本明細書中で使用される文言(原子、基、 環等)の定義について以下に詳しく説明する� �また、以下の文言の定義が別の文言の定義� �準用する場合、各定義の好ましい範囲も準� �できる。

 「ハロゲン原子」とは、フッ素、塩素、臭� ��又はヨウ素原子を示す。

 「低級アルキル基」とは、炭素原子数が1~8� ��、好ましくは1~6個の直鎖又は分枝のアルキ� ��基を示す。

具体例として、メチル、エチル、n-プロピ� ��、n-ブチル、n-ペンチル、n-ヘキシル、n-ヘ� �チル、n-オクチル、イソプロピル、イソブチ ル、sec-ブチル、tert-ブチル、イソペンチル基 等が挙げられる。

 「低級アルケニル基」とは、炭素原子数が2 ~8個、好ましくは2~6個の直鎖又は分枝のアル� ��ニル基を示す。具体例として、ビニル、プ� ��ペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニ� ��、ヘプテニル、オクテニル、イソプロペニ� ��、2-メチル-1-プロペニル、2-メチル-2-ブテニ ル基等が挙げられる。

 「低級アルキニル基」とは、炭素原子数が2 ~8個、好ましくは2~6個の直鎖又は分枝のアル� ��ニル基を示す。具体例として、エチニル、� ��ロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシ� ��ル、ヘプチニル、オクチニル、イソブチニ� ��、イソペンチニル基等が挙げられる。

 「低級シクロアルキル基」とは、炭素原子� ��が3~8個、好ましくは3~6個のシクロアルキル� ��を示す。具体例として、シクロプロピル、� ��クロブチル、シクロペンチル、シクロヘキ� ��ル、シクロヘプチル又はシクロオクチル基� ��挙げられる。

 「アリール基」とは、炭素原子数が6~14個の 単環式芳香族炭化水素基又は2環式若しくは3� ��式の縮合多環式芳香族炭化水素から水素1原 子を除いた残基を示す。具体例として、フェ ニル、ナフチル、アントリル、フェナントリ ル基等が挙げられる。

 「低級アルコキシ基」とは、ヒドロキシ基� ��水素原子が低級アルキル基で置換された基� ��示す。具体例として、メトキシ、エトキシ� ��n-プロポキシ、n-ブトキシ、n-ペントキシ、n -ヘキシルオキシ、n-ヘプチルオキシ、n-オク� ��ルオキシ、イソプロポキシ、イソブトキシ� ��sec-ブトキシ、tert-ブトキシ、イソペントキ� ��基等が挙げられる。

 「低級シクロアルキルオキシ基」とは、ヒ� ��ロキシ基の水素原子が低級シクロアルキル� ��で置換された基を示す。具体例として、シ� ��ロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、� ��クロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキ� ��、シクロヘプチルオキシ、シクロオクチル� ��キシ基等が挙げられる。

 「アリールオキシ基」とは、ヒドロキシ基� ��水素原子がアリール基で置換された基を示� ��。具体例として、フェノキシ、ナフトキシ� ��アントリルオキシ、フェナントリルオキシ� ��等が挙げられる。

 「低級アルキルカルボニル基」とは、ホル� ��ル基の水素原子が低級アルキル基で置換さ� ��た基を示す。具体例としてメチルカルボニ� ��、エチルカルボニル、n-プロピルカルボニ� �、n-ブチルカルボニル、n-ペンチルカルボニ� ��、n-ヘキシルカルボニル、n-ヘプチルカルボ ニル、n-オクチルカルボニル、イソプロピル� ��ルボニル、イソブチルカルボニル、sec-ブチ ルカルボニル、tert-ブチルカルボニル、イソ� ��ンチルカルボニル基等が挙げられる。

 「低級アルコキシカルボニル基」とは、ホ� ��ミル基の水素原子が低級アルコキシ基で置� ��された基を示す。具体例として、メトキシ� ��ルボニル、エトキシカルボニル、n-プロポ� �シカルボニル、n-ブトキシカルボニル、n-ペ� ��トキシカルボニル、n-ヘキシルオキシカル� �ニル、n-ヘプチルオキシカルボニル、n-オク� ��ルオキシカルボニル、イソプロポキシカル� ��ニル、イソブトキシカルボニル、sec-ブトキ シカルボニル、tert-ブトキシカルボニル、イ� ��ペントキシカルボニル基等が挙げられる。

 「複素環」とは、窒素原子、酸素原子及び� ��黄原子から選択される1又は複数個のヘテロ 原子を環内に有する飽和或いは不飽和単環式 複素環又は2環式若しくは3環式の縮合多環式� ��素環を示す。

 
 飽和の単環式複素環の具体例として、窒素� ��子を環内に有するアジリジン、アゼチジン� ��ピロリジン、ピラゾリジン、イミダゾリジ� ��、トリアゾリジン、ピペリジン、ヘキサヒ� ��ロピリダジン、ヘキサヒドロピリミジン、� ��ペラジン、ホモピペリジン、ホモピペラジ� ��等が、酸素原子を環内に有するテトラヒド� ��フラン、テトラヒドロピラン、[1,4]ジオキ� �ン、[1,2]ジオキシラン等が、硫黄原子を環内 に有するテトラヒドロチオフェン、テトラヒ ドロチオピラン等が、窒素原子と酸素原子を 環内に有するオキサゾリジン、イソオキサゾ リジン、モルホリン等が、窒素原子と硫黄原 子を環内に有するチアゾリジン、イソチアゾ リジン、チオモルホリン等が挙げられる。

 また、それらの飽和の単環式複素環はベ� ��ゼン環等と縮合してジヒドロインドール、� ��ヒドロインダゾール、ジヒドロベンゾイミ� ��ゾール、テトラヒドロキノリン、テトラヒ� ��ロイソキノリン、テトラヒドロシンノリン� ��テトラヒドロフタラジン、テトラヒドロキ� ��ゾリン、テトラヒドロキノキサリン、ジヒ� ��ロベンゾフラン、ジヒドロイソベンゾフラ� ��、クロマン、イソクロマン、ベンゾ[1,3]ジ� �キソール、2,3-ジヒドロベンゾ[1,4]ジオキシ� �、ジヒドロベンゾチオフェン、ジヒドロイ� �ベンゾチオフェン、チオクロマン、イソチ� �クロマン、ジヒドロベンゾオキサゾール、� �ヒドロベンゾイソオキサゾール、ジヒドロ� �ンゾオキサジン、ジヒドロベンゾチアゾー� �、ジヒドロベンゾイソチアゾール、ジヒド� �ベンゾチアジン、キサンテン、4a-カルバゾ� �ル、ペリミジン等の2環式又は3環式の縮合多 環式複素環を形成してもよい。

 不飽和の単環式複素環の具体例として、窒� ��原子を環内に有するジヒドロピロール、ピ� ��ール、ジヒドロピラゾール、ピラゾール、� ��ヒドロイミダゾール、イミダゾール、ジヒ� ��ロトリアゾール、トリアゾール、テトラヒ� ��ロピリジン、ジヒドロピリジン、ピリジン� ��テトラヒドロピリダジン、ジヒドロピリダ� ��ン、ピリダジン、テトラヒドロピリミジン� ��ジヒドロピリミジン、ピリミジン、テトラ� ��ドロピラジン、ジヒドロピラジン、ピラジ� ��等が、酸素原子を環内に有するジヒドロフ� ��ン、フラン、ジヒドロピラン、ピラン等が� ��硫黄原子を環内に有するジヒドロチオフェ� ��、チオフェン、ジヒドロチオピラン、チオ� ��ラン等が、窒素原子と酸素原子を環内に有� ��るジヒドロオキサゾール、オキサゾール、� ��ヒドロイソオキサゾール、イソオキサゾー� ��、ジヒドロオキサジン、オキサジン等が、� ��素原子と硫黄原子を環内に有するジヒドロ� ��アゾール、チアゾール、ジヒドロイソチア� ��ール、イソチアゾール、ジヒドロチアジン� ��チアジン等が挙げられる。

 また、それらの不飽和の単環式複素環は� ��ンゼン環等と縮合してインドール、インダ� ��ール、ベンゾイミダゾール、ベンゾトリア� ��ール、ジヒドロキノリン、キノリン、ジヒ� ��ロイソキノリン、イソキノリン、フェナン� ��リジン、ジヒドロシンノリン、シンノリン� ��ジヒドロフタラジン、フタラジン、ジヒド� ��キナゾリン、キナゾリン、ジヒドロキノキ� ��リン、キノキサリン、ベンゾフラン、イソ� ��ンゾフラン、クロメン、イソクロメン、ベ� ��ゾチオフェン、イソベンゾチオフェン、チ� ��クロメン、イソチオクロメン、ベンゾオキ� ��ゾール、ベンゾイソオキサゾール、ベンゾ� ��キサジン、ベンゾチアゾール、4,5,6,7-テト� �ヒドロベンゾチアゾール、ベンゾイソチア� �ール、ベンゾチアジン、フェノキサンチン� �カルバゾール、β-カルボリン、フェナント� �ジン、アクリジン、フェナントロリン、フ� �ナジン、フェノチアジン、フェノキサジン� �の2環式又は3環式の縮合多環式複素環を形成 してもよい。

