CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se relaciona con el campo técnico de la mecánica, electrónica y más específicamente con el parafinado y la obtención de muestras histológicas, ya que aporta un aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

Para estudiar la estructura de las células, tejidos y órganos que constituyen los componentes del cuerpo humano y organismos pluricelulares, el hombre ha desarrollado diversos métodos y técnicas, con el paso del tiempo, se han perfeccionado los instrumentos necesarios para conocer con más profundidad la morfología y función de los diferentes niveles de organización de la materia.

Parece factible que, si deseamos estudiar una célula o una asociación de ellas, para conocer su estructura morfológica microscópica y deducir, en lo posible sus funciones, bastaría examinarlas a través de los instrumentos que amplían imágenes de los objetos observados (microscopios fotónicos y electrónicos); este procedimiento no es factible de realizar, al intentar hacerlo se presentan serias dificultades en la manipulación de los especímenes y el inicio de los procesos propios de descomposición molecular (autólisis) y celular que suelen presentarse después que las células y los tejidos abandonan su hábitat natural. Por lo tanto, es necesario utilizar una serie de procedimientos y artificios que nos permitan describir, comprender y analizar la estructura microscópica de las células, tejidos y órganos.

El objeto de estudio de la histología son los tejidos (y las células que los componen). A fin de estudiarlos y comprenderlos, cuenta con dos poderosas herramientas que le permiten observar la microestructura celular y tisular: la microscopía y la técnica histológica.

La técnica histológica es la serie de pasos ordenados que permiten preparar al tejido para su observación a través del microscopio. El tejido se prepara para su observación de acuerdo con el tipo de microscopio que será utilizado.

En el caso de la microscopía de campo claro, la técnica más común para preparar las muestras es la técnica histológica ordinaria o de inclusión en parafina. En este proceso, las muestras se infiltran en parafina, con el fin de que tengan la consistencia adecuada para obtener los bloques con las muestras o especímenes. Una vez que se tienen los bloques (inclusión), éstos se cortan en un equipo que se llama micrótomo y con el que se obtienen cortes muy delgados (micrómetros de espesor) lo que permite observar las estructuras celulares y tisulares.

Para la inclusión de muestras que han de observarse con el microscopio óptico se utiliza sobre todo la parafina, y en menor medida la celoidina, como medio de inclusión.

La parafina es una sustancia de aspecto ceroso que está formada por mezclas de hidrocarburos saturados. A temperatura ambiente es sólida y su punto de fusión puede variar entre 40 °C y 70 °C según la composición de la mezcla de hidrocarburos. Asi, parafinas más duras a temperatura ambiente tienen un punto de fusión mayor, mientras que las más blandas uno menor. Es recomendable una dureza mayor para incluir muestras más duras. Las parafinas más usadas tienen un punto de fusión en torno a los 60 °C. Podemos también modificar las características de las parafinas añadiendo sustancias para variar su dureza, viscosidad, fragilidad, etcétera.

La parafina no es miscible con agua, mientras que todos los tejidos están formados principalmente por agua. Además, la mayoría de los fijadores son soluciones acuosas, esto implica que para que la parafina líquida pueda penetrar completamente en el tejido ha de sustituirse el agua por un solvente orgánico; esto se consigue mediante la deshidratación del tejido en alcoholes, normalmente etanol, de gradación creciente hasta alcohol de 100°. La deshidratación debe ser completa porque de no ser así afectará a la infiltración posterior de la parafina. Posteriormente se transfiere el tejido a un líquido que es miscible tanto con el alcohol de 100° como con la parafina, denominado sustancia intermediaria, como es el benceno, xileno, tolueno o el óxido de propileno, entre otros. Estas sustancias son normalmente aclarantes por lo que comprobando la translucidez de la pieza podemos cerciorarnos de la penetración de la sustancia intermediaria en el tejido. El tiempo de incubación de la pieza en algunos de estos líquidos intermediarios como el tolueno o xileno no debe ser excesivo puesto que estas sustancias endurecen la pieza y crean problemas al hacer las secciones.

