glucopiranósido (25%) y 40 g del anómero P que se isomeriza para dar el a metil 2- acetamido-2-desoxi-a-D-glucopiranósido en las mismas condiciones de reacción (70% de rdto.).

R. M. N. H (300 MHz, CD30D) 8ppm : 4,64 (d, 1H, J12 = 3,5Hz, H-1), 3,89 (dd, 1H, J21 = 3, 5Hz, J23 = 8, 8Hz, H- 2), 3,81 (dd, 1H, J65 = 2,5Hz, J66' = 12Hz, H-6), 3,67 (dd, 1H, J6'5 = 5Hz, J66' = 12Hz H-6'), 3,62 (dd, 1H, J34 = 10,5Hz, J32 = 8,5Hz H-3), 3,36 (s, 3H, MeO), 3,29 (m, 1H, H-4), 1,96 (s, 3H, CH3CONH-).

1F Metil 2-acetamido-4, 6-benciliden-2-desoxi-a-D- glucopiranósido (IIIa) A una solución de metil 2-acetamido-2-desoxi-a-D- glucopiranósido (0,88 g, 3,74 mmol) en DMF seca (10 ml), se añade ácido p-toluenosulfónico en cantidades catalíticas, y PhCH (OMe) 2 (1,014 ml, 5,61 mmol) y la mezcla se calienta durante 12 h a una temperatura de 55°C. Posteriormente se neutraliza con una solución sa- turada de NaHCO3, se diluye con CH2Cl2 y se lava con agua (2x50 ml). Los extractos orgánicos se secan con MgS04 y se concentran al vacúo. El crudo resultante se purifica en columna de gel de silice (CH2Cl2/.MeOh 25 : 1) para dar 1,079 g del compuesto del título (90% de rdto.).

R. M. N. 1H (500 MHz, CDC13) bppm : 7,5-7,3 (m, 5H, Ph), 5,83 (d, 1H, JNH, 2 = 8, 5Hz, NH-), 5,55 (s, 1H, Hipso).

4,70 (d, 1H, J12 = 3, 5Hz, H-1), 4,27 (dd, 1H, J65 = 3,5Hz, J66. = 12Hz H-6), 4,21 (ddd, 1H, J21 = 3, 5Hz, J2, NH = 8, 5Hz, J23 = 9Hz H-2), 3,89 (ddd, 1H, J3, oH = 3,5Hz, J34 = J32 = 9Hz H-3), 3,76 (m, 2H, H-5, H-6'), 3,57 (t, 1H, J43 = J45 = 9Hz H-4), 3,40 (s, 3H, MeO), 2,97 (d, 1H, J3, oH = 3, 5Hz, OH), 2,06 (s, 3H, CH3CONH-).

1G Metil 2-acetamido-4,6-benciliden-2-desoxi-3-0- (metil 2,3, 4-tri-O-pivaloli-ß-D-glucopiranosiluronato)-α-D- glucopiranósido (IVa) A una mezcla de metil (2,3,4-tri-O-pivaloil-D- glucopiranosil tricloroacetimidato) uronato (10 g, 16,54 mmol) y de metil 2-acetamido-4,6-benciliden-2-desoxi-a- D-glucopiranósido (4,1 g, 12,73 mmol) disueltos en

CH2Cl2 seco (80 ml) a temperatura ambiente, se añade trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (0,3 ml, 0,1 eq.) y la mezcla se agita durante 1 h. Posteriormente la reacción se neutraliza añadiendo solución saturada de NaHC03, se diluye con CH2Cl2 y se lava la fase orgá- nica con H2O (3x100 ml). Los extractos orgánicos se se- can sobre MgSO4 y se concentran al vacío. El crudo ob- tenido se purifica por cromatografía en columna de gel de silice (tolueno/acetona 5 : 1), obteniéndose 7,8 g de metil 2-acetamido-4, 6-benciliden-2-desoix-3-O-(metil 2,3,4-tri-O-pivaloil-ß-D-glucopiranosiluronato)-α-D- glucopiranósido (80% de rdto.) y 1,4 g (14%) de metil 2-acetamido-4, 6-benciliden-2-desoxi-α-D-glucopiranósido recuperado.

