STEREO-ISOMERE DU FLOCOUMAFENE, COMPOSITION ET APPAT RODONTICIDE LE COMPRENANT, PROCEDE DE LUTTE CONTRE DES RONGEURS CIBLES NUISIBLES

L'invention concerne un stéréo-isomère de configuration du flocoumafène, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles. L'invention concerne aussi un procédé d'obtention d'un tel stéréo-isomère de configuration du flocoumafène. L'invention concerne donc le domaine technique de la lutte contre des populations de rongeurs cibles nuisibles.

II est connu d'utiliser des poisons sous forme d'appâts rodonticides contre des rongeurs cibles nuisibles. On connaît de WO2005/072524 un appât rodonticide comprenant une proportion de flocoumafène de 50 ppm dans l'appât et une proportion de fipronil de 40 ppm.

Un tel appât est susceptible d'être consommé par des animaux autres que des rongeurs cibles nuisibles lorsqu'il est mis à la disposition de rongeurs cibles nuisibles. Il peut être consommé directement (consommation primaire) par des animaux domestiques ou des animaux de compagnie. Il peut aussi être consommé accidentellement par des humains. Une telle consommation peut produire chez ces animaux domestiques, chez ces animaux de compagnie ou chez des humains un empoisonnement qui peut être létal.

En outre, une fraction du flocoumafène de ces appâts rodonticides peut être ingérée (consommation secondaire) par des animaux -notamment par des oiseaux- prédateurs ou charognards de rongeurs nuisibles et notamment de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé un tel appât rodonticide. Cette consommation secondaire est susceptible d'entraîner à terme la mort par intoxication secondaire de ces animaux prédateurs ou charognards qui peuvent être des animaux -notamment des oiseaux- appartenant à des espèces protégées.

L'invention vise donc à pallier ces inconvénients en proposant un stéréo-isomère de configuration du flocoumafène, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour contrôler les populations de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d'empoisonnement d'animaux non-cibles -notamment des animaux domestiques ou d'élevage, des animaux de compagnie ou des humains- consommant accidentellement un tel appât rodonticide.

L'invention vise donc à pallier ces inconvénients en proposant un stéréo-isomère de configuration du flocoumafène, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour contrôler les populations de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d'empoisonnement secondaire d'animaux -par exemple de renards ou d'oiseaux- sauvages prédateurs de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé de l'appât rodonticide ou d'animaux sauvages charognards de rongeurs cibles nuisibles morts empoisonnés.

L'invention vise aussi à proposer un stéréo-isomère de configuration du flocoumafène, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont respectueux de l'environnement, de la santé humaine et des animaux non cibles -notamment des oiseaux, et en particulier des rapaces-.

L'invention vise aussi à proposer un stéréo-isomère de configuration du flocoumafène, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dont la mise en œuvre est en accord avec les règles de bon usage -notamment vis à vis de la protection des oiseaux, et en particulier des rapaces-.

L'invention vise aussi à proposer un stéréo-isomère de configuration du flocoumafène, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont susceptibles de pouvoir être utilisés pour lutter contre des rongeurs cibles nuisibles susceptibles d'être résistants à des appâts connus de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles.

L'invention vise donc à proposer une alternative à des appâts rodonticides connus.

Pour ce faire, l'invention concerne un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E _l5 du flocoumafène, ledit énantiomère Ei présentant, par analyse chromatographique d'une composition de flocoumafène comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du flocoumafène effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention ti de valeur telle que ti < t ₂ < t ₃ < t ; t ₂ , t ₃ et t ₄ représentant les temps de rétention des stéréo-isomères de configuration du flocoumafène distincts dudit énantiomère E ₁ , ladite analyse étant réalisée à la température de 23,5°C et dans les conditions suivantes :

- sur une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-chloro-3-méthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 A ;

- en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0, 1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 92/8 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ;

- par injection dans la colonne pour chromatographie d'un volume de 1 de composition de flocoumafène à une concentration de 1 μg de flocoumafène par millilitre d'acétonitrile.

Dans tout le texte :

- le terme « flocoumafène » désigne le composé de formule 3-[4-(4- trifluorométhylbenzyloxy)phényl-4-yl]-l-(4-hydroxycoumarin -3-yl)- l,2,3,4- tétrahydronaphtalène ou 4-hydroxy-3- [ 1 ,2,3,4-tétrahydro-3- [4- [[4-

(trifluorométhyl)phény 1] méthoxy ] phényl] - 1 -naphthalényl] - 2H- 1 -benzopyran- 2- one, ou 4-hydroxy-3- [ 1 ,2,3,4-tétrahydro-3- [4-(4-trifluorométhylbenzyloxy) phényl] -l-naphthyl]coumarine de formule (I) ci-après :

dans laquelle sont représentés les numéros des carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène ;

- le terme « stéréo-isomères » désigne des isomères de même formule semi-développée, mais dont la position relative des atomes diffère dans l'espace.

L'expression « stéréo-isomères de configuration » désigne les stéréo-isomères dont la conversion de l'un en l'autre de ces stéréo-isomères de configuration nécessite une rupture/reformation d'une liaison covalente interatomique. Ainsi, l'expression « stéréo-isomères de configuration » désigne les stéréo-isomères qui ne sont pas des isomères de conformation (ou « rotamères », dont la conversion de l'un en l'autre des isomères de conformation s'accompagne uniquement d'une rotation d'une partie de la molécule selon l'axe d'une liaison σ (sigma) formée par recouvrement axial d'orbitales) ;

- le terme « quantité » s'entend d'une quantité molaire, d'une quantité massique ou d'une quantité volumique. Les proportions sont donc des proportions d'une quantité molaire rapportée à une quantité molaire, d'une quantité massique rapportée à une quantité massique, ou d'une quantité volumique rapportée à une quantité volumique ;

- le terme « sensiblement » indique, de façon habituelle, qu'une caractéristique structurelle ou fonctionnelle ne doit pas être prise comme marquant une discontinuité abrupte, qui n'aurait pas de sens physique, mais couvre non seulement cette structure ou cette fonction, mais également des variations légères de cette structure ou de cette fonction qui produisent, dans le contexte technique considéré, un effet de même nature, sinon de même degré ;

- les expressions « chromatographie liquide à haute pression » ou

« chromatographie liquide à haute performance » (« CLHP ») désignent la chromatographie « HPLC » ou « High Performance Liquid Chromatography », et ; - l'expression « temps de rétention » désigne la durée mesurée au sommet du pic de chromatogramme pendant laquelle un composé est retenu sur la colonne de chromatographie.

