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Title:
RABIES VACCINE CULTURED FROM HUMAN DIPLOID CELLS AND METHOD FOR PREPARING SAME
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2015/106483
Kind Code:
A1
Abstract:
The present invention provides a rabies vaccine and a method for preparing same, and particularly relates to a rabies vaccine cultured from human diploid cells and a method for preparing same. The rabies vaccine cultured from human diploid cells comprises more than 92.0% (by mass fraction) of loose bodies in physical form, and the dissolution time of the rabies vaccine cultured from human diploid cells is 95-99 seconds.

Inventors:
HOU WENLI (CN)
CAI YONG (CN)
ZHANG TAO (CN)
Application Number:
PCT/CN2014/073116
Publication Date:
July 23, 2015
Filing Date:
March 10, 2014
Export Citation:
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Assignee:
CHENGDU KANGHUA BIOLOG PROD CO (CN)
International Classes:
A61K39/205; A61K9/19; A61K47/42; A61P31/14; F26B5/06
Foreign References:
CN102512686A2012-06-27
CN103505723A2014-01-15
Other References:
XU, BIN ET AL.: "Optimization of Procedure for Lyophilization of Live Attenuated Measles Vaccine", CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS, vol. 23, no. 12, 31 December 2010 (2010-12-31), pages 1343 - 1346
CAO, YONGMEI ET AL.: "Effect of Freeze-Dry on Brucellosis Living Vaccine", PROCEEDINGS OF 2010 ANNUAL MEETING OF CHINESE ASSOCIATION OF ANIMAL SCIENCE AND VETERINARY MEDICINE AND THE SECOND CHINA VETERINARY MEDICINE CLINICAL CONGRESS (VOLUMN 2, vol. 2, 31 December 2010 (2010-12-31), pages 1602
Attorney, Agent or Firm:
UNITALEN ATTORNEYS AT LAW (CN)
北京集佳知识产权代理有限公司 (CN)
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Claims:
权 利 要 求

1、 一种人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗,其特征在于: 所述人二倍 体细胞培养的狂犬病疫苗在物理形态上具有质量分数为 92.0%以上的疏 松体,并且所述人二倍体细胞培养的狂犬病毒疫苗的溶解时间为 95s-99s。

2、 根据权利要求 1所述的人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗,所述人 二倍体细胞培养的狂犬病疫苗包括有将人二倍体细胞作为宿主细胞接种 狂犬病毒后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病 毒半成品经冻干获得所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗,其特征在于所 述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真空阶段和干燥阶段; 所述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥;所述逐步升温干燥所设置 的温度梯度为从 -40.0°C到 -35.0°C , 温度间隔为 1 °C和 /或 0.5 °C ; 所述逐步 升温干燥中每一种温度下的干燥时间为 200-260min。

3、 根据权利要求 2所述的人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗,其特征 在于所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真空阶段和干燥阶段; 所述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥;所述逐步升温干燥中的温 度梯度分别设置为 -40.0 °C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

4、 一种权利要求 1所述的人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗的制备 方法,所述制备方法包括有将人二倍体细胞作为宿主细胞接种狂犬病毒后 扩增培养, 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品; 所述病毒半成品经 冻干获得所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗,其特征在于所述冻干包含 有以下步骤:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真空阶段和干燥阶段; 所述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥;所述逐步升温干燥所设置 的温度梯度为从 -40.0°C到 -35.0°C , 温度间隔为 1 °C和 /或 0.5 °C ; 所述逐步 升温干燥中每一种温度下的干燥时间为 200-260min。 5、 根据权利要求 4所述的制备方法, 其特征在于所述冻干步骤如 下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真空阶段和干燥阶段; 所述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥;所述逐步升温干燥中的温 度梯度分别设置为 -40.0 °C、 -39.0°C、 -38.5°C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5°C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