R. M. N. H (500 MHz, CDC13) 8 ppm : 7,5-7,3 (m, 5H, Ph), 5,59 (d, 1H, JNH,2 = 7Hz, NH-), 5,5 (s, 1H, Hipso), 5,22 (t, 1H, J34 = J32 = 9,5Hz, H-3), 5,1 (t, 1H, J43 = J45 = 9, 5Hz H-4), 4,97 (t, 1H, J21 = 8Hz, H-2), 4,88 (d, 1H, J12 = 3Hz, H-1'), 4,87 (d, 1H, J12 = 8Hz, H-1), 4,22 (m, 1H, H-5'), 4,11 (m, 1H, H-2'), 3,92 (t, 1H, J34 = J32 = 9Hz, H-3'), 3,82 (t, 1H, J34 = J32 = 9Hz, H-4'), 3,76 (m, 2H, H-5, H-6'), 3,70 (m, 1H, H-6'), 3,64 (s, 3H, COOMe), 3,32 (s, 3H, OMe), 2,00 (s, 3H, MeCONH-), 1,4-1,0 (3s, 27 H, 3-OPiv).

1H Metil 2-acetamido-2-desoxi-3-O-(metil 2,3,4-tri-O- <BR> <BR> <BR> <BR> pivaloil-ß-d-glucopiranosiluronato)-α-D-glucopiranósido (Va) A una solución de metil 2-acetamido-4,6-benciliden-

-2-desoxi-3-0- (metil 2,3, 4-tri-O-plvaloil-ß-D-gluco- piranosiluronato)-a-D-glucopiranósido (100 mg, 0,13 mmol) en CH2Cl2 seco (2 ml) y una cantidad catalítica de ácido p-toluenosulfónico, se le añade EtSH (48 µl, 0,65 mmol) lentamente y se deja agitando a temperatura ambiente durante 5 h. Al cabo de este tiempo se neutra- liza añadiendo solución saturada de NaHCO3, se diluye con CH2CL2 (25 ml) y se lava la fase orgánica con H2O (2x25 ml). Los extractos orgánicos se secan con MgSO4 y se concentran al vacío. El crudo resultante se purifica por cromatografía en columna de gel de silice (CH2Cl2/MeOH 25 : 1), obteniéndose 78,4 mg del compuesto del título (89% de rdto.).

R. M. N. 1H (500 MHz, CDC13) 8ppm : 5,89 (d, 1H, JNH,2 = 7Hz, NH), 5,34 (t, 1H, J34 = J32 = 9, 5Hz, H-3), 5,27 (t, 1H, J43 = J45 = 9Hz H-4), 4,88 (t, 1H, J21 = 5Hz, H- 2), 4,80 (d, 1H, J12 = 6Hz, H-1), 4,68 (d, 1H, J12 = 3,5Hz, H-1'), 4,16 (d, 1H, J54 = 9, 5Hz H-5), 4,07 (m, 1H, H-2), 3,86 (dd, 1H, J65 = 6Hz, J66 = 12Hz, H-6), 3,77 (dd, 1H, Jg-s = 5Hz, J6-6 = 12Hz, H-6), 3,71 (s, 3H, COOMe), 3,70 (m, 1H, H-3'), 3,57 (t, 1H, H-4'), 3,56 (m, 1H, H-3'), 3,31 (s, 3H, OMe), 2,00 (s, 3H, Me- CONH-), 1,4-1,0 (3s, 27 H, 3-OPiv).