 さらにこれらの複素環において、同一の炭� ��原子上に2つの水素原子を有する複素環の場 合、それらの水素原子がオキソ基と置換して 、2-ピロリドン、4-ピペリドン、4-チアゾリド ン、ピラン-4-(4H)-オン、ピラジン-2-(3H)-オン� �の複素環式ケトンを形成してもよく、この� �素環式ケトンも本発明の複素環の範囲に包� �される。

 「窒素原子、酸素原子及び硫黄原子からな� ��群より選択される1又は複数個のヘテロ原子 を環内に有する複素環」とは、前記複素環の 内、窒素原子、酸素原子及び/又は酸素原子� �1又は複数個、環内に有する複素環を示す。

 「複素環基」とは、複素環から水素1原子を 除いた残基を示す。

 
 「炭化水素環」とは、炭素原子数が3~10個の 飽和又は不飽和単環式炭化水素若しくは二環 式炭化水素を示す。

 飽和単環式炭化水素の具体例として、シク� ��プロパン、シクロブタン、シクロペンタン� ��シクロヘキサン、シクロヘプタン、シクロ� ��クタン等が挙げられる。

 
 飽和二環式炭化水素の具体例として、オク� ��ヒドロペンタレン、オクタヒドロインデン� ��デカヒドロナフタレン等が挙げられる。

 
 不飽和単環式炭化水素の具体例として、シ� ��ロペンテン、シクロヘキセン、シクロペン� ��ジエン、シクロヘキサジエン、ベンゼン等� ��挙げられる。

 
 不飽和二環式炭化水素の具体例として、イ� ��ダン、1,2,3,4-テトラヒドロナフタレン、ナ� �タレン等が挙げられる。

 
 「低級アルキレン基」とは、炭素原子数が1 ~8個、好ましくは1~6個の直鎖又は分枝のアル� ��レン基を示す。具体例として、メチレン、� ��チレン、トリメチレン、テトラメチレン、� ��ンタメチレン、ヘキサメチレン、ヘプタメ� ��レン、オクタメチレン、メチルメチレン、� ��チルメチレン基、2,2-ジメチルプロピレン基 等が挙げられる。

 
 「置換基を有してもよい低級アルキル基」� ��「置換基を有してもよい低級アルコキシ基� ��、「置換基を有してもよい低級アルキルカ� ��ボニル基」、「置換基を有してもよい低級� ��ルコキシカルボニル基」及び/又は「置換基 を有してもよい低級アルキレン基」とは、ハ ロゲン原子、低級シクロアルキル基、アリー ル基、複素環基、ニトロ基、シアノ基、‐OR ^p 、-COR ^q 、-COOR ^r 、-CONR ^s R ^t  及び-NR ^u R ^v  からなる群より選択される1又は複数個の置 換基を有してもよい「低級アルキル基」、「 低級アルコキシ基」、「低級アルキルカルボ ニル基」、「低級アルコキシカルボニル基」 及び/又は「低級アルキレン基」を示す。

 「置換基を有してもよい低級シクロアルキ� ��基」、「置換基を有してもよいアリール基� ��及び/又は「置換基を有してもよい複素環基 」とは、ハロゲン原子、低級アルキル基、低 級アルケニル基、低級アルキニル基、低級シ クロアルキル基、アリール基、複素環基、ニ トロ基、シアノ基、‐OR ^p 、-COR ^q 、-COOR ^r 、-CONR ^s R  ^t  及び-NR ^u R ^v からなる群より選択される1又は複数個の置� �基を有してもよい「低級シクロアルキル基� �、「アリール基」及び/又は「複素環基」を� ��す。

 ここで、R ^p 、R ^q 、R ^r 、R ^s 、R ^t 、R ^u 及びR ^v は同一又は異なって、水素原子、低級アルキ ル基、低級アルケニル基、低級アルキニル基 、低級シクロアルキル基、アリール基及び複 素環基からなる群より選択される基を示す。

 本発明でいう「複数個の基」とは、夫々の� ��が同一であっても異なるものであってもよ� ��、その個数は2又は3個の場合が好ましく、� �に2個の場合が好ましい。また、水素原子や� ��ロゲン原子もこの「基」の概念に含まれる� ��

 本発明において、「l」、「m」、「n」及び/ 又は「o」が2又は3を示す場合、複数存在する 各R ⁴ 、R ⁵ 、R ⁶ 及びR ⁷ は同一又は異なっていてもよい。 尚、「l」 、「m」、「n」及び/又は「o」が0を示す場合� ��は、各R ⁴ 、R ⁵ 、R ⁶ 及び/又はR ⁷ が存在しない、すなわち、それらの置換基を 有さない場合を示す。

 本発明でいう「房水流出促進剤」とは、房� ��流出を促進することにより、眼圧下降等の� ��薬的作用を発現させる医薬組成物をいう。

 本発明でいう「眼圧が関与するとされる疾� ��」としては、緑内障、高眼圧症等が挙げら� ��る。

 本発明化合物における「塩」とは、医薬と� ��て許容される塩であれば、特に制限はなく� ��塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、� ��酸、リン酸等の無機酸との塩、酢酸、フマ� ��酸、マレイン酸、コハク酸、クエン酸、酒� ��酸、アジピン酸、グルコン酸、グルコヘプ� ��酸、グルクロン酸、テレフタル酸、メタン� ��ルホン酸、乳酸、馬尿酸、1,2-エタンジスル ホン酸、イセチオン酸、ラクトビオン酸、オ レイン酸、パモ酸、ポリガラクツロン酸、ス テアリン酸、タンニン酸、トリフルオロメタ ンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、p-トル� ��ンスルホン酸、硫酸ラウリルエステル、硫� ��メチル、ナフタレンスルホン酸、スルホサ� ��チル酸等の有機酸との塩、臭化メチル、ヨ� ��化メチル等との四級アンモニウム塩、臭素� ��オン、塩素イオン、ヨウ素イオン等のハロ� ��ンイオンとの塩、リチウム、ナトリウム、� ��リウム等のアルカリ金属との塩、カルシウ� ��、マグネシウム等のアルカリ土類金属との� ��、鉄、亜鉛等との金属塩、アンモニアとの� ��、トリエチレンジアミン、2-アミノエタノ� �ル、2,2-イミノビス(エタノール)、1-デオキシ -1-(メチルアミノ)-2-D-ソルビトール、2-アミノ -2-(ヒドロキシメチル)-1,3-プロパンジオール� �プロカイン、N,N-ビス(フェニルメチル)-1,2-エ タンジアミン等の有機アミンとの塩等が挙げ られる。

 本発明化合物に幾何異性体及び/又は光学異 性体が存在する場合は、それらの異性体も本 発明の範囲に含まれる。

 また、本発明化合物は水和物及び/又は溶媒 和物が存在する場合は、それらの水和物及び /又は溶媒和物も本発明の範囲に含まれる。

 本発明化合物にプロトン互変異性が存在す� ��場合は、それらの互変異性体も本発明に含� ��れる。

 本発明化合物に結晶多形及び/又は結晶多形 群(結晶多形システム)が存在する場合は、そ� ��らの結晶多形及び/又は結晶多形群(結晶多� �システム)も本発明に含まれる。ここで、結� ��多形群(結晶多形システム)とは、それら結� �の製造、晶出、保存等の条件及び/又は状態( 尚、本状態には製剤化した状態も含む)によ� �、結晶形が変化する場合の各段階における� �々の結晶形及び/又はその過程全体を意味す� ��。

 (a)本発明化合物における好ましい例として� ��一般式(1)で示される化合物又はその塩にお� ��て、各基が下記に示す基である化合物又は� ��の塩が挙げられる。

 
(a1)R ¹ 及びR ² が同一又は異なって、水素原子、低級アルキ ル基、カルボキシ基を置換基として有する低 級アルキル基、低級アルコキシカルボニル基 を置換基として有する低級アルキル基又は下 記一般式(2)で示される基を示し;及び/又は

(a2)R ³ がヒドロキシ基、低級アルコキシ基、ヒドロ キシ基を置換基として有する低級アルコキシ 基、低級アルコキシ基を置換基として有する 低級アルコキシ基、低級シクロアルキルオキ シ基、アリールオキシ基、-NR ^a R ^b 又は下記一般式(3)で示される基を示し;及び/� ��は