Por último, se pasa el tejido a parafina previamente licuada en una estufa regulada a la temperatura apropiada para dicho tipo de parafina. Se dan tres pasos por parafina liquida para favorecer una completa sustitución del liquido intermediario por la parafina. El tiempo que dura dichos pasos depende de lo volátil que sea el liquido intermediario y lo grande que sea nuestra pieza. Será mayor cuanto menos volátil es el liquido intermediario o mayor sea la muestra de tejido. Hay que tener en cuenta que un tiempo excesivo en parafina puede endurecer el tejido. Sin embargo, los efectos de una pobre infiltración pueden ser más perjudiciales que mantener mucho tiempo las muestras en parafina liquida. Tras el embebimiento completo de la muestra se vierte parafina liquida en un molde, se introduce la muestra y se coloca según la orientación deseada de corte y se deja solidificar a temperatura ambiente.

Los aparatos mecánicos para hacer secciones de un grosor de micrómetros se denominan microtomos y existen diferentes tipos según el grosor que queramos conseguir en nuestras secciones, según el medio de inclusión en el que se encuentre el tejido y según el proceso de endurecimiento de la muestra: por congelación o por inclusión.

El micrótomo es un equipo mecánico de precisión que se utiliza para realizar cortes en tejidos, siendo las secciones conseguidas de espesor micrométrico lo suficientemente delgadas para permitir su examen por el microscopio. Normalmente los microtomos modernos permiten cortes de un espesor de 0.1 hasta 100 micrómetros.

Los aparatos de corte más usados tradicionalmente para estudiar las características generales de los tejidos y de las células son el microtomo para material incluido en parafina para observaciones con el microscopio óptico y el ultramicrotomo para observaciones con el microscopio electrónico de transmisión. El criostato se usa también frecuentemente en microscopía óptica por el ahorro de tiempo que supone ya que no necesita incluir el tejido, incluso se puede cortar material no fijado.

Se realizó una búsqueda del estado de la técnica de aparatos ensamblables para realizar parafinado y corte de muestras histológicas, donde se encontró el documento de patente de Estados Unidos de América número US9733166 (B2), con fecha de publicación del 15 de agosto de 2017, que tiene como título "DISPOSITIVO Y MÉTODO PARA LA MANIPULACIÓN E INCLUSIÓN DE TEJIDOS", el cual describe un dispositivo para inclusión de tejidos, el cual comprende un mecanismo de transporte para un miembro de entrada, el miembro de entrada está adaptado para sostener una pluralidad de soportes de tejido, cada soporte de tejido se encuentra asociado con un molde, un baño de cera y una estación de enfriamiento en el que el mecanismo de transporte mueve el miembro de entrada desde un baño de cera a una estación de enfriamiento. El dispositivo para fijación de tejidos en un medio de inclusión que puede ser parafina, cuenta con un miembro de entrada el cual contiene soportes con las muestras histológicas, dicho miembro se mueve mediante un brazo robótico primeramente a la cámara de incrustación donde se fija el tejido y posteriormente a la estación de enfriamiento.

También se encontró el documento de patente de Estados Unidos de América US8968683 (B2), con fecha de publicación del 03 de marzo de 2015, que tiene como título "APARATO DE MANIPULACIÓN DE MUESTRAS DE TEJIDO", que se refiere a un aparato de manipulación de muestras de tejido, en particular para la toma de muestras histológicas después de la infiltración de un medio de inclusión como, por ejemplo, parafina. El aparato para manipulación de muestras histológicas se conforma de un sistema con tuberías y boquillas intercambiables de diversos tamaños, las cuales sostienen las muestras ya fijadas en parafina o algún otro medio de inclusión, para sujetarlas utiliza presión negativa, la cual permite tomarlas de forma firme pero suave evitando la manipulación directa por el usuario.

