発明の名称 ：

植物由来エキス及び/又は植物由来加工品� �有組成物

技術分野

[0001 ] 本願は、 運動効率向上組成物、 疲労軽減組成物、 および動体視力改善組成 物に関する。

背景技術

[0002] 激しいトレーニングをするアスリートのみな らず、 一般人の日常的な労働 （例えば家事、 荷物運び、 階段の昇降） においても運動効率の向上、 疲労軽 減、 動体視力改善は非常に重要である。 酸素利用はエネルギー産生の指標で あり、 スポーツや日常生活において、 疲れや息切れを感じることなく持続的 に 「運動」 ができるには、 酸素利用効率を向上することがカギとなる。 一般に安静時の動脈血酸素飽和度は 9 6 %以上が正常とされているが、 激 しい運動時には 9 3〜 8 8 %まで低下する （非特許文献 1） 。 また動脈血酸 素飽和度 （安静時） は、 2 0代では約 9 7 %であるものの加齢と共にこの数 値は低下し、 6 0代では約 9 3 %となる （非特許文献 2） 。 すなわち激しい スポーツのときの急激な酸素状態の低下に加 え、 一般人の日常生活において も加齢や労働、 また悪天候 （低気圧） や無呼吸症候群などにより酸素状態の 低下は起こりうる。

スポーツのときのみならず一般人の日常生活 においても酸素状態の低下は 起こりうるため、 通常の酸素状態に加え酸素状態が低下してい る場合であっ ても、 酸素利用効率を改善でき、 運動効率を向上し、 疲れをためにくくする ことができ、 または動体視力を改善できるものであって、 日常的に継続して 安全に摂取できる製剤が望まれる。

[0003] ケンペロールは茶、 ブロッコリー、 グレープフルーツ、 キャベツ、 ケール 、 豆類、 キクヂシャ、 セイヨウニラネギ、 トマト、 イチゴ、 ブドウ、 メキャ べツ、 リンゴ、 キヌア、 西洋わさび、 サフラン、 プロポリス、 高菜、 ルッコ ラ等多くの食用植物等に含まれる天然フラボ ノイ ドの一種である。

[0004] ケンペロールを含む天然フラボノイ ドについてはその多様な生理作用に着 目した研究がなされており、 例えば、 ケンペロールのミ トコンドリア機能へ の関与 (特許文献 1、 特許文献 2、 および非特許文献 3) 、 およびケンペロ —ルの細胞エネルギー消費および甲状腺ホル モンへの影響 (非特許文献 4) が挙げられるが、 これらはいずれもインビトロの研究に関する ものである。 特許文献 3はクエルセチンの乳酸濃度への影響につい� �開示するものであ るが、 他のフラボノイ ドを使った具体的な記載はない。

先行技術文献

特許文献

[0005] 特許文献 1 :国際公開第 201 4/1 7 1 333号

特許文献 2 :特開 2007 -228855号公報

特許文献 3 :特表 201 3-542924号公報

非特許文献

[0006] 非特許文献 1 : Williams JH, Powers SK, Stuart MK (1986) Hemoglobin desa turat i on in highly trained athletes during heavy exercise. Med Sci Sp orts Exerc 18: 168-173

非特許文献 2 : Wi Lkins, R. L. et al. Clinical assessment in respiratory care, (2004), Relationship between Age, PaO, and Saturation

非特許文献 3 : M. Montero, C.D. Lobaton, E. Hernandez-Sanmigue L, et a L , Direct activation of the mitochondrial· calcium uniporter by natural· plant f Lavonoids, Biochem. J. 384 (2004) 19-24.

非特許文献 4 : da-Si Lva WS, Harney JW, Kim BW, Li J, Bianco SD, Crescen z i A, Chr i stof fo Lete MA, Huang SA, Bianco AC 2007 The sma L L po Lypheno L i c mo Lecu Le kaempfero L increases ceLLuLar energy expenditure and thy roid hormone activation. Diabetes 56:767-776

非特許文献 5 : Oxygen uptake effciency slope (OUES) : その生理学的基礎 と臨床応用、 東海大学スポーツ医科学雑誌 11, 9-14, 1999-03、 東海大学 〇 2020/175579 3 卩（：171? 2020 /007858

[0007] 本明細書において引用する先行技術文献の開 示は全て参照することにより 、 本明細書に組み込まれる。

発明の概要

発明が解決しようとする課題

[0008] 本願の課題は、 酸素利用効率を向上する （つまり酸素を利用する能力が高 める） ことで運動効率の低下を抑制または運動効率 を向上できもしくは疲労 を軽減することができ、 または動体視力の低下を抑制または動体視力 を改善 できる組成物あって、 通常の酸素状態に加え酸素状態が低下してい る場合で あってもこれらの作用を奏しうる組成物を提 供することである。

課題を解決するための手段

[0009] 本発明者等は、 上記課題を解決すべく鋭意検討を行ったとこ ろ、 ケンペロ —ルを含有する組成物をヒトへ経口投与する ことにより、 日常生活程度の軽 度の運動から激しいスポーツに相当する強度 の運動にわたる広い強度範囲の 運動において、 酸素利用効率は増加し、 運動効率は向上し、 疲労感は軽減さ れ、 動体視力は改善されることを見出した。 さらに、 本発明者等は、 ケンペ 口ール （ケンペロール配糖体を含む） を含むと知られる食用植物等のなかで 、 特に、 西洋わさび葉、 サフラン、 紅茶葉、 ケール、 プロポリス、 ルツコラ 、 キヌア、 および高菜にはケンペロールまたはケンペロ ール配糖体が非常に 多く含まれることを明かにし、 本願発明に至った。

[0010] 本願発明は下記を提供する ：

[ 1 ] 西洋わさびエキス、 サフランエキス、 茶葉エキス、 ケールエキス、 プ ロポリスエキス、 高菜エキス、 ルツコラエキス、 およびこれらの混合から選 択される植物由来エキス、 および/または、 西洋わさび加工品、 サフラン加 エ品、 茶葉加工品、 ケール加工品、 プロポリス加工品、 高菜加工品、 ルツコ ラ加工品、 およびこれらの混合から選択される植物由来 加工品を含有する運 動効率向上組成物。

[ 2 ] 該運動効率向上が持久力の向上である、 [ 1 ] に記載の運動効率向上 組成物。 〇 2020/175579 4 卩（：171? 2020 /007858

［3］ 該運動効率向上が息切れ軽減である、 ［1］ に記載の運動効率向上組 成物。

［001 1］ ［4］ 西洋わさびエキス、 サフランエキス、 茶葉エキス、 ケールエキス、 プ ロポリスエキス、 高菜エキス、 ルツコラエキス、 およびこれらの混合から選 択される植物由来エキス、 および/または、 西洋わさび加工品、 サフラン加 エ品、 茶葉加工品、 ケール加工品、 プロポリス加工品、 高菜加工品、 ルツコ ラ加工品、 およびこれらの混合から選択される植物由来 加工品を含有する疲 労軽減組成物。