(a3)R ⁴ 及びR ⁵ が同一又は異なって、ハロゲン原子、低級ア ルキル基、ヒドロキシ基又は低級アルコキシ 基を示し;及び/又は
(a4)R ⁶ がハロゲン原子、低級アルキル基、ハロゲン 原子を置換基として有する低級アルキル基、 シアノ基を置換基として有する低級アルキル 基、低級シクロアルキル基、アリール基、複 素環基、低級アルキル基を置換基として有す る複素環基、ヒドロキシ基、低級アルコキシ 基、ハロゲン原子を置換基として有する低級 アルコキシ基、低級シクロアルキル基を置換 基として有する低級アルコキシ基、アリール 基を置換基として有する低級アルコキシ基、 低級シクロアルキルオキシ基、アリールオキ シ基、ホルミル基、低級アルキルカルボニル 基、カルボキシ基、低級アルコキシカルボニ ル基、ニトロ基、シアノ基、-NR ^c R ^d 又は-NR ^e (COR ^f )を示し;及び/又は
(a5)R ⁷ が低級アルキル基、低級シクロアルキル基、 アリール基、ヒドロキシ基、低級アルコキシ 基、低級シクロアルキルオキシ基又はアリー ルオキシ基を示し;及び/又は
(a6)R ^a 、R ^b 、R ^c 、R ^d 、R ^e 及びR ^f が同一又は異なって、水素原子、低級アルキ ル基、-NR ^g R ^h を置換基として有する低級アルキル基、低級 シクロアルキル基又はアリール基を示し;及� �/又は
(a7)R ^g 及びR ^h が同一又は異なって、水素原子又は低級アル キル基を示し;
(a8)環Aが炭化水素環又は複素環を示し;及び/� �は
(a9)環Bが窒素原子及び酸素原子からなる群よ� ��選択される1又は複数個のヘテロ原子を環内 に有する複素環を示し;及び/又は
(a10)Xが低級アルキレン基、ヒドロキシ基を置 換基として有する低級アルキレン基又は低級 アルコキシ基を置換基として有する低級アル キレン基を示し;及び/又は
(a11)Y及びZが同一又は異なって、単結合又は� �級アルキレン基を示し;及び/又は
(a12)l、m、n及びoが同一又は異なって、0、1、2 又は3を示し、l、m、n及びoが2又は3を示す場� �、各R ⁴ 、R ⁵ 、R ⁶ 又はR ⁷ は同一又は異なっていてもよい。

 すなわち、一般式(1)で示される化合物にお� ��て、上記(a1)、(a2)、(a3)、(a4)、(a5)、(a6)、(a7) 、(a8)、(a9)、(a10)、(a11)及び(a12)からなる群よ� ��選択される1又は2以上の各組み合わせから� �る化合物又はその塩が挙げられる。

 (b)本発明化合物におけるより好ましい例と� ��て、一般式(1)で示される化合物又はその塩� ��おいて、各基が下記に示す基である化合物� ��はその塩が挙げられる。

(b1)R ¹ が低級アルキル基、カルボキシ基を置換基と して有する低級アルキル基、低級アルコキシ カルボニル基を置換基として有する低級アル キル基又は下記一般式(2)で示される基を示し ; 及び/又は

(b2)R ² が水素原子を示し;及び/又は
(b3)R ³ がヒドロキシ基、低級アルコキシ基、ヒドロ キシ基を置換基として有する低級アルコキシ 基、-NR ^a R ^b 又は下記一般式(3)で示される基を示し; 及び /又は

(b4)R ⁵ がハロゲン原子又は低級アルコキシ基を示し ;及び/又は
(b5)R ⁶ がハロゲン原子、低級アルキル基、ハロゲン 原子を置換基として有する低級アルキル基、 シアノ基を置換基として有する低級アルキル 基、複素環基、低級アルキル基を置換基とし て有する複素環基、ヒドロキシ基、低級アル コキシ基、ハロゲン原子を置換基として有す る低級アルコキシ基、アリール基を置換基と して有する低級アルコキシ基、低級アルキル カルボニル基、カルボキシ基、低級アルコキ シカルボニル基、ニトロ基、シアノ基又は-NR ^c R ^d を示し;及び/又は
(b6)R ⁷ が低級アルキル基又はヒドロキシ基を示し;� �び/又は
(b7)R ^a 、R ^b 、R ^c 及びR ^d が同一又は異なって水素原子又は低級アルキ ル基を示し;及び/又は
(b8)環Aが炭化水素環又は複素環を示し;及び/� �は
(b9)環Bが窒素原子及び酸素原子からなる群よ� ��選択される1又は複数個のヘテロ原子を環内 に有する複素環を示し;及び/又は
(b10)Xが低級アルキレン基又はヒドロキシ基を 置換基として有する低級アルキレン基を示し ;及び/又は
(b11)Yが低級アルキレン基を示し;及び/又は
(b12)Zが単結合又は低級アルキレン基を示し;� �び/又は
(b13)lが0を示し;及び/又は
(b14)mが0又は1を示し;及び/又は
(b15)nが0、1又は2を示し、nが2を示す場合、R ⁶ は同一又は異なっていてもよく;及び/又は
(b16)oが0又は1を示す。

 すなわち、一般式(1)で示される化合物にお� ��て、上記(b1)、(b2)、(b3)、(b4)、(b5)、(b6)、(b7) 、(b8)、(b9)、(b10)、(b11)、(b12) 、(b13) 、(b14)  、(b15)及び(b16)からなる群より選択される1又� ��2以上の各組み合わせからなる化合物又はそ の塩が挙げられる。

 (c)環Aの好ましい例として、下記の環が挙げ られる。

 環Aがシクロペンタン、ベンゼン、インダン 、1,2,3,4-テトラヒドロナフタレン、フラン、� ��オフェン、イソオキサゾール、チアゾール� ��ベンゾ[1,3]ジオキソール、2,3-ジヒドロベン� ��[1,4]ジオキシン、ピリジン、ジヒドロベン� �フラン、ベンゾイミダゾール、4,5,6,7-テトラ ヒドロベンゾチアゾール及びキノリンからな る群より選択される環を示す。

 また、その環Aを有し、上記(a)、(b)及び/� �は下記(d)の条件を充足する化合物又はその� �が特に好ましい。

 (d)環Bの好ましい別の例として、下記の環が 挙げられる。

 環Bがピロリジン、モルホリン、ピペラジン 、ピペリジン、2-ピロリドン及びピリジンか� ��なる群より選択される環を示す。

 また、その環Bを有し、上記(a)、(b)及び/� �は(c)の条件を充足する化合物又はその塩が� �に好ましい。

 (e)本発明化合物における特に好ましい具体� ��として、下記の化合物又はその塩が挙げら� ��る。

・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(2-ジメチルアミノ エチル)-3-フェニルウレイドメチル]ベンズア� ��ド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(2,3-ジヒドロキシ� ��ロピル)-3-(インダン-5-イル)ウレイドメチル] ベンズアミド、
・N-(2-アミノ-5-メトキシフェニル)-4-[1-(2-ジメ チルアミノエチル)-3-(インダン-5-イル)ウレイ ドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-シクロペンチル-1- (2-メチルアミノエチル)ウレイドメチル]ベン� ��アミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-t-ブチル-1-(3-ジメ� ��ルアミノプロピル)ウレイドメチル]ベンズ� �ミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(4-ジメチルアミノ フェニル)-1-[3-(モルホリン-4-イル)プロピル]� �レイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(4-シアノメチルフ ェニル)-1-(3-ジメチルアミノ-2,2-ジメチルプロ ピル)ウレイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(3-アミノプロピル )-3-(2,3-ジヒドロベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イル) ウレイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(3,4-ジフルオロフ� ��ニル)-1-(3-ジメチルアミノプロピル)ウレイ� �メチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(3-ジメチルアミノ プロピル)-3-(4-メトキシカルボニルフェニル)� ��レイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(4-ジメチルアミノ フェニル)-1-(2-ヒドロキシエチル)ウレイドメ� ��ル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(2-ヒドロキシエチ ル)-3-フェネチルウレイドメチル]ベンズアミ� ��、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(2,3-ジヒドロベン� ��[1,4]ジオキシン-6-イル)-1-(1-エチルピロリジ� ��-2-イルメチル)ウレイドメチル]ベンズアミ� �、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(3-メトキシフェニ ル)-1-[3-(モルホリン-4-イル)プロピル]ウレイ� �メチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(4-ジフルオロメト キシフェニル)-1-[3-(モルホリン-4-イル)プロピ ル]ウレイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(3-ジメチルアミノ プロピル)-3-(3-ヒドロキシフェニル)ウレイド� ��チル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(3,4-ジフルオロフ� ��ニル)-1-[2-(1-メチルピロリジン-2-イル)エチ� �]ウレイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(3-ジメチルアミノ プロピル)-3-(ピリジン-3-イル)ウレイドメチル ]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-ベンジル-1-(2-ジメ チルアミノエチル)ウレイドメチル]ベンズア� ��ド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(4-クロロフェニル )-1-(ピペリジン-4-イルメチル)ウレイドメチル ]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(3-ジメチルアミノ プロピル)-3-(2-メトキシフェニル)ウレイドメ� ��ル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(3-ジメチルアミノ プロピル)-3-エトキシカルボニルメチルウレ� �ドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(4-ジメチルアミノ フェニル)-1-[3-(ピロリジン-2-オン-1-イル)プロ ピル]ウレイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(4-ジメチルアミノ ブチル)-3-(4-ジメチルアミノフェニル)ウレイ� ��メチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-[2-(ベンゾ[1,3]ジオ キソール-5-イル)エチル]-1-[3-(モルホリン-4-イ ル)プロピル]ウレイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(4-アミノフェニル )-1-[3-(モルホリン-4-イル)プロピル]ウレイド� �チル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(3-ベンジルオキシ フェニル)-1-(3-ジメチルアミノプロピル)ウレ� ��ドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(2-ジメチルアミノ エチル)-3-フェネチルウレイドメチル]ベンズ� ��ミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(2,3-ジヒドロベン� ��[1,4]ジオキシン-6-イル)-1-(2-メチルアミノエ� ��ル)ウレイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(3-ジメチルアミノ プロピル)-3-フェネチルウレイドメチル]ベン� ��アミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(3,4-ジメトキシフ� ��ニル)-1-(3-ジメチルアミノ-2,2-ジメチルプロ� ��ル)ウレイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(2,3-ジヒドロベン� ��[1,4]ジオキシン-6-イル)-1-(2-ジメチルアミノ� ��チル)ウレイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(2,3-ジヒドロベン� ��[1,4]ジオキシン-6-イル)-1-[2-(4-メチルピペラ� ��ン-1-イル)エチル]ウレイドメチル]ベンズア� ��ド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(3-ジメチルアミノ プロピル)-3-(4-フルオロ-3-ニトロフェニル)ウ� ��イドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(2,3-ジヒドロベン� ��[1,4]ジオキシン-6-イル)-1-[3-(ピロリジン-1-イ ル)プロピル]ウレイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(3,4-ジフルオロフ� ��ニル)-1-[2-(4-メチルピペラジン-1-イル)エチ� �]ウレイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-[3-(モルホリン-4-� �ル)プロピル-3-(3-フェニルプロピル)]ウレイ� �メチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(2,3-ジヒドロベン� ��[1,4]ジオキシン-6-イル)-1-[3-(4-メチルピペリ� ��ン-1-イル)プロピル]ウレイドメチル]ベンズ� ��ミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[1-[3-(モルホリン-4-� �ル)プロピル]-3-(チオフェン-3-イル)ウレイド� ��チル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(4-フルオロ-3-メチ ルフェニル)-1-[3-(モルホリン-4-イル)プロピル ]ウレイドメチル]ベンズアミド、
・N-(2-アミノフェニル)4-[1-[3-(モルホリン-4-イ ル)プロピル]-3-(5-ニトロチアゾール-2-イル)ウ レイドメチル]ベンズアミド。

