H4IIE-C3-No.75株(A)および76株(B)のインスリ ン刺激糖産生抑制作用を示す図である。 siRNAライブラリーに含まれる標的RNA関� �因子を示す図である。 CPSF5、CPSF6に対するsiRNAの糖産生評価(A� �よびB)およびmRNAノックダウンのTaqman解析(Cお よびD)の結果を示す図である。図中、NCはネ� �ティブコントロール(siRNA導入なし)を示す。

〔発明の詳細な説明〕
 本発明におけるCPSF5は、配列番号:2で表され るアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含むタンパク質である。ま た、本発明におけるCPSF6は、配列番号:4で表� �れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に� �一のアミノ酸配列を含むタンパク質である� �本明細書において、タンパク質およびペプ� �ドは、ペプチド標記の慣例に従って左端がN� ��端(アミノ末端)、右端がC末端(カルボキシル 末端)で記載される。
 CPSF5およびCPSF6タンパク質は、ヒトや他の温 血動物(例えば、モルモット、ラット、マウ� �、ニワトリ、ウサギ、イヌ、ブタ、ヒツジ� �ウシ、サルなど)の細胞[例えば、肝細胞、脾 細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、� ��髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハン� ��細胞、表皮細胞、上皮細胞、杯細胞、内皮� ��胞、平滑筋細胞、線維芽細胞、線維細胞、� ��細胞、脂肪細胞、免疫細胞(例、マクロファ ージ、T細胞、B細胞、ナチュラルキラー細胞� ��肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単� ��)、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、 骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞もしくは間質 細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞 もしくは癌細胞など]もしくはそれらの細胞� �存在するあらゆる組織[例えば、脳、脳の各� ��位(例、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、 視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳)、� �髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖� �、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋� �(例、平滑筋、骨格筋)、肺、消化管(例、大� �、小腸)、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺� ��末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮� ��骨、関節、脂肪組織(例、白色脂肪組織、褐 色脂肪組織)など]等から、自体公知のタンパ� ��質分離精製技術により単離・精製されるも� ��であってよい。

 「配列番号:2(もしくは配列番号:4)で表さ� ��るアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸� ��列」としては、配列番号:2(もしくは配列番� ��:4)で表されるアミノ酸配列と約50%以上、好� ��しくは約60%以上、より好ましくは約70%以上� ��いっそう好ましくは約80%以上、特に好まし� ��は約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相� ��性を有するアミノ酸配列などが挙げられる� ��ここで「相同性」とは、当該技術分野にお� ��て公知の数学的アルゴリズムを用いて2つの アミノ酸配列をアラインさせた場合の、最適 なアラインメント(好ましくは、該アルゴリ� �ムは最適なアラインメントのために配列の� �方もしくは両方へのギャップの導入を考慮� �得るものである)における、オーバーラップ� ��る全アミノ酸残基に対する同一アミノ酸お� ��び類似アミノ酸残基の割合(%)を意味する。� ��類似アミノ酸」とは物理化学的性質におい� ��類似したアミノ酸を意味し、例えば、芳香� ��アミノ酸(Phe、Trp、Tyr)、脂肪族アミノ酸(Ala� ��Leu、Ile、Val)、極性アミノ酸(Gln、Asn)、塩基� ��アミノ酸(Lys、Arg、His)、酸性アミノ酸(Glu、A sp)、水酸基を有するアミノ酸(Ser、Thr)、側鎖� ��小さいアミノ酸(Gly、Ala、Ser、Thr、Met)など� �同じグループに分類されるアミノ酸が挙げ� �れる。このような類似アミノ酸による置換� �タンパク質の表現型に変化をもたらさない(� ��ち、保存的アミノ酸置換である)ことが予測 される。保存的アミノ酸置換の具体例は当該 技術分野で周知であり、種々の文献に記載さ れている(例えば、Bowieら,Science, 247:1306-1310 ( 1990)を参照)。

 本明細書におけるアミノ酸配列の相同性� ��、相同性計算アルゴリズムNCBI BLAST(National  Center for Biotechnology Information Basic Local Align ment Search Tool)を用い、以下の条件(期待値=10; ギャップを許す;マトリクス=BLOSUM62;フィルタ� ��ング=OFF)にて計算することができる。アミ� �酸配列の相同性を決定するための他のアル� �リズムとしては、例えば、Karlinら, Proc. Natl . Acad. Sci. USA, 90: 5873-5877 (1993)に記載のア� ��ゴリズム[該アルゴリズムはNBLASTおよびXBLAST プログラム(version 2.0)に組み込まれている(Alt schulら, Nucleic Acids Res., 25: 3389-3402 (1997))]� �Needlemanら, J. Mol. Biol., 48: 444-453 (1970)に記 載のアルゴリズム[該アルゴリズムはGCGソフ� �ウェアパッケージ中のGAPプログラムに組み� �まれている]、MyersおよびMiller, CABIOS, 4: 11-1 7 (1988)に記載のアルゴリズム[該アルゴリズ� �はCGC配列アラインメントソフトウェアパッ� �ージの一部であるALIGNプログラム(version 2.0)� ��組み込まれている]、Pearsonら, Proc. Natl. Aca d. Sci. USA, 85: 2444-2448 (1988)に記載のアルゴ� ��ズム[該アルゴリズムはGCGソフトウェアパッ ケージ中のFASTAプログラムに組み込まれてい� ��]等が挙げられ、それらも同様に好ましく用 いられ得る。

 より好ましくは、配列番号:2(もしくは配� ��番号:4)で表されるアミノ酸配列と実質的に� ��一のアミノ酸配列とは、配列番号:2(もしく� ��配列番号:4)で表されるアミノ酸配列と約50%� ��上、好ましくは約60%以上、より好ましくは� ��70%以上、いっそう好ましくは約80%以上、特� ��好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%� ��上の同一性を有するアミノ酸配列である。

 「配列番号:2(もしくは配列番号:4)で表され� ��アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一� ��アミノ酸配列を含むタンパク質」は、配列� ��号:2(もしくは配列番号:4)で表されるアミノ� ��配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含み� ��かつ配列番号:2(もしくは配列番号:4)で表さ� ��るアミノ酸配列からなるタンパク質と実質� ��に同質の活性を有するタンパク質である。
 ここで「活性」とは、mRNA前駆体の3'末端プ� ��セッシング活性(切断因子I _m (CFI _m ) 活性)である。また、「実質的に同質」と� �、例えば生理学的に、あるいは薬理学的に� �て、その性質が定性的に同じであることを� �味する。したがって、CFI _m 活性が同等であることが好ましいが、これら の活性の程度(例、約0.01~約100倍、好ましくは 約0.1~約10倍、より好ましくは0.5~2倍)や、タン パク質の分子量などの量的要素は異なってい てもよい。
 CFI _m 活性の測定は、自体公知の方法に準じて行う ことができるが、例えば、Ruegseggerら(Mol. Cell ., 1巻, 243-253頁, 1998年)に記載の方法等に従� ��て行うことができる。

 また、本発明におけるCPSF5として、例えば� �(i)配列番号:2で表されるアミノ酸配列中の1� �たは2個以上(例えば1~50個程度、好ましくは1~ 30個程度、より好ましくは1~10個程度、さらに 好ましくは数(1~5、4、3もしくは2)個)のアミノ 酸が欠失したアミノ酸配列、(ii)配列番号:2で 表されるアミノ酸配列に1または2個以上(例え ば1~50個程度、好ましくは1~30個程度、より好� ��しくは1~10個程度、さらに好ましくは数(1~5� �4、3もしくは2)個)のアミノ酸が付加したアミ ノ酸配列、(iii)配列番号:2で表されるアミノ� �配列に1または2個以上(例えば1~50個程度、好� ��しくは1~30個程度、より好ましくは1~10個程� �、さらに好ましくは数(1~5、4、3もしくは2)個 )のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、(iv)� ��列番号:2で表されるアミノ酸配列中の1また� ��2個以上(例えば1~50個程度、好ましくは1~30個 程度、より好ましくは1~10個程度、さらに好� �しくは数(1~5、4、3もしくは2)個)のアミノ酸� �他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、� �たは(v)それらを組み合わせたアミノ酸配列� �含有するタンパク質などのいわゆるムテイ� �も含まれる。同様に、本発明におけるCPSF6と して、例えば、(i)配列番号:4で表されるアミ� ��酸配列中の1または2個以上(例えば1~100個程� �、好ましくは1~50個程度、より好ましくは1~10 個程度、さらに好ましくは数(1~5、4、3もしく は2)個)のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、 (ii)配列番号:4で表されるアミノ酸配列に1ま� �は2個以上(例えば1~100個程度、好ましくは1~50 個程度、より好ましくは1~10個程度、さらに� �ましくは数(1~5、4、3もしくは2)個)のアミノ� �が付加したアミノ酸配列、(iii)配列番号:4で� ��されるアミノ酸配列に1または2個以上(例え� ��1~100個程度、好ましくは1~50個程度、より好� ��しくは1~10個程度、さらに好ましくは数(1~5� �4、3もしくは2)個)のアミノ酸が挿入されたア ミノ酸配列、(iv)配列番号:4で表されるアミノ 酸配列中の1または2個以上(例えば1~100個程度� ��好ましくは1~50個程度、より好ましくは1~10� �程度、さらに好ましくは数(1~5、4、3もしく� �2)個)のアミノ酸が他のアミノ酸で置換され� �アミノ酸配列、または(v)それらを組み合わ� �たアミノ酸配列を含有するタンパク質など� �含まれる。
 上記のようにアミノ酸配列が挿入、欠失ま� ��は置換されている場合、その挿入、欠失ま� ��は置換の位置は、mRNA前駆体の3'末端プロセ� ��シング活性(CFI _m 活性)が保持される限り、特に限定されない� �

 CPSF5タンパク質の好ましい例としては、� �えば、配列番号:2で表されるアミノ酸配列か らなるヒトCPSF5(RefSeq Accession No. NP_008937.1)、 あるいは他の哺乳動物におけるそれらのホモ ログ(例えば、GenBankにRefSeq Accession No. NP_0808 99.1として登録されているマウスホモログ)、� ��らにはそれらの天然のアレル変異体などが� ��げられる。また、CPSF6タンパク質の好まし� �例としては、例えば、配列番号:4で表される アミノ酸配列からなるヒトCPSF6(RefSeq Accession� �No. NP_008938.1)、あるいは他の哺乳動物におけ るそれらのホモログ(例えば、GenBankにRefSeq Ac cession No. NP_001013409.1として登録されている� �ウスホモログ)、さらにはそれらの天然のア� ��ル変異体などがあげられる。