［0012］ ［5］ 西洋わさびエキス、 サフランエキス、 茶葉エキス、 ケールエキス、 プ ロポリスエキス、 高菜エキス、 ルツコラエキス、 およびこれらの混合から選 択される植物由来エキス、 および/または、 西洋わさび加工品、 サフラン加 エ品、 茶葉加工品、 ケール加工品、 プロポリス加工品、 高菜加工品、 ルツコ ラ加工品、 およびこれらの混合から選択される植物由来 加工品を含有する動 体視力改善組成物。

［0013］ ［6］ 西洋わさびエキスを含む、 ［1］ 〜 ［5］ のいずれか 1つに記載の組 成物。

［0014］ ［7］ 西洋わさび加工品を含む、 ［1］ 〜 ［6］ のいずれか 1つに記載の組 成物。

［0015］ ［8］ 該植物由来エキスおよび/または該植物由来� �工品がケンペロールを 含有する、 ［1］ 〜 ［7］ のいずれか 1つに記載の組成物。

［0016］ ［9］ 該ケンペロールを〇.

、 ［1］ 〜 ［8］ のいずれか 1つに記載の組成物。

［0017］ ［ 1 0］ 該ケンペロールを〇.

る、 ［1］ 〜 ［9］ のいずれか 1つに記載の組成物。

［0018］ ［ 1 1］ 該ケンペロールが 1回あたり〇. されるこ とを特徴とする、 ［1］ 〜 ［1 〇］ のいずれか 1つに記載の組成物。

［0019］ ［1 2］ 該ケンペロールが、 1回あたり〇. される ことを特徴とする、 ［1］ 〜 ［1 1］ のいずれか 1つに記載の組成物。 〇 2020/175579 5 卩（：171? 2020 /007858

［0020］ ［ 1 3］ 該ケンペロールが、 1 日あたり〇. 1 111 9〜 6 0 0 01 9投与される ことを特徴とする、 ［1］ 〜 ［1 2］ のいずれか 1つに記載の組成物。

［0021］ ［ 1 4］ 該ケンペロールが、 1 日あたり〇. される ことを特徴とする、 ［1］ 〜 ［1 3］ のいずれか 1つに記載の組成物。

［0022］ ［1 5］ 低酸素状態である対象に投与されることを特 徴とする、 ［1］ 〜 ［

1 4］ のいずれか 1つに記載の組成物。

［0023］ ［1 6］ 飲食品である、 ［1］ 〜 ［1 5］ のいずれか 1つに記載の組成物。

［0024］ ［1 7］ 医薬組成物である、 ［1］ 〜 ［1 5］ のいずれか 1つに記載の組成 物。

［0025］ さらに本願発明は、 運動効率向上組成物、 疲労軽減組成物、 または動体視 力改善組成物の製造における、 西洋わさびエキス、 サフランエキス、 茶葉エ キス、 ケールエキス、 プロポリスエキス、 高菜エキス、 ルツコラエキス、 お よびこれらの混合から選択される植物由来エ キス、 および/または、 西洋わ さび加工品、 サフラン加工品、 茶葉加工品、 ケール加工品、 プロポリス加工 品、 高菜加工品、 ルツコラ加工品、 およびこれらの混合から選択される植物 由来加工品の使用を提供する。

［0026］ さらに本願発明は、 西洋わさびエキス、 サフランエキス、 茶葉エキス、 ケ —ルエキス、 プロポリスエキス、 高菜エキス、 ルツコラエキス、 およびこれ らの混合から選択される植物由来エキス、 および/または、 西洋わさび加工 品、 サフラン加工品、 茶葉加工品、 ケール加工品、 プロポリス加工品、 高菜 加工品、 ルツコラ加工品、 およびこれらの混合から選択される植物由来 加工 品を投与することを含む、 運動効率を向上する方法、 疲労を軽減する方法、 または動体視力を改善する方法を提供する。

［0027］ 加えて本願発明は、 運動効率向上、 疲労軽減、 または動体視力改善におけ る使用のための、 西洋わさびエキス、 サフランエキス、 茶葉エキス、 ケール エキス、 プロポリスエキス、 高菜エキス、 ルツコラエキス、 およびこれらの 混合から選択される植物由来エキス、 または西洋わさび加工品、 サフラン加 エ品、 茶葉加工品、 ケール加工品、 プロポリス加工品、 高菜加工品、 ルツコ 〇 2020/175579 6 卩（：171? 2020 /007858

ラ加工品、 およびこれらの混合から選択される植物由来 加工品を提供する。 発明の効果

［0028］ 本発明の組成物は酸素利用効率 （酸素を利用する能力） を上げることがで き、 それにより日常の動作およびスポーツを含む あらゆる 「運動」 において その効率を向上すること、 例えば息切れが軽減された状態、 または持久力が 向上した状態で運動できることを可能にしう る。 本発明の組成物は、 息切れ 軽減組成物あるいは、 持久力向上組成物としても用いることができ る。 加え て、 本発明の組成物は疲労を軽減することができ 、 スポーツや日常の家事等 を、 疲れを感じずに行うことが可能となり得る。 さらに本発明の組成物は動 体視力を改善し得、 例えばスポーツでの成果の向上に寄与し得る 。

図面の簡単な説明

［0029］ ［図 1］各運動強度における酸素利用量 （ 〇 ₂ ） を示す。

［図 2］漸増負荷運動開始後の酸素消費効率 を示す。

［図 3］漸増負荷運動における各用量の酸素摂取� �率勾配 （0 11巳3） を示す。 ［図 4］漸増負荷運動における各用量の最大酸素� �用量 を示す。 ［図 5］漸増負荷運動における各用量の最大運動� �荷量を示す。

［図 6-1］階段上り時相当の酸素利用量における運 動強度 （％! !［¾） と自覚運動 強度 （8 巳） 。

［図 6-2］ジョギング時相当の酸素利用量における 運動強度 （％! !［¾） と自覚運 動強度 （8 巳） 。

［図 7］漸増負荷運動前後の横方向動体視力 （〇 ） を示す。

［図 8］低酸素環境下における各化合物の 丁 産生への影響を示す。

［図 9-1］ヒラメ筋 （3〇 丨） における八丁 含量を示す。

［図 9-2］全脳における 丁 含量を示す。

［図 10］原料に含まれるケンペロールおよびケン� ��ロール配糖体の量を示す。 はケンペロールである。

発明を実施するための形態

［0030］ 本発明は、 運動効率向上組成物、 疲労軽減組成物、 または動体視力改善組 〇 2020/175579 7 卩（：171? 2020 /007858

成物に関し、 これらの組成物は、 西洋わさびエキス、 サフランエキス、 茶葉 エキス、 ケールエキス、 プロポリスエキス、 高菜エキス、 ルツコラエキス、 およびこれらの混合から選択される植物由来 エキス （好ましくは西洋わさび エキス、 さらに好ましくは西洋わさび葉エキス） 、 および/または、 西洋わ さび加工品、 サフラン加工品、 茶葉加工品、 ケール加工品、 プロポリス加工 品、 高菜加工品、 ルツコラ加工品、 およびこれらの混合から選択される植物 由来加工品 （好ましくは西洋わさび加工品、 さらに好ましくは西洋わさび葉 加工品） を含有することを特徴とするものである。