L'invention concerne donc ledit énantiomère E ₁ à l'état isolé et qui présente la propriété de pouvoir être élué, dans les conditions de chromatographie décrites ci-dessus, le premier par rapport aux quatre stéréo- isomères de configuration du flocoumafène.

Les inventeurs ont observé que l'analyse du flocoumafène par chromatographie liquide à haute pression dans les conditions décrites ci-dessus fait apparaître quatre signaux ou pics correspondant à quatre composés de même formule chimique développée et correspondant à la formule (I) du flocoumafène. Ils ont déterminé, par l'analyse de préparations de flocoumafène comprenant des proportions variables des deux diastéréoisomères du flocoumafène que :

- le composé correspondant au signal de temps de rétention ti d'une valeur de l'ordre de 4,5 min est un énantiomère, dit énantiomère E _l5 de l'un des deux diastéréoisomères, dit diastéréoisomère D _1;4 , du flocoumafène ;

- le composé correspondant au signal de temps de rétention t ₄ d'une valeur de l'ordre de 9,3 min est l'autre énantiomère, dit énantiomère E ₄ , dudit diastéréoisomère D _1;4 , distinct dudit énantiomère E ₁ ;

- le composé correspondant au signal de temps de rétention t ₂ d'une valeur de l'ordre de 6,2 min est un énantiomère, dit énantiomère E ₂ , de l'autre diastéréoisomère, dit diastéréoisomère D _{2 3} , du flocoumafène, distinct dudit diastéréoisomère D _1;4 , et ;

- le composé correspondant au signal de temps de rétention t ₃ d'une valeur de l'ordre de 6,8 min est l'autre énantiomère, dit énantiomère E ₃ , dudit diastéréoisomère D _{2 3} , distinct dudit énantiomère E ₂ .

Les valeurs des temps de rétention t _l5 t ₂ , t ₃ et t ₄ sont susceptibles de varier, notamment avec la température de la colonne de chromatographie. Cependant, dans ces conditions chromatographiques, l'ordre d'élution des énantiomères du flocoumafène reste inchangé. L'un des deux diastéréoisomères du flocoumafène est un stéréo-isomère de configuration du flocoumafène dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène du flocoumafène sont de même configuration absolue et l'autre des deux diastéréoisomères du flocoumafène est un stéréo-isomère de configuration du flocoumafène dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1 ,2,3,4-tétrahydronaphtalène du flocoumafène sont de configurations absolues distinctes, les configurations absolues étant déterminées selon les règles séquentielles de priorité et la nomenclature de Cahn, Ingold et Prelog.

Les inventeurs ont réalisé une telle séparation des stéréo-isomères de configuration, c'est-à-dire des énantiomères des deux diastéréoisomères, du flocoumafène par chromatographie liquide à haute pression sur colonne chirale LUX ^® Cellulose-4 (00F-4490-B0, phenomenex, Le Pecq, France). Le cas échéant, il est possible de réaliser successivement plusieurs étapes de chromatographie liquide à haute pression sur colonne chirale aux fins d'obtenir la quantité dudit énantiomère Ei recherchée à la pureté souhaitée. Il est aussi possible de réaliser une telle séparation par chromatographie liquide à haute pression sur colonne chirale préparative de plus grandes dimensions -notamment de diamètre intérieur supérieur à 2 mm- et dans laquelle la phase stationnaire présente une granulométrie supérieure à 3 μπα. Les inventeurs ont obtenu ledit énantiomère Ei purifié et séparé de l'énantiomère E ₄ dudit diastéréoisomère D _1;4 du flocoumafène et des énantiomères E ₂ et E ₃ dudit diastéréoisomère D _{2 3} du flocoumafène par élimination de la phase mobile de la fraction collectée et contenant ledit énantiomère Ε^

II n'était pas connu antérieurement de méthode pour séparer les énantiomères dudit diastéréoisomère D _1;4 du flocoumafène. Dans ces conditions expérimentales, les énantiomères (E ₁ et E ₄ ) dudit diastéréoisomère D _1;4 sont efficacement séparés et purifiés par chromatographie liquide à haute pression. Dans ces conditions chromatographiques, on sépare aussi les énantiomères dudit diastéréoisomère D _2,3 du flocoumafène.

L'invention concerne donc ledit énantiomère E ₁ dudit diastéréoisomère D _{1 4} qui est le moins retenu (de plus faible temps de rétention) des quatre énantiomères des diastéréoisomères du flocoumafène séparés par chromatographie dans les conditions précitées.

L'invention concerne donc ledit énantiomère E ₁ séparé de Γ énantiomère E ₄ dudit diastéréoisomère D _1;4 et séparé de chaque énantiomère dudit diastéréoisomère D _{2 3} .

L'invention concerne aussi un procédé chromatographique de séparation des stéréo-isomères de configuration -notamment desdits énantiomères Ei et E ₄ dudit diastéréoisomère D _1;4 et desdits énantiomères E ₂ et E ₃ dudit diastéréoisomère D _{2 3} . L'invention concerne aussi un procédé chromatographique d'obtention dudit énantiomère E ₁ selon l'invention.

L'invention concerne donc un tel procédé chromatographique d'obtention dudit énantiomère E ₁ selon l'invention, dans lequel :

- on choisit une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-chloro-3-méthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 A ;

- on choisit, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0, 1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 92/8 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ;

- on réalise une séparation des stéréo-isomères de configuration du flocoumafène à température ambiante lors de laquelle ;

- on introduit en tête de la colonne pour chromatographie une composition liquide comprenant dudit énantiomère E ₁ , puis ;

- on entraîne la composition liquide avec la phase mobile dans la colonne pour chromatographie dans des conditions propres à séparer les stéréo-isomères de configuration du flocoumafène, et on collecte une fraction de la phase mobile comprenant ledit énantiomère E ₁ avec un temps de rétention ti de valeur telle que ti < t ₂ < t ₃ < t ₄ ; t ₂ , t ₃ et t ₄ représentant les temps de rétention de chacun des stéréo-isomères de configuration du flocoumafène distincts dudit énantiomère E ₁ , séparément dudit énantiomère E ₄ de temps de rétention t ₄ , et ;

- on élimine la phase mobile liquide de ladite fraction de façon à obtenir ledit énantiomère Ei.

L'invention concerne aussi ledit énantiomère E ₁ obtenu par un procédé selon l'invention.

L'invention concerne aussi une composition comprenant dudit énantiomère Ei selon l'invention, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E ₁ et dudit énantiomère E ₄ .