1I Metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (metil 2,3,4-tri-O- pivaloil-ß-D-glucopiranosiluronato)-4,6-disulfo-α-D- glucopiranósido, sal disódica (VIIc) Metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (metil 2,3,4-tri-O- pivaloil-ß-D-glucopiranosiluronato)-6-sulfo-α-D- glucopiranósido, sal sódica (VIIb)

Una solución de metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (metil 2,3, 4-tri-O-pivaloil-ß-D-glucopiranosiluronato)-α-D- glucopiranósido (75 mg, 0,11 mmol) en DMF seca (2 ml) se agita durante 2 días en presencia del complejo SO3- NMe3 (200 mg, 1,437 mmol) a 55°C bajo atmósfera de ar- gón. La mezcla se enfría y se le añade MeOH (1 ml) y H20 (1 ml). La solución se pasa por una columna de Se- phadex LH-20 (CH2Cl2/MeOH 1 : 1). Las fracciones obteni- das conteniendo los dos disacáridos se concentran y se pasan por una columna de gel de silice (AcOEt/MeOH 5 : 1) para separar el mono-del disulfatado.. Las dos fraccio- nes resultantes se pasan por DOWEX-50 W X4 (Na+) (MeOH/H20 9 : 1) para dar metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (metil 2,3, 4-tri-O-pivaloil-ß-D-glucopiranosiluronato)- 6-sulfo-a-D-glucopiranósido, sal sódica (62,4 mg, 68% rdto.) y metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (metil 2,3,4- tri-O-pivaloil-ß-D-glucopiranosiluronato)-4, 6-disulfo- a-D-glucopiranósido, sal disódica (13 mg, 15% rdto.).

R. M. N. 1H (500 MHz, CDC13) de metil 2-acetamido-2- desoxi-3-0- (metil 2,3,4-tri-O-pivaloil-ß-D-gluco- piranosiluronato)-6-sulfo-a-D-glucopiranósido (VIIb), sal sódica 8 ppm : 5,35 (t, 1H, J34 = J32 = 9, 5Hz, H-3), 5,17 (t, 1H, J43 = J45 = 9Hz H-4), 5,00 (m, 2H, H-2, H- 1), 4,61 (d, 1H, J12 = 6Hz, H-1'), 4,34 (dd, 1H, J65 = 2Hz, J66' = 10, 5Hz H-6'), 4,27 (d, 1H, J54 = 10Hz H-5), 4,10 (dd, 1H, J65 = 6Hz, J66' = 11Hz H-6'), 3,94 (m, 2H, H-2', H-3'), 3,79 (m, 1H, H-5'), 3,74 (s, 3H, COOMe), 3,41 (m, 2H, H-2, H-4'), 3,38 (s, 3H, OMe), 1,97 (s, 3H, MeCONH-), 1,2-1,0 (3s, 27H, 3-OPiv).

R. M. N. 1H (500 MHz, CDC13) de metil 2-acetamido-2- desoxi-3-0- (metil 2,3, 4-tri-O-pivalil-ß-D-gluco- piranosiluronato)-4,6-disulfo-a-D-glucopiranósido (VIIc), sal disódica 8ppm : 7,80 (d, 1H, JNH, 2 = 9Hz, NH), 5,38 (t, 1H, J34 = J32 = 9Hz, H-3), 5,22 (t, 1H, = J45 = 10Hz H-4), 5,11 (d, 1H, J12 = 7, 5Hz, H-1), 5,01 (dd, 1H, J21 = 8Hz, J23 = 9,5Hz H-2), 4,68 (d, 1H, J12 = 3Hz, H-1'), 4,57 (d, 1H, J45 = J43 = 9, 5Hz H-4'), 4,28 (m, 2H, H-6, H-5), 4,14 (m, 3H, H-3, H-5, H-6'), 4,10 (m, 1H, H-2'), 3,73 (s, 3H, COOMe), 3,41 (s, 3H, OMe), 2,05 (s, 3H, MeCONH-), 1,2-1,0 (3s, 27H, 3-OPiv).

1J Metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (P-D-glucopiranosil urónico)-6-O-sulfo-a-D-glucopiranósido, sal disódica (Ib) A una solución de metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (metil 2,3,4-tri-O-pivaloil-ß-D-glucopiranosiluronato)-6- sulfo-a-D-glucopiranósido, sal sódica (60 mg, 0,07 mmol) en 2 ml de una mezcla (MeOH/H2O 5 : 1) se le añaden 1,5 ml de una solución de Hidróxido de sodio 3M, se de- ja en agitación a temperatura ambiente durante 2 días.

