说 明 书 一类布鲁顿 技术领域

本发明涉及用于抑制布鲁顿 (Bruton' s) 激酶 (Btk) 并且可以用于治疗由异常 B 细胞活 化导致的自身免疫疾病和炎性疾病的新型衍生 物。 本文所述的新型衍生物 2-苯基-异喹啉 1-酮衍生物可以用于治疗关节炎。

背景技术

蛋白质激酶组成人类酶的最大家族之一并且通 过添加磷酸基团到蛋白质上来调节许 多不同的信号传导过程 (T. Hunter, Cell 1987 50 :823-829) 。特别地， 酪氨酸激酶磷酸化蛋 白质在酪氨酸残基的酚部分。酪氨酸激酶家族 包括控制细胞生长、迁移和分化的成员。异 常的激酶活性己经涉及许多人类疾病， 包括癌症， 自身免疫疾病和炎性疾病。 由于蛋白质 激酶属于细胞信号传导的关键调节剂，它们提 供用小分子激酶抑制剂来调节细胞功能的目 标， 并且因此成为了良好的药物设计靶标。除了激 酶介导的疾病过程的治疗， 激酶活性的 选择性和有效抑制剂还可用于研究细胞信号传 导过程和鉴定其它具有治疗意义的细胞靶 标。

关于 B 细胞在自身免疫和 /或炎性疾病的发病机制中的关键作用存在良� �的证据。消 耗 B 细胞的基于蛋白质的治疗剂如 Rituxan针对自身抗体导致的炎性疾病如类风湿� �关 节炎是有效的 (Rastetter等， Annu Rev Med 2004 55 :477)。 因此， 在 B 细胞活化中发挥 作用的蛋白质激酶的抑制剂应该是对于 B 细胞介导的疾病病理如自身抗体生成有用的治 疗剂。

通过 B 细胞受体 (BCR) 的信号传导控制一系列 B 细胞应答，包括增殖和分化到成熟 的抗体生成细胞。 BCR 是 B 细胞活性的关键调节点并且异常的信号传导可 以导致失调的 B 细胞增殖和病原性自身抗体的形成， 其导致多种自身免疫疾病和 /或炎性疾病。 布鲁顿 (Bruton' s)酪氨酸酸蛋白激酶 (Btk) 是在 BCR 的膜近端和紧接下游的非 BCR相关的激酶。 Btk 的缺乏己经显示阻断 BCR信号传导， 并且因此 Btk 的抑制可以是阻断 B 细胞介导 的疾病过程的有效治疗方法。

Btk 是酪氨酸激酶 Tec 家族的成员，并且显示是早期 B 细胞形成以及成熟 B 细胞活 化和存活的关键调节剂 (Khan 等， Immuni ty 1995 3 :283； Ellmeier等， J. Exp. Med. 2000 192： 1611)。 人的 Btk 突变导致病症 X连锁丙球蛋白缺乏血症 (XLA) (在 Rosen 等 New EngJ.Med.1995 333 :431 禾 P Li ndvall 等 Immunol.Rev.2005 203 :200 中综述）。这些患者是 免疫受损的， 并且显示受损的 B 细胞成熟， 降低的免疫球蛋白和外用 B 细胞水平， 减少 的不依赖 T 细胞的免疫应答以及在 BCR剌激后的减弱的钙动用。

关于 Btk在自身免疫疾病和炎性疾病中的作用的证据 己经由 Btk缺陷型小鼠模型提 供。 在系统性红斑狼疮 (SLE) 的临床前鼠模型中， Btk缺陷型小鼠显示疾病进展的显著 改善。此外， Btk-缺陷型小鼠对胶原诱导的关节炎具有抗性 (Jansson 禾 P Holmda Clin.Exp. Immunol. 1993 94 :459)。己经证明选择性 Btk抑制剂在小鼠关节炎模型中的剂量依赖性功 效 (z. Pan 等， Chem.Med Chem.2007 2 :58-61)。

Btk还由除了 B 细胞之外可能涉及疾病过程的细胞表达。例如 ， Btk 由肥大细胞表 达并且 Btk 缺陷型骨髓来源的肥大细胞显示受损的抗原诱 导的脱粒 (Iwaki 等 J. Biol.Chem. 2005 280 :40261)。 这显示 Btk可以用于治疗病理性肥大细胞反应如变态反 应 和哮喘。此外，其中缺乏 Btk 活性的来自 XLA患者的单核细胞显示在剌激后减少的 TNFa 生成 (Horwood 等 J Exp Med 197： 1603 , 2003)。 因此， TNFa介导的炎症可以由小分子 Btk 抑制剂调节。 此外， 己经报道 Btk 在细胞凋亡中发挥作用 Oslam 和 Smith Immunol.Rev.2000178 :49) ， 并且因此 Btk抑制剂对于治疗某些 B 细胞淋巳瘤和白血病 将是有效的 (Feldha n等 J. Exp. Med. 2005 201： 183 7)。

Roche公司在 WO2010100070专利中公开了一类作为布鲁顿激酶抑 制剂的 2-苯基-异 喹啉 1-酮衍生物。 Thomson Pharma的数据显示， 根据有关文献的报道， 推测代表性化合 物为 RN486, 并已进入临床研究阶段。 但是， 我们认为， 分子末端哌嗪环上的甲基可能 容易发生代谢， 将导致该化合物在体内的清除较快， 暴露量不高， 有关文献的报道初步也 验证了我们的推测 (Xu等 J. Pharmacol. Exp. Ther. 2012 341： 1 90)。故而， 为获得药代性质 和体内药效理想、效果优异的化合物， 我们对末端哌嗪环开展更为系统的研究， 获得了预 想的化合物。

RN486 发明内容

本申请提供结构如式 （I )所示的 Btk抑制剂化合物， 它的使用方法， 如本文下面所 本申请提供式 （I)

其中，

R ¹ 是 -R ⁶ - R ⁷ - R ⁸ ;

R ² 选自氢或 -C ₆ 垸基；

R ³ 选自氢、 d-C ₆ 垸基或羟基 C C ₆ 垸基；

R ⁴ 选自氢、 C _r C ₆ 垸基或 ¾ ₈ 环垸基；

R ⁵ 选自氢或卤素；

X、 Y、 Ζ独立选自 CH或 Ν;

Q选自 CH或 Ν， 条件是当 Ζ是 Ν时， Q是 CH;

D、 G独立选自 CH或 N， 但 D、 G不同时为 N;

R ⁶ 选自 C ₆ -C _1Q 芳基、 C ₅ -C _1Q 杂芳基、 C ₃ -C ₈ 环垸基或 C ₄ -C ₈ 杂环垸基， 其每一个任选 被一个或多个 R ^1Q 取代；

R ⁷ 选自 C ₃ -C ₈ 环垸基或 C ₄ -C ₈ 杂环垸基， 其每一个任选被一个或多个 R ¹¹ 取代；

R ⁸ 选自 C ₄ -C ₈ 杂环垸基、 C ₃ -C ₈ 环垸基 -C ₆ 亚垸基、 C ₄ -C ₈ 杂环垸基 C _r C ₆ 亚垸基、 d-C ₆ 垸基、 -COR ⁹ 或 -(S0 ₂ )R ⁹ , C ₄ -C ₈ 杂环垸基选择性地被一个或多个 R ¹² 取代；

R ⁹ 选自 -C ₆ 垸基、 ¾ ₈ 环垸基、 C ₄ -C ₈ 杂环垸基、 C ₆ -C ₁₍₎ 芳基、 C ₅ - 。杂芳基、 C ₃ -C ₈ 环垸基 d-C ₆ 亚垸基、 C ₅ -C ₈ 杂环垸基 C C ₆ 亚垸基、 C ₆ -C _1Q 芳基 C C ₆ 亚垸基、 C ₅ -C ₁₀ 杂 TJ Ci- e ¾υ¾ Ci-C ₆ ¾¾¾ ¾S¾ C广 C ₆ ¾¾ C广 C ₆ ¾¾ ， C广 C ₆ ¾¾ 、 C ₃ -C ₈ 环垸基、 C ₅ -C ₈ 杂环垸基可选地被一个或多个卤素、羟基 、 d-C ₆ 垸氧基取代， C ₆ -C ₁₀ 芳基、 C ₅ -C _1Q 杂芳基可选地被一个或多个卤素、 C _r C ₆ 垸基、 ₁ -0 ₎ 垸氧基、卤代 -C ₆ 垸基取代；

R ^1Q 选自氢、 d-C ₆ 垸基、 羟基、 羟基 d-C ₆ 亚垸基、 C C ₆ 垸氧基、 卤素、 硝基、 氨 基、 酰氨基、 氰基、 氧代基或 ¾代 -C _r C ₆ 垸基取代； R ¹¹ 选自氢、 -C ₆ 垸基、 C _r C ₆ 垸基氨基、 C _r C ₆ 垸基 -C ₆ 垸基氨基、 羟基、 羟基 d-C ₆ 垸基、 C C ₆ 垸氧基、 卤素、 硝基、 氨基、 酰氨基、 酰基、 氰基、 氧代基、 胍基、 羟 基氨基、 羧基、 氨基甲酰基、 氨基甲酸酯、 ^H CH^垸氧基、 ^H d-Cs垸基或羟基取 代 d-C ₆ 垸基取代；

R ¹² 选自氢、 C _r C ₆ 垸基、 ^-^环垸基、 C ₄ -C ₈ 杂环垸基、 C ₃ -C ₈ 环垸基 C _r C ₆ 亚垸基或 C ₄ -C ₈ 杂环垸基 C C ₆ 亚垸基。

当 R ³ 选自羟基 -C ₆ 垸基， X、 Y、 D、 G选自 CH时， R ⁸ 、 R ¹¹ 不选自氢或 C _r C ₆ 垸 基； 当 R ³ 选自 C -Co垸基或羟基 d-C ₆ 垸基， X、 Y、 D、 G选自 CH， Q选自 N时， R ⁸ 不选自氢、 -C ₆ 垸基或 -COR ⁹ ， R ¹¹ 不选自氢、 -C ₆ 垸基或酰基。

更进一步地， 本发明提供了结构如式 （I) 所示的化合物或其药学上可接受的盐，

其中， R ¹ 选自 ；

R'选自 -R ⁷ R ⁸ ;

R ⁷ 选自 C ₄ -C ₈ 杂环垸基， C ₄ -C ₈ 杂环垸基选择性地被一个或多个 R ¹¹ 取代；

R ⁸ 选自 C ₄ -C ₈ 杂环垸基、 C ₃ -C ₈ 环垸基 -C ₆ 亚垸基、 C ₄ -C ₈ 杂环垸基 -C ₆ 亚垸基、 d-C ₆ 垸基、 -COR ⁹ 或 -(S0 ₂ )R ⁹ ， C ₄ -C ₈ 杂环垸基选择性地被一个或多个 R ¹² 取代；

R ⁹ 选自 -C ₆ 垸基、 ¾ ₈ 环垸基、 C ₄ -C ₈ 杂环垸基、 C ₆ -C ₁₍₎ 芳基、 C ₅ - 。杂芳基、 C ₃ -C ₈ 环垸基 d-C ₆ 亚垸基、 C ₅ -C ₈ 杂环垸基 C C ₆ 亚垸基、 C ₆ -C _1Q 芳基 C C ₆ 亚垸基、 C ₅ -C ₁₀ 杂 Ci-C ₆ ¾υ¾ Ci-C ₆ ¾¾¾ ¾S¾ C广 C ₆ ¾¾ C广 C ₆ ¾¾ ， C广 C ₆ ¾¾ 、 C ₃ -C ₈ 环垸基、 C ₅ -C ₈ 杂环垸基可选地被一个或多个卤素、羟基 、 d-C ₆ 垸氧基取代， C ₆ -C ₁₀ 芳基、 C ₅ -C _1Q 杂芳基可选地被一个或多个卤素、 C _r C ₆ 垸基、 ₁ -0 ₎ 垸氧基、卤代 -C ₆ 垸基取代；