 本発明において「CPSF5(もしくはCPSF6)タン� ��ク質の発現を阻害する物質」とは、CPSF5(も� ��くはCPSF6)遺伝子の転写レベル、転写後調節� ��レベル、蛋白質への翻訳レベル、翻訳後修� ��のレベル等のいかなる段階で作用するもの� ��あってもよい。従って、CPSF5(もしくはCPSF6)� ��ンパク質の発現を阻害する物質としては、� ��えば、該遺伝子の転写を阻害する物質、初� ��転写産物からmRNAへのプロセッシングを阻害 する物質、mRNAの細胞質への輸送を阻害する� �質、mRNAの分解を促進する物質、mRNAからタン パク質への翻訳を阻害する物質、CPSF5(もしく はCPSF6)ポリペプチドの翻訳後修飾を阻害する 物質などが含まれる。いずれの段階で作用す るものであっても好ましく用いることができ るが、CPSF5もしくはCPSF6タンパク質の産生を� �接的に阻害するという意味では、mRNAからタ� ��パク質への翻訳を阻害する物質が好ましい� ��

 CPSF5もしくはCPSF6のmRNAからタンパク質への� �訳を特異的に阻害し得る物質として、好ま� �くは、これらのmRNAの塩基配列と相補的もし� ��は実質的に相補的な塩基配列またはその一� ��を含む核酸が挙げられる。
 CPSF5もしくはCPSF6のmRNAの塩基配列と実質的� �相補的な塩基配列とは、インスリン抵抗性� �病態を呈し、あるいは将来インスリン抵抗� �となるリスクが高いと予測される哺乳動物� �内の生理的条件下において、該mRNAの標的配� ��に結合してその翻訳を阻害し得る程度の相� ��性を有する塩基配列を意味し、具体的には� ��例えば、該mRNAの塩基配列と完全相補的な塩 基配列(すなわち、mRNAの相補鎖の塩基配列)と 、オーバーラップする領域に関して、約70%以 上、好ましくは約80%以上、より好ましくは約 90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を 有する塩基配列である。
 本発明における「塩基配列の相同性」は、� ��同性計算アルゴリズムNCBI BLAST(National Center  for Biotechnology Information Basic Local Alignment  Search Tool)を用い、以下の条件(期待値=10;ギャ ップを許す;フィルタリング=ON;マッチスコア= 1;ミスマッチスコア=-3)にて計算することがで きる。塩基配列の相同性を決定するための他 のアルゴリズムとしては、例えば、Karlinら,  Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 5873-5877 (1993)に� �載のアルゴリズム[該アルゴリズムはNBLASTお� ��びXBLASTプログラム(version 2.0)に組み込まれ� �いる(Altschulら, Nucleic Acids Res., 25: 3389-3402� �(1997))]、Needlemanら, J. Mol. Biol., 48: 444-453 ( 1970)に記載のアルゴリズム[該アルゴリズムは GCGソフトウェアパッケージ中のGAPプログラム に組み込まれている]、MyersおよびMiller, CABIOS , 4: 11-17 (1988)に記載のアルゴリズム[該アル ゴリズムはCGC配列アラインメントソフトウェ アパッケージの一部であるALIGNプログラム(ver sion 2.0)に組み込まれている]、Pearsonら, Proc.� �Natl. Acad. Sci. USA, 85: 2444-2448 (1988)に記載� �アルゴリズム[該アルゴリズムはGCGソフトウ� ��アパッケージ中のFASTAプログラムに組み込� �れている]等が挙げられ、それらも同様に好� ��しく用いられ得る。

 より具体的には、CPSF5のmRNAの塩基配列と相� ��的もしくは実質的に相補的な塩基配列とし� ��は、(a)配列番号:1で表される塩基配列また� �(b)該塩基配列とハイストリンジェントな条� �下でハイブリダイズする塩基配列であって� �配列番号:2で表されるアミノ酸配列からなる タンパク質と実質的に同質の活性を有するタ ンパク質をコードする配列と、相補的もしく は実質的に相補的な塩基配列が挙げられる。 また、CPSF6のmRNAの塩基配列と相補的もしくは 実質的に相補的な塩基配列としては、(a)配列 番号:3で表される塩基配列または(b)該塩基配� ��とハイストリンジェントな条件下でハイブ� ��ダイズする塩基配列であって、配列番号:4� �表されるアミノ酸配列からなるタンパク質� �実質的に同質の活性を有するタンパク質を� �ードする配列と、相補的もしくは実質的に� �補的な塩基配列が挙げられる。ここで「実� �的に同質の活性」とは前記と同義である。
 ハイストリンジェントな条件とは、例えば� ��ナトリウム濃度が約19~約40mM、好ましくは約 19~約20mMで、温度が約50~約70℃、好ましくは約 60~約65℃の条件をいう。特に、ナトリウム塩� ��度が約19mMで温度が約65℃の場合が好ましい� ��

 CPSF5のmRNAは、好ましくは、配列番号:1に� �される塩基配列を含むヒトCPSF5 mRNA(RefSeq Acc ession No. NM_007006.2)、あるいは他の哺乳動物� �おけるそれらのホモログ(例えば、GenBankにRef Seq Accession No. NM_026623.3として登録されてい� ��マウスホモログ)、さらにはそれらの天然の アレル変異体である。また、CPSF6のmRNAは、好 ましくは、配列番号:3に示される塩基配列を� ��むヒトCPSF6 mRNA(RefSeq Accession No. NM_007007.1)� ��あるいは他の哺乳動物におけるそれらのホ� ��ログ(例えば、GenBankにRefSeq Accession No. NM_00 1013391.1として登録されているマウスホモログ )、さらにはそれらの天然のアレル変異体で� �る。

 「CPSF5もしくはCPSF6のmRNAの塩基配列と相� �的もしくは実質的に相補的な塩基配列の一� �」とは、CPSF5もしくはCPSF6のmRNAに特異的に結 合することができ、且つ該mRNAからのタンパ� �質の翻訳を阻害し得るものであれば、その� �さや位置に特に制限はないが、配列特異性� �面から、標的配列に相補的もしくは実質的� �相補的な部分を少なくとも10塩基以上、好ま しくは約15塩基以上、より好ましくは約20塩� �以上含むものである。

 具体的には、CPSF5もしくはCPSF6のmRNAの塩基� �列と相補的もしくは実質的に相補的な塩基� �列またはその一部を含む核酸として、以下� �(a)~(c)のいずれかのものが好ましく例示され� ��。
(a) CPSF5もしくはCPSF6のmRNAに対するアンチセ� �ス核酸
(b) CPSF5もしくはCPSF6のmRNAに対するsiRNA
(c) CPSF5もしくはCPSF6のmRNAに対するsiRNAを生成 し得る核酸

(a) CPSF5もしくはCPSF6のmRNAに対するアンチセ� �ス核酸
 本発明における「CPSF5もしくはCPSF6のmRNAに� �するアンチセンス核酸」とは、該mRNAの塩基� ��列と相補的もしくは実質的に相補的な塩基� ��列またはその一部を含む核酸であって、標� ��mRNAと特異的かつ安定した二重鎖を形成して 結合することにより、タンパク質合成を抑制 する機能を有するものである。
 アンチセンス核酸は、2-デオキシ-D-リボー� �を含有しているポリデオキシリボヌクレオ� �ド、D-リボースを含有しているポリリボヌク レオチド、プリンまたはピリミジン塩基のN-� ��リコシドであるその他のタイプのポリヌク� ��オチド、非ヌクレオチド骨格を有するその� ��のポリマー(例えば、市販のタンパク質核酸 および合成配列特異的な核酸ポリマー)また� �特殊な結合を含有するその他のポリマー(但� ��、該ポリマーはDNAやRNA中に見出されるよう� ��塩基のペアリングや塩基の付着を許容する� ��置をもつヌクレオチドを含有する)などが挙 げられる。それらは、二本鎖DNA、一本鎖DNA、 二本鎖RNA、一本鎖RNA、DNA:RNAハイブリッドで� �ってもよく、さらに非修飾ポリヌクレオチ� �(または非修飾オリゴヌクレオチド)、公知の 修飾の付加されたもの、例えば当該分野で知 られた標識のあるもの、キャップの付いたも の、メチル化されたもの、1個以上の天然の� �クレオチドを類縁物で置換したもの、分子� �ヌクレオチド修飾のされたもの、例えば非� �電結合(例えば、メチルホスホネート、ホス� ��トリエステル、ホスホルアミデート、カル� ��メートなど)を持つもの、電荷を有する結合 または硫黄含有結合(例、ホスホロチオエー� �、ホスホロジチオエートなど)を持つもの、� ��えばタンパク質(例、ヌクレアーゼ、ヌクレ アーゼ・インヒビター、トキシン、抗体、シ グナルペプチド、ポリ-L-リジンなど)や糖(例� ��モノサッカライドなど)などの側鎖基を有し ているもの、インターカレント化合物(例、� �クリジン、ソラレンなど)を持つもの、キレ� ��ト化合物(例えば、金属、放射活性をもつ金 属、ホウ素、酸化性の金属など)を含有する� �の、アルキル化剤を含有するもの、修飾さ� �た結合を持つもの(例えば、αアノマー型の� �酸など)であってもよい。ここで「ヌクレオ� ��ド」、「ヌクレオチド」および「核酸」と� ��、プリンおよびピリミジン塩基を含有する� ��みでなく、修飾されたその他の複素環型塩� ��をもつようなものを含んでいて良い。この� ��うな修飾物は、メチル化されたプリンおよ� ��ピリミジン、アシル化されたプリンおよび� ��リミジン、あるいはその他の複素環を含む� ��のであってよい。修飾されたヌクレオシド� ��よび修飾されたヌクレオチドはまた糖部分� ��修飾されていてよく、例えば、1個以上の水 酸基がハロゲンとか、脂肪族基などで置換さ れていたり、またはエーテル、アミンなどの 官能基に変換されていてよい。

