Chemical Abstracts, Band 92, Nummer 3, 21. Januar 1980 (Columbus, Ohio, US) W.J. Zeller u.a.: "Examination of four newly synthesized 2-chloroethylnitrosoureas im comparison with BCNU, CCNU, MeCCNU, chlorozotocin and hydroxyethyl-CNU in preterminal rat leukemia L 5222, Seite 54, Zusammenfassung 15507u; & J.Canc.Res.Clin.Oncol. 1979, 95(1) 43-9
Chemical Abstracts, Band 85, Nr. 1, 5. Juli 1976 (Columbus, Ohio, US) Seiten 491-492, Zusammenfassung 6050t; & JP-A-51 013 722, 3. Februar 1976
| 1. | N * ' (2Chloräthyl)N'nitrosocarbamoylj/ oligopeptid¬ ester und amide der allgemeinen Formel C0R4 CONHCH ClCH2CH2NCONHCH R ■ (III) und NO R worin R1=R3=H, CH3 CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2,C2H5 CH(CH3)C2H5, CR2ζ r_~ , "CH. OH, CH(OH)CH3, CH2CH2SCH3, CH2„CH2C nNH. |
| 2. | CH2 0 ^ R = OCH , NH_, NHR' wobei R' einen Oligopeptidrest dar stellt, dessen endständige Carboxylgruppe ihrerseits als Methylester oder Amidgruppe verschlossen ist. |
| 3. | 2 N N ' (2Chloräthyl) N * nitroso ) carbamoy liglycylLvalinmeth ester. |
| 4. | N ( ' (2Chloräthyl)N'nitroso)carbamoy3LvalylLvalin methvlester. |
| 5. | N { r(2Chloräthyl)N'nitroso)carbamoyl|LvalylLmethioni methvlester. |
| 6. | N (N* (2Chloräthyl)N'nitroso)carbamoy^LisoleucylL leucinmethylester. |
| 7. | N jü' (2Chloräthyl)N'nitroso)carbamoy3Lphenylalanyl Lvalinmethylester. |
| 8. | N{N*(2Chloräthyl)N'nitroso)carbamoyljLphenylalany1L leucinmethylester. |
| 9. | N(V (2Chloräthyl)N'nitroso)carbamoyJLphenylalany1 Lphenylalaninmethylester. |
| 10. | N{N*(2Chloräthyl)N'nitroso)carbamoyϊjLphenylalanyl Lmethioninmethylester. |
| 11. | N{ ' (2Chloräthyl)N*nitroso)carbamoy LmethionylL phenylalaninmethylester. |
| 12. | Verfahren zur Herstellung von N N'(2Chloräthyl)N'nitroso carbamoyljoligopeptidestemoder a iden nach Anspruch 1 , da¬ durch gekennzeichnet, daß N J'(2Chloräthyl)N'nitroso carbamoyl"7aminosäuren oder oligopeptide mit einem Ester oder Amid einer zweiten Aminosäure oder eines Oligopeptids die gleich den ersten oder verschieden sein können unter Ein¬ wirkung eines geeigneten basischen Peptidkatalysators in der Kälte zu N N' (2Chloräthyl)N'nitrosocarbamoylJoli peptidestern oder amiden umgesetzt werden. |
| 13. | Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß als Ausgangsmaterial verwendeten N ' (2Chloräthyl) ' nitrosocarbamoyljaminosäuren oder oligopeptide aus N (2Chloräthyl)Nnitrosocarbamoylazid und Aminosäure bzw. Oligopeptid in an sich bekannter Weise in einem ge eigneten Lösungsmittel, insbesondere Dichlormethan herg stellt werden und diese Reaktionslösung ohne Isolierung für die Umsetzung mit dem Aminosäureester oder amid oder entsprechenden Oligopeptid eingesetzt wird. |