R ¹¹ 选自氢、 d-C ₆ 垸基、氰基、羟基或选择性地被一个或多 个卤素、羟基取代的 d-C ₆ 焼基；

R ¹² 选自氢、 d-C ₆ 垸基、 C ₃ -C ₈ 环垸基、 C ₄ -C ₈ 杂环垸基、 C ₃ -C ₈ 环垸基 C C ₆ 亚垸基、 C ₄ -C ₈ 杂环垸基 -C ₆ 亚垸基。

在结构如式 （I) 所示的化合物或其药学上可接受的盐中，

R'优选为 m选自 0-2， 更优选为 0或 1。

R ⁸ 优选为 C ₃ -C ₆ 环垸基亚甲基、 C ₄ -C ₆ 杂环垸基、 C ₄ -C ₆ 杂环垸基亚甲基、 d-C ₆ 垸基、

-COR ^y sK-(S0 ₂ )R ^y , C ₄ -C ₆ 杂环垸基选择性地被一个或多个 R ¹² 取代， 其中， C ₄ -C ₆ 杂环垸

W选自 0、 S或 NR ¹² ; R ¹² 如前所定义。

R ⁹ 优选为 C C ₄ 垸基、 C ₃ -C ₆ 环垸基、 C ₄ -C ₆ 杂环垸基、 苯基、 C ₅ -C ₁₍₎ 杂芳基、 C ₃ -C ₆ 环垸基亚甲基、 C ₄ -C ₆ 杂环垸基亚甲基、 苄基、 甲氨基、 二甲氨基、 乙胺基、 二乙胺基， d-C ₄ 垸基、 C ₃ -C ₆ 环垸基、 C ₄ -C ₆ 杂环垸基选择性地被一个或多个卤素、羟 基、 d-C ₄ 垸氧 基取代， 苯基、 苄基上的苯基、 C ₅ -C _1Q 杂芳基选择性地被一个或多个卤素、 -C ₄ 垸基、 C C ₄ 垸氧基、 卤代 d-C ₄ 垸基取代， 其中 C ₅ -C _1Q 杂芳基包括吡咯基、 吡唑基、 咪唑基、 三氮唑基、 呋喃基、 噁唑基、 噻吩基、 噻唑基、 苯并咪唑基、 苯并三氮唑。

R ¹¹ 优选为氢、 甲基、 乙基、 氰基、 羟基、 -CH ₂ F、 CHF ₂ 、 CF ₃ 或 CH ₂ OH。

更进一步地， 上述结构如式 （I) 物或其药 的盐，

其中， 所述 -R ⁶ - R ⁷ 由 -R ⁶ - R - R'

构成的 R ¹ 如下式所示： M选自 CH或 N;

R ⁸ 选自 C ₄ -C ₈ 杂环垸基、 C _r C ₆ 垸基、 -COR ⁹ ， C ₄ -C ₈ 杂环垸基选择性地被 R ¹² 取代; R ⁹ 选自 C ₃ -C ₈ 环垸基；

R ¹² 选自氢、 -C ₆ 垸基

更进一步的， R ⁸ 选自 Y ⁰ CT 或甲基、 乙基、 丙基。

R ² 选自甲基乙基、 丙基。

R ³ 选自氢、 甲基、 羟基甲基

R ⁴ 选自环丙基。 R ⁵ 选自氢或氟。

X、 Y、 Ζ、 Q独立选自 CH。

D、 G独立选自 CH或 N， 但 D、 G不同时为？。

本发明还涉及一种药用组合物，包含治疗有效 量的游离形式或可药用盐形式的通式化 合物 （I) 作为活性成分； 一种或多种药用载体物质和 /或稀释剂。 也可以包括本发明提供 的通式化合物 （I) 和药学上可接受的载体、 赋形剂或稀释剂。 本发明还涉及一种组合的药用组合物，包含有 效量的游离形式或可药用盐形式的通式 化合物 （I); 一种或多种药用载体物质和 /或稀释剂。

本申请提供用于治疗炎性和 /或自身免疫病症的方法， 所述方法包括向需要它的患者 给药治疗有效量的式 I的任一个的 Btk抑制剂化合物。

本申请提供用于治疗关节炎的方法，所述方法 包括向需要它的患者给药治疗有效量的 式 I 的任一个的 Btk抑制剂化合物。

本申请提供用于治疗类风湿性关节炎的方法， 所述方法包括向需要它的患者给药治疗 有效量的上式或其变体的任一个的 Btk抑制剂化合物。

本申请提供用于治疗哮喘的方法，所述方法包 括向需要它的患者给药治疗有效量的式 I的任一个的 Btk抑制剂化合物。

本申请提供抑制 B 细胞增殖的方法， 所述方法包括向需要它的患者给药治疗有效量 的式 I的任一个的 Btk抑制剂化合物。

本申请提供用于治疗炎性病症的方法，所述方 法包括向需要它的患者共同给药治疗有 效量的抗炎化合物以及式 I 的任一个的 Btk抑制剂化合物。

本申请提供用于治疗关节炎的方法，该方法包 括向需要它的患者共同给药治疗有效量 的抗炎化合物以及式 I 的任一个的 Btk抑制剂化合物。

本申请提供药物组合物， 所述药物组合物包含式 I 的任一个的 Btk抑制剂化合物， 且混合有至少一种药用载体、 赋形剂或稀释剂。

为了检验本发明提供的化合物对于蛋白激酶的 作用水平，采用生化水平酶活性测试和 细胞水平酶活性测试来确定本发明的各种化合 物对一种或多种 PK的活性和作用水平。使 用工艺中熟知的方法， 对于任何激酶均可按照同样的方式设计类似的 实验。

在生化水平酶活性测试中， 利用 HTRF技术检测酪氨酸激酶的活性， HTRF是一种时 间分辨荧光共振能力转移技术， 可以按照已知的说明书或文献方法进行， 参看 Kolb 等， "Tyrosine kinase assays adapted to homogenous time-resolved fluorescence". Drug Discovery Today杂志. 3卷: pp 333-342。 HTRF (均相时间分辨荧光)是用来检测均相体系中待� ��物的 一种最常用的方法， 这种技术结合了荧光共振能量转移 (FRET) 和时间分辨技术 (TR)， 已 经被广泛应用于基于细胞实验和生化实验的药 物研发的不同阶段。 根据 HTRF法的测定 原理，将纯酶 Btk与生物素化的底物以及 ATP—起孵育反应后，加入亲和素标记的 XL-665 和识别底物磷酸化的 Eu标记的抗体， 当底物被 Btk磷酸化后， Eu标记的抗体即可以识别 该磷酸化产物， 与亲和素标记的 XL665形成时间分辨的荧光共振能量转移 （FRET), 而 未被磷酸化的底物由于不能倍抗体识别而无法 形成 FRET信号， 通过测定 665 nm和 620 nm的荧光信号差值测定待测物在不同浓度下对 Btk酪氨酸激酶的抑制活性。 因而， 采用 此法可测定本发明化合物对 Btk酪氨酸激酶的生化水平的活性作用，同时利 用本领域熟知 的方法， 可以对其它蛋白激酶使用相似的测定方法。

在细胞水平酶活的测定是通过测定钙流实现的 。 该实验使用 Fluo-4 Direct™ Calcium Assay Kits试剂盒。 其试剂盒中主要使用的染料为 Fluo 4-AM。 Fluo 4-AM是 Fluo 4的一 种乙酰甲酯衍生物， 通过培养， 能够轻易进入细胞中。 AM进入细胞后会被胞内酯酶所水 解， 产生的 Fluo 4随后会和钙离子结合并发出荧光， 可以使用激光共聚焦显微镜或流式 细胞仪等仪器检测细胞内钙离子浓度的变化。

采取通用的大鼠体内药代实验的测试方法， 还可考察化合物在大鼠体内的药效性质。 采取通用的小鼠的 Arthus Reaction模型或大鼠胶原诱导的关节炎 （rCIA) 模型， 可 考察化合物在小鼠或大鼠上的体内药效。

本发明制备的结构如式 （I) 所示的化合物对布鲁顿激酶活性具有很好的抑 制作用， 其半数抑制浓度 （IC _5Q ) 普遍在 10— ⁷ mol/L以下。 同时， 本发明实施例中制备的具有式 I 结构的化合物具有良好的口服药代性质， 并在 Arthus Reaction模型或大鼠胶原诱导的关 节炎 （rCIA) 模型上显示出明确的体内药效。 有此推知， 本发明具有式 （I) 结构的化合 物可应用于制备治疗有机体中布鲁顿激酶相关 的疾炎性和 /或自身免疫病症的药物。

发明的详细说明

除非有相反陈述， 下列用在说明书和权利要求中的术语具有下述 含义。

"垸基 "指饱和的脂族烃基团。 包括 1至 20个碳原子的直链或支链基团。 优选含有 1 至 6个碳原子的中等大小垸基， 例如甲基、 乙基、 丙基、 2-丙基、 正丁基、 异丁基、 叔丁 基、 戊基等。 更优选的是含有 1 至 4个碳原子的低级垸基， 例如甲基、 乙基、 丙基、 2- 丙基、 正丁基、 异丁基或叔丁基等。 垸基可以是取代的或未取代的， 当被取代时， 优选的 基团为： 卤素、 C ₂ -C ₆ 烯基、 C ₆ -C _1Q 芳基、 C ₅ -C _1Q 杂芳基、 卤代 -C ₆ 垸基、 4至 8元杂脂 环基、 羟基、 C C ₆ 垸氧基、 C ₆ -C _1Q 芳氧基。

"亚垸基"表示 1至 10个碳原子的二价饱和直连烃基 （例如 （CH ₂ ) _n ) 或 2至 10 个碳原子的支链饱和二价烃基 （例如 -CHMe)， 除非另有。 除了在亚甲基的情况下之外， 亚垸基的开放态不连接到相同的原子上。亚垸 基的实施例包含但不限于:亚甲基、亚乙基、 亚丙基、 2-甲基-亚丙基、 1,1-二甲基-亚乙基、 亚丁基、 2-乙基亚丁基。

"环垸基"指 3至 8元全碳单环、 全碳 5元 /6元或 6元 /6元稠和环或多环稠和环 （"稠 和"环意味着系统中的每个环与系统中的其它� �共享毗邻的一对碳原子） 基团， 其中一个 或多个环具有完全连接的 π电子系统， 环垸基的实例 （不局限于） 为环丙垸、 环丁垸、 环 戊垸、 环戊烯、 环己垸、 金刚垸、 环己二烯、 环庚垸和环庚三烯。 环垸基为可取代的和为 取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多 个各自选自以下的基团，包括： 氢、羟基、 巯基、 氧代、 低级垸基、 低级垸氧基、 低级环垸基、 低级杂环垸基、 低级卤代垸氧基、 垸 硫基、 ¾素、低级 ¾代垸基、低级羟垸基、低级环垸基亚垸基、� ��级杂环垸基亚垸、芳基、 杂芳基、 垸氧基羰基、 氨基、 垸基氨基、 垸基磺酰基、 芳基磺酰基、 垸基氨基磺酰基、 芳 基氨基磺酰基、 垸基磺酰基氨基、 芳基磺酰基氨基、 垸基氨基羰基、 芳基氨基羰基、 垸基 羰基氨基、 芳基羰基氨基。