Otro documento encontrado, es una patente de Alemania número DE102015002382 (B3), con fecha de publicación del 18 de febrero de 2016, que tiene como titulo "MICROTOMO CON OPERACIÓN DE CORTE MOTORIZADA", el cual describe un micrótomo con accionamiento motorizado para que el movimiento de corte produzca secciones delgadas para histología; el objeto de la microtomo es limitar el efecto de la fuerza en caso de accidente o daño para que se encuentre dentro de un rango permisible y asi se eviten o reduzcan lesiones y daños y el micrótomo sea intrínsecamente seguro en la operación de corte, tanto para el usuario como para la muestra al utilizar un microtomo.

Por último, se encontró el documento de la solicitud de patente internacional número WO2016128604 (Al), con fecha de publicación del 18 de agosto del 2016, que tiene como titulo "DISPOSITIVO DE POSICIONAMIENTO AUTOMÁTICO PARA EL CORTE DE TEJIDO TRIDIMENSIONAL EN UNA MUESTRA, VIBRATOMO COMPUESTO Y USO DEL MISMO", el cual se refiere a un dispositivo de posicionamiento automático para el corte tridimensional de tejido, en una muestra de tejido vivo o fija, caracterizado porque comprende al menos: una plataforma para depositar las muestras de tejido; un subsistema electromecánico que comprende al menos un primer motor y unos primeros medios mecánicos que mueven la plataforma de manera angular; y un segundo motor y unos segundos medios mecánicos que inclinan la plataforma (1). También se refiere a un vibratomo que comprende dicho dispositivo de posicionamiento y al uso de este en histología, anatomía, neurociencia, bioquímica o farmacología .

Como se puede observar, los documentos anteriormente descritos no describen que tengan las características técnicas que permitan ensamblar más de un aparato y que se comuniquen entre sí en tiempo real, por medio de un dispositivo inteligente como puede ser un teléfono, computadora o tableta y conectarse a una aplicación móvil, para el control remoto y realizar varios cortes de muestras histológicas que fueron previamente parafinadas en el mismo dispositivo y cada muestra obtenida es colocada en su respectivo recipiente; todo lo anterior en un espacio reducido.

Los dispositivos anteriormente descritos no evidencian que el corte histológico se efectúa mediante una navaja sujeta sobre una base rectangular, la cual se mueve mediante motores y actuadores lineales, y se desliza con ayuda de un par de ruedas sobre rieles en cada extremo para llegar a la sección donde se efectuara el corte, todo de manera automatizada .

Otra diferencia que se evidencia del aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas motivo de la presente invención y de los documentos descritos anteriormente es que ninguno presenta la característica de poder realizar la fijación, corte y almacenamiento de muestras histológicas; además que cuente con dos o más secciones dentro de las cuales se tiene un recipiente para colocar el tejido dentro del cual se introduce la parafina.

Tampoco describen que se pueda fijar cada muestra con parafina liquida de forma independiente en una sección que cuenta con una placa peltier que enfria de un lado para solidificar la parafina y del otro lado mantiene una temperatura cálida en un reciente de almacenamiento de parafina.

Los documentos anteriormente descritos tampoco describen que realicen cortes histológicos de forma automatizada por medio de un microcontrolador que activa un conjunto de motores y actuadores lineales que permiten el movimiento de la navaja.

Por último, los documentos anteriormente descritos tampoco describen que la fijación de la muestra con parafina se realiza de forma automatizada por medio de un recipiente externo que contiene la parafina liquida que pasa a través de una tubería hasta llegar al tejido.

OBJETO DE LA INVENCION

Es, por lo tanto, objeto de la presente invención, proporcionar un aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas, que permite ensamblar más de un aparato y que se comuniquen entre sí en tiempo real, por medio de un dispositivo inteligente como puede ser un teléfono, computadora o tableta y conectarse a una aplicación móvil, para el control remoto y realizar varios cortes de muestras histológicas. Otro objeto de la presente invención es un aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas que efectúa el corte histológico mediante una navaja sujeta sobre una base rectangular, la cual se mueve mediante motores y actuadores lineales, y se desliza con ayuda de un par de ruedas sobre rieles en cada extremo para llegar a la sección donde se efectuara el corte, todo de manera automatizada.