 上記の通り、アンチセンス核酸はDNAであ� ��てもRNAであってもよく、あるいはDNA/RNAキメ ラであってもよい。アンチセンス核酸がDNAの 場合、標的RNAとアンチセンスDNAとによって形 成されるRNA:DNAハイブリッドは、内在性RNase H に認識されて標的RNAの選択的な分解を引き起 こすことができる。したがって、RNase Hによ� ��分解を指向するアンチセンスDNAの場合、標� ��配列は、mRNA中の配列だけでなく、CPSF5もし� ��はCPSF6遺伝子の初期翻訳産物におけるイン� �ロン領域の配列であってもよい。例えば、� �トの場合、CPSF5遺伝子は第16番染色体の16q13� �域、CPSF6遺伝子は第12番染色体の12q15領域に� �れぞれ存在するので、これらの領域のゲノ� �配列と、配列番号:1で表されるヒトCPSF5 cDNA� ��基配列および配列番号:3で表されるヒトCPSF6  cDNA塩基配列とをBLAST、FASTA等のホモロジー� �索プログラムを用いて比較して、イントロ� �配列を決定することができる。

 本発明のアンチセンス核酸の標的領域は� ��該アンチセンス核酸がハイブリダイズする� ��とにより、結果としてCPSF5もしくはCPSF6タン パク質への翻訳が阻害されるものであればそ の長さに特に制限はなく、これらタンパク質 をコードするmRNAの全配列であっても部分配� �であってもよく、短いもので約10塩基程度、 長いものでmRNAもしくは初期転写産物の全配� �が挙げられる。合成の容易さや抗原性、細� �内移行性の問題等を考慮すれば、約10~約40塩 基、特に約15~約30塩基からなるオリゴヌクレ� ��チドが好ましいが、それに限定されない。� ��体的には、CPSF5およびCPSF6遺伝子の5'端ヘア� ��ンループ、5'端6-ベースペア・リピート、5'� ��非翻訳領域、翻訳開始コドン、タンパク質� ��ード領域、ORF翻訳終止コドン、3'端非翻訳� �域、3'端パリンドローム領域または3'端ヘア� ��ンループなどが、アンチセンス核酸の好ま� ��い標的領域として選択しうるが、それらに� ��定されない。

 さらに、本発明のアンチセンス核酸は、C PSF5もしくはCPSF6のmRNAや初期転写産物とハイ� �リダイズしてタンパク質への翻訳を阻害す� �だけでなく、二本鎖DNAであるこれらの遺伝� �と結合して三重鎖(トリプレックス)を形成し 、RNAへの転写を阻害し得るもの(アンチジー� �)であってもよい。

 アンチセンス核酸を構成するヌクレオチド� ��子は、天然型のDNAもしくはRNAでもよいが、� ��定性(化学的および/または対酵素)や比活性( RNAとの親和性)を向上させるために、種々の� �学修飾を含むことができる。例えば、ヌク� �アーゼなどの加水分解酵素による分解を防� �ために、アンチセンス核酸を構成する各ヌ� �レオチドのリン酸残基(ホスフェート)を、例 えば、ホスホロチオエート(PS)、メチルホス� �ネート、ホスホロジチオネートなどの化学� �飾リン酸残基に置換することができる。ま� �、各ヌクレオチドの糖(リボース)の2'位の水� ��基を、-OR(Rは、例えばCH ₃ (2'-O-Me)、CH ₂ CH ₂ OCH ₃ (2'-O-MOE)、CH ₂ CH ₂ NHC(NH)NH ₂ 、CH ₂ CONHCH ₃ 、CH ₂ CH ₂ CN等を示す)に置換してもよい。さらに、塩基 部分(ピリミジン、プリン)に化学修飾を施し� ��もよく、例えば、ピリミジン塩基の5位への メチル基やカチオン性官能基の導入、あるい は2位のカルボニル基のチオカルボニルへの� �換などが挙げられる。

 RNAの糖部のコンフォーメーションはC2'-end o(S型)とC3'-endo(N型)の2つが支配的であり、一� �鎖RNAではこの両者の平衡として存在するが� �二本鎖を形成するとN型に固定される。した� ��って、標的RNAに対して強い結合能を付与す� ��ために、2'酸素と4’炭素を架橋することに� ��り、糖部のコンフォーメーションをN型に固 定したRNA誘導体であるBNA(LNA)(Imanishi, T. et al ., Chem. Commun., 1653-9, 2002; Jepsen, J.S. et al.,  Oligonucleotides, 14, 130-46, 2004)やENA(Morita, K.  et al., Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids, 22, 16 19-21, 2003)もまた、好ましく用いられ得る。

 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチ� ��は、CPSF5およびCPSF6のcDNA配列もしくはゲノ� �ックDNA配列に基づいてmRNAもしくは初期転写� ��物の標的配列を決定し、市販のDNA/RNA自動合 成機(アプライド・バイオシステムズ社、ベ� �クマン社等)を用いて、これに相補的な配列� ��合成することにより調製することができる� ��また、上記した各種修飾を含むアンチセン� ��核酸も、いずれも自体公知の手法により、� ��学的に合成することができる。

(b) CPSF5もしくはCPSF6のmRNAに対するsiRNA
 本明細書においては、CPSF5もしくはCPSF6のmRN Aに相補的なオリゴRNAとその相補鎖とからな� �二本鎖RNA、いわゆるsiRNAもまた、CPSF5もしく� ��CPSF6のmRNAの塩基配列と相補的もしくは実質� ��に相補的な塩基配列またはその一部を含む� ��酸に包含されるものとして定義される。短� ��二本鎖RNAを細胞内に導入するとそのRNAに相� ��的なmRNAが分解される、いわゆるRNA干渉(RNAi) と呼ばれる現象は、以前から線虫、昆虫、植 物等で知られていたが、この現象が動物細胞 でも広く起こることが確認されて以来[Nature,� �411(6836): 494-498 (2001)]、リボザイムの代替技� ��として汎用されている。siRNAは標的となるmR NAの塩基配列情報に基づいて、市販のソフト� ��ェア(例:RNAi Designer; Invitrogen)を用いて適宜� ��計することができる。具体的には、後述の� ��施例において使用されるsiRNA等が本発明のsi RNAとして好ましく例示され得るが、それらに 限定されない。

 siRNAを構成するリボヌクレオシド分子も� �た、安定性、比活性などを向上させるため� �、上記のアンチセンス核酸の場合と同様の� �飾を受けていてもよい。但し、siRNAの場合、 天然型RNA中のすべてのリボヌクレオシド分子 を修飾型で置換すると、RNAi活性が失われる� �合があるので、RISC複合体が機能できる最小� ��の修飾ヌクレオシドの導入が必要である。

 siRNAは、mRNA上の標的配列のセンス鎖及び� ��ンチセンス鎖をDNA/RNA自動合成機でそれぞれ 合成し、適当なアニーリング緩衝液中、約90~ 約95℃で約1分程度変性させた後、約30~約70℃� ��約1~約8時間アニーリングさせることにより� ��製することができる。また、siRNAの前駆体� �なるショートヘアピンRNA(shRNA)を合成し、こ� ��をダイサー(dicer)を用いて切断することによ り調製することもできる。

(c) CPSF5もしくはCPSF6のmRNAに対するsiRNAを生成 し得る核酸
 本明細書においては、生体内で上記のCPSF5� �しくはCPSF6のmRNAに対するsiRNAを生成し得るよ うにデザインされた核酸もまた、CPSF5もしく� ��CPSF6のmRNAの塩基配列と相補的もしくは実質� ��に相補的な塩基配列またはその一部を含む� ��酸に包含されるものとして定義される。そ� ��ような核酸としては、上記したshRNAやそれ� �発現するように構築された発現ベクターな� �が挙げられる。shRNAは、mRNA上の標的配列の� �ンス鎖およびアンチセンス鎖を適当なルー� �構造を形成しうる長さ(例えば15から25塩基程 度)のスペーサー配列を間に挿入して連結し� �塩基配列を含むオリゴRNAをデザインし、こ� �をDNA/RNA自動合成機で合成することにより調� ��することができる。shRNAの発現カセットを� �む発現ベクターは、上記shRNAをコードする二 本鎖DNAを常法により作製した後、適当な発現 ベクター中に挿入することにより調製するこ とができる。shRNAの発現ベクターとしては、U 6やH1などのPol III系プロモーターを有するも� ��が用いられ得る。この場合、該発現ベクタ� ��を導入された動物細胞内で転写されたshRNA� �、自身でループを形成した後に、内在の酵� �ダイサー(dicer)などによってプロセシングさ� ��ることにより成熟siRNAが形成される。

 CPSF5もしくはCPSF6のmRNAの塩基配列と相補� �もしくは実質的に相補的な塩基配列または� �の一部を含む核酸の他の好ましい例として� �、該mRNAをコード領域の内部で特異的に切断� ��得るリボザイムが挙げられる。「リボザイ� ��」とは、狭義には、核酸を切断する酵素活� ��を有するRNAをいうが、本明細書では配列特� ��的な核酸切断活性を有する限りDNAをも包含� ��る概念として用いるものとする。リボザイ� ��として最も汎用性の高いものとしては、ウ� ��ロイドやウイルソイド等の感染性RNAに見ら� ��るセルフスプライシングRNAがあり、ハンマ� ��ヘッド型やヘアピン型等が知られている。� ��ンマーヘッド型は約40塩基程度で酵素活性� �発揮し、ハンマーヘッド構造をとる部分に� �接する両端の数塩基ずつ(合わせて約10塩基� �度)をmRNAの所望の切断部位と相補的な配列に することにより、標的mRNAのみを特異的に切� �することが可能である。このタイプのリボ� �イムは、RNAのみを基質とするので、ゲノムDN Aを攻撃することがないというさらなる利点� �有する。CPSF5およびCPSF6 mRNAが自身で二本鎖� ��造をとる場合には、RNAヘリカーゼと特異的� ��結合し得るウイルス核酸由来のRNAモチーフ� ��連結したハイブリッドリボザイムを用いる� ��とにより、標的配列を一本鎖にすることが� ��きる[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98(10): 5572-5577  (2001)]。さらに、リボザイムを、それをコー ドするDNAを含む発現ベクターの形態で使用す る場合には、転写産物の細胞質への移行を促 進するために、tRNAを改変した配列をさらに� �結したハイブリッドリボザイムとすること� �できる[Nucleic Acids Res., 29(13): 2780-2788 (2001) ]。