[0031 ] 本発明において、 植物由来エキスは、 西洋わさびエキス、 サフランエキス 、 茶葉エキス、 ケールエキス、 プロポリスエキス、 高菜エキス、 およびルツ コラエキスから選択される。 本発明において、 植物由来エキスは 1種または 複数種を組み合わせて用いても良い。 本発明において、 「西洋わさびエキス 、 サフランエキス、 茶葉エキス、 ケールエキス、 プロポリスエキス、 高菜エ キス、 ルツコラエキス、 およびこれらの混合」 における 「混合」 とは、 当該 列記されたエキスの任意の組み合わせを意味 する。

[0032] 本発明において、 植物由来加工品は、 西洋わさび加工品、 サフラン加工品 、 茶葉加工品、 ケール加工品、 プロポリス加工品、 高菜加工品、 およびルツ コラ加工品から選択される。 本発明において、 植物由来加工品は 1種または 複数種を組み合わせて用いても良い。 本発明において、 「西洋わさび加工品 、 サフラン加工品、 茶葉加工品、 ケール加工品、 プロポリス加工品、 高菜加 エ品、 ルツコラ加工品、 およびこれらの混合」 における 「混合」 とは、 当該 列記された加工品の任意の組み合わせを意味 する。

[0033] 本発明において植物由来エキスとは、 原料 （西洋わさび （例えばその葉部 分） 、 サフラン、 茶葉 （例えば紅茶葉） 、 ケール、 プロポリス、 高菜、 また はルツコラ） に対し、 ケンペロール配糖体をケンペロールアグリコ ンに変換 するための酵素処理 （酵素を産生しうる微生物を用いても良い） および/ま たは酸加水分解処理、 および、 抽出処理を施して得られたエキスを意味する 。 植物由来エキスの製造は抽出処理後の精製工 程を含んでいても良い。 [0034] 本発明において植物由来加工品とは、 原料 （西洋わさび （例えばその葉部 分） 、 サフラン、 茶葉 （例えば紅茶葉） 、 ケール、 プロポリス、 高菜、 また はルツコラ） に対し、 ケンペロール配糖体をケンペロールアグリコ ンに変換 するための酵素処理 （酵素を産生しうる微生物を用いても良い） および/ま たは酸加水分解処理を施して得られた加工品 であって抽出工程を含まずに製 されたものを意味する。

[0035] 本発明において西洋わさびエキスとは、 西洋わさび （Armoracia rust icana ） を原料にして得られた植物由来エキスを意味 する。 本発明において西洋わ さび加工品とは、 西洋わさび （Armoracia rust icana） を原料にして得られた 植物由来加工品を意味する。 西洋わさびの葉にはケンペロール配糖体 （例え ばケンペロール 3 _0—キシロシルガラクトシド） が多く含まれるため、 原 料として葉部分を用いることが好ましい。 本開示において、 西洋わさび葉エ キスおよび西洋わさび葉加工品とは、 主として西洋わさびの葉部分を用いて 製造された西洋わさびエキスおよび西洋わさ び加工品をそれぞれ意味する。

[0036] 本発明においてサフランエキスとはサフラン （Crocus sativus） を原料に して得られた植物由来エキスを意味する。 本発明においてサフラン加工品と はサフラン （Crocus sativus） を原料にして得られた植物由来加工品を意味 する。

サフランにはケンペロール 7-0-/S-d-グルコピラノシド（kaempferol 7-0- /S -d-g lucopyranos ide）が含まれることが知られている （Mini Rev Med Chem.

11（4）:298-344.2011） 。

[0037] 本発明において茶葉エキスとは茶 （Camellia sinensis） の葉 （茶葉） を原 料にして得られた植物由来エキスを意味する 。 本発明において茶葉加工品と は茶 （Came Ilia sinensis） の葉 （茶葉） を原料にして得られた植物由来加工 品を意味する。 茶葉は生であっても、 乾燥および/または発酵させたもの （ 例えば、 緑茶葉、 ウーロン茶葉、 紅茶葉） であっても良い。

茶葉には、 ケンペロール 3-0-（2-0-/S-D-ガラクトピラノシル- 6-0-a-L-ラ ムノピラノシル）-/ S-D-グルコピラノシド （kaempferol 3-0-（2-0-（3 -D-ga lac \¥02020/175579 9 卩（：17 2020 /007858

topyranosy L-6-0-a-L-rhamnopyranosy L)-/S -D-g Lucopyranos ide) _N ケンペ 口ール 3-0-(2-0-/S-D-キシロピラノシルト 6-0-a-L-ラムノピラノシル)- - D-グルコピラノシド (kaempferoL 3-〇-(2-〇- (3 -D-xy Lopy ranosy L-6-0- a -L-r hamnopyranosy L)-/S -D-g Lucopyranos ide) _N ケンペロール 3 -グルコシル- (1 ®3) -ラ厶ノシル (1®6)ガラクトシド (kaempferoL 3-g Lucosy 1-(1 ®3)-rhamn osyL(1®6)gaLactoside) 、 ケンペロール 3-0-[2 -クマロイル- 3-0-/S-D-グル コシル- 3-0-/S-D-グルコシルルチノシド] (kaempferoL 3-〇-[2-coumaroy L-3- 0- (3 -D-g Lucosy L-3-0-/S -D-g Lucosy L rut i nos ide]) が含まれることが知られ ている (Mini Rev Med Chem. 11 (4) : 298-344· 2011 ) 。

[0038] 本発明においてケールエキスとはケール (Brassica oleracea) を原料にし て得られた植物由来エキスを意味する。 本発明においてケール加工品とはケ —ル (Brassica oleracea) を原料にして得られた植物由来加工品を意味 する ケールにはケンペロール 3 -シナボイル-ジ-グルコシド- 7 -ジ-グルコシド ( kaempfero I 3-s i napoy l-d i -g lucos i de-7-d i -g lucos i de) が含まれることが知 られている (Mini Rev Med Chem. 11 (4) =298-344.2011 ) 。

[0039] 本発明においてプロポリスエキスとはプロポ リスを原料にして得られた植 物由来エキスを意味する。 本発明においてプロポリス加工品とはプロポ リス を原料にして得られた植物由来加工品を意味 する。

[0040] 本発明において高菜エキスとは高菜 (Brassica juncea) を原料にして得ら れた植物由来エキスを意味する。 本発明において高菜加工品とは高菜 (Brass ica juncea) を原料にして得られた植物由来加工品を意味 する。