| 14. | Verfahren nach Anspruch 11 oder 12, dadurch gekennzeich daß als basischer Peptidkatalysator Dicyclohexylcarbodi verwendet wird. |
Unter den Alkylantien ist in den letzten Jahren eine neue Stoff in die Krebschemotherapie eingeführt worden, nämlich die Nitroso- harnstoffe, z. B. 1 ,3-bis- (2-Chloräthyl)-1-nitrosoharnstoff (B C NU) , 1- (2-Chloräthyl)-3-cyclohexyl-l-nitrosoharnstoff (CCNU) und 1- (2-Chloräthyl)-3- (4-methylcyclohexyl)-1-nitrosoharnstoff (MeCCNU) (Proceeding of the 7th new drug se inar on the nitroso- ureas, (Washington, D.C., Dec. 15-16, 1975), Cancer Treat. Rep. , 60, 645-811 (1976)). Um Substanzen mit besserem therapeutischen
Index zu erhalten, hat man in der letzten Zeit eine Reihe neuer Nitrosoharnstoffe mit verschiedenen Substituenten, z.B. Zuckerderivate, synthetisiert und experimentell getestet. (Anderson et al. , Cancer Res. ' 76τ (1976), Hayat et al. , Cancer Chemother. Pharmacol. 3, 217 (1979).
Im Gegensatz zu den bisher synthetisierten Substanzen, han¬ delt es sich im vorliegenden Fall -um Oligopeptidester, die an der Aminogruppe eine N- (2-Chloräthyl)-N-nitroso-carbamoylgrup- pierung tragen. Als Ausgangsmaterial zur Synthese von .N-£N'-(2- ChloräthylJ-N'-nitroso carbamoyl-oligopeptidestern dienen N N'- (2-Chloräthyl)N*-nitrosq carba oylaminosäuren oder -oligopeptide , die ihrerseits zweckmäßig durch Reaktion von N-(2-Chloräthyl)-N- nitrosocarba oylazid mit Aminosäuren bzw. Oligopeptiden zugänglic sind. Unter dem Einfluß von an sich bekannten Peptidkatalysatoren wie z.B. Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) reagieren die erwähnten N N'- (2-Chloräthyl)N , -nitroso carbamoylaminosäuren bzw. -oligo¬ peptide zu Amiden, sodaß sie mit dem Ester oder Amid einer zweite Aminosäure bzw. eines zweiten Oligopeptids eine Peptidbindung bil Die Reaktion kann schematisch wie folgt dargestellt werden:
COR- COR,
C1-CH--CH--N-CO-NH-CH H-N-CH NO R„
(I) (II)
COR.
. 4
> Cl-CH 2 -CH 2 -N-CO-NH-CH B_
NO R
(III)
R 1 -R 3 - -H, CH. -CH(CH 3 ) -CH 2 -CH(CH 3 ) 2 , -CH(CH 3 )C 2 H 5 ,-C 2H 5
, -CH 2 OH, -CH(OH)CH 3 , -CH -CH 2 -S-CH 3 ,
R = OH bzw. -NH-R' ,. wobei R' einen über die terminale Aminogruppe peptidisch gebundenen Oligopeptidrest mit freier Carboxylgruppe darstellt.
^ Beispiele für R':
-Glycyl-Glycin
-Glycyl-Glycyl-Glycin und Peptide anderer Aminosäuren bis zu Tripeptid, sowie gemischt Oligopeptide wie:
Glycyl-Alanin
Alanyl-Leucin
Leucyl-Alanin
Glycyl-Tyrosin
Leucyl-Glycyl-Tyrosin
Leucyl-Glycyl-Prolin
R.=OCH_, NH_, -NHR', wobei R' Alkyl oder Aryl bzw. einen üb die terminale Aminogruppe peptidisch gebundenen Oligopeptid rest darstellt, dessen endständige Carboxylgruppe ihrerseit als Methylester oder Amid vorliegt.