 CPSF5もしくはCPSF6のmRNAの塩基配列と相補� �もしくは実質的に相補的な塩基配列または� �の一部を含む核酸は、リポソーム、ミクロ� �フェアのような特殊な形態で供与されたり� �遺伝子治療に適用されたり、付加された形� �で与えられることができうる。こうして付� �形態で用いられるものとしては、リン酸基� �格の電荷を中和するように働くポリリジン� �ようなポリカチオン体、細胞膜との相互作� �を高めたり、核酸の取込みを増大せしめる� �うな脂質(例、ホスホリピド、コレステロー� ��など)などの疎水性のものが挙げられる。付 加するに好ましい脂質としては、コレステロ ールやその誘導体(例、コレステリルクロロ� �ルメート、コール酸など)が挙げられる。こ� ��したものは、核酸の3'端または5'端に付着さ せることができ、塩基、糖、分子内ヌクレオ シド結合を介して付着させることができうる 。その他の基としては、核酸の3'端または5'� �に特異的に配置されたキャップ用の基で、� �キソヌクレアーゼ、RNaseなどのヌクレアーゼ による分解を阻止するためのものが挙げられ る。こうしたキャップ用の基としては、ポリ エチレングリコール、テトラエチレングリコ ールなどのグリコールをはじめとした当該分 野で知られた水酸基の保護基が挙げられるが 、それに限定されるものではない。

 これらの核酸のCPSF5(もしくはCPSF6)タンパ� ��質発現阻害活性は、CPSF5(もしくはCPSF6)遺伝� ��を導入した形質転換体、生体内や生体外のC PSF5(もしくはCPSF6)遺伝子発現系、または生体� ��や生体外のCPSF5(もしくはCPSF6)タンパク質翻� ��系を用いて調べることができる。

 本発明におけるCPSF5(もしくはCPSF6)タンパ� ��質の発現を阻害する物質は、上記のようなC PSF5もしくはCPSF6のmRNAの塩基配列と相補的も� �くは実質的に相補的な塩基配列またはその� �部を含む核酸に限定されず、CPSF5(もしくはCP SF6)タンパク質の産生を直接的または間接的� �阻害する限り、低分子化合物などの他の物� �であってもよい。そのような物質は、例え� �、後述する本発明のスクリーニング方法に� �り取得することができる。

 本発明において「CPSF5(もしくはCPSF6)タンパ� ��質の活性を阻害する物質」とは、いったん� ��能的に産生されたCPSF5(もしくはCPSF6)タンパ� ��質が、mRNA前駆体の3'末端プロセッシング活� ��(CFI _m 活性)を発揮するのを阻害する限りいかなる� �のでもよく、例えば、CPSF5とCPSF6との複合体� ��成を阻害する物質や、CPSF5、CPSF6もしくは該 複合体のmRNA結合能を阻害する物質、CPSF5やCPS F6の核移行を阻害する物質等が挙げられる。

 具体的には、CPSF5(もしくはCPSF6)タンパク質� ��活性を阻害する物質として、例えば、CPSF5� �しくはCPSF6タンパク質に対する抗体が挙げら れる。該抗体はポリクローナル抗体、モノク ローナル抗体の何れであってもよい。これら の抗体は、自体公知の抗体または抗血清の製 造法に従って製造することができる。抗体の アイソタイプは特に限定されないが、好まし くはIgG、IgMまたはIgA、特に好ましくはIgGが挙 げられる。また、該抗体は、標的抗原を特異 的に認識し結合するための相補性決定領域(CD R)を少なくとも有するものであれば特に制限� ��なく、完全抗体分子の他、例えばFab、Fab'、 F(ab’) ₂ 等のフラグメント、scFv、scFv-Fc、ミニボディ� ��、ダイアボディー等の遺伝子工学的に作製� ��れたコンジュゲート分子、あるいはポリエ� ��レングリコール(PEG)等のタンパク質安定化� �用を有する分子等で修飾されたそれらの誘� �体などであってもよい。
 好ましい一実施態様において、CPSF5もしく� �CPSF6タンパク質に対する抗体はヒトを投与対 象とする医薬品として使用されることから、 該抗体(好ましくはモノクローナル抗体)はヒ� ��に投与した場合に抗原性を示す危険性が低� ��された抗体、具体的には、完全ヒト抗体、� ��ト化抗体、マウス-ヒトキメラ抗体などであ り、特に好ましくは完全ヒト抗体である。ヒ ト化抗体およびキメラ抗体は、常法に従って 遺伝子工学的に作製することができる。また 、完全ヒト抗体は、ヒト-ヒト(もしくはマウ� ��)ハイブリドーマより製造することも可能で はあるが、大量の抗体を安定に且つ低コスト で提供するためには、ヒト抗体産生マウスや ファージディスプレイ法を用いて製造するこ とが望ましい。

 CPSF5およびCPSF6はCFI _m 複合体を形成し、mRNA前駆体の3'末端における プロセッシングにおいて中心的な役割を担っ ているので、CPSF5(もしくはCPSF6)タンパク質の 活性を阻害する物質は、細胞内移行性、核移 行性に優れた物質であることが望ましい。し たがって、CPSF5(もしくはCPSF6)タンパク質の活 性を阻害するより好ましい物質は、Lipinski's  Ruleに見合った低分子化合物である。そのよ� �な化合物は、例えば、後述する本発明のス� �リーニング法を用いて取得することができ� �。

 本発明のCPSF5もしくはCPSF6の発現もしくは活 性を阻害する物質は、インスリン刺激した時 の糖新生を抑制するため、インスリン抵抗性 の病態改善に有用である。しかも該物質は、 Dex/8CPT刺激による糖産生には影響しないので� ��乳酸アシドーシス等の毒性を発現する危険� ��が低いというさらなる有利な効果を奏する� ��
 したがって、CPSF5もしくはCPSF6の発現もしく は活性を阻害する物質を含有する医薬は、例 えばインスリン抵抗性改善剤、(肝臓などに� �ける)糖新生阻害剤などとして、例えば糖代� ��異常が関与する疾患、脂質代謝異常が関連� ��る疾患の予防および/または治療剤などとし て使用することができる。

(1)アンチセンス核酸、siRNA、その前駆体核酸� ��含有する医薬
 CPSF5もしくはCPSF6遺伝子の転写産物に相補的 に結合し、該転写産物からのタンパク質の翻 訳を抑制することができる本発明のアンチセ ンス核酸や、CPSF5もしくはCPSF6遺伝子の転写� �物における相同な(もしくは相補的な)塩基配 列を標的として該転写産物を切断し得るsiRNA( もしくはリボザイム)、さらに該siRNAの前駆体 であるshRNAなど(以下、包括的に「本発明の核 酸」という場合がある)は、生体内におけるCP SF5もしくはCPSF6タンパク質の機能や作用を抑� ��し、肝臓などにおける糖新生作用を阻害す� ��ことができるので、例えばインスリン抵抗� ��改善剤、糖新生阻害剤などとして、例えば� ��代謝異常が関連する疾患〔例、糖尿病(好ま しくはII型糖尿病)、糖尿病性合併症(例、神� �障害、腎症、網膜症等)、耐糖能異常、肥満� ��、メタボリックシンドローム等〕、脂質代� ��異常が関連する疾患〔例、動脈硬化、高血� ��、高脂血症(特に高トリグリセリド血症等)� �脂肪肝、非アルコール性脂肪肝炎(NASH)、突� �心臓死、非致死性心筋梗塞、安静狭心症・� �作狭心症、心血管疾患(例、狭心症の不安定� ��等)、脳血管障害(例、脳血栓、脳塞栓、脳� �血、クモ膜下出血、一過性脳虚血発作等)等� ��の予防・治療剤として使用することができ� ��。
 本発明の核酸を含有する医薬は低毒性であ� ��、そのまま液剤として、または適当な剤型� ��医薬組成物として、ヒトまたは非ヒト哺乳� ��物(例、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、 ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど)に対し� �経口的または非経口的(例、血管内投与、皮� ��投与など)に投与することができる。

 本発明の核酸を上記のインスリン抵抗性改� ��剤、糖および/または脂質代謝異常が関連す る疾患の予防・治療剤などとして使用する場 合、自体公知の方法に従って製剤化し、投与 することができる。即ち、本発明の核酸を、 単独あるいはレトロウイルスベクター、アデ ノウイルスベクター、アデノウイルスアソシ エーテッドウイルスベクターなどの適当な哺 乳動物細胞用の発現ベクターに機能可能な態 様で挿入した後、常套手段に従って製剤化す ることができる。該核酸は、そのままで、あ るいは摂取促進のための補助剤とともに、遺 伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカ テーテルによって投与することができる。あ るいは、エアロゾル化して吸入剤として気管 内に局所投与することもできる。
 さらに、体内動態の改良、半減期の長期化� ��細胞内取り込み効率の改善を目的に、前記� ��酸を単独またはリポソームなどの担体とと� ��に製剤(注射剤)化し、静脈、皮下等に投与� �てもよい。

 本発明の核酸は、それ自体を投与しても� ��いし、または適当な医薬組成物として投与� ��てもよい。投与に用いられる医薬組成物と� ��ては、本発明の核酸と薬理学的に許容され� ��る担体、希釈剤もしくは賦形剤とを含むも� ��であってよい。このような医薬組成物は、� ��口または非経口投与に適する剤形として提� ��される。

 非経口投与のための組成物としては、例� ��ば、注射剤、坐剤等が用いられ、注射剤は� ��脈注射剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉� ��射剤、点滴注射剤等の剤形を包含しても良� ��。このような注射剤は、公知の方法に従っ� ��調製できる。注射剤の調製方法としては、� ��えば、上記本発明の核酸を通常注射剤に用� ��られる無菌の水性液、または油性液に溶解� ��懸濁または乳化することによって調製でき� ��。注射用の水性液としては、例えば、生理� ��塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等� ��液等が用いられ、適当な溶解補助剤、例え� ��、アルコール(例、エタノール)、ポリアル� �ール(例、プロピレングリコール、ポリエチ� ��ングリコール)、非イオン界面活性剤〔例、 ポリソルベート80、HCO-50(polyoxyethylene(50mol)adduc t of hydrogenated castor oil)〕等と併用してもよ い。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆 油等が用いられ、溶解補助剤として安息香酸 ベンジル、ベンジルアルコール等を併用して もよい。調製された注射液は、適当なアンプ ルに充填されることが好ましい。直腸投与に 用いられる坐剤は、上記核酸を通常の坐薬用 基剤に混合することによって調製されてもよ い。