"芳基 "表示 6至 14个碳原子的全碳单环或稠合多环基团，具有� ��全共轭的 π电子系 统。 "芳基"包括：

六元的碳芳香环， 如， 苯；

双环， 其中至少有一个环是碳芳香环， 如， 萘， 茚和 1, 2, 3, 4-四氢喹啉； 以及 三环， 其中至少有一个环是碳芳香环， 如， 芴。

例如，芳基包括含六元的碳芳香环并一个六元 杂环，这个杂环包含一个或多个选自氮、 氧和硫的杂原子， 条件是连接点在碳芳香环上。但是， 芳基不包含、也不通过任何方式与 下面分别定义的杂环芳基重叠。 因此， 在此定义， 如果一个或多个碳芳香环与一个杂芳香 环并环， 由此产生的环系统是杂芳基， 而不是芳基。 芳基的非限制性实例有苯基、 萘基。 芳基可以是取代的或未取代的。 当被取代时， 优选的基团为： 氢、 羟基、 硝基、 氰基、 氧 代、 低级垸基、 低级垸氧基、 低级环垸基、 低级杂环垸基、 低级卤代垸氧基、 垸硫基、 卤 素、低级 ¾代垸基、低级羟垸基、低级环垸基亚垸基、� ��级杂环垸基亚垸、芳基、杂芳基、 垸氧基羰基、 氨基、 垸基氨基、 垸基磺酰基、 芳基磺酰基、 垸基氨基磺酰基、 芳基氨基磺 酰基、垸基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、垸 基氨基羰基、芳基氨基羰基、垸基羰基氨基、 芳基羰基氨基。

"杂芳基"表示 5至 14个环原子的单环或稠合环基团， 含有一个、 两个、 三个或四个 选自 Ν、 0或 S的环杂原子， 其余环原子是 C， 另外具有完全共轭的 π电子系统。 杂芳基 指的是： 5-8元的单环芳烃， 含一个或多个选自 N、 0和 S的杂原子， 如 1-4个杂原子， 在一 些实施方案中， 1-3个杂原子， 环上其他原子是碳原子；

8-12元的双环芳烃， 含一个或多个选自 N、 0和 S的杂原子， 如 1-4个杂原子， 在一 些实施方案中， 1-3个杂原子， 环上其他原子是碳原子； 其中至少有一个环是芳香环； 以 及

11-14元的三环芳烃， 含一个或多个选自 N、 0和 S的杂原子， 如 1-4个杂原子， 在 一些实施方案中， 1-3个杂原子， 环上其他原子是碳原子； 其中至少有一个环是芳香环。

例如， 杂芳基包括一个 5-6元的杂芳香环并一个 5-6元的环垸基。 对于这样的双环并 起来的杂芳基， 其中只有一个环含有一个或多个杂原子， 连接位点在杂芳香环上。

当杂芳基上的硫原子和氧原子总数超过 1时，这些杂原子不会一一相邻。在一些实施 方案中， 硫原子和氧原子在杂芳基中的总数不超过 2。 在一些实施方案中， 硫原子和氧原 子在杂芳基中的总数不超过 1。

杂芳基的例子， 包括但不限于， 吡咯、 呋喃、 噻吩、 咪唑、 噁唑、 噻唑、 吡唑、 三氮 唑、嘧啶、 吡啶、吡啶酮、 咪啶、吡嗪、 哒嗪、吲哚、氮杂吲哚、苯并咪唑、苯并三氮 唑、 吲哚啉、 吲哚酮、 喹啉、 异喹啉、 喹唑啉、 噻吩并吡啶、 噻吩并嘧啶等。 此类基团的优选 实施例为吡咯基、 吡唑基、 咪唑基、 三氮唑基、 呋喃基、 噁唑基、 噻吩基、 噻唑基、 苯并 咪唑基、苯并三氮唑。杂芳基中的一个或全部 氢原子可被下列基团取代：氢、羟基、硝基、 氰基、 氧代、 低级垸基、 低级垸氧基、 低级环垸基、 低级杂环垸基、 低级卤代垸氧基、 垸 硫基、 ¾素、低级 ¾代垸基、低级羟垸基、低级环垸基亚垸基、� ��级杂环垸基亚垸、芳基、 杂芳基、 垸氧基羰基、 氨基、 垸基氨基、 垸基磺酰基、 芳基磺酰基、 垸基氨基磺酰基、 芳 基氨基磺酰基、 垸基磺酰基氨基、 芳基磺酰基氨基、 垸基氨基羰基、 芳基氨基羰基、 垸基 羰基氨基、 芳基羰基氨基。

"杂环垸基"表示由一个或多个环， 优选 1 至 2个环 (包括螺环系统)组成的一价饱和 环状基团，每个环 3至 8个原子，其结合有一个或多个环杂原子 (选自 Ν，0 或 S (0) _Q _ ₂ ) ， 并且其可以任选独立地被一个或多个， 优选 1 个或 2个取代基取代， 所述的取代基选自: 氢、 羟基、 巯基、 氧代、 低级垸基、 低级垸氧基、 低级环垸基、 低级杂环垸基、 低级卤代 垸氧基、 垸硫基、 卤素、 低级卤代垸基、 低级羟垸基、 低级环垸基亚垸基、 低级杂环垸基 亚垸、 芳基、 杂芳基、 垸氧基羰基、 氨基、 垸基氨基、 垸基磺酰基、 芳基磺酰基、 垸基氨 基磺酰基、 芳基氨基磺酰基、 垸基磺酰基氨基、 芳基磺酰基氨基、 垸基氨基羰基、 芳基氨 基羰基、 垸基羰基氨基、 芳基羰基氨基。 除非另外指出。 杂环垸基的实例包括但不限于， 吗啉基， 哌嗪基， 哌啶基， 氮杂环丁垸基， 吡咯垸基， 六氢氮杂 基， 氧杂环丁垸基， 四 氢呋喃基， 四氢噻吩基， 噁唑垸基， 噻唑垸基， 异噁唑垸基， 四氢吡喃基， 硫代吗琳基，

， W选自 0、 S或 NR ¹² ，各基团如前所述， 实例还可以是双环的，诸如，例如， 3， 8-二氮杂 -双环 [3.2.1]辛垸、 2， 5-二氮杂双环 [2. 2. 2] 辛垸或八氢-吡嗪并 [2， 1-c] [1, 4] 噁嗪。 其杂环垸基 (和衍生物)包括其离子形式。

"垸氧基"表示 -0- (未取代的垸基） 和 -0 (未取代的环垸基）。 代表性的实例包括但 不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环 丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。

"芳氧基"表示 -0-芳基和 -0-杂芳基。 代表性实例包括但不限于苯氧基、 吡啶氧基、 呋 喃氧基、 噻吩氧基、 嘧啶氧基、 吡嗪氧基等及其衍生物。

"芳基亚垸基 "表示垸基， 优选如上所定义的低级垸基， 它被如上所述的芳基取代， 例 如 -CH ₂ 苯基、 -(CH ₂ ) ₂ 苯基、 -(CH ₂ ) ₃ 苯基、 CH ₃ CH (CH ₃ ) CH ₂ 苯基及其衍生物。

"杂芳基亚垸基"表示垸基，优选如上所定义的� ��级垸基，它被如上所述的杂芳基取代， 例如 ¾吡啶基、 -(0¾) ₂ 嘧啶基、 -(CH ₂ ) )|C唑基等及其衍生物。

"羟基 "表示 -0H基团。

"羟基垸基"表示 -垸基 -0H。

"巯基"表示 -SH基团。

"卤素 "表示氟、 氯、 溴或碘， 优选为氟或氯。

"卤代垸基"表示垸基， 优选如上所定义的低级垸基， 它被一个或多个相同或不同的卤 原子取代， 例如 -CH ₂ C1、 -CF ₃ 、 -CC1 ₃ 、 -CH ₂ CF ₃ 、 -CH ₂ CC1 ₃ 等。

"氰基 "表示 -CN基团。

"氨基 "表示 -NH ₂ 基团。

"硝基 "表示 -N0 ₂ 基团。 "酰基"表示式 -C (=0) R基团， 其中 R是氢或者 C _r C ₆ 垸基、 -C ₆ 垸氧基、 C ₆ -C ₁₍₎ 芳基、 C ₆ -C _1Q 芳氧基或 C ₅ -C _1Q 杂芳基等。

"酰氨基"表示- (CO) NH ₂ 基团。

所谓"任选地 "的意思是指后续描述的事件或情形可能会也� �能不会发生，并且该描述 包括事物或情形可能会也可能不会发生，并且 该描述包括事物或情形发生和不发生两种情 况。

在一些实施方案中， "被一个或多个基团取代"是指在指定的原子或� ��团中的一个、两 个、 三个或四个氢原子分别被指定范围的基团中选 出的相同或不同的基团替换。

波浪线表示连接位点；

"药学上可接受的盐 "表示保留母体化合物的生物有效性和性质的� �些盐。这类盐包括:

( 1 ) 与酸成盐， 通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的 反应而得， 无机酸包 括盐酸、 氢溴酸、 硝酸、 磷酸、 偏磷酸、 硫酸、 亚硫酸和高氯酸等， 有机酸包括乙酸、 丙 酸、 丙烯酸、 草酸、 （D) 或 （L) 苹果酸、 富马酸、 马来酸、 羟基苯甲酸、 γ-羟基丁酸、 甲氧基苯甲酸、 邻苯二甲酸、 甲磺酸、 乙磺酸、 萘 -1-磺酸、 萘 -2-磺酸、 对甲苯磺酸、 水 杨酸、 酒石酸、 柠檬酸、 乳酸、 扁桃酸、 琥珀酸或丙二酸等。

(2) 存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子代 替或者与有机碱配位化合所生成 的盐，金属例子例如碱金属离子、碱土金属离 子或铝离子，有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、 三乙醇胺、 氨丁三醇、 Ν-甲基葡糖胺等。

"药物组合物 "指将本发明中的化合物中的一个或多个或其� �学上可接受的盐、溶剂化 物、水合物或前药与别的化学成分， 例如药学上可接受的载体， 混合。 药物组合物的目的 是促进给药给动物的过程。

"药用载体"指的是对有机体不引起明显的剌激� ��和不干扰所给予化合物的生物活性 和性质的药物组合物中的非活性成分， 例如但不限于： 碳酸钙、 磷酸钙、 各种糖（例如乳 糖、 甘露醇等）、 淀粉、 环糊精、 硬脂酸镁、 纤维素、 碳酸镁、 丙烯酸聚合物或甲基丙烯 酸聚合物、 凝胶、 水、 聚乙二醇、 丙二醇、 乙二醇、 蓖麻油或氢化蓖麻油或多乙氧基氢化 蓖麻油、 芝麻油、 玉米油、 花生油等。

前述的药物组合物中， 除了包括药学上可接受的载体外， 还可以包括在药（剂）学上 常用的辅剂， 例如： 抗细菌剂、 抗真菌剂、 抗微生物剂、 保质剂、 调色剂、 增溶剂、 增稠 剂、 表面活性剂、 络合剂、 蛋白质、 氨基酸、 脂肪、 糖类、 维生素、 矿物质、 微量元素、 甜味剂、 色素、 香精或它们的结合等。