Beispiele für Ri: -Glycin-Methylester -Glycyl-Glycyl-Methylester -Glycyl-Glycyl-Glycylmethylester
Peptide anderer Aminosäuren-bis Tripeptid sowie gemischte
Oligopeptide wie: '
Glycyl-Alanin-Methylester
Leucyl-Glycyl-Prolinmethylester
Leucyl-Alinin-Amid
Glycyl-Tyrosin-Amid
Die Umsetzung des Ausgangsmaterials I mit dem Ester bzw. Am einer weiteren Aminsäure oder eines Oligopeptids II, die gl oder verschieden von der ersten Aminosäure bzw. dem ersten peptid sein können, erfolgt vorzugsweise unter Kühlung (etw 0°C) , aber auch problemlos bei Raumtemperatur. Beispielswei werden 1 M N-(N'~(2-chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl)—amino- säure und 1 mM Aminosäuremethylester zusammen in 20 ml Di¬ chlormethan gelöst. In diese Lösung wird unter Rühren 1,1 . (230 mg) Dicyclhexyl-carbodiimid, gelöst in 10 ml Dichlormet langsam zugetropft. Das Reaktionsgemisch wird dann weiter ei Stunde gerührt und über Nacht bei Zimmertemperatur stehen ge
lassen. Nach Abfiltrieren von N,N'-Dicyclohexylharnstoff wi das Filtrat unter Vakuum eingeengt. Man erhält das Rohprodu das man säulenchromatographisch mit Ether/Dichlormethan unt schiedlicher Mischungsverhältnisse an Kieselgel reinigt. Na der Ξlution werden die Hauptfraktionen kombiniert und unter V eingeengt. Der Rückstand wird in Dichlormethan aufgenommen, wenn nötig mit n-Pentan versetzt, und im Kühlschrank zur Kristallisation gebracht.
Die folgenden Beispiele erläutern die Er-findung:
Beispiel 1
Herstellung von N-fN'- (2-Chloräthyl) -N'-nitroso-carbamoylj- glycyl-L-valinmethylester (allgemeine Formel III)
R-!=-H R 2 =-CH(CH 3 ) 2
N- [ 1 - (2-Chloräthyl)-N'-nitroso)-carbamoyl-glyci J(1 mM) und L-Valinmeth lester (1 mM) werden zusammen in 20 ml Di¬ chlormethan gelöst. In dieser Lösung wird unter Rühren Dicyclohexyl-carbodiimid (DCC; 1,1 mM) , gelöst in 10 ml Dichlormethan, zugetropft. Das Reaktionsgemisch wird dann noch eine Stunde gerührt und bei Zimmertemperatur über Nacht stehengelassen. Nach Abfiltrieren von N,N'-Dicyclo- hexyl-harnstoff wird das Filtrat unter Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wird durch Säulenchromatographie gereinigt (Kieselgel, eluiert mit Äther/Dichlormethan 1:10). Aus den Haup fraktionen wird das reine Produkt nach Entfernen von Lösungsmittel in Vakuum und durch Umkristallisation aus Di- chlormethan/n-Pentan erhalten. Hellgelbe Nadeln, Ausbeute: ca. 70 %, F . 97 bis 98 °C (Z-ers.); Elementaranalyse:
P Ber. : C 40,94; H 5,93; N 17,36; Gef. : C 41,09; H 6,00; ι N 17,16. Die H-NMR-spektrαskopische Untersuchung ergab charakteristische Peaks bei <£= 0,95 ppm (m, -C(CH-,) 2 );
- = 2,20 ppm (m, -CH=); & = 3,50 ppm (t, C1-CH 2 -) ;
° = 3,75 ppm (s, -OCH 3 ) ; έ = 4,20 ppm ( -N-CH 2 ~CO- und