A continuación, se neutraliza con ácido acético hasta pH 8, se concentra al vacío y el crudo resultante se purifica por cromatografía en columna de Sephadex G-10 (H2O/EtOH 9 : 1), se obtienen 40 mg (rdto. cuantitativo) del compuesto del título como un sólido blanco de punto de fusión 250°C con desc.

IR (KBr) : 3429,2915,1627,1553,1422,1381,1232, 1106,1061,950,820 cm-1.

R. M. N. 1H (500 MHz, D20) 8ppm : 4,76 (d, 1H, J12 = 3,5Hz, H-1'), 4,52 (d, 1H, J12 = 8Hz, H-1), 4,37 (dd, 1H, J56 = 2Hz, J66' = 11, 5Hz, H-6), 4,29 (dd, 1H, J6'5 = 5, 5Hz, J66' = 11,5Hz H-6'), 4,15 (dd, 1H, J21 = 3,5Hz, J23 = 10, 5Hz H-2'), 3,94 (m, 2H, H-5', H-3'), 3,73 (m, 1H, H-4), 3,63 (t, 1H, J43 = J45 = 9, 5Hz, H- 4'), 3,53 (m, 2H, H-3, H-5), 3,45 (s, 3H, MeO), 3,37 (dd, 1H, J21 = 8Hz, J23 = 9, 5Hz H-2), 1,94 (s, 3H, CH3CONH-) o Ejemplo 2 : Metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (P-D-gluco- piranosil urónico)-4, 6-di-O-sulfo-α-D-glucopiranósido, sal trisódica (Ic) A una soluciónm de metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (metil 2,3, 4-tri-O-pivaloil-ß-D-glucopiranosiluronato)-4, 6- disulfo-a-D-glucopiranósido, sal disódica (13 mg, 0,01 mmol) en 2 ml de una mezcla (MeOH/H2O 5 : 1) se le añaden 1,5 ml de una solución de hidróxido de sodio 3M, se de- ja con agitaciónm a temperatura ambiente durante 2 días.

A continuación se neutraliza con écido acético hasta pH 8, se concentra al vacío y el crudo resultante se puri- fica por cromatografía en columna de Sephadex G-10 (H20/EtOH 9 : 1), se obtienen 8,5 mg (92% de rdto.) del compuesto del título como un sólido blanco de punto de fusión 249-250°C con desc.

IR (KBr) : 3436,2918,1632,1555,1429,1381,1257, 1109,1060,950,811 cm-1, R. M. N. 1H (300 MHz, D2O) # ppm : 4,80 (m, 2H, H-1, H-1'), 4,19 (t, 1H, J43 = J45 = 9Hz, H-4'), 3,98 (t, 1H, J34 = J32 = 9, 3Hz H-3'), 3,75 (m, 3H, H-6, H-6', H-5'), 3,57

(m, 1H, H-5), 3,42 (m, 2H, H-4, H-3), 3,31 (s, 4H, H-2, MeO), 2,95 (dd, 1H, J21 = 3,76Hz, J23 = 10, 2Hz H-2'), 1, 83 (s, 3H, CH3CONH-).

Ejemplo 3: Metil 2-acetamido-2-desoxi-=3-O-(ß-D- glucopiranosil urónico)-4-0-sulfo-a-D-glucopiranósido, sal disódica (Ia) 3A Metil 2-acetamido-6-0-acetil-2-desoxi-3-0- (metil 2,3,4-tri-O-pivaloil-ß-D-glucopiranosiluronato)-α-D- glucopiranósido (VIa) A una solución de metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (metil 2,3,4-tri-O-pivaloil- (3-D-glucopiranosiluronato)-a-D- glucopiranósido (100 mg, 0,147 mmol) en piridina (2 ml) a-10°C se le añaden 0,016 ml de anhídrido acético (0,162 mmol) y se deja a esta temperatura durante 2 dí- as. Después de este tiempo se añade CH2Cl2 y se lava la fase orgánica con H2O (2x25 ml). Los extractos orgáni- cos se secan con MgSO4 y se concentran al vacío. El crudo se purifica por cromatografía en columna de gel de silice (CH2Cl2/MeOH 40 : 1), obteniéndose 73 mg del compuesto del título (70% de rdto.), más 14,6 mg de producto de partida (15% de rdto.).