Un objeto adicional de la presente invención es un aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas que permita realizar la fijación, corte y almacenamiento de muestras histológicas.

Otro objeto de la presente invención es un aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas que realiza cortes histológicos de forma automatizada por medio de un microcontrolador que activa un conjunto de motores y actuadores lineales que permiten el movimiento de la navaja.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS

Los detalles característicos de este novedoso aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas se muestran claramente en la siguiente descripción y en las figuras que se acompañan, asi como una ilustración de aquella, y siguiendo los mismos signos de referencia para indicar las partes mostradas. Sin embargo, dichas figuras se muestran a manera de ejemplo y no deben de ser consideradas como limitativas para la presente invención. La figura 1 muestra una vista superior del aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas.

La figura 2 muestra una vista lateral derecha en perspectiva del aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas.

La figura 3 muestra una vista lateral izquierda en perspectiva frontal de la estructura del aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas.

La figura 4 muestra una vista inferior del aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas.

La figura 5 muestra una vista en perspectiva inferior del aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas.

La figura 6 muestra una vista en perspectiva de la estructura de soporte del aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas.

La figura 7 muestra una vista en perspectiva a detalle del interior del cilindro del aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas, donde se aprecia la placa sobre la cual se monta el actuador y botón de reinicio.

La figura 8 muestra una vista en perspectiva a detalle del interior del cilindro del aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas, donde se aprecia el orificio del recipiente.

La figura 9 muestra una vista en perspectiva a detalle del contenedor del aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas.

La figura 10 muestra una vista en perspectiva posterior del ensamble de dos aparatos ensamblables para realizar parafinado y corte de muestras histológicas.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Para una mejor comprensión de la invención, a continuación, se enlistan las partes que componen el aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas:

I.Estructura de soporte 2.Largueros

3.Sección semicircular 4.Riel

5.Barra

6.Rueda

7.Actuador

8.Soporte

9.Navaja

10.Ranura

II.Estructura secundaria 12.Protuberancia

13.Corredera

14.Contenedor

15.Saliente

16.Rueda

17.Resistencia 18.Orificio

19.Tubería

20.Mecanismo de sujeción

21.Cilindro 22.Abertura

23.Actuador

24.Placa

25.Solera

26.Dispositivo electrotérmico 27.Recipiente

28.Base 29.Orificio 30.Válvula 31.Pestaña

32.Receptáculo

33.Sensor

34.Orificio

35.Carcasa

36.Botón de reinicio

37.Mecanismo de sujeción

Con referencia a las figuras, el aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas está conformado por una estructura de soporte (1) la cual cuenta con dos largueros (2) que se extienden de manera paralela y se unen en un extremo por una sección semicircular (3); cada larguero (2) de la estructura de soporte (1) del lado contrario a donde se encuentra la sección semicircular (3), tiene un riel (4) colocado de manera vertical en la cara interna de su extremo que va al suelo.

Una barra (5) la cual es preferentemente rectangular, tiene una rueda (6) en cada uno de sus extremos, dichas ruedas están configuradas para introducirse al riel (4), permitiendo que la barra (5) se deslice a lo largo del mismo riel (4), teniendo un movimiento lineal hacia arriba y abajo. Un actuador (7) se coloca sobre la barra (5) por medio de un soporte (8); el vástago del actuador (7) está configurado para sujetar una navaja (9) en su extremo la cual se encarga de realizar el corte de las muestras histológicas al momento que el actuador (7) es accionado. El actuador (7) puede ser hidráulico, neumático, eléctrico o automático.

Los costados de la estructura de soporte (1) cuentan con un corte rectangular y uno de los costados tiene, al menos, una ranura (10) en cada lado del corte rectangular, esta configuración permite el ensamble de una estructura secundaria (11) la cual es preferentemente rectangular que cuenta en cada uno de sus costados con, al menos, una protuberancia (12) coincidiendo con el mismo número de ranuras (10), lo que permite asegurar el ensamble entre la estructura de soporte (1) y la estructura secundaria (11).