 経口投与のための組成物としては、固体� ��たは液体の剤形、具体的には錠剤(糖衣錠、 フィルムコーティング錠を含む)、丸剤、顆� �剤、散剤、カプセル剤(ソフトカプセル剤を� ��む)、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等が挙げら れる。このような組成物は公知の方法によっ て製造され、製剤分野において通常用いられ る担体、希釈剤もしくは賦形剤を含有してい ても良い。錠剤用の担体、賦形剤としては、 例えば、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン 酸マグネシウムが用いられる。

 上記の非経口用または経口用医薬組成物� ��、活性成分の投与量に適合するような投薬� ��位の剤形に調製されることが好都合である� ��このような投薬単位の剤形としては、例え� ��、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤(アンプ ル)、坐剤が挙げられる。本発明の核酸は、� �えば、投薬単位剤形当たり通常5~500mg、とり� ��け注射剤では5~100mg、その他の剤形では10~250 mg含有されていることが好ましい。

 本発明の核酸を含有する上記医薬の投与� ��は、投与対象、対象疾患、症状、投与ルー� ��などによっても異なるが、例えば、成人の� ��尿病の治療・予防のために使用する場合に� ��、本発明の核酸を1回量として、通常0.01~20mg /kg体重程度、好ましくは0.1~10mg/kg体重程度、� ��らに好ましくは0.1~5mg/kg体重程度を、1日1~5� �程度、好ましくは1日1~3回程度、静脈注射に� ��り投与するのが好都合である。他の非経口� ��与および経口投与の場合もこれに準ずる量� ��投与することができる。症状が特に重い場� ��には、その症状に応じて増量してもよい。

 なお前記した各組成物は、本発明の核酸� ��の配合により好ましくない相互作用を生じ� ��い限り他の活性成分を含有してもよい。

 さらに、本発明の核酸は、他の薬剤、例� ��ば、インスリン抵抗性改善薬(例、トログリ タゾン、ビオグリタゾン等のチアドリジン誘 導体等)、血糖降下薬(例、トルブタミド、グ� ��コピラミド、アセトヘキサミド等のスルホ� ��ルウレア薬、グリミジン、グリブゾール等� ��スルホンアミド薬、メトフォルミン、ブフ� ��ルミン等のビグアナイド薬等)、アルドース 還元酵素阻害薬(例、エパルレスタット等)、� �-グルコシダーゼ阻害薬(例、ボグリボース、 アカルボース等)ソマトメジンC製剤(例、メカ セルミン等)などの抗糖尿病薬;中枢性抗肥満� ��(例、デキスフェンフルラミン、フェンフル ラミン、フェンテルミン等)、MCH受容体拮抗� �(例、SB-568849、SNAP-7941等)、ニューロペプチド Y拮抗薬(例、CP-422935等)、カンナビノイド受容 体拮抗薬(例、SR-141716、SR-147778等)、グレリン� ��抗薬、レプチン、β3アゴニストなどの抗肥� ��薬などと併用してもよい。本発明の核酸お� ��び上記薬剤は、同時または異なった時間に� ��者に投与すればよい。

(2)CPSF5もしくはCPSF6に対する抗体、CPSF5もしく はCPSF6の発現または活性を阻害する低分子化� ��物等を含有する医薬
 CPSF5もしくはCPSF6に対する抗体や、CPSF5もし� ��はCPSF6の発現または活性を阻害する低分子� �合物は、CPSF5もしくはCPSF6タンパク質の産生� ��たは活性を阻害、あるいはCPSF5およびCPSF6の 相互作用(複合体形成)を阻害することができ� ��。したがって、これらの物質は、生体内に� ��けるCPSF5もしくはCPSF6タンパク質の機能や作 用を抑制し、肝臓などにおける糖新生作用を 阻害することができ、例えばインスリン抵抗 性改善剤、糖新生阻害剤などとして、例えば 糖代謝異常が関連する疾患〔例、糖尿病(好� �しくはII型糖尿病)、糖尿病性合併症(例、神� ��障害、腎症、網膜症等)、耐糖能異常、肥満 症、メタボリックシンドローム等〕、脂質代 謝異常が関連する疾患〔例、動脈硬化、高血 圧、高脂血症(特に高トリグリセリド血症等)� ��脂肪肝、非アルコール性脂肪肝炎(NASH)、突� ��心臓死、非致死性心筋梗塞、安静狭心症・� ��作狭心症、心血管疾患(例、狭心症の不安定 化等)、脳血管障害(例、脳血栓、脳塞栓、脳� ��血、クモ膜下出血、一過性脳虚血発作等)等 〕の予防・治療剤として使用することができ る。
 上記の抗体や低分子化合物を含有する医薬� ��低毒性であり、そのまま液剤として、また� ��適当な剤型の医薬組成物として、ヒトまた� ��哺乳動物(例、マウス、ラット、ウサギ、ヒ ツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど)� �対して経口的または非経口的(例、血管内投� ��、皮下投与など)に投与することができる。

 上記の抗体や低分子化合物は、それ自体� ��投与してもよいし、または適当な医薬組成� ��として投与してもよい。投与に用いられる� ��薬組成物としては、上記の抗体もしくは低� ��子化合物またはその塩と薬理学的に許容さ� ��得る担体、希釈剤もしくは賦形剤とを含む� ��のであってもよい。このような医薬組成物� ��、経口または非経口投与に適する剤形とし� ��提供される。

 非経口投与のための組成物としては、例� ��ば、注射剤、坐剤等が用いられ、注射剤は� ��脈注射剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉� ��射剤、点滴注射剤等の剤形を包含しても良� ��。このような注射剤は、公知の方法に従っ� ��調製できる。注射剤の調製方法としては、� ��えば、上記本発明の抗体もしくは低分子化� ��物またはその塩を通常注射剤に用いられる� ��菌の水性液、または油性液に溶解、懸濁ま� ��は乳化することによって調製できる。注射� ��の水性液としては、例えば、生理食塩水、� ��ドウ糖やその他の補助薬を含む等張液等が� ��いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アル� ��ール(例、エタノール)、ポリアルコール(例� ��プロピレングリコール、ポリエチレングリ� ��ール)、非イオン界面活性剤〔例、ポリソル ベート80、HCO-50(polyoxyethylene(50mol)adduct of hydro genated castor oil)〕等と併用してもよい。油性 液としては、例えば、ゴマ油、大豆油等が用 いられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル 、ベンジルアルコール等を併用してもよい。 調製された注射液は、適当なアンプルに充填 されることが好ましい。直腸投与に用いられ る坐剤は、上記抗体またはその塩を通常の坐 薬用基剤に混合することによって調製されて も良い。

 経口投与のための組成物としては、固体� ��たは液体の剤形、具体的には錠剤(糖衣錠、 フィルムコーティング錠を含む)、丸剤、顆� �剤、散剤、カプセル剤(ソフトカプセル剤を� ��む)、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等が挙げら れる。このような組成物は公知の方法によっ て製造され、製剤分野において通常用いられ る担体、希釈剤もしくは賦形剤を含有してい ても良い。錠剤用の担体、賦形剤としては、 例えば、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン 酸マグネシウムが用いられる。

 上記の非経口用または経口用医薬組成物� ��、活性成分の投与量に適合するような投薬� ��位の剤形に調製されることが好都合である� ��このような投薬単位の剤形としては、例え� ��、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤(アンプ ル)、坐剤が挙げられる。抗体や低分子化合� �は、投薬単位剤形当たり通常5~500mg、とりわ� ��注射剤では5~100mg、その他の剤形では10~250mg� ��有されていることが好ましい。

 上記の抗体もしくは低分子化合物または� ��の塩を含有する上記医薬の投与量は、投与� ��象、対象疾患、症状、投与ルートなどによ� ��ても異なるが、例えば、成人の糖尿病の治� ��・予防のために使用する場合には、抗体も� ��くは低分子化合物を1回量として、通常0.01~2 0mg/kg体重程度、好ましくは0.1~10mg/kg体重程度� ��さらに好ましくは0.1~5mg/kg体重程度を、1日1~ 5回程度、好ましくは1日1~3回程度、静脈注射� ��より投与するのが好都合である。他の非経� ��投与および経口投与の場合もこれに準ずる� ��を投与することができる。症状が特に重い� ��合には、その症状に応じて増量してもよい� ��

 上記の抗体もしくは低分子化合物またはそ� ��塩は、それ自体または適当な医薬組成物と� ��て投与することができる。上記投与に用い� ��れる医薬組成物は、上記抗体もしくは低分� ��化合物またはその塩と薬理学的に許容され� ��る担体、希釈剤もしくは賦形剤とを含むも� ��である。かかる組成物は、経口または非経� ��投与(例、血管内注射、皮下注射など)に適� �る剤形として提供される。
 なお前記した各組成物は、上記抗体や低分� ��化合物との配合により好ましくない相互作� ��を生じない限り他の活性成分を含有しても� ��い。
 さらに、上記の抗体もしくは低分子化合物� ��、本発明の核酸を含有する医薬において前� ��したと同様の他の薬剤と併用してもよい。� ��記の抗体もしくは低分子化合物とそれらの� ��の薬剤とは、同時または異なった時間に患� ��に投与すればよい。

(3)疾病に対する医薬候補化合物のスクリーニ ング
 上述の通り、CPSF5および/またはCPSF6の発現� �よび/または活性を阻害すると、インスリン� ��激したときの肝臓などにおける糖新生作用� ��阻害される。従って、CPSF5もしくはCPSF6タン パク質の発現および/または活性を阻害する� �合物またはその塩は、例えばインスリン抵� �性改善剤、糖新生阻害剤などとして、例え� �糖代謝異常が関連する疾患〔例、糖尿病(好� ��しくはII型糖尿病)、糖尿病性合併症(例、神 経障害、腎症、網膜症等)、耐糖能異常、肥� �症、メタボリックシンドローム等〕、脂質� �謝異常が関連する疾患〔例、動脈硬化、高� �圧、高脂血症(特に高トリグリセリド血症等) 、脂肪肝、非アルコール性脂肪肝炎(NASH)、突 然心臓死、非致死性心筋梗塞、安静狭心症・ 労作狭心症、心血管疾患(例、狭心症の不安� �化等)、脳血管障害(例、脳血栓、脳塞栓、脳 出血、クモ膜下出血、一過性脳虚血発作等)� �〕の予防・治療剤として使用することがで� �る。
 したがって、CPSF5および/またはCPSF6タンパ� �質あるいはその部分ペプチドを産生する細� �は、該タンパク質(遺伝子)の発現量および/� �たは活性を指標とすることにより、インス� �ン抵抗性改善作用を有する物質のスクリー� �ングのためのツールとして用いることがで� �る。