具体实齢式

以下结合实施例用于进一步描述本发明， 但这些实施例并非限制着本发明的范围. 实施例 h 化合物 1的制备

化合物 1

叔丁基 4-(6-硝基 -3-吡啶基 )-1-哌嗪 -1-羧酸酯中间体（1 a) 的制备

称取 5-溴 -2-硝基吡啶 ( 17. lg, 84.7mmol) 和二甲基亚砜 (DMSO) ( 550mL) 置于 1L 的三颈瓶中， 加入 N-叔丁氧羰基哌嗪 （15.8g , 84.7mmol) 和碳酸钾 （K ₂ C0 ₃ ) (35.4g, 254.1 mmol), 加毕， 升温至 65 °C反应过夜， 冷至室温， 将反应液缓慢倾倒入 2L的冰水 混合物中搅拌 30分钟， 有大量固体析出， 过滤后真空干燥后得黄色产品（14g， 53.8% )。 MS (ESI) m/z: [M+H] ⁺ = 309.2。 1H-NMR (CDCI3, 400 MHz): δ 8.18(d, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.16(d, 1H), 3.64(t, 4H), 3.45(t, 4H), 1.49(s, 9H) ppm。

叔丁基 4-(6-胺基 -3-吡啶基 )-1-哌嗪 -1-羧酸酯中间体（1 b) 的制备

称取叔丁基 4-(6-硝基 -3-吡啶基 )-1-哌嗪 -1-羧酸酯（1.6g， 5.19mmol)，加 Pd/C ( 10%， 0.32g) 以及无水甲醇 （45mL)， 密封后用氢气置换三次后在室温下反应 3 小时， 停止反 应后过滤掉 Pd/C,减压除去甲醇后真空干燥得褐色产品 （0.91g， 63.2 % )。 MS (ESI) m/z: [M+H] + = 279.2。 1H-NMR (CDC1 ₃ ， 400 MHz): δ 7.78(s, 1H), 7.18 (d, H), 6.49 (d, H), 4.21(bs, 2H), 3.57(t, 4H), 2.97(t, 4H) 1.48(s, 9H) ppm。

叔丁基 4-(6-((5-溴 -1-甲基 -2-氧代 -1，2-二氢吡啶 -3-基)氨基)吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸酯中间 体（1 c) 的制备

称取 4,5-双二苯基膦 -9,9-二甲基氧杂蒽 （Xantphos ) (410mg, 0.709mmol)、 Pd ₂ (dba) ₃ ( 160mg, 0.177 mmol), 混合， 在氩气保护下加入二氧六环 50mL， 继续氮气保护， 搅拌 20min， 继续加入碳酸铯 （Cs ₂ C0 ₃ ) ( 3.47g, 10.7mol)、 叔丁基 4-(6-胺基 -3-吡啶基 )-1-哌 嗪 -1-羧酸酯 （1.0g， 3.5mmol), 3,5-二溴 -1-甲基吡啶 -2(1H)-酮， 氮气保护下升温至 100°C 反应 2.5h， 停止反应冷却至室温下， 硅藻土抽滤， 虑液用乙酸乙酯 （40mL*3 ) 萃取， 再 用饱和 NaCl ( 30mL) 洗一次， 最后酯层用无水 Na ₂ S04干燥， 浓缩至剩余少量溶液时过 滤固体， 真空干燥得黄色固体 ( 0.98g, 60% )。 MS (ESI) m/z: [M+H] + = 466.2.

5-溴 -1-甲基 -3-((5- (哌嗪 -1-基)吡啶 -2-基)氨基)吡啶 -2(1H)-酮中间体（1 d ) 的制备

称取叔丁基 4-(6-((5-溴 - 1-甲基 -2-氧代 -1,2-二氢吡啶 -3-基)氨基)吡啶 -3-基)哌嗪 - 1-羧 酸酯（470mg， lmmol)置于 50mL的圆底烧瓶中，加入 20mL的二氯甲垸（DCM )及 lmL 的三氟乙酸， 在室温下反应过夜， 反应完毕后加入饱和 NaHC0 ₃ 调至溶液 PH值为 7-8为 止， 再用 DCM ( 40mL*3 )萃取,有机层用无水 Na ₂ S04干燥， 过滤减压去除溶剂后得黄色 固体（270mg， 72.9% MS (ESI) m/z: [M+H] ⁺ = 364.1。 ¹ H-NMR (CDC1 ₃ , 400 MHz) : δ 8.57(s, 1H), 7.99(s, 1H), 7.41(s, 1H), 7.24 (d, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.75 (d, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.06(bs, 8H) ppm。

5-溴 -1-甲基 -3-((5-(4- (氧杂环丁 -3-基)哌嗪 -1-基)吡啶 -2-基)氨基)吡啶 -2(1H)-酮中间体（1 e ) 的制备

称取 5-溴 小甲基 -3-((5- (哌嗪 -1-基)吡啶 -2-基)氨基)吡啶 -2(1H>酮 （1.4g， 38mmol)、 3-氧杂环丁酮 （0.8g， 144mmol)、 无水氯化锌 （1.5g， 144mmol)、 无水甲醇 （45mL) 置 于 lOOmL的圆底烧瓶中搅拌 3分钟， 在室温下缓慢加入氰基硼氢化钠（2.3g， 144mmol) , 加毕后升温至 50°C反应 3 小时， 冷至室温下加入 2mL水终止反应， 反应液用乙酸乙酯 ( 60mL*3 ) 萃取， 再用饱和氯化钠 （NaCl ) ( 30mL) 洗一次， 最后酯层用无水 Na ₂ S04 干燥， 浓缩有机层后柱层析分离得淡黄色固体 （0.87g， 57.1% )。 MS (ESI) m/z: [Μ+Η] ⁺ = 420.1。 iH-NMR (DMSO- ^, 400 MHz) : δ 8.56(d, 1H), 8.48(s, 1H), 7.93(d, 1H), 7.42(d, 1H), 7. 38 (dd, H), 7.21 (d, H), 4.56 (t, 2H), 4.46 (t, 2H), 3.46(s, 3H), 3.43(t, 1H), 3.09 (t, 4H), 2.39 (t, 4H) ppm。

5-溴 -1-甲基 -3-((5-(4- (氧杂环丁 -3-基)哌嗪 -1-基)吡啶 -2-基)氨基) -5- (4，4，5，5-四甲基-1，3，2 二氧杂戊硼烷 -2-基）吡啶 -2(1H)-酮中间体（1 f ) 的制备

称取 2-二环己基磷 -2',4',6'-三异丙基联苯 （X-phos ) ( 0.678g, 1.4mmol)、 Pd(OAC) ₂ ( 0.16g, 0.7mmol) 置于 lOOmL的三颈烧瓶中， 加入 1,4-二氧六环 （3mL)， 氮气保护， 搅拌 20min， 加入 5-溴 - 1-甲基 -3-((5-(4- (氧杂环丁 -3-基)哌嗪 -1-基)吡啶 -2-基)氨基)吡啶 -2(1H>酮（1.5g， 0.35mmol)、联硼酸频哪醇酯 ( B ₂ Pin ₂ ) ( 1.8g, 1.5mmol)、醋酸钾 ( KOAc ) ( 1.05g, 4.2mmol) , 二氧六环 52mL， 氮气保护， 升温 100°C反应 2.5h， 垫硅藻土抽滤， 滤液加水、 乙酸乙酯 （60mL*3 ) 萃取， 再用饱和 NaCl ( 30mL) 洗一次， 最后酯层用无 水 Na ₂ S04干燥， 有机相干燥浓缩至大量固体析出， 过滤真空干燥后得（0.78g， 46.6% )。 MS (ESI) m/z: [M+H] + = 468.3， ¹ H-NMR (OMSO-d6, 400 MHz) : δ 8.44(s, IH), 8.19(s, IH), 7.88(d, IH), 7.48(s,lH), 7.36(dd, H), 7.15 (d, IH), 4.57(t, 2H), 4.48-4.45 (t, 2H), 3.54(s, 3H),3.44(t, IH), 3.09(t, 4H), 2.40(t, 4H), 1.28 (s, 12H) ppm。

6-环丙基 -8-氟 -2-(2- (羟甲基) -3-(l-甲基 -5-((5-(4- (氧杂环丁 -3-基)哌嗪 -1-基) -吡啶 -2-基)氨 基) -6-氧杂 -1，6-二氢 -吡啶 -3-基) -苯基) -异喹啉 -1(2H)-酮（化合物 1) 的制备

称取 5-溴 -1-甲基 -3-((5-(4- (氧杂环丁 -3-基)哌嗪 -1-基)吡啶 -2-基)氨基) -5- ( 4,4,5,5-四甲 基 - 1,3,2 二氧杂戊硼垸 -2-基） 吡啶 -2(1H>酮 （246mg， 0.478mmol)、 2-(3-氯 -2- (羟甲基) 苯基) -6-环丙基 -8-氟异喹啉 -1(2Η)-酮 （185mg， 0.478mmol)、 [Ι, Γ-双 (二苯基膦)二茂铁] 二氯化钯二氯甲垸络合物 （Pd ( dppf) ₂ C1 ₂ *CH ₂ C1 ₂ ) ( 175mg, 0.19mmol) 置于 50mL的 三颈烧瓶中， 用氩气置换三次后加入 1,4-二氧六环 （15mL) 后搅拌 5分钟， 加入 2M的 NaHC0 ₃ ( 0.7mL, 1.43mmol ) 后用氩气置换三次后升温至 100°C反应 2小时， 停止反应 冷至室温下，垫硅藻土抽滤，滤液加水、乙酸 乙酯（30mL*3 )萃取，再用饱和 NaCl GOmL) 洗一次，最后酯层用无水 Na ₂ S04干燥后柱层析分离后得产品（163mg， 48.1% ) , MS (ESI) m/z: [M+H]+=649.4, ¹ H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) : δ 8.57(s, IH), 8.38(s, IH), 7.86(d, IH), 7.50-7.54(m, 2H), 7.43(d, IH), 7.33-7.38(m, 4H), 7.26(s, IH), 6.99(d, IH), 6.59(d, IH), 5.80(t, IH), 4.55 (t, 2H), 4.47 (t, 2H) 4.35-4.15 (m, 2H), 3.58(s, 3H), 3.45(s, IH), 3.06(t, 4H), 2.46(t, 4H), 2.1(m, IH), 1.08- 1.07(m, 2H), 0.87-0.8 l(m, 2H) ppm。

实

叔丁基 -6-硝基 -5'，6'-二氢 -[3，4'-联吡啶 ]-l'(2'H)-羧酸酯的制备

称取 5-溴 -2-硝基吡啶 （250mg， 1.23mmol)、 N-叔丁氧羰基 -3,6-二氢 -2H-吡啶 -4- 硼酸频哪醇酯（456mg， 1.47mmol)、 Pd ( dppf) ₂ C1 ₂ *CH ₂ C1 ₂ ( 30mg, 0.37mmol)置于 50mL 的三颈烧瓶中， 用氩气置换三次后加入 1,4-二氧六环 （15mL) 后搅拌 5分钟， 加入 2M 的 NaHC0 ₃ (1.85mL， 3.7mmol) 后用氩气置换三次后升温至 100°C反应 2小时， 停止反 应冷至室温下， 垫硅藻土抽滤， 滤液加水、 乙酸乙酯 （20mL*3) 萃取， 再用饱和 NaCl