L'invention concerne donc une composition comprenant un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E _l5 du flocoumafène, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E ₁ et d'un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E ₄ , du flocoumafène ;

- ledit énantiomère E ₁ présentant, par analyse chromatographique d'une composition de flocoumafène comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du flocoumafène effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention ti ;

- ledit énantiomère E ₄ présentant, par analyse chromatographique d'une composition de flocoumafène comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du flocoumafène effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t ₄ ;

ti et t étant de valeurs telles que ti < t ₂ < t ₃ < t , t ₂ et t ₃ représentant les temps de rétention de chacun des stéréo-isomères de configuration du flocoumafène distincts dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E ₄ , ladite analyse étant réalisée à la température de 23,5 °C et dans les conditions suivantes :

^■ sur une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-chloro-3-méthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 A ; ^■ en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0, 1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 92/8 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ;

■ par injection dans la colonne pour chromatographie d'un volume de 1 μΕ de composition de flocoumafène à une concentration de 1 μg de flocoumafène par millilitre d'acétonitrile.

L'invention concerne donc une telle composition comprenant dudit énantiomère E _l5 à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E ₁ et dudit énantiomère E ₄ , c'est-à-dire à l'exclusion d'une composition dans laquelle ledit énantiomère E ₁ et ledit énantiomère E ₄ sont en mélange équimoléculaire et non optiquement actif.

On dose ledit énantiomère E ₁ et ledit énantiomère E ₄ de toute composition comprenant du flocoumafène par analyse et séparation par chromatographie en utilisant une phase stationnaire chirale et une phase mobile liquide telles que décrites ci-dessus pour l'analyse des stéréo-isomères de configuration du flocoumafène, en réalisant une détection quantitative des énantiomères des diastéréoisomères du flocoumafène en sortie de colonne séparative, par exemple par photométrie ou spectrophotométrie d'absorption, en ajustant la concentration en flocoumafène et le volume d'injection aux fins d'obtenir une détection optimale et en mesurant la valeur de l'aire sous le pic de chaque énantiomère E ₁ et E ₄ . Il est aussi possible de doser ledit énantiomère E ₁ et ledit énantiomère E ₄ de toute composition comprenant du flocoumafène en réalisant une détection par spectrométrie de masse en sortie de colonne séparative.

Avantageusement et selon l'invention, la quantité dudit énantiomère E ₁ est supérieure à la quantité dudit énantiomère E ₄ dans la composition. Dans la composition ledit diastéréoisomère D _1;4 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E ₁ . La composition selon l'invention comprend dudit diastéréoisomère D _1;4 majoritairement sous forme dudit énantiomère Ei.

Dans tout le texte, l'expression « ledit diastéréoisomère D _1;4 est majoritairement sous forme dudit énantiomère E ₁ » signifie que le rapport de la quantité (massique, molaire ou volumique) dudit énantiomère Ei sur la quantité (massique, molaire ou volumique correspondante) dudit diastéréoisomère D _1;4 (sous toutes ses formes énantiomères) est supérieur à 50%.

Ainsi, en particulier dans une composition selon l'invention :

- le rapport de la quantité dudit énantiomère Ei sur la somme de la quantité dudit énantiomère E ₁ et de la quantité dudit énantiomère E ₄ est supérieur à 0,5 (supérieur à 50 %) ;

- le rapport de la concentration dudit énantiomère E ₁ sur la somme de la concentration dudit énantiomère E ₁ et de la concentration dudit énantiomère E ₄ est supérieur à 0,5 (supérieur à 50 %), et ;

- la proportion dudit énantiomère E ₁ dans la composition est supérieure à la proportion dudit énantiomère E ₄ dans la composition.

Avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère Ei telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère E ₁ et de la quantité dudit énantiomère E ₄ présents dans la composition est supérieur à 50%, notamment supérieur à 60%, en particulier supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, plus préférentiellement supérieur à 95%, particulièrement préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l'ordre de 100%.

Dans un mode particulier de réalisation, avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère E ₁ telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère Ei et de la quantité dudit énantiomère E ₄ présents dans la composition est supérieur à 75 %, de préférence compris entre 85 % et 100 %, plus préférentiellement compris entre 90 % et 98 %.

Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère Ei telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère E ₁ et de la quantité dudit énantiomère E ₄ présents dans la composition est compris entre 98 % et 100 .

La composition peut aussi comprendre une quantité dudit énantiomère E ₄ telle que le rapport de cette quantité sur la somme de la quantité dudit énantiomère Ei et de la quantité dudit énantiomère E ₄ présents dans la composition est inférieur à 50 , notamment inférieur à 25 , préférentiellement compris entre 0 % et 25 , en particulier inférieur à 10 .

Avantageusement et selon l'invention, le flocoumafène est majoritairement sous forme dudit énantiomère Ei dans la composition. La composition comprend donc une quantité dudit énantiomère E ₁ telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du flocoumafène dans la composition est supérieur au rapport de la quantité dudit énantiomère E ₄ sur la quantité du flocoumafène dans la composition et supérieur au rapport de la quantité de chaque énantiomère dudit diastéréoisomère D ₂ ,3 sur la quantité du flocoumafène dans la composition.

Ainsi, en particulier, dans une composition selon l'invention :

le rapport de la quantité dudit énantiomère E ₁ sur la quantité du flocoumafène est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ;

- le rapport de la quantité dudit énantiomère Ei sur la somme des quantités de chaque énantiomère dudit diastéréoisomère Ό _{1 4} et des quantités de chaque énantiomère dudit diastéréoisomère D _{2 3} est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ;

le rapport de la concentration dudit énantiomère E ₁ dans la composition sur la concentration du flocoumafène dans la composition est supérieur à 0,25 (supérieur à 25 %) ;

la proportion dudit énantiomère E ₁ dans la composition est supérieure à la proportion de chaque énantiomère dudit diastéréoisomère D _{2 3} dans la composition et à la proportion dudit énantiomère E ₄ dans la composition.

Avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère E ₁ telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du flocoumafène dans la composition est supérieur à 25%, notamment supérieur à 50%, en particulier supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, particulièrement préférentiellement supérieur à 95%, plus préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l'ordre de 100%.

Dans un mode particulier de réalisation, avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère Ei telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du flocoumafène dans la composition est supérieur à 70 %, de préférence compris entre 80 % et 100 %, plus préférentiellement compris entre 90 % et 100 %.

Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère Ei telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du flocoumafène dans la composition est compris entre 95 % et 99 %.

Dans un autre mode de réalisation particulier, avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère Ei telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du flocoumafène dans la composition est supérieur à 95%.