 CPSF5もしくはCPSF6タンパク質の活性を阻害 する化合物またはその塩をスクリーニングす る場合、該スクリーニング方法は、CPSF5およ� ��/またはCPSF6タンパク質を産生する能力を有� ��る細胞を、試験化合物の存在下および非存� ��下に培養し、両条件下におけるCPSF5および/� ��たはCPSF6タンパク質の活性を比較すること� �含む。

 上記のスクリーニング方法において用いら� ��るCPSF5および/またはCPSF6タンパク質を産生� �る能力を有する細胞としては、それらを生� �発現しているヒトもしくは他の哺乳動物細� �またはそれを含む生体試料(例、血液、組織� ��臓器等)であれば特に制限はないが、インス リン低感受性の細胞株(例、後述の実施例の� �法に従って樹立され得るラット肝臓由来の� �ンスリン低感受性細胞株)等が好ましく挙げ� ��れる。非ヒト動物由来の血液、組織、臓器� ��の場合は、それらを生体から単離して培養� ��てもよいし、あるいは生体自体に試験化合� ��を投与し、一定時間経過後にそれら生体試� ��を単離してもよい。
 また、CPSF5および/またはCPSF6タンパク質ま� �はその部分ペプチドを産生する能力を有す� �細胞としては、公知慣用の遺伝子工学的手� �により作製された各種の形質転換体が例示� �れる。宿主としては、例えば、H4IIE-C3細胞、 HepG2細胞、HEK293細胞、COS7細胞、CHO細胞などの 動物細胞が好ましく用いられる。

 具体的には、CPSF5またはその部分ペプチド� �コードするDNA(即ち、配列番号:1で表される� �基配列もしくは該塩基配列とハイストリン� �ェントな条件下でハイブリダイズし、且つ� �列番号:2で表されるアミノ酸配列からなるタ ンパク質と同質の活性を有するポリペプチド をコードする塩基配列を含むDNA)、および/ま� ��はCPSF6またはその部分ペプチドをコードす� �DNA(即ち、配列番号:3で表される塩基配列も� �くは該塩基配列とハイストリンジェントな� �件下でハイブリダイズし、且つ配列番号:4で 表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と 同質の活性を有するポリペプチドをコードす る塩基配列を含むDNA)を、適当な発現ベクタ� �中のプロモーターの下流に連結して宿主動� �細胞に導入することにより調製することが� �きる。
 CPSF5またはその部分ペプチドをコードするDN AおよびCPSF6またはその部分ペプチドをコード するDNAは、例えば、配列番号:1および配列番� ��:3で表される塩基配列に基づいて、適当な� �リゴヌクレオチドをプローブもしくはプラ� �マーとして合成し、前記したCPSF5およびCPSF6� ��産生する細胞・組織由来のcDNAもしくはcDNA� �イブラリーから、ハイブリダイゼーション� �やPCR法を用いてクローニングすることがで� �る。ハイブリダイゼーションは、例えば、� �レキュラー・クローニング(Molecular Cloning)第 2版(J. Sambrook et al., Cold Spring HarborLab. Press , 1989)に記載の方法などに従って行なうこと� ��できる。また、市販のライブラリーを使用� ��る場合、ハイブリダイゼーションは、該ラ� ��ブラリーに添付された使用説明書に記載の� ��法に従って行うことができる。

 DNAの塩基配列は、公知のキット、例えば、M utan ^TM -super Express Km(宝酒造(株))、Mutan ^TM -K(宝酒造(株))等を用いて、ODA-LA PCR法、Gapped� �duplex法、Kunkel法等の自体公知の方法あるい� �それらに準じる方法に従って変換すること� �できる。

 クローン化されたDNAは、目的によりその� ��ま、または所望により制限酵素で消化する� ��、リンカーを付加した後に、使用すること� ��できる。該DNAはその5'末端側に翻訳開始コ� �ンとしてのATGを有し、また3'末端側には翻訳 終止コドンとしてのTAA、TGAまたはTAGを有して いてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳 終止コドンは、適当な合成DNAアダプターを用 いて付加することができる。

 発現ベクターとしては、動物細胞発現プラ� ��ミド(例:pA1-11、pXT1、pRc/CMV、pRc/RSV、pcDNAI/Neo) ;λファージなどのバクテリオファージ;レト� �ウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウ� �ルスなどの動物ウイルスベクターなどが用� �られる。プロモーターとしては、遺伝子の� �現に用いる宿主に対応して適切なプロモー� �ーであればいかなるものでもよい。例えば� �SRαプロモーター、SV40プロモーター、LTRプロ モーター、CMV(サイトメガロウイルス)プロモ� ��ター、RSV(ラウス肉腫ウイルス)プロモータ� �、MoMuLV(モロニーマウス白血病ウイルス)LTR、 HSV-TK(単純ヘルペスウイルスチミジンキナー� �)プロモーターなどが用いられる。なかでも� ��CMVプロモーター、SRαプロモーターなどが好 ましい。
 発現ベクターとしては、上記の他に、所望� ��よりエンハンサー、スプライシングシグナ� ��、ポリA付加シグナル、選択マーカー、SV40� �製起点(以下、SV40 oriと略称する場合がある) などを含有しているものを用いることができ る。選択マーカーとしては、例えば、ジヒド ロ葉酸還元酵素遺伝子(以下、dhfrと略称する� ��合がある、メソトレキセート(MTX)耐性)、ア� ��ピシリン耐性遺伝子(以下、amp ^r と略称する場合がある)、ネオマイシン耐性� �伝子(以下、neo ^r と略称する場合がある、G418耐性)等が挙げら� ��る。特に、dhfr遺伝子欠損チャイニーズハム スター細胞を用い、dhfr遺伝子を選択マーカ� �として使用する場合、チミジンを含まない� �地によって目的遺伝子を選択することもで� �る。

 CPSF5をコードするDNAとCPSF6をコードするDNA の両方を宿主動物細胞に導入する場合、これ らのDNAは同一ベクター上にジシトロニックに 挿入されてもよいし、IRES配列を用いてモノ� �ストロニックに挿入されてもよい。あるい� �、これらのDNAは別個の発現ベクターにそれ� �れ挿入され、コトランスフェクションによ� �宿主細胞に導入されてもよい。

 上記したCPSF5および/またはCPSF6をコードす� �DNAを含む発現ベクターで宿主を形質転換す� �ことにより、CPSF5および/またはCPSF6発現細胞 を製造することができる。
 宿主としては、哺乳動物細胞、例えば、HepG 2細胞、HEK293細胞、HeLa細胞、ヒトFL細胞、サ� �COS-7細胞、サルVero細胞、チャイニーズハム� �ター卵巣細胞(以下、CHO細胞と略記)、dhfr遺� �子欠損CHO細胞(以下、CHO(dhfr ^- )細胞と略記)、マウスL細胞,マウスAtT-20細胞� �マウスミエローマ細胞、ラットH4IIE-C3細胞、 ラットGH3細胞などが用いられ得る。

 形質転換は、リン酸カルシウム共沈殿法� ��PEG法、エレクトロポレーション法、マイク� ��インジェクション法、リポフェクション法� ��どにより行うことができる。例えば、細胞� ��学別冊8 新細胞工学実験プロトコール,263-26 7 (1995)(秀潤社発行)、ヴィロロジー(Virology),52 巻,456 (1973)に記載の方法を用いることができ る。

 上記のようにして得られる形質転換細胞� ��生来CPSF5およびCPSF6タンパク質を産生する能 力を有する哺乳動物細胞または該細胞を含む 組織・臓器は、例えば、約5~20%の胎仔牛血清� ��含む最小必須培地(MEM)〔Science,122巻,501(1952)� �,ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)〔Virology,8 巻,396(1959)〕,RPMI 1640培地〔The Journal of the A merican Medical Association,199巻,519(1967)〕,199培地� ��Proceeding of the Society for the Biological Medici ne,73巻,1(1950)〕などの培地中で培養すること� �できる。培地のpHは約6~8であるのが好ましい 。培養は通常約30~40℃で行ない、必要に応じ� ��通気や撹拌を加える。

 試験化合物としては、例えばタンパク質� ��ペプチド、抗体、非ペプチド性化合物、合� ��化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽� ��液、動物組織抽出液、血漿などが挙げられ� ��これらの物質は新規なものであってもよい� ��、公知のものであってもよい。

 試験化合物の上記細胞との接触は、例え� ��、上記の培地や各種緩衝液(例えば、HEPES緩� ��液、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水� ��トリス塩酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酢酸緩� ��液など)の中に試験化合物を添加して、細胞 を一定時間インキュベートすることにより実 施することができる。添加される試験化合物 の濃度は化合物の種類(溶解度、毒性等)によ� ��異なるが、例えば、約0.1nM~約100nMの範囲で� �宜選択される。インキュベート時間として� �、例えば、約10分~約24時間が挙げられる。

 CPSF5およびCPSF6タンパク質を産生する細胞 が、非ヒト哺乳動物個体の形態で提供される 場合、該動物個体の状態は特に制限されない が、例えば、db/dbマウス、ob/obマウス、KKAyマ� ��ス、Zucker fattyラット等の肥満および/また� �糖尿病モデル動物であってもよい。使用さ� �る動物の飼育条件に特に制限はないが、SPF� �レード以上の環境下で飼育されたものであ� �ことが好ましい。試験化合物の該細胞との� �触は、該動物個体への試験化合物の投与に� �って行われる。投与経路は特に制限されな� �が、例えば、静脈内投与、動脈内投与、皮� �投与、皮内投与、腹腔内投与、経口投与、� �道内投与、直腸投与等が挙げられる。投与� �も特に制限はないが、例えば、1回量として� ��0.5~20 mg/kgを、1日1~5回、好ましくは1日1~3回� ��1~14日間投与することができる。