(10mL)洗一次，最后酯层用无水 Na ₂ S04干燥后柱层析分离后得产品（270mg， 71 %), MS (ESI) m/z: [M+H] ⁺ = 306.2. ¹ H-NMR (CDC1 ₃ ， 400 MHz): δ 8.65 (s, IH), 8.24(d, IH), 7.94(d, IH), 6.32 (bs, IH), 4.16 (t, 2H), 3.70(m, 2H), 2.57(t, 2H), 1.50(s, 9H) ppm。

叔丁基 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌啶 -1-羧酸酯的制备

称取叔丁基 -6-硝基 -5',6'-二氢 -[3,4'-联吡啶 H'(2'H>羧酸酯 （250mg， 0.82mmol), 加 Pd/C (10%, 0.05g) 以及无水甲醇 （45mL)， 密封后用氢气置换三次后在室温下反应 3 小时， 停止反应后过滤掉 Pd/C,减压除去甲醇后真空干燥得褐色产品 （0.147g， 64 %)。 MS (ESI) m/z: [Μ+Η] + = 278.2。 ¹ H-NMR (CDC1 ₃ ， 400 MHz): δ 7.92(s,lH), 7.27(d,lH), 6.47(d,lH), 4.34(t, 2H), 4.20(bs, 2H), 2.79(t, 2H), 2.55(m, IH), 2.04(t, IH), 1.85(m, 2H) , 1.67(m, IH) 1.47(s, 9H) ppm。

叔丁基 4-(6-((5-溴 -1-甲基 -2-氧代 -1，2-二氢吡啶 -3-基)氨基)吡啶 -3-基)哌啶 -1-羧酸酯的制 备

称取 Xantphos (436mg, 0.752mmol)、 三 (二亚苄基丙酮)二钯 （Pd ₂ (dba) ₃ ) (80.52mg, 0.188 mmol)、 混合， 在氩气保护下加入二氧六环 50mL， 继续氮气保护， 搅拌 20min， 继 续加入 Cs ₂ C0 ₃ (1.83g, 5.64mol)、 叔丁基 4-(6-氨基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-羧酸酯 （0.52g， 1.88mmol)， 3,5-二溴 -1-甲基吡啶 -2(1H)-酮 （0.5g， 1.88mmol), 氮气保护下升温至 100°C 反应 2.5h， 停止反应冷却至室温下， 硅藻土抽滤， 虑液用乙酸乙酯 （40mL*3) 萃取， 再 用饱和 NaCl (30mL) 洗一次， 最后酯层用无水 Na ₂ S0 ₄ 干燥， 浓缩至剩余少量溶液时过 滤固体， 真空干燥得黄色固体 （0.53g， 60.9%)。 MS (ESI) m/z: [M+H] ⁺ = 463.2.1H-NMR (DMSO- ^, 400 MHz): δ 8.68(s, 1H)， 8.65(s, IH), 8.15(s, IH), 7.50-7.55(m, 2H), 7.28(d, IH), 4.06 (d, 2H), 3.51(s, 3H), 2.79(bs, 2H)， 2.63(m, IH), 1.73(d, 2H), 1.50-1.47(m, 2H), 1.46(s, 9H) ppm。

5-溴 -1-甲基 -3-((5- (哌啶 -4-基)吡啶 -2-基)氨基)吡啶 -2(1H)-酮的制备

称取叔丁基 4-(6-((5-溴 -1-甲基 -2-氧代 -1,2-二氢吡啶 -3-基)氨基)吡啶 -3-基)哌啶 -1-羧 酸酯（379mg， 0.82mmol)置于 50mL的圆底烧瓶中， 加入 20mL的 DCM及 lmL的三氟 乙酸， 在室温下反应过夜， 反应完毕后加入饱和 NaHC0 ₃ 调至溶液 PH值为 7-8为止， 再 用 DCM (20mL*3) 萃取,有机层用无水 Na ₂ S0 ₄ 干燥， 过滤减压去除溶剂后得黄色固体 ( 210mg, 70.9% MS (ESI) m/z: [M+H] ⁺ = 363.1. 1H-NMR DMSO-d6, 400 MHz) : (5 8.73(s, 1H), 8.66(s， 1H), 8.15(s, 1H), 7.49-7.53(m, 2H), 7.31(d, 1H), 5.75(s, H), 3.51 (s, 3H), 3.19(d, 1H), 2.96-2.90(m, 2H) , 2.76-2.73(m, 1H), 1.91-1.88(m, 2H), 1.79-1.73(m, 2H) ppm。

溴 甲基 (氧杂环丁 基)哌啶 基)吡啶 基)氨基)吡啶 H)-酮的制备

称取 5-溴 - 1-甲基 -3-((5- (哌啶 -4-基)吡啶 -2-基)氨基)吡啶 -2(1H>酮（225m，0.62mmol)、 3-氧杂环丁酮（44.6mg， 1.86mmol)、无水氯化锌（256mg， 1.86mmol)、无水甲醇（15mL) 置于 50mL的圆底烧瓶中搅拌 3分钟，在室温下缓慢加入氰基硼氢化钠（40mg� �� 1.86mmol), 加毕后升温至 50°C反应 5小时， 冷至室温下加入 2mL水终止反应， 反应液用乙酸乙酯 ( 20mL*3 )萃取， 再用饱和 NaCl ( lOmL) 洗一次， 最后酯层用无水 Na ₂ S0 ₄ 干燥， 浓缩 有机层后柱层析分离得淡黄色固体 （160mg， 61.7% )。 MS (ESI) m/z: [Μ+Η] ⁺ = 419.1. ¹ H-NMR (DMSO-ίΜ, 400 MHz) : δ 8.67(s, 1H), 8.65(s, 1H), 8.15(s, 1H), 7.56 (dd, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 4.55-4.54(t, 2H), 4.45-4.42 (t, 2H), 3.51(s, 3H), 3.41(t, 1H), 2.80-2.78(d, 2H), 1.87-1.81(m, 2H), 1.74- 1.63(m, 4H) ppm。

溴 甲基 (氧杂环丁 基)哌啶 基)吡啶 基)氨基) ，，， 四甲基 ，， 二氧杂戊硼烷 基）吡啶 H)-酮的制备

称取 X-phos ( 68mg, 0.14mmol)、 Pd(OAc) ₂ ( 16mg, 0.07mmol ) 置于 25mL的三颈 烧瓶中，加入 1,4-二氧六环（lmL)，氮气保护，搅拌 20min，加入 5-溴 -1-甲基 -3-((5-(1- (氧 杂环丁 -3-基)哌啶 -4-基)吡啶 -2-基)氨基)吡啶 -2(1H>酮（ 150mg， 0.35mmol)、 B ₂ Pin ₂ ( 180mg, 0.71mmol)、 KOAc ( 105g, 1.07mmol ) , 二氧六环 5mL，氮气保护， 升温 100°C反应 2.5h， 垫硅藻土抽滤， 滤液加水、 乙酸乙酯（15mL*3 )萃取， 再用饱和 NaCl ( lOmL)洗一次， 最后酯层用无水 Na ₂ S0 ₄ 干燥，有机相干燥浓缩至大量固体析出， 过滤真空干燥后得（70mg， 41.9% MS (ESI) m/z: [Μ+Η] ⁺ = 467.3， ¹ H-NMR (DMSO- (5, 400 MHz) : δ 8.52(s, 1H), 8.37(s, 1H), 8.10(d, 1H), 7.52-7.49(m,2H), 7.17(d, H), 4.57t, 2H), 4.55 (t, 2H), 4.45(s, 2H), 3.56(s, 3H), 2.80 (d, 2H), 1.87-1.81(m, 2H), 1.74- 1.63(m, 4H), 1.28 (s, 12H)ppm。

环丙基 氟 (羟甲基) 甲基 (氧杂环丁 基)哌啶 基) -吡啶 基)氨 基) 氧杂 ， 二氢 -吡啶 基) -苯基) -异喹啉 H)-酮（化合物 的制备

称取 5-溴 -1-甲基 -3-((5-(1- (氧杂环丁 -3-基)哌啶 -4-基)吡啶 -2-基)氨基) -5- ( 4,4,5,5-四甲 基 -1,3,2二氧杂戊硼垸 -2-基）吡啶 -2(1H)-酮（37mg，0.085mmol)、2-(3-氯-2-(羟甲基)苯� �)-6- 环丙基-8-氟异喹啉- l(2H)-酮 ( 40mg， 0.085mmol)、 Pd ( dppf) ₂ C1 ₂ *CH ₂ C1 ₂ ( 23.4mg , 0.0225 mmol )置于 25mL的三颈烧瓶中， 用氩气置换三次后加入 1,4-二氧六环（lmL)后 搅拌 5分钟，加入 2M的 NaHC0 ₃ ( 27mg, 0.255mmol )后用氩气置换三次后升温至 10CTC 反应 2小时， 停止反应冷至室温下， 垫硅藻土抽滤， 滤液加水、 乙酸乙酯 （10mL*3 ) 萃 取， 再用饱和 NaCl ( 5mL) 洗一次， 最后酯层用无水 NaS0 ₄ 干燥后柱层析分离后得产品 ( 30.9mg, 50% ) , MS (ESI) m/z: [M+H] ⁺ =648.4, 1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) : δ 8.66(s, 1H), 8.52(s, lH),8.05(d, 1H), 7.56-7.52(m, 4H), 7.35-7.3 l(m, 3H), 7.26-7.22(m, 2H), 6.98(d 1H), 6.59(d, 1H), 4.76 (t, 1H), 4.53 (t, 2H) 4.43 (t, 2H), 4.38-4.15(m, 2H), 3.59(s, 3H), 3.41(t, 1H), 2.78(t, 2H), 2.08(t, 1H), 1.80- 1.65(m, 6H), 1.17- 1.10(m, 2H), 0.87-0.86(m, 2H) ppm。

3: 化合物 3的制备

叔丁基 3-(4-(6-硝基吡啶 -3-基)哌嗪 -1-基)氮杂环丁烷 -1-羧酸酯的制备

采用制备化合物化合物中间体（1 e )相类似的方法可制得叔丁基 3-(4-(6-硝基吡啶 -3- 基） 哌 嗪 - 1- 基） 氮 杂环 丁 垸 - 1- 羧 酸 酯 （1.5g ， 79%) 。 [M+H]+=364.2 ； ¹ H-NMR(400MHz,DMSO-d ₆ ) δ: 8.27 (d, = 2.64Hz, 1H), 8.16 (d, J= 9.16Hz, 1H), 8.50 (dd, J = 2.68Hz, 9.24Hz, 1H), 3.92-3.83(m, 2H), 3.78-3.67(m, 2H), 3.57-3.49(m, 4H), 3.13-3.06(m, 1H), 2.47-2.40(m, 4H), 1.39(s, 12H)。

1- (氮杂环丁基 -3-基) -4-(6-硝基吡啶 -3-基)哌嗪的制备

采用制备化合物化合物中间体 （Id) 相类似的方法可制得 1- (氮杂环丁基 -3-基) -4-(6- 硝基吡啶 -3-基)哌嗪 （0.93g， 88.6%) [M+H]+=264.2。