Dans un autre mode de réalisation, avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère E ₁ telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du flocoumafène dans la composition est compris entre 98% et 100 % -bornes incluses-.

Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux selon l'invention, la composition comprend une quantité dudit énantiomère E ₁ telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du flocoumafène dans la composition est sensiblement de l'ordre de 100 %.

Une composition selon l'invention peut être sensiblement exempte dudit énantiomère E ₄ , c'est à dire que ledit énantiomère E ₄ peut éventuellement être présent dans la composition mais seulement à l'état de traces. Une composition selon l'invention peut aussi être sensiblement exempte dudit diastéréoisomère D ₂ ,3, c'est à dire que ledit diastéréoisomère D _{2 3} peut éventuellement être présent dans la composition mais seulement à l'état de traces.

Avantageusement et selon l'invention, la composition peut être à l'état liquide et comprendre un solvant liquide du flocoumafène. Il peut s'agir d'une solution de flocoumafène dans un solvant du flocoumafène, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E ₁ et dudit énantiomère E ₄ . Il peut aussi s'agir d'une solution comprenant du flocoumafène dans un solvant du flocoumafène et dans laquelle la quantité dudit énantiomère E ₁ est supérieure à la quantité dudit énantiomère E ₄ . Il peut aussi s'agir d'une solution comprenant du flocoumafène dans un solvant du flocoumafène et dans laquelle le flocoumafène est majoritairement sous forme dudit énantiomère E ₁ .

Avantageusement et selon l'invention, la composition peut être à l'état solide. Il peut aussi s'agir d'un solide comprenant du flocoumafène, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E ₄ . Il peut aussi s'agir d'un solide comprenant du flocoumafène et dans lequel la quantité dudit énantiomère E ₁ est supérieure à la quantité dudit énantiomère E ₄ . Il peut aussi s'agir d'un solide comprenant du flocoumafène et dans lequel le flocoumafène est majoritairement sous forme dudit énantiomère E ₁ .

L'invention concerne donc aussi une composition selon l'invention comprenant du flocoumafène, le flocoumafène de la composition étant optiquement actif. Il n'est cependant pas exclu que le flocoumafène de la composition selon l'invention soit optiquement inactif.

L'invention concerne aussi l'utilisation d'une composition selon l'invention pour la préparation d'un appât rodonticide pour des rongeurs cibles nuisibles.

L'invention concerne aussi un appât rodonticide comprenant une composition selon l'invention, et au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles. Un appât rodonticide selon l'invention comprend :

- au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ;

- un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E ₁ , du flocoumafène, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère Ei et d'un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E ₄ , du flocoumafène ;

o ledit énantiomère Ei présentant, par analyse chromatographique d'une composition de flocoumafène comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du flocoumafène effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention ti ;

o ledit énantiomère E ₄ présentant, par analyse chromatographique d'une composition de flocoumafène comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du flocoumafène effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t ;

ti et t ₄ étant de valeurs telles que ti < t ₂ < t ₃ < t ₄ , t ₂ et t ₃ représentant les temps de rétention de chacun des stéréo-isomères de configuration du flocoumafène distincts dudit énantiomère E ₁ et dudit énantiomère E ₄ , ladite analyse étant réalisée à la température de 23,5 °C et dans les conditions suivantes :

^■ sur une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-chloro-3-méthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 A ;

^■ en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0, 1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 92/8 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ;

^■ par injection dans la colonne pour chromatographie d'un volume de 1 μΕ de composition de flocoumafène à une concentration de 1 μg de flocoumafène par millilitre d ' acétonitrile .

Avantageusement, un appât rodonticide selon l'invention comprend un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles et dudit énantiomère Ei dans lequel la quantité dudit énantiomère Ei est supérieure à la quantité dudit énantiomère E ₄ . Il peut aussi s'agir d'un appât rodonticide comprenant du flocoumafène et dans lequel le flocoumafène est majoritairement sous forme dudit énantiomère Ei.

Les inventeurs qui sont parvenus à séparer ledit énantiomère Ei et ledit énantiomère E ₄ et à isoler ledit énantiomère E _l5 ont aussi découvert, de façon totalement surprenante et imprévisible, que :

- la rémanence dudit énantiomère Ei dans le foie de rongeurs cibles nuisibles femelles ayant consommé un tel appât rodonticide selon l'invention est supérieure à la rémanence dudit énantiomère Ei dans le foie de rongeurs cibles nuisibles mâles ayant consommé un tel appât rodonticide, et que ;

- la rémanence dudit énantiomère Ei dans le foie de rongeurs cibles nuisibles femelles est suffisante pour être rodonticide pour les rongeurs cibles nuisibles femelles.

Ils ont aussi constaté qu'il est ainsi possible de contrôler une population de rongeurs cibles nuisibles en visant sélectivement les femelles de rongeurs cibles nuisibles, en limitant le nombre de portées de rongeurs cibles nuisibles.

Ainsi, ledit énantiomère Ei selon l'invention permet la réalisation d'appâts rodonticides présentant une efficacité rodonticide élevée vis-à-vis de de rongeurs cibles nuisibles femelles et permettant de limiter le nombre de portées de rongeurs cibles nuisibles susceptibles d'être engendrées par ces rongeurs cibles nuisibles femelles.

Un tel appât rodonticide permet donc de limiter la quantité de flocoumafène résiduelle dans le foie des rats mâles tout en maintenant dans le foie des rats femelles une quantité de flocoumafène qui est rodonticide pour lesdites femelles de rongeurs cibles nuisibles. Un tel appât rodonticide est donc moins toxique pour l'environnement et, en particulier pour des animaux -notamment pour des oiseaux appartenant à des espèces protégées- prédateurs ou charognards de rongeurs nuisibles et notamment de rongeurs cibles nuisibles mâles affaiblis ayant consommé un tel appât rodonticide, mais conserve une activité anticoagulante suffisante, en particulier chez les femelles de rongeurs cibles nuisibles, de sorte que l'appât rodonticide permet de contrôler des populations de rongeurs cibles nuisibles.

Un appât rodonticide selon l'invention est susceptible de pouvoir être utilisé pour lutter contre des populations de rongeurs cibles nuisibles résistants à des traitements rodonticides connus.