 本発明化合物は、以下の方法により製造す� ��ことができる。尚、個々の具体的な製造方� ��については、後述の実施例[製造例の項]で� �細に説明する。下記の合成経路中で使用さ� �ているBocはtert-ブトキシカルボニル基を示す 。下記の式中R ¹ 、R ² 、R ³ 、R ⁴ 、R ⁵ に酸素原子、窒素原子、硫黄原子等が含まれ る場合にはこれらを汎用される方法で保護、 脱保護することが出来る。

 本発明化合物の製造方法は、以下に示す方� ��に大別することができ、置換基の種類に応� ��て、適宜その方法を選択することができる� ��

1) 本発明化合物(Ia,R ² =H)は、合成経路1に従い製造することができ� �。すなわち、これは、化合物(IIa,R ² =H)をメタノール等の有機溶媒中、塩化水素-� �酸エチル溶液等の酸存在下、0℃から室温で3 0分間から3時間処理することにより得ること� ��できる。

 化合物(IIa)は、合成経路1-1に従い製造する� �とができる。すなわち、これは、化合物(III) とイソシアネート(IV)を塩化メチレン等の有� �溶媒中、0℃から室温で30分間から24時間反応 させることにより得ることができる。

 化合物(III)は、合成経路1-2に従い製造する� �とができる。すなわち、これは、化合物(V)� �塩化メタンスルホニル(VI)を塩化メチレン等� ��有機溶媒中、トリエチルアミン等の塩基存� ��下、0℃から室温で30分間から3時間反応させ ることにより中間体(VII)を得ることができる� ��続いて、得られた中間体(VII)とアミン(VIII)� �0℃から室温で30分間から24時間反応させるこ とにより得ることができる。

 化合物(V)は、合成経路1-3に従い製造するこ� ��ができる。すなわち、これは、化合物(IX)と 化合物(X)をN,N-ジメチルホルムアミド(以下「D MF」とする)等の有機溶媒中、O-(7-アザベンゾ� ��リアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロ ニウム ヘキサフルオロフォスフェート(以下 「HATU」とする)等の縮合剤及びN,N-ジイソプロ ピルエチルアミン等の塩基存在下、室温で1� �間から24時間反応させることにより得ること ができる。

 化合物(IX)は、合成経路1-4に従い製造するこ とができる。すなわち、これは、化合物(XI)� �二炭酸ジ-tert-ブチル(XII)をテトラヒドロフラ ン(以下「THF」とする)等の有機溶媒中、トリ� ��チルアミン等の塩基存在下、室温で1時間か ら24時間反応させることにより得ることがで� ��る。

2) 化合物(II)は、合成経路2に従い製造するこ とができる。すなわち、これは、化合物(III)� ��化合物(XIII)をジメチルスルホキシド(以下、 「DMSO」とする)等の有機溶媒中、0℃から室温 で30分間から24時間反応させることにより得� �ことができる。

 化合物(XIII)は、合成経路2-1に従い製造する� ��とができる。すなわち、これは、アミン(XIV )と塩化フェニルカルバメート(XV)をTHF等の有� ��溶媒中、ピリジン等の塩基存在下、0℃から 室温で30分間から24時間反応させることによ� �得ることができる。

3) 本発明化合物(Ia,R ² =H)は、合成経路3に従い製造することができ� �。すなわち、これは、化合物(XVIa,R ² =H)と化合物(XI)をDMF等の有機溶媒中、HATU等の� ��合剤及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン等 の塩基存在下、室温で1時間から24時間反応さ せることにより得ることができる。

 化合物(XVIa)は、合成経路3-1に従い製造する� ��とができる。すなわち、これは、化合物(XVI Ia,R ² =H)を水素雰囲気下、パラジウム炭素等の触媒 存在下、メタノール等の有機溶媒中、室温で 1時間から72時間処理することにより得ること ができる。

 化合物(XVIIa)は、合成経路3-2に従い製造する ことができる。すなわち、これは、化合物(XV III)とイソシアネート(IV)を塩化メチレン等の� ��機溶媒中、0℃から室温で30分間から24時間� �応させることにより得ることができる。

 化合物(XVIII)は、合成経路3-3に従い製造する ことができる。すなわち、これは、化合物(XI X)とアミン(VIII)をDMF等の有機溶媒中、トリエ� ��ルアミン等の塩基存在下、0℃から室温で30� ��間から3時間反応させることにより得ること ができる。

 化合物(XIX)は、合成経路3-4に従い製造する� �とができる。すなわち、これは、化合物(XX)� ��塩化メタンスルホニル(VI)を塩化メチレン等 の有機溶媒中、トリエチルアミン等の塩基存 在下、0℃から室温で30分間から3時間反応さ� �ることにより得ることができる。

4) 化合物(II)は、合成経路4に従い製造するこ とができる。すなわち、これは、アミン(XIV)� ��カルボニルジイミダゾールとをTHF等の有機� ��媒中0℃から室温で30分間から12時間反応さ� �、さらに化合物(III)を加え40℃から60℃で1時� ��から24時間反応させることにより得ること� �できる。

5) 化合物(IIb,R ³ =NR ⁶ R ⁷ )は、合成経路5に従い製造することができる� ��すなわち、これは、化合物(IId,R ³ =OH)と塩化メタンスルホニルをトリエチルア� �ンなどの塩基存在下、THFなどの有機溶媒中0� ��から室温で30分間から12時間反応させ中間体 (IIc,R ³ =OSO ₂ Me)を得ることができる。さらに中間体(IIc)と� ��ミン(XXI)を塩化メチレンなどの有機溶媒中� �温で1時間から24時間反応させることにより� �ることができる。

 本発明化合物は前述したとおり線維柱帯細� ��に対して、優れた細胞形態変化作用を有し� ��おり、眼圧が関与するとされる疾患の予防� ��は治療剤、特に、緑内障及び高眼圧症の予� ��又は治療の為の眼圧下降剤として有用であ� ��。

 また、この詳細については、後述の実施例� ��薬理試験の項」で詳細に説明するが、The Jo urnal of Clinical Investigation, 103, 1141-1150 (1999) で報告されているCell Shape Index(以下、「CSI� �とする)を指標とした評価系により、本発明� ��合物の線維柱帯細胞に対する形態変化作用� ��評価したところ、線維柱帯細胞に対して、� ��れた細胞形態変化作用を示した。

 本発明化合物は経口でも、非経口でも投与� ��ることができる。投与剤型として、錠剤、� ��プセル剤、顆粒剤、散剤、注射剤、点眼剤� ��が挙げられ、それらは汎用される技術を使� ��して製剤化することができる。

 例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤� ��の経口剤は、乳糖、マンニトール、デンプ� ��、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸、炭酸� ��ルシウム、リン酸水素カルシウム等の賦形� ��、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウ� ��、タルク等の滑沢剤、デンプン、ヒドロキ� ��プロピルセルロース、ヒドロキシプロピル� ��チルセルロース、ポリビニルピロリドン等� ��結合剤、カルボキシメチルセルロース、低� ��換度ヒドロキシプロピルメチルセルロース� ��クエン酸カルシウム等の崩壊剤、ヒドロキ� ��プロピルメチルセルロース、マクロゴール� ��シリコーン樹脂等のコーティング剤、パラ� ��キシ安息香酸エチル、ベンジルアルコール� ��の安定化剤、甘味料、酸味料、香料等の矯� ��矯臭剤等を必要に応じて、必要量を使用し� ��調製することができる。