Una corredera (13) se coloca en cada costado del marco interno de la estructura secundaria (11); un contenedor (14) configurado para almacenar parafina, tiene dos salientes (15) en sus costados sobre las cuales se coloca, al menos, una rueda (16) configuradas para introducirse a la corredera (13), permitiendo que el contenedor (14) se deslice a lo largo de dicha corredera (13), teniendo un movimiento lineal hacia arriba y abajo.

Una resistencia (17) se coloca en cualquier cara del contenedor (14), permitiendo con esta configuración que se mantenga una temperatura dentro de dicho contenedor, de al menos, 40 °C lo que permite que la parafina se encuentre en un estado liquido. La resistencia (17) puede ser un dispositivo electrotérmico, placa cerámica, tira mica, tubular, flexible, infrarroja, de Silicon y/o la combinación de las anteriores. El dispositivo electrotérmico es preferentemente una placa peltier.

El contenedor (14) tiene un orificio (18) en la superficie de una de sus caras, preferentemente la que se encuentra posicionada delante de la estructura de soporte (1). Una tubería (19) se coloca en el orificio (18) por medio de la cual se transporta la parafina líquida fuera del contenedor (14). Una bomba (no ilustrada) se coloca en el interior del contenedor (14), se conecta a la tubería (19); esta configuración permite bombear la parafina del interior del contenedor (14) al exterior, trasladándose por medio de la tubería (19).

Al menos, un motor (no ilustrado) el cual puede ser un servomotor, motor eléctrico o motor a pasos, se puede instalar en cualquiera de las ruedas (6 y 16), esta configuración permite que el movimiento de giro del motor se transmita a dichas rueda (6 y 16) para permitir el desplazamiento lineal de la barra (5) y el contenedor (14).

Un mecanismo de sujeción (20) se coloca en la pared interna de la sección semicircular (2) de la estructura de soporte (1) y está configurado para sujetar un cilindro (21) el cual es hueco y de menor dimensión que la estructura de soporte (1), de tal manera que está protegido por dicha estructura .

El cilindro (21) tiene en la parte delantera una abertura (22) desde la base superior hasta, al menos, la mitad de la altura del cilindro (21). Un actuador (23) se encuentra en la base interna del cilindro (21), junto a la abertura (22), preferentemente sobre una placa (24) que se encuentra en la base del cilindro (21) a un lado de la abertura (22), esta configuración permite mantener fijo el actuador (23).

Al menos, una solera (25) se coloca al centro del cilindro (21), preferentemente a la mitad de su altura; sobre dicha solera se coloca un dispositivo electrotérmico (26) el cual preferentemente es una placa peltier, cuya función es disminuir la temperatura para solidificar la parafina que cubre la muestra histológica, ya que está en contacto con un recipiente (27) que preferentemente es rectangular el cual está colocado junto a dicho dispositivo electrotérmico (26), el recipiente (27) está alineado vertical y horizontalmente con los actuadores (7 y 23) respectivamente. Sobre el recipiente (27) se coloca la muestra histológica para posteriormente ser cubierta con la parafina y cortada con la navaja (9). La base (28) del recipiente (27) no es fija y se coloca sobre la punta del vástago del actuador (23), el cual al ser activado sube junto con la muestra histológica, para posteriormente activar el actuador (7) y realizar el corte con la navaja (9) que está alineado con el recipiente (27).

Un orificio (29 y 34) se coloca en una de las paredes del cilindro (21) y del recipiente (27), preferentemente en la pared que se encuentra del lado de la estructura secundaria (11); una válvula (30) de no retorno se coloca en el orificio (34) del recipiente (27) y del lado contrario de dicha válvula, se conecta la tubería (19), permitiendo con esta configuración el traslado de la parafina liquida del contenedor (14) al recipiente (27) sin el riesgo de que la parafina que entra en contacto con el medio ambiente, retorne al contenedor (14) y contamine la parafina almacenada; una vez que la muestra histológica se cubre con la parafina, el dispositivo electrotérmico (26) disminuyendo la temperatura del recipiente (27) permitiendo que la parafina que cubre la muestra histológica se solidifique y quede lista para su posterior corte.