高菜にはケンペロール 7-0-/S-D-グルコピラノシル- (1®3)-[/S-D-グルコ ピラノシル- (1 ®6)]- グルコピラノシド (kaempferoL 7-0- (3 -D-g lucopy rano sy 1-(1 ®3)-[ (3 -D-g lucopy ranosy 1-(1 ®6)]-g lucopyranos ide) が含まれるこ とが知られている (Mini Rev Med Chem. 11 (4) =298-344.2011 ) 。

[0041] 本発明においてルツコラエキスとはルツコラ (Eruca sativa) を原料にし て得られた植物由来エキスを意味する。 本発明においてルツコラ加工品とは \¥0 2020/175579 10 卩（：17 2020 /007858

ルツコラ 53† ^' ^3） を原料にして得られた植物由来加工品を意味 する

ルツコラにはケンペロール ジ -0-グリコシド （kaempfero l d i -O-g lycos i de ） が含まれることが知られている （M i n i Rev Med Chem. 1 1（4）: 298-344. 201 1

[0042] 植物由来エキス/加工品を製造するにあたり� � 原料は、 生の状態であって もよいし、 乾燥品や粗乾燥品であってもよいが、 ケンペロールまたはその配 糖体を効率的に酵素処理/酸加水分解処理/抽� ��するという観点から、 原料 を常法により粉砕してから用いることが好ま しい。

[0043] 抽出方法は、 特に限定されず、 製剤学または食品工学の分野で通常用いら れる方法によって行うことができる。 例えば、 エタノール、 メタノール、 ブ タノール、 エーテル、 エチルアセテートおよびクロロホルムよりな る群から 選ばれるいずれか一種以上の有機溶媒、 または、 これらの有機溶媒と水との 混合溶媒を用いる抽出が挙げられる。

[0044] 植物体には通常、 アグリコンよりも配糖体が多く含まれる一方 、 通常グル コース配糖体以外の配糖体はアグリコンより も体内で吸収されにくいため、 本願の植物由来エキスおよび植物由来加工品 の製造においては、 ケンペロー ル配糖体をケンぺ口ールアグリコンに変換す るための酵素処理/酸加水分解 処理工程が含まれる。 上記の植物由来エキスの原料に含まれうるケ ンペロー ル配糖体としては、 グルコース、 ガラク ト—ス、 ラムノ—ス、 キシロ—ス、 およびこれらの組合せ （例えば、 ソホロース （グルコース +グルコース） 、 ルチノース （ラムノース +グルコース） 、 ネオヘスペリ ドース （ラムノース +グルコース） ） が、 ケンペロールの 3位、 6位、 および/または 7位に〇- グリコシド結合しているケンペロール配糖体 が挙げられる。 各原料に含まれ うる配糖体の糖としては、

サフラン ： グルコース ；

茶葉： グルコース、 ガラクトース +ラムノース +グルコース、 キシロース +ラムノース +グルコース、 ガラクトース +グルコース、 グルコース +ルチ 〇 2020/175579 11 卩（：171? 2020 /007858

ノース （ラムノース十グルコース） ；

ケール ： ソホロース （グルコース十グルコース）

高菜： グルコース十グルコース十グルコース

ルツコラ ： グルコース

西洋わさび葉：ガラクトース十キシロース

が挙げられる。

酵素処理は、 含まれうる配糖体をアグリコンに変換するの に適した酵素、 例えば、 グルコシダーゼ〇 ^008 ^' ^886） _% アラビノシダーゼ

、 ラムノシダーゼ キシロシダーゼ（乂 1〇3 _1（^36）、 セルラー ゼ（0611111836）、 ヘスペリジナーゼ（1163卩6「 _1〇1 _1 36）、 ナリギナーゼ（ 「 _1叩 _1门 ㊀）、 グルクロニダーゼ ぺクチナーゼ（ 6〇1；丨 36）、 ガラ ク トシダーゼ（9318〇1；03丨〇^ ㊀）、 アミログルコシダーゼ（811^ 1〇9111003丨〇^ ㊀）、 またはアミラーゼ （8111 336） を適宜組み合わせて用いて行われ得る。 該酵素 を産生しうる微生物、 例えばアスペルギルス（83 6「9_111 ）属、 バチルス（ 〇 丨 11 ）属、 ぺニシリウム（penici 11丨11111）属、 クモノカスビ（「11丨 〇 ）属、 リゾ ムコール（「 1å011111（；0「）属、 タラロマイセス ビフィ ドバクテ リウム モルティエラ（1110「1；_16「6113）属、 クリプトコツ カス（0「 1；0（；0001^）属、 またはミクロバクテリウム 属を適 宜組み合わせて用いて酵素処理を行ってもよ い。

例えば、 西洋わさびエキスの製造においては、 グルコシダーゼとキシラー ゼ （あるいはこれらを産生しうる微生物を用い て酵素処理が行われ得る。 あるいは、 酸加水分解処理により配糖体をアグリコンに 変換しても良い。

[0045] 本願において、 植物由来エキスおよび植物由来加工品にはケ ンペロールア グリコンが高濃度で含まれることが好ましい が、 食品組成物または医薬品組 成物の材料として使用可能な程度 （例えば 1 9/9以上、 あるいは 3111 ₉ / ₉ 以上、 好ましくは 101119 以上、 さらに好ましくは 20019/9以上、 より好ま しくは 501119 以上） に含まれていれば良い。 植物由来エキス/加工品にはケ ンぺ口ール配糖体が残存していても良い。 植物由来エキスおよび植物由来加 〇 2020/175579 12 卩（：171? 2020 /007858

エ品にはケンペロール 3—〇ーグルコシドが含まれていてもよい。

植物由来エキスおよび植物由来加工品中のケ ンペロールアグリコンの定量 方法は特に限定されず、 常法により行われ得るが、 例えば本願実施例の試験 例 6の方法に従って行われ得る。