6、 根据权利要求 4所述的制备方法,其特征在于: 所述病毒半成品 在冻干之前在病毒半成品中每 mL加入 4.5g-5.5g的人血白蛋白。

7、 根据权利要求 4所述的制备方法,其特征在于: 所述病毒半成品 在冻干之前在病毒半成品中每 mL加入 5g的人血白蛋白。

8、 根据权利要求 4所述的制备方法,其特征在于,所述人二倍体细 胞为 WI-38、 KMB 17、 IMR-90、 MRC-5、 2BS中的任意一种。

9、 根据权利要求 4所述的制备方法,其特征在于: 所述狂犬病毒为 PM毒株或 CDKHBP- 1毒株。

10、 根据权利要求 4所述的制备方法, 其特征在于: 所述人二倍体 细胞为 WI-38, 所述狂犬病毒为 CDKHBP-1毒株。

Description:
一 一 人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗及其制备方法 本申请要求于 2014 年 01 月 17 日提交中国专利局、 申请号为 201410022611.6、 发明名称为 "人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗及其制备 方法" 的中国专利申请的优先权, 其全部内容通过引用结合在本申请中。 技术领域

本发明涉及一种狂犬病疫苗及其制备方法,具 体涉及一种人二倍体细 胞培养的狂犬病疫苗及其制备方法。 背景技术

狂犬病疫苗是由狂犬病病毒在宿主细胞上扩增 培养,然后经灭活、纯 化、冻干等步骤后得到的用于预防或治疗对狂 犬病毒有高危接触者或已感 染狂犬病毒者的疫苗。目前作为制备狂犬病疫 苗的宿主细胞可以是最早开 始使用的动物细胞如 Vero细胞, 还可以是人二倍体细胞, 前述两种宿主 细胞中,人二倍体细胞来源于人体组织,是目 前已经公知的可用于制备狂 犬病疫苗的宿主细胞;人二倍体细胞目前经过 十年的研究,其生长特性, 遗传稳定性、外源因子污染检查、致肿瘤阴性 等特征已被充分验证,另夕卜, 人二倍体细胞来源于人体组织,其用于制备疫 苗时其内的残余成分不会成 为超敏反应原, 因此, 其所制得的疫苗的安全性较高。

利用人二倍体细胞作为宿主细胞扩增培养而获 得的狂犬病毒原液需 要经过灭活、纯化、冻干等工艺步骤后才可作 为用于人体的狂犬病疫苗成 品。 前述步骤中, 无论是灭活、 纯化, 或者是冻干工艺均会对最后所获得 的狂犬病疫苗的性质有一定的影响。

扩增培养后的狂犬病毒原液经灭活和纯化后得 到的狂犬病毒半成品 在冻干过程中, 由于冻干方法、冻干工艺参数的区别常常导致 所获得狂犬 病疫苗在物理形态、 残余水分含量、溶解性等性能上具有差异,从 而导致 了狂犬病疫苗的效价稳定性有差异。

另外, 狂犬病毒半成品在冻干过程中, 为了避免效价稳定性的降低, 一般均为采用在狂犬病毒半成品中加入一定比 例的稳定剂, 如人血白蛋 白; 目前在狂犬病毒半成品每 mL中所加入的人血白蛋白的量一般为 lg - - 或 3g,或者是采用更多的加入量,如 10g;由于人血白蛋白成本价格较高, 加入过多则产品成本偏高, 若加入过少则产品的效价稳定性则较差。 发明内容

有鉴于此,本发明提供一种人二倍体细胞培养 的狂犬病疫苗,其热稳 定性和效价稳定性相对于用现有的冻干工艺制 备出的人二倍体细胞培养 的狂犬病疫苗而言具有明显的提高。

为解决以上技术问题,本发明的技术方案是采 一种人二倍体细胞培 养的狂犬病疫苗,所述人二倍体细胞培养的狂 犬病疫苗在物理形态上具有 质量分数为 92.0%以上的疏松体,并且所述人二倍体细胞培 的狂犬病毒 疫苗的溶解时间为 95s-99s。

优选的, 所述疏松体为乳白色。

优选的,所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗 包括有将人二倍体细胞 作为宿主细胞接种狂犬病毒后扩增培养、收获 病毒原液并灭活、纯化得病 毒半成品,所述病毒半成品经冻干获得所述人 二倍体细胞培养的狂犬病疫 苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥所设置的 温度梯度为从 -40.0°C到 -35.0°C , 温度间隔为 1 °C和 /或 0.5 °C ; 所述逐步升 温干燥中每一种温度下的干燥时间为 200-260min。