Avantageusement, un appât rodonticide selon l'invention comprend une quantité massique de flocoumafène telle que le rapport de cette quantité massique de flocoumafène sur la quantité massique d'appât rodonticide est inférieur à 200 ppm -c'est-à-dire inférieure à 200 mg de flocoumafène par kilogramme d'appât rodonticide-. Avantageusement, il comprend une quantité massique de flocoumafène telle que le rapport de cette quantité massique de flocoumafène sur la quantité massique d'appât rodonticide est supérieur à 1 ppm. Avantageusement, un appât rodonticide selon l'invention comprend une quantité massique de flocoumafène telle que le rapport de cette quantité massique de flocoumafène sur la quantité massique d'appât rodonticide est compris entre 1 ppm et 200 ppm (1 mg à 200 mg de flocoumafène par kilogramme d'appât rodonticide). Avantageusement, le rapport de cette quantité massique de flocoumafène sur la quantité massique d'appât rodonticide est compris entre 1 ppm et 100 ppm (1 mg à 100 mg de flocoumafène par kilogramme d'appât rodonticide), notamment compris entre 1 ppm et 50 ppm (1 mg à 50 mg de flocoumafène par kilogramme d'appât rodonticide), de préférence compris entre 5 ppm et 25 ppm (5 mg à 25 mg de flocoumafène par kilogramme d'appât rodonticide).

Avantageusement, un appât rodonticide selon l'invention comprend une quantité dudit énantiomère E ₁ telle que le rapport de cette quantité sur la quantité du flocoumafène dans l'appât rodonticide est supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, particulièrement préférentiellement supérieur à 95%, plus préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l'ordre de 100%, et du flocoumafène en quantité massique dans l'appât rodonticide telle que le rapport de cette quantité massique sur la quantité massique d'appât rodonticide soit inférieur 200 ppm, notamment inférieur à 50 ppm.

Avantageusement et selon l'invention, l'excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles est choisi pour permettre une consommation de l'appât rodonticide par des rongeurs cibles nuisibles. Avantageusement et selon l'invention, chaque excipient comestible est non létal pour des rongeurs cibles nuisibles. L'excipient comestible n'est pas rodonticide en lui-même.

Avantageusement et selon l'invention, l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des graines de céréale -notamment des graines de céréale décortiquées-, des moutures de graines de céréale, des farines de graines de céréale, des flocons de graines de céréale, du son de céréales et des graines non céréalières, par exemple des graines de luzerne -notamment sous forme décortiquée, sous forme de mouture, sous forme de farine, sous forme de flocons ou de son-. L'excipient comestible peut comprendre tout support susceptible d'être consommé par des rongeurs cibles nuisibles.

Avantageusement, l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des aliments d'origine végétale et des aliments d'origine animale. Avantageusement, l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi pour pouvoir stimuler l'appétit des rongeurs cibles nuisibles. En particulier, cet aliment est choisi dans le groupe formé de graines d'une ou de plusieurs céréales, de graines décortiquées d'une ou de plusieurs céréales, des moutures de graines d'une ou de plusieurs céréales, des flocons de graines d'une ou de plusieurs céréales, du son d'une ou de plusieurs céréales et des farines de graines d'une ou de plusieurs céréales. À titre d'exemple, on choisit les céréales dans le groupe formé de l'avoine, du blé, de l'orge, du maïs, du soja et du riz.

Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des aliments sucrés. Par exemple, il peut s'agir d'aliments comprenant au moins un sucre choisi dans le groupe formé du saccharose, du lactose, du fructose et du glucose. Il peut s'agir d'un sirop de sucre -par exemple, d'un sirop de sucre obtenu par hydrolyse de l'amidon- ou d'un sirop de sucre obtenu par hydrolyse de saccharose (sirop de sucre inverti), ou d'un sirop de sucre de betterave, ou d'un sirop d'érable ou d'un sirop de canne à sucre, ou d'un sirop obtenu à partir d'une plante du genre stevia.

Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des flocons et de la farine de l'albumen de noix de coco (coprah). Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des noix, des noisettes et des amandes -râpées et/ou en poudre-.

Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des graisses végétales, des huiles végétales (par exemple huile de colza, graisse de soja, huile de tournesol, beurre de cacao, huile d'arachides, beurre d'arachides, huile de maïs, huile de palme), des graisses animales et des huiles animales (beurre, saindoux, huile de poisson).

Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des protéines d'origine végétale et des protéines d'origine animale. À titre d'exemple, on peut citer par exemple le lait en poudre -notamment le lait écrémé en poudre-, les œufs -notamment les œufs en poudre-, les hydrolysats de protéines d'origine animale et les hydrolysats de protéines d'origine végétale.

Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts solides comprenant du flocoumafène et un excipient comestible solide. Avantageusement, l'appât rodonticide est un solide à l'état divisé, par exemple sous forme de boulettes ou de granulés. Avantageusement, l'appât rodonticide peut être un solide sous forme de bloc ou de pâte susceptibles d'être consommés par les rongeurs cibles nuisibles ou d'un matériau solide susceptible d'être rongé par les rongeurs cibles nuisibles. Avantageusement, l'appât rodonticide solide selon l'invention peut se présenter sous forme d'un bloc rigide, d'un bloc semi-rigide, d'une mousse, d'une poudre ou d'un gel.

Avantageusement, l'appât rodonticide se présentant sous forme d'une poudre, sous forme d'une mousse ou sous forme d'un gel est adapté pour pouvoir souiller la fourrure du (de) rongeur(s) cible(s) nuisible(s) et pour pouvoir être ingérée par celui (ceux)-ci lors de son (leur) toilettage.

Il peut s'agir d'un appât rodonticide solide comprenant du flocoumafène, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E ₄ . Il peut aussi s'agir d'un appât rodonticide solide comprenant du flocoumafène et dans lequel la quantité dudit énantiomère Ei est supérieure à la quantité dudit énantiomère E ₄ dans l'appât rodonticide. Il peut aussi s'agir d'un appât rodonticide solide comprenant du flocoumafène majoritairement sous forme dudit énantiomère Ε^

Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts liquides comprenant du flocoumafène et un excipient comestible liquide. L'appât rodonticide est alors une boisson pour des rongeurs cibles nuisibles.

Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts liquides comprenant du flocoumafène et un excipient comestible liquide. L'appât rodonticide est alors une boisson pour des rongeurs cibles nuisibles. Il peut s'agir d'une solution de flocoumafène dans un solvant du flocoumafène, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E ₁ et dudit énantiomère E ₄ . Il peut aussi s'agir d'une solution de flocoumafène dans un solvant du flocoumafène et dans laquelle la quantité dudit énantiomère E ₁ est supérieure à la quantité dudit énantiomère E ₄ dans l'appât rodonticide. Il peut aussi s'agir d'une solution de flocoumafène dans un solvant du flocoumafène et dans laquelle le flocoumafène est majoritairement sous forme dudit énantiomère Ε^

Il peut aussi s'agir d'une suspension de flocoumafène à l'état solide dans un milieu liquide. Il peut aussi s'agir d'une émulsion de flocoumafène dans un milieu liquide.