[0046] 植物由来エキスの製造において、 抽出工程と酵素/酸加水分解処理の順序 およびそれらの回数は特に限定されず、 例えば、

原料を溶媒で抽出し、 得られた抽出物を酵素/酸加水分解処理して� �造し ても良く ；

原料を酵素/酸加水分解処理し、 得られた処理物を溶媒で抽出して製造し ても良く ； または

原料を溶媒で抽出し、 得られた抽出物を酵素/酸加水分解処理し、 得られ た処理物を溶媒で抽出して製造しても良い。

これらの製造方法はいずれも、 抽出物に精製処理および/または濃縮処理 を適宜行っても良い。

[0047] 本発明において、 植物由来エキス/加工品は水、 アルコール、 糖等の希釈 媒で希釈したものであっても良く、 凍結乾燥した粉末であっても良い。

[0048] 例えば、 西洋わさびエキスは下記 (1 ) 〜 (6) の工程により製造される

( 1 ) 西洋わさび葉を収穫後、 洗浄 ·殺菌し， 熱風乾燥する。

(2) 乾燥した西洋わさび葉を〇〜 50 / ％の水を含むエタノールにて 抽出する。

(3) 抽出液を樹脂カラムにて吸着、 脱離を行い、 精製する。

(4) 精製液を適当な酸または塩基で 1 ^~ 13— 7に調整し、 30_50°〇に て適当な時間加水分解酵素による酵素反応を 実施する。

(5) 60°〇以上で酵素を失活させる。

(6) 凍結乾燥したものを西洋わさびエキス (粉末) とする。

[0049] 本発明の組成物は、 植物由来エキスおよび/または加工品が、 1回の投与 あたり、 例えば 0. 05〇1 ₉ ~5 ₉ 、 好ましくは〇. 1 〇1 ₉ ~3 ₉ 、 さらに 〇 2020/175579 13 卩（：171? 2020 /007858 好ましくは〇. 5〇19~2 ₉ 、 さらにより好ましくは 1 0〇19~ 1. 5 ₉ 投 与されるものであり得る。 あるいは該植物由来エキスおよび/または加� �品 の下限値の例として 0. 05〇19、 0. 1 〇19、 0. 5〇19、 1 0〇! 、 2 0〇19、 50〇19、 1 001119、 2001119、 5001119、 および 700 9が挙げられ、 上限値の例として 1 9、 1. 5 ₉ 、 2 ₉ 、 3 ₉ 、 および 5 ₉ が挙げられ、 該植物由来エキスおよび/または加工品の好� �しい範囲は該上 限値と該下限値の組合せにより示されうる。

[0050] 本発明の組成物おいて、 植物由来エキスおよび/または加工品は 1 日あた り、 例えば〇. 好ましくは〇. 5 ₉ 、 さら に好ましくは〇. 投与され得る。 該植物由来エキスおよび/ま たは加工品の下限値の例として〇. 051119、 0. 1 〇19、 〇. 5〇19、 1 0〇19、 20〇19、 50〇19、 2001119、 5001119、 および 7001119 が挙げられ、 上限値の例として 1 9、 1. 5 ₉ 、 2 ₉ 、 3 ₉ 、 5 ₉ 、 7. 5 9、 および 1 09が挙げられ、 該植物由来エキスおよび/または加工品の好 ましい範囲は該上限値と該下限値の組合せに より示されうる。 1 日あたりに 投与されうる植物由来エキスおよび/または� �工品が 1回の投与で投与され ても、 複数回 （例えば 2回、 3回、 4回、 および 5回） に分けて投与されて もよい。

[0051] 本発明の組成物中 （飲食品、 医薬組成物等） に含まれうる、 植物由来エキ スおよび/または加工品 （あるいはケンペロール） の量、 1回の投与あたり に投与される植物由来エキスおよび/または� �工品 （あるいはケンペロール ） の量、 および 1 日あたりに投与される植物由来エキスおよび /または加工 品 （あるいはケンペロール） の量は、 目的の効果が発揮されうる範囲であれ ば特に制限されず、 組成物の形態や投与回数、 対象の健康状態等に応じて適 宜選択されうる。 本発明の組成物の投与期間は目的の効果が発 揮されうる範 囲であれば特に制限されず、 単回であっても、 継続的に投与されても良い。 運動効率向上、 疲労軽減、 または動体視力改善の効果を継続的に得るた めに 、 本発明の組成物は長期間にわたり継続して投 与されることが望ましく、 例 〇 2020/175579 14 卩（：171? 2020 /007858

えば 2日間、 3日間、 1週間、 1 0日間、 1箇月、 3箇月以上投与されうる

[0052] 本発明の組成物には、 組成物の全重量にもよるが、 植物由来エキスおよび /または加工品は、 ケンペロールとして、 例えば〇.

好ましくは〇. 5〇19〜 1 00〇! 、 さらに好ましくは1 〇19~3〇1119、 さらにより好ましくは 2 9含まれる。 該ケンペロールの下限値 の例として 0. 1 〇19、 〇. 5〇19、 1 〇19、 2〇19、 および 2. 5〇19が 挙げられ、 上限値の例として 200〇! 、 1 50〇! 、 1 00〇! 、 9、 30〇19、 25〇19、 1 5〇19、 1 01119、 5〇19、 3〇19、 および 2 . 5019が挙げられ、 該ケンペロールの好ましい範囲は該上限値と 該下限値 の組合せにより示されうる。

[0053] 本発明の組成物は、 植物由来エキスおよび/または加工品が、 1回の投与 あたり、 ケンペロールとして、 例えば〇. 1 〇1 ₉ ~200〇1 ₉ 、 好ましくは 〇. 5〇19〜 1 00〇! 、 さらに好ましくは1 〇19~3〇1119、 さらにより 好ましくは 2〇19~ 1 0 9投与されるものであり得る。 該ケンペロールの 下限値の例として 0. 〇. 5〇19、 1 〇19、 2〇19、 および 2. 5 1119が挙げられ、 上限値の例として 200〇! 、 1 50〇! 、 1 00〇! 、 50〇19、 301119、 25〇19、 1 5〇19、 1 01119、 5〇19、 3〇19、 お よび 2. 5 9が挙げられ、 該ケンペロールの好ましい範囲は該上限値と 該 下限値の組合せにより示されうる。

[0054] 本発明の組成物おいて、 植物由来エキスおよび/または加工品は 1 日あた りケンペロールとして、 例えば〇. 1 9、 好ましくは 0. 5 200〇! 、 さらに好ましくは 1 〇19~ 1 00019投与され得る。 該 ケンペロールの下限値の例として 0. 1 〇19、 〇. 5〇19、 1 〇19、 2〇19

、 および 2. 5〇! 9が挙げられ、 上限値の例として 600〇! 9、 300〇! 9 、 2001119、 1 501119、 1 001119、 50〇19、 30〇19、 25〇19、 1 5019、 1 0〇! 、 5〇19、 3〇19、 および 2. 51119が挙げられ、 該ケ ンぺ口ールの好ましい範囲は該上限値と該下 限値の組合せにより示されうる 〇 2020/175579 15 卩（：171? 2020 /007858

。 1 日あたりに投与されうるケンペロールが 1回の投与で投与されても、 複 数回 （例えば 2回、 3回、 4回、 および 5回） に分けて投与されてもよい。

[0055] 本発明の組成物は好ましくは経口投与製剤と して製剤化されることが好ま しく、 製剤型は特に限定されないが、 例えば、 錠剤、 顆粒剤、 カプセル剤、 粉末剤、 チユアプル錠、 菓子類 （クッキー、 ビスケッ ト、 チョコレート菓子 、 チップス、 ケーキ、 ガム、 キャンディー、 グミ、 饅頭、 羊羹、 プリン、 ゼ リー、 ヨーグルト、 アイスクリーム、 シャーベッ トなど） 、 パン、 麵類、 ご 飯類、 シリアル食品、 飲料 （液剤、 清涼飲料、 炭酸飲料、 栄養飲料、 粉末飲 料、 果実飲料、 乳飲料、 ゼリー飲料など） 、 スープ （粉末、 フリーズドライ ） 、 味噌汁 （粉末、 フリーズドライ） 等の通常の食品形態であり得る。