 上記のスクリーニング方法におけるCPSF5� �よび/またはCPSF6活性の測定は、例えば、標� �したRNAプローブとの結合などを指標にして� �定することができ、例えば、Ruegseggerら(1998� �, 上述)に記載の方法等に従って行うことが� ��きるが、それに限定されない。活性測定の� ��めの被験試料としては、CPSF5および/またはC PSF6タンパク質を産生する細胞が細胞培養、� �織、臓器培養の形態で提供される場合は該� �養物の抽出液が、該細胞がそれを含む非ヒ� �哺乳動物個体として提供される場合は、該� �体から分離した細胞、組織、臓器の抽出物� �例えば、肝臓、脂肪組織、骨格筋、あるい� �それらの組織切片等のホモジネートなどが� �げられる。

 例えば、上記のスクリーニング方法にお� ��て、試験化合物の存在下におけるCPSF5およ� �/またはCPSF6タンパク質の活性が、試験化合� �の非存在下における活性に比べて、約20%以� �、好ましくは30%以上、より好ましくは約50%� �上阻害された場合に、該試験化合物または� �の塩を、CPSF5および/またはCPSF6タンパク質の 活性阻害物質、従って、インスリン抵抗性改 善作用を有する物質の候補として選択するこ とができる。

 本発明はまた、CPSF5および/またはCPSF6タ� �パク質を産生する能力を有する細胞におけ� �該タンパク質(遺伝子)の発現を、試験化合物 の存在下と非存在下で比較することを特徴と する、インスリン抵抗性改善作用を有する物 質のスクリーニング方法を提供する。本方法 において用いられる細胞、試験化合物の種類 、試験化合物と細胞との接触の態様などは、 上記したCPSF5および/またはCPSF6タンパク質の� ��性を指標とする方法と同様である。

 CPSF5およびCPSF6の発現量は、前記したCPSF5ま� ��はCPSF6をコードするDNAとハイストリンジェ� �トな条件下でハイブリダイズし得る核酸、� �ち、配列番号:1(配列番号:3)で表される塩基� �列もしくはそれと相補的な塩基配列とハイ� �トリンジェントな条件下でハイブリダイズ� �得る核酸(以下、「本発明の検出用核酸」と� ��う場合がある)を用いて、CPSF5またはCPSF6のmR NAを検出することにより、RNAレベルで測定す� ��ことができる。あるいは、該発現量は、前� ��したCPSF5に対する抗体またはCPSF6に対する抗 体(以下、「本発明の検出用抗体」とい場合� �ある)を用いて、これらのタンパク質を検出� ��ることにより、タンパク質レベルで測定す� ��こともできる。
 従って、より具体的には、本発明は、
(a)CPSF5および/またはCPSF6タンパク質を産生す� ��能力を有する細胞を試験化合物の存在下お� ��び非存在下に培養し、両条件下における該� ��ンパク質をコードするmRNAの量を、本発明の 検出用核酸を用いて測定、比較することを特 徴とする、インスリン抵抗性改善物質のスク リーニング方法、および
(b)CPSF5および/またはCPSF6タンパク質を産生す� ��能力を有する細胞を試験化合物の存在下お� ��び非存在下に培養し、両条件下における該� ��ンパク質の量を、本発明の検出用抗体を用� ��て測定、比較することを特徴とする、イン� ��リン抵抗性改善物質のスクリーニング方法� ��提供する。

 例えば、CPSF5および/またはCPSF6のmRNA量また� ��タンパク質量の測定は、具体的には以下の� ��うにして行うことができる。
(i)正常あるいは疾患(例えば、糖尿病、肥満� �高血圧、高脂血症など)モデル非ヒト哺乳動� ��(例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ 、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど)に対� �て、薬剤(例えば、インスリン、cAMP、グルコ ース等)などを与え、一定時間経過した後に� �血液、あるいは特定の臓器(例えば、肝臓、� ��肪組織、骨格筋等)、あるいは臓器から単離 した組織または細胞を得る。
 得られた細胞に含まれるCPSF5および/またはC PSF6のmRNAは、例えば、通常の方法により細胞� ��からmRNAを抽出し、例えば、RT-PCRなどの手法 を用いることにより定量することができ、あ るいは自体公知のノーザンブロット解析によ り定量することもできる。一方、CPSF5およびC PSF6タンパク質量は、ウェスタンブロット解� �や以下に詳述する各種イムノアッセイ法を� �いて定量することができる。
(ii)CPSF5および/またはCPSF6タンパク質をコード するポリヌクレオチドを導入した形質転換体 を上記の方法に従って作製し、該形質転換体 に含まれるCPSF5および/またはCPSF6タンパク質� ��るいはそれをコードするmRNAを、上記(i)と同 様にして定量、解析することができる。

 CPSF5および/またはCPSF6の発現量を変化させ� �物質のスクリーニングは、
(i)正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に 対して、薬剤などを与える一定時間前(30分前 ~24時間前、好ましくは30分前~12時間前、より� ��ましくは1時間前~6時間前)もしくは一定時間 後(30分後~3日後、好ましくは1時間後~2日後、� ��り好ましくは1時間後~24時間後)、または薬� �などと同時に試験化合物を投与し、投与か� �一定時間が経過した後(30分後~3日後、好まし くは1時間後~2日後、より好ましくは1時間後~2 4時間後)、該動物から単離した細胞に含まれ� ��CPSF5をコードするmRNA量および/またはCPSF6を� ��ードするmRNA量、あるいはCPSF5タンパク質量� ��よび/またはCPSF6タンパク質量を定量、解析� ��ることにより、あるいは
(ii)形質転換体を常法に従って培養する際に� �験化合物を培地もしくは緩衝液中に添加し� �一定時間インキュベート後(1日後~7日後、好� ��しくは1日後~3日後、より好ましくは2日後~3� ��後)、該形質転換体に含まれるCPSF5をコード� ��るmRNA量および/またはCPSF6をコードするmRNA� �、あるいはCPSF5タンパク質量および/またはCP SF6タンパク質量を定量、解析することにより 行うことができる。

 上記(b)のスクリーニング方法におけるCPSF5� �よびCPSF6タンパク質の量の測定は、具体的に は、例えば、
(i)本発明の検出用抗体と、試料液および標識 化されたCPSF5もしくはCPSF6タンパク質とを競� �的に反応させ、該抗体に結合した標識化さ� �たタンパク質を検出することにより試料液� �のCPSF5もしくはCPSF6タンパク質を定量する方� ��、
(ii)試料液と、担体上に不溶化した本発明の� �出用抗体および標識化された別の本発明の� �出用抗体とを、同時あるいは連続的に反応� �せた後、不溶化担体上の標識剤の量(活性)を 測定することにより、試料液中のCPSF5もしく� ��CPSF6タンパク質を定量する方法等が挙げら� �る。
 上記(ii)の定量法においては、2種の抗体はCP SF5もしくはCPSF6タンパク質の異なる部分を認� ��するものであることが望ましい。例えば、� ��方の抗体が該2タンパク質のN端部を認識す� �抗体であれば、他方の抗体として該タンパ� �質のC端部と反応するものを用いることがで� ��る。
 標識物質を用いる測定法に用いられる標識� ��としては、例えば、放射性同位元素、酵素� ��蛍光物質、発光物質などが用いられる。放� ��性同位元素としては、例えば、〔 ¹²⁵ I〕、〔 ¹³¹ I〕、〔 ³ H〕、〔 ¹⁴ C〕、〔 ³² P〕、〔 ³³ P〕、〔 ³⁵ S〕などが用いられる。上記酵素としては、� �定で比活性の大きなものが好ましく、例え� �、β-ガラクトシダーゼ、β-グルコシダーゼ� �アルカリフォスファターゼ、パーオキシダ� �ゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる� �蛍光物質としては、例えば、フルオレスカ� �ン、フルオレッセンイソチオシアネート、� �アニン蛍光色素などが用いられる。発光物� �としては、例えば、ルミノール、ルミノー� �誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなどが� �いられる。さらに、抗体あるいは抗原と標� �剤との結合にビオチン-(ストレプト)アビジ� �系を用いることもできる。

 本発明の検出用抗体を用いるCPSF5およびCP SF6タンパク質の定量法は、特に制限されるべ きものではなく、試料液中の抗原量に対応し た、抗体、抗原もしくは抗体-抗原複合体の� �を化学的または物理的手段により検出し、� �れを既知量の抗原を含む標準液を用いて作� �した標準曲線より算出する測定法であれば� �いずれの測定法を用いてもよい。例えば、� �フロメトリー、競合法、イムノメトリック� �およびサンドイッチ法が好適に用いられる� �感度、特異性の点で、例えば、後述するサ� �ドイッチ法を用いるのが好ましい。

 抗原あるいは抗体の不溶化にあたっては� ��物理吸着を用いてもよく、また通常タンパ� ��質あるいは酵素等を不溶化・固定化するの� ��用いられる化学結合を用いてもよい。担体� ��しては、アガロース、デキストラン、セル� ��ースなどの不溶性多糖類、ポリスチレン、� ��リアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂� ��あるいはガラス等があげられる。

 サンドイッチ法においては不溶化した本� ��明の検出用抗体に試料液を反応させ(1次反� �)、さらに標識化した別の本発明の検出用抗� ��を反応させ(2次反応)た後、不溶化担体上の� ��識剤の量もしくは活性を測定することによ� ��、試料液中のCPSF5もしくはCPSF6タンパク質を 定量することができる。1次反応と2次反応は� ��の順序で行っても、また、同時に行っても� ��いし、時間をずらして行ってもよい。標識� ��剤および不溶化の方法は前記のそれらに準� ��ることができる。また、サンドイッチ法に� ��る免疫測定法において、固相化抗体あるい� ��標識化抗体に用いられる抗体は必ずしも1種 類である必要はなく、測定感度を向上させる 等の目的で2種類以上の抗体の混合物を用い� �もよい。