1 (1-甲基氮杂环丁基 -3-3基) -4-(6-硝基 -3-基)哌嗪的制备

取 1- (氮杂环丁基 -3-基) -4-(6-硝基吡啶 -3-基）哌嗪 （0.93g, 3.53mmol)、 多聚甲醛 (954mg, 10.6mmol)加入到 100ml的圆底烧瓶中， 同时加入 25ml的甲酸做溶剂， 10CTC下 反应过夜。 反应结束后， 减压浓缩至少量甲酸， 用浓氨水调节 PH至 8-9， 用乙酸乙酯 /饱 和 NaCl溶液萃取，合并有机层，用无水硫酸镁干� �，过滤，减压浓缩，柱层析得固体 ( 627mg， 64.1%)。 [M+H] ⁺ =278.2; ¹ H-NMR(400MHz, CDC1 ₃ ) δ: 8.18 (d, = 9.12Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.84Hz, 1H), 7.22 (dd, =2.8Hz, 9.16Hz, 1H), 4.23 (t, = 8.2Hz, 2H), 3.60 (t, = 8.08Hz, 2H), 3.51-3.45(m, 4H), 3.42-3.37(m, 1H), 2.79(s, 3H), 2.57-2.43(m, 4H)。

5-(4-(l-甲基氮杂环丁基 -3-基） 哌嗪 -1-基)吡啶 -2-胺的制备

采用制备化合物化合物中间体 （1 b ) 相类似的方法可制得 5-(4-(1 -甲基氮杂环丁基 -3- 基） 哌嗪 -1 -基)吡啶 -2-胺 （354mg， 78%)。 [M +H]+=248.2。

5-溴 -1-甲基 -3-((5-(4-(1-甲基氮杂环丁基 -3-基） 哌嗪 -1-基)吡啶 -2-基)胺）吡啶 -2(1H)-酮胺 的制备

采用制备化合物中间体 （1 e ) 相类似的方法可制得 5-溴 -1-甲基 -3-((5-(4-(1-甲基氮杂 环丁基 -3-基）哌嗪 -1-基)吡啶 -2-基)胺） 吡啶 -2(1H)-酮胺（550mg， 63%)。 [M+H] ⁺ =433.1 ; ¹ H-NMR(400MHz, CDC1 ₃ ) δ: 8.57 (d, J = 2.0Hz, 1H), 7.98 (d, J = 2.8Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.23 (dd, J = 2.76Hz, 9.2Hz, 1H), 6.93 (d, J = 2.04Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.88Hz, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.55 (m, 2H), 3.14 (t, = 4.68Hz, 4H), 3.07-3.0 (m, 1H), 2.95 (m, 2H), 2.50 (t, = 4.76Hz, 4H), 2.37(s, 3H)。

1-甲基 -3-((5-(4-(l-甲基氮杂环丁基 -3-基)哌嗪 -1-基)吡啶 -2-基)胺) -5-(4，4，5，5-四甲基 -1,3,2- 二氧杂戊硼烷 -2-基)吡啶 -2(1H)-酮的制备

采用制备化合物中间体（1 f )相类似的方法可制得 1-甲基 -3-((5-(4-(1-甲基氮杂环丁基 -3-基)哌嗪 -1-基)吡啶 -2-基)胺) -5-(4,4,5,5-四甲基 -1,3,2-二氧杂戊硼垸 -2-基)吡啶 -2(1H)-酮 ( 245mg, 48%) [M+H]+=481.3。

6-环丙基 -8-氟 -2-(2- (羟甲基) -3-(1-甲基 -5-((5-(4- (甲基氮杂环丁基 -3-基）哌嗪 -1-基)吡啶 -2- 基)胺) -6-氧 -1，6-二氢吡啶 -3-基)苯基)异喹啉 -1(2H)-酮化合物 3的制备

采用制备化合物 1相类似的方法可制得化合物 3 (51 mg, 50.2 %)。Mp: 230.4-232 °C; MS (ESI) m/z 662.3 [M + H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO- ₆ ): δ 8.56 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.53 (t, = 7.64 Hz, 1H), 7.43 (d, = 7.24 Hz, 1H), 7.40-7.28 (m, 4H), 7.26 (s, 1H), 7.21 (d, = 9.12 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 13.08 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 7.00 Hz, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.37-4.29 (m, 1H), 4.25-4.15 (m, 1H), 3.59 (s, 4H), 3.35 (m, 1H), 3.03 (s, 4H), 2.88 (s, 3H), 2.35 (s, 4H), 2.27 (s, 3H), 2.12-2.03 (m, 1H), 1.15-1.03 (m, 2H)， 0.93-0.82 (m, 2H); ¹³ C NMR(100 MHz, DMSO- ₆ )： δ 163.25, 161.13, 158.88, 157.08, 152.10, 149.08, 142.03, 141.39, 140.91, 140.71, 136.39, 135.71, 134.43, 131.21, 131.01, 129.22, 128.35, 127.53, 127.14, 118.82， 118.60, 117.10, 113.39, 111.08, 104.56, 60.54, 57.45, 54.90, 49.59, 49.12, 46.02, 37.90, 15.89, 11.13; HPLC 97.7%; HRMS(ESI) m/z calcd for C ₃₈ H ₄₀ FN ₇ O ₃ [M+H] ⁺ 662.3177, found 662.3252.

实施例 4: 化合物 4的制备

化合物 4

5-溴 -3-((5-(4- (环丙基甲雌)哌嗪 -1-基)吡啶 -2-基)胺) -1甲基吡啶 -2(1H)-酮的制备

称取化合物中间体（ Id) (247 mg, 0.68 mmol)、 Et ₃ N (137 mg, 1.36 mmol) 溶解在 20ml 的 CH ₂ C1 ₂ 中， 反应液冷却至 0 °C下缓慢滴加环丙基甲酰氯（77. 8 rr¾, 0. 75 ΓΤΤΤΌΙ ) , 滴加 完毕升温至室温下继续反应 2h， 反应完毕加入饱和 NaHC0 ₃ ,乙酸乙酯 （15mL*3 ) 萃取， 再用饱和 NaCl ( lOmL) 洗一次， 最后酯层用无水 Na ₂ S0 ₄ 干燥后柱层析分离后得白色固 (250 mg, 58.1 %) as a gray solid. MS (ESI) m/z 432.1 [M + H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO- ₆ ): δ 8.59-8.58 (d, J = 2.44 Hz, IH), 8.00-7.99 (d, J = 2.84 Hz, IH), 7.77 (s, IH), 7.28-7.27 (d, J = 2.86 Hz, IH), 6.95-6.94 (d, J = 2.44 Hz, IH), 6.78-6.76 (d, J = 8.88 Hz, IH), 3.86-3.81 (d, J = 20.2 Hz, 4H), 3.60 (s, 3H), 3.14-3.08 (d, J = 22.4Hz, 4H), 1.58 (m, IH), 1.04-1.01 (m, 2H), 0.83-0.79 (m, 2H)。

3-((5-(4- (环丙甲酰基)哌嗪 -1-基)吡啶 -2-基)胺) -1-甲基 -5-(4，4，5，5-四甲基 -1,3,2-二氧杂戊硼 烷 -2-基 -2-基)吡啶 -2(1H)-酮的制备

采用制备化合物中间体（If)相类似的方法可制 得 3-((5-(4- (环丙甲酰基)哌嗪 -1-基)吡啶 -2-基)胺) -1-甲基 -5-(4,4,5,5-四甲基 -1,3,2-二氧杂戊硼垸 -2-基 -2-基)吡啶 -2(1H)-酮 (96 mg, 48.2 %)o MS (ESI) m/z 480.3 [M + H]+; 1H NMR (400 MHz, CDC1 ₃ ): δ 8.48-8.47 (d, J = 2.42 Hz, IH), 8.03 (d, J = 2.84 Hz, IH), 7.64 (s, IH), 7.34-7.33 (d, J = 2.43 Hz, IH), 7.24-7.23 (d, J Γ 'Ρ)89·9 '(Ηΐ 'ζΗε·8 = 'Ρ) L L \ΥίΖ 'Ρ) 0VL-6VL '(Ηΐ 'ΖΗ0·8 = 'Ρ) L '(Ηΐ'ζΗ 8 ' ^Ζ Η6·Δ = 'ΡΡ) ZLL '(Ηΐ 'ζΗΐ·8 = 'Ρ) Z6'L '(Ηΐ '¾£'8 = 'Ρ) 90' 8 '(Ηΐ 's)刚 ΐ ： g ( ⁹ P-OSWa 'z匪 0017) 霸 N H _T ^: r89£= ₊ [H+W] :(IS3)SW %LV ' 8Ό) W^ '½1ί¾

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2-(3-溴 -2- (羟甲基)苯基) -6-环丙基异喹啉 -1(2H)-酮的制备

取 2-溴 6-(6-环丙基 -1 -氧代异喹啉 -2(1 H)-基)苯甲醛 (368mg, lmmol)溶于 500ml的甲醇 中， 冰浴下慢慢加入硼氢化钠 (5.5mg, 1.5mmol) , 完毕继续搅拌 15min。 反应完毕， 加入 饱和的 NaCl溶液猝灭反应， 减压浓缩至少量溶剂， 用二氯甲焼 /饱和 NaCl萃取， 无水硫 酸钠干燥， 减压浓缩， 得白色固体 （314mg， 82% )。 [M+H]+=372.1 ; 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ： 8.10 (d, J = 8.4Hz, IH), 7.78 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.5-7.4 (m, 2H), 7.36 (d, J = 7.8Hz, IH), 7.33-7.28 (m, 2H), 6.64 (, d, = 7.4Hz, IH), 4.91 (d, = 4.0Hz, IH), 4.47 (dd, = 3.9Hz, 11.5Hz, IH), 4.27 (dd, J = 3.8Hz, 11.6Hz, IH), 2.20-2.05 (m, IH), 1.15-1.0 (m, 2H), 0.92-0.78 (m, 2H)。

6-环丙基 -2-(2- (羟甲基) -3-(1 -甲基 -5-((5-(4-甲基哌嗪 -1 -基)吡啶 -2-基)胺) -6-氧代 -1 ,6-二氢吡 啶 -3-基)苯基)异喹啉 -1 (2H)-酮化合物 5的制备

采用制备化合物 1相类似的方法可制得化合物 5 (63 mg, 57.1 %). Mp: 170.4- 173.2 °C; MS (ESI) m/z 589.2 [M + H]+; 1H NMR(400 MHz, DMSO- ₆ ): δ 8.58 (s, IH), 8.36 (s, IH), 8.12 (d, = 8.40 Hz, IH), 7.86 (s, IH), 7.54 (dd, J = 7.70 Hz, 7.80 Hz, IH), 7.49-7.40 (d, 2H), 7.41-7.31 (m, 4H), 7.28 (d, J = 8.40 Hz, IH), 7.22 (d, J = 9.00 Hz, IH), 6.64 (d, J = 7.40 Hz, IH), 4.74 (s, IH), 4.39-4.35 (m, IH), 4.25-4.15 (m, IH), 3.60 (s, 3H), 3.04 (s, 4H), 2.45 (s, 4H), 2.22 (s, 3H), 2.18-2.03 (m, IH), 1.15-1.01 (m, 2H), 0.92-0.78 (m, 2H); ¹³ C NMR (100 MHz, DMSO- ₆ ): δ 161.80, 157.07, 149.93, 149.02, 142.29, 141.35, 140.93, 138.00, 136.32, 134.63, 134.39, 131.15, 130.96, 129.19, 128.20, 127.82, 127.46, 127.15, 125.09, 123.73, 122.58, 118.56， 117.06, 113.33, 105.19, 57.41, 54.92, 49.22, 46.13, 37.87, 15.93, 10.86, 10.82; HPLC 97.5 %; HRMS(ESI) m/z calcd for C ₃₅ H ₃₆ N ₆ 0 ₃ [M+H] ⁺ 589.2849, found 589.2919。