[0056] 本発明の組成物は飲食品または医薬組成物で あり得、 例えば機能性表示食 品、 特定保健用食品、 健康食品、 栄養補助食品 （サプリメント） 、 医療用食 品などの飲食品として利用されうる。

[0057] 本発明の組成物は植物由来エキス/加工品の� �に、 薬学的に許容される基 剤や担体、 食品に使用可能な添加物等を添加して、 経口投与製剤に製剤化さ れうる。 本発明の組成物に使用される植物由来エキス /加工品以外の材料は ケンペロールの安定性を害さないものが望ま しく、 更に本発明の組成物の目 的とする効果 （例えば酸素利用効率向上、 運動効率向上、 疲労軽減、 または 動体視力改善） を害するものでないことが望ましい。

[0058] 本発明において 「酸素利用効率向上」 とは、 酸素を利用する能力が高まる ことを意味する。 具体例として、 本願実施例に記載の酸素消費効率 （ 〇 ₂ / 巳） の増加に加え、 所定の運動強度下での酸素利用量 （ 0 ₂ ） の増加、 酸 素摂取効率勾配 （〇 11巳 3の増加） 、 および最大酸素利用量 の 増加が挙げられる。

[0059] 本明細書において 「運動」 とは体を動かすことを意味し、 日常の家事、 荷 物運び、 階段の昇降、 スポーツ等あらゆる態様を含む。

[0060] 本発明において 「運動効率向上」 とは、 あらゆる運動の場面で、 体をより 楽に動かせられることを意味する。 例えば持久力が向上してより楽な状態で 〇 2020/175579 16 卩（：171? 2020 /007858

長く運動を継続することが可能であり、 または息切れが軽減された状態でよ り楽に運動することができることが挙げられ る。 運動効率向上の指標の例と しては、 所定の運動強度下での酸素利用量 （ 0 ₂ ） の増加、 酸素消費効率 （ ▽ 0 ₂ / 巳） の増加、 酸素摂取効率勾配 （0 11巳3の増加） 、 最大酸素利用 量 の増加、 最大運動負荷量の増加、 所定の酸素利用量 （ 0 ₂ ） 下での運動強度の減少、 または自覚運動強度の減少 （これらの用語は本願 実施例に説明される） が挙げられる。

本願発明の組成物が運動効率向上のために投 与される場合、 その用量およ び投与回数は特に限定されず、 例えば上記に例示する投与量、 投与回数、 投 与期間で投与されうる。

[0061 ] 本発明において疲労軽減とは、 あらゆる運動の場面で、 より疲れが少なく 運動できることを意味する。 疲労軽減の指標の例としては運動強度または 自 覚運動強度 （これらの用語は本願実施例に説明される） が減少することが挙 げられる。

本願発明の組成物が疲労軽減のために投与さ れる場合、 その用量および投 与回数は特に限定されず、 例えば上記に例示する投与量、 投与回数、 投与期 間で投与されうる。

[0062] 本発明において動体視力改善とは、 動体視力の低下を防ぐまたは動体視力 を向上することを意味する。

本願発明の組成物が動体視力改善のために投 与される場合、 その用量およ び投与回数は特に限定されず、 例えば上記に例示する投与量、 投与回数、 投 与期間で投与されうる。

[0063] 本発明の組成物は酸素利用効率を向上する （つまり酸素を利用する能力が 高まる） 効果を有し得る。 従って、 本発明の組成物は酸素利用効率向上剤と しても使用されうる。

[0064] 本発明において、 低酸素状態とは体内の酸素が不足している状 態を意味し 、 例えば動脈血酸素飽和度が 9 5 %未満の状態であることが挙げられる。 本発明の組成物は低酸素状態の対象において も酸素利用効率を向上する効 \¥0 2020/175579 17 卩（：17 2020 /007858

果を有し得るため、 当該低酸素状態の対象においても、 運動効率向上、 疲労 軽減、 動体視力改善に寄与しうる。

[0065] 本発明の組成物の投与対象は特に限定されな いが、 好ましくはヒトである 。 スポーツの前後、 屋外での作業の前後、 日常の労動 （階段の上り下り、 家 事など） の前後、 日頃の疲れが抜けないと感じるとき、 効率的に作業をした いとき、 加齢で動きが鈍くなったと感じたときに投与 することが好ましい。 実施例

[0066] 以下、 製剤例および試験例を挙げて本発明を説明す るが、 本発明はこれら に限定されるものではない。

[製剤例 1 ] クッキー （ケンペロール含量 2 .

キヌア抽出物 3 7重量％

メープルシロップ 2 2重量％

牛乳 2 2重量％

バター （含塩） 1 5重量％

グラニュー糖 4重量％

合 計 1 0 0重量％

これらを混合し、 常法によりオーブン温度約 1 4 0 ^° 〇で 2 0分間焼成して 、 クッキーを製造した。 クッキー 1枚あたりのケンペロールの含量は 2 . 5 〇! による） であった。

キヌア抽出物* :酵素処理によりケンペロール配糖体をケン� �ロールアグリ コンに変換した抽出物。

[0067] ＜試験例 1 : 自転車こぎ漸増負荷運動試験＞

健常成人男性 2 5名に対して、 3用量のケンペロール含有クッキー状食品 （ケンペロールとして、 2 . を含む） およびプ ラセボクッキー状食品 （ケンペロールを含まない） を試験食品として、 1 日 1回 8日間の連続摂取を、 クロスオーバー法にて 4セッ ト繰り返した。 摂取 1 日目 （単回摂取時） および摂取 8日目 （連続摂取時） の試験食品摂取 3時 間後から、 呼気ガスを採取しながら自転車こぎ漸増負荷 運動を実施し、 酸素 〇 2020/175579 18 卩（：171? 2020 /007858

利用量を算出した。 運動中は、 心拍数および自覚的運動強度をモニターした 。 また、 運動前後に動体視力を測定した。 各評価項目の詳細を以下に示す。

[0068] <1 :酸素利用量 の評価 >

酸素利用量 （ !_/ 丨 n/k g） を、 吸った息 （大気） に含ま れる酸素の量と呼気ガスに含まれる酸素の量 の差より算出した。

自転車こぎ漸増負荷運動において、 ペダルの重さが被験者の限界に近づく と心拍数 （!! [¾） は最大となる。 安静時の心拍数から最大心拍数までの心拍 数の増加を運動強度の 1 〇〇%として、 各運動強度における酸素利用量 （V 〇 ₂ ） をプロッ トした。