 また、注射剤、点眼剤等の非経口剤は、塩� ��ナトリウム、濃グリセリン、プロピレング� ��コール、ポリエチレングリコール、塩化カ� ��ウム、ソルビトール、マンニトール等の等� ��化剤、リン酸ナトリウム、リン酸水素ナト� ��ウム、酢酸ナトリウム、クエン酸,氷酢酸、 トロメタモール等の緩衝化剤、ポリソルベー ト80、ステアリン酸ポリオキシ40、ポリオキ� �エチレン硬化ヒマシ60油等の界面活性剤、ク エン酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム等の 安定化剤、塩化ベンザルコニウム、パラベン 、塩化ベンゾトニウム、パラオキシ安息香酸 エステル、安息香酸ナトリウム、クロロブタ ノール、ソルビン酸等の防腐剤、塩酸、クエ ン酸、リン酸、氷酢酸、水酸化ナトリウム、 炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等のpH� ��整剤、ベンジルアルコール等の無痛化剤等� ��必要に応じて、必要量を使用し、調製する� ��とができる。

 本発明は、治療を要する患者(ヒトの患者)� �本発明化合物の有効な量を投与することか� �なる、眼圧が関与するとされる疾患の予防� �び/又は治療方法にも関する。

 本発明化合物の投与量は、症状、年齢、剤� ��等により適宜選択して使用することができ� ��。例えば、経口剤では通常1日当たり0.01~1000 mg、好ましくは1~100mgを1回又は数回に分けて� �与することができる。また、点眼剤は通常0. 0001%~10%(w/v)、好ましくは0.01%~5%(w/v)の濃度のも のを1回又は数回に分けて投与することがで� �る。

 以下に本発明化合物の製造例、製剤例及び� ��理試験の結果を示す。尚、これらの例示は� ��発明をよりよく理解するためのものであり� ��本発明の範囲を限定するものではない。

 


[製造例]
参考例1
2-アミノフェニルカルバミン酸-t-ブチルエス� ��ル(参考化合物1-1)
 O-フェニレンジアミン(22g,200mmol)とトリエチ� ��アミン(30mL)のTHF(150mL)溶液に二炭酸ジ-t-ブチ ル(44g,200mmol)のTHF(50mL)溶液を滴下し、室温で15 時間撹拌した。反応液を濃縮して得られた固 体を酢酸エチルでろ取し、固体を減圧下で乾 燥して標記参考化合物21gを白色固体として得 た。またろ液を濃縮して得られた固体を酢酸 エチルでろ取し、減圧下で乾燥することによ り、標記参考化合物11gを白色固体として得た (収率76%)。

参考例2
N-(2-t-ブトキシカルボニルアミノフェニル)-4-� ��トキシカルボニルベンズアミド(参考化合物 2-1)
 氷冷下で2-アミノフェニルカルバミン酸-t-� �チルエステル(参考化合物1-1,1.1g,5.0mmol)、ト� �エチルアミン(30mL)の塩化メチレン(15mL)溶液� �テレフタル酸クロリドモノメチルエステル(1 .1g,5.0mmol)を加え、室温で4時間撹拌した。水(5 0mL)を加え、酢酸エチル(40mL)で2回抽出した。� ��機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減� ��下で溶媒を留去した。得られた固体を混合� ��媒(ヘキサン10mL-酢酸エチル5mL)でろ取し、減 圧下で乾燥することにより、標記参考化合物 1.8gを白色固体として得た(収率99%)。

参考例3
N-(2-t-ブトキシカルボニルアミノフェニル)-4-� ��ドロキシメチルベンズアミド(参考化合物3-1 )
 氷冷下でN-(2-t-ブトキシカルボニルアミノフ ェニル)-4-メトキシカルボニルベンズアミド(� ��考化合物2-1,1.1g,3.0mmol)のTHF(15mL)溶液にテト� �ヒドロほう素化リチウム(73mg,3.6mmol)を加え、 終夜室温で撹拌した。氷冷下、水(20mL)と2.0M� �酸(20mL)を加えた後、酢酸エチル(40mL)で2回抽� ��し、飽和重曹水(50mL)、飽和食塩水(50mL)で洗� ��した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾� ��後、減圧下で溶媒を留去した。残渣をシリ� ��ゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン-� �酸エチル)で精製することにより、標記参考� ��合物890mgを白色固体として得た(収率87%)。

 なお、標記参考化合物は、次の製造方法� ��よっても得ることができる。

 2-アミノフェニルカルバミン酸-t-ブチルエ� �テル(参考化合物1-1,8.3g,40mmol)、4-ヒドロキシ� ��チル安息香酸(6.2g,41mmol)及びN,N-ジイソプロ� �ルエチルアミン(21mL,120mmol)の無水DMF(200mL)溶� �にHATU(17g,45mmol)を加え、室温で16時間撹拌し� �。水(500mL)を加え、酢酸エチル(500mL)で2回抽� �し、飽和食塩水(500mL)で2回洗浄した。有機層 を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で溶 媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロ マトグラフィー(クロロホルム-メタノール)で 精製することにより、標記参考化合物1.7gを� �黄色固体として得た(収率42%)。

参考例4
N-(2-t-ブトキシカルボニルアミノフェニル)-4-[ 3-(4-メチルピペラジン-1-イル)プロピルアミノ メチル]ベンズアミド(参考化合物4-1)
 氷冷下でN-(2-t-ブトキシカルボニルアミノフ ェニル)-4-ヒドロキシメチルベンズアミド(参� ��化合物3-1,1.0g,2.9mmol)とトリエチルアミン(0.61 mL,4.4mmol)の無水塩化メチレン(15mL)溶液に塩化� ��タンスルホニル(0.25mL,3.2mmol)を加え、40分間� ��拌した。反応液に1-(3-アミノプロピル)-4-メ� ��ルピペラジン(2.3mL,4.4mmol)を加え室温でさら� ��2.5時間撹拌した。水(200mL)を加え、酢酸エチ ル(200mL)で2回抽出し、飽和食塩水(200mL)で洗浄 した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後 、減圧下で溶媒を留去した。残渣をシリカゲ ルカラムクロマトグラフィー(NH修飾シリカゲ ル,クロロホルム-メタノール)で精製すること により、標記参考化合物470mgを無色アモルフ� ��スとして得た(収率33%)。

以下、参考化合物3-1、市販化合物及び既知化 合物から選択される化合物を使用し、参考化 合物4-1の製造方法に準じて、参考化合物4-2~4- 26を得た。

参考例5
1-ベンジルオキシ-3-(フェノキシカルボニルア ミノ)ベンゼン(参考化合物5-1)
 氷冷下で3-ベンジルオキシアニリン(3.7g,16mmo l)とピリジン(6.0mL)のDMF(25mL)溶液に塩化フェニ ルカルバメート(2.0mL,16mmol)のTHF(2.0mL)溶液を滴 下した後、室温で3時間撹拌した。酢酸エチ� �(200mL)を加え、水(200mL)で2回、飽和食塩水(200m L)で2回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシ ウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去した。得 られた固体をジイソプロピルエーテルでろ取 し、減圧下で乾燥することにより、標記参考 化合物3.7gを白色固体として得た(収率73%)。

以下、市販化合物及び既知化合物から選択さ れる化合物を使用し、参考化合物5-1の製造方 法に準じて、参考化合物5-2~5-4を得た。

参考例6
4-ヒドロキシメチル安息香酸ベンジルエステ� ��(参考化合物6-1)
 4-ヒドロキシメチル安息香酸(10g,66mmol)と炭� �セシウム(11g,33mmol)の混合溶媒(DMF100mL-メタノ� ��ル30mL-水30mL)懸濁液に、臭化ベンジル(7.8mL,66 mmol)を加え、室温で2時間撹拌した。水(500mL)� �加え、酢酸エチル(500mL)で抽出し、飽和重曹� ��(300mL)と水(300mL)で2回ずつ洗浄した。有機層� ��無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で� ��媒を留去した。得られた固体をヘキサンで� ��取し、35℃で減圧下で乾燥することにより� �標記参考化合物13gを白色固体として得た(収� ��81%)。

参考例7
4-メタンスルホニルオキシメチル安息香酸ベ� ��ジルエステル(参考化合物7-1)
 氷冷下で4-ヒドロキシメチル安息香酸ベン� �ルエステル(参考化合物6-1,6.0g,25mmol)とトリエ チルアミン(7.6mL,54mmol)の塩化メチレン(60mL)溶� ��に塩化メタンスルホニル(2.1mL,27mmol)を加え� �後、室温で50分間撹拌した。飽和食塩水(300mL )を加え、クロロホルム(150mL)で4回抽出した。 有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減 圧下で溶媒を留去することにより、標記化合 物1.8gを黄色油状物質として得た(収率73%)。

参考例8
4-(2-ジメチルアミノエチルアミノメチル)安息 香酸ベンジルエステル(参考化合物8-1)
 4-メタンスルホニルオキシメチル安息香酸� �ンジルエステル(参考化合物7-1,2.3g,7.2mmol)と� �リエチルアミン(3.0mL,22mmol)のDMF(10mL)溶液にN,N -ジメチルエチレンジアミン(0.87mL,7.9mmol)を加� ��、室温で2時間撹拌した。飽和重曹水(150mL)� �加え、クロロホルム(100mL)で3回抽出した。有 機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧 下で溶媒を留去することにより、標記参考化 合物を含む混合物1.2gを黄色油状物質として� �た。