La base (28) cierra herméticamente con el recipiente (27), para impedir que la parafina se derrame; para asegurar el cierre hermético, se puede colocar un empaque (no ilustrado) entre la base (28) y el recipiente (27).

Al menos, una pestaña (31) se coloca en la pared interna del cilindro (21), sobre la cual se fija un receptáculo (32) detrás del dispositivo electrotérmico (26); dicho receptáculo (32) preferentemente es de forma semicircular y está configurado para recibir las muestras histológicas con parafina ya cortadas.

Un sensor (33) preferentemente de presencia se coloca en la cara interna del cilindro (21) a un lado de la abertura (22), posicionado viendo al recipiente (27), de tal manera que puede detectar cuando la navaja (9) entra por la abertura (22) y realiza el corte de la muestra histológica con parafina, para enviar una señal y que el actuador (23) sea accionado para subir y colocar la muestra histológica con parafina en posición para realizar un nuevo corte.

El impulso de la navaja (9) al momento de realizar un corte en la muestra histológica, empuja el corte de tal manera que cae en el receptáculo (32).

Los actuadores (7 y 23), el sensor (33), los motores (no ilustrados), la bomba (no ilustrada) están conectados a un microcontrolador (no ilustrado), el cual está albergado dentro de una carcasa (35) que se coloca debajo del cilindro (21). Una unidad de comunicación (no ilustrada) la cual puede ser por medio de Bluetooth, WiFi (Wireless Fidelity por sus siglas en inglés), UWB (Ultra Wide Band por sus siglas en inglés) o la combinación de los anteriores, dicha unidad de comunicación se encuentra instalada en el interior de la carcasa (35) y conectado al microcontrolador; dicha unidad de comunicación está configurada para establecer comunicación en tiempo real con un dispositivo inteligente como puede ser un teléfono, computadora o tableta y conectarse a una aplicación móvil, para el control remoto del aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas.

Una batería (no ilustrada) la cual puede ser recargable o desechable, se encuentra instalada en el interior de la carcasa (35), configurada para energizar los componentes electrónicos del aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas, tales como, el microcontrolador, la unidad de comunicación, actuadores (7 y 23), el sensor (33), los motores (no ilustrados), la bomba (no ilustrada), la resistencia (17); y el dispositivo electrotérmico (26).

En la superficie del aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas se coloca un botón de reinicio (36), preferentemente sobre la base del cilindro (21) encima de la placa (24) a un lado del actuador (23); dicho botón de reinicio está configurado para activarse en caso de alguna falla con los componentes electrónicos del aparato ensamblable de la presente invención y se reinicie la operación.

Unos mecanismos de sujeción (37) se colocan en la superficie superior y posterior de la estructura de soporte (1), el cilindro (21) y/o en la estructura secundaria (11); esta configuración permite que se pueda ensamblar en la parte superior y/o inferior otro aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas con las mismas características descritas, tal como se ilustra en la figura 10.

Gracias a la unidad de comunicación (no ilustrada) de cada aparato ensamblable para realizar parafinado y corte de muestras histológicas unido entre si, se pueden comunicar de manera simultánea con un solo un dispositivo inteligente, haciendo cortes de muestras histológicas al mismo tiempo, en un lugar reducido.

Los mecanismos de sujeción (20 y 37) pueden ser velero, medios magnéticos, mecanismos machihembrado, tornillos, pernos, remaches, broches y/o la combinación de los anteriores .

El invento ha sido descrito suficientemente como para que una persona con conocimientos medios en la materia pueda reproducir y obtener los resultados que mencionamos en la presente invención. Sin embargo, cualquier persona hábil en el campo de la técnica que compete el presente invento puede ser capaz de hacer modificaciones no descritas en la presente solicitud, sin embargo, si para la aplicación de estas modificaciones en una estructura determinada o en el proceso de manufactura de este, se requiere de la materia reclamada en las siguientes reivindicaciones, dichas estructuras deberán ser comprendidas dentro del alcance de la invención.