L'invention concerne donc aussi un appât rodonticide comprenant dudit énantiomère E _l5 à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E ₁ et dudit énantiomère E ₄ , le flocoumafène de l'appât rodonticide étant optiquement actif. Il n'est cependant pas exclu que le flocoumafène de l'appât rodonticide selon l'invention, comprenant dudit énantiomère E _l5 à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E ₁ et dudit énantiomère E ₄ , soit lui-même optiquement inactif.

Avantageusement, l'appât rodonticide comprend au moins un colorant. Un tel colorant permet en particulier de donner audit appât rodonticide une couleur aisément détectable et identifiable par une personne manipulant l'appât rodonticide.

Avantageusement, l'appât rodonticide comprend au moins un conservateur apte à assurer sa conservation lors de son stockage. Avantageusement, l'appât rodonticide comprend au moins un composé amérisant de type benzoate de dénatonium, aussi connu sous le nom de « Bitrex ^® » destiné à réduire les risques de consommation accidentelle par des organismes non cibles.

Avantageusement, dans une variante particulière, la composition et l'appât rodonticide selon l'invention comprennent exclusivement du flocoumafène, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E ₁ et dudit énantiomère E ₄ , à titre de substance rodonticide. En particulier, la composition et l'appât rodonticide selon l'invention sont exempts de toute autre substance anticoagulante à usage rodonticide distincte du flocoumafène. Cependant, dans cette variante selon l'invention, la composition et l'appât rodonticide peuvent comprendre toute substance anti-nuisible autre qu'un rodonticide, telle qu'une substance insecticide et/ou acaricide.

Avantageusement, dans une autre variante particulière, la composition et l'appât rodonticide selon l'invention comprennent du flocoumafène à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E ₄ et au moins une autre substance distincte du flocoumafène à titre de substance rodonticide. Cette autre substance rodonticide distincte du flocoumafène peut être une autre substance anticoagulante -notamment du type anti- vitamine K ou non- ou toute autre substance rodonticide non anticoagulante. L'invention concerne aussi un procédé de lutte -notamment un procédé de lutte sélective- contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on dissémine une quantité d'appât rodonticide comprenant :

- au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ;

- un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E ₁ , du flocoumafène, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère Ei et d'un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E ₄ , du flocoumafène ;

o ledit énantiomère Ei présentant, par analyse chromatographique d'une composition de flocoumafène comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du flocoumafène effectuée dans des conditions décrites ci-après, un temps de rétention ti ;

o ledit énantiomère E ₄ présentant, par analyse chromatographique d'une composition de flocoumafène comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du flocoumafène effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t ;

ti et t ₄ étant de valeurs telles que ti < t ₂ < t ₃ < t ₄ , t ₂ et t ₃ représentant les temps de rétention de chacun des stéréo-isomères de configuration du flocoumafène distincts dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E ₄ , ladite analyse étant réalisée à la température de 23,5 °C et dans les conditions suivantes :

^■ sur une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-chloro-3-méthylphénylcarbamate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 A ;

^■ en utilisant, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0, 1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 92/8 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ; ^■ par injection dans la colonne pour chromatographie d'un volume de 1 μΕ de composition de flocoumafène à une concentration de 1 μg de flocoumafène par millilitre d'acétonitrile.

L'invention concerne aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles -notamment un procédé de lutte sélective contre des rongeurs cibles nuisibles femelles- dans lequel on dissémine une quantité d'appât rodonticide selon l'invention, ladite quantité d'appât étant suffisante pour être rodonticide, notamment pour des rongeurs cibles nuisibles femelles.

Dans un tel procédé, avantageusement et selon l'invention, on choisit un appât rodonticide dans lequel la quantité dudit énantiomère E ₁ est supérieure à la quantité dudit énantiomère E ₄ dans l'appât rodonticide. Dans un tel procédé, avantageusement et selon l'invention, le flocoumafène est majoritairement sous forme dudit énantiomère E ₁ .

Avantageusement et en variante selon l'invention, on choisit en combinaison :

- l'excipient comestible ;

- une quantité dudit énantiomère E ₁ distincte de la quantité dudit énantiomère E ₄ dans l'appât rodonticide ;

- une proportion dudit énantiomère Ei par rapport au flocoumafène ;

- une proportion massique de flocoumafène dans l'appât rodonticide, et ;

- une quantité d'appât rodonticide disséminé ;

de façon que des rongeurs cibles nuisibles femelles consomment une quantité du flocoumafène suffisante pour être létale pour lesdits rongeurs cibles nuisibles femelles consommant dudit appât rodonticide au cours d'une période unique de 24 heures consécutives.

Un appât rodonticide selon cette variante de l'invention est un appât rodonticide mortel en une seule prise ou « one-shot » en anglais. Avantageusement et selon cette variante de l'invention, la proportion massique du flocoumafène dans l'appât rodonticide est inférieure à 200 ppm, notamment comprise entre 2 ppm et 200 ppm, de préférence comprise entre 2 et 100 ppm, plus préférentiellement comprise entre 2 ppm et 50 ppm, en particulier comprise entre 15 ppm et 50 ppm.

Avantageusement et dans une autre variante selon l'invention, on choisit en combinaison :

- l'excipient comestible ;

- une quantité dudit énantiomère E ₁ distincte de la quantité dudit énantiomère E ₄ dans l'appât rodonticide ;

- une proportion dudit énantiomère E ₁ par rapport au flocoumafène ;

- une proportion massique de flocoumafène dans l'appât rodonticide, et ; - une quantité d'appât rodonticide disséminé ;

de façon que des rongeurs cibles nuisibles femelles consomment une quantité du flocoumafène ;

o non létale pour des rongeurs cibles nuisibles femelles, c'est-à-dire généralement non létale pour les rongeurs cibles nuisibles femelles, consommant dudit appât rodonticide pendant une période de 24 heures consécutives, et ;

o suffisante pour être létale pour des rongeurs cibles nuisibles femelles consommant dudit appât rodonticide pendant plusieurs périodes de 24 heures.

Avantageusement et selon l'invention, lesdites périodes de 24 heures sont consécutives.