2-溴 -6-(2-环丙基 -5-氧代 -1，6-萘啶 -6(5Η)-基)苯甲醛的制备

采用制备化合物中间体 (5a)相类似的方法可制得化合物 2-溴 -6-(2-环丙基 -5-氧代 -1,6-萘 啶 -6(5H)-yl)苯甲醛 (218 mg, 77.1 %)。 MS (ESI) m/z 369.1 [M + H]+。 6-(3-溴 -2- (羟甲基)苯基) -2-环丙基 -1，6-萘啶 -5(6H)-酮的制备

采用制备化合物中间体（5b)相类似的方法可制 得化合物 6-(3-溴 -2- (羟甲基)苯基) -2-环 丙基 -1,6-萘啶 -5(6H)-酮 (100 mg, 83.0 %)。 MS (ESI) m/z 371.1 [M + H]+。

2-环丙基 -6-(2- (羟甲基) -3-(1 -甲基 -5-((5-(4-甲基哌嗪 -1 -y基)吡啶 -2-基)胺) -6-氧代 -1 ,6-二氢吡 啶 -3-基)苯基) -1 ,6-萘啶 -5(6H)-酮化合物 6的制备

采用制备化合物 1相类似的方法可制得化合物 6 (33 mg, 65 %). Mp: 167.3-170.8 °C; MS (ESI) m/z 590.2 [M + H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO- ₆ ): δ 8.59 (S, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.38 (d, = 3.10 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 2.80 Hz, 1H), 7.65-7.50 (m, 2H), 7.51-7.42 (m, 2H), 7.41-7.31 (m, 3H), 7.22 (d, J = 9.00 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 4.81 (dd, = 4.10 Hz, 4.40 Hz, 1H), 4.33 (dd, J = 3.60 Hz, 11.10 Hz, 1H), 4.20 (dd, J = 4.60 Hz, 11.30 Hz, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.05 (s, 4H), 2.45 (s, 4H), 2.40-2.27 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.20-1.05 (m, 4H); ¹³ C NMR(100 MHz, DMSO- ₆ ): δ 168.41, 161.40, 156.52, 150.25, 153.51, 148.56, 141.32, 140.81, 140.36, 137.82, 135.70, 135.44, 133.75, 130.62, 128.71, 127.76, 127.02, 126.64, 120.41, 119.02, 117.94 116.52, 112.84, 106.11, 56.82, 54.41, 48.81, 45.64, 37.46, 17.52, 11.31, 11.22; HPLC 95.5 %; HRMS(ESI) m/z calcd for C ₃₃ H ₃₆ N ₈ 0 ₃ [M+H] ⁺ 590.2801, found 590.2877。

2-溴 -6-(6-环丙基 -1 -氧代 -2,7-萘啶 -2(1 H)-yl)苯甲醛的制备

采用制备化合物中间体（5a)相类似的方法可制 得化合物 2-溴 -6-(6-环丙基 -1 -氧代 -2,7- 萘啶 -2(1 H)-yl)苯甲醛 (103 mg, 52.2 %). MS (ESI) m/z 369.1 [M + H]+。

2-(3-溴 -2- (羟甲基)苯基) -6-环丙基 -2,7-萘啶 -1 (2H)-酮的制备

采用制备化合物中间体（5b)类似的方法可制得 化合物 2-(3-溴 -2- (羟甲基)苯基) -6-环丙 基 -2,7-萘啶 -1 (2H)-酮 MS (ESI) m/z 371.1 [M + H]+。

6-环丙基 -2-(2- (羟甲基) -3-(1 -甲基 -5-((5-(4-甲基哌嗪 -1 -基)吡啶 -2-基)胺) -6-氧代 -1 ,6-二氢吡 啶 -3-基)苯基) -2,7-萘啶 -1 (2H)-酮化合物 7的制备

采用制备化合物 1相类似的方法可制得化合物 7 (63 mg, 58.0 %)。 Mp: 149.6-151.3 °C; MS (ESI) m/z 590.2 [M + H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO- ₆ ): δ 9.20 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.84 (d, J = 2.20 Hz, 1H), 7.61-7.50 (m, 3H), 7.46 (d, J = 7.30 Hz, 1H), 7.37 (m, 2H), 7.32 (s, IH), 7.22 (d, J = 9.00 Hz, IH), 6.18 (d, J = 7.60 Hz, IH), 4.85 (s, IH), 4.41-4.10 (m ,2H), 3.59 (s, 3H), 3.04 (s, 4H), 2.45 (s, 4H), 2.22 (s, 4H), 1.01-0.92 (m, 4H). ¹³ C NMR(100 MHz, DMSO- ₆ ): δ 164.69, 160.89, 156.55, 150.21, 148.62, 142.76, 141.18, 140.82, 140.36, 139.08, 135.81, 133.82, 130.66, 128.68, 128.40, 127.77, 127.04, 126.65, 118.41, 117.93, 116.53， 115.75, 112.91, 102.70, 74.32, 58.44, 56.90, 48.89, 48.63, 37.39, 17.09, 10.34, 10.26; HPLC 99.0 %; HRMS(ESI) m/z calcd for C ₃₄ H ₃₅ N ₇ 0 ₃ [M+H] ⁺ 590.2801, found 590.2877。

8: 化合物 8的制备

2-(3-溴苯) -6-环丙基 -8-氟喹啉 -1 (2H)-酮的制备

采用制备化合物中间体（5a)相类似的方法可制 得化合物 2-(3-溴苯) -6-环丙基 -8-氟喹啉 -1 (2H)-酮 （93 mg, 53.1 %) as a white solid ₀ MS (ESI) m/z 358.1 [M + H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO- ₆ ): δ 7.73 (s, IH), 7.66 (s, IH), 7.48 (s, 3H), 7.26 (s, IH), 6.99 (d, J = 10.80 Hz, IH), 6.60 (d, = 5.20 Hz, IH), 2.2-2.01 (m, IH), 1.2-1.01 (m, 2H), 0.95-0.81 (m, 2H)。

6-环丙基 -8-氟 -2-(3-(1 -甲基 -5-((5-(4-甲基哌嗪 -1 -基)吡啶 -2-基)胺) -6-氧代 -1 ,6-二氢吡啶 -3-基) 苯基)异喹啉 -1 (2H)-酮化合物 8的制备

采用制备化合物 1相类似的方法可制得化合物 8 (114 mg, 79.1 %)。 Mp: 200.8-202.1 °C; MS (ESI) m/z 577.2 [M + H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO- ₆ ): δ 8.87 (d, J = 2.40 Hz, IH), 8.43 (s, IH), 7.90 (d, = 2.80 Hz, IH), 7.67 (d, = 2.40 Hz, IH), 7.66-7.55 (m, 3H), 7.51 (d, J = 6.60 Hz, IH), 7.43-7.35 (m, 2H), 7.30-7.21 (m, 2H), 7.01 (d, J = 12.80 Hz, IH), 6.63 (d, J = 6.50 Hz, IH), 3.61 (s, 3H), 3.06 (s, 4H), 2.44 (s, 4H), 2.21 (s, 3H), 2.15-2.01 (m, IH), 1.21-1.09 (m, 2H), 0.90-0.79 (m, 2H); ¹³ C NMR(100 MHz, DMSO- ₆ ): δ 162.10, 160.38, 158.34, 156.66, 152.20, 150.35, 149.40, 141.50, 140.93, 139.81, 138.52, 134.26, 133.67, 131.42, 129.63, 127.06, 125.48, 124.89, 124.13, 118.40, 117.63, 113.30, 113.06, 110.38, 104.75, 54.49, 48.77, 45.73, 37.37, 15.41, 10.76; HPLC 97.8 %; HRMS(ESI) m/z calcd for C ₃₄ H ₃₃ FN ₆ 0 ₂ [M+H] ⁺ 577.2649, found 577.2724。

实施例 9: 化合物 9的制备

2-(3-溴 -2-甲苯基 )-6-环丙基 -8-氟异喹啉 -1 (2H)-酮的制备

采用制备化合物中间体 （5a) 相类似的方法可制得化合物 2-(3-溴 -2-甲苯基 )-6-环丙基 -8-氟异喹啉 -1 (2H)-酮 (72 mg, 38.7 %)。 MS (ESI) m/z 372.1 [M + H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO- ₆ ): δ 7.76 (d, J = 7.48 Hz, IH), 7.40-7.25 (m, 4H), 7.01 (d, J = 13.56 Hz, IH), 6.64 (d, = 5.20 Hz, IH), 2.21-2.01 (m, 4H), 1.13-1.01 (m, 2H), 0.91-0.77 (m, 2H)。

6-环丙基 -8-氟 -2-(2-甲基 -3-(1 -甲基 -5-((5-(4-甲基哌嗪 -1 -基)吡啶 -2-基)胺) -6-氧代 -1 ,6-二氢吡 啶 -3-基)苯基)异喹啉 -1 (2H)-酮化合物 9的制备

采用制备化合物 1相类似的方法可制得化合物 9 (28 mg, 57.3 %)。 Mp: 204.3-206.7 °C; MS (ESI) m/z 591.3 [M + H]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO- ₆ ): δ 8.51 (d, J = 1.32 Hz, IH), 8.39 (s, IH), 7.86-7.85(d, = 2.52 Hz, IH), 7.47-7.28 (m, 6H), 7.23-7.17 (m, 2H), 7.01 (d, = 13.32 Hz, IH), 6.64 (d, J = 7.28 Hz, IH), 3.60 (s, 3H), 3.05 (s, 4H), 2.45 (s, 4H), 2.22 (s, 3H), 2.15-2.05 (m, IH), 2.02 (m, 3H), 1.13-1.02 (m, 2H), 0.90-0.80 (m, 2H); ¹³ C NMR (100 MHz, DMSO- ₆ ): δ 163.22, 160.63, 157.70, 156.53, 151.70, 148.60, 140.89, 140.86, 139.98, 139.67, 134.18, 133.75, 133.29, 130.72, 129.98, 127.20, 127.00, 126.69, 126.48, 118.73, 118.44, 116.20， 113.01, 110.76, 104.85, 54.43, 48.71, 45.64, 37.22, 15.39, 15.04, 10.64; HPLC 97.1 %; HRMS(ESI) m/z calcd for C ₃₅ H ₃₅ FN ₆ 0 ₂ [M+H] ⁺ 591.2878, found 591.2881。

实

采用制备化合物 1相类似的方法可制得化合物 10 (40 mg, 53.1 %)。Mp: 198.3-200.4; MS

(ESI) m/z 633.3 [M + H]+; Ή NMR (400 MHz, DMSO- ₆ ): δ 8.53 (s, IH), 8.43 (s, IH), 7.86 -7.85 (d, = 2.52 Hz, IH), 7.43-7.32 (m, 4H), 7.30 (s, IH), 7.23 -7.22 (m, 2H), 7.01-6.98 (d, J = 13.10 Hz, IH), 6.63 -6.62 (d, = 8.40 Hz, IH), 4.57-4.55 (m, = 12.10 Hz, 2H), 4.46-4.37 (m, = 12.20 Hz, 2H), 3.59 (s, 3H), 3.38 (m, IH), 3.06 (s, 4H), 2.37 (s, 4H), 2.02 (m, 3H), 1.99 (s, 2H), 1.13-1.02 (m, 2H), 0.90-0.80 (m, 2H); "C NMR (400 MHz, DMSO- ₆ ): δ 163.20, 160.61, 157.75, 156.47, 151.80, 148.71, 140.87, 140.81, 139.97, 139.66, 134.20, 133.72, 133.28, 130.70, 129.99, 127.21, 127.07, 126.70, 126.51, 118.69, 118.42, 116.23, 113.05, 110.85, 104.84, 74.32, 58.43, 48.89, 48.60, 37.25, 15.39, 15.05, 10.71; HPLC 97.6 %; HRMS(ESI) m/z calcd for C ₃₇ H ₃₇ FN ₆ 0 ₃ [M+H] ⁺ 633.2983, found 633.2987。