-CH 2 -N-N.O) ; 6 = 4,60 ppm (m, -N-CH-C-) ; £ = 6,70 ppm
(d, -NH-) ; <5 = 7,70 ppm (t, -NH-) . Das Massenspektrum zeigt kein Signal für ein Molekülion, aber charakteristische
-Fragmente bei M-107 und M-108, die der Abspaltung von
Cl(CH 2 ) 2 -NNO bzw. Cl(CH 2 ) 2 ~N=N0H zuzuschreiben sind«
Beispiel 2
Herstellung von N- N' -2-Chloräthyl) -N'-nitroso-carbamoyl -L valyl-L-valinmethylester ' (allgemeine Formel III)
R 1 =R 2 = -CH(CH 3 ) 2 )
N-{N t -(2-Chloräthyl)-N'-nitroso-carbamoylJ-L-valin (1 mM) und L-Valinmethylester (1 mM) werden analog wie unter Beispiel 1 behandelt. Das Produkt kristallisiert aus Dichlo methan/n-Pentan als hellgelbe Nadeln, Ausbeute 65%, F .125 bis 126°C (Zers.); Elementaranalyse; Ber. : C 46,09; H 6,91; N 15,36; Gef. : C 46,31; H 7,10, N 15,23. Die 1 H-NMR-spektro kopische Untersuchung ergab , " folgende charakteristische Pea bei: (f-Q , S- Λ ,1ppm ' (m, f ~~ 3 7 50ppm (t, C1-CH 2 -) ; (t, -CH -N-NO) ; J =4, (d, -NH-) ; ö^=7,50ppm (d, -NH-) . Das Massenspektrum zeigt einen Molekülpeak bei 364 und Peaks bei m/e = 258 und 257 (M-107 und M-108). Die letzten beiden Peaks entstehen durch Abspaltung von C1-CH 2 -CH -N-NO oder Cl-CH 2 ~CH 2 -N-NOH, entweder durch einfache Aufspaltung der N-C-Bindung oder du eine McLafferty Umlagerung.
Beispiel 3
Herstellung von N-£N'- (2-Chloräthyl)-N 1 -nitroso-carbamoylj L-valyl-L-methioninmethylester (allgemeine Formel III) R 1 =-CH(CH 3 ) 2 ; R 2 =-CH 2 -CH 2 -SCH 3 )
N- '- (2-Chloräthyl) -N'-nitroso-carbamoylJ-L-Valin (1mM) und L-Methioninmethylester (1mM) werden analog wie unter
Beispiel 1 behandelt. Gelbliche Nadeln (Dichlormethan/n-Pen Ausbeute ca. 70%, F .81 bis 82°C (Zers.). Elementaranalyse: Ber. C 42,37; H 6,35; N 14,12; Gef.: C 42,65; H 6,50; N 14, Die H-NMR-spektroskopische Untersuchung ergab, folgende
Das Massenspektrum zeigt ein Molekülpeak bei 396 und Peaks bei m/e = 289 und 288 (M-107 und M-108).
Herstellung von N-£N'-(2-Chloräthyl)-N'-nitroso-carbamoylj- L-isoleucyl-L-leucinmethylester (allgemeine Formel III) R 1 =-CH(CH )CH 2 CH ; 2 =-CH 2 -CH(CH 3 ) 2 )
N-_ '- (2-Chloräthyl)-N'-nitroso-carbamoylj-L-isoleucin (1 mM) und L-Leucinmethylester ' (1 mM) werden analog wie unter " Beispiel 1 behandelt. Hellgelbe Nadeln ' (Dichlormethan m
r
6,30ppm (d, -NH-) ; </^=7,45ppm (d, -NH-) . Das Massenspek¬ trum zeigt ein Molekül-Peak bei 392 und Peaks von m/e = 286, 285 (M-107, M-108) .
Beispiel 5
Herstellung von N- N'- (2-Chloräthyl)- '-nitroso-carbamoylj- L-phenylalanyl-L-valinmethylester (III, R = - H 2 -CgH 5
R 2 = -CH(CH 3 ) 2
N- (N 1 -(2-Chloräthyl) -N'-nitroso) -carbamoyl-L-phenylalanin
(1 mM) und L-Valinmethylester (1 mM) werden analog wie unte
Beispiel 1 behandelt. Gelbe Nadeln (Dichlormethan/n-Pentan)
Ausbeute ca. 60%, F . 107 bis 108°C.