 本発明の検出用抗体は、サンドイッチ法以� ��の測定システム、例えば、競合法、イムノ� ��トリック法あるいはネフロメトリーなどに� ��用いることができる。
 競合法では、試料液中のCPSF5もしくはCPSF6タ ンパク質と標識したCPSF5もしくはCPSF62タンパ� ��質とを抗体に対して競合的に反応させた後� ��未反応の標識抗原(F)と、抗体と結合した標� ��抗原(B)とを分離し(B/F分離)、B、Fいずれかの 標識量を測定することにより、試料液中のCPS F5もしくはCPSF6タンパク質を定量する。本反� �法には、抗体として可溶性抗体を用い、ポ� �エチレングリコールや前記抗体(1次抗体)に� �する2次抗体などを用いてB/F分離を行う液相� ��、および、1次抗体として固相化抗体を用い るか(直接法)、あるいは1次抗体は可溶性のも のを用い、2次抗体として固相化抗体を用い� �(間接法)固相化法とが用いられる。
 イムノメトリック法では、試料液中のCPSF5� �しくはCPSF6タンパク質と固相化したCPSF5もし� ��はCPSF6タンパク質とを一定量の標識化抗体� �対して競合反応させた後、固相と液相を分� �するか、あるいは試料液中のCPSF5もしくはCPS F6タンパク質と過剰量の標識化抗体とを反応� ��せ、次に固相化したCPSF5もしくはCPSF6タンパ ク質を加えて未反応の標識化抗体を固相に結 合させた後、固相と液相を分離する。次に、 いずれかの相の標識量を測定し試料液中の抗 原量を定量する。
 また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるい� ��溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性� ��沈降物の量を測定する。試料液中のCPSF5も� �くはCPSF6タンパク質の量がわずかであり、少 量の沈降物しか得られない場合にもレーザー の散乱を利用するレーザーネフロメトリーな どが好適に用いられる。

 これら個々の免疫学的測定法を本発明の定� ��方法に適用するにあたっては、特別の条件� ��操作等の設定は必要とされない。それぞれ� ��方法における通常の条件、操作法に当業者� ��通常の技術的配慮を加えてCPSF5およびCPSF6タ ンパク質の測定系を構築すればよい。これら の一般的な技術手段の詳細については、総説 、成書などを参照することができる。
 例えば、入江 寛編「ラジオイムノアッセ� �」(講談社、昭和49年発行)、入江 寛編「続� �ジオイムノアッセイ」(講談社、昭和54年発� �)、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」(医学書 院、昭和53年発行)、石川栄治ら編「酵素免疫 測定法」(第2版)(医学書院、昭和57年発行)、� �川栄治ら編「酵素免疫測定法」(第3版)(医学� ��院、昭和62年発行)、「Methods in ENZYMOLOGY」  Vol. 70 (Immunochemical Techniques (Part A))、同書  Vol. 73 (Immunochemical Techniques (Part B))、同書  Vol. 74 (Immunochemical Techniques (Part C))、同書  Vol. 84 (Immunochemical Techniques (Part D: Selected  Immunoassays))、同書 Vol. 92 (Immunochemical Techniqu es (Part E: Monoclonal Antibodies and General Immunoa ssay Methods))、同書 Vol. 121 (Immunochemical Techni ques (Part I: Hybridoma Technology and Monoclonal Ant ibodies))(以上、アカデミックプレス社発行)な� ��を参照することができる。
 以上のようにして、本発明の検出用抗体を� ��いることによって、細胞におけるCPSF5およ� �CPSF6タンパク質の量を感度よく定量すること ができる。

 例えば、上記(a)および(b)のスクリーニン� ��法において、試験化合物の存在下におけるC PSF5および/またはCPSF6の発現量(mRNA量またはタ ンパク質量)が、試験化合物の非存在下にお� �る場合に比べて、約20%以上、好ましくは約30 %以上、より好ましくは約50%以上阻害された� �合、該試験化合物またはその塩を、CPSF5およ び/またはCPSF6タンパク質の発現阻害物質、従 って、インスリン抵抗性改善作用を有する物 質の候補として選択することができる。

 本発明のスクリーニング方法を用いて得ら� ��る、CPSF5の発現および/または活性阻害物質� ��らびにCPSF6の発現および/または活性阻害物� ��(遊離体であっても塩の形態であってもよい )は、例えばインスリン抵抗性改善剤、糖新� �阻害剤などとして、例えば糖代謝異常が関� �する疾患〔例、糖尿病(好ましくはII型糖尿� �)、糖尿病性合併症(例、神経障害、腎症、網 膜症等)、耐糖能異常、肥満症、メタボリッ� �シンドローム等〕、脂質代謝異常が関連す� �疾患〔例、動脈硬化、高血圧、高脂血症(特� ��高トリグリセリド血症等)、脂肪肝、非アル コール性脂肪肝炎(NASH)、突然心臓死、非致死 性心筋梗塞、安静狭心症・労作狭心症、心血 管疾患(例、狭心症の不安定化等)、脳血管障� ��(例、脳血栓、脳塞栓、脳出血、クモ膜下出 血、一過性脳虚血発作等)等〕の予防・治療� �として使用することができる。
 本発明のスクリーニング方法を用いて得ら� ��る物質を上述の予防・治療剤として使用す� ��場合、上記CPSF5(もしくはCPSF6)の発現および/ または活性を阻害する低分子化合物と同様に 製剤化することができ、同様の投与経路およ び投与量で、ヒトまたは哺乳動物(例えば、� �ウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウ� �、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー� �ど)に対して、経口的にまたは非経口的に投� ��することができる。

 本明細書において、塩基やアミノ酸などを� ��号で表示する場合、IUPAC-IUB Commissionon Bioche mical Nomenclature による略号あるいは当該分野 における慣用略号に基づくものであり、その 例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性 体があり得る場合は、特に明示しなければL� �を示すものとする。
 DNA     :デオキシリボ核酸
 cDNA    :相補的デオキシリボ核酸
  A      :アデニン
  T      :チミン
  G      :グアニン
  C      :シトシン
 RNA     :リボ核酸
 mRNA    :メッセンジャーリボ核酸
 dATP    :デオキシアデノシン三リン酸
 dTTP    :デオキシチミジン三リン酸
 dGTP    :デオキシグアノシン三リン酸
 dCTP    :デオキシシチジン三リン酸
 ATP     :アデノシン三リン酸
 EDTA    :エチレンジアミン四酢酸
 SDS     :ドデシル硫酸ナトリウム
 Gly      :グリシン
 Ala         :アラニン
 Val         :バリン
 Leu         :ロイシン
 Ile         :イソロイシン
 Ser         :セリン
 Thr         :スレオニン
 Cys          :システイン
 Met      :メチオニン
 Glu      :グルタミン酸
 Asp      :アスパラギン酸
 Lys      :リジン
 Arg      :アルギニン
 His      :ヒスチジン
 Phe      :フェニルアラニン
 Tyr      :チロシン
 Trp      :トリプトファン
 Pro      :プロリン
 Asn      :アスパラギン
 Gln      :グルタミン
 pGlu    :ピログルタミン酸
 Sec     :セレノシステイン(selenocysteine)

 本願明細書の配列表の配列番号は、以下の� ��列を示す。
〔配列番号:1〕
CPSF5をコードするcDNAの塩基配列を示す。
〔配列番号:2〕
CPSF5のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号:3〕
CPSF6をコードするcDNAの塩基配列を示す。
〔配列番号:4〕
CPSF6のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号:5〕
CPSF5に対するsiRNA、CPSF5-1の標的配列の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:6〕
CPSF5に対するsiRNA、CPSF5-1のセンス鎖の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:7〕
CPSF5に対するsiRNA、CPSF5-1のアンチセンス鎖の� ��基配列を示す。
〔配列番号:8〕
CPSF6に対するsiRNA、CPSF6-1の標的配列の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:9〕
CPSF6に対するsiRNA、CPSF6-1のセンス鎖の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:10〕
CPSF6に対するsiRNA、CPSF6-1のアンチセンス鎖の� ��基配列を示す。
〔配列番号:11〕
CPSF5に対するsiRNA、CPSF5-2の標的配列の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:12〕
CPSF5に対するsiRNA、CPSF5-2のセンス鎖の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:13〕
CPSF5に対するsiRNA、CPSF5-2のアンチセンス鎖の� ��基配列を示す。
〔配列番号:14〕
CPSF5に対するsiRNA、CPSF5-3の標的配列の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:15〕
CPSF5に対するsiRNA、CPSF5-3のセンス鎖の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:16〕
CPSF5に対するsiRNA、CPSF5-3のアンチセンス鎖の� ��基配列を示す。
〔配列番号:17〕
CPSF5に対するsiRNA、CPSF5-4の標的配列の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:18〕
CPSF5に対するsiRNA、CPSF5-4のセンス鎖の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:19〕
CPSF5に対するsiRNA、CPSF5-4のアンチセンス鎖の� ��基配列を示す。
〔配列番号:20〕
CPSF6に対するsiRNA、CPSF6-2の標的配列の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:21〕
CPSF6に対するsiRNA、CPSF6-2のセンス鎖の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:22〕
CPSF6に対するsiRNA、CPSF6-2のアンチセンス鎖の� ��基配列を示す。
〔配列番号:23〕
CPSF6に対するsiRNA、CPSF6-3の標的配列の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:24〕
CPSF6に対するsiRNA、CPSF6-3のセンス鎖の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:25〕
CPSF6に対するsiRNA、CPSF6-3のアンチセンス鎖の� ��基配列を示す。
〔配列番号:26〕
CPSF6に対するsiRNA、CPSF6-4の標的配列の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:27〕
CPSF6に対するsiRNA、CPSF6-4のセンス鎖の塩基配� ��を示す。
〔配列番号:28〕
CPSF6に対するsiRNA、CPSF6-4のアンチセンス鎖の� ��基配列を示す。
〔配列番号:29〕
CPSF5に対するセンスプライマーの塩基配列を� ��す。
〔配列番号:30〕
CPSF5に対するアンチセンスプライマーの塩基� ��列を示す。
〔配列番号:31〕
CPSF5に対するプローブの塩基配列を示す。
〔配列番号:32〕
CPSF6に対するセンスプライマーの塩基配列を� ��す。
〔配列番号:33〕
CPSF6に対するアンチセンスプライマーの塩基� ��列を示す。
〔配列番号:34〕
CPSF6に対するプローブの塩基配列を示す。
〔配列番号:35〕
β-アクチンに対するセンスプライマーの塩基 配列を示す。
〔配列番号:36〕
β-アクチンに対するアンチセンスプライマー の塩基配列を示す。
〔配列番号:37〕
β-アクチンに対するプローブの塩基配列を示 す。