优选的, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

本发明与现有技术相比, 其详细说明如下:

本发明所采用的技术方案为所述人二倍体细胞 培养的狂犬病疫苗在 物理形态上具有质量分数为 92.0%以上的疏松体,并且所述人二倍体细胞 培养的狂犬病疫苗的溶解时间为 95s-99s。 - - 本发明所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗为 了解决现有的利用同 样的宿主细胞培养出的狂犬病疫苗在效价稳定 性上的不足之处,主要采用 了将狂犬病疫苗产品的物理形态进行调整,将 狂犬病疫苗产品在物理形态 上所具有疏松体的含量进行提高, 当其含量达到 92.0%以上, 同时所得疫 苗产品的溶解时间为 95s-99s时, 其所得到的狂犬病疫苗的效价稳定性可 以得到明显的提高;下文中分别通过热稳定性 试验和效价稳定性试验来说 明, 具体可详见实施例部分。

本发明所述人二倍体细胞可以是现有常用的任 一种人二倍体细胞株 系, 包括有 WI-38、 KMB 17、 IMR-90、 MRC-5、 2BS等。

进一步的,本发明所述人二倍体细胞培养的狂 犬病疫苗可优选为以下 制备方法所得:包括有将人二倍体细胞作为宿 主细胞接种狂犬病毒后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品经冻干 获得所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥所设置的 温度梯度为从 -40.0°C到 -35.0°C , 温度间隔为 1 °C和 /或 0.5 °C ; 所述逐步升 温干燥中每一种温度下的干燥时间为 200-260min。

本发明所述人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗可 采用其他的方式制备 成物理形态中质量分数 90%以上为疏松体, 并且溶解时间为 95s-99s的疫 苗产品,但本发明主要采用对其制备方法中所 获得的病毒半成品在冻干步 骤中各种参数的改进来达到本发明的目的。如 前所述,本发明可进一步的 优选在冻干步骤中对逐步升温干燥中的温度梯 度设置以及每一温度下的 干燥时间进行调整,具体改进为所述逐步升温 干燥所设置的温度梯度为从 -40.0°C到 -35.0°C , 温度间隔为 1 °C和 /或 0.5 °C ; 所述逐步升温干燥中每一 种温度下的干燥时间为 200-260min的方式, 从而得到效价稳定性更好的 狂犬病疫苗产品。

本发明所述温度间隔为 1 °C和 /或 0.5 °C , 可以是从 -40.0°C到 -35.0°C之 间均为 1 °C的间隔, 即 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.0°C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.0 °C的温度梯度; 还可以是从 -40.0°C到 -35.0°C之间均为 0.5 °C的间隔, 即 -40.0°C、 -39.5 °C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 - -

-36.0°C、 -35.5 °C、 -35.0°C的温度梯度; 更可以是从 -40.0°C到 -35.0°C之间 均可以有 1 °C和 0.5 °C的间隔, 例如 -40.0°C、 -39.5 °C、 -39.0°C、 -38.0°C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.5 °C、 -35.0°C的温度梯度。

本发明为了得到效价稳定性进一步提高的狂犬 并疫苗,可对前述逐步 升温干燥步骤中的温度梯度设置进行进一步的 筛选, 同时,每一种温度下 的干燥时间同样可进一步的筛选;通过本发明 人的大量实验研究证实,本 发明中若进一步优选采用所述温度梯度设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C , 并且每一种温度 下的干燥时间均为 240min时, 其所获得的人二倍体细胞培养的狂犬病疫 苗产品在效价稳定性上可以进一步的得到提高 。

本发明的第二个目的在于提供一种前述的人二 倍体细胞培养的狂犬 病疫苗的制备方法,所述制备方法包括有将人 二倍体细胞作为宿主细胞接 种狂犬病毒后扩增培养, 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品; 所述 病毒半成品经冻干获得所述人二倍体细胞培养 的狂犬病疫苗,所述冻干包 含有以下步骤:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥所设置的 温度梯度为从 -40.0°C到 -35.0°C , 温度间隔为 1 °C和 /或 0.5 °C ; 所述逐步升 温干燥中每一种温度下的干燥时间为 200-260min。