实施例 11: 体外生化水平抑制蛋白激酶（PK)活性实验

材料与方法： BTK激酶，来源于 Invitrogen; HTRF KinEASE ； TK kit (Cisbio公司）；

384孔板 ( Greiner公司）; ATP ( sigma公司）， MgCl ₂ ( sigma) 公司； PHERAstar FS多 功能酶标仪 （BMG公司）； 低速离心机 （StaiteXiangyi公司）； 恒温箱 （Binder公司）。 选 取的阳性药为 RN486,可 已有的文献报道制备（WO2010100070), 结构如下：

RN486

化合物溶解及保存： 视溶解性用 DMSO将受试化合物配置成 0.5-10 mmol/L的母液， 分装后 -20°C保存；

化合物工作液的配制： 测试前将分装的化合物从冰箱取出， 用纯 DMSO稀释到 50χ 所需浓度； 然后用去离子水将化合物稀释至 4χ所需浓度；

1.33><Enzymatic buffer的配制： 将 5><Enzymatic buffer来源于 HTRF kit)用去离子水稀 释到 1.33 x，并且加入 1.33 x终浓度的相应成分： 1.33 mmol/L DTT和 1.33 mmol/L MgC12; 激酶工作液的配制： 用 1.33 xEnzymatic buffer将 Btk稀释到 2χ所需终浓度 0.2 ng/μί; 底物工作液的配制： 用 1.33 xEnzymatic buffer将 sub strate-biotin (来源于 HTRF kit) 和 ATP ( lO mM) 稀释为 4χ所需终浓度的混合液；

检测工作液的配制： 用 HTRF detection buffer将 16.67 μηιοΙ/L的 Streptavidin-XL665 稀释到 4χ所需终浓度， 然后与等体积的 Antibody-Cryptate混合 （均来源于 HTRF kit)。

酶反应步骤： 向低体积 384微孔板的每个孔中加入 4 μLμl的激酶工作液， 同时加入 4 的 1.33xEnzymatic buffer作为阴性对照 （Negative); 向孔加入 2 μΐ的化合物工作液， 同时加入 2 的 8 % DMSO水溶液作为零化合物浓度对照 （即阳性对照， Positive); 于 25 V (或 30 V ) 孵育 5 -10 min; 向孔中加入 2 μL底物工作液启动酶反应， 于 25 °C (或 30 °C ) 振荡反应 15-60 min。

HTRF试剂检测步骤： 向孔加入 8 μL的检测工作液终止反应； 25 °C反应 1 h;

HTRF信号的读取： 采用 PHERAstar FS读数检测信号， 仪器相应设置如下：

Optic module HTRF®

Integration delay (lag time) 50

Integration time 400

Number of flashes 200

对于每孔读出的原始数据， 比值 =665 nm/620 nm;

抑制率的计算： 试验组比值 一 阴性对照组比值

抑制率 % = ( 1- ) 100 %

^阳性对照组比值 一阴性对照组比值 ~

IC ₅ o值的计算： 以化合物浓度的对数为横坐标，抑制率为纵坐 标，在 GmphPad Pri _S m 5 中， 拟合非线性曲线： log (inhibitor) vs. response - Variable slope, 求出酶活抑制率为 50 % 时的待测化合物浓度即 IC ₅ o。

实验结果： BTK激酶活性半数抑制浓度 （IC _5Q , nM)

本发明提供结构如式 I所示化合物对 BTK激酶活性的半数抑制浓度 （IC _5Q )

结论： 本发明部分化合物对 BTK激酶生化水平的抑制活性优于阳性药 RN486。

实施例 :12: 体外细胞水，制蛋白激酶（PK)活性实验

材料与方法： Fluo-4 Direct™ Calcium Assay Kits试齐 [J盒， Invitrogen公司； RPMI1640 培养基： GIBCO公司； 96孔黑板： CORNING公司； PHERAstar FS多功能酶标仪（BMG); 低速离心机 （StaiteXiangyi)；。 选取的阳性药为 RN486。

细胞处理： 用无血清培养基清洗细胞， 去除血清。

染料配制： 然后用无血清的培养基将 2χ的染料稀释成 l x。 细胞重悬： 用上述配制的 lx染料， 重悬清洗过的细胞。

细胞接种： 20万 /孔， 40μ1/孔， 96孔板， 需要黑壁板。

染料孵育： 放入孵箱中， 孵育 40min。

加药： 然后加入一系列配制好的化合物， ΙΟμΙ/孔， 继续作用 20min。

室温平衡： 将测试板拿出， 室温平衡 5min。

测定基线： 在没有加入激动剂前， 先用 PHERStar酶标仪检测基线。

加入激动剂： 加入终浓度为 l(^g/ml的 IgM， ΙΟμΙ/孔。

测定： 加入激动剂后， 立即用 PHERStar酶标仪进行检测， 每隔 10s， 共检测 8min。 数据处理： OD (最高值）— OD (基线）， 然后用 GraphPad Prism 5软件计算 IC50值。 实验结果： BTK细胞钙流半数抑制浓度 （IC _5Q , nM)

本发明提供结构如式 I所示化合物对 BTK细胞钙流的半数抑制浓度 （IC _5Q )

结论： 本发明部分化合物对 BTK细胞钙流的抑制活性优于阳性药 RN486。

实施例 13: 大鼠体内药代性质的测定方法

1、 摘要

以 SD 大鼠为受试动物， 应用 LC/MS/MS 法测定了大鼠静脉注射给予实施例 1化合 物后不同时刻血浆中的药物浓度。研究本发明 化合物在大鼠体内的药代动力学行为， 评价 其药动学特征。

2、 试验方案：

2.1 试验药品

实施例 1化合物和阳性对照药物 RN486。

2.2试验动物

种类： SD大鼠 数量： 12只

性别： 雄 体重： 190-210g 食物、 给水： 词养、 给药期间自由进食进水， 取血前 12小时开始禁食 来源： 上海斯莱克实验动物有限公司

2.3 给药实验设计： 12只大鼠分为 4组， 每组 3只。

2.4 配药及给药：

化合物 RN486处方： 化合物 RN486溶解于含 5%的 DMA与 5% solute溶液中， 所配 处方溶液澄清透明。

化合物 1处方： 化合物 1溶解于含 5%的 DMA与 5% solute溶液中， 所配处方溶液澄 清透明。

2.5 样品收集及处理： 灌胃组大鼠于给药后 0min， 10min、 20min、 40min、 1、 2、 4、 6、 8、 10、 24h采集血样,静脉注射组于给药后 5min、 10min、 20min、 40min、 1、 2、 4、 6、 8、 10、 24h分别取血约 0.3ml至肝素化 Eppendorf管中， 暂存于冰浴中， 全血经离心后收 集血浆， 转移血浆至 96孔板中， 于 -20°C保存至 LC-MS/MS检测。

3、 药代动力学参数结果

本发明化合物的药代动力学参数如下：

性对照药 RN486, 药代动力学性质优于化合物 RN486。

实施例 14： 小鼠 Arthus Reaction模塑上的体内药效测定

1、 摘要

以 Balb/c小鼠为受试动物，应用 Arthus Reaction模型测评价本发明化合物及阳性对照 药的体内药效。

2、 材料：

受试药物： 地塞米松： 100701， 金陵药业有限公司

化合物 1和 RN486: 各 3 mL， 浓度为 3 mg/mL， 置于 Eppendorf管中， 于

4°C保存。 溶剂： 麻醉药物： 1%的戊巴比妥钠

OVA:批号 SLBB5992V, sigma;兔 anti-OVA: 099K4830, sigma;兔 IgG: SLBD1647V, sigma; Evans blue, 72496LJ, sigma; 所有试剂均在使用前采用冷生理盐水 （4°C ) 配制， 配制好的试剂置于冰浴保存， 现配现用。

实验动物： Balb/c小鼠， SPF级； C57/BL6, SPF级；

3、 试验方案： 分组： 动物随机分组。

分组后给药， 给药时设为时间点 0。

给药约半小时后麻醉动物 （i.p注射 1%的戊巴比妥钠， 剂量 70 mg/kg)， 动物背部脱 毛， 对拟皮内注射位点进行标记。

动物尾静脉注射 0.2 mL的 OVA+Evans blue。

给药后 1小时， 皮内注射 IgG、 抗体 （ anti-OVA )， 每点注射 30 μί， 每侧皮肤注射 3 点。

皮内注射 4 h后， 动物 C0 ₂ 麻醉处死， 剥取分离动物背部皮肤， 拍照记录； 以 0.9 cm 的橡皮塞打孔器钻取注射位点皮肤。 将组织剪碎后， 加入一定量的甲酰胺， 超声 30分钟 后， 37 °C水浴提取过夜。

检测指标：

注射位点组织甲酰胺提取溶液 620 nm处 OD值测定 （96孔板）。

4、 试验结果： 注射位点组织甲酰胺提取溶液 620 nm处 OD值

结论： 化合物 1在 Arthus Reaction模型上的体内药效优于阳性对照药 RN486。

实施例 15： 大鼠胶原诱导的关节炎（rCIA)模型上的体内药� ��测定

1. 实验动物： 品系和来源： Wistar大鼠， SPF级， 上海斯莱克

体重： 170-190 g

性别： 雌

2. 试验方案：

造模: DAY0,取 10 ml不完全弗氏佐剂 IFA和 10 ml胶原，于冰上用匀浆器进行乳化， 直至乳剂滴入水中不散。 于大鼠尾巴皮内多点注射， 每只大鼠注射 0.3 ml乳剂， 使皮肤表 面形成局部鼓包。

分组： 观察模型发病情况， 发病后 （约 Dayl4 ) ， 测量各大鼠后两肢体积， 根据体积 将发病模型大鼠随机分组。

给药及测量： 根据以上组别给药， 持续 14天。 给药期间每周两次称量大鼠体重， 以 足跖测量仪测量大鼠后肢足体积， 并进行评分。

大体解剖： 各组除采血动物外， 其余动物进行大体解剖， 对免疫器官 （脾脏、 胸腺、 淋巴结） 进行观察。

测量指标及方法： 动物体重： 每周两次称量记录；

动物后肢体积： 每周两次以足跖测量仪测量并记录；

评分： 指标如下所示

评分标准

3. 试验结果

18 19 20 21

Tr eat merit ci ays 结论： 化合物 1可以显著的抑制牛 II型胶原蛋白诱导的关节炎症状， 且作用效果优于阳性 对照药 RN486。 己经通过举例说明和实施例的方式比较详细地 描述了上述发明， 以用于阐述和理解的 目的。对于本领域技术人员显而易见的是，可 以在后附权利要求的范围内进行改变和改进。 因此， 应该理解上述说明意在是举例说明性的而不是 限制性的。 因此， 本发明的范围不应 该参考上述说明书而确定，而应该参考下列后 附的权利要求以及由权利要求授权的等价物 的全部范围而确定。