P Elementaranalyse: Ber. C 52,36; H 6,10; N 13,57; Gef.:
M-108).
Beispiel 6
Herstellung von - N'- (2-Chloräthyl) -N'-nitroso-carbamoyl/- L-phenylalanyl-L-leucinmethylester (allgemeine Formel III) R^-C^-CgH-. R 2 =-CH 2 -CH(CH 3 ) 2 )
N- N*- (2-Chloräthyl)-N*-nitroso-carbamoyl ^-L-phenylalanin
(1 mM) und L-Leucinmethylester (1 mM) werden analog wie unter Beispiel 1 behandelt. Hellgelbe Nadeln ' (Dichlormethan n-Pentan) , -Ausbeute ca. 60%, Fp.96 bis 96,5°C.
Elementaranalyse: Ber.: C 53,46; H 6,38; N ' 13,12; Gef.: -
Das Massenspektrum zeigt Molekül-Peaks bei 426 und Peaks be m/e = 319,318 (M-107, M-108).
Beispiel 7
Herstellung von N- £N'- (2-Chloräthyl) -N 1 -nitroso-carbamoylj- L-phenylalanyl-L-phenylalaninmethylester (allgemeine Formel III) R 1= R 2 =-CH 2 -C 6 H 5 ).
N- N'- (2-Chloräthyl) - 1 -nitroso-carbamoylJ-L-phenylalanin (1 mM) und L-Phenylalaninmethylester (1 mM) werden analog wie unter Beispiel 1 behandelt. Hellgelbe Nadeln (Dichlor¬ methan/n-Pentan) , Ausbeute ca. 60%, F .116 bis 117°C. Elementaranalyse: Ber.: C 57,33; H 5,47; N 12,16; Gef.:
Das Massenspektrum zeigt Molekül-Peaks bei 460 und Peaks bei m/e = 353, 352 ' (M-107, M-108).
Beispiel 8
Herstellung von N-^N' - (2-Chloräthyl) - 1 -nitroso-carbamoyl - L-phenylalanyl-L-methioninmethylester (allgemeine Formel I R 1 =-CH 2 -C 6 H 5 ; R 2 =CH 2 -CH 2 -§CH 3 )
N-['J'- (2-Chloräthyl) -N'-nitroso-carbamoyl -L-phenylalanin (1 mM) und L-Methioninmethylester (1 mM) werden analog wie unter Beispiel 1 behandelt. Hellgelbe Nade. In (Dichlormetha n-Pentan) , Ausbeute ca. 70%, F .74 bis 75°C. Elementaranalyse: Ber.: C 48,59; H 5,66;- N 12,59; Gef.: C 48,69;, H 5,67; N 12,41.
Die H-NMR-spektroskopische Untersuchung ergab folgende
OMFI
(d, -NH-).
Das Massenspektrum zeigt einen Molekül-Peak bei 444 und Peaks bei m/e = 337,336 (M-107, M-108).
Beispiel 9
Herstellung von N-/ ' - (2-Chloräthyl) -N ' -nitroso-carbamoyl -
L-methionyl-L-phenylalaninmethylester (allgemeine Formel
N- N'- (2-Chloräthyl)-N'-nitroso-carbamoy_i7-L-methionin (1 m und L-Phenylalaninmεthylester (1 mM) werden analog wie unte
Beispiel 1 behandelt. Hellgelbe Nadeln (Dichlormethan/ n-Pentan) ,' Ausbeute ca. 70% , Fp.70 bis 71°C.
Elementaranalyse: Ber.: C 48,59; H 5,66; N12,59; Gef.:
s Massenspektrum zeigt einen.Moϊekül-Peak bei 444 und Peaks bei m/e = 337, 336 " (M-107, M-198).
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