采用本发明所述制备方法中的冻干步骤所得到 的狂犬病疫苗能够达 到本发明的目的, 即其效价稳定性相对于现有的狂犬病疫苗更高 。

优选的, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

进一步的, 本发明可优选对所述的冻干步骤进行改进, 具体如前述, 其改进后所得的狂犬病疫苗产品的效价稳定性 进一步提高。

进一步的,本发明制备方法中优选采用所述病 毒半成品在冻干之前在 病毒半成品中每 mL力口入 4.5g-5.5g的人血白蛋白。

人学白蛋白是一种价格较为昂贵的试剂,其病 毒疫苗的制备中常常作 为冻干之间加入病毒半成品中的稳定剂来使用 ,但由于其成本偏高, 因此 大多狂犬病毒半成品多采用在其每 mL内加入 lg或 3g的人血白蛋白,但 其所获得的疫苗产品在效价稳定性上常常不够 理想。

但若采用在狂犬病毒半成品每 mL中加入 10g的人血白蛋白,则成本 过于偏高, 没有实际的生产价值。 鉴于上述原因, 本发明中进一步研究了 人血白蛋白的加入量在成本和效价上的平衡问 题,即可采用加入每 mL病 毒半成品的 4.5g-5.5g的人学白蛋白的方式, 从而即可达到成本控制, 同 时其经冻干后得到的效价稳定性可达到较好的 效果。

进一步的,本发明制备方法中优选采用所述病 毒半成品在冻干之前在 病毒半成品中每 mL加入 5g的人血白蛋白。 作为本发明的进一步优选的 实施方式, 人血白蛋白的加入量可调整为每 mL病毒半成品中加入 5g。

进一步的, 本发明制备方法中优选采用所述人二倍体细胞 为 WI-38、 KMB 17、 IMR-90、 MRC-5、 2BS中的任意一种。 本发明中所述的人二倍 体细胞可选用现有常用的人二倍体细胞株系, 也可选用本发明的优选实施 方式。

进一步的, 本发明制备方法中优选采用所述狂犬病毒为 PM毒株或 CDKHBP-1毒株。

进一步的, 本发明制备方法中优选采用所述人二倍体细胞 为 WI-38, 所述狂犬病毒为 CDKHBP-1毒株。 作为本发明的优选实施方式, 本发明 中优选采用当人二倍体细胞为 WI-38时, 狂犬病毒为 CDKHBP-1毒株。 具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的 技术方案,下面结合具 体实施例对本发明作进一步的详细说明。

对照例 1

将人二倍体细胞 IMR-90作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白,然后所得病毒半成品经 干获得对照例 1 - - 人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 —38.0°C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.0 °C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间 为 200min。

对照例 2

将人二倍体细胞 IMR-90作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白,然后所得病毒半成品经 干获得对照例 2 人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.5 °C、 -39.0 °C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0 °C、 -35.5 °C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一 种温度下的干燥时间为 200-260min。

对照例 3

将人二倍体细胞 IMR-90作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白,然后所得病毒半成品经 干获得对照例 3 人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.5 °C、 -39.0 °C、 -38.0°C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.5 °C、 -35.0 °C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间 为 200min。

对照例 4

将人二倍体细胞 IMR-90作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白,然后所得病毒半成品经 干获得对照例 4 人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下: - - 冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0 °C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 200min。

对照例 5

将人二倍体细胞 IMR-90作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白,然后所得病毒半成品经 干获得对照例 5 人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.0 °C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间 为 260min。

对照例 6

将人二倍体细胞 IMR-90作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白,然后所得病毒半成品经 干获得对照例 6 人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.5 °C、 -39.0 °C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0 °C、 -35.5 °C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一 种温度下的干燥时间为 260min。

对照例 7

将人二倍体细胞 IMR-90作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白,然后所得病毒半成品经 干获得对照例 Ί 人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 - - 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.5°C、 -39.0°C、 -38.0°C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.5 °C、 -35.0 °C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间 为 260min。

对照例 8

将人二倍体细胞 IMR-90作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白,然后所得病毒半成品经 干获得对照例 8 人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5°C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 260min。

对照例 9

将人二倍体细胞 IMR-90作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白,然后所得病毒半成品经 干获得对照例 9 人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5°C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