Cette autre variante de l'invention vise donc aussi un procédé de lutte sélective contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on dissémine une quantité d'appât rodonticide létale pour des rongeurs cibles nuisibles femelles consommant durablement cet appât rodonticide et généralement non létale pour les rongeurs ou des animaux non cibles consommant accidentellement cet appât rodonticide. On parle alors d'un procédé de lutte « multi-doses » ou, en anglais, « multi-feeding ». Dans un tel procédé selon l'invention, la consommation d'appât rodonticide par un rongeur cible nuisible femelle pendant une durée de 24 heures est insuffisante pour entraîner la mort du rongeur cible nuisible, alors qu'une consommation répétée d'appât rodonticide pendant au moins deux jours consécutifs est suffisante pour entraîner la mort du rongeur cible nuisible femelle. Cette autre variante de l'invention vise donc un procédé de lutte sélective contre une population de rongeurs cibles nuisibles dans lequel on met à disposition des rongeurs cibles nuisibles une quantité d'appât rodonticide susceptible d'être ingérée par les rongeurs cibles nuisibles, ladite quantité d'appât rodonticide étant suffisante pour tuer des rongeurs cibles nuisibles femelles consommant ledit appât rodonticide pendant plusieurs jours.

Avantageusement, dans cette autre variante d'un procédé selon l'invention, on adapte la quantité d'appât rodonticide disséminé, la proportion massique du flocoumafène par rapport à l'appât rodonticide et la proportion dudit énantiomère E ₁ par rapport audit diastéréoisomère D _1;4 pour que la consommation de l'appât rodonticide soit létale pour des rongeurs cibles nuisibles femelles consommant quotidiennement de l'appât rodonticide pendant au moins 2 périodes de 24 heures -notamment de 3 à 7 périodes-, lesdites périodes pouvant être consécutives.

Avantageusement, dans cette autre variante d'un procédé selon l'invention, la proportion dudit énantiomère Ei étant supérieure à 95% -notamment de l'ordre de 100%- par rapport au flocoumafène dans l'appât rodonticide, la proportion massique du flocoumafène par rapport à l'appât rodonticide est comprise entre 2 ppm et 100 ppm -notamment comprise entre 2 ppm et 50 ppm, de préférence comprise entre 2 ppm et 15 ppm, en particulier de l'ordre de 10 ppm-.

Dans un procédé selon l'invention, on met à disposition des rongeurs cibles nuisibles une quantité d'appât rodonticide suffisante pour satisfaire quotidiennement l'appétit des rongeurs cibles nuisibles femelles, ledit appât rodonticide comprenant majoritairement dudit énantiomère E ₁ par rapport audit diastéréoisomère D _1;4 et/ou par rapport au flocoumafène.

Dans un procédé selon l'invention, on adapte la quantité d'appât rodonticide disséminé, la proportion dudit énantiomère Ei par rapport audit diastéréoisomère D _{1 4} et la proportion massique du flocoumafène par rapport à l'appât rodonticide de façon à permettre une consommation d'appât rodonticide pendant plusieurs jours par des rongeurs cibles nuisibles femelles, tout en limitant :

- les risques d'intoxication primaire de mammifères et oiseaux non cibles susceptibles de ne consommer qu'occasionnellement et accidentellement un tel appât rodonticide ;

- les risques d'intoxication secondaire, par exemple des prédateurs des rongeurs cibles, susceptibles de consommer des rongeurs -morts ou vifs- cibles ayant ingéré une quantité dudit appât rodonticide.

L'invention concerne également un stéréo-isomère de configuration du flocoumafène, un procédé d'obtention de ce stéréo-isomère de configuration, une composition et un appât rodonticide comprenant ce stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre les rongeurs cibles nuisibles caractérisés en combinaison par tout ou partie des caractéristiques mentionnées ci-dessus ou ci-après.

D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture de la description suivante et des exemples donnés à titre uniquement non limitatif et qui se réfèrent aux figures annexées, dans lesquelles :

- la figure 1 est un chromatogramme représentatif de la séparation des stéréo-isomères de configuration du flocoumafène sur colonne chirale ;

- la figure 2 est une représentation en histogramme de la rémanence de l'énantiomère Ei du flocoumafène selon l'invention dans le foie de rats mâles et dans le foie de rats femelles.

Extraction du flocoumafène de foies de rats gavés avec du flocoumafène

Homogénéisation de l'échantillon de foie

On pèse avec précision de l'ordre de 0,525 g (±0,025 g) de foie de rat que l'on place dans un tube en polypropylène de 50 mL. On ajoute 10 mL d'acétone et on soumet la suspension à une homogénéisation au moyen d'un homogénéisateur/disperseur Ultra- Turrax ^® pendant une durée de l'ordre de 30 sec. On rince la tige de l'homogénéisateur/disperseur à l'eau chaude puis 2 fois avec 20 mL d'acétone dans un tube en polypropylène. On centrifuge l'homogénat pendant 5 min à une vitesse de centrifugation de 3000 rpm (rotation par minute). On collecte et on transvase le surnageant dans un tube à essai. On soumet l'échantillon à une évaporation sous un flux d'azote (N ₂ ) à la température de 40° C de façon à former un extrait sec.

Élimination des lipides

Dans le tube contenant l'extrait sec, on ajoute 1 mL d'acétonitrile de façon à solubiliser l'extrait sec. On lave la solution d'acétonitrile 2 fois successivement avec 1 mL d'hexane. L'extrait débarrassé des lipides est séché sous un flux d'azote (N ₂ ) à la température de 40°C, puis repris avec 0,5 mL de méthanol et solubilisé par agitation sous vortex. On ajoute ensuite 0,5 mL d'eau ultra-pure (Milli-Q). L'échantillon est homogénéisé sous vortex.

Extraction du flocoumafène sur phase solide (« SPE, Solid

Phase Extraction »)

On fait passer 1 mL de dichloro méthane (CH ₂ C ₂ ), puis

1 mL de méthanol (CH ₃ OH), puis 1 mL d'eau ultra-pure (Milli-Q) sur une cartouche Oasis HLB lcc (WAT094225, Waters). On dépose ensuite l'extrait de foie débarrassé des lipides (lmL CH ₃ OH/H ₂ O Milli-Q) et contenant le flocoumafène en tête de la cartouche préalablement conditionnée. L'extrait de foie pénètre dans la cartouche par gravité au contact de la phase solide de la cartouche. On dépose en tête de cartouche 1 mL de solution de lavage formée de méthanol (CH ₃ OH) et d'eau ultra-pure (H ₂ O) en proportion volumique de 90/10. On sèche la cartouche par aspiration sous vide connectée en partie basse de la cartouche. On dépose ensuite en tête de cartouche 1 mL de solution d'élution formée de dichlorométhane (CH ₂ Ct ₂ ) et de méthanol (CH ₃ OH) en proportion volumique de 90/10 et on collecte en bas de cartouche un éluat comprenant le flocoumafène. On évapore le solvant de Γ éluat sous un flux d'azote (N ₂ ) à la température de 40°C. On reprend l'échantillon dans 0,5 mL d'acétonitrile (NC-CH ₃ ) et on filtre la solution d'acétonitrile contenant le flocoumafène sur filtre de porosité 0,2 μπι. Analyse des stéréo-isomères de configuration du flocoumafène