すなわち、 例えば運動強度 50%!! [¾の場合、 下式：

1 〇〇 （X-安静時心拍数） / （最大心拍数-安静時心拍数） =50%!·^ 中の 「X」 の心拍数を示すときの酸素利用量 が 「運動強度 50%!·! における酸素利用量 （ 〇 ₂ ） 」 となる。

結果を図 1 に示す。

図 1 に示されるとおり、 単回摂取後および連続摂取後共に、 運動強度 50 %、 60%、 70%、 80%、 90%、 および 1 00%の全てにおいて、 ケ ンぺ口ールを摂取した方がケンペロールを摂 取しない場合に比べて、 酸素利 用量は増加したことが確認された。

[0069] <2 :酸素消費効率 の評価 >

酸素消費効率を下式により算出した。

酸素消費効率 =酸素利用量/換気量

図 2に示されるとおり、 単回摂取後および連続摂取後共に、 ケンペロール を摂取した方がケンペロールを摂取しない場 合に比べて、 酸素消費効率 （V 〇 ₂ / 巳） の増加が認められた。

[0070] <3 :酸素摂取効率勾配 （011巳 3） の評価 >

漸増負荷運動開始時から 1分毎の換気量と 〇 ₂ を利用して酸素摂取効率勾 配 （〇11巳3） を算出した。 具体的には横軸に 「換気量 （ 巳） の I 〇 9値 」 、 縦軸に 「 〇 ₂ 」 をプロッ トした直線性のグラフを得、 その一次関数グラ フの傾きを〇11巳3とする。 詳しくは非特許文献 5を参照。

図 3に示されるとおり、 単回摂取後および連続摂取後共に、 ケンペロール を摂取した方がケンペロールを摂取しない場 合に比べて、 酸素摂取効率勾配 （OU ES） は増加し、 漸増負荷運動の間を通して酸素が効率良く利 用でき たことが確認された。

[0071] <4 :最大酸素利用量 （V〇 _2peak ） の評価 >

図 4に示すとおり、 単回摂取後および連続摂取後共に、 ケンペロールを摂 取した方がケンペロールを摂取しない場合に 比べて、 最大酸素利用量 （V〇 ₂ p e a k） （m L/m i n / k g） は増加した。

[0072] <5 :最大運動負荷量の評価 >

図 5に示すとおり、 単回摂取後および連続摂取後共に、 ケンペロールを摂 取した方がケンペロールを摂取しない場合に 比べて、 最大運動負荷量 （ぺダ ルの重さ （wa t t） ） は増加した。

[0073] <6 : 日常生活における運動強度への影響 >

階段を上る際およびジョギング時の酸素利用 量 （V〇 ₂ ） は一般にそれぞれ 1 4mL/m i n/k gおよび 24. 5 mL/m i n/k gであるとの報告 がある。

漸増負荷運動において、 酸素利用量 （V〇 ₂ ） が階段の上りおよびジョギン グにそれぞれ相当する 1 4 m L/m i n/k gおよび 24. 5 m L/m i n /k gのときの運動強度 （％H R） と自覚運動強度 （R P E） を評価した。 酸素利用量 （V0 ₂ ） および運動強度 （％H R） の算出方法は上記と同じで ある。

自覚運動強度 （R P E） は、 下記の表に従って漸増負荷運動開始時から 1 分間隔で被験者が評価し、 各被験者の回答値を平均して算出した。

図 6— 1および 6— 2に示すとおり、 階段を上る際およびジョギング時に 相当する酸素利用量 （V0 ₂ ） の両方において、 単回摂取後および連続摂取後 共に、 ケンペロールを摂取した方がケンペロールを 摂取しない場合に比べて 、 運動強度および自覚運動強度は低下した。

[0074] 上記 1〜 6の評価結果に示されたとおり、 ケンペロール含有食品の摂取に より、 同じ運動強度下で酸素利用量、 酸素利用効率は増加した。 さらに最大 運動負荷量が増大した。 また、 同じ酸素利用量下での運動強度を想定した場 合、 心拍数は低下しており、 被験者は持久力が向上して息切れなく楽に運 動 できる可能性が示唆された。 このように運動効率が向上したため、 被験者の 疲労感も軽減すると考えられる。 実際、 ケンペロール含有食品の摂取により 、 被験者が自覚する運動強度は低下しており、 息切れや疲労感は軽減された 。 したがって、 本組成物は息切れ軽減組成物及び/又は持久� �向上組成物と して使用できることが示唆された。

[0075] <7 :動体視力への影響 >

漸増負荷運動の前と後 （運動後約 1 分以内） に横方向動体視力 （DVA ） および奥行方向動体視力 （KVA） を測定して、 動体視力への影響を調べ た。

[0076] （1） 横方向動体視力 （DVA : Dynamic Visual Acuity） の測定

測定機器：

動体視力計 HI-10Dynamic Vision Tester （興和株式会社）

測定方法：

被験者を中心として円弧上を水平に移動する ランドルト氏環の視認しうる 最も速いスピードを測定した。 目標物は回転するごとに自動的に徐々に減速 していき、 ランドルト氏環の切れ目が分かったとき、 被験者は手元のスイッ チを押し、 切れ目の方向 （上下左右） を答えさせた。 デジタル表示されたそ のときの回転数を記録用紙に記載し、 検査成績とした。 結果を図 7に示す。

[0077] <試験例 2 :低酸素環境下における AT P産生への影響 > 〇 2020/175579 21 卩（：171? 2020 /007858

馬血清により分化させた〇 ₂ 〇 ₁₂ 骨格筋細胞を得、 種々の化合物 （最終濃度 2 0 1\/1） あるいは陰性対照としてジメチルスルホキシ ド 〇） を添 加し、 低酸素インキュベータ （3 %〇 ₂ ） にて 2 4時間培養後、 細胞中の八丁 含量を東洋ビーネッ ト （株） 製キッ ト （ルシフエラーゼ発光法） を用いて 定量した。

活性値は口 IV! 3 0添加サンプルの八丁 含量を 1 0 0 %としたときの％値 にて表示した。

結果を図 8に示す。

[0078] ＜試験例 3 : ラッ トにおけるケンペロールまたはケンペロール 3— 0—グ ルコシドの影響＞

9週齢雄性 3 0ラッ トに対して、 ケンペロール

9体重） 、 またはケンペロール 3—〇ーグルコシド

リコン換算値として〇. 1、 〇. 2または を毎朝 9時に 1 日 1回、 8日間連続経口投与した （酸素 2 1 %で飼育した） 。 投与 8日目 に、 0〇 n I群は酸素 2 1 %に 1時間暴露した後、 それ以外の群は酸素濃度 1 2 %に 1時間暴露した後、 ヒラメ筋 （3〇 I） 、 全脳を摘出し、 組織中の 八丁 含量を測定した。