以下、参考化合物7-1、市販化合物及び既知化 合物から選択される化合物を使用し、参考化 合物8-1の製造方法に準じて、参考化合物8-2~8- 3を得た。

参考例9
4-[1-(2-ジメチルアミノエチル)-3-(インダン-5-� �ル)ウレイドメチル]安息香酸ベンジルエステ ル(参考化合物9-1)
 4-(2-ジメチルアミノエチルアミノメチル)安� ��香酸ベンジルエステルを含む混合物(参考化 合物8-1,1.2g,3.8mmol)の塩化メチレン(10mL)溶液に� ��ンダン-5-イルイソシアネート(0.61mL,4.2mmol)を 加え、室温で15時間撹拌した。反応液を濃縮� ��、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ� ��ー(クロロホルム-メタノール)で精製するこ� ��により、標記参考化合物0.98gを無色油状物� �として得た(2工程、収率29%)。

以下、参考化合物8-2~8-3、市販化合物及び既� �化合物から選択される化合物を使用し、参� �化合物9-1の製造方法に準じて、参考化合物9- 2~9-6を得た。

参考例10
4-[1-(2-ジメチルアミノエチル)-3-(インダン-5-� �ル)ウレイドメチル]安息香酸(参考化合物10-1)
 4-[1-(2-ジメチルアミノエチル)-3-(インダン-5- イル)ウレイドメチル]安息香酸ベンジルエス� ��ル(参考化合物9-1,970mg,2.1mmol)のメタノール(20 mL)溶液に10%パラジウム炭素(100mg)を加え、水� �雰囲気下、室温で29時間撹拌した。不溶物を ろ去後、減圧下で溶媒を留去した。得られた 固体を酢酸エチルでろ取することにより、標 記参考化合物0.78gを白色固体として定量的に� ��た。

以下、参考化合物9-2~9-6、市販化合物及び既� �化合物から選択される化合物を使用し、参� �化合物10-1の製造方法に準じて、参考化合物1 0-2~10-6を得た。

参考例11
4-メトキシ-2-ニトロフェニルカルバミン酸-t-� ��チルエステル(参考化合物11-1)
 水素化ナトリウム(1.1g,46mmol)のTHF(35mL)懸濁液 に4-メトキシ-2-ニトロアニリン(1.3g,7.7mmol)を� �え、二炭酸ジ-t-ブチル(2.0g,9.2mmol)のTHF(10mL)溶 液を滴下し、室温で18時間撹拌した。氷冷下� ��1.0M塩酸(50mL)を加え、酢酸エチル(40mL)で3回� �出し、飽和重曹水(50mL)、飽和食塩水(50mL)で� �浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで� �燥後、減圧下で溶媒を留去した。残渣をシ� �カゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン- 酢酸エチル)で精製することにより、標記参� �化合物1.7gを橙色油状物質として得た(収率86% )。

参考例12
2-アミノ-4-メトキシフェニルカルバミン酸-t-� ��チルエステル(参考化合物12-1)
 4-メトキシ-2-ニトロフェニルカルバミン酸-t -ブチルエステル(参考化合物11-1,1.3g,4.8mmol)の� ��タノール(20mL)溶液に10%パラジウム炭素(120mg) を加え、水素雰囲気下、室温で9時間撹拌し� �。不溶物をろ去後、減圧下で溶媒を留去し� �。得られた固体をヘキサンでろ取すること� �より、標記参考化合物1.1gを淡褐色固体とし� ��定量的に得た。

参考例13
N-(2-t-ブトキシカルボニルアミノフェニル)-4-[ 3-(2,3-ジヒドロベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イル)-1 -[3-(4-メチルピペラジン-1-イル)プロピル]ウレ イドメチル]ベンズアミド(参考化合物13-1)
 N-(2-t-ブトキシカルボニルアミノフェニル)-4 -[3-(4-メチルピペラジン-1-イル)プロピルアミ� ��メチル]ベンズアミド(参考化合物4-1,350mg,0.73 mmol)の無水塩化メチレン(15mL)溶液に2,3-ジヒド ロベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イルイソシアネー� ��(0.11mL,0.80mmol)を加え、室温で40分間撹拌した 。反応液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラム クロマトグラフィー(クロロホルム-メタノー� ��)で精製することにより、標記参考化合物460 mgを無色アモルファスとして得た(収率94%)。

以下、参考化合物4-1~4-26、市販化合物及び既� ��化合物から選択される化合物を使用し、参� ��化合物13-1の製造方法に準じて、参考化合物 13-2~13-158を得た。

参考例14
4-[3-(3-ベンジルオキシフェニル)-1-(3-ジメチル アミノプロピル)ウレイドメチル]-N-(2-t-ブト� �シカルボニルアミノフェニル)ベンズアミド( 参考化合物14-1)
 N-(2-t-ブトキシカルボニルアミノフェニル)-4 -(3-ジメチルアミノプロピルアミノメチル)ベ� ��ズアミドを含む混合物(参考化合物4-5,10g,24mm ol)のDMSO(30mL)溶液に1-ベンジルオキシ-3-(フェ� �キシカルボニルアミノ)ベンゼン(参考化合物 5-1,3.7g,12mmol)を加え、室温で15時間撹拌した。 水(300mL)を加え、酢酸エチル(250mL)で2回抽出し 、飽和食塩水(250mL)で2回洗浄した。有機層を� ��水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で溶� ��を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロ� ��トグラフィー(クロロホルム-メタノール)で� ��製することにより、標記参考化合物1.1gを白 色アモルファスとして得た(収率15%)。

以下、参考化合物4-5、4-11、5-2~5-4、市販化合� ��及び既知化合物から選択される化合物を使� ��し、参考化合物14-1の製造方法に準じて、参 考化合物14-2~14-4を得た。

参考例15
4-[3-(4-アミノフェニル)-1-[3-(モルホリン-4-イ� �)プロピル]ウレイドメチル]-N-(2-t-ブトキシカ ルボニルアミノフェニル)ベンズアミド(参考� ��合物15-1)
 N-(2-t-ブトキシカルボニルアミノフェニル)-4 -[1-[3-(モルホリン-4-イル)プロピル]-3-(4-ニト� �フェニル)ウレイドメチル]ベンズアミド(参� �化合物13-62,80mg,0.13mmol)のメタノール(2mL)溶液� ��5%パラジウム炭素(10mg)を加え、水素雰囲気� �、室温で18時間撹拌した。不溶物をろ去し、 減圧下で溶媒を留去した。残渣をシリカゲル カラムクロマトグラフィー(クロロホルム-メ� ��ノール)で精製することにより、標記参考化 合物45mgを淡黄色油状物質として得た(収率60%) 。

参考例16
N-(2-t-ブトキシカルボニルアミノ-5-メトキシ� �ェニル)-4-[1-(2-ジメチルアミノエチル)-3-(イ� �ダン-5-イル)ウレイドメチル]ベンズアミド(� �考化合物16-1)
 4-[1-(2-ジメチルアミノエチル)-3-(インダン-5- イル)ウレイドメチル]安息香酸(参考化合物10- 1,120mg,0.3mmol)、2-アミノ-4-メトキシフェニルカ ルバミン酸-t-ブチルエステル(参考化合物12-1, 80mg,0.33mmol)及びN,N-ジイソプロピルエチルアミ ン(0.12mL,0.66mmol)のDMF(3.0mL)溶液にHATU(130mg,0.33mmo l)を加え、室温で18時間撹拌した。水(30mL)を� �え、酢酸エチル(30mL)で2回抽出し、飽和食塩� ��(40mL)で2回洗浄した。有機層を無水硫酸マグ ネシウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去した 。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ ー(クロロホルム-メタノール)で精製すること により、標記参考化合物43mgを無色アモルフ� �スとして得た(収率24%)。

以下、参考化合物10-1、市販化合物及び既知� �合物から選択される化合物を使用し、参考� �合物16-1の製造方法に準じて、参考化合物16-2 を得た。

参考例17
N-(2-t-ブトキシカルボニルアミノフェニル)-4-[ 1-[3-(モルホリン-4-イル)プロピル]-3-(チアゾー ル-2-イル)ウレイドメチル]ベンズアミド(参考 化合物17-1)
 氷冷下、N,N’-カルボニルジイミダゾール(11 0mg,0.68mmol)のTHF溶液(3.0mL)に2-アミノチアゾー� �(65mg,0.64mmol)を加え、6時間撹拌した。N-(2-t-ブ トキシカルボニルアミノフェニル)-4-[3-(モル� ��リン-4-イル)プロピルアミノメチル]ベンズ� �ミド(参考化合物4-11,110mg,0.23mmol)を加え、60℃ で16時間撹拌した。水(100mL)を加え、酢酸エチ ル(100mL)で抽出し、飽和食塩水(100mL)で洗浄し� ��。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、� ��圧下で溶媒を留去した。残渣をシリカゲル� ��ラムクロマトグラフィー(クロロホルム-メ� �ノール)で精製することにより、標記参考化� ��物90mgを無色アモルファスとして得た(収率65 %)。