On sépare les stéréo-isomères de configuration du flocoumafène par chromatographie liquide à haute pression en utilisant une colonne chirale LUX ^® Cellulose-4 (00F-4490-B0, phenomenex, Le Pecq, France) à titre de phase stationnaire et un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0,1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 92/8 à titre de phase mobile avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min. On injecte 1 μL· de l'extrait de foie de rat préalablement préparé comme décrit ci-dessus. La détection est effectuée par spectrométrie de masse en tandem (MS/MS) en mode d'ionisation négative par électronébulisation (ESI, « ElectroSpray Ionization »). La température du gaz nébuliseur est de 350°C et son débit est de 8 L/min. La pression du gaz nébuliseur est portée à 2700 hPa. En particulier, on détecte les transitions MRM {« Multiple Reaction Monitoring » m/z 541,1→ 382,1 et m/z 541,1→ 161 correspondant aux signaux du flocoumafène.

Les valeurs des temps de rétention de chacun des stéréo-isomères de configuration du flocoumafène sont, dans les conditions décrites, de :

- ti = 4,5 min pour l'énantiomère E ₁ dudit diastéréoisomère D _1;4 ;

- t ₂ = 6,2 min pour l'énantiomère E ₂ dudit diastéréoisomère D _{2 3} ;

- t ₃ = 6,7 min pour l'énantiomère E ₃ dudit diastéréoisomère D _{2 3} , et ;

- t ₄ = 9,3 min pour l'énantiomère E ₄ dudit diastéréoisomère D _1;4 .

Les valeurs des temps de rétention t _l5 t ₂ , t ₃ et t ₄ sont susceptibles de varier, notamment avec la température de la colonne de chromatographie. Cependant, dans ces conditions chromatographiques, l'ordre d'élution des énantiomères du flocoumafène reste inchangé. Â titre indicatif, pour une variation de température de quelques degrés Celsius, la valeur du temps de rétention (ti) dudit énantiomère E ₁ selon l'invention peut varier entre 4,4 min et 4,6 min. La valeur du temps de rétention (t ₂ ) de l'énantiomère E ₂ dudit diastéréoisomère D _{2 3} du flocoumafène peut varier entre 5,9 min et 6,4 min. La valeur du temps de rétention (t ₃ ) de l'énantiomère E ₃ dudit diastéréoisomère D _{2 3} du flocoumafène peut varier entre 6,4 min et 6,9 min. La valeur du temps de rétention (t ₄ ) de l'énantiomère E ₄ dudit diastéréoisomère D _{1 4} du flocoumafène peut varier entre 8,9 min et 9,4 min.

Rémanence hépatique des stéréo-isomères de configuration du flocoumafène chez le rat mâle et chez le rat femelle

On administre par voie orale (« peros ») à des rats de laboratoire (rats Sprague Dawley, Charles River, Saint germain sur l'Arbresle, France) mâles et femelles, âgés de 8 semaines et pesant entre 180 et 200 g, une solution comprenant du flocoumafène dans un mélange d'huile végétale et de DMSO à 5 % de façon que la quantité de flocoumafène ingérée par chaque rat soit de l'ordre de 2,3 mg par kilogramme de rat. Les rats gavés sont traités quotidiennement par administration par voie sous cutanée d'une dose de vitamine Kl à raison de 1U par rat de façon à maintenir les rats en vie pendant la durée de l'expérience.

Le rapport de la somme des quantités dudit énantiomère E ₂ et dudit énantiomère E ₃ (diastéréoisomère D _{2 3} ) sur la quantité de flocoumafène dans la solution de gavage est de 59% et le rapport de la somme des quantités dudit énantiomère Ei et dudit énantiomère E ₄ (diastéréoisomère D _1;4 ) sur la quantité de flocoumafène dans la solution de gavage est de 41%.

À 1 jour (J+l), 3 jours (J+3) et 7 jours (J+7) après le gavage, on euthanasie 6 rats préalablement anesthésiés à l'isoflurane, on prélève le foie des rats euthanaisés puis on extrait du foie et on dose les quantités de l'énantiomère E ₁ du flocoumafène selon l'invention présentes dans le foie des rats gavés. Les résultats sont donnés au tableau 1 ci-après dans lequel les valeurs de la concentration de chacun des énantiomères du flocoumafène dans le foie sont la moyenne des valeurs mesurées sur les 3 rats et exprimées en nanogramme (ng) par gramme de foie et représentés en figure 2 dans laquelle la concentration dudit énantiomère E ₁ dans le foie des rats mâles est représentée par des barres noires et la concentration dudit énantiomère Ei dans le foie des rats femelles est représentée par des barres à hachures obliques. Concentration hépatique de

J+l J+3 J+7 l'énantiomère E ₁ , ng/g

Moyenne 196,3 47,2 0

Mâles

Écart type 15,7 26,8 0

Moyenne 4584,5 2692,2 1196,1

Femelles

Écart type 1269,7 779,6 206, 1

Tableau 1

La teneur moyenne dudit énantiomère E ₁ dans le foie de rats mâles est plus faible que la teneur moyenne dudit énantiomère E ₁ dans le foie de rats femelles. Un appât rodonticide et un procédé de lutte sélective contre une population de rongeurs cibles nuisibles selon l'invention permet de cibler les femelles de rongeurs cibles nuisibles, en tuant lesdites femelles de rongeurs cibles nuisibles et en limitant la reproduction des rongeurs cibles nuisibles, tout en limitant les risques d'empoisonnement d'animaux -notamment d'oiseaux- prédateurs ou charognards de rongeurs nuisibles -notamment de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé un tel appât rodonticide (consommation secondaire). Il n'est cependant pas exclut que certains rongeurs cibles nuisibles mâles puisse être empoisonnés dans le cas d'une consommation élevée et réitérée d'appât rodonticide selon l'invention.

II va de soi que l'invention peut faire l'objet de nombreuses variantes de réalisation et applications. En particulier, une composition, un appât rodonticide et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles sont sujets à des infinités de variantes tant dans la formulation de l'appât rodonticide que dans les modes de mise en œuvre du procédé.