对照例 10

将人二倍体细胞 IMR-90作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 3g含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对照例 10人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 - - 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

对照例 11

将人二倍体细胞 IMR-90作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 4.5g含量的人血白蛋白,然后所得病毒半成品 冻干获得对照例 11人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

对照例 12

将人二倍体细胞 IMR-90作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 5.5g含量的人血白蛋白,然后所得病毒半成品 冻干获得对照例 12人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

对照例 13

将人二倍体细胞 IMR-90作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 5g含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对照例 13人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 - - 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5°C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

对照例 14

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对照例 14人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 —38.0°C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间 为 200min。

对照例 15

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对照例 15人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.5°C、 -39.0°C、 -38.5°C、 -38.0°C、 -37.5°C、 -37.0°C、 -36.5°C、 -36.0°C、 -35.5°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一 种温度下的干燥时间为 200min。

对照例 16

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对照例 16人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 - - 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.5°C、 -39.0°C、 -38.0°C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.5 °C、 -35.0 °C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间 为 200min。

对照例 17

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对照例 17人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5°C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 200min。

对照例 18

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对照例 18人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.0°C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间 为 260min。

对照例 19

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对照例 19人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.5°C、 -39.0°C、 -38.5°C、 -38.0°C、 -37.5°C、 - -

-37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.5 °C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一 种温度下的干燥时间为 260min。

对照例 20

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对照例 20人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.5 °C、 -39.0°C、 -38.0°C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.5 °C、 -35.0 °C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间 为 260min。

对照例 21

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对照例 21人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 260min。

对照例 22

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对照例 22人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 - -

-36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

对照例 23

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 3g含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对照例 23人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

对照例 24

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 4.5g含量的人血白蛋白,然后所得病毒半成品 冻干获得对照例 24人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

对照例 25

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 5.5g含量的人血白蛋白,然后所得病毒半成品 冻干获得对照例 25人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 - -

-36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

对照例 26

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 PM毒株后扩增 培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品中每 mL加入 5g含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对照例 26人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

对照例 27

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 CDKHBP-1毒株 后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品 中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对 照例 27人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 —38.0°C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间 为 200min。

对照例 28

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 CDKHBP-1毒株 后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品 中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对 照例 28人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.5 °C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.5 °C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一 - - 种温度下的干燥时间为 200min。

对照例 29

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 CDKHBP-1毒株 后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品 中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对 照例 29人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.5 °C、 -39.0°C、 -38.0°C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.5 °C、 -35.0 °C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间 为 200min。

对照例 30

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 CDKHBP-1毒株 后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品 中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对 照例 30人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 200min。

对照例 31

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 CDKHBP-1毒株 后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品 中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对 照例 31人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.0°C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间 为 260min。 - - 对照例 32

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 CDKHBP-1毒株 后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品 中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对 照例 32人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.5°C、 -39.0°C、 -38.5°C、 -38.0°C、 -37.5°C、 -37.0°C、 -36.5°C、 -36.0°C、 -35.5°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一 种温度下的干燥时间为 260min。

对照例 33

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 CDKHBP-1毒株 后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品 中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对 照例 33人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.5°C、 -39.0°C、 -38.0°C、 -37.0°C、 -36.0°C、 -35.5 °C、 -35.0 °C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时间 为 260min。

对照例 34

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 CDKHBP-1毒株 后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品 中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对 照例 34人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5°C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 260min。 - - 对照例 35

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 CDKHBP-1毒株 后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品 中每 mL加入 lg含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对 照例 35人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

对照例 36

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 CDKHBP-1毒株 后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品 中每 mL加入 3g含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对 照例 36人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

对照例 37

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 CDKHBP-1毒株 后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品 中每 mL加入 4.5g含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得 对照例 37人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5 °C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。 - - 对照例 38

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 CDKHBP-1毒株 后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品 中每 mL加入 5.5g含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得 对照例 38人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5°C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

对照例 39

将人二倍体细胞 WI-38作为宿主细胞接种狂犬病毒 CDKHBP-1毒株 后扩增培养、 收获病毒原液并灭活、 纯化得病毒半成品, 所述病毒半成品 中每 mL加入 5g含量的人血白蛋白, 然后所得病毒半成品经冻干获得对 照例 39人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗, 所述冻干步骤如下:

冻干步骤中包括有升温阶段、预冻阶段、抽真 空阶段和干燥阶段; 所 述干燥阶段包括有逐步升温干燥和解析干燥; 所述逐步升温干燥中的温度 梯度分别设置为 -40.0°C、 -39.0°C、 -38.5 °C、 -38.0°C、 -37.5°C、 -37.0°C、 -36.5 °C、 -36.0°C、 -35.0°C ; 所述逐步升温干燥中每一种温度下的干燥时 间为 240min。

前述对照例 1-39在制备过程中其他步骤如病毒扩增培养、 病毒原液 灭活、纯化等可采用现有制备人二倍体细胞培 养的狂犬病疫苗的方法; 另 外对照例 1-39中所述冻干中的其他步骤均可采用现有常 的制备方法, 本发明对照例 1-39中优选为采用以下冻干工艺参数:

预冻阶段为温度 -50.0 °C、 时间为 120min; 真空度为 0.2mbar

( lbar=0.1Mpa,lbar=1000mbar ); 解析干燥分为两次, 第一次温度为 15 °C , 时间为 180min, 第二次温度为 30.0 °C , 时间为 180min。

上述对照例 1-39中所述的各材料的来源如下:

人二倍体细胞 IMR-90: 购自 ATCC

人二倍体细胞 WI-38: 购自 ATCC - - 狂犬病毒 PM毒株: 购自 ATCC

狂犬病毒 CDKHBP-1毒株: 购自康华生物有限公司

人血白蛋白: 购自成都蓉生药业有限责任公司

其余步骤中未明确写明的试剂或材料等均可采 用从市售获取的方式 获得。

实施例 1 __对照例 1-39的产品指标测定实验

每个对照例 1-39分别随机抽取 100支疫苗产品, 然后均按照现行版 《中国生物制品规程》(《中国药典》 2010版三部 pl l l〜113 )分别检测其 各成品中的物理形态、 颜色、 残余水分含量、 溶解时间等产品指标, 所得 各产品指标的结果列于下表一中:

- -

对照例 1-39人二倍体细胞培养的狂犬病疫苗其余产品 标检测结果 中, 物理形态均无塌陷裂缝,颜色均为均匀白色, 残余水分质量含量均在 .1%- 1.8%之间。

实施例 2 __对照例 27-39的产品热稳定性实验

将对照例 27-39分别置于 37°C环境保存 7d、 14d、 28d, 按照现行版

《中国生物制品规程》(《中国药典》 2010版三部 pl l l〜113 )对其进行效 - - 价测定, 效价不低于 2.5IU/剂量为合格;

所得各效价的区间分别如下:

A—— 2.51-2.80; B—— 2.81-3.10; C- -3.11-3.40; D -3.41-3.70; E—— 3.71-4.00; F—— 4.01-4.30; G— -4.31-4.60; Η- -4.61-4.90; I—— 4.91-5.20; J—— 5.21-5.50; K一 -5.51-5.80; L- 5.81-6.10; Μ—— 6.11-6.40; Ν—— 6.41-6.70; Ο —6.71-7.00; Ρ -7.01-7.30; Q—— 7.31-7.60; R—— 7.61-7.90; S— -7.91-8.20; Τ- -8.21-8.50; U—— 8.51-8.80; V—— 8.81-9.10; W- —9.11-9.40; X -9.41-9.70; Υ—— 9.71-10.0;

所得各结果如下表二:

表二

实施例 3 __对照例 27-39的产品的效价稳定性实验

将对照例 27-39分别置于 2-8 °C环境保存 2年、 2.5年, 3年, 然后分 别抽样并按照《中国生物制品规程》(《中国 药典》 2010版- -部 pl l l〜113 ) 进行效价测定, 所得结果如下表三:

以上对本发明所提供的一种人二倍体细胞培养 的狂犬病疫苗及其制 进行了阐述,以上实施例的说明只是用于帮助 理解本发明的方法及其核心 思想。应当指出, 对于本技术领域技术人员来说, 在不脱离本发明原理的 前提下,还可以对本发明进行若干改进和修饰 ,这些改进和修饰也落入本 发明权利要求的保护范围内。