以下、参考化合物4-11を使用し、参考化合物17 -1の製造方法に準じて、参考化合物17-2~17-6を� ��た。

参考例18
N-(2-t-ブトキシカルボニルアミノフェニル)-4-[ 3-(4-ジメチルアミノフェニル)-1-[3-(N-エチル-N- メチルアミノ)プロピル]ウレイドメチル]ベン ズアミド(参考化合物18-1)
 氷冷下、N-(2-t-ブトキシカルボニルアミノフ ェニル)-4-[3-(4-ジメチルアミノフェニル)-1-(3-� ��ドロキシプロピル)ウレイドメチル]ベンズ� �ミド(参考化合物13-79,200mg,0.36mmol)とトリエチ� ��アミン(0.68mL,4.9mmol)の無水塩化メチレン(5mL)� ��液に塩化メタンスルホニル(0.30mL,3.9mmol)を加 え、7時間撹拌した。水(100mL)を加え、酢酸エ� ��ル(100mL)で抽出し、飽和食塩水(100mL)で洗浄� �た。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後� �減圧下で溶媒を留去した。得られた残渣に� �水塩化メチレン(1mL)とエチルメチルアミン(0. 03mL,0.35mmol)を加え室温で5時間撹拌した。水(50 mL)を加え、酢酸エチル(5.0mL)で抽出し、飽和� �塩水(50mL)で洗浄した。有機層を無水硫酸ナ� �リウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去した� �残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ� �(クロロホルム-メタノール)で精製すること� �より、標記参考化合物9.0mgを無色油状物質と して得た(収率4%)。

実施例1
N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(2,3-ジヒドロベンゾ[ 1,4]ジオキシン-6-イル)-1-[3-(4-メチルピペラジ� ��-1-イル)プロピル]ウレイドメチル]ベンズア� ��ド(化合物1-1)
 N-(2-t-ブトキシカルボニルアミノフェニル)-4 -[3-(2,3-ジヒドロベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イル) -1-[3-(4-メチルピペラジン-1-イル)プロピル]ウ� ��イドメチル]ベンズアミド(参考化合物13-1,450 mg,0.68mmol)の混合溶液(酢酸エチル10mL-メタノー ル10mL)に4.0M塩化水素-酢酸エチル(10mL)を加え� �室温で2.5時間撹拌した。飽和重曹水(150mL)を� ��え、クロロホルム(150mL)で抽出し、飽和食塩 水(150mL)で洗浄した。有機層を無水硫酸ナト� �ウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去した。� �渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(N H修飾シリカゲル,クロロホルム-メタノール)� �精製することにより、標記化合物310mgを無色 アモルファスとして得た(収率82%)。

以下、参考化合物13-2~13-158、参考化合物14-1~14 -4、参考化合物15-1、参考化合物16-1~16-2、参考 化合物17-1~17-6、参考化合物18-1、市販化合物� �び既知化合物から選択される化合物を使用� �、化合物1-1の製造方法に準じて、化合物1-2~1 -172を得た。

実施例2
N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(2-ジメチルアミノエ チル)-3-(インダン-5-イル)ウレイドメチル]ベ� �ズアミド(化合物2-1)
 4-[1-(2-ジメチルアミノエチル)-3-(インダン-5- イル)ウレイドメチル]安息香酸(参考化合物10- 1,250mg,0.66mmol)、O-フェニレンジアミン(140mg,1.3m mol)及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.33mL ,2.0mmol)のDMF(5.0mL)溶液にHATU(250mg,0.66mmol)を加え 、室温で16時間撹拌した。酢酸エチル(100mL)を 加え、飽和食塩水(50mL)で3回洗浄した。有機� �を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下� �溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラム� �ロマトグラフィー(クロロホルム-メタノール )で精製した後、得られた固体を酢酸エチル� �ろ取し、減圧下で乾燥することにより、標� �化合物230mgを薄黄白色固体として得た(収率74 %)。

以下、参考化合物10-2~10-6、市販化合物及び既 知化合物から選択される化合物を使用し、化 合物2-1の製造方法に準じて、化合物2-2~2-6を� �た。

実施例3
N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(3-ジメチルアミノプ ロピル)-3-(3-ヒドロキシフェニル)ウレイドメ� ��ル]ベンズアミド(化合物3-1)
 N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(3-ベンジルオキシ� ��ェニル)-1-(3-ジメチルアミノプロピル)ウレ� �ドメチル]ベンズアミド(化合物1-76,640mg,1.2mmol )の混合溶液(酢酸エチル10mL-メタノール10mL-DMF 10mL)に10%パラジウム炭素(100mg)を加え、水素雰 囲気下、室温で32時間撹拌した。不溶物をろ� ��後、水(100mL)を加え、酢酸エチル(100mL)で2回� ��出し、飽和食塩水(100mL)で2回洗浄した。有� �層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧� �で溶媒を留去することにより、標記化合物48 0mgを白色アモルファスとして得た(収率88%)。

以下、化合物1-81、市販化合物及び既知化合� �から選択される化合物を使用し、化合物3-1� �製造方法に準じて、化合物3-2を得た。

実施例4
N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(4-カルボキシフェニ ル)-1-(3-ジメチルアミノプロピル)ウレイドメ� ��ル]ベンズアミド(化合物4-1)
 N-(2-アミノフェニル)-4-[1-(3-ジメチルアミノ� ��ロピル)-3-(4-メトキシカルボニルフェニル)� �レイドメチル]ベンズアミド(化合物1-46,62mg,0. 12mmol)の混合溶液(メタノール30mL-THF5.0mL)に1.0M� ��酸化ナトリウム水溶液(6.0mL)を加え、室温で 7日間撹拌した。1.0M塩酸を用いて中和した後� ��減圧下で溶媒を留去した。残渣をシリカゲ� ��カラムクロマトグラフィー(クロロホルム-� �タノール)で精製することにより、標記化合� ��60mgを白色固体として定量的に得た。

以下、化合物2-4、市販化合物及び既知化合物 から選択される化合物を使用し、化合物4-1の 製造方法に準じて、化合物4-2を得た。

実施例5
N-(2-アミノフェニル)-4-[3-[4-(2-ジメチルアミノ エチルアミノカルボニル)フェニル]-1-(3-ジメ� ��ルアミノプロピル)ウレイドメチル]ベンズ� �ミド(化合物5-1)
 N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(4-カルボキシフェ� ��ル)-1-(3-ジメチルアミノプロピル)ウレイド� �チル]ベンズアミド(化合物4-1,33mg,0.067mmol)、N, N-ジメチルアミノエチレンジアミン(0.30mL,2.8mm ol)とN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.023mL,0. 13mmol)のDMF(5.0mL)懸濁液に1-[ビス(ジメチルアミ ノ)メチレン]-5-クロロ-1H-ベンゾトリアゾリウ ム 3-オキシド ヘキサフルオロフォスフェー ト(49mg,0.067mmol)を加え、室温で80分間撹拌した 。飽和重曹水(30mL)を加え、酢酸エチル(20mL)で 2回抽出し、飽和食塩水(30mL)で2回洗浄した。� ��機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減� ��下で溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカ� ��ムクロマトグラフィー(クロロホルム-メタ� �ール)で精製することにより、標記化合物21mg を無色油状物質として得た(収率57%)。

実施例6
N-(2-アミノフェニル)-4-[3-(4-クロロフェニル)-1 -[2-(ピロリジン-1-イル)エチル]ウレイドメチ� �]ベンズアミド(化合物6-1)
 塩化-2-クロロトリチルポリスチレン樹脂(3.0 g,4.2mmol)を塩化メチレン(30mL)に膨潤させ、O-フ ェニレンジアミン(1.4g,13mmol)とN,N-ジイソプロ� ��ルエチルアミン(4.4mL,25mmol)を加え、室温で18 時間振とうした。反応液をろ過後、樹脂をDMF と塩化メチレン(各15mL)で交互に3回洗浄し、� �圧下で乾燥することにより中間体[I]を得た� �

 中間体[I]の全量をDMF(30mL)に膨潤させ、4-� �ドロキシメチル安息香酸(1.9g,13mmol)、N,N-ジイ ソプロピルエチルアミン(4.4mL,25mmol)及びHATU(4. 8g,13mmol)を加え、室温で4時間振とうした。反� ��液をろ過後、樹脂をDMFと塩化メチレン(各15m L)で交互に3回洗浄し、減圧下で乾燥すること により中間体[II]4.3gを得た。

 中間体[II](1.2g,1.3mmol)を塩化メチレン(15mL)� ��膨潤させ、N,N-ジイソプロピルエチルアミン (1.1mL,6.5mmol)と塩化メタンスルホニル(0.30mL,3.9m mol)を加え、室温で40分間振とうした。反応液 をろ過後、樹脂をDMFと塩化メチレン(各10mL)で 交互に3回、さらにDMF(10mL)で2回洗浄した。樹� ��にDMF(15mL)と2-アミノエチル-1-ピロリジン(0.83 mL,6.5mmol)を加え、室温で15時間振とうした。� �応液をろ過後、樹脂をDMF、塩化メチレン及� �メタノール(各10mL)で交互に3回洗浄し、減圧� ��で乾燥することにより中間体[III]を得た。

 中間体[III](150mg,0.15mmol)を塩化メチレン(2.0 mL)に膨潤させ、4-クロロフェニルイソシアネ� ��ト(120mg,0.75mmol)を加え、室温で16時間振とう� ��た。反応液をろ過後、樹脂をDMF、塩化メチ� ��ン及びメタノール(各3.0mL)で交互に3回洗浄� �、減圧下で乾燥することにより中間体[IV]を� ��た。