結果を図 9— 1 - 2に示す。

[0079] ＜試験例 4 :原料に含まれるケンペロールおよびケンペ� �ール配糖体の量＞ 西洋わさび葉、 サフラン、 紅茶葉、 ケール、 プロポリス、 高菜、 およびル ッコラを検体として、 これらに含まれるケンペロールおよびケンペ ロール配 糖体の量を、 下記の方法に従って測定した。 結果を図 1 0に示す。

（1） 50 1111_ チューブに検体 0. 8 9を電子天秤で秤量し （ = 1 ~3） 、 メス シリンダーで 70%エタノール水溶液 40 111を分取し、 添加 秤量する。 ポリ ト ロンホモジナイザーで、 室温、 2, 000 rp.ii, 1分間懸濁を行った。

（2） 懸濁液を十分に反転混和し、 懸濁液 1 ＞111_を 1 （111_ピぺッ トマンにて 14（111_ ガラス試験管に分注 ·秤量した （N = 1〜 3） 。

（3） 2!\!塩酸 1 111を 1 1111_ピペッ トマンにて添加し、 ボルテックスにて混合後 \¥02020/175579 22 卩（：17 2020 /007858

、 ヒートブロックにて 100 、 20分間加熱した (酸加水分解によるケンペロー ル配糖体のケンペロールアグリコンへの変換 ) 。 加熱終了後 5分以上氷冷した

(4) ドラフト内で、 ディスペンサーにてヘキサン 5 111を添加した。 手で水 平に 20回振盪した。 大型冷却遠心機にて 4°(：、 12,000 rp.ii, 5分間遠心を行っ た。

(5) ドラフト内で、 パスツールピペッ トにて上層を廃棄した。 ディスペン サーにて酢酸エチル 5 111を添加した。 振盪機で室温、 150 111、 10分間水平に 振盪した。 大型冷却遠心機にて 4°〇、 12,000 rp.ii, 5分間遠心を行った。

(6) ドラフト内で、 パスツールピペッ トにて上層を乾固用の 14〇!ガラス試 験管に回収した。 回収した上層は吹付式窒素乾固機にて 60 ^° 〇で窒素乾固を行 った。 下層にはディスペンサーにて酢酸エチル 5 1111_を添加した。 振盪機で室 温、 150 111、 10分間水平に振盪した。

大型冷却遠心機にて 4°〇、 12,000 111、 5分間遠心を行った。

(7) 乾固用の 14 しガラス試験管を取り出した (乾固が完了しなくてもよい ) 。 ドラフト内で、 パスツールピぺッ トにて上層を乾固用の 14〇!ガラス試験 管に回収した。 回収した上層は吹付式窒素乾固機にて 60 ^° 〇で窒素乾固を行っ た。

(8) 乾固が終了したら 14 しガラス試験管を取り出し、 70%エタノール水溶 液 1 111を 1 1111_ピペッ トマンにて添加し、 ボルテックスにて溶解した。 超音波 発生装置にて 1分間 X 2回超音波処理してボルテックスにて溶解し� �。 ミニユ ニフィルターに 1 〇!ピぺッ トマンにて溶解液 400 〇!を添加しフィルターを通 した。

(9) 1_(：分析に供した。

[0080] ＜試験例 5 :西洋わさびエキスの製造＞

西洋わさびエキスを下記 (1 ) 〜 (6) の工程により製造した。

( 1 ) 西洋わさび葉を収穫後、 洗浄 ·殺菌し， 熱風乾燥した。

(2) 乾燥した西洋わさび葉 (ケンペロール含量 (ァグリコン換算) 1 1 〇 2020/175579 23 卩（：171? 2020 /007858

/9) を 50%エタノールにて抽出し、 濃縮した。

(3) 抽出濃縮液を樹脂カラムに吸着および脱離し て、 ケンペロールを精製 -濃縮した。

(4) 精製液を適当な酸または塩基で 1 ^~ 15. 0に調整し、 50°〇にて適当 な時間加水分解酵素による酵素反応を実施し た。

(5) 80°〇で酵素を失活させた。

(6) 凍結乾燥したものを西洋わさびエキス (粉末) とした。

[0081] ＜試験例 6 :西洋わさびエキス中のケンペロールの定量� �

試験例 5で得られた西洋わさびエキス (粉末、 乾燥重量) に含まれるケン ペロールアグリコンの量を下記の方法で定量 した。 西洋わさびエキス (粉末 、 乾燥重量) 中のケンペロール含量は 1 6 ^ ^ g / 9であった。

定量方法

(1 ) 50 111 チューブに検体 0.2 9を電子天秤で秤量し ( =1~3) 、 メス シリンダーで 70%エタノール水溶液 40 111を分取し、 添加 秤量する。 ポリ ト ロンホモジナイザーで、 室温、 2,000 rp.ii, 1分間懸濁を行った。

(2) 懸濁液を十分に反転混和し、 懸濁液 1 ＞111_を 1 (111_ピぺッ トマンにて 14 (111_ ガラス試験管に分注 ·秤量した (N =1〜 3) 。

(3) ミリ 01 111を 1 111ピペッ トマンにて添加し、 ボルテックスにて混合後、 ヒートブロックにて 100°〇、 20分間加熱した。 加熱終了後 5分以上氷冷した。

(4) ドラフト内で、 ディスペンサーにてヘキサン 5 111を添加した。 手で水 平に 20回振盪した。 大型冷却遠心機にて 4°(：、 12,000 rp.ii, 5分間遠心を行っ た。

(5) ドラフト内で、 パスツールピペッ トにて上層を廃棄した。 ディスペン サーにて酢酸エチル 5 111を添加した。 振盪機で室温、 150 111、 10分間水平に 振盪した。 大型冷却遠心機にて 4°〇、 12,000 rp.ii, 5分間遠心を行った。

(6) ドラフト内で、 パスツールピペッ トにて上層を乾固用の 141111_ガラス試 験管に回収した。 回収した上層は吹付式窒素乾固機にて 60 ^° 〇で窒素乾固を行 った。 下層にはディスペンサーにて酢酸エチル 5 1111_を添加した。 振盪機で室 20/175579 24 卩（：171? 2020 /007858

温、 150 111、 10分間水平に振盪した。

大型冷却遠心機にて 4°〇、 12,000 111、 5分間遠心を行った。

(7) 乾固用の 14 しガラス試験管を取り出した (乾固が完了しなくてもよい ) 。 ドラフト内で、 パスツールピぺッ トにて上層を乾固用の 141111_ガラス試験 管に回収した。 回収した上層は吹付式窒素乾固機にて 60 ^° 〇で窒素乾固を行っ た。

(8) 乾固が終了したら 14 しガラス試験管を取り出し、 70%エタノール水溶 液 10 (11!_を 10 1111_ピぺッ トマンにて添加し、 ボルテックスにて溶解した。 超音 波発生装置にて 1分間 X 2回超音波処理してボルテックスにて溶解し� �。 ミニ ユニフィルターに 1 111ピぺッ トマンにて溶解液 400 1111_を添加しフィルターを 通した。

(9) 1_(：分析に供した。