R. M. N. H (500 MHz, CDC13) 8ppm : 6,16 (d, 1H, JNH,2 = 8,5Hz, NH), 5,23 (t, 1H, J34 = J32 = 9Hz, H-3), 5,12 (t, 1H, J43 = J45 = 9Hz H-4), 4,84 (t, 1H, J21 = J23 = 8Hz H-2), 4,75 (d, 1H, J2 = 6,5Hz, H-1), 4,56 (d, 1H, J12 = 3, 5Hz H-1'), 4,39 (dd, 1H, J6'5 = 1, 5Hz, J6'6 = 11, 5Hz H-6), 4,12 (dd, 1H, J65 = 5,5Hz, J6'6 = 12Hz H-6', H-6), 4,076 (d, 1H, J54 = 10Hz H-5), 3,96 (m, 1H,

H-2'), 3,92 (d, 1H, H-5'), 3,62 (t, 1H, J32 = J34 = 8,5Hz H-3'), 3,57 (s, 1H, OH), 3,58 (s, 3H, COOMe), 3,38 (t, 1H, J45 = J43 = 10hz H-4'), 3,31 (s, 3H, OMe), 1,95 (s, 3H, MeCONH-), 1,85 (s, 3H, MeCO), 1,4-1,0 (3s, 27H, 3-OPiv).

3B Metil 2-acetamido-6-0-acetil-3-0- (metil 2,3,4-tri-O- pivaloil-ß-D-glucopiranosiluronato)-4-O-sulfo-a-D- glucopiranósido Una solución de metil 2-acetamido-6-0-acetil-2-desoxi- 3-0- (metil 2,3,4-tri-O-pivaloil-p-D-glucopiranosil- uronato)-a-D-glucopiranósido (1 g, 1,39 mmol) en DMF seca (15 ml) se agita durante 24 horas en presencia del complejo S03-NMe3 (1,93 g, 13,90 mmol) a 55°C bajo at- mósfera de argón. La mezcla se enfría y se le añade MeOH (10 ml) y H2O (5 ml). La solución se pasa por una columna de Sephadex LH-20 (CH2Cl2/MeOH 1 : 1). La mezcla de reacción que contiene tres productos se purifica por cromatografía en columna de gel de silice (CH2Cl2/MeOH 15 : 1), obteniéndose las siguientes fracciones : a) pro- ducto de partida con sales de amonio, b) producto de Rf intermedio sin sulfato y diacetilado, c) producto de Rf inferior que corresponde al producto del título (500 mg).

3C Metil 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (P-D-glucopiranosil urónico)-4-O-sulfo-a-D-glucopiranósido, sal disódica (Ia) Siguiendo el mismo procedimiento ya descrito para los compuestos Ib y Ic, el compuesto metil 2-acetamido-6-0- acetil-3-0- (metil 2,3, 4-tri-O-pivaloil-ß-D-gluco-

piranosiluronato)-4-0-sulfo-a-D-glucopiranósido se so- mete a hidrólisis básica dando lugar al compuesto del título como un sólido blanco de punto de fusión 203°C con desc.

IR (KBr) : 3430,2958,1622,1553,1484,1413,1361, 1229,1112,1049,904,803 cm-1.

R. M. N. 1H (500 MHz, D20) 8ppm : 4,74 (m, 2H, J12 = 3,5Hz, J12 = 8Hz H-1 H-1'), 4,24 (t, 1H, J43 = J45 = 9Hz, H-4), 4,02 (t, 1H, J43 = J32 = 9Hz H-3), 3,89 (m, 1H, H-6), 3,80 (m, 2H, H-5', H-6'), 3,65 (m, 1H, H-5), 3,48 (m, 2H, H-4, H-3), 3,34 (s, 4H, H-2, MeO), 2,99 (dd, 1H, J21 = 3, 5Hz, J23 lOHz H-2'), 1,87 (s, 3H, CH3CONH-).