 中間体[IV]の全量に5.0%トリフルオロ酢酸-塩� ��メチレン溶液(1.5mL)を加え、室温で25分間振� ��うした。樹脂をろ去し、ろ液を飽和重曹水( 3.0mL)で洗浄し、有機層を減圧下で濃縮した。 残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム-メタノール)で精製することに より、標記化合物7.2mgを黄色油状物質として� ��た(収率9.8%)。

以下、市販化合物及び既知化合物から選択さ れる化合物を使用し、化合物6-1の製造方法に 準じて、化合物6-2~6-5を得た。

[製剤例]
本発明化合物の代表的な製剤例を以下に示す 。

1)錠剤(150mg中)
  本発明化合物                  1m g
  乳糖                   100mg
  トウモロコシデンプン           40mg
  カルボキシメチルセルロースカルシウム    4.5mg
  ヒドロキシプロピルセルロース        4mg
  ステアリン酸マグネシウム           0.5mg

 上記処方の錠剤にコーティング剤(例えば、 ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マク ロゴール、シリコーン樹脂等の通常のコーテ ィング剤)3mgを用いてコーティングを施し、� �的とする錠剤を得ることができる。また、� �発明化合物並びに添加物の種類及び/又は量� ��適宜変更することで、所望の錠剤を得るこ� ��もできる。

2)カプセル剤(150mg中)
  本発明化合物           5mg
  乳糖                   135mg
  カルボキシメチルセルロースカルシウム      4.5mg
  ヒドロキシプロピルセルロース           4mg
  ステアリン酸マグネシウム            1.5mg

 本発明化合物並びに添加剤の種類及び又は� ��を適宜変更することで、所望のカプセル剤� ��得ることができる。

3)点眼剤(100ml中)
  本発明化合物                 100m g
  塩化ナトリウム                900 mg
  ポリソルベート80         500mg
  水酸化ナトリウム               � �量
  塩酸                    適量
  滅菌精製水                 適量

 本発明化合物及び添加物の種類及び/又は量 を適宜変更することで、所望の点眼剤を得る ことができる。

 
 
[薬理試験]
1.線維柱帯細胞に対する形態変化作用の評価� ��験
 細胞の形態変化を評価する方法の一つとし� ��、Cell Shape Index(以下、「CSI」とする)を指� �とした評価系が、The Journal of Clinical Investi gation, 103, 1141-1150 (1999)に報告されている。� ��こで、前記文献記載の方法に準じ、本発明� ��合物の線維柱帯細胞に対する形態変化作用� ��評価した。

(使用細胞)
 Investigative Ophthalmology & Visual Science, 43,  151-161 (2002)に報告されている、ヒト線維柱� ��細胞株(以下、「TM-1細胞」とする)を使用し� ��。

(試薬の調製)
培養液1:Dulbecco’s Modified Eagle Medium(以下、� �D-MEM」とする)にウシ胎児血清(10%)、L-グルタ� ��ン(2mM)、アンフォテリシンB(2.5mg/mL)及びゲン タマイシン(25mg/mL)を添加して試薬を調製した 。

培養液2:D-MEMにウシ胎児血清(3%)、L-グルタ� �ン(2mM)、アンフォテリシンB(2.5mg/mL)及びゲン� ��マイシン(25mg/mL)を添加した。

細胞染色液:Calcein-AM溶液(細胞質染色試薬、 DOJINDO社製)及びHoechst 33342溶液(核染色試薬、D OJINDO社製)を、L-グルタミン(2mM)、アンフォテ� ��シンB(2.5mg/mL)及びゲンタマイシン(25mg/mL)を� �むD-MEMで希釈し、Calcein-AM(16mM)、Hoechst 33342(40 mM)の混合液を調製した。

(細胞の調製)
 37℃、8%炭酸ガス雰囲気下で継代培養したTM- 1細胞を、後述の薬物処理24時間前にトリプシ ン-EDTA溶液(0.05% トリプシン、0.53mM エチレン ジアミン四酢酸四ナトリウム)で処理して96穴 培養プレートに播種した。細胞の継代培養に は培養液1を用いた。プレート播種後の細胞� �養には培養液2を用いた。

(被験化合物溶液の調製)
被験化合物をジメチルスルホキシドに溶解し て5mM溶液を調製し、これを培養液2で希釈し� �200mMの被験化合物溶液を調製した。

(陽性対照化合物溶液の調製)
 Rhoキナーゼ阻害剤であるY-27632が線維柱帯細 胞の形態変化を誘導することがInvestigative Oph thalmology & Visual Science,42,137-144(2001)に報告 されている。そこでY-27632(国際公開第90/05723� �パンフレットに記載の方法に従い製造)を陽� ��対照として用い、これを被験化合物と同様� ��ジメチルスルホキシドに溶解して5mM溶液を� ��製し、これを培養液2で希釈して200mMの溶液� ��陽性対照化合物溶液を調製した。

(試験方法及び測定方法)
1)96穴培養プレートに、1.6×10 ⁴ cells/mLに調整したTM-1細胞を1穴あたり95mL(1.5×1 0 ⁴ cells)ずつ添加した。

2)8%炭酸ガス雰囲気下、37℃で24時間培養を� ��った。

3)被験化合物溶液または陽性対照化合物溶� ��を1穴あたり5mLずつ添加した(被験化合物ま� �は陽性対照化合物の最終濃度:10mM)。またコ� �トロールとしては、ジメチルスルホキシド(4 %)を含有する培養液2を1穴あたり5mLずつ添加� �た。

4)8%炭酸ガス雰囲気下、37℃で24時間培養を� ��った。

5)細胞染色液を1穴あたり10mLずつ添加した� �

6)8%炭酸ガス雰囲気下、37℃で1時間インキ� �ベーションし細胞を染色した。

7)37%ホルムアルデヒド溶液を1穴あたり10mL� �つ添加した。

8)室温で1時間インキュベーションし細胞を 固定した。

9)リン酸緩衝生理食塩液による洗浄を行っ� ��。

10)Array Scan Vti HCS reader(Cellomics社製)を用� �て、20倍の対物レンズで、1被験化合物添加� �あたり80視野(10視野×8穴)につき染色細胞の� �像を取り込んだ。

11)各細胞につきCSIを算出し、各被験化合物 添加群ごとの平均値を求めた。

(CSIの計算式)
CSIは以下の式により算出した。

CSI=4π×細胞の面積/(細胞周囲の長さ) ²

(試験結果及び考察)
試験結果の一例として、各被験化合物(化合� �1-2、化合物1-4、化合物1-5、化合物1-16、化合� ��1-22、化合物1-23、化合物1-28、化合物1-31、化 合物1-34、化合物1-36、化合物1-38、化合物1-39� �化合物1-43、化合物1-46、化合物1-47、化合物1- 49、化合物1-50、化合物1-53、化合物1-58、化合� ��1-59、化合物1-60、化合物1-66、化合物1-76、化 合物1-80、化合物1-94、化合物1-97、化合物1-102� ��化合物1-104、化合物1-107、化合物1-113、化合� ��1-128、化合物1-134、化合物1-135、化合物1-165� �化合物1-169、化合物2-2、化合物2-3、化合物2-4 、化合物2-5、化合物3-1)添加群およびY-27632添� ��群のCSIを表Iに示す。

2.眼圧下降作用の評価試験
本化合物の眼圧下降作用を評価するため、雄 性日本白色ウサギを用いた薬物の前房内投与 による眼圧下降作用の評価試験を実施した。

(被験化合物投与液の調製)
被験化合物を0.5%ジメチルスルホキシド含有� �理食塩液に溶解又は懸濁させ、1mMの被験化� �物投与液を調製した。

 
(試験方法及び測定方法)
雄性日本白色ウサギの両眼に0.4%塩酸オキシ� �プロカイン点眼液を一滴ずつ点眼し局所麻� �した後、圧平式眼圧計を用いて眼圧を測定� �た。次いで、30G針の注射器を用い、片眼に� �験化合物投与液(20μL)を前房内投与した。コ� ��トロールとしては、被験化合物の溶媒(0.5%� �メチルスルホキシド含有生理食塩液)を20μL� �房内投与した。被験化合物又は溶媒を投与� �てから一定時間の後に、投与眼に0.4%塩酸オ� ��シブプロカイン点眼液を一滴ずつ点眼し局� ��麻酔した後、圧平式眼圧計を用いて眼圧を� ��定した。

(眼圧下降率の計算式)
各被験化合物の眼圧下降作用は眼圧下降率を 算出することにより評価した。眼圧下降率(%) は以下の式により算出した。

眼圧下降率(%)=100×(コントロール群の眼圧の� �均値-各被験化合物投与群の眼圧の平均値)/� �ントロール群の眼圧の平均値

(試験結果)
試験結果の一例として、各被験化合物(化合� �1-59、化合物1-80及び化合物2-2)を投与してか� �9時間後における各被験化合物投与群の眼圧� ��降率を表IIに示す(一群あたり6例)。
 
表Iで示したとおり、本化合物は線維柱帯細� �に対し、陽性対照としたY-27632と同等または� ��れ以上の優れた細胞形態変化作用を有して� ��り、さらに表IIで示したとおり、本化合物� �実際の動物モデル試験においても優れた眼� �下降作用を有していることから、眼圧下降� �として使用でき、眼圧が関与するとされる� �患の予防及び/又は治療剤、特に、緑内障、� ��眼圧症等の予防及び/又は治療剤として有用